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ORIGINAL
Darwin Hernndez H,1 M.Sc, Andrs Posso T,1 M.Sc, Jaime Muoz F,1 Ph.D,
Guillermo Giovambattista,2 Ph.D, Luz lvarez F,1* Ph.D.
1
Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Laboratorio de Gentica
Animal, Palmira, Colombia. 2Universidad Nacional de la Plata, Facultad de Ciencias Veterinarias,
Instituto de Gentica Veterinaria IGEVET, La Plata, Provincia de Buenos Aires, Repblica Argentina.
*Correspondencia: laalvarezf@unal.edu.co
RESUMEN
Objetivo. Caracterizar el polimorfismo del gen BoLA-DRB3.2* en las razas bovinas criollas y
colombianas. Materiales y mtodos. En 360 muestras de ADN de ocho razas bovinas criollas
(Blanco Orejinegro, Casanareo, Costeo con Cuernos, Chino Santandereano, Caqueteo, Hartn
del Valle, Romosinuano y San Martinero), dos razas sintticas Colombianas (Lucerna y Velsquez) y
dos razas forneas (Brahman y Holstein) se evalu el polimorfismo del gen BoLA-DRB3.2 mediante
tcnicas moleculares (PCR-RFLP); se calcul el nmero promedio de alelos (NPA), las frecuencias,
la heterocigocidad esperada (He) y observada (Ho), el equilibrio de Hardy-Weinberg, la estructura
gentica y los valores de FST y FIS. Resultados. El NPA fue 14.6 3.8 siendo Caqueteo la raza con
mayor NPA (25) y el menor el Chino Santandereano (10). Se encontraron 41 alelos BoLA-DRB3.2*
los ms frecuentes fueron *28, *37, *24, *23, *20, *27, *8, *16, *39 (0.17, 0.11, 0.10, 0.09,
0.09, 0.07, 0.07 y 0.06 respectivamente). Se encontr alta diversidad gentica (He = 0.878) con
mayor valor en Caqueteo (0.96) y menor en San Martinero (0.81). Todas las razas se encontraron
en equilibrio de Hardy-Weinberg, se encontraron valores altamente significativos de diferenciacin
gentica (FST= 0.044) y de coeficiente de endogamia (FIS = 0.249). Conclusiones. El ganado criollo
colombiano posee alto polimorfismo del gen BoLA-DRB3.2* representado en los altos valores de NPA
y diversidad gnetica.
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3666 REVISTA MVZ CRDOBA Volumen 18 Suplemento 2013
ABSTRACT
INTRODUCCIN
El Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH) Los genes y los productos de la regin clase IIa
de los bovinos es conocido como Antgenos de son los ms estudiados porque presentan altos
los Leucocitos Bovinos (BoLA) y se localiza en el niveles de polimorfismo. Han sido identificados
cromosoma 23. Los Antgenos son glicoprotenas 14 genes en esta regin: DRA, DRB (DRB1,
que se ubican en la superficie celular y su funcin DRB2, DRB3), DQA (DQA1, DQA2, DQA3,
principal es la presentacin de pptidos a las DQA4, DQA5) y DQB (DQB1, DQB2, DQB3,
clulas B y T (1). DQB4, DQB5) (1), donde el gen DRB3 es el ms
estudiado, este tiene una longitud de 11,4 Kbp
Existen tres clases de antgenos leucocitarios con cinco intrones y seis exones, de los cuales el
bovinos, los antgenos clase I que constan de ms polimrfico es el exn 2 (BoLA-DRB3.2) de
dos cadenas polipeptdicas codificadas por locus un tamao aproximado de 270bp (3).
diferentes. Una de ellas atraviesa la membrana
celular, tiene un peso molecular aproximado Los genes BoLA-DRB3.2 han sido asociados
de 45000 D y la cadena ms corta llamada con caracteres productivos como produccin
microglobulina 2 tiene un peso aproximado de leche, protena y grasa en leche (4-6) y con
de 12000 D. Los genes BoLA clase I codifican enfermedades como linfocitosis persistente,
protenas implicadas en el reconocimiento de las carga proviral, brucelosis, mastitis y parsitos
clulas del hospedero que han sido infectadas como las garrapatas (5,7-13).
y en la presentacin de pptidos a las clulas
citotxicas T y T CD8+ (1,2). Algunos autores (9,10) sealan que los bovinos
criollos expresan caractersticas adaptativas
Los antgenos clase II son dos cadenas de de gran importancia como tolerancia al calor y
un tamao similar. Los genes clase II estn humedad y resistencia a ciertas enfermedades, lo
localizados en dos partes diferentes del cual incrementa su valor como recurso gentico.
cromosoma 23, posee dos regiones llamadas
clase IIa y clase IIb separadas por 15cM. La clase El objetivo del presente trabajo fue caracterizar
IIa contiene los genes DR y DQ y la clase IIb los el polimorfismo del gen BoLA-DRB3.2* en las
genes DYA, DYB, DMA, DMB, DOB, DOA, TAP1, razas criollas y sintticas Colombianas mediante
TAP2, LAPM2 y LMP7. Estos genes producen tcnicas moleculares (PCR-Semianidado y RFLP).
protenas implicadas en la comunicacin entre las
clulas B y T, procesos antgenos extracelulares
con clulas T CD4+ y otras funciones inmunes (1). MATERIALES Y MTODOS
Mientras que, los genes clase III codifican Instalaciones y muestras de ADN. El estudio
protenas del sistema de complemento, molculas se realiz en el Laboratorio de Gentica Animal
relacionadas con la inflamacin y protenas de de la Universidad Nacional de Colombia sede
choque trmico (2). Palmira. Se utilizaron 30 muestras de ADN de
Hernndez - Polimorfismo del gen BoLA-DRB3.2 en ganado criollo 3667
cada raza de ganado criollo (Blanco Orejinegro (B y H). El ganado criollo colombiano (GCC)
- BON, Chino Santandereano - ChS, Costeo con est formado por las razas criollos y las razas
cuernos - CCC, Caqueteo - CQT, Casanareo - sintticas. Se determin el nmero promedio de
CAS, San Martinero - SM, Romosinuano - RS, alelos, las frecuencias allicas, la heterocigocidad
Hartn del Valle - HV), de cada raza sinttica esperada (He) y observada (Ho) y el equilibrio
Colombiana (Lucerna - LUC y Velsquez - VEL) de Hardy Weinberg (EHW). La estructura
y razas forneas (Brahman - B y Holstein gentica se infiri a partir del AMOVA basado
- H) del banco de ADN del Laboratorio. La en las frecuencias allicas de las poblaciones,
concentracin se determin utilizando ADN se determinaron los coeficientes de endogamia
del bacterifago lambda de concentraciones (FIS) y de diferenciacin gentica (FST) usando el
conocidas, visualizado mediante geles de agarosa programa ALERQUIN versin 3.5 (16).
al 0.8 % (p/v) teidos con bromuro de etidio. El
ADN fue diluido a 20 ng/l.
RESULTADOS
Reacciones de amplificacin por PCR.
Se amplific el segundo exn del gen BoLA- Se analizaron 360 animales, de los cuales 240
DRB.3, por un protocolo de PCR de dos pasos fueron criollos, 60 de razas sintticas y 60
(semi-anidado) (14); con los cebadores: HL030 de razas forneas. Se encontraron 41 alelos
(5-ATCCTC TCTCTGCAGCACATTTCC-3), HL031 BoLA-DRB3.2*, de los cuales slo 20 estuvieron
(5-TTTAAATTCGCGCTCACCTCGCCGCT-3), presentes en las razas forneas B y H. La
HL032 (5-TCGC CGCTCAGTGAAACTCTC-3); en frecuencia y distribucin de los alelos de acuerdo
la primer reaccin de amplificacin se utilizaron con la raza se muestra en la tabla 1. Los alelos
los oligonucletidos HL030 y HL031 (1.25mM), BoLA-DRB3.2 *23, *36 y *37 se encontraron en
en 25 l de mezcla total, con 20 a 40 ng de ADN, todas razas, mientras que los alelos *7, *9, *11,
0.2 mM de cada dNTP, 1X de tampn PCR, 2.5 mM *19, *32, *33, *35, *39, *41, *45, *46, *48,
MgCl2 y 1U de Taq DNA Polimerasa (Fermentas). *50 y *51 en slo una raza, siendo estos alelos
El programa de amplificacin const de una nicos para el GCC.
desnaturalizacin inicial de 4 minutos a 94C,
10 ciclos de 1 minuto a 94C, 2 minutos a 60C El NPA para toda la poblacin fue de 14.63.8,
y 1 minuto a 72C, con una extensin final de 5 para las razas criollas de 14.64.6, para las
minutos a 72C (7). Para la segunda reaccin sintticas de 12.50.71 y para las forneas de
se tomaron 4 l de la primera reaccin de PCR 151.41. El CQT present el mayor nmero de
como molde y los oligonucletidos HL030 y alelos (25 alelos) y el ChS el menor (10 alelos),
HL032 en un volumen total de 50 l, con las mientras que en las razas sintticas el mayor
mismas concentraciones de dNTPs, tampn PCR, nmero de alelos lo present LUC (13 alelos) y
MgCl2 y Taq DNA polimerasa. El programa de en las razas forneas B (16 alelos).
amplificacin const de una desnaturalizacin
inicial de 4 minutos a 94C y 25 ciclos de 1 La raza CQT present el mayor nmero de alelos
minuto a 94C, 30 segundos 65C y 1 minuto nicos (8 alelos), de otro lado el BON, SM, RS,
a 72C, con una extensin final de 5 minutos a CAS, LUC y VEL presentaron slo uno. Las razas
72C (7). Todas las amplificaciones se realizaron forneas no mostraron alelos nicos.
en un termociclador modelo PTC-100 (Peltier
Thermal Cycler BIO-RAD). El producto de ambas El 58% de los alelos encontrados en el ganado
reacciones fue una banda de 282 pares de bases. GCC y el 36% en las forneas tuvieron frecuencias
menores a 5%. Los alelos con frecuencias
RFLP, Electroforesis e interpretacin de los superiores a 5% en el GCC fueron: BoLA-DRB3.2
cortes. 10l del producto de PCR de la segunda *28 (0.15), *37 (0.128), *24 (0.089), *23
reaccin se utilizaron como sustrato para la (0.093) y *20 (0.078). Las frecuencias en cada
digestin con 5U de las enzimas RsaI, BstyI y grupo racial se detallan en la tabla 1. En las
HaeIII (Fermentas) a 37C durante 4 horas (7). razas forneas los alelos con frecuencia mayor
La electroforesis se realiz en geles de agarosa al 5% fueron los BoLA-DRB3.2 *13 (0.167), *37
SFRTM (Super Fine Resolution, AMRESCO) al 3% (0.15), *36 (0.09), *23 (0.079), *28 (0.061) y
(p/v) y teidos con bromuro de etidio en una el *25 (0.052).
cmara SUB-CELL GT (BIO-RAD). La lectura
de los alelos se bas en la nomenclatura del 5th Las razas sintticas compartieron en promedio
BoLA workshop (15). el 33% de sus alelos con las razas criollas que
las conforman.
Anlisis estadstico. Se formaron los siguientes
grupos: criollos (BON, CAS, CCC, ChS, CQT, HV, El promedio de He fue de 0.880.05 para los
RS y SM), sintticas (LUC y VEL) y forneas ganados criollos, para las sintticas y las forneas
3668 REVISTA MVZ CRDOBA Volumen 18 Suplemento 2013
Tabla 1. Frecuencias allicas y Nmero Promedio de Alelos (NPA) para cada raza*.
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