5.1.

2 ORIGEN DE LAS CEPAS INDUSTRIALES

ORIGEN DE
LOS
organizacin celular

MICROORGANISMOS

INDUSTRIALES

Tipos de

Los seres vivos pueden agruparse en tres grandes grupos que se separaron
en pocas evolutivas muy antiguas: bacterias, arqueas y eucarias. Bacterias y
arqueas presentan un tipo de organizacin celular conocida como procaritica
porque en ellas el material gentico no est separado del resto del citoplasma
por una membrana nuclear (son clulas sin ncleo), mientras que los
organismos pertenecientes al grupo de eucaria presentan un ncleo
diferenciado del resto de la clula y, por tanto, su organizacin celular se
denomina eucaritica.
La teora evolutiva establece que todos los seres vivos (procariticos y
eucariticos) derivan de un antepasado comn cuyos descendientes fueron
divergiendo a lo largo de la evolucin. Mediante tcnicas de biologa molecular
ha sido posible ir estableciendo las relaciones familiares entre los diferentes
grupos de organismos de forma que pueden representarse en esquemas que
relacionan los grupos entre s. Estos esquemas se conocen generalmente con
el nombre de rboles universales de la vida.
Los organismos ms relevantes desde el punto de vista industrial y aplicado
pertenecen al grupo de bacterias y eucarias. Dentro de las bacterias se
encuentran la mayora de los organismos patgenos, un gran nmero de
productores de substancias de inters aplicado (antibiticos, por ejemplo) y
productores y agentes alterantes de alimentos. Dentro de los eucarias nos
encontramos los animales, plantas y hongos (las levaduras unicelulares y
los hongos filamentosos). Hay algunas arqueas que participan en procesos
de inters aplicado (organismos metangenos, por ejemplo). Aunque su
nmero es reducido, probablemente se ir incrementando en el futuro conforme
se profundice en el estudio de este tipo de microorganismos.
En esta presentacin hemos dejado de un lado los virus por ser estructuras
acelulares que slo desarrollan actividad biolgica cuando se encuentran en el
interior de una clula a la que infectan y por su escasa relevancia en
microbiologa industrial (dejando a un lado su efecto negativo sobre ciertos
cultivos industriales).
http://www.unavarra.es/genmic/micind-1.htm
1.- Introduccin al proceso industrial
A la hora de desarrollar un proceso industrial MICROBIOLGICO destinado a
la produccin de un metabolito secundario o de una enzima de origen
microbiano, hay que considerar varios aspectos:
(1) el aislamiento del microorganismos de inters, la deteccin de los
metabolitos secundarios deseados y la conservacin del microorganismo
aislado para la produccin industrial estable,

(2) el diseo del proceso de fermentacin, y

(3) la mejora de las cepas aisladas para incrementar el rendimiento.
Todos los organismos producen metabolitos primarios (aquellos que
intervienen en las rutas centrales del metabolismo y que son esenciales para la
supervivencia y, en general, idnticos en todo tipo de organismos) y
secundarios. Estos ltimos son especficos de cada tipo de organismo y estn
involucrados en el establecimiento de las relaciones ecolgicas del organismo
productor.
2.- Aislamiento y manipulacin de cultivos de inters.
2.1.- Aislamiento de cultivos
El primer paso en el proceso industrial es el aislamiento de un microorganismo
que produzca un metabolito secundario con inters industrial. La tarea de
aislamiento de microorganismos hay que plantearla considerando las
caractersticas del producto y del proceso que se va a realizar y las
caractersticas ecolgicas de la muestra que se toma. Lo primero nos indicar
dnde tomar las muestras y lo segundo cmo disear los medios de
aislamiento para los microorganismos presentes en dichas muestras.
El estudio ecolgico de las caractersticas del microorganismo de inters
permitir hacer una bsqueda sistemtica en los diferentes nichos de un
ecosistema, lo que proporcionar un gran nmero de microorganismos de
salida para el proceso de deteccin.
Un esquema de estudio ecolgico previo a la toma de muestras comprendera
los siguientes pasos:
(1) lista de grupos de microorganismos que van a ser aislados (los medios y
tcnicas de cultivo son diferentes para bacterias y hongos, por ejemplo);
(2) descripcin del ecosistema o hbitat en el que se van a tomar las
muestras,
(3) agrupacin de las muestras segn el material de origen (suelo y horizontes
del suelo, agua, material vegetal, etc.);
(4) lista de los parmetros ambientales a considerar (pH, salinidad, potencial
redox, temperatura, etc.);
(5) lista de los substratos naturales disponibles por los microorganismos
autctonos en su ambiente natural,
(6) diseo de las tcnicas de aislamiento usando la informacin de los puntos
anteriores,

(7) evaluacin de las tcnicas de aislamiento usando patrones internos como

control, y
(9) utilizacin de procedimientos de enriquecimiento para los microorganismos
que puedan ser de inters.
1.2.- Deteccin de metabolitos secundarios:
Una vez recogidas las muestras hay que desarrollar el procedimiento de
bsqueda y deteccin (screening en ingls) del metabolito secundario de
inters. Histricamente la bsqueda se ha dirigido hacia la produccin de
antibiticos; pero actualmente se ha ampliado el campo a otros productos
teraputicos y, en general, puede desarrollarse cualquier bsqueda para la que
se disponga de un sistema de deteccin suficientemente correcto.
En cualquier caso, haz que considerar dos cualidades importantes a la hora de
disear un proceso de deteccin:
(1) la selectividad: se ha de poder detectar un compuesto de inters mezclado
con un nmero muy elevado de compuestos que no son interesantes; y,
(2), la sensibilidad: la concentracin del metabolito secundario de inters
puede ser extremadamente baja.
La bsqueda puede hacerse en cultivos slidos o en cultivos lquidos. Sin
embargo, puesto que la produccin ha de realizarse en cultivos lquidos y
puesto que los metabolitos secundarios de cultivos slidos son diferentes de
los de cultivos lquidos, es conveniente realizar la deteccin, siempre que sea
posible, en medios de cultivo lquido.
Las pruebas de actividad se pueden realzar sobre diferentes tipos de
organismos (animales vivos, plantas, bacterias, hongos), sobre cultivos
celulares o sobre preparaciones subcelulares. Para cada tipo de bsqueda hay
que disear un procedimiento de deteccin adecuado.
1.3.- Desarrollo del inculo:
Tanto en la primera produccin industrial como en las siguientes es necesario
utilizar grandes volmenes de cultivo por lo que la preparacin de un inculo
adecuado es una tarea de importancia capital. En un proceso industrial puede
ser necesario realizar incubaciones de gran volumen (>160.000 litros) para las
que son necesarios tambin grandes inculos (>1.000 litros).
Para repetir rutinariamente la operacin de produccin es necesario utilizar
cultivos almacenados del microorganismo de inters (cultivos stock) y a partir
de ellos hay que desarrollar el inculo intentando: (1) minimizar la prdida de
viabilidad durante el proceso de recuperacin del microorganismo, (2) obtener
una copia genticamente idntica a la que se haba almacenado (esto es: evitar
mutaciones y contaminaciones), (3) incrementar la biomasa del cultivo y (4)

cultivar el microorganismo hasta un estado fisiolgico adecuado para lograr la

mayor eficiencia en la fase final de produccin.
Al desarrollar un inculo es necesario conseguir una alta velocidad de
crecimiento y de concentracin de biomasa al inicio del proceso de
fermentacin.
1.4.- Mejora de las tcnicas de cultivo:
Desde las primeras etapas del desarrollo de un proceso industriales hace
necesario mejorar el medio de cultivo del microorganismo para conseguir un
mayor rendimiento en la produccin del metabolito de inters, reducir la
presencia de otros productos que puedan dificultar el aislamiento del
compuesto deseado y reducir los costes de produccin. Puesto que el nmero
de variables qumicas y fsicas independientes que afectan el crecimiento del
microorganismo es muy alto, su optimizacin mediante el anlisis sistemtico
de cada una de ellas se hace rpidamente imposible. Para realizar el estudio
cuando hay ms de cinco variables independientes se recomienda utilizar una
aproximacin de anlisis multivariable (mtodo de Packett-Burman) que
consiste en agrupar varias variables para decidir sobre el incremento en
rendimiento debido al cambio de un grupo de ellas.
1.5.- Conservacin de los microorganismos importantes:
La conservacin de microorganismo de inters industrial es una tcnica bsica
en todo el proceso. La conservacin ha de estar encaminada al mantenimiento
de las cepas altamente productivas durante largos periodos de tiempo sin que
se produzcan cambios fenotpicos, especialmente en las caractersticas
relacionadas con la produccin de los metabolitos secundarios de inters.
Se han desarrollado varias tcnicas de conservacin;
(1) el subcultivo de clulas activas,
(2) la desecacin de cultivos,
(3) la liofilizacin,
(4) la congelacin mecnica (-20 -80C) y
(5) la ultracongelacin en vapor de nitrgeno lquido (-156C) o en nitrgeno
lquido (-196C). Generalmente, las tasas de supervivencia son ms elevadas
despus de la conservacin en nitrgeno lquido que tras cualquiera de los
otros mtodos. En los casos de conservacin por congelacin, es necesario
aadir a los cultivos agentes crioprotectores (glicerol, Di-Metil-SulfOxido,
DMSO).
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/010introd%20micro%20industrial.htm