Aplicaciones de Biotecnología Industrial

Ingeniera gentica: Aplicaciones biotecnolgicas
Produccin de GMOs: vegetales

Otro tipo de vectores para producir otros GMOs
En vegetales:
Agrobacterium tumefeciens
Produccin de GMOs: vegetales
Otro tipo de vectores para producir otros GMOs
Alimentos transgnicos
PLAY
http://www.youtube.com/watch?v=L7qnY_GqytM&feature=related
Tema expo: Mtodos de Produccin de GMOs animales

5
Procesos Biotecnolgicos: Biotecnologa Blanca
1. Productos menos txicos

2. Reduccin de gasto energtico
3. Reduccin de derivados
4. Economa atmica
5. Empleo de fuentes renovables
REQUERIMIENTOS
DE LA QUMICA 6. Catlisis
VERDE 7. Prevenir produccin de residuos
8. Sntesis qumica segura
9. Reduccin de sustancias auxiliares
10. Productos degradables
11. Monitorizacin en tiempo real
12. Empleo de sustancias seguras.
Oxford University Press. Anastas (1998)
Catlisis y Qumica Sostenible
Reacciones ms rpidas a temperaturas ms bajas(actividad).
Menos subproductos y Ahorro de pasos de purificacin

(selectividad - especificidad).
Ingeniera y Economa del proceso (estabilidad).

Biocatlisis
Biocatlisis para la industria
LOS BIOCATALIZADORES SON CAPACES DE CATALIZAR LOS PROCESOS

QUMICOS MS COMPLEJOS
CONDICIONES SUAVES
Eficiencia energtica.
Ausencia de subproductos (enzimas).
Ausencia de reactivos txicos.
Respeto por el medio ambiente.
PROCESOS SOSTENIBLES
Ingeniera de Biocatalizadores
Cmo mejorar el biocatalizador
BIOLOGA MOLECULAR
Diseo de enzimas recombinantes de organismos termoalcalficos
Purificacin
CRISTALOGRAFA
QUMICA DE SUPERFICIES
(Estructura 3D)
INMOVILIZACIN
INGENIERA DEL MEDIO
Optimizacin de la estabilidad y la reactivacin Optimizacin de la selectividad Aumento de la actividad

Bases de la biotecnologa: Ingeniera gentica
Biotecnologa Blanca: Ingeniera de Biocatalizadores
Cmo mejorar el biocatalizador
- Ingeniera de protenas.
- Ingeniera de inmovilizacin.
- Ingeniera del medio de reaccin.
Ingeniera de protenas: mutagnesis dirigida, al azar, modificaciones qumicas,

mtodos in silico.
Ingeniera de inmovilizacin: heterogeneizacin y estabilizacin; mtodos

reversibles e irreversibles, uso de macro y nanopartculas.
Ingeniera del medio de reaccin: cambio en el diseo de reactores, cambio del

medio de reacccin, uso de aditivos (cosmotropos, cosolventes, detergentes),
Optimizacin.
Cmo mejorar la protena o biomolcula recombinante

obtenida.
Al azar (no racional) : se promueven mutaciones durante la PCR o
en los clones generados (con mutgenos) y despus se ve el
resultado en la protena.
Mutagnesis Sitio-dirigida (racional): se cambian ciertos aminocidos de lo

(cambios en el gen que se conoce su funcin probable en la protena por otros para
condificante de la
protena de inters verificar hiptesis y producir mutantes con nuevas propiedades.
para cambiar sus AAs)
Combinatoria (semi-racional): usada en evolucin dirigida y se

dan cambios de fragmento del gen asociados al sitio activo u
otros dominios; sobre el fragmento se realizan diversas
combinaciones (todas si es saturacin) posibles de cambios de
aminocidos; cada cambio genera una protina mutantes sobre
la cual se puede hacer un nuevo cclo de mutagnesis.
Bases de la biotecnologa: Ingeniera gentica
obtenida. Sitio-especfica (racional): ej. Whole Plasmid Mutagenesis
Primers
con
mutacin
Mutagnesis Nuevo
(cambios en el gen plsmido
codificante de la con mutacin
protena de inters
La enzima DpnI slo hidroliza el plsmido

original por estar metilado (el nuevo no).
El nuevo plsmido
mutado se usa
para transformar
clulas.
http://www.genomics.agilent.com/article.jsp?pageId=384
obtenida. Sitio-especfica (racional): Ej. cambio de Ser x Ala
Triada Cataltica : Asp-His-Ser x Asp-His-Ala
Mutagnesis
(cambios en el gen
condificante de la
protena de inters
"Catalytic triad of TEV protease" by Thomas Shafee - Own work. Licensed under CC BY-SA 3.0 via Wikimedia Commons - http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Catalytic_triad_of_TEV_protease.png#/media/File:Catalytic_triad_of_TEV_protease.png
obtenida.
La subtilisina, una enzima usada en detergentes , se ionactiva con H2O2
Enzima inactivada
obtenida. Sitio-especfica (racional): Ej. cambio de Met x Ala
Sustitucin en Subtilisina de Met 22 x Ala 22
Mutagnesis
(cambios en el gen
condificante de la
protena de inters
Ala
Enzima resistente a blanqueador

Biocatlisis (fermentacin) enzimtica
Inmovilizacin de enzimas (o clulas)
Confinamiento espacial, varia maneras de hacerlo:
a) Atrapamiento
b) Encapsulamiento
c) Inmovilizacin en slido
d) Entrecruzamiento
Biocatlisis
Inmovilizacin de enzimas (o clulas) en slidos
S
o
p
o
r
t
e Enzima/ clula
Biocatlisis
Inmovilizacin de enzimas (o clulas) en slidos
S
o
p Nuclefilo Electrofilo
Catinico Aninico
o Aninico Catinico
r Hidrofbico Hidrfbico
t Enzima/clula M(II) Polihis
Inhibidor Centro activo
e Lectina Oligosacarido
Anticuerpo Antgeno
Grupo Disulfuro Grupo tiol
Dienfilo Dieno
La naturaleza de la unin puede se reversible o irreversible; unipuntual

o multipuntual.
Biocatlisis
Inmovilizacin de enzimas
Proceso de Inmovilizacin
Sustrato
Enzima soluble Enzima inmovilizada
+ Soporte
Derivado
Re-uso o uso continuo

Control de la reaccin ms sencillo
Proceso ms limpio Producto
Inmovilizacin Mejora de las propiedades de las enzimas?
Immobilization of Enzymes and Cells. Guisn (2006).

Biocatlisis
Inmovilizacin de enzimas
Ventajas Desventajas
Posibilidad de re-uso del Problemas de
biocatalizador generado transferencia de masa.
Mayor estabilidad Posibles sobrecostos
Modulacin de Dependencia frente a
propiedades catalticas de proveedores de soportes.
Derivado= enzima+soporte
la enzima inmovilizada
Biocatlisis
Principales tipos de biocatalizadores
Enzimas vs. Clulas enteras

Mayor actividad especfi ca Procesos de varios pasos para ir de SP
Mayor control (especificidad) Produccin de sus propios cofactores
Mas estabilidad Ms problemas de difusin por
Fcil caracterizacin (pH,T,Km,etc) membranas celulares que deben ser
atravesadas.
Ms costosas (necesidad de su
previa purificacin )
Menos subproductos.
Biocatlisis
Algunos hitos de la biocatlisis aplicada

Enzimas
Hidrlisis selectiva de penicilina G (PGA)
Produccin de acrilamida (nitrilhidratasa)
Resolucin de mezclas racmicas (lipasas, acilasas)
Almidn . Fructosa (amilasa, glucoamilasa, GI)
Hidrlisis de lactosa a galactosa y glucosa (beta-gal)
Sensores de glucosa (glucosa oxidasa)
Detergentes (proteasas, lipasas)
Clulas enteras
Depuradoras lodos activos.
Fermentaciones industriales (Hongos, Bacterias).
Biocatlisis
Requisitos de los microorganismos como biocatalizadores
- Ser capaz de producir la sustancia de inters con altos rendimientos.
- Ser capaz de ser cultivado y de producir el producto a gran escala.
- Ser capaz de reproducirse por si solo.
- Ser capaz de crecer en medio de cultivo lquidos y en condiciones

econmicas.
- No debe ser patognico ni para el ser humano ni para animales o plantas

de inters comercial.
- Debe ser genticamente manipulable (prerrequisito conocer su genoma

y bioqumica).
Biocatlisis
Requisitos de los microorganismos como biocatalizadores
- Ejemplos:
BACTERIAS
E. coli. (metabolitos secundarios y protenas recombinantes)
Corynebacterium glutamicum (cido glutmico, esteroides y biorremediacin)
Xanthomonas (goma Xanthan)
HONGOS:
Levaduras (Sacharomices cervisae ; Pichia pastoris): etanol proteinas
recomb.
Aspergillus
Biocatlisis
Produccin y Escala
Cultivo con cantidad

Equilibrio de nutriente limitada.
Adaptacin
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/c/c0/Bacterial_growth_en.svg/250px-Bacterial_growth_en.svg.png
Biocatlisis
Produccin y Escala (contexto industrial):

Metabolito Primario y Secundario
Taller: listado de al menos 5 ejemplos de metabolismo de cada

grupo.
Biocatlisis
Produccin y Escala: Fermentadores
Tamao del fermentador (L) Producto

0-10L ; 300-3000 L Laboratorio ; Planta piloto
1.000-20.000 Enzimas para diagnstico, sustancias
para biologa molecular.
40.000-80.000 Algunas enzimas y antibiticos.
100000-150000 Penicilina, antibiticos tipo
aminoglicsido, enzimas industriales,
transformaciones de esterides,
aminocidos, vino y cerveza
200.000-500.000 Aminocidos (glutmico), vino y
cerveza.
Biocatlisis
~10000L
10,000-100,000 USD
Biocatlisis industrial
Partes crticas.
1. Sistema de aireacin (difusor+

agitador): aire estril para cultivo
aerbico.
2. El agitador: homogeniza el cultivo .
3. Chaqueta de agua o vapor: para

previa esterilizacin y posterior
termostatizacin del cultivo.
4. Control en tiempo real con sondas y

vlvulas automatizadas: ej. para pH,
oxgeno, glucosa, amoniaco, etc.
Escalado: del laboratorio a la industria
T+I
I+D
Biocatlisis
Escalado: del laboratorio a la industria

Principales retos:
1. Comportamiento a escala de laboratorio no son necesariamente

iguales que a escala industrial.
2. Problemas de transferencia de masa
Problemas de mezclado: garantizar

homogeneidad y suficiente aire para el cultivo
Biocatlisis
Escalado: del laboratorio a la industria Industria

>10.000 L
ETAPAS DE ESCALADO
Planta
piloto
(300-3000L)
Laboratorio
(10L)
Produccin de medicamentos
Produccin de medicamentos: antibiticos

Antibiticos son sustancias por microorganismos para matar o detener el crecimiento de
otros microorganismos, generalmente son metabolitos secundarios.
Agrupacin de Bacillus polimixa
Micelio de un Penicillium spp.

Lnea histrica
del desarrollo
de Antibiticos
Descubrimiento de nuevos antibiticos: etapas y tiempos
Naturaleza
15 aos y 1 billn USD.

Descubrimiento de nuevos antibiticos: sntesis y validacin
Sintticos
o semisintticos
Descubrimiento de nuevos antibiticos
Naturaleza
Mtodos
in silico
Descubrimiento de nuevos antibiticos: aislamiento de

microorganismos
Cultivo liquido
Cultivo slido
Descubrimiento de nuevos antibiticos: aislamiento de

microorganismos porductores de antibitico
Adicin
Cultivo slido de
patgeno
(ej. S. aureus)
Zonas de inhibicin de
crecimiento alrededor
de colonias candidatas
Descubrimiento de nuevos antibiticos: espectro de actividad
Mtodo de cross-streaking: cultivo de colonias candidatas
colonia
colonia en
consolidada
crecimiento
Difusin de antibitico en el agar

Descubrimiento de nuevos antibiticos: espectro de actividad
Mtodo de cross-streaking
Inoculacin de patgenos
e incubacin.
a b c d e a b c d e
a = E. coli
b = B. subtilis
Es nuevo el antibitico producido por c = S. aureus
el organismo candidato? d = K. pneumoniae
e = M. smegmatis
Produccin y Purificacin de antibiticos
Naturaleza
Bioprospeccin GMO
Aislamiento
y
Seleccin Ing. gentica
y metablica
Aumento en rendimiento produciendo
el metabolitos difundibles de inters
y/o
Seleccin natural
Produccin y Purificacin de antibiticos
Purificacin y cristalizacin.
Pirgenos

Aplicaciones de Biotecnología Industrial

Transféré par

Informations du document

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Aplicaciones de Biotecnología Industrial

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Ingeniera gentica: Aplicaciones biotecnolgicas

Produccin de GMOs: vegetales

Tema expo: Mtodos de Produccin de GMOs animales

1. Productos menos txicos

Reacciones ms rpidas a temperaturas ms bajas(actividad).

Menos subproductos y Ahorro de pasos de purificacin

Ingeniera y Economa del proceso (estabilidad).

Biocatlisis para la industria

LOS BIOCATALIZADORES SON CAPACES DE CATALIZAR LOS PROCESOS

INGENIERA DEL MEDIO

Optimizacin de la estabilidad y la reactivacin Optimizacin de la selectividad Aumento de la actividad

Ingeniera de protenas: mutagnesis dirigida, al azar, modificaciones qumicas,

Ingeniera de inmovilizacin: heterogeneizacin y estabilizacin; mtodos

Ingeniera del medio de reaccin: cambio en el diseo de reactores, cambio del

Cmo mejorar la protena o biomolcula recombinante

Mutagnesis Sitio-dirigida (racional): se cambian ciertos aminocidos de lo

Combinatoria (semi-racional): usada en evolucin dirigida y se

La enzima DpnI slo hidroliza el plsmido

La subtilisina, una enzima usada en detergentes , se ionactiva con H2O2

Enzima resistente a blanqueador

Inmovilizacin de enzimas (o clulas)

Confinamiento espacial, varia maneras de hacerlo:

Inmovilizacin de enzimas (o clulas) en slidos

Inmovilizacin de enzimas (o clulas) en slidos

La naturaleza de la unin puede se reversible o irreversible; unipuntual

Re-uso o uso continuo

Inmovilizacin Mejora de las propiedades de las enzimas?

Immobilization of Enzymes and Cells. Guisn (2006).

Enzimas vs. Clulas enteras

Algunos hitos de la biocatlisis aplicada

Requisitos de los microorganismos como biocatalizadores

- Ser capaz de producir la sustancia de inters con altos rendimientos.

- Ser capaz de ser cultivado y de producir el producto a gran escala.

- Ser capaz de reproducirse por si solo.

- Ser capaz de crecer en medio de cultivo lquidos y en condiciones

- No debe ser patognico ni para el ser humano ni para animales o plantas

- Debe ser genticamente manipulable (prerrequisito conocer su genoma

Requisitos de los microorganismos como biocatalizadores

Cultivo con cantidad

Produccin y Escala (contexto industrial):

Taller: listado de al menos 5 ejemplos de metabolismo de cada

Produccin y Escala: Fermentadores

Tamao del fermentador (L) Producto

Produccin y Escala: Fermentadores

Produccin y Escala: Fermentadores

1. Sistema de aireacin (difusor+

2. El agitador: homogeniza el cultivo .

3. Chaqueta de agua o vapor: para

4. Control en tiempo real con sondas y

Escalado: del laboratorio a la industria

Escalado: del laboratorio a la industria

1. Comportamiento a escala de laboratorio no son necesariamente

2. Problemas de transferencia de masa

Problemas de mezclado: garantizar

Escalado: del laboratorio a la industria Industria

Produccin de medicamentos: antibiticos

Agrupacin de Bacillus polimixa

Micelio de un Penicillium spp.

Descubrimiento de nuevos antibiticos: etapas y tiempos

15 aos y 1 billn USD.

Descubrimiento de nuevos antibiticos: sntesis y validacin

Descubrimiento de nuevos antibiticos

Descubrimiento de nuevos antibiticos: aislamiento de

Descubrimiento de nuevos antibiticos: aislamiento de