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Contenido
i.
Lista
ii.
3
Lista
iii.
3
Lista
iv.
3
Resumen
v.
4
Abstrac
de
ilustraciones
de
tablas
de
ecuaciones
4
1. Introduccin
4
2. Antecedentes
5
2.1
Sntesis
de
la
melanina
5
2.2 La mutacin que causa albinismo oculocutneo OCA1A
6
2.3 Genes asociados al albinismo oculocutneo (OCA)
6
2.4 Mtodos
de
clculo
7
3. Hiptesis
8
4. Objetivos
8
4.1
generales
objetivos
particulares
8
5. Metodologa
9
5.1
mtodo
de
gota
colgante
hanging
drop
9
5.2 Materiales
9
2
5.3
Desarrollo
del
10
5.4 Obtencin
10
5.5 Difraccin
experimento
del
de
rayos
para
cristal
la
obtencin
de
de
la
rayos
10
5.7 Obtencin de datos para generar la estructura de la
protena T373K
6. Conclusiones
11
13
7. Bibliografa
14 y 15
i.
Lista de ilustraciones
la
del
gen
tirosinasa
mtodo
de
gota
ii.
Lista de tablas
iii.
Listas de ecuaciones
Ecuacin
1.
Ecuacin
de
Fourier..
11
Ecuacin 2. Transformada de Fourier, la cual nos dar el mapa de
densidad
electrnica
para
deducir
la
estructura
de
la
molcula.12
Ecuacin
3.
Ecuacin
de
Bragg.
.12
iv. Resumen
El albinismo es una enfermedad gentica responsable de la prdida parcial o
completa de pigmentacin, es decir, del color de la piel, los ojos o el pelo que
es causada por mutaciones en las clulas productoras del pigmento melanina
[0].
4
V. Abstrac
Albinism is a genetic disease responsible for the partial or complete loss of
pigmentation, the color of the skin, eyes or hair that is caused by mutations in
the cells producing pigment melanin [0].
With this draft is to understand the structural role in T373K mutation produces
protein in the signaling cascade for the production of melanin in the OCA1A
albinism type, produced by the gene "TYR".
1. Introduccin
El albinismo oculocutneo (OCA) es un grupo de trastornos hereditarios de la
biosntesis de la melanina que se caracteriza por una reduccin generalizada
en la pigmentacin del cabello, la piel y los ojos [1].
Esta causada por mutaciones que afectan a los melanocitos, clulas
productoras del pigmento melanina que da color a ciertas partes del cuerpo
como el cabello, la piel y los ojos. La melanina es un pigmento que se forma
como producto final del metabolismo de la tirosina el cual es un aminocido.
Una deficiencia en la sntesis de tirosina produce una inhibicin en la sntesis
de melanina y por lo tanto falta de pigmentacin [2].
2. Antecedentes
2.1 Sntesis de la melanina
TYR es una enzima que contiene cobre la cual cataliza los dos primeros pasos
en la va de la biosntesis de la melanina, la conversin de la tirosina en Ldihidroxi-fenilalanina (DOPA) y posteriormente la dopaquinona [5].
Figura 4 [5]
Se han detectado hasta 303 mutaciones en el gen TYR donde casi todas son
conocidas (ver tabla 1).Todas estas mutaciones estn implicadas en la
produccin de albinismo de tipo OCA1A y OCA1B [3].
Tabla1 [3]
2.4
Mtodos de clculo
Los cuales arrojaron los datos de la distribucin de nsSNPs en el gen TYR, las
barras rojas indican el porcentajes de nsSNPs que resulto ser nocivo y las
barras azules indican el porcentaje de nsSNPs que son tolerados (ver figura 5)
[11].
Figura 5 [8]
Mediante el programa l-mutante se detectaron que las mutaciones T373K,
N371Y, M370T y P313R tienen un alto efecto perjudicial sobre la protena de
TYR que es responsable de la OCA1A por tener los
parmetros ms
exergonicos (-3 a -4 KJ/mol) [11].
El anlisis de variantes de OCA1A, mostro que T373K tiene el efecto ms
perjudicial al ser la ms exergonica afectando las propiedades dinmicas de la
protena dando lugar al albinismo tipo 1A [11].
Debido a la mutacin en la protena TYR se ampli la estructura geomtrica por
lo tanto T373K tiene ms efecto sobre la geometra estructural que otras
mutaciones.
La mutante T373K tiene los valores ms elevados, lo cual indico que es
responsable sobre la desestabilizacin de la estructura TYR por lo tanto tiene
un alto efecto perjudicial sobre la protena TYR nativa [8].
3. Hiptesis
La mutacin T373K afecta el sitio cataltico del dominio de la tirosinasa
provocando que la enzima tirosinasa no se exprese y por tanto se produzca
OCA1A.
4. Objetivo general
Determinar la estructura de T373K la cual nos ayude a comprender ms el
papel de esta y como puede afectar en sus funciones catalticas a TYR nativa.
4.1 Objetivo particular
1. Analizar los cambios significativos en la estructura de T373K.
2. Determinar las consecuencias del cambio estructural producido
por el cambio de un solo aminocido mediante la tcnica de
5.2 Materiales
Se utilizara el JBS Kit de iniciacin a la cristalizacin proteica que contiene todo
el material necesario partiendo de una protena [12].
Realizacin del Experimento Segn el Mtodo de Gota Colgante
La protena T373K se cristalizara equilibrando la gota de dicha protena diluida
en la solucin de cristalizacin contenida en el pocillo por medio de una placa
de cristalizacin sellada. Para ello se utilizara un sistema de acetato de
10
Figura 7: Esquema general del mtodo de gota colgante para la solucin a pipetar [6].
Se tendr que pipetar 1 l de solucin proteica y 1 l de solucin del pocillo en una
lmina circular. Primero colocaremos una gota de la solucin proteica en una lmina,
despus aplicaremos con cuidado la solucin del pocillo sobre cada gota y con ayuda
de una pinza procederemos a coger las lminas y darles vuelta cuidadosamente con la
gota hacia abajo y colocarlo sobre los pocillos. Presionaremos ligeramente para que la
silicona cierre hemticamente el pocillo.
5.4 Obtencin del cristal
Se conservaran las placas preparadas en una habitacin con una temperatura
constante (20-22C). Se observara a toda profundidad la gota de protena en el
microscopio.
5.5
Difraccin de rayos X para la obtencin de la estructura de
la protena T373K
5.6 Generalidades de la difraccin de rayos X
La cristalografa de rayos X nos proporciona la imagen ms adecuada que
podemos tener de las estructuras cristalinas (el 85% de los depsitos en el PDB
11
Figura 8 [9]
hx ( j )+ ky ( j ) +lz( j)
2. i
F ( hkl )= jfj e
Ecuacin 1: ecuacin de Fourier
( xyz )=
1
( h ) ( k ) ( l ) F ( hkl ) cos 2[hx+ ky+ lz ( hkl ) ]
V
n=2 d sin
Ecuacin 3: ecuacin de bragg
13
6. Conclusiones
Mediante el procedimiento de difraccin de rayos X podremos
analizar la estructura tridimensional de la protena mutante T373k y
podremos deducir si dicha mutacin afecta al sitio cataltico del
dominio tirosinasa provocando que la enzima implicada en la
produccin de melanina (tirosinasa) no se exprese.
14
7. Bibliografa
0 revista investigacin y ciencia Raymond Boissy, profesor de dermatologa
1 Review, Oculocutaneous albinism ,Karen Grnskov, Jakob Ek and Karen
Brondum-Nielsen
2 Shin Hae P, Hyojin Ch, Yonggoo K, Myungshin K (2012) Molecular Analysis Of
Korean Patients With Oculocutaneous Albinism.
3 A. Gargiulo, F. Testa, S. Rossi et al., Molecular and clinical characterization of
albinism in a large cohort of Italian patients, Investigative Ophthalmology and
Visual Science. Mutational Analysis of Oculocutaneous Albinism: A Compact
Review
4 C. F.Wildsoet, P. J. Oswald, and S. Clark, Albinism: its implications for
refractive development, Investigative Ophthalmology , B. Kasmann-Kellner, K.
Hille, and B. Pfau, Eye and general illnesses in the public school for the blind
and usually handicapped students in Saarland development in the last 20
years,.
5 C. J. Cooksey, P. J. Garratt, E. J. Land et al., Evidence of the indirect formation
of the catecholic intermediate substrate responsible for the autoactivation
kinetics of tyrosinase, The Journal of Biological Chemistry.
6 Y. Tomita, A. Takeda, S. Okinaga, H. Tagami, and S. Shibahara, Human
oculocutaneous albinism caused by single base insertion in the tyrosinase
gene, Biochemical and Biophysical Research Communications.
7 B. S. Kwon, A. K. Haq, S. H. Pomerantz, and R. Halaban, Isolation and
sequence of a cDNA clone for human tyrosinase that maps at the mouse calbino locus, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United
States of America.
8 Mutational analysis of TYR gene and its structural consequences in OCA1A
9 Wiederstein,M., Sippl,M.J., 2007. ProSA-web: interactiveweb service for the
recognition of
errors in three-dimensional structures of proteins.
15
Bibliografa de figuras
1 Albinism-Causing Mutations in Recombinant Human Tyrosinase Alter Intrinsic
Enzymatic Activity, figura 6.
2 Two Novel Tyrosinase (TYR) Gene Mutations with Pathogenic Impact on
Oculocutaneous Albinism Type 1 (OCA1), figura 2.
3 Mutational Analysis of Oculocutaneous Albinism: A Compact Review, table 1.
4 Texto de bioqumica para estudiantes de medicina, capitulo 17 pginas 205
5 Albinism-Causing Mutations in Recombinant Human Tyrosinase Alter Intrinsic
Enzymatic Activity
6 Manual JBS kit de iniciacin a la cristalizacin de protenas
7 "Crystallography-Cristalografia" (Departmento de Cristalografa y Biologa
Estructural)
8 Mutational analysis of TYR gene and its structural consequences in OCA1A
9 Tesis preservacin de la informacin cristalogrfica en los centros metlicos
de la oxidase multicobre de thermo thermophilus, Eduardo Rosas Bentez.
10 Presentacin Perspectivas de la Cristalografa Biolgica en Mxico por el Dr.
Enrique Rudio Piera IBT-UNAM
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