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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

CENTRO UNIVERSITARIO METROPOLITANO


FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS
AREA DE INMUNOLOGA Y MICROBIOLOGA MDICA
TERCER AO 2008

BASES CELULARES Y MOLECULARES DE LA RESPUESTA


INMUNE. LINFOCITOS T
Dr. Mario Roberto Pinto
INTRODUCCIN
El sistema inmunitario es fundamental para la supervivencia humana. En ausencia de
un sistema inmunitario activo hasta las infecciones menores pueden resultar mortales.
La respuesta inmune es innata y adquirida. La inmunidad adquirida es proporcionada
por los linfocitos T y sus molculas (citoquinas) y los linfocitos B y sus molculas
(anticuerpos).
Los linfocitos T son las clulas que dirigen la respuesta inmune adquirida, pues incluso
el sistema B est bajo su control.
Los linfocitos T nacen en la mdula sea
a partir de las clulas madres
pluripotenciales hematopoyticas (CMPH) diferencindose en una clula que es la
progenitora linfoide comn (PLC), que se encuentra en la mdula sea, posteriormente
se forma una clula linfoide que se dirige al timo, donde tiene una diferenciacin,
reproduccin y maduracin. Desarrolla la tolerancia central de antgenos propios con
los fenmenos biolgicos de seleccin positiva y negativa, cambios de molculas y
funciones de 2 grupos principales de linfocitos en CD4 (ayudadores) y CD8
(citotxicos), para luego migrar a los rganos linfoideos secundarios, donde se ponen
en contacto con antgenos presentados por las clulas presentadoras de antgenos
(clulas dendrticas, macrfagos y linfocitos B), quienes inducen su activacin
induciendo factores de transduccin y vas de sealizacin que se traducen en
replicacin celular y produccin de molculas (citoquinas) estructurando una respuesta
inmune efectora y cooperando con el sistema B para produccin de anticuerpos, as
mismo la formacin de linfocitos T de memoria que permitan una rpida respuesta
cuando nuevamente ingresen dichos antgenos al organismo que se desencadenar
una respuesta inmune adquirida.
CLULA PROGENITORA LINFOIDE COMN (PLC)
Los linfocitos T, al igual que el resto de las clulas del sistema inmune, se originan en
la mdula sea a partir de un precursor comn denominado Clula Madre
Pluripotencial Hematopoytico (CMPH). Estas clulas cuya caracterstica principal es
autorenovarse y generar distintos tipos celulares hematopoyticos. Los CMPH
aparecen en el saco vitelino embrionario, a partir de la tercera semana de vida, luego
migran al hgado y bazo y a partir del cuarto mes de vida, se localizan en la mdula
sea, que posteriormente se transforma en el principal sitio que da origen a la
hematopoyesis.

A partir de la CMPH se generan distintos progenitores. El progenitor mieloide que da


origen a las clulas mieloides y el progenitor linfoide comn (PLC) a partir del cual se
generan los linfocitos T y B.
No se sabe como el PLC se diferencia al linaje B o T. Pero guante este periodo
participan las citoquinas Factor de Clula Madre (SCF) y la IL-7, y se inicia la
sealizacin a travs de un receptor presente en los PLC denominado Nocht 1 que
inducira la diferenciacin hacia el linaje T. Hay cuatro receptores Nocht que
desempean un papel importante durante el desarrollo linfocitario. En este momento el
ms importante es el Nocht 1 cuyo ligando es el Jagged 1 producido por las clulas del
estroma que inicia la sealizacin a travs del dominio extracelulares del receptor,
iniciando una cascada proteoltica que induce la escisin del dominio
intracitoplasmtico del receptor, el cual se trasloca al ncleo para actuar como
coactivador transcripcional de diversos genes. Entre los cuales est el factor de
transcripcin Aiolos, que es especfico del linaje T y acta como represor de la
transcripcin del PU-1 e Ikaros que inicia la generacin de Pro-B, sin embargo la
presencia de Ikaros se mantiene y aumenta cuando se expresa el factor de
transcripcin GATA-3 posteriormente el Aioles induce la sntesis de la protena de
adherencia CD44 y el receptor de Factor derivado del estroma 1 Alfa (SDF- 1 Alfa).
Cuando las clulas del estroma tmico producen el SDF-1 Alfa, atrae a las clulas
precursoras T al timo y el CD44 participaran en el homing de dichas clulas al timo.
En este momento se inicia la sntesis y expresin de la molcula CD2 que es de
adherencia a las clulas epitelioides del timo (CET) y adems de la CD44 se inicia la
etapa de doble negativa de los timocitos.
MADURACIN DE LINFOCITOS T EN TIMO (TIMOCITOS)
Los progenitores linfoides que ingresan en el estroma tmico expresan altos niveles de
los factores de transcripcin Ikaros y GATA-3. El factor de transcripcin GATA-3,
pertenece a la familia dedos de Cinc y es fundamental para la maduracin de los
linfocitos T en el timo y luego para el desarrollo de los TH2.
El tiempo que pasan los linfocitos T en el timo dura aproximadamente tres das y se
caracteriza por un estadio doble negativo, doble positivo y simple positivo. Esto se
refiere a las molculas de membrana CD4 y CD8. El estadio doble negativo y doble
positivo se realizan en la corteza del timo y el simple positivo en la mdula tmica.
ESTADIO DOBLE NEGATIVO
El doble negativo (DN) tiene a su vez cuatro etapas y su clasificacin se hace en
relacin a las molculas de membrana CD44 y CD25 (es la cadena Alfa del receptor
de ILK-2), en el DN-1 es CD44+, CD25-, en DN-2 CD44+, CD25+, en DN-3 CD44CD25+ y en DN-4 CD44- CD25. Como se observan las etapas (DN1-4) caracterizada
por la ausencia o presencia de marcadores CD44 y CD25 en la superficie celular.
Si bien los timocitos DN dan lugar mayoritariamente a linfocitos T (Alfa Beta),
tambin pueden generar linfocitos T, (Gamma Delta).
En la etapa DN3, los rearreglos de las cadenas Gamma, Delta y Beta, comienzan en
forma simultnea, un reordenamiento exitoso de las cadenas Gamma y Delta detienen
el reordenamiento de la cadena Beta y se expresa un TCR (Gamma Delta). Sin
embargo la mayora de los timocitos rearreglan con xito la cadena Beta (antes que se
genere con xito el locus Gamma-Delta). En este momento se activa nuevamente el
receptor Nocht-1 activando el gen de la cadena sustituta Alfa del Pre- TCR y entonces
pasa a la etapa DN4, donde ya no se expresan el CD44 y CD25, pero en la membrana

se expresa el receptor Pre-TCR, junto a las molculas del complejo CD3. En el


linfocito T al igual que la cadena H (pesada) de la inmunoglobulina el rearreglo de la
cadena Beta se hace en dos etapas, primero se reordenan los fragmentos D B JB en
ambos cromosomas y luego se asocia un fragmento VB al DB JB, se intenta en un
cromosoma y si no es exitoso sigue el segundo cromosoma (existe exclusin allica
para la cadena Beta), luego se une a un gen de Constante Beta. Se inicia el rearreglo
de la cadena Alfa con 2 genes V y J.
Figura 1

Figura 2

Figura 3

Figura 4

Los timocitos dobles negativos requieren de dos factores de transcripcin. El TCF-1 y


LEF-1, estos inducen un estadio intermedio caracterizado por la presencia de timocitos
inmaduros CD8+ (estadio transitorio de clulas CD8+ simples positivas) y luego
timocitos doble positivos (CD4+ y CD8+).
Los Factores TCF-1 y LEF-1 son miembros de la familia de factores de transcripcin
que contienen HMG box como dominio de unin al ADN y forman parte de la

sealizacin por ligandos y receptores de la va Wnt. Son regulados por l aprotena


como la B-catenina y Smad 3 y son fundamentales para promover la transicin de
timocitos doble negativo o doble positivo.
Otro factor de transcripcin importante es el LKLF, que pertenece a la familia
Krumppel-Like de factores de transcripcin y es necesario para mantener el repertorio
de los linfocitos T, luego de su transicin a clulas simples positivas (CD4+ o CD8+),
capaces de migrar al compartimiento perifrico.
ESTADIO DOBLE POSITIVO (DP)
La expresin en la membrana del Pre-TCR induce la expresin de las molculas
correceptoras CD+ y CD8+ y la expresin de ambas molculas en una misma clula
define a estos timocitos como doble positivo.
El factor de transcripcin SDF-1 Alfa atrae preferentemente a los progenitores
linfoideos y a las clulas DN hacia la regin cortical y dirige a los timocitos DP hacia la
regin medular.
Los linfocitos cuando expresan el DP entran en divisin celular, replicando la cadena
Beta rearreglada y nuevamente se activa el Rag 1 y 2 para rearreglar la cadena Alfa
con sus genes V y J, desplazando a la cadena sustituta Alfa del Pre-TCR. Por lo tanto
pueden generarse timocitos con cadena , acoplados con distintas cadenas ,
pasando luego a la etapa de induccin de tolerancia central, los mecanismos de
control operan analizando la especificidad del receptor antignico generado. El
primer control se denomina seleccin positiva.
SELECCIN POSITIVA
Las clulas epitelioides del timo tienen unidos estrechamente a los linfocitos T (DP) a
travs del CD2 y expresan los CMH tipo I y II, por lo cual los timocitos se acercan y
reconocen las molculas de CMH a travs de un recin formado TCR. Si el TCR y uno
u otro CMH se unen en forma complementaria, generan los mensajes de
sobrevivencia para los timocitos DP y no son eliminados por apoptosis. Si los timocitos
no reconocen las molculas del CMH o reconocen antgenos propios solubles que no
estn ligados a CMH, entran en apoptosis y son eliminados. El 90% de los timocitos
son eliminados en esta forma, en el rea de la corteza tmica son muy abundantes los
macrfagos que fagocitan estos timocitos apoptsicos.
Luego de la seleccin positiva los timocitos que sobreviven pasan a la diferenciacin
de linfocitos DP a linfocitos SP.
ESTADIO DE LINFOCITOS SIMPLE POSITIVOS (SP)
La seleccin positiva determina en ltima instancia el fenotipo y la posible
funcionalidad de la clula T: CD4+ o CD8+.
Si la seal de supervivencia que recibe la clula DP se genera por interaccin del TCR
con una molcula de clase I del CMH, se favorecer la supervivencia de los timocitos
que expresen el correceptor CD8+.
Si la clula DP sobrevive por seales generadas a travs de interacciones con una
molcula de clase II, se favorecer la supervivencia de la clula CD4+.

No todas las clulas seleccionadas positivamente alcanzan la madurez, pueden morir


ms tarde como consecuencia de un segundo mecanismo de control, la seleccin
negativa.
SELECCIN NEGATIVA
Esta se lelva a cabo cuando los timocitos con su TCR reconoce antgenos propios
presentados por las clulas dendrticas y los macrfagos a travs de sus CMH tipo I y
II y sus molculas cooperadoras como CD80 y CD86 (B 7.1 y 7.2). Si el linfocito T
reconoce fuertemente a los antgenos propios presentados por esta clula
presentadora de antgeno entran en apoptosis, si su reconocimiento produce una
respuesta de activacin moderada sobreviven y pasan a la siguiente fase de
maduracin y si no reconocen totalmente el antgeno y no se produce ninguna
activacin del linfocito T, tambin se produce apoptosis. La regin donde se produce la
seleccin negativa es en la interfase entre la corteza y mdula tmica.
La sensibilidad de los timocitos a los glucocorticoides (GC) vara durante el desarrollo
y es mximo en el estadio DP. Los GC endgenos producidos por las clulas del
estroma tmico, participan en la apoptosis de los timocitos, en particular de los
timocitos incapaces de interactuar con las molculas del CMH del individuo. Este
mecanismo mediado por GC sera responsable de establecer un umbral para la
seleccin positiva de las clulas T. Los GC ejercen una presin proapoptsica sobre
los timocitos, los cuales solo sobreviven si reciben seales apropiadas a travs del
TCR. En ausencia de las seales o seales muy dbiles, el timocito no logra
sobrevivir.
Tambin se identific el factor de transcripcin Aire (auto inmune regulador) como
responsable de la transcripcin de numerosos genes de protena especfica de tejidos
(Ej. Tiroglobulina, insulina, protena bsica de la mielina). Los pacientes que poseen
una forma defectuosa de este factor de transcripcin sufren en enfermeades
autoinmunes que pueden comprometer a diversos rganos.
Los linfocitos T maduros, pasan a la mdula tmica y abandonan el timo para unirse a
los rganos linfoideos secundarios.
La quimiocina TECK, producida por las clulas dendrticas y por las clulas de estroma
tmico, actan como un factor de retencin de los timocitos en el timo, ya que su
receptor CCR9 se expresa durante todos los estadios, salvo cuando la clula T
alcanza su madurez, lo que permite a los linfocitos T emigrar del timo.
ACTIVACIN DE LOS LINFOCITOS T
Los receptores de las clulas T son variados y con especificidad antignica. Sin
embargo los heterodmeros de cadena y , son incapaces de abandonar por s
mismos el retculo endoplsmico y expresarse en la superficie de la clula T. Antes de
abandonar el retculo endoplsmico un heterodmero : se asocia a cuatro protenas
de membranas constantes. Tres de estas protenas son codificadas por genes
estrechamente unidos del cromosoma 11 y son homlogos entre si, estas protenas se
denominan en conjunto complejo CD3 e individualmente CD3, CD3 y CD3. La
cuarta protena se conoce como cadena Zeta y es codificada por un gen del
cromosoma I. En la superficie celular las protenas CD3 y la cadena Z permanecen en
asociacin estable con el receptor de las clulas T y forman el complejo receptor de
las clulas T funcional. En este complejo las protenas CCD3 y la cadena Z traducen

seales al interior de la clula despus del reconocimiento del antgeno por el


heterodmero de cadena y .
Al contrario los dominios citoplasmticos de las protenas CD3 y de la cadena Z
contienen secuencias que se asocian con molculas de sealizacin intracelulares. En
cambio, las cadenas y del receptor de las clulas T tienen colas intracelulares muy
cortas que carecen de funciones de sealizacin.
Figura 5

Cuando un linfocito T capta los complejos Pptido CMH que se encuentra en una
clula presentadora de antgeno, se producen interacciones receptor y ligandos en
zonas localizadas en ambas membranas celulares, se focalizan alrededor de esta
unin las molculas correceptoras de la clula T. Las colas citoplasmticas de todas
las protenas CD3 contienen secuencias llamadas motivos de activacin de
inmunoreceptores basados en tirosina (ITAM), que se asocian con tirosin cinasas de
protenas del citoplasma. Estas cinasas son activadas por el agrupamiento de los
receptores y fosforilan los residuos de tirosina presentes en los ITAM. A su vez, las
enzimas y otras molculas de sealizacin se unen a los residuos de tirosina
fosforilada y se activan. De esta manera se inician las vas de sealizacin intracelular
que activan genes en el ncleo.
Las seales provenientes del TCR y del CD4 o CD8 se combinan para estimular al
linfocito T. Las colas citoplasmticas del CD4 y CD8 se asocian en una tirosin cinasa
de protenas llamado LCK.
La fosfotasa CD45 que se expresa en la superficie del linfocito, es responsable de
eliminar los grupos fosfato inhibidos de las proteincinasa, lo que permite su activacin
y la consecuente fosforilacin de los dominios ITAM, presentes en el complejo CD3. La

fosforilacin de los dominios ITAM, permite la activacin de otra tirosin cinasa ZAP-70
que fosforila a las protenas adaptadoras LAT y SLP-76. Esta ltima favorece la
activacin de la enzima fosfolipasa C (Gamma) (PLC-) por Tec cinasa y la activacin
de Ras por factores de intercambio denominados GEF (Guanine-exchange factors). La
PLC-, inicia dos de las vas transduccionales ms importantes, al escindir los
fosfolpidos de membrana PI P2 en IP3 y diacil glicerol (DAG). El IP3 induce la
liberacin de calcio de los reservorios intracelulares que activa la fosfotasa
calcineurima que a su vez activa el factor de transcripcin NFAT (Factor nuclear de
linfocitos T activados). El diacilglicerol (DAG) y el calcio activan la proteincinasa C
(PKC) que activa el factor de transcripcin NF KB. Los factores GET activan la protena
G llamada Ras y Rac que a su vez la cascada de cinasas MAP que induce y activa a
Fos, que es un componente del factor de transcripcin AP-1 y el RAc induce y activa a
Jun que es un componente tambin del factor de transcripcin AP-1.
Los factores de transcripcin NF-KB, NFAT y AP-1, actan en conjunto para inducir la
transcripcin de genes que conducen a la proliferacin y a la diferenciacin celular del
linfocito T.

La proliferacin y diferenciacin de los linfocitos T activados son controlados por la


citosina IL-2, la produccin de esta citosina requiere la seal del TCR, as como la
seal coestimuladora del CD28. Las seales emitidas a travs del complejo TCR
activan el factor de transcripcin NFAT que a su vez activa la transcripcin del gen de
la IL-2. Para evitar su produccin excesiva, el ARNm de las cito cias es
intrnsicamente inestable, por lo que requiere estabilizacin del ARNm. La
estabilizacin es una de las funciones de la seal coestimuladora. Tambin el receptor
de alta afinidad de la IL-2 es producto del mismo factor de transcripcin NFAT.

Iniciando la clula un circuito de activacin autcrino en la cual IL-2 secretada por


estos linfocitos T sostienen una respuesta proliferativa.
DIFERENCIACIN DE CLULAS TH1 Y TH2
La inmunidad celular se basa en la diferencia de linfocitos TCD4+ hacia clulas TH1
capaces de inducir respuestas inflamatorias y citotxicas para destruir patgenos
intracelulares como M. tuberculosis y Leishmania. Secretar las citoquinas IL-2, INF-,
FNT y , activan macrfagos y generan reacciones de hipersensibilidad retardada
(tipo IV), estimulan la funcin de linfocitos T citotxicos. Entre sus marcadores estn
los receptores de quimiocina CXCR3, CCR% y receptor de IL-12 e IL-18.
Los linfocitos TCD4+ polarizados hacia un perfil TH2 sintetizan altos niveles de cito
cias IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 y colaboran con los linfocitos B en la produccin de
anticuerpos. Tiene la expresin de receptores CCR3, CCR4 y la molcula ICOS. La
diferenciacin a clulas TH1 y TH2 es influida fundamentalmente por el fenotipo de
clulas dendrticas que actan como CPA y el microambiente de citocinas.
FACTORES DE TRANSCRIPCIN INVOLUCRADAS EN EL COMPROMISO TH1
Al mismo tiempo del efecto causado por la sntesis de la IL-2 y su receptor, se induce
la sntesis del receptor de IL-12. Al presentar antgeno al TCR por una clula dendrtica
que produce cantidades elevadas de IL-12, al ser reconocido dicho antgeno, sucede
la diferenciacin de los linfocitos TCD4+ en clulas TH1, proceso durante el cual
STAT4+ (transductor de seales y activador de la transcripcin tipo 4), es fosforilado
por JAK (pertenece a la familia Janus) y adquiere actividad transcripcional, se traslada
al ncleo y desreprime el ADN, donde se codifica la citoquina Gamma Interfern (INF
) y su receptor.
El INF amplifica la respuesta TH1 al unirse a su receptor en la membrana en un
circuito de activacin autocrina/paracrina y activa el factor de transcripcin STAT-1, lo
que promueve a su vez un incremento progresivo de la actividad T-bet, que es el factor
de transcripcin de mayor relevancia identificado, capaz de determinar respuesta TH1, dirigiendo en forma directa y sostenida de INF, actividad que comparte con otros
factores de transcripcin como NFB y STAT-4.
FACTORES DE TRANSCRIPCIN INVOLUCRADA EN LA DIFERENCIACIN DE
TH2.
Los linfocitos vrgenes tienen capacidad moderada de presentar receptores y citocinas
del grupo TH1 y TH2.
El reconocimiento de antgeno por linfocitos T vrgenes presentados por clulas
dendrticas (CPA) en un microambiente, predominante de Il-4, activa el factor de
transcripcin STAT-6 que inicia la cascada de fosforilacin por enzimas JAK. Dicha
activacin se pone en marcha tras la interaccin de IL-4 con su receptor e inicia la
activacin del factor de transcripcin GATA-3 que es un miembro de la familia de
factores de transcripcin GATA que poseen dominios del tipo dedos de cinc. El GAT-3
participa activamente en la maduracin de los linfocitos T inmaduros, pero tambin
tiene un papel preponderante en inducir el perfil TH2, pues se asocia con la presencia
de sitios de unin de GAT-3 en el promotor de IL-4 e IL-5. Tambin se ha observado
que el factor de transcripcin C-Mat, que pertenece a la superfamilia AP1/CREB/ATF,
se expresa en linfocitos TH2 y su blanco principal es el gen de IL-4 facilitando su
expresin, es muy importante en el incremento de niveles plasmticos de IL-4 y las
inmunoglobulinas de isotipo IgE e IgG-1.

La protena NOTCH que es importante en el desarrollo de clulas T tempranas,


participan tambin pero a nivel de las clulas dendrticas presentadoras de antgenos
en la diferenciacin TH1 y TH2.
Si las protenas NOTCH se unen a ligandos de protenas Delta de la superficie de
linfocitos T, se favorece la produccin de un patrn de citocinas TH1. Si por el
contrario NOTCH se une a protenas Jagged, la clula se polariza hacia un perfil TH2.
LINFOCITOS TCD8 CITOTOXICOS
Estos linfocitos reconocen antgenos de clulas presentadoras de antgenos que son
prcticamente todas las clulas nucleadas del organismo, con excepcin de los
eritrocitos y la clula nerviosa que tiene muy poco CMH tipo I, quizs como un
mecanismo de proteccin para evitar una destruccin masiva del sistema nervioso
cuando por ejemplo se produce una encefalopata viral.
El factor de transduccin T-bet es importante para activar la produccin de Gamma
Interfern que activa junto a la IL-2 la reproduccin de este grupo de linfocitos.
La activacin de los linfocitos TCD citotxicos al reconocer antgeno unido al CMH tipo
I, se produce destruccin de la clula presentadora de antgenos, por dos
mecanismos:
a)

Molculas de secrecin: Perforinas y Granzinas.


Las perforinas son glicoprotenas largas parecidas al C9 del complemento,
que al unirse a la membrana celular, se unen unas con otras hasta formar
agujeros, por donde penetran las granzinas, que activan caspasas que son
proteolticas y rompen protena intracelular con la posterior destruccin
celular. Las principales caspasas activadas son la 8 y 6.
Al unirse el linfocito T citotxico con la clula diana (CPA), se activa el factor
de transduccin el Eomes que induce la sntesis de los grnulos y la
produccin de perforinas y caspasas.

b)

Activacin de la Apoptosis:
Estimula la activacin de la molcula FAS (CD 95) en la membrana celular
de la clula blanco, por medio de su molcula FAS ligando (FASL).
Al unirse estas dos molculas se inicia la apoptosis celular con una serie de
procesos metablicos que activan las caspasas 8 y 6 que rompen protenas
intracelulares con la consiguiente muerte celular.
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