Preguntas Fermenta:

Factor de Efectividad ()
1. Por qu la actividad enzimtica se mide a tiempos cortos?
Expresa los efectos combinados de los factores que afectan a
Como sabemos la actividad enzimtica est en funcin con su velocidad
las propiedades intrnsecas de la enzima.
y para poder medir la velocidad el tiempo tienen que ser muy cortos de
modo que la velocidad de la reaccin de reserva es insignificante

2. Cules son los parmetros de RDI y RDC en un proceso reactivo

con enzimas inmovilizadas?

RD externas:
=1 -> La actividad de la enzima no se ha reducido por la
inmovilizacin.
: ( numero de Damkheler )
<1 -> Se ha perdido parte de la actividad durante la
inmovilizacin y por los efectos de particin y difusionales.
0
>1 -> Al romper clulas inmovilizada, cuando hay divisin
, celular, cuando los inhibidores se excluyen selectivamente,
= ( factor de efectividad ) :f aumento de temperatura, cuando la enzima inmovilizada es
ms estable.

Resultan como consecuencia de la existencia (en la vecindad de la

partcula cataltica) de una zona de lquido estanco donde hay slo RD internas:
difusin molecular y no transporte convectivo.
Si la limitacin es muy fuerte, la velocidad de la reaccin es la velocidad =( modulo de Thiele ) , =f ( z , )
de difusin.
Estas restricciones disminuyen aumentando la agitacin para mejorar el
mezclado. 0
En una situacin ideal de mezcla sin limitacin de la difusin, la ,
reaccin tendr los parmetros cinticos idnticos a los de la enzima :f
libre.

Mdulo de Damkholer ()
Nmero adimensional que expresa la relacin entre la velocidad Se deben al tamao y tortuosidad de los poros del soporte.
mxima de una reaccin enzimtica y la velocidad mxima de Efecto ms complejo porque la difusin se produce simultneamente
transferencia de sustrato en las proximidades de una enzima con la reaccin, creando gradientes de concentracin alrededor de las
inmovilizada partculas.
Indica los factores que limitan la actividad de la enzima inmovilizada El efecto sobre la Km es el mismo que para la limitacin difusional
y cuanto se aleja del mximo posible. externa (Km> Km)
La disponibilidad de sustrato es ms difcil y siempre se tendrn valores
Incidencia del fenmeno de transporte de Vmax < Vmax porque la enzima ubicada en el centro de la partcula
de sustrato en la expresin del permanecer inactiva.
potencial cataltico de la enzima.
Es importante controlar la cantidad de enzima inmovilizada.
Si es pequeo -> baja incidencia de
RDE
Si es grande -> alta incidencia de
RDE
 Mdulo de Thiele ()
Mtodo para cuantificar las restricciones difusionales internas y
externas.
Relacin entre velocidad de reaccin qumica y proceso difusivo en
los poros.
Los valores pequeos: no influye el proceso difusivo (mayor factor
de efectividad); y los valores altos: tienen mayor influencia de
difusin en los poros (menor factor de efectividad)
La definicin slo es vlida para una ecuacin cintica concreta
(primer orden).

L = Espesor medio de la
partcula.
[E] = Contenido en enzima
de la partcula.
De = Difusividad efectiva del

3. Porque es fundamental el K y Vmax de enzimas como

biocatalizadores en un reactor.
K es la constante de velocidad o tambin constantes microscpicas
de velocidad
En estas condiciones (las condiciones ptimas de pH,temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato), la velocidad de reaccin observada es la
velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.
Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de
desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo se
4. Mencione un objetivo de las estrategias de operacin en un
obtiene la llamada curva de progreso de la reaccin,
biorreactor enzimtico.
o simplemente, la cintica de la reaccin.
La operacin de reactores enzimticos requiere producto de calidad
uniforme (X= cte)

En bioreactores por lotes :

E soluble: X:f(E,t)

E inmovilizado: Prdida de capacidad cataltica

La prdida de la capacidad cataltica durante la operacin del birreactor;

bsicamente se debe a la temperatura y al tiempo que est expuesto.
 El estudio del fenmeno de inactivacin trmica del biocatalizador y la
determinacin de la T de operacin de un birreactor enzimtico son
aspectos de la mayor relevancia.
5. Defina UI.
UNIDAD INTERNACIONAL DE ACTIVIDAD ENZIMTICA: Es la
cantidad de enzima que cataliza la transformacin de 1 micromol de
substrato por minuto, bajo condiciones bien definidas (condiciones
estndar). Esta es la expresin bsica de la velocidad de la reaccin.
Se ha sugerido que la temperatura debe ser, en lo posible, de 30C
y que las otras condiciones, tales como pH y concentraciones de
substratos, debieran ser las ptimas para la actividad enzimtica.
La cantidad de enzimas presentes en un fluido biolgico es muy
difcil de determinar en valores absolutos, mg. o moles, una forma de
resolver este problema es midiendo la velocidad de reaccin
catalizada por la misma empleando un sustrato especfico. La
velocidad de reaccin puede expresarse como la cantidad de
reactivo que se transforman en producto por unidad de tiempo. De
all que la unidad internacional (UI) de cualquier enzima se define
como la cantidad de la misma que cataliza la transformacin de un
mol de sustrato por minuto, bajo condiciones definidas: pH,
temperatura, concentracin de sustrato/s y cofactores, etc.
En base a lo que se acaba de explicar es posible expresar la
cantidad de una enzima en un fluido biolgico en UI/cm 3 o en UI/ mg.
de protena total. Esta ltima expresin denominada actividad
especfica es la cantidad de moles de sustrato transformados por
minuto y por mg. de protena, debindose indicar la temperatura, el
pH, etc.Es importante recordar que la actividad especfica de una
enzima es una medida indirecta de la fraccin de la protena total en
una preparacin que contienen a la enzima.
6. Mencione las ventajas de usar biorreactores con enzimas
inmovilizadas.
Biorreactores con Enzimas Inmovilizadas
CREADO EL MARZO 30, 2011 POR AMARIN
ARCHIVADO COMO BIOTECNOLOGA Y ECONOMA, PRODUCTOS
BIOTECNOLGICOS | DEJA UN COMENTARIO
Las enzimas son macromolculas de carcter proteico que poseen
capacidad cataltica. Esto quiere decir que hacen que las reacciones
qumicas se produzcan ms rpidamente. Esta extraordinaria propiedad
junto con otras, como por ejemplo la especificidad de sustrato o la
esteroselectividad, justifican el gran inters que han suscitado en el mundo
de la qumica. Cada da se intentan encontrar ms y ms procesos que se
puedan llevar a la prctica por va enzimtica. Pero el empleo de esta
tecnologa genera problemas derivados principalmente de su alto coste y de
la imposibilidad de reutilizarlos cuando se trata de reacciones con enzimas
solubles. Es por ello por lo que se han desarrollado diversos tipos de
inmovilizacin para estas enzimas.
Figura 1. Esquema de un reactor de membrana con lipasas inmovilizadas en
la membrana
La inmovilizacin de enzimas presenta una serie de ventajas clave que
justifican su utilizacin en la industria, pero esta tcnica no esta exenta
tambin de algn que otro inconveniente. Entre las ventajas podemos
destacar que la inmovilizacin de enzimas permite la reutilizacin de las
mismas, a la vez que aumenta su estabilidad frente a un abanico ms amplio
de valores de temperatura y pH. Tambin posibilita su operacin en continuo
as como el diseo de reactores enzimticos de ms fcil manejo y control.
Por otro lado, entre las desventajas podemos mencionar que el proceso de
inmovilizacin puede bloquear centros activos de la enzima, haciendo que la
actividad global disminuya. Y tambin la protena puede ver modificada su
conformacin con respecto al estado nativo. Otra desventaja es el coste de
la inmovilizacin, pero este se ve compensado por la reutilizacin de la
enzima [1].
Existen distintos tipos de reactores que operan con enzimas inmovilizadas.
Entre otros, destacan los reactores que utilizan enzimas inmovilizadas en
partculas porosas con forma esfrica. En el interior de dichos poros, las
enzimas pueden quedar fijadas por mtodos fsicos y qumicos, que aqu no
se detallan. Los reactores que operan con este tipo de partculas lo pueden
hacer bien en lecho fijo [2], lecho fluidizado [3] o suspendidas en el seno del
lquido (tanque agitado o CSTR). Tambin existen otro tipo de reactores que
utilizan enzimas incluidas en una membrana semipermeable [5]. Un
esquema de este tipo de reactor se muestra en la Figura 1
Permite la utilizacin continua del biocatalizador, dado que ste
queda fcilmente retenido en el interior del reactor utilizado, mientras se
mantiene en flujo continuo de entrada y salida de lquido.
Favorece la re-utilizacin del biocatalizador en el caso de reacciones
en discontinuo.
V S0
v=
K + S0
8. En el rango de linealidad de la invertasa Cul fue el objetivo de
emplear un blanco?
El blanco es una muestra cultivada de la clula sin las sustancias que se
quiere emplear, y el objetivo es que permita saber si el comportamiento
del cultivo se debe a la sustancia que le aadiste o si simplemente se
debe a otro factor distinto de la sustancia.
9. Por qu la determinacin de experimental de rango de linealidad
de la invertasa soluble se tuvo que ensayar a diferentes diluciones
del extracto enzimtico de levadura?

Con la inmovilizacin se puede aumentar sensiblemente

la concentracin de biocatalizador, con respecto a un proceso en el que
el mismo se encuentre en suspensin.

En cuanto a sistemas operando en continuo, stos permiten

un aumento en las productividades de los correspondientes
biorreactores, dado que permiten operara a mayor concentracin
decatalizador, (mayor conversin de substrato) y con caudales ms
altos. K et
10. Para qu es til obtener el perfil X vs K ?
En el caso de enzimas inmovilizadas es frecuente observar un
aumento de su estabilidad y su resistencia a la desnaturalizacin
y proteolisis.

Permite reducir los efectos de contaminacin accidentales del

proceso en las clulas; dado que la poblacin de clulas contaminantes
se encuentran en suspensin y en concentracin mucho menor que la
poblacin de clulas inmovilizadas, sta puede ser eliminada mucho
ms fcilmente del reactor.

7. Cmo se mide la actividad de una enzima?

Se mide mediante la siguiente ecuacin:

11. Porque es indispensable en el experimento determinar los valores

de los parmetros de una enzima soluble e inmovilizada en tu
 experiencia de catlisis de la invertasa inmovilizada podras intuir sustratos anlogos) y segn las condiciones de reaccin en que se
que sus valores fueran equivalentes o semejantes a las obtenidas realicen las mediciones.
con invertasa soluble por qu? Se puede hallar ambas constantes (Vmax y Kmax) con el diagrama de
Lineweaver-Burk que se emplea como herramienta grfica para
Cuando estudiamos la accin de una enzima en un organismo es importante calcular los parmetros cinticos de una enzima.
saber su Vmax porque es el parmetro cintico por excelencia. Tenemos que
saber su velocidad mxima para poder conocer su 1/2 Vmax, del cual
hallamos Km, que es la concentracin de sustrato a la que una enzima
o
trabaja a la mitad de la Vmax. De esta manera, aadiendo los distintos
sustratos de la enzima sabremos, segn su Km, con cual trabaja mejor, por Cuyo recproco es:
cual tiene ms o menos afinidad etc. Asimismo, podremos estudiar
inhibidores y activadores de la enzima, que segn sean Competitivos, no
competitivos o Mixtos modificarn su Vmax pero no su Km, o modificarn su o
Km pero no su Vmax, o modificarn ambos parmetros.

No hay semejanza porque los parmetros cinticos de la enzima soluble son

mayores que de la enzima inmovilizada, la inmovilizacin puede limitar el
acceso del sustrato al centro activo de la enzima, lo que afecta en la Donde V es la velocidad de reaccin, Km es la constante de
actividad. Michaelis-Menten, Vmax es la velocidad mxima, y [S] es
la concentracin de sustrato.

12. Cmo se halla el Vmax y Kmax?

Para determinar la velocidad mxima de una reaccin enzimtica, la
concentracin de sustrato ([S]) se aumenta hasta alcanzar una
velocidad constante de formacin de producto. Esa es lavelocidad
mxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la
enzima estn saturados con sustrato.
La representacin grfica de Lineweaver-Burk permite identificar el
Km y Vmax; el punto de corte con el eje de ordenadas es el
equivalente a la inversa de Vmax, y el de abscisas es el valor de
-1/Km.

13. Cul es el verdadero parmetro cintico que determina la

eficiencia de la enzima?

Pues K es una cnstante que ayuda a definir la actividad enzimtica,es decir

la eficiencia de una enzima.

K=K0.e ED/RT

Es K m como la concentracin de sustrato necesaria para alcanzar la mitad

de la velocidad mxima de la reaccin.
Aunque es imposible medir exactamente la concentracin de sustrato
que da Vmax, las enzimas pueden caracterizarse mediante la
concentracin de sustrato a la cual la velocidad de reaccin es la
mitad de la velocidad mxima. Esta concentracin de sustrato se
conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Se obtendr
una KM diferente segn el sustrato especfico sobre el que acte la
enzima (como sucede en el caso de enzimas que actan sobre
14. Cul es el procedimiento para obtener el rango de linealidad y
enzima inmovilizada?