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Universidad de El Salvador

Facultad de Ciencias Naturales y Matemtica


Escuela de Qumica
Profesorado en qumica
Introduccin a la Bioqumica
Ciclo II-2016

PRCTICA DE LABORATORIO 3
ENZIMAS

OBJETIVO.
Determinar cuantitativa y cualitativamente la actividad enzimtica de algunas enzimas como la
catalasa, amilasa, glucosidasa y la succinato deshidrogenasa.
INTRODUCCIN.
Las enzimas* son el grupo ms variado y especializado de las protenas, su funcin es actuar como
catalizadores, permitiendo que las reacciones que transcurren en los seres vivos puedan
desarrollarse ptimamente.
Las enzimas son biocatalizadores (es decir compuestos de origen biolgico) que aceleran las
reacciones qumicas. El proceso organizado del metabolismo solo es posible porque cada clula
dispone de un contenido enzimtico determinado genticamente. Solo de este modo pueden
tener lugar secuencias de reacciones combinadas (vas metablicas). Las enzimas tambin
participan en muchos mecanismos de regulacin que de este modo permiten que el metabolismo
se adapte a diferentes situaciones. Casi todas las enzimas son protenas pero tambin hay cidos
nucleicos catalticamente activos conocidos como ribozimas. A continuacin se describen algunas
enzimas de inters para esta prctica.

Succinato deshidrogenasa.

La succinato deshidrogenasa cataliza la deshidrogenacin estereoespecfica del succinato a


fumarato:

La succinato deshidrogenasa contiene un grupo prosttico FAD que se une en forma covalente a la
enzima por medio de un residuo de histidina. En general, el FAD funciona para oxidar
bioqumicamente compuestos saturados (succinato) a alquenos (fumarato). La deshidrogenacin
del succinato produce FADH2, que debe reoxidarse antes que la succinato deshidrogenasa pueda
emprender otro ciclo cataltico. La reoxidacin de FADH2 se produce cuando sus electrones pasan
a la cadena de transporte de electrones en la mitocondria.

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Amilasa.

La amilasa salival, tambin llamada ptialina acta hidrolizando los enlaces glucosa-( 14)-glucosa
y, por lo tanto, degrada el almidn y el glucgeno. La ptialina requiere cloruro como cofactor
inorgnico para que la catlisis ocurra de manera ptima. El rompimiento de del almidn y del
glucgeno ocurre de tal forma que se separan de dos en dos los fragmentos de la molcula
polimrica.

Glucosidasa.

Las glucosidasas son un subgrupo de las hidrolasas. Su especificidad no se limita a un solo azcar,
hidrolizan enlaces y . La sacarosa constituye un sustrato para dos glucosidasas distintas, pues se
hidroliza con una -glucosidasa pero adems las clula de levadura la hidrolizan con una fructofuranosidasa.

Catalasa.

Considerada una hidroperoxidasa junto con la peroxidasa, se encuentra presente tanto en


animales como en vegetales. El centro activo de la catalasa se encuentra un grupo hemo.

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Una acumulacin excesiva de H2O2 resulta txica para la clula. La catalasa puede descomponer el
perxido de hidrgeno u oxidar sustratos secundarios, pero no tiene ninguna accin contra otros
perxidos. El H2O2 se descompone por medio de la accin de dos enzimas: a) catalasa (perxido de
hidrgeno oxidoreductasa) y b) cualquier peroxidasa. La descomposicin cataltica del H2O2
involucra la reduccin del Fe3+ en la catalasa por H2O2 a su forma reducida Fe2+ y la reoxidacin de
este mismo por el oxgeno generado en el proceso.

DESARROLLO EXPERIMENTAL.
MATERIALES.
1 Hotplate
1 Bureta de 25 mL
1 Beaker de 250 mL
3 Beaker de 50 mL
4 Beaker de 15 mL
3 Beaker de 100 mL
1 Balanza analtica
1 Mortero y pistilo
1 Soporte metlico
1 Probeta de 5 mL
2 Agitadores de vidrio

2 Balones volumtricos de 50 mL
1 Pizeta
1 Esptula
2 Vidrios de reloj
1 Termmetro
1 Pinza para bureta
8 Tubos de ensayo pequeos (10 x 75)
1 Pinzas para tubo de ensayo
1 Gradilla para tubos de ensayo
2 Balones volumtricos de 25 mL
3 Embudos de vidrio de cuello corto

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REACTIVOS.
Sacarosa
NaOH al 10%
Fenol al 90%
Almidn al 2%
Lugol (I2 y KI)
Papel pH o pH-metro
Azul de metileno al 0.1%
*Aceite mineral
*Zanahoria pequea
*Corazn e Hgado de pollo

cido succnico al 3%
Perxido de hidrgeno (H2O2) al 30 %
Reactivo de Fehling
Agua destilada
*Marcador
*Vietas
*Levadura
*Fuente de catalasa: Papa (Pequea)
*Hojas de planta (4 hojas de espinaca)

Nota: * Material que traer el alumno.


PARTE 1.
PARTE 2.
HIDRLISIS DEL ALMIDN POR ACCIN DE LA AMILASA.

Marcar 2 tubos de ensayo y realizar las siguientes preparaciones.


Tubo 1

2.0 mL de solucin de almidn al 2 % ms 2 gotas del reactivo de Fehling. Anotar


los resultados.

Tubo 2

2.0 mL de solucin de almidn al 2 % ms 1 gota de lugol. Anotar los resultados.

Preparar la solucin de saliva (1:10) con agua destilada, obtenindose as la preparacin de


enzima base. Agregar 2 mL de solucin de saliva a los tubos 1 y 2. Anotar los cambios.
PARTE 2
ACCION DE LA CATALASA
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Fragmentar en pequeos trozos el hgado de pollo.


Pesar 1.0 g de hgado de pollo
Introducir los trozos del hgado en un Beaker de 20 mL.
Rotular las muestras.
Repetir los pasos 1-4 con zanahoria y las hojas de espinaca
Agregar 4 mililitros de perxido de hidrgeno (H2O2) al 30 % a cada una de las muestras

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7. Observar la reaccin que se lleva a cabo en el interior de los Beaker


8. Registrar los cambios y reacciones observadas.
9. Tomar 3 nuevas muestras (hgado, hojas de espinaca, y una de zanahoria) e introducirlas en
3 Beaker de 100 mL con agua en ebullicin respectivamente.
10. Despus de 15 minutos sacar las muestras y colocarlas en Beaker de 20 mL
respectivamente.
11. Rotular las muestras.
12. Observar y registrar los cambios sucedidos.
13. Dejar enfriar ambas muestras.
14. Agregar a cada uno de los Beaker 4 mililitros de perxido de hidrgeno (H2O2) al 30 %
15. Observar y registrar los cambios sucedidos.
16. Fragmentar en pequeos trocitos la muestra de corazn de pollo.
17. Depositar la muestra de corazn en un Beaker de 20 mL.
18. A esta muestra aplicarle 5 mililitros de perxido de hidrgeno al 30 %.
19. Observar la reaccin que se lleva cabo y registrar los cambios.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.
1. Koolman.; Rohm.; Bioqumica. Texto y Atlas. Tercera edicin. Editorial mdica
Panamericana. Madrid. Espaa 2004. Pp80.
2. Voet.; Voet.; Pratt. Fundamentos de Bioqumica. La vida a nivel molecular. Segunda
edicin. Editorial mdica Panamericana. Madrid. Espaa 2007. Pp530.
3. Silvia Quesada Mora. Manual de experimentos de laboratorio para Bioqumica. Primera
edicin. Editorial Universidad Estatal a Distancia. San Jos, Costa Rica 2007. Pp103.
4. Pea; Arroyo; Gmez; Tapia; Gmez. Bioqumica. Editorial LIMUSA. Mxico 2004. Pp256.
5. K. Bachmann. Biologa para mdicos. Editorial Revert. Barcelona, Espaa 1978. Pp18.
6. Mac. Faddin. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia
clnica. Tercera edicin. Editorial mdica Panamericana. Montevideo, Uruguay 2000. Pp76.