32 C aptulo 2 Mtodos y proc edimientos de investigoci n
En j ulio de 1982, empeza ron a llegar a las
consultas de Neurologa del norte de Californ ia
algunos jvenes que prese ntaban intensos y graves sntomas
(Langston, Ballard, Tetrud e Irwin, 1983). Los pacientes ms
gravemente afectados estaban cas i paralizados por completo.
t No podan hablar de manera inteligible, salivaban constante-
I
mente y tenan los oj os siempre abiertos, con la mirada fija.
Otros, menos graves, andaban con un paso lento, vacil ante,
movindose despacio y con gran difi cultad. Los sntomas se
parecan a los de la enfermedad de Pa rkinson, pero este tras-
torno se va manifestando gradualmente. Adems, rara vez se
da antes del final de la vida adulta y los pacientes estaban
todos ellos entre los veinte y los treinta aos de edad.
El factor comn que relacionaba a estos pacientes era el
consu mo de drogas por va intr avenosa: todos haban tomado
una herona nueva, un opioide sinttico relacionado con la
petidina (Demerol). Ciertas pesquisas revelaron que la droga
il cita estaba contaminada con un producto qumico que
daa a las neuronas dopaminrgicas y provoca los sntomas
neurolgicos. Dado que los sntomaseran similares a los de la
enfermedad de Parkinson, se tr at a los pacientes con I-dopa
[Ievodopa], el frmaco que se uti liza en el tratamiento de
dicha enfermedad, y todos ellos mostraron una mejora sig-
nificativa de sus sntomas. Lamentablemente, la mejora fue
temporal: la droga dej de ser eficaz.
El trasplante de neuronas fetales, un mtodo neuroqui-
rrgico experimental para tratar el parkinsonismo, ha resul-
tado hasta cierto punto prometedor. El fundamento de este
procedimiento es el siguiente: los sntomas parkinsonianos,
ya sean debidos a la enfermedad de Parkinson o a los efec-
tos txicos del MPT P, se deben a la falta de dopamina en el
ncleo cau dado y el putamen. Por el momento no se puede
inducir el desa rrollo de nuevas neuronas dopaminrgicas en
el encfalo. Sin embargo, si se pueden injertar neuronas secre-
toras de dopamina en el ncleo caudado y el putamen, y si
estas sobreviven y secretan dopamina, entonces tal vez los
l est ud io de la Fisiol oga d e la Co nduc ta impli ca
E e l esfu e rzo de inves tiga dores d e much as d isci-
p linas cie n tficas, incluyendo la Fisiol oga , la
Neu ro anatoma , la Bioqu m ica , la Psico loga ,
la Endocri nologa y la Hi stol oga. Llevar a ca bo un pro-
yecto de inves tigaci n e n Neuro ciencia co m porta men-
ta l req u iere do m inar much as tcni cas experime n tale s.
Puesto que di feren tes procedi mi en to s llevan a m en ud o
a res u ltados co ntrad ictorios, los in vestigad ores h an d e
es ta r fam iliarizados co n las ventajas y las limitaciones de
lo s m todos que e m p lean . En es te se ntido , la inv estiga-
ci n cie ntfica co n lle va un proce so d e cuestio narse cul
es la n a tural e za de lo s fen m en o s, y e l m t odo q ue se
u tiliza e n m a rca la cues ti n. Co n fr ecu encia se o b tie ne
sntomas parkinsonianos disminuyan. Pu esto que las neuro-
nas implantadas han de estar indemnes, ser resistentes y no
desencadenar la reaccin del sistema inmunitario del recep-
tor, lo ms razona ble es obtenerlas de fetos humanos abor-
tados -o, quiz algn da, de cultivos de hemocitoblastos
(clulas madre) est imulados para convertirse en neuronas
secretoras de dopamina- .
Al menos a uno de los afectados por la intoxicacin con
MPTP se le rea liz este tipo de trasplante. (L1 ammosle Sr.
B.). Antes de que tuviera lugar la intervencin, se le inyect
l-dopa radioactiva, sustancia precursora de doparnina. Luego,
una hora ms tarde, se le condujo a una pequea sa la en la
que haba un equipo de TE P. Su cabeza fue situada dentro del
aparato y durante varios minutos la mquina obtuvo datos de
los positrones que se emitan, en forma de partculas radioac-
tivas, en su trastornada ca beza.
Unas cuantas semanas ms tarde, el Sr. B. ingres en el
hospital para someterse a una intervencin qui rrgica. El
equipo mdico ext rajo neuronas dopaminrgicas de la sus-
tancia negra de varios fetos abortados y las prepar para
implantarlas en el cerebro del Sr. B. Este estaba anestesiado y
el cirujano le hizo unas incisiones en el cuero ca belludo para
dejar al descubierto partes del cr neo. Acopl el so porte de un
instrumento este reotxico a su crneo, tom algunas medi-
dasy luego taladr variosorificios. Utiliz el instrumento este-
reotxico para dirigir la inyeccin de las neuronas fetales al
ncleo cau dado y el putamen del Sr. B. Una vez realizada la
inyeccin, el cirujano ret ir el soporte estereotxico y sutur
las incisiones realizad as en el cuero ca belludo.
La operacin tuvo un xito considerable: el Sr. B. recu-
per en gran parte el control motor. Poco ms de un ao des-
pus se le volvi a inyectar I-dopa radioactiva y de nuevo se
le coloc la ca beza en el equipo de TE P. Los resultados de esta
segu nda exploracin indicaron lo que significaba su recupe-
racin: las clulas haban sobrevivido y estaban segrega ndo
dopamina.
u na respues ta qu e extra a , h asta q ue ms tarde se cae
en la cue n ta d e que no se es taba p lantea ndo la pregunta
correc ta. Co mo se ver, las m ejo res co n cl usio n es sobre
la Fisiologa d e la Con d ucta no se extraen d e un n ico
expe ri me nto, sino de u n p rog ra m a d e in vest igaci n q ue
permite co m parar lo s res u ltados d e es tud ios q u e abor-
d an e l m ismo p ro bl e m a con mtodos d iferentes .
Lo s inv esti gado res d ispon e n de una e no rme - y sor-
p rendente- se rie de m tod os de inv est igacin. Si se
p resenta ra aq u ta n so lo un iu vc n tari o d e ellos , n o sera
de so rp re n de r que el lec to r se perdiera o , simp leme n te,
p e rd iera in te rs. En vez d e ello , se p res en ta rn n ica-
m ente los procedim ientos m s importan tes y uti liza dos
co n m ayo r frec ue ncia , estructura dos e n torno a un o s

cuantos problemas que h an es tu d iado los in vest igadores.
De esta manera , d eber resultar m s fc il d arse cuen ta
del tipo d e in forma ci n que a porta n los div ersos m to-
dos de inv estiga ci n y e n te n de r sus ve n tajas y d esven-
tajas. Tambi n p e r m itir d escribir las est ra tegias d e las
que se va le n los in vestigado res para di se ar y re ali zar un
expe ri me n to basndose e n los resu ltados d el a nte rio r.
ABLACi N EXPERIMENTAL
Uno d e lo s prin cipal es m todos d e investigaci n utili-
zados para e stu d ia r la s fu ncio nes ce re b ra le s requi ere
destrui r una parte d el e ncfa lo y e va lua r la co n d uc ta
subsec ue n te d el a n imal. Est e m todo se denomin a
ablacin experimental (de l trmin o latino ablat us, lle-
varse d e " ). En la m ayo r a d e los casos, di cha t cnica n o
imp lica e xt rae r el tejido ce re b ra l, e n vez d e e llo, e l inv es-
tigador d estruye al go d e teji do y lo d eja e n su sitio . La
ablacin ex perime ntal es e l m s a n tig uo d e los m todo s
uti lizado e n Neuro cien cia y sig ue utilizndose Irec uen-
temente hoy en d a .
Evaluacin de los efectos
comportamentales del da o
cere bra l
U na lesin es una h erida o un traumatism o , y un inv esti-
gado r que d estruye un a parte d el ce re b ro por lo genera l
describe e l dao co mo una lesin cerebral. Los experime n-
tos e n los que se da a un a parte d el e nc fa lo y d esp us
se o bse rva la co n d uc ta de! animal se llaman es tudios d e
lesin. Su fund amento te ri co es qu e la fun cin d e un
rea ce re b ra l puede d educirse ba sndose e n las con d uc -
tas q ue e l a n imal ya n o puede re ali zar d espus d e que
se haya d estruido di ch a rea. Por eje m p lo, si d espu s
d e que se haya d estru id o p arte d el e ncfa lo d e un a n i-
mal este ya n o puede rea lizar ta reas qu e requieren ve r,
se puede concluir que e l a n imal es t ciego y q u e e l rea
daiiada dese m pea algun a fu nc i n e n la visi n .
Qu es e n realidad lo q ue se pued e a prende r d e lo s
e stu d ios de lesin ? lu est ro o bjetivo es d escubri r cu-
les son las fu ncio nes que cu m ple n las d ife rentes re gio-
n es ce re b ra les y lu eg o e n te n de r c mo se co m b ina n es tas
funcio nes para dar lu ga r a d et e rmin adas co nd uctas . La
disti nc i n e nt re funcin cerebral y conduela es importante.
As, los circ u itos que h ay e n e l e nc fa lo realizan fu nc io-
nes , no co nd uc tas. Ningun a re gin ce re b ra l o ci rc uito
ne ural es e l nic o re sp onsable d e un a co n d uc ta: ca da
regi n d esempea una fu nc i n (o una sede d e fun ci o-
nes) que co n trib uye a la ejecuc i n de la co n d uc ta . Por
eje m p lo , e l a cto d e le er imp lica funcio n es que requi e-
ren co n tro la r los m ovimi entos o cu lares , e n foca r la le n te
Fundam entn s de fisiologa de la conducta 33
d el ojo, p ercibi r y re con o cer pal a bras y letras, compren-
d er e l sig n ificado d e las p al ab ras, e tcte ra . No obstante ,
a lg u nas d e estas fu nc io nes participan tam bi n e n otras
con d uctas. Por ejemplo, e l con tro l de l m ovimie nto de
los oj os y del e n fo que se n e cesitan para cualquier tarea
que requi era mirar, as como lo s m ecan ismos cerebra-
les qu e se utilizan p a ra co m p re n der e l significado de
las palabras intervien en ta m b i n e n la com p rensi n del
habla . La tarea d el invest igador es com p re n der cules
so n las funcion es que se n e cesitan p ara llevar a ca bo un a
co n d uc ta especfica y d etermin ar cules son los ci rcui-
to s d e neuronas ce re b ra les resp onsables d e ca d a una d e
esas fun ciones.
La interpreta ci n d e lo s dato s d e lo s estu d ios d e
lesin se co m p lica po r e l h e ch o d e que to das las re g io-
n es d el e n cfa lo es t n conec tadas e n tre s. Su pongamos
que sa bem os bi en las fu ncio nes que se requieren para
que se lleve a ca bo un a d et e rmina d a con d uc ta y descu-
brim os que la lesin d e la es truc tura X altera u n a deter-
minada con d uc ta: hemos d e concluir fo rzosamen te q ue
los circ uitos n eu ron al es lo cali zado s en di ch a estructura
c u m p le n una fu nci n esencial e n esa con d ucta? Lamen-
tabl emente , n o. Pu ede qu e , de h e ch o , la fu ncin que
no s interesa la re ali cen circui tos n e u ral es q ue se lo ca li-
za n e n o tra parte d el e ncfalo y que la lesin d e la estruc-
tu ra X tan sol o interfiera e n el n orm al fu ncio namiento
d e los circ u ito s n eural es d e la estru ctu ra Y.
Realizacin de le siones cere bra les
C mo se e fec ta n la s lesion es cerebrale s? Destrui r las
partes d el e ncfalo que se e nc ue ntra n justo d ebajo de l
c r neo es f cil : se a nes tes ia al a n imal, se hace una in ci-
sin e n e l cu e ro cabell udo, se e x trae un a p arte de l cr-
n e o y se corta la du ra m adre , d ejan d o a l d escubie rt o la
co rteza. Se puede utili zar e nto n ces un dispositi vo d e su c-
cin para asp ira r e l tejido ce re b ra l, y p a ra extirparlo se
sita una pipeta d e vid rio so b re la su pe rficie de l enc-
fa lo y se succio na e l tej ido co n una bo mba de vaco
unid a a la pipeta .
Lo m s fr ecuen te es q ue la regi n que se quiere des-
tr u ir es t oculta e n e l interi o r de l encfalo. LiS lesiones
ce re b ra les d e re gi on es su bcorticales - re g io n es locali-
za das d ebajo d e la corteza- se rea liza n po r lo general
h aci end o p as ar un a corrie nte e lctrica a travs de un
e lectrodo d e acero in oxid able q ue , sa lvo e n la p unta ,
es t cu b ie rt o por un barni z ais la n te e l ct rico. Se gua e!
e lec tro do sig u ie n do un m todo es iereot xico, d e m o d o
ablacin experimental Extirpacin o destru ccin de una parte del
en cfalo de un an imal de laborator io. Se supone que las funcio -
nes que ya no pu eden realizarse son las que dicha regin contro-
laba previamente.
estudio de lesin Sin nimo de ablacin experiment al.
34 Ca ptu lo 2 Mtodos y procedimientos de investigacin

q u e su ex t re mo lle gu e al lugar adecuado . (La cir u ga

es te reot xica se d es c rib e en el prximo subapartado) .
Lue g o , re currim o s a un in strumento para producir (a) En esta seccin pu ede verse el hipocampo intact o del en-
lesion es, que p roduce una co rrie n te d e radiofrecuencias cfalo de una rata. (b) Lesin produ cid a por la inf usi n de
( RF) - co n i e n te alterna d e fr ecuencia muy elevad a-o un aminocido excitador en un a regi n del hip ocamp o. Las
El p aso d e la co r rie nte a travs d el tejido ce re b ral pro- puntas de fl echa sealan los lmites de la regin en la q ue
se han destruido las neuronas.
d uce una alta te m pe ra tu l'a, que d estruye las clulas cer-
ca nas a la regin que rod ea la punta d el el ectrodo (vase
(Cortesa de Benn o Roozendaa l, University of Cali forn ia , Irvin e.)
la Figura 2.1 ).
Las lesion es prod ucidas co n este m todo destruyen
todo lo qu e se e nc ue nt ra en las cercanas d e la p u nta
d el e lec trod o , in cl uye n d o lo s somas n e uro n ales y lo s
a xon es de las n euronas que atraviesan la regin . U n
m todo m s se lec tivo d e producir les ion es ce re b rales es
em plea r un amin ocido e xci tad o r como el cido cainico,
que d estruye las neuronas estim ul n d o las hasta destruir-
las. (El c ido cani co es ti m u la los receptores glutama-
trgicos). A este tip o de lesion es se les llama le siones
excitotxicas. Cu ando se in ye cta a travs de una cnula
un amin ocido e xc itad o r e n u na regi n cerebral, este
d estruye los so rnas ce lula re s vecinos, pero no lo s axones
d e las diferentes n euronas que pasan por los alrededo-
res (vase la Figura 2.2) . Esta sel e cti vidad le permite al
(a)
investigad o r d et erminar si los efectos co rn p o rta m e n ta les
d e la d estruccin de una es tr uc tu ra cere bral con creta se
d eben a la muerte d e las neuronas que all se locali zan

Las f lechas sealan minsculas lesion es produ cidas por el

paso de una corrie nte de radi ofrecuenci a a tr avs de los
extre mos de electrodos de acero ino xidabl e, sit uados en el
ncleo prept ico medial del encfalo de una rata. (Secci n
frontal , ti ncin de cuerpos celula res).

(De Turk enb ur g, J. L.; Swaab, D. F.; Endert, E.; t.ou w er se, A. L., Y Van
de Poli , N. E. Brai n Research Buffetin , 1988, 21 , 215' 224. Reprodu-
cido con auto r izaci n.) (b)

o a la lesin d e los ax on es q ue p asan ce rca . Por ej e m -

pl o , uno s in ve sti gad o res d es cubri ero n q u e las lesio n es
por RF de una regin determinada d e l tron co d el e nc-
fa lo abolan e! sueo REM , p o r lo tanto crey e ro n q u e
esa regi n participaba e n e l esta b lec im ie n to de d icha
fase d e! sue o . (El su eo REM es la fase d el sue n o e n
la q u e tie ne n lu ga r los ensue os). Pero estu d ios poste-
riores d emostra ro n que c ua ndo se uti liza c id o ca n ico
p ara d estrui r las n euronas que co n tie ne esa regin. el
sue o de los a nimales no resulta afect ad o, d e m odo que
las lesiones por RF d ebieron alte rar el su e o al destr uir
los axones q u e atravi esan el rea .

lesin excitotxica Lesi n cerebral producida por la inyeccin en

el cereb ro de un aminocido excitador, como por ejem plo el cido
can ico.

Se dispon e , incluso , d e m todos m s especficos p ara
marcar y lesion ar un ti po d etermin ado d e n eu ron as.
Por ej e m p lo , los bil o go s mole cul ares h an id eado pro-
ce d im ie n to s p ara in corporar su sta ncias qu micas t xi ca s
a los a n tic ue r pos, los cuales se un irn con d ete rm in a-
d as protenas q ue se encuentra n so lo e n cie r tos tip os d e
n euro nas d el cere b ro . Los a n tic ue r pos alca n za n es tas
protenas y las sus ta ncias qumicas txi cas d es truyen las
c lu las a las que est n unidas las p rote n as.
Represe e n que cu a n do se producen lesiones sub-
co r tica les m ediante co rrie nte d e RF a travs d e un e lec -
trodo o p or in fusi n d e una susta nc ia qumi ca a tr avs
d e u na cn u la , sie m p re se ca usa n d a os adi cional es e n
e l e n c fa lo . C ua n do se in troduce un e lectrodo o u na
c n u la e n el e ncfa lo p a r a alc anzar e l o b jetivo qu e se
pre ten de , inevita bleme n te se produce un cieno g rado
de lesin incluso an te s de acti var el dispositi vo d e lesin
o de in icia r la in fu sin. Por lo tanto , n o podem os lim i-
tarnos a co m parar la con d uc ta d e los a n imales lesio-
n ados con la d e a n imales d e refe ren ci a , o co ntro les,
intactos. Puede que , e n rea lid ad , la ca usa d e algun a d e
las a lterac io nes co m portame n ta les que se o bserva n sea
e l d a o fortuito d e las re g iones ce re b ra les sit ua das p or
e n cim a d e la lesin. Lo q ue se ha ce , e nto nces, es inte rve-
nir qui r rgicame nte a un g ru po d e a n imales y produci r-
les una lesin falsa. Para e llo, se a nestes ia a ca da an imal,
se le co loca e n e l a parato es tereo t xico (q ue se d es cribe
ms ade la n te ), se le h a ce una incisin e n e l cuero cabe-
lludo, se le tr e p an a e l cr neo y se ins erta el el e ct rod o o
la c n u la, haciend o q ue p ene tren hasta la pro fund id ad
ad e cu a d a . En o tras palab ras, se h a ce lo mi sm o que se
hara p ara produci r la lesin , exce p to a cti var e l d isp o-
sitivo d e lesin o ini cia r la in fusi n . Este gr u po d e an i-
m ales sirve de gr u po d e re fe re nc ia : si la co n d uc ta d e los
a n im a les co n u na lesin ce re b ra l e s diferente d e la de
los ani males de refe re n cia co n una lesi n falsa , se puede
concluir que las lesion es so n la ca usa de las a lte rac io nes
com p o rt a m e n tales. (Como se puede ad vertir, un a lesin
fals a tie ne la m isma fin alidad que un trata m ie nto pla-
ce bo e n los es tudios fa rmacolgicos) .
La mayora d e las veces los investigado res p roducen
lesiones ce re b ra les p e rm an ent es, p e ro e n a lg u nas oca-
siones res u lta p ro ve cho so impedi r te m po ra lme n te la
ac tivid ad de u n a d e termin ada re gin d el encfalo . La
forma ms sencilla d e h acerl o es in yect a r u n a nes tsico
lo ca l o un f rmaco llam ado muscimol e n e l lu ga r a de-
c uad o d el e ncfa lo . El anest sico bl oque a los potencia-
les d e acci n e n lo s axon es qu e e n tra n o sa le n d e esa
regi n y es e ficaz para producir un a lesi n tempo ral (lla-
mada h abitualmente lesin ce re b ra l reversible). El mus-
cim o l, un f r maco que estim u la lo s rece p tores GA BA,
inact iva una regi n d el e ncfalo a l inhibir a las n eu ron as
all localiza das. (Se reco rdar que el GABA es e l prin ci-
pal ne u rot ra ns m iso r inhibidor e n e l e ncfa lo) .
Fu n d amentos de fisi ologa de la conducta 35
Ciruga estereotxica
C mo se puede sit uar la p unta de u n e lectrodo o una
c n u la e n un lu ga r preciso del inte rior d el encfalo
de un a n imal? La re spu esta es med ia nte ciruga este-
reotxica. Stereotaxis sig n ifica lite ralm en te d isp o sici n
s lida y, e n co ncreto, se refiere a la ca pacidad d e lo ca -
lizar obje tos e n e l espacio . U n aparato estcreotxico co n sta
d e un so porte qu e in m ovili za la c a be za d el animal e n
un a posicin establecida y un b razo q u e desplaza e l e le c-
trod o o la c n ula e n los tres ejes espacia les a lo la rgo d e
di stan cias c uan tificab les . No obstante, p ara realizar un a
interven ci n este re o txica primero se h a de consultar
un atla s estereot xico.
El atlas estereotxico
N o e xiste n d o s e ncfalos de a n imales de una d e te r m i-
nad a es pecie que sean completamente id n tico s, pero
la se meja n za e ntre los ind ivid uos es su ficie nte para pre-
d e cir la lo cali zacin de un a estructura cerebral concreta
res pec to a las ca ractersticas externas d e la cabeza. Por
ejem p lo, un ncle o su bcortical de la ra ta p uede esta r a
ta ntos milm etros e n lo s pl an os ventral, a nte rior y la teral
d e un punto formado por la co n fluencia d e varios h uesos
d el c r neo. La Figura 2.3 muestra d os vista s del crneo
d e una rata: un d ibujo d e la su pe rfi cie d orsal y, debajo,
una vista sag ita l m edial (va se la Figura 2.3). El crneo
se com po ne d e varios hueso s que crece n j u ntos y for-
man suturas (p u n to s d e uni n ) . En la cabeza de los n ifios
recin nacidos h ay un pun to b lando e n donde se unen
las su tu ras sag ita l y coronal , llam ad o [onianela. C uando
es ta abe rt u ra se cie rra , la u n in se de nomina bregma ,
d e la pala b ra griega q u e sig n ifica p a rte anterior d e la
ca beza . Tambin se observa b regma en e l crneo de una
ra ta, y sirve co mo u n til p un to de re fe rencia. Si el cr-
neo d el a n imal est o rie ntado ta l como se re presenta en
la ilu straci n , una d e te rminada re gi n d el encfalo siem-
pre se e nc ue n tra e n un a p osicin bastante constante en
e l es pacio, tomando b re gm a como referencia ,
U n atlas estereotxico incluye fo tografas o esque-
m as que co rres pon de n a seccio nes fro ntales , tomadas a
lesin fal sa Procedimiento placebo que reproduce todas las eta-
pas para producir un a lesin cerebra l, excepto la que en realidad
la provoca.
ciruga estereotxica Ciruga cerebra l qu e utiliza instrument al
ester eor xico para situ ar un electrodo o una cnula en una posici n
especfica del encfalo.
bregma Unin de las suturas sagital y coronal del crneo. Am en ud o
se utiliza como pumo de referencia en la ciruga esrereotaxica.
a tl as estereotxico Reco pi lac in de esquemas de secciones del
encfalo de un determin ad o anima l, co n medidas que proporcio-
nan coordenadas para la cirug a estereor xica.
36 Capulo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigotin
La fi gura mue stra la relacin ent re las sut uras del cr neo y
el encfalo de una rata y la localizacin del objetivo don-
de sit uar el electrodo. Arriba: vista dorsal. Abajo : vista sagi-
tal medi al.
Contomo de la incisin
en el cuero cabelludo
\ \~ \
\.~\\J
;)f }
/ / 1/
Se perforar aqu un
agujero por encima del
Bregma objetivo de la lesin
(vase Figura 2.4)
diferentes di stan cias rostra les y ca udales a bregma. Por
e je m plo , e n la pgi na represen tada e n la Figura 2.4 hay
u n esque ma de una secc i n d el e ncfa lo e n la qu e se
h all a una es tr uc tu ra ce re b ra l (q ue se ve e n rojo) que le
in teresa al inv esti gador. Si e ste quisiera co locar la p unta
d e un e le ct ro d o e n dicha es tr uc tu ra (el frnix) , tendra
qu e per fora r e l crneo j usto p o r e nc ima d e e lla (vase
la Figura 2.4 ) . Cada p t,rin a d el at las estereotxico es t
id e n tifica d a conforme a la d ista ncia d e la seccin ante-
rio r o poste rio r resp e c to a bre gm a , y la c uadr c u la d e
ca d a pgina in d ica las coorde nad as d e las estruc tu ras
ce re b ra les e n el plan o ventral a la parte su pe rio r d el
c r n e o y lat e ra l a la ln e a m edia . Para situ a r la pu nta
d e un e lec trodo e n e l frn ix habra qu e hacer un tala-
d ro p or e nc ima d el objetivo y lu eg o bajar e l e le ctro d o
p o r e l orific io h ast a que su punta est e n la profun-
didad co r re c ta. e n rel a cin a la altitud d e l c r neo e n
b re g m a (co m p re nse las Figuras 2.3 y 2.4). As , lo cali-
zando u na estr u ctu ra n eural (q ue n o se puede ver e n e l
a n imal d e ex pe rimen taci n ) e n un a d e las p ginas d e
u n at las estereouixico, se puede d e terminar su lo ca liza-
cin res pecto a b re gm a (q ue s se puede ver) . Hay que
te ner e n cu e n ta que , de b ido a varia cion es e n la ce p a y
e d a d de los a n im a les, la lo cali zacin que propo rcionan
los a tlas es so lo a proxim ad a, po r lo qu e sie m p re hay qu e
p robar con un a nueva seri e d e co o rde n adas, se cc io n a r y
En esta pgina de m uest ra de un at las estereo tx ico se re"
presenta un encfa lo de rata .
El objetivo (frnix) se ha resaltado en rojo. Para facilitar su
com prensin, se han sup ri m ido lo s rt u los de las estructu -
ras.
(Modificado de 5wanson, lo \11. : Brai n Maps: Struct ure oj the Rat
Brain. Nueva York: H sevier, 1992.)
Objetivo de la lesin
teir el e ncfa lo d el a ni mal, comprobar la lo ca lizaci n
e xac ta d e la lesi n , corregir los va lo re s y volver a int en-
tado. (Lo s m todo s de secci n y ti nc i n ce re b ra l se d es-
cribirn m s adelante ) .
El instrumento este reotxico
Un instrumento estereotxico fu n cio na sig uie n d o p r in -
cip ios sen ci llos . El di sp ositiv o incl uye un so porte para la
cabeza, que manti e n e e l cr neo del a nimal e n la u b ica-
ci n ad ecuada , un so porte pa ra el elec trodo y un m eca-
ni smo d e g ra d u aci n p or e l q u e se mu eve este lt imo
so p o rte e n di stancias po nde radas a lo la rg o de lo s tres
ejes es pac ia les : ante ri or-posterio r, dorsal-ventra l)' late-
ral-medi al. En la Figura 2.5 se p resenla un instru me n to
este re o t xico disead o para a nimales p equeos. Se pue-
d en u tili za r varios ti pos de so portes d e ca beza co n el fin
de adaptar este instrumento a dife rentes esp e cies, co mo
ratas , rato n es, h m ste res, p a lom as y tortugas (vase la
Figura 2.5) .
U n a ve z que se ha n o btenido las co o rd e n ad as este-
reot xica s a p artir d e un a lias cstercor xico, se a n es tes ia
al anim al , se le co loca e n el iu str urn e ru o estereotxico
instrumento estereotxico Di sposit ivo que permit e a un cirujano
situar un electrodo o una cnula en una parte concreta del enc-
falo.

Este eq uipo se utiliza par a realizar ciruga cerebral en rata s.
Tuercas
de ajuste
Electrodo
en el encfalo
y se le hace u n a in cisi n e n el cuero ca belludo. Se lo ca-
liza bregma, se marcan lo s nmero s ap ro p iados e n e l
a pa ra to de este reotaxia, se ta la d ra e l crneo y se intro-
duce e l di sp ositivo e n el e nc fa lo h asta las coorde nadas
co r rec tas. Ahora la p u n ta de la c n u la o d el e lec trodo
est do nde se q uera que estuviese y se pu ed e efectuar
la lesin .
Evidenteme nte, la ciruga estereotxica pued e uti-
lizarse p a ra otros fi nes d isti n tos q ue p ro ducir les io nes.
Los electro d os situados en e l e ncfalo puede n e m p learse
tanto para es timular n e u ronas co mo p ara d estruirlas, y
se puede n inye cta r frmacos que es ti m ul en ne u ro nas
o bloq uee n re ce p tores es pecficos . Ta m b i n se pueden
implantar c nulas o e lectrodos per mane n tes, sig u ie n do
un procedim ie nto q ue se d escribir luego en e ste ca p -
tu lo . En c ua lq u ie r caso, una ve z fina lizada la inte rven-
cin q ui rrgica , se cose la h erida, se re tira al an im a l d el
instrumento estereotxico y se d eja que se rec upere d e
la a n estesia.
A propsito, tam b i n h ay eq u ipos e stereot xicos p ara
seres h uma nos. E n ocasiones , los n euro ci r uj an os efec-
tan lesion es su bcorticales -por ejem p lo, para re d ucir
los sntomas d e la enfermedad de Parkin so n-. En estos
casos , por lo ge ne ra l, se va le n d e m ltip les puntos d e
refere ncia y verifican la localizacin d el electrodo (o d e
o tro d isp ositivo ) insertad o e n el e ncfa lo to man do im -
genes de RM o regist ra ndo las ac tividades de las n euro-
n as en esta reg i n antes de producir la lesin ce re b ra l
(vase la Figura 2.6) .
@
@
Fundam cnt os dc fisiolog a de la conducta 37
(Fo togra fa por co rtes a d e john W. Snell, University of Virgin ia
Health System .)
Mtodos histolgicos
Despus d e h aber p rodu cid o una lesin cerebral y obser-
vad o su s e fec tos e n la co n d uc ta d el ani mal, h ay que sec-
c io n a r y t e ir e l tej id o cerebral d e modo que se p ueda
inspec cionar con e l mi c ro scopio y lo cal izar el luga r de la
lesin . A m enudo , las lesiones cerebrales yerran su o bje-
tivo , pat lo qu e h ay que verificar la localizac in exacta
d el d afi o ce re b ra l desp us de exam inar e l comporta-
mi ent o d el anim al. Para e llo se n e cesit a fija r, seccio-
na r, te ir y e xa m inar e l e ncfalo . To mados en conj u nto,
es to s pro cedim ientos se d en omin an mtodos histolgicos.
(El prefijo liisto- hace a lus i n a l tejid o corporal).
Fijacin y obtencin de cortes histolgicos
Si se pretend e es tu d iar e l tejid o ta l co mo era en el
mom ento d e la mue rte d el organism o , se h an d e des-
truir las e n zim as auto l tica s (au llisis sig n ifica a u to d iso-
lu ci n " ) , o d e lo con trario estas con vertirn a l teji do en
una masa d eform e. Ta m bin h a d e ma n te nerse el tej ido
e n buen as co n d ic io nes p a ra evit a r que se d esco mponga
p or la acci n d e ba ct e rias o mo hos. Con e l fin de lo g ra r
es to s d os obj etivo s, se su merge e l tej ido n e ural en un
fijador. El que m s frec ue nte me nte se u tiliza es e l for-
mol, solucin ac uosa d e formaldeh d o , un gas . El formo l
de tien e la a u t lisis , e n d u rece e l tejido , que es extrema-
damente blando y fr gil , y e lim in a cu a lq u ie r m icro o rga-
nism o que pudiera d estruirlo.
formol Solucin acuosa del gas forma ldchdo, el fijador m s habi-
tual para rejidos cor porales.
38 Captulo 2 Mtodosy procedimientos deinvestigodn
Antes d e fijar e l e ncfa lo (e s decir, d e pone rlo e n
un a so luc i n fijadora ) , p or lo ge ne ral se p erfunde . La
perfusin d el tejido (literalm ente , fl u ir a trav s de )
su pone ex trae r la sa ngre y sus tituirla co n otro lquido.
El e ncfalo del a n imal se perfu nde p o rque se o btie ne n
m ejo res resultados hi stol gi cos c ua n do n o h ay sangre
e n el te jid o . El a n imal cuyo e ncfa lo va a es tu d ia rse se
sac rifica humani tariam ente m edian te una so bredosis d e
u n anests ico ge ne ra l. Se a bren lo s vasos sa ngu n e os de
fo n na q u e se puedan vaciar d e sa ngre, ree m p laz n d ol a
p or una so luc i n salin a di luida . Se extra e e l e ncfa lo
d e l c r neo y se coloc a e n un re cipient e que co n tie ne e l
fijado r.
U n a ve z fijado e l e nc falo, hay que seccio na rl o e n
d e lgadas l min as y teii.ir div ersas estructuras ce lu la res
co n e l fin d e examina r p o rmen o rizadamerne su estruc-
tura. Las seccio nes se efec ta n co n un micr to mo (lite-
ra lm ent e . aq u e llo que co rta e n fin as l rnin as ) . Las
secc io n es que se preparan p ara e xa m ina rlas al m icro s-
co p io p tico su ele n ten er un es peso r d e lOa SO pm, y las
q ue se prepa ran p ara el mi cr os copio electr n ico , por lo
ge ne ra l m en os de l plll. (Po r alguna raz n, los cortes d e
l ~jid o ce re b ra l su el en denominarse seccionesy ,
U n mi crt omo co n sta d e tr es part es : una c uc h illa,
u na p la tafo rma d onde se colo ca e l tejido y un m ecan ismo
que hace avanza r la c uch illa (o la platafo rma ) lo justo
d es pus d e cad a co rte , d e m odo que pueda co rtarse o tra
seccin . En la m a yor a d e los cas os, la plataforma in cl uye
u n a cc eso rio q u e co ngela e l e ncfa lo , e n d u reci n d o lo
lo su ficie nte pa ra p od er co rta rlo e n fin as seccio nes. En
la Figu ra 2 .7 se muestra un mi crtom o . El soporte de
la cuc h illa se d esliza hacia d elante sobre un rie l e n g ra-
sa d o y as se o b tie ne una secci n de la part e superio r
d e l tejid o lijado a la plataforma. Esta sube autom tica -
m en te a un a alt u ra pred et e rmin ada cua n do la c uc h i-
lla y e l soporte so n e m p u jados de nue vo hacia a tr s, d e
ma ne ra que e l sig uie n te m ovim iento h acia d el ante d e la
c uch illa co rt a o tra secc i n (v ase la Figura 2.7 ) .
Tras h abe r co rtado e l tejido , las seccio nes se m ontan
so bre portaobjetos d e vidrio y pueden e n to n ces te irse
sumergiendo el p o rtao bje tos e n di versas so luc io nes qu-
m icas. Por ltimo , las secc io nes teii.idas se c ub re n co n
una p equ e a ca n tid ad d e lqu id o transparen te , co no-
cid o co m o medio de montaje. y se co loc a u na l mina d e
c r istal mu y fi na (c u b re o bje-
tos) sobre e llas. El m ed io d e
prep ara ci n m an ti en e lij o e l
Animacin 2.1
c u b r eo b je to s. En MyPs}'chKit
Mtodos histolgicos 2.1 Mtodos histolgicos, pu eden
verse es to s procedimi ento s.
Tinci n
Si se observa al mi cr oscopio u n a se cci n d e tejido ce re-
bral sin teir, se p o d rn ve r los co nto r n o s d e alg u nas
masas ce lu la res g ra ndes y lo s fascc u los d e fibras m s
d estacados, p ero n o se d e jar n ve r los d et all es m s lino s.
Por esta razn , el es tud io d e la n euro anatoma mi cros-
c p ica requ iere tin ci ones histol gi ca s es pe cfic as. Lo s
investigado res h a n cre ad o muchas tin ciones diferentes
p a ra id e n tificar sustan cias espec ificas e n el interior o el
ex terior d e las c lul as. Para ve rifica r la lo calizacin d e
una lesi n ce re b ra l se utilizar un a d e las m s sim p les : la
tinci n d e los somas celula res.
A final es del siglo pasado, Franz Nissl, un n eur lo go
alemn , d escubri q ue un tin te , llam ad o azul d e metil cno,
poda teii.ir los somas celula res del tej ido ce re bra l. El ma te-
ria l que ca pt."lel tinte , co nocido co mo sustan cia de Nissl, est
formado por ARN , AD N Yprot enas aso ciadas localizad as
e n el ncleo y dispersas, en forma de g r n ulos, por el cito -
plasma . Adems d el azul d e m etil eno se pu eden util izar
m uch os tintes pa ra te ir los so mas cel ula res , pero el que
ms se e m plea es el vio le ta d e cresi lo. Por cie rt o, los tintes
no se desarro llaron exp re sa m e n te co n fin es hi stol gicos
sin o que, e n un principi o. se fabricaron para teii.ir tel as.
El d escubrimie n to d e las u n cion es d e somas ce lula-
res hi zo posible id enti ficar m asas n uclea res e n el e nc-
falo . En la Figura 2 .8 se represe nt a u na secc i n fro ntal
d e un e ncfalo d e ga to te ida co n viol et a d e c res ilo .
Represe e n que se p uede n dis tin guir los fascc u los d e
fibras porq ue tie nen un aspecto m s claro : no abso rb en
e l tinte (vase la Figura 2.8) . La tinc i n no ti e se lec tiva-
m en te lo s so mas celulares neuronales: todas las c lu las , ya
sean ne uro nas o n eu roglia , queda n te id as por igual. Le
co rresp o n d e al investi gado r d e te rm in ar cu l es c ul. e n
funcin d e su tam a o , fo rma y lo cali zacin .
perfusin Pro ceso m edi ante el cua l se reemp laza la sang re d e un
anim al por un lquido , [al co mo un a so lucin salina o un fijado r. al
prepar ar el enc falo p ara un exame n h isrolgico .
micrtomo Instr um ent o qu e produce lminas mu y finas de reji-
dos corporales.

El encfalo se ha te ido con violeta de cresilo, una t in cin
del soma celul ar. Las puntas de flech a sealan los n cleos o
grupos de somas cel ular es.
(Material histolgico por cortesa de Mary Carlson.)
Microsco pia electrnica
El mi cro scopio ptico tien e u n a escasa ca p aci d ad d e
resoluci n espacial p a ra apreciar p eque os d etall es, ya
que , deb id o a la propia naturale za d e la luz, u na m ag n i-
ficac i n o aum e nto m ayor d e aproxim adam ente 1.500
no aade n in gn d etall e . Para pod er ver es truc t u ras
anat m icas ta n p cque as co mo las vescu las sin p ticas
y detalles d e lo s o rg n u lo s ce lu la res, los investigado res
han d e uti lizar un microscopio electr n ico de transmi-
si n . Se pasa un haz d e electro nes d e u n lad o a otro d e
una fina lmina d el tejido a exa m in a r y el h az d e e lec-
trones pro ye c ta u n a im agen d el tej id o e n un a p a n ta-
lla fluo res ce n te, que pu ed e fo to g rafia rse o esca nearse
m e dian te u n o rde n ado r. Las m icrofotografas e lect r-
nicas as pro ducidas pueden a p o rt a r info rmaci n so b re
d etalle s estruc tu rales d el o rde n d e unas p ocas d ece n as
de na n me tro s (vase la Figura 2.9).
Un microscopio electrnico d e barrido proporcio n a
me nos amp lificaci n q ue un mi croscopio elec tr n ico d e
transm isi n es t n da r, el cua l tran sm ite el ha z d e elec tro-
nes a travs d el tej id o. En ca m b io, mu estra lo s ob jeto s
e n tres d im ensio n es . Para ello, e l mi croscopio ex p lo ra
el teji do med ia n te un h az d e elec tro nes q ue se d espl a za,
u n d e tector recib e la informacin d e la refl exi n d e l
h a z y u n ord enador produce un a im agen tri d im e ns io-
nal m uy d etalla da (vase la Figura 2.10) .
Mi croscopio confocal con lser
La mi cro sco pia co nve nc io nal o electr n ica d e tra ns m i-
si n requiere q ue e l teji do se corte e n fin as seccio n es ,
Fu nda mento s de fisiologa d e la con ducta 39
En est a microfotogra fa electr nica de una secci n a t ravs
de un a sinapsis axode ndrtica, se seal an con fl echas dos
regiones sinpti cas y se destaca con un crculo un a regin
de pinocito sis en un bot n te rm inal adyacente, que posi-
blem ent e consti t uye el reciclado de la m emb rana de la
vescul a. T = bot n t erminal ; f = mi crof il am entos; M = mi-
tocondrias.
(De Rockel, A. J. Y[ones, E. G. [ ourn al 01 Comparativ e Neurology,
1973,1 47, 61-92. Reproducido con autorizacin.)
p ero la invenc i n d e l microscopio co n focal con lser
p erm iti ver d e tall es e n e l in teri o r d e seccio nes gme-
sas d e tej ido o incluso e n bl oques d e tejid o e n cultivo o
e n las ca pas su p eri ores d e tejido d e un ce rebro vivo . El
m icroscopio co n foca l req uie re que se ti an con u n tinte
lluorescent e aq u ellas c lu las o part es d e la c lula qu e
nos inte resa n. (Este procedimi en to, d enominad o inmu-
nocitoqu imica ; se d escribe e n el prx im o a partado de este
ca p tu lo). Po r ejem p lo, se pueden m arca r con un tinte
lluo rescente las n euron as q ue producen u n ti p o espe-
cfico d e p ptid o . U n lser produce un rayo d e luz d e
u na d ete r m in ad a longitud d e o n da q ue se re flej a en un
es pej o dicroico-un tip o especial de espejo que tra nsmi te
mi cro scopio ele ctrn ico de t ran smi sin Microscopio qu e hace
pasar un haz de electrone s en focado a travs de finas secciones de
tejido para pon er de man ifiesto detalles extremada mente pequeos.
microscopio electrn ico de barr ido M icrosco pio que propor-
cio na informaci n trid ime nsion al sobre la forma de la superficie
de un pequeo objeto , explo ran do el objeto co n un fino haz de
electrones.
m icroscopio confocal con lser M icroscopio qu e aporra imge-
nes de aira resoluci n de diversas profu nd idades de una seccin
gruesa de rejido qu e conti en e molculas fluorescent es, med iante la
exploracin del rejido con la luz de un rayo lser.
40 Captu lo 2 Mtodos y proredlmlentos deinvestigodn

la lu z de ciertas longitudes d e o n da y refl eja las d e

otras- oLas len tes del microscopi o e n fo ca n la luz lse r
Microfo tog rafa elec tr n ica de barr id o, utili zada para vis ib i- en un a de te rm inada profundid ad e n el tejido . Esta luz
li za r n eur on as y ne uroglia. dese ncade na la fluo resce ncia e n e l te jido, que atraviesa
las lentes y se tra n sm ite a travs d el espejo d icroi co a una
(De Tissues and Organs: A Text-At/as 01 Scanning E/ectron Microscopy, abertu ra (jJinhole). Esta abertura bl oquea la luz ex t ra a
por Kessel, R. G.YKardon, R. H. Copyright 1979 por W. H. Freeman
and Co. Reprod ucido con autorizaci n de Barbara Kessel y Randy
causada por la di sp e rsi n d entro d el tejido , y la luz que
Kardon.) atraviesa la abertura se mide m ediante un d e te cto r. Dos
espejos mviles h ace n que la lu z lser e xp lo re el tejido,
Neurona Botones terminales que sinaptan lo que p ropo rcio n a a un ordenador la in fo rm aci n pre-
con una neurona cisa para fo rma r un a imagen d e un a se cci n d e tejido
locali zad a a u n a p ro fu n d id a d de te rm in ad a d entro d e la
m uestra . Si se realizan mltiples ex p lo rac io nes mientras
se mueve la lo calizaci n de la abe rtura , se puede o b te -
ner u n cmulo d e imge nes d e secc io nes a travs d el
teji do - recu rd ese que puede se r tej id o vivo- (vase
la Figura 2.11 ) .
En la Figura 2.12 se ilu stra e l u so d el mi croscopi o
confocal e n el hi p o ca m p o d e un ratn vivo anestesi ado
(Mizrah i y co ls., 20(4). Se abri el crn eo y se seccion
la co rte za ce rebral d e modo que pudie ran obten erse
im gen e s d e l in terior del h ipocampo . Se a p lica ro n
m todos ge nticos moleculares para insertar e n e! ADN
d el a nimal un gen que prod u ce una prote n a fluore s-
ce nte e n cie rtas n e uro n as de! hipocampo. Mizrah i y sus

Este grfico sim pli f ica do y esq ue m tico mu estr a el mi cr oscopi o co nfoc al co n lser.

Ocular l Microscopio
invertido

C:;;~~!i> Objetivo J

Muestra
 @
Estas fotografas de ra mificaciones de las dendritas de neu-
ronas hipocmpicas de un ratn vivo se obtuvi eron me-
dian te un microscopio confocal con lser. Las imge nes
demuest ran que las crisis causa das por la inyeccin de dro-
gas provocaron la prdida de algunas espinas dendrticas.
(De Mizrahi , A., Crowley, J. c.. Shtoye rma n, E. y Kart , L. c. journal
of Neuroscience, 2004, 24 , 3.147-3.151. Copyright 2004 po r la 50-
ciety lar Neurosci ence. Reproducido con autorizaci n de la Socie-
ty lar Neuroscience .)
co lab o rad o re s tomaron imgenes de cada dendrita d e
es as n euronas antes y d espus de inducir convulsio n es
e n lo s animal es administrn doles drogas exci tadoras.
Las imgenes obtenidas antes de las co nv ulsiones estn
e n verde y las realizadas entre cuatro y cinco horas des-
pus, e n rojo. Como se puede ver, en los a nimales e n los
qu e se provocaron convulsio nes hub o prdida de espi-
n as d endrticas (flechas ), p ero n o as en los a n im ales d e
re fe re n cia (vase la Figura 2.12 ).
Marcado de conexiones neurales
Su pon gam os que nos interesa averiguar cu les son los
m e canismos neurales qu e co n tr o la n la conducta repro-
ductora, y para e m p e za r, q uisira mos estudiar la Iisio lo-
ga d e la conducta sex ual d e ratas h e m b ra . Pues bi e n, a
p artir de alg unas pistas ob te ni das leye nd o artculos de
ex peri m e n tos realizados por otros in vestigad o res y publi-
cados e n revistas cientficas, se les p rac tica la ciruga est e-
reot xica a dos grupos d e ratas h e mb ra . A las ratas del
g ru po experimental se les h ace una lesin e n el n cleo
Fu ndam en t os de f is iologa de la con du ct a 41
ventromedia l d el hipotlamo (I-IVM), y a las ratas d el
grupo de referen cia una lesin fals a . Despus d e un os
cua n to s das d e re cupe ra cin , se acom o da (individual-
mente , por supu esto ) a los animal es co n ratas mach o .
Las h e m bras del grupo de referencia resp o n d ie ro n posi-
tivamente a la atencin d e los m ach os: ac eptaron la co n-
d ucta de cortejo, a lo que sigui la co p u lac i n. Por e l
contrario, las h embras con le sion es e n el IIVM la recha-
zaron y re h uyeron la co p u lac i n . Median te tc n icas histo-
l gicas, se co nfirm que , en efec to , el I-IVM d el e ncfalo
de los an imales d e ex peri mentac i n es ta ba des truido.
(Un anima l d el grupo e xpe rim e n ta l co p ul , pero m s
tarde se vio que en l la les in no haba afe ctado al I-IVM,
de modo que se d escartaron los datos d e dicho suj eto ).
Los res u ltados d e este e xper ime n to indican que las
neuronas ele! HVM p are cen in te rve n ir e n las fun cion es
re q ue ri das p a ra la co n d u cta ele c p u la de las hembras.
(Dicho sea ele p aso, resulta que estas lesiones no afect an
a la co nd uc ta de apareamiento d e los machos) . As que
adnde n o s lle va esto ? Cul es e l sig u ie nte p aso? De
hec ho, se pu ed e n seguir ex p lo ra n d o muchos aspectos
del tema. U no de e llos co n cie r n e al sistema d e estr uc-
turas cerebrales que participan en la co n d uc ta de a pa-
ream ie nto d e las hembras. Evide n te me n te, e l I-IVM
no opera so lo , recib e aferen cias d e cie rtas estr uc tu ras
y e n va eferen cias a otras. La cp ula requiere in teg ra r
percepcio nes visu ales, t ct iles y olfativas y organizar los
m o vimi entos en re spuest a a los d e la pareja. Ad em s ,
se n ecesi ta q u e todo el sist ema sea act ivad o por las hor-
mo nas sexuales adecuadas. Entonces, cu l es la fun cin
exacta elel HVM e n este co m p lej o sist ema?
Antes ele pret ender co n te sta r a esta pregunta h ay
que sa ber ms ac erca d e las con exi o n es ele! IIVM co n e l
resto del encfalo . Qu estruc tu ras e nv a n sus axon es al
I-IVM ya q u estructuras los e nva es te a su vez? U n a ve z
sab id o cules son las co nex iones, se podr investigar la
func in ele estas estructuras y el ca rc te r d e sus interac-
ciones (vase la Figura 2.13) .
Una vez qu e se sa be que una determ inada regin de l en c-
falo inte rviene en el control de una determinada funcin,
cabe pregunta rse cu les son las estructuras que le aportan
informacin y cu les la reciben de ella.
42 Captulo 2 Mtodos y procedimientos de investigocin

Cmo se pu ed en in ve sti g ar las co ne xio ne s d el
II V~I? Esta cuestin n o se puede resolv er m ediante pro-
ce dimientos hi stol gi cos que ti en todas las n euronas,
co mo h ace la tin cin d e los so mas ce lu la re s, pues , si se
o bse rva d et enidamen te u n e ncfa lo que h a sid o prepa-
rad o co n tales m todo s, ni camente se ver una masa
e n m a ra ada d e n euronas. Pero e n los ltimos aos los
inv e stigadores h an d esarrollado m todos de gra n preci-
si n que hacen resaltar a n euronas especficas de e ntre
todas las d ems .
Marcado de axones eferentes
E n ltim a instancia , el I-IV?",! tien e que afe ctar a la co n-
d uc ta . Es d e cir, las n e uronas d e es te ncl eo tienen que
e nviar axo nes a zonas d el e ncfa lo e n las que h aya n eu-
ron as que m edien los m ovimientos musculares. Proba-
b le me nte la d a n o se a d ir ect a : lo ms probable e s que
las n eu ronas d el I-IV~I a fect en a neuronas lo cal iza d as e n
o tras es tr uc tu ra s, las c uales a su vez influyan e n las d e
o tras estr uc tu ras, h asta que , finalm ente , las n euronas
moto ras a p ro p ia das sean es tim u ladas . Por tanto , para
p on e r de m ani fiesto este siste ma se h an d e id entificar
las ru tas qu e sig ue n lo s ax on es que sa le n d e l HV~r. En
otras palabras, se pre tende a ho ra marcar los axones efe-
rentes d e di cha es tr uct u ra,
Pa ra m a rcar di chos a xo nes se uti lizar un mtodo
d e marcado a n te r gra d o , (A n terog rad o sig n ific a q u e
se mueve h acia d e lanie ) . Estos m todos e m p le a n su s-
tan cias que so n ca p ta d as por las d endritas o lo s somas
ce lula re s y las transportan a lo largo d e l ax n h asta los
boton es term inales .
A lo largo d e los aos , los n e urocient fico s ha n desa-
rrollad o difere ntes m todos para ma rcar las vas que
sigue n lo s a xo nes e fere ntes . Po r ejem plo, para d esc u-
b rir e l d estino de axo nes eferen tes lo cali zad o s d en tr o
d el HVM podem os inyecta r una m insc ula ca ntidad d e
PHA-L (u na prote n a q u e se e n c ue nt ra e n las judas)
d entro d e l ncleo . (Po r sup u esto , uti liza re mos un in s-
tr um ento estere otxi c o p a ra h a c erlo ) . La s d endri-
tas a bsor ben las m ol cul as d e PI IA-L Y las transportan
a t raves a n d o e l som a h asta e l ax n, p or d ond e viaj an
m edian te transporte axo p ls mi co r pido h asta los b oto-
n es terminales . En p o cos das las c lula s es t n rep let as
d e m ol cul as de PI-IA-L e n su tot alidad: las d end ritas , e l
soma , e l ax n y todas sus ra m ific ac io n e s y los botones
termi nales . E n tonces, se sacrifica a l a n imal, se secc io n a
e l e n c fa lo y se ac opl a n las secciones so b re portaobj e-
tos. Para poder ver las m ol cu las de PllA-L se a p lica un
m todo inmunocitoou imico es pe cia l y las preparacion es se
e xa m in a n a l mi croscopio (vase la Figura 2014).
Los m todos inm un o ci to q u m icos sacan prove ch o d e
las reaccio n es inmu n itarias. El siste m a inm un itario d el
o rga n ismo tiene la ca pac idad d e p rodu cir a ntic uerpos
e n respuesta a lo s antge nos . Los an tgenos so n prote n as
(o p ptidos) , co mo las que se e nc ue nt ra n e n la su pe rfi -
cie d e las bacterias o los vir us . Lo s an tiC1l1'11JOs, q ue tam-
bi n so n prote n as, so n pro du cid o s p or los leuco cito s
m todo de m ar cad o antergrado M to do histolgico que marca
los axo nes y botones termi nales d e neuronas cuyos som as celulares
se enc uent ran en una regin det erm inada.
P HA-L Phaseolus vulgaris leuleoagglutinin. Prot en a qu e se en cue n-
tra en las jud as y se ut iliza co mo marcado r anrergrado. La absor -
ben las d endritas y el so m a de la clula y la transpo rta n hasta el
extre m o del axn.
m to do in m u no cito q u m ico M tod o histolgico qu e utili za ant i-
cuerpos radioactivos o an ticuerpos ligad os a un a m olcu la teida
para indi car la existencia d e det erm inad as proten as d e p p tidos .

Se inyecta PHA-L en una regin

del cerebro y esta es captada
por dendri tas y somas neuronal es

,." '" El lujo axoplsmico

.:::;: ;_. o; o::". transporta la PHA-L ~ !' _

- ""'e .

Con el microscopio pueden verse

los axones y los botones terminales

de la sa ngre p ara d estr uir a los m icrorgan ismos invaso-
res . Lo s a n ticue rpos o bien so n segt-egados p or los le u-
cocitos o bi en se sita n sobre su su pe rficie y, a l ig ual
que lo s rec eptores de lo s n e u rotran smiso res. se lo ca-
lizan so bre la membran a de las n eu ron as. C ua n do los
antge nos presente s e n la su per fic ie d el mi cro rganism o
invasor e n tra n e n contacto co n lo s a n ticuerpos que lo s
re conocen, es tos d esen cad en an e l ata q ue d e los leuco ci-
tos so b re e l inv aso r.
Los b il o go s m o le culares ha n puesto a punto m to-
dos d e p rod u ccin d e an ticuerpos para cualq u ie r p p-
tido o p rote n a . Las m o l cul as d e los a n tic ue rp o s est n
u n id as a dis ti n tos tip os d e mol cu las d e co lo ra n tes, alg u-
nos d e los cu ales rea ccionan con o tras su stan c ias y ti en
el tej ido d e co lo r m a r rn . m ientras que o tros so n fluo-
res ce n tes : brillan c ua n do son ex puestos a u n a luz d e u n a
d ete rm inad a lo n gitu d d e o n da. Ent o n ces, pa ra d e termi-
n ar en qu p arte del encfalo se lo ca liza e l p ptido o
la protena (e l a ntge no), los in vestiga d o res su me rge n
sec ciones frescas de teji d o cerebral e n u na so luci n q ue
co n tie n e las m ol c ul as de ant icue rpo/colo ra n te , y lo s
a n ticu e r p os se un en a su a ntge no . Cua ndo el inv estiga-
dor e xa m in a las seccio nes co n u n mi cro scopio (bajo un a
luz d e un a d etermi n ada lon g itud de on da, en e l caso d e
tintes flu oresc entes) puede ver cules so n las partes d el
e nc fa lo - in cluso qu ne u ro nas individuales- co ntie-
nen e l a n tge no.
La Fig u ra 2. ] 5 muest ra cmo se pu ed e u tilizar la
P I-IA-L para id e n tifi ca r la s efere ncias d e u n a r e gi n
dete rm ina d a d el encfa lo. E n un ex perime n to se in ye c-
taro n m o lcu las d e es ta sus ta nc ia e n e l 1-[V1'\'1 y, d o s das
des p us, cu a n d o las n euro n as d e es a re gi n h a ban
Se inyect PHA-l en el ncl eo vent ro media l del hipotlam o, dond e fu e capta do por las dendrit as y t ran sportado a tr avs de los
axones de las clula s hasta sus botones terminales. (a) lugar de la inyecci n. (b) Axones y boton es ter mi nales de la sustancia gris
periacued uctal marcados.
(Co rt esa de Kir st en , Nie lsen, Ricciard i y j effrev Blau stein , Uni ver sity of Massachu sset s.)
r I
.-~
... .
":
(a)
Fu n dame ntos de fis io loga de la co n d u ct a 43
a bsor b ido y tra ns po rtado a lo s e xtre mos d e sus axones
la PI-IA-L, se sacr ific a l a nimal. E n la Figu ra 2. 15a se
indica e l lugar d e la inyecci n: como se pued e ve r, los
so mas celu la re s y las d e ndritas cercanas estn llen os de
leci tin a (vase la Figura 2.15a). En la Figura 2. 15b se pre-
se n ta u na mi c ro fo to g ra fa d e la sus ta nc ia g ris periacue-
du ct a l (SGPA). Es ta re gi n contie ne a lg u nos axo nes
y b oton es te r mi n al es marcad o s (e n d orado ) , lo c ual
d em u es tr a que a lg un o s ax on es efe re n tes d el HVM ter-
m in a n e n la SG PA (vase la Figura 2.15b) .
Pa ra se g u ir con e l es tu d io d e la fu nc i n d el HVM e n
la co n d u c ta se xual d e las h e m b ras, h ab ra que averiguar
cu les so n las e str uc tu ras que re ciben in fo r m a ci n d e
las n e uronas d el H VM (e n tre e llas, la SGPA) y ver qu
suc e de cuan d o se lesio n a ca da u n a d e ella s. Su pongamos
q u e e l daiio d e alg u nas d e estas estructu ras a lte ra ta m -
b in la co n d uc ta se xual fem enin a . Se in ye c tar- P HA-L
e n di c has estr uc turas y se o bse rvar h acia d n d e se d iri -
ge n sus axones. Finalm en te , se d escubrir la va princi-
p a l que va d esd e e l HVM h asta las neuron as motoras
cuya actividad es n e cesari a p a ra copula r. (De h ech o , los
in vest igad o re s ya lo h an re ali zad o y alg u nos d e los resul-
tados o b te n id os se ex pon d rn e n el Cap tu lo 5).
Marcado de axones aferentes
Traz ar lo s axo n es e fe re ntes de l H V~1 so lo ex plicar parte
d e la hi sto ria so b re lo s ci rc u itos n e u ral es implicad os e n
la co n d ucta sexual fem enin a: la p a rt e que ocurre e ntre
e l I-I VM y las n eu ron as m otoras. Q u sucede con los
circ u itos que se e nc ue ntra n antes d eI I-lVM?, in tervie n e
d e a lgn m odo e l HVM e n e l a nlisis d e la informa cin
(b)
44 Captulo 2 Mtodos y procedimientosde investiga cin
se nso -ia l (co mo la visiou , e l o lo r o e l contacto de l
m ach o )? O tal vez los efec tos activad o res d e las hormo-
n as se x uales d e la h embra so b re su conduc ta actan a
t ravs d el HVM, o d e n euronas cuyo s axo n es es ta ble ce n
si naps is all. Para ave riguar cules son las regiones del
e ncfalo que form an parte d e lo s co m po ne nte s d e la
co rrie n te superior d e los circ u itos neurales , se ha d e
d et erm inar c ule s so n las aferen cias que recibe e l HVM
- su s co ne xio nes afe re n te s-o Para hacerlo, se e m p lea r
un mtodo d e m a rcad o retrgrado .
El trmin o retrgrado sig n ifica q ue se mueve hacia
atrs. Los m todos d e marcado re t rgrad o emple an
susta nc ias que son ca p ta das po r los b oton es terminales y
tr ansp ortadas de vu elt a a lo largo de los axo nes h acia los
so mas cel ula res . El m todo para id entifi ca r las aferen cias
qu e recibe una det ermin ada regin d el e ncfalo e s simi-
lar al utilizado para id entifi ca r sus efe re nc ias. En p rimer
lu gar, se in yect a e n el HV~ 1 u na pequ efia cantidad d e
un a sus ta ncia d enominada oro Il uo rado, que es a bso r-
bida po r los botones terminal es y transportada d e vuelta
a los somas ce lu la re s m ediante tra nspone ax o p lsm ico
retr gr ad o , Po cos das d esp u s se sacrifica al a n im al, se
seccio na su e ncfa lo y se exam ina el tejido bajo una luz
d e la longitud d e o n da adecuada, bajo la cual las molcu-
las d e o ro luorado emit en fluorescen cia . As, se e n co n-
tr ar que la a mgdala m edial es una d e las regiones que
aportan aferen cias a l HVM (vase la Figura 2.16).
Los m todos d e marcado a nterg rado y re trgrado
qu e se han de scrito h asta aq u id entifi can u n solo esla-
b n d e un a ca de na d e n euronas -neuronas c uyo s
Se inyect oro fluo rado en el HVM, do nde fue capta do por
los boto nes termina les y t ransport ado de vue lta a travs
de los axones hasta sus somas celulares. La microfotogra-
fa muestra estos somas celulares, localizad os en la a mg-
dala medial.
(Co rtes a d e Yvon Delvi lle, Medica l Schoo l, Unive rsity of Mas sach u-
se tts .)
axones entran o sale n d e una regin cereb ra l d etermi-
n ada- , m ientras que los m t od os de m a rca do iransneu-
tonal id entifican una se rie d e d o s, tres o ms n euron as
que form an co nexiones sin pticas e n se rie una co n o tra.
El m todo de marc ad o tra n sne uro nal retrg rado m s
e ficaz emple a un virus de la seud o r r ab ia : una form a
d ebilitada d el virus h erpes d el cerdo que originalme n te
se co n cibi co m o vacu n a. Para e l ma rca d o tr asn euronal
ante rgrado se utiliza u n a varied ad d el virus del h e rpes
simple. que se in yecta d irect a m e n te e n un a re gi n ce re -
bral, es ca p tad o p or las n euro n as de l lu gar y las in fe ct a.
Luego se extie n de a tr avs d e las ne uro n as infec tadas y
finalmente es lib e rad o , co n tagian do la infe ccin a la s
neuronas co n las q ue es ta blece conexio nes sinpti cas .
Cuan to ms e spe ra e l inve stigad or tras in ye ctar el
virus , mayor es la ca n tidad d e ne u ro nas q u e lle gan a
infectarse . Desp u s d e q ue se haya sac rifica do el a n imal
y se h aya secc ionado su e ncfa lo, se apli can m tod os
inmuno citoqum icos p ara lo cali zar una p roten a produ-
cid a por el virus. Por e jem p lo, Daniels, Miseli s y Flan a-
gan-Cato (1999) in yect aron el virus d e la se udo rra b ia e n
los msculos que contro la n la postura d e a parea m ie n to
de las ratas h e m b ra . TI-as unos c ua ntos das, se sac rific a
las ratas y se busca ron e n su e nc falo signos de infeccin
vri ca . El estud io in d ic que el vir us e nco ntr su tr aye c-
toria a lo largo de los n ervios m o tores hasta las n euronas
motoras d e la m dul a esp inal, d e a h a la fo rm acin re ti-
cu lar del b u lbo, luego a la sustancia gris p e riac ue d uc ta l
y por ltimo al I-IVM . Estos resultad o s co n firma n los d e
los m todos de m arcado a n tergra d o y re tr g rado que
se ac aban de d es cribir. (Ta m bi n se e nco n tra ro n n euro-
n as infectadas en otras est r uc turas, p e-o que n o so n rel e-
vantes e n esta exposici n ) .
Co mbi nn dolos, lo s mtodos de m a rcad o anter-
grado y retrgrad o - i ncl uye n do lo s m todos tra ns-
n euronales- p ermiten d escu b ri r circ ui tos d e n euron as
interre la cion adas. As, e sto s m tod o s co n trib uye n a
ob ten er un d iag ra ma d el ca bleado ue u ra l d el e nc-
falo (vase la Figura 2.17) . Pr o vistos d e otros m t o-
dos d e inv estigacin (incl u idos alg u n o s d e los qu e se
mtodo de marcado retrgrado Mtodo hi stol gico q ue marca
los somas celu lares a los que pert en ecen los bo tones term in ales de
los axon es qu e es tablece n sina psis con las cl ulas de u na regin co n-
cr et a.
oro fluorado T inc i n que sirve co mo m a rcad or ret rg rad o. Lo
ab sor ben los bo ton es term in ales y lo tra nspo rta n d e vuel ta al so ma
cel ular.
virus de la seudorrabia Forma d ebil itad a d el virus del her p es d e!
cerd o u tilizad o para e! m arcado tr asn euronal ret rgr ado. Marca una
serie de neuron as que est n in terco necta das med iante sinaps is,
virus d el h erp es simple Form a del virus d el herp es q ue se ut iliza
para e! m arc ado tra sn eu ronal anrer grado. M arca un a se rie d e ne u-
ron as que estn interconectad as median te sina psis .
 Fu n dam ento s d e fisiologa de la conduct a 45

e ra co nseguir e l ce re b ro d el paciente cua n do m ora y

e xam in a rlo al microscopi o . Pero sol a ser impo sibl e . En
En la fi gura se representan u na d e las afe rencias al HVM y ocasio n es, e l pacien te so b reviva a l in vestigador. Il aba
una de sus efe rencias, pu estas de m an if iest o por los m to- caso s e n q u e el paci ente ca m b ia ba de c iu dad d e resi-
dos de m a rcado anter grad o y retr grad o. de ncia. Alg unas veces (q u iz dem asi adas ) , la fa m ilia n o
co n ce d a la auto riza cin para la autopsia. Debido a estos
Marcado antergrado: se
inyecta PHA-L en el HVM
proble mas p r cticos, e l es tu d io d e los efectos co m po rta-
m entales d el d a o e n re gi on es es pecfic as del e n c fa lo
1 b . Entonces pueden verse los
axones y terminales en la SGPA
h um an o progres ms bi en lentamente.
Los re cien tes avan ces e n las t cnicas de .-ayo s X ye n
--------
-r:i> ( . -.----- la tec nologa de los ord enadores h an llevado a co nce b ir
var ios m todos para es tudiar la a nato ma de l ce re b ro in
(...J" Ir;; ,..t>-, ~ ( __
/

v ivo. Dich os avances p ermiten a lo s investigadores e xa-
r-~,\~jl Jr~~ l~, ,- ~ ~----=--~--
"-~5
r""'~ '1
'- '/'//'1'--<"'\
.\ ~__. - ~""
<, .-0' ........
minar la localizacin y e x te n si n d e la lesi n ce re b ral
\ ~\( I I '~'0.- ' ,- ,o ~ ) mi en tras e l p ac ie n te est an vivo. El prim er m todo
".. ==! \ ./1) ~. d~. <,"-....:--j
/~-"vVJ J/ .~--_:./ que se ide recibi e l nombre d e to m ografa axial com-
( ~j~"r;;/ .' SGPA~ putarizada (TAC) (de los trmin os g rie g os lomos, co rt e

/j_.
\
\.-0!.~')-r"'--Y ;:/ . HVM I y graphein, esc rib ir ) . Est e proc edimiento, qu e h abi-
r:
\ .C d t
Otras
estructuras?
!/ Arniqdala
r",h::-
( . medial o" -
j
tualmente se denomina exp loraci n T.t e, fun ciona como
sigu e: se coloca la c abeza d el pa c iente e n un a m p lio
\ on uc a,. ! ~ cilindro de forma o va lada, que co ntie n e un a pa rato d e
' sexual / ~-
\ rayos X y.j u sto e n fre n te d e l (a l otro lado d e la ca beza
L .s-> ,.,,/
del p ac ie nte ) , ha y un d e te ct or d e rayos X. El h az d e
2a Marcado retrgrado: se
inyecta oro fluarado
rayos X pasa a travs d e la ca beza d el p aciente y e l d e te c-
2b Entonces pueden verse los somas en el HVM to r mide la cantidad d e rad ioac tividad que se tra ns m ite.
celulares de la amgdala medial Este h a z explora la c abeza d esde to dos los ngu los y un
ordenador convierte los valores que re cibe d el d e te c-
tor en im ge n es d el c r neo y su con te n ido (vase la
desc rib ir n m s adelante e n este ca p tu lo ) , se pued e tra- Figura 2.18 ) .
tar de descu brir las funcion es de cad a u n o de lo s co m-
p on entes de dicho circuito.

Estud io de la estru ctura del cerebro

( Larry Mulvihill /Rainbow.)
hum a no in vivo
H ay muy b uenas razo n es para inv es tiga r las fu ncio nes
d el e ncfa lo d e otros a n ima les aparte d e los seres h uma-
n os, y una d e e llas es que se pued en co m pa ra r los resu l-
ta dos de estud ios realizados co n dife rentes e sp ecies para
sacar a lg u n as co n cl u sio nes so b re la evo lucin d e varios
sis te m as neurales, Aunque nuest ro prin cipal fo c o d e
inters sea n las funciones d e l e ncfa lo h u m a n o , obvia-
m ente no se puede p edir a las personas que se som etan a
ciruga ce re b ral con e l fin de inv est iga rlo. Pero, a veces,
las e n fe r med a des y lo s acc ide n te s daan e l enc fal o
humano y, si se sabe dnde se h a producido la lesi n , se
puede estud ia r la conduct a d e e sas personas e in te n ta r
h acer e l m ismo tipo de inferencias que se hi cie ron res-
p ect o a las lesio n es cerebra les p ro du cid as in te n cion a d a-
m ente e n los a n imales de la borato ri o . El p ro ble ma es :
d n d e se lo cali za la lesin ? tomografa axial computari zad a (TAC) T cni ca qu e se sirve
de un orde nador para analizar los daro s obteni do s mediante un a
En e l p asado , u n in vestigad o r poda es tudiar la co n-
exploracin por rayos X y proporciona una imagen bidim ensional
ducta de una p ersona con da o ce re bral y n o sa ber co n de un a seccin del cue rpo.
e xac titu d su lo cali zacin : la n ica m an era d e asegu ra rse
46 Capnulo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigacin
En la Figura 2 . 19 se p rese n ta una se rie d e estas im -
genes d e TAC o b te n idas d e la ca be za d e una paci e nte
que haba sufrido una a pop leja . Este accide nte ce r e-
brovasc u lar d a una p arte d el e ncfa lo implicada e n
la co nsci e ncia d el p ro p io cue r po y e n la percepc i n d el
es p ac io , y la p acien te p e rdi la pe rcepci n co n scie n te
d e la p a rte izq ui erd a d e su c ue r po y d e lo s es tm u los
lo calizado s a su izq u ie rd a . Se puede ver el d all a co m o
una m a n ch a b lanca en e l lado infe rior izq uie rdo d e la
im agen 5 (vase la Figura 2. 19).
Un a rad iog rafa in cluso m s d etall ada d e lo que h ay
e n e l in te rio r d e la ca beza d e u na p erso n a la pro por-
cio n a u n a tcn ica co nocida co m o re sonancia magntica
(RM) . El eq ui po de RM se p a rece al de l TAC , p e ro n o uti-
liza rayos X . En luga r d e ello, hace pasar un ca m po m ag-
n t ico e xtre m ad a me n te in ten so a travs d e la ca beza d el
pacie nte. C ua n do se co loca el cuer p o d e u n sujet o e n un
intenso ca m po m agntico , los ncleos d e algu nos to mos
d e m ol cu la s d el o rga n ismo ro ta n sigu ie n do una d e te r-
minada alineaci n . Si entonces se h ace pasar una o nda
d e ra d iofrecue ncia a tr avs d el c ue r po , di chos n cleos
e m ite n o ndas d e rad io . Las di ferentes m o l cu las e m ite n
e ne rg a a d ife re ntes frecu en cias, de m odo que el eq u ipo
de RM se a jus ta p ara d e tect a r la rad iacin procede n te
El pacient e tena un a lesin en el rea parieto-occipital derecha (i magen 5). La lesin se ve en blanco debido a la hem orr agia: la
sangre absorbe ms radia ci n q ue el t ejido cerebral adyacente . La zona rostral se sita arr ib a, la caudal abajo ; los lados izqu ierdo
y derecho est n i nverti do s. La im agen 1 mu estra un a seccin a niv el d e los ojos y la base del encfalo.
(Cort esa de J. MeA. jo nes, Good Sam arita n Hospital, Portl and, Oregon.)
(1 )
(4)
d e lo s to m os de h idr ge no . Ya q u e la co nce n traci n
d e estos to m o s e n los di stintos tejidos es diferente, e l
equipo puede uti lizar la inform acin para elabo ra r im -
ge n es d e sec cio n es d el e nc falo . A difere ncia d e las im -
gen es d e TAC , que por lo ge n eral se limita n a un pl an o
h o rizon tal , las d e RM pueden o b te ne rse tambin e n un
pl a n o sagital o uno fr o n tal (va se la Figura 2.20).
Co mo se ap recia e n la Figura 2.20, e n las im ge ne s
d e R.\1 se p u ede distingu ir e n tre las regiones d e sustan-
cia gris y las d e susta ncia bl a n ca, d e m odo que p ued en
verse lo s prin cip ales fasc c u los d e fib ras (tales co m o el
c ue r p o calloso) . Sin e m ba rgo , lo s fas c cu los d e lib ras
m s p eq ueos n o pueden verse e n estas ex p lo raciones ,
salvo q ue se e m p lee u na versi n esp ecial d e la Rl\1 q ue
p ermite ve r, in cl uso, peq u eos fasccu los d e fib ras y m ar-
ca r h aces d e fibras. Vea mos c mo. Por e nci m a d e l ce ro
ab so lu to, to das las mol cu las se mueve n e n di re ccio-
n es alea torias d ebid o a la agitac i n t rm ica; p o r tan to ,
c ua n to m ayo r es la temperatura , m s rpi d o resu lta e l
resonancia ma gntica (RM) T cni ca con la qu e se pued en obte-
ner imgenes pr ecisas del int erior del cuerpo . Im plica la int eracci n
ent re o nda s d e rad io y un inte nso campo ma gnt ico.
(2) (3)
(5) (6)

(Fot o por cortesa de Philip s Medica l Systems.)
movim ie nto aleatori o. Las imgenes tensoriales d e difu-
si n (ITD) se b enefi cian d el hecho d e que el m ovimiento
d e las m ol cul as d e agua e n los fasccul o s d e susta nc ia
b la nca no es aleatorio sino que tiend e a re al izarse e n
una direccin paral el a a la d e lo s axon es que co ns tituye n
dic h os fasccul os. La RM u tiliza la informacin rel ativa al
m ovim ie n to d e las m ol cul as d e ag ua para d etermin a r
la locali zacin y orientacin d e los fascculos d e axon es
de la susta nc ia blan ca . En la Figura 2.2] se presenta u n a
vista sagital d e alg u nos d e los axo nes qu e se proyectan
intermedio
Ablacin experimental
El objetivo de la investigacin en Neurociencia cornpor-
tamental es entender qu funciones cerebral es se requie-
ren para llevar a ca bo una conducta determinada y luego
sa ber dnde se localizan los circuitos neurales que ejecu-
tan esas funciones. El mtodo de lesin es el ms antiguo
de losque se emplean en este tipo de investigacin y sigue
siendo uno de los ms tile s. Para ell o. se efecta una
lesinsubcortical con la ayuda de un equipo estereotaxico,
se obtienen las coordenadas en un atlas estereotxico y
luego se sita la punta del electrodo o de la cnula en el
objetivo. Se realiza una lesin haciendo pasar corriente de
RF a travs del electrodo o infun diendo un aminocido
excitador a travs de la cnu la. produciendo as una lesin
Fundament os de f isi ol og a d e la con du ct a 47
En esta imagen tensorial de difusin , vista sagital , se obser-
van algunos de los axones que se proyectan desde el tlamo
hasta la corteza cerebral en el cerebro humano.
(De wak ana, S.; [ian, H.; Nagae-Poetscher, L. M.; Van Zijl, P. C. M. y
Mori, S. Radlology, 2004. 230 . 7787. Reprod ucido con autoriza cin .)
Tla mo
d esd e el tlamo h a sta la corteza ce re b ra l d e l encfa lo
hum ano seg n po n en d e manifiesto las imgene s ten-
so riale s d e difusi n . El ord e n ador aad e co lo res para
di stinguir los diferentes fascculos d e axo ne s. (Va se la
Figura 2.2 1).
imgenes tensoriales de difusin (IT D ) M tod o de neuroi ma-
gen qu e emplea una RM modi ficada para pon er de manifiesto
haces de axones mielni cos en el cerebro hu mano in uiuo.
excitotxica. La ventaja de estas lesiones es que solo des-
truyen los somas celulares de las neuronas, pero los axo-
nes que atraviesan la regin no resultan daados.
Se ha de determinar la localizacin de la lesin tras
haber observado la conducta del ani mal. El animal se
sacrifica de forma humanitaria. se perfunde el encfalo
con una solucin salina. se extrae del crneo y se conserva
en un fijador como el formol. Se util iza un micrtomo
paraseccionar el tejido. el cual generalmente seha conge-
lado con el fin de endurecerlo suficientemente para poder
cortarlo en finas secciones. Estas se montan en portaobje-
tos. teidas con un colorante de somas celulares, y se exa -
minan al microscopio.
El microscopio ptico permitever lasclulasy susorg-
nulos ms grandes, pero para ver pequeos pormenores,
48 Captulo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigocin
tales como cada una de las mito condrias o las vescu-
las sinpticas, se necesita un microscopio electrnico. El
microscopio electrnico de barrido proporciona una vista
tridimensional del tejido, pero con amplificacin menor
que el microscopio electrnico de transmisin convencio-
nal. Los microscopios confoca les proporcionan imgenes
de lminas" de tejido que pueden descubrir la presencia
de determinadas molculas, incluso en un teji do vivo.
El siguiente paso en un programa de investigacin
a menudo requiere que el investigador descubra las
conexiones aferentes y eferentes de la regin que se est
estudiando con el resto del encfalo. Las conexiones efe-
rentes (las que transmiten informa cin de dicha regin
a otras partes del encfalo) se descubren con mtodos
de marcado antergrado, como el que utiliza PHA-L. Las
conexionesaferentes (aquellas que llevan info rmacin a
dicha regin desde otras partes del encfalo) se eviden-
cian con mtodos de marcado retrgrado, como el que
usa oro fluorado. Las cadenas de neuronas que estable-
cen conexiones sinpticas pueden verse con el mtodo
REGISTRO Y ESTIMULACIN
DE LA ACTIVIDAD NEURAL
La prim era parte d e es te cap tu lo se ocup d e la a nato-
ma d e l e nc falo y lo s e fec to s d e las lesion es e n d ete r-
minadas region es ce re b r a les. Es ta se c ci n a bo rda
una aprox imaci n di fe rente: el es tu dio d el e ncfa lo
m ediante e l registro o la es tim u lac i n d e la ac tivid ad d e
region es especficas. Las fu n cio nes ce re b ra les impli can
la ac tivid ad d e circ u itos n euron al es, as pues, las diferen-
tes p ercepcio n es y respuestas co m p o rt a me n tales impli-
ca n d iferentes p au tas d e act ividad ce reb ra l. Po r e llo, los
investi gad ores h an e la borado m to d o s p ara reg istra r
estas pauta s o pal-a produci rlas de fo rma artifi cia l.
Registro de la activ idad neural
Los axones producen p ot en cial es d e acci n y lo s b ot o-
n es te rm in al es provocan p ot encial es po stsin pti co s e n
la m e m bra na d e las c lu las co n las que esta b lece n sina p-
siso Estos fen m e nos e lc trico s p u ed en registrarse y los
ca m b ios e n la actividad e lctrica de un a regi n co nc re ta
se pueden util izar para d e term inar si dic ha regin pa r-
ticipa e n e l co n tro l d e d ive rsas co n d u ctas. Po r ejemplo ,
puede n h acerse regist ros d u ra n te la presen tacin d e un
es tm u lo, e l proceso d e to ma d e d eci sion es o la ejec u-
ci n de u na ac tivid ad m o to ra.
Lo s reg ist ros pu ed en r eali zars e crn ica men te,
du rante un largo p erod o d e tiempo d espu s d e qu e
de marcado tr ansneuronal. El virus de la seudorrab ia
puede utilizar se como marcador retrgrado y una varie-
dad del virus del herpes simple, como marcador anter-
grado.
Aunque no se realizan lesiones deliberadas en el enc-
falo de los se res humanos con fines de investigacin, las
enfermedades y los accidentes pueden causar una lesin
cerebral y, si se sa be dnde se localiza dicha lesin. se
puede estudiar la conducta de los suj etos y sacar conclu-
siones ace rca de la localizacin de los circuitos neurales
que llevan a cabo funciones import antes. Si el paciente
muere y puede disponerse de su encfalo para exami-
narlo, se pueden aplicar los mtodos histolgicos habi-
tuales. En otro caso, se puede examinar el cerebro in vivo
uti lizando exploraciones con TAC o con RM. Las imgenes
tensoriales de difusin utilizan una modificacin de la RM
para visibilizar fasccu los de axones mielnicosen un cere-
bro humano in vivo .
En la Tabla 2.1 se resumen los mtodos de investiga-
cin descritos en este apartado.
e l a ni mal se h a ya re cuperado d e la in te rve n ci n qui-
r rgi ca ; o d e fo rm a aguda, durante un perodo d e
ti empo rel a tivam e n te co rt o durant e e l c ual e l a n im a l
p erm an e ce a nes te siado . Los regi stros agu dos, e fec tua-
dos ba jo a nes tes ia , p or lo gen el-al se lim it an a l es t u-
di o d e las vas se nsori ales y rara vez se ac om p a an d e
o bservacio nes comportamental e s, ya qu e la ca pacidad
co m portame n ta l d e un a n imal a nes tes iado es, cu a n do
m en os, limitada .
Registro con microelectrodos
Los age nt es q u m icos que a fectan a las n euronas seroto-
ni n rgi cas y n orad re n rg icas tambi n afectan al sue o
REM . Supo ngamos que , sab ie n do esto , n os pl an team os
si la ac tividad d e las n euronas se ro to n in rg ica s y nora-
drenrgi cas vara durante las diferentes fa ses del sue iio.
Para averig ua do, se regist ra r a co n mi croelectrodos la
ac tividad de di ch as n euronas , ya que los m icroelectrodos
tie ne n un a punta m u y fina, lo suficie ntem ente p eq u e a
para p oder regist ra r la actividad e lc trica d e n e uro n as
individual e s. Por lo general esta t cn ica se denom in a
registro de neuronas individuales o d e u ni dades (u na
un id ad se re fiere a una n eurona individual).
Pu esto qu e se qu iere registrar la ac tivid ad d e n eu-
ro nas individual es d u ra n te un largo perodo d e tiem po
microel ectrodo Electrodo mu y fino ut ilizad o gen eralm ent e pa ra
registra r la acrividad de neuron as individ ua les.
registro d e unidades ind ividu ales Regisrro de la activid ad el c-
rrica de un a sola ne urona.
 Fu nd amc nto s dc f isio loga d c la co n d u ct a 49

Destrui r o ina ctivar regi ones cerebrales Lesin por radio fre cuencia Destru ye t odo el t ej id o cerebral prximo a
especficas la pu nta del electro do

Lesin excitotxica; utiliza ami noci do s Destr uye solo los somas celula res prximos
excitadores como el cido cani co al extre mo de la cnula; no afecta a los
axones qu e at raviesan la regin

Lesin con 6 HD Destru ye las neuronas catecola mi nrgicas

prxima s al extremo de la cnul a

Infu sin de un anestsi co local; crio do Inactiva t empo ralm ent e region es
cerebrales especficas; el anima l puede
servir como su propio control

Situar electro dos o cnulas en una regin Ciruga estereotxica Consultar un atlas estereotx ico para
especfica dent ro del cerebro det erminar las coordena das

Encontrar la sede de la lesin Perfusi n, fijacin, seccin del cerebro y

t inci n de las secciones

Ident ifica r los axones efere ntes de Mto do de marcado ante rgrado, como el
una regi n det erm in ada y los boton es de PHA L
termi nales de di chos axones

Identifi car la local izacin de neuronas Mto do de marcado retr grado, como el
cuyos axones te rmi nan en una regin oro flu orado
determinada

Identificar series de neuronas que estn Mto do de marcado tra nsneuro nal; uti liza
conectadas mediante sinapsis el vir us de la seudo rrabia (para el ma rcado
ret rgrado) o el virus del herpes simple
(para el marcado antergra do)

Ident ifi car la locali zacin de la lesin Tom ograf a axial computa rizada (TAC) Muestra lmi nas.. del cerebro ; ut il iza
en el cerebro hum ano in vivo rayos X

Resonan cia magntica Muest ra lminas" del cerebro ; imagen

ms detall ada qu e la de TAC; uti liza un
campo magnt ico y ondas de radio

Identifica r la localizacin de haces de Imgenes tensoria les de difusin (ITD) Muestra haces de axones mielnicos; se
fibras en el cerebro humano in vivo basa en la RM

Revelar detall es de las clu las en fin as Microscopia confocal con lser Puede uti lizar se para ver lm inas" de
secciones de t ejido t ejid o en el cerebro in vivo; requiere que
exista n mol cul as flu orescent es en el
t ejido

e n animales no an es tesiados, se ele gir n elec trodos q ue
d uren ms. Para e llo, se puede co n se g u ir un juego d e
ca b les muy finos , unidos e n un manojo, q ue estn el c-
trica m e n te a islados, d e modo que solo sus puntas que-
dan sin recubrir.
Los electrodos se im pl a ntan en e l e ncfalo de los ani-
mal es m edian te ciruga este re o tx ica . Lu e go se co nec-
ta n a un os zcalos d e co n exi n e lctrica e n minia tura y
estos se fijan al cr neo d e l animal co n una pasta que e n
un p ri n ci pi o se id e para uso d e los d entistas (ceme nto
den ta l) . Desp u s, cu a n d o el animal se ha recuperado d e
la ciruga, ya se le p u ed e co n ec ta r al sistema d e regis-
tro . Los a n imales de laboratorio n o prestan at en cin a
lo s zcalos d e conexi n e lctrica q ue tie n e n so b r e la
ca beza y se co m portan co n basta nte normalidad (vase
la Figura 2.22) .
50 Cap ru lo 2 Mtodos y procedi mientos de investigocin
En este esq uema se repr esent a un gr upo de elect rodos uni-
dos permanentemente al crneo m edi ant e un a base de ce-
mento.
Zcalo de conexin
Cemento dental
Electrodos
Crneo
En much as ocasio n es, los investigadores fijan dispo-
sitivos bastante complejos al cr neo del animal cuando
implantan mi crocl cctrodos. Estos dispositivos incluyen
m ecanism o s d e tornill o s que p e rmiten al experimen-
tad or d espla zar e l e lec tr od o - o el co n ju n to de elec-
trod o s- al interior d el e n c fa lo, d e forma que pueda
re gistrar d iferentes partes d e este mientras realiza sus
o bse rvaciones .
Las se a le s e l c tr icas qu e dete c tan los microelec-
trodo s so n b ast ante d b ile s y tienen que amplificarse .
Lo s a m p lificado re s utilizados co n tal fin fun ciona n de
la m ism a mane ra que los d e un eq u ip o estreo, co nvir-
tie n d o las d bil es se a les regi stradas e n e l en cfalo e n
o tras m s fu ertes, que pueden verse e n un osciloscopio y
alm ace narse e n la m emoria de un ord en ador p ara a na-
lizarl as m s tarde .
C u les so n los resultados d e este registro d e n euro-
n as seroto n inrgicas y ad re n rgicas? Como se estudiar
e n e l Ca ptu lo 4, si se registra la actividad de neuronas
seroto ni u rgicas y noradren rgi cas durante diferen tes
fases d el sue o se e nc o nt ra r que la frecuen cia de d es-
ca rga ele estas n euron as d ecae casi h asta cero dura nte e l
sue io RE.M . Esta o bservaci n sugiere que tales n euro-
nas tien en un efe cto inhibidor sob re dicho tipo de sueo.
Es d ecir, e l sue o REM no puede ocurrir h asta que esas
n eu ron as d ejan d e d escargar.
Regi stro con macroe lectrodos
A veces se q u iere registrar la actividad d e una reglOn
glo ba l d el e nc falo , n o la ac tivid ad d e las neuronas in d i-
vid uales que se locali zan e n ella . Para hacerlo se uti liza n
macroe lectrodos. Los macroelectrodos n o d etectan la
ac tividad de n euro n as individu al es, antes bi en , los regis-
tros que se obtien en mediante tal es dispositivos repre-
sentan lo s pote ncial es po stsin p ti cos d e much o s mi les
- o mi llones- de c lula s d el rea e n qu e se sit a el
electrodo . Estos e lec t rodos pu eden co ns ist ir e n al a m -
b res no afilados in se rtad os e n el e ncfa lo , tornill os fija-
dos sobre el crneo o incluso dis cos d e m etal p egados
sobre e l c uero cabelludo d e suj e tos humanos co n una
pasta especial qu e co n duce la e le c tr icidad . Los regis-
tros , e n particu lar los tom ado s d el cue ro ca be ll udo ,
represe n ta n la actividad d e una g ra n ca ntid ad d e n eu-
ro rias , cuyas se ales el ctricas a travie sa n las m enin ges ,
el crn eo y el c uero ca be llud o a ntes d e alc anza r los e lec-
trodos,
En algunas ocasi ones , los n e u ro ciruj anos implantan
macroelectrodos direc tam ente e n e l interior d el e nc-
falo h u m a n o para d ete ctar el origen d e una activid ad
elctrica anmala que origina frec ue n tes co nvu lsio nes .
U na vez detectada la fu ente , e l ciruja n o pu ed e a b ri r
el crneo y e xtrae r e l fo co d e las co nv u lsio nes, que e n
la mayora de las o casiones es tej ido cicatr icia l produ-
cido por un da o cerebral ocurrido afio s a n te s. H abi-
tua lmente, la actividad el c tri ca del e n c falo humano se
registra media nte e lectr o d os pe gados al cue ro ca bellud o
y se m u estra en u n l)olgr(~ro .
Un polgrafo contiene un m e canismo que h ace a van-
zar u n a larga tira d e p apel so b re la que escribe n una
serie d e p lumillas . Estas bsi cam ente son m ane cillas d e
grandes voltmetros, que se mu even h acia arriba y abajo
e n res puesta a la sea] el ctrica que les e nva n lo s a m p li-
ficadores biolgico s. (Po r lo gen eral, la in forma cin se
almacena e n u n ordenador y se p res e n ta e n una panta-
lla e n vez de imprimirse e n p apel ). En la Figura 2.23 se
representa un regis tro de la ac tividad elctrica obtenido
m ediante macroel e ctrodos sit uados e n varios lu gares
d e l c uero cabelludo d e un suje to (vase la Figura 2.23) .
Dich o s registros se llaman electroencefalogramas (EEG),
o escritos d e la el ectri cidad d e la cabe za ". Pu eden uti-
liza rse para e l d iagn sti co d e la e p ile p sia o para estu-
diar las fases de su eo y vigilia, las cuale s se asoc ia n con
p a tro n es de ac tivid ad e lc trica caracterstico s.
Otra ap licacin d el EEG es su pe rvisa r el esta d o del
encfalo d urante in tervenciones qu e, e n principio , p u e-
d en daarlo. El auto r presen ci una d e estas in terven-
cio nes h ace varios aos.
macroelec trodo Electrodo utilizado pa ra registrar la act ivida d
elctrica de una gran cantida d de neu ron as en un a regin espec -
fica del encfalo. Su tamao es much o m ayo r que el de un m icro-
e1ecrrodo .
electroencefalograma (EEG ) Registro del pot enci al elctri co cere-
br al obtenido med iante electrodos siruad os sobre el cuero cabe-
lludo .

La Sra. F. sufri un leve ataque ca rdacoy las prueba s posterio-
res ind icaron que padeca una considerable arteriosclerosis,
genera lmente denominada "endurecimiento de las arterias.
Muchas de sus arterias se haban estrechado debido a placas
arteriosclerticas ricas en colesterol. Un trombo, formado en
una parte especialmente estrecha de una de susarterias coro-
narias, fue lo que provoc el ataque.
Meses despu s de su ataque al corazn, la Sra. F. tuvo varios
ataques isqumicos transitorios, breves episodios de sntomas
neurolgicosque al parecer se deben a trombosque se forman
y luego se disuelven en los vasos san guneos cerebrales. En
su caso, le provocaron entumecimiento en el brazo derecho y
dificultades para hablar. Su mdico la remiti a un neurlogo,
quien le recomend hacerse un angiograma. Este revel que
su arteria cartida izquierda estaba casi totalmente obstruida.
El neurlogo aconsej a la Sra . F. que consultara al neuroci-
rujano, y este la urgi a someterse a una intervencin quirr-
gica en la que se extraera la placa que estaba obstruyendo
parte de su arteria ca rtida izquierda, con lo que aumentara
el aporte sa nguneo al iado izquierdo del encfalo.
El procedimiento se denomina endoarteriectoma cartida.
Yo estaba conversando con el neurocirujano de la Sra. F. des-
pus de una conferencia y casualmente coment que iba a
rea lizar la operacin ms tarde esa maana. Le pregunt si
poda asistir y dio su consentimiento. Cuando entr en la sa la
de operaciones, con vestimentas esterilizadas, encontr a la
Sra . F. ya anestesiada y la enfermera haba preparado el lado
izquierdo de su cuello para la incisin. Adems, se le haban
coloca do varios electrodosde EEG en el cuero cab elludo y vi al
Dr. L., un neurlogo es pecializado en Neurofisiologa clnica ,
se ntado ante su equipo de EEG.
Fund a m ent os de fi siologa d e la conducta 51
El cirujano hizo una incisin en el cuello de la Sra. F. y dej
al descubi erto su cartida interna en el punto donde la car-
tida comn, que procede del corazn, sedivide en la cartida
interna y la externa. Coloc una cinta de plstico alrededor de
la arteria cartida comn, pinzndola y deteniendo el fluj o
de sa ngre. "Qu aspecto ti ene, Ken? le pregunt al Dr. L.
No muy bueno: veo cierta lentitud . Deberas hacer una deri-
vacin.
El cirujano quit rpidamente la banda compreso ra y le
pidi a la enfermera una sonda de derivacin, un corto tubo
de plstico un poco ms fino que la arteria. Hizo dos peque-
as incisiones en la arteria bastante por encima y por debajo
de la regin en donde estaba la placa, e insert la sonda.
Ahora ya poda trabajar en la arteria sin detener el fluj o de
sa ngre al cerebro. Hizo un corte longitudinal en la arteria, que
dej ver una masa amarillenta que seccion y extirp. Cerr
la incisin, extrajo la sonda y sutur los pequeos cortes que
haba hecho para colocarla. Va todo bien?, pregunt al Dr.
L. "S, su EEG est bien.
La mayora de los neurociruj anos prefieren hacer una
endoarteriectoma pinzando temporalmente la arteria ocluida
mientras trabajan en ella. El trabajo es ms rpido y las com-
plicacionesson menos probables. Dado que hay una conexin
del aporte sanguneo a ca da uno de los hemisferios del enc-
falo (mediante arterias comunicantes especiales), a menudo es
posible se llar una de las arterias carti das durante unos minu-
tos sin provocar ningn dao. Sin embargo, a veces el flujo
sanguneo de un lado del encfalo al otro no es suficiente
para mantener uno de los lados abastecido de sa ngre y ox-
geno. El nico modo que ti ene el cirujano de sa berlo es poder
disponer en cada momento del EEG del paciente. Si el cerebro
no est recibiendo el aporte sanguneo necesario, en el EEG se
vern lasca ractersticas "ondas lentas. Esto es lo que sucedi
al pinzar la arteria de la Sra. F. y es por lo que el cirujano tuvo
que usar una sonda de derivacin. Sin ello, la int ervencin
podra haber cau sado una apopleja en lugar de prevenirla.
Por cierto, la Sra. F. se recuper bien de la intervencin
quirr gica .
Magnetoencefa log ra fa
Co m o sin duda el lect or ya sabe, cuan do una corriente
e lctric a flu ye a trav s d e un conductor, induce un
cam p o m agn tico. Esto significa que cuan do los poten-
ciale s d e ac cin se trans mi te n a lo largo de los axones o
los p ot en cial es po stsin p ticos se tra nsm iten por las den-
dri ta s o se propaga n d e un lado a ot ro de la membrana
somti ca d e un a n e uron a, tambi n se prod u ce n campos
m agn ti cos. Esto s ca m pos son su mamen te pequeos,
p e ro los ingeni ero s h an elaborado detectores supercon-
ductores (lla m ados SQU ID, o dispositivos supercondu c-
tores d e interfe rencias cu nt icas) cap aces de detectar
ca m pos magnti co s que so n de aproximadamente u na
52 \All HUJU 2 Mtodos y proced imientos deinvestigocin
mi lm illo nsima p a rte del tama o d el ca m p o m agn-
tico de la tie rra. La magnetoencefalografa se re ali za
m edi an te neuromagnetometros, in strum en to s que co n tie-
ne n var ios SQU ID di sp u esto s d e m anera que u n o rde-
nado r p u eda e xa m in a r su e m isi n y ca lc u la r e l o rige n
de se a les d eterm inadas e n e l e ncfa lo . El n euromag-
n e t m etro q ue se muest ra e n la Figura 2.2 4 co n tie ne
275 SQU ID . Este eq u ipo pue d e utilizarse e n la prcti ca
cln ica , por e jem p lo, para localizar el foco d e c risis e p i-
lpticas y as pode r e x tirp a rl as q u ir rgica me n te . Tam-
bi n pued e usa rse e n ex pe ri me ntos para cua n tificar la
act ividad cereb ra l regio nal asociada a la p ercepcin d e
d iversos estm u los o a la ejecuc i n d e vari as cond uc tas o
tareas cog n itivas (vase la Figura 2.24 ).
Registro de la actividad metablica
y sinptica del cerebro
Las se a les e l ctricas n o so n lo s n icos signos d e acti-
vidad n eural. Si la ac tividad n e ural de una regi n co n-
c r e ta d e l e ncfa lo a u m e nta , e l n dice m etab li co
ta mbi n lo h ace , e n gra n m e d id a co mo co nsec ue nc ia
d e l m ayo r fu nc io na mien to d e las b ombas ini cas d e la
membra na d e las clu las. Es te a ume n to del ndice me ta-
b lico p uede e stim a rse . Para e llo, el in vesti gad or in yect a
2-desoxiglucosa (2-DG) radi oactiva e n el torrente cir cu-
la to ri o de l ani mal. Dacio que esta su stancia es simi la r a
la glucosa (la princi pal fue nte d e e ne rga d el e ncfa lo),
es tr a nspo rta da al in te rio r d e las c lulas . As, las c lulas
El neurom agn et m etro se mu estra a la izqui erd a de la pan -
talla . En la parte derecha de esta pued en ver se las regiones
con eleva da act ividad elctr ica, su perpuestas a una imagen
del encfa lo obt enid a con RM.
(Co rte sa d e cn Systc rns ln c.)
m s ac tiva s, q u e so n las que consume n ms glucosa, lle-
ga n a se r las que alcanzan la mayor con ce ntracin d e
2-DG radi oacti va. Pero, a d ife re n cia de la glucosa nor-
mal , la 2-DG n o p ued e ser m etabolizada, d e modo q ue
queda d entro de la c lu la. Lu ego , el investigador sacri-
fica al a n imal, extrae su enc falo , lo seccio na y lo pre-
p ara p a ra la autorradi ograjia .
El t rmi n o auto rr adiografa p od ra traducirse co m o
escrib ir co n la propia rad iaci n . Sob re un portaob jetos
se m onta una secci n del encfal o y se lleva e n to nces a
una habitacin oscura, do nde se cu bre con una e m u lsi n
fo togrfica (la sus tancia que tienen las p elculas ftogr-
ficas) . Vari as semanas d espus , la seccin, co n su capa d e
e m ulsin, se revela e xa c ta me n te igual que un a pelcul a
fotogrfica. Las m ol cu las d e 2-DG radioactiva se pon en
d e m anifi esto co mo puntos de gr nulos p lateados en
la e m u lsi n revelad a , ya que la radioac tividad reve la la
e m ulsi n, tal co mo lo h a ran los rayos X o la lu z.
La s zonas m s activas del e n c fa lo co ntien e n el
m ayo r grado d e rad ioactivid ad , y esta se m an ifiesta e n
la e m u lsi n rev elad a co mo punto s os curos. En la Figura
2.25 se muestra una a u to rrad iografa d e una secci n d el
e n cfalo d e rat a. Lo s puntos os curos e n la parte inferior
(sealados co n la flecha) son ncleos del hipotlamo
que tie ne n un ndice metab lico es pe cialm e n te elevado.
En e l Captulo 4 se d escriben
d ichos ncle os y sus fun cio-
n es (vase la Figura 2.25) . En
Animacin 2.2 MyPs)'chK it 2.2, Au to r r ad iogra-
Autorrodiogrolo fa, pued e verse este procedi-
mi ento .
Otro m todo p ara identificar las region es ac tivas del
e ncfalo se b en efi cia del h ec h o d e que cua nd o las n eu-
ro nas son estim u ladas (p o r ej emplo, por los boto nes ter-
minal es que esta b lecen sinapsis co n e llas) determinados
ge nes d el ncleo, a los q ue se llama genes de expresi/m teni-
pra n a, so n ac tivados y se prod ucen protenas esp ecficas .
Estas protenas se une n enton ces a los cromosomas del
n cleo y la p resen cia de estas p rotenas n uclea res in d ica
que la s n euron as acaba n d e ser ac tivad as.
U na d e estas pro te n as nucl ea res prod ucida d urante
la activacin n e u ral recibe el n ombre d e Fos. Como se
mng n ero ence fa log rafa Procedimi ento qu e detecta gru pos de
neu ron as activadas sincr nicamente grac ias al cam po ma gntico
ind ucido por su actividad el ctrica, Utili za un conjunt o de elemen -
tos superco nd ucto res de int erferencia cunt ica o SQU ID .
2-dcsoxiglueosa (2- D G) Azcar qu e penetra en las clulas junto
co n la glucosa per o qu e no se metabol iza.
autor radiografa Procedimient o que localiza sustancias radioactivas
en un a seccin de tejido. La radiacin pon e de manifiesto una emu l-
sin fotogrfica o un fragmento de pelcula qu e recubr e el tejido .
Fos Pro tena que se produce en el n cleo de un a neuron a en res-
puesta a la est irn u lac i n sinptica.

Esta seccin frontal del encfalo de una rata (la zona dor sal
se sita arriba ) muestra regiones con una actividad marca-
damente elevada en el par de ncleos hipotal m icos, e n la
base del encfalo.
(De Schwa rtz, W. J. y Gaine r, H. Science, 1977, 197, 1089-1 091. Re-
produci do con a uto rizacin.)
recordar, a ntes se estaba explicando una sup uesta inves-
tiga ci n acerca de los circ u itos neu ra les implicad os en la
co nd ucta sexual de la rata h e m b ra . Supongamos q ue se
qui ere utiliza r el m to d o Fos en ese p ro yecto de investi-
gaci n para ver qu n eu ro n as se ac tiva n d ura nte la ac ti-
vid ad sexua l d e u na rata h embra. Pa ra ello, se in stal an
ratas he m bra con m ach o s y se les p e rmite a pa rearse ;
luego se ex trae el e ncfalo d e las ra tas, se seccio na y se
sig ue un procedimiento para te ir la p roten a Fo s. En
la Figura 2.26 se p resen tan los resultados: e n las n e uro-
nas de la am gdala m edial d e una rata h embra que acaba
d e aparearse p u eden observarse pun tos osc u ros, lo que
indi ca la p re se n ci a d e pro tena Fo s. As, parece ser
que estas n euronas se h a n activado de b ido a la cpu la
-quiz por la es timulacin fsica d e los ge ni ta les que
h an tenido las ratas-o Como se recorda r, cuando se
in yect un m a rcad o r retrgrado (o ro flu o rad o ) en e l
I-IVivl, se encontr que esta reg i n re cibe aferencias de
la am gd ala m ed ial (vase la Figura 2.26).
La activid ad metablica de regio n es ce reb rales es pe-
cficas pu ede asi m ismo est imarse en el ce re b ro hu mano
utilizando neuroimagen funcional - un mtodo com-
putarizado para detectar cam b ios q u mi cos o m e tab li-
cos e n e l ce re b ro-o El p rim er m to do de neuroimage n
fun cional que se invent fu e la tomografa por emisin
d e positrones (TEP ). En primer lu ga r, al pacien te se le
in yecta 2-DG radi o acti va . (Con el tie m po , la susta nc ia
se degrada y sal e d e las clu las. La d osi s que se ad m i-
ni stra a los p acientes hum an o s es in o cu a ) . Se co loca la
ca b e za d el suje to e n un a pa ra to sim ila r al d e un TAC ,
Fu n d a men tos de f isiologa d e la con d ucta 53
La microfotografa present a una seccin frontal del e ncfa-
lo de una rata hembra, siguiendo un plano tran sversal de la
am gdala med ial. Los punt os oscuros indican la presencia
de protena Fos, localizada mediant e inmunocitoqumica .
La sntes is de protena Fos se estimul permitiend o a l ani-
mal tener una condu cta de aparea miento.
(Co rtesa de Marc Tet el, Wellesley Co llege.)
,. -,
': ,.. ... ,~~:
.. ' -
" -.,
, .
y al desco m pone rse las molculas radioactivas d e 2-DG ,
e mite n panc u las subat rnicas , llamadas posi tron es ,
qu e so n d ete ct adas Po - e l eq u ip o de T EP. El o rde na-
d o r dete rm ina cules son las regiones del en cfalo qu e
h an a bso rb ido la sustancia radioa ctiva y crea una ima-
ge n d e una seccin d el e ncfalo, mostra n do e l nivel d e
actividad d e div ersas regio nes d e d ich a seccin (vas e la
Figura 2.27) .
U n o d e los in conveni entes d e la TE P es su co ste d e
fu nc io na m ie n to , ya que, por motivos de seguridad , las
sustanc ias rad io acti vas que se adm inistra n tien en una
vida m edi a muy corta, es d ecir, se desco mpon en y pier-
den su rad io activid ad muy rpidamente. Po r ejem p lo , la
vida me dia d e la 2-DG ra dioactiva es de 110 minutos ; la
del agua ra d ioactiva (que tambin se uti liza para obten e r
imgenes de TEP) es de so lo dos minutos. Teniendo en
cu e nt a q u e estas sustancias se descomponen tan d eprisa ,
tie ne n que p ro ducirse e n el lu gar donde se van a utilizar.
media n te un acelerador de partculas atmicas d enomi-
nado ciclotrn . Po r lo tanto, al coste de la TEP h ay que
aadi rle el d el ciclotr n }' los salarios del personal que
se e n ca rga d e l.
neuroimagen funcional Mtodo co mputarizado par a det ect ar
cam bios qu m icos o metab licos en regione s co ncre tas del cerebro .
tomografa por emisin de po sitrones (TE P) Mrodo d e neuro-
image n funcion al qu e revela la localizaci n de u n marcado r radio -
activo en un enc falo vivo.
54 Captu lo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigocin
En la fil a superior d e est as im genes de TEP, seccin hori-
zontal, de encfalos humanos pueden verse tres imgenes
de un a persona en estado de reposo. En la fila inferior se
mu estran tres im gen es de la m isma persona mien tra s abr a
y cerraba el puo derecho. En ellas se ob serva una elevada
absorci n de 2-desoxiglucosa radi oactiva en las region es del
cerebro encargadas del control del movimiento, lo que in-
di ca un alto grado de activid ad metablica en di chas reas.
Los diferent es colo res qu e genera el ordenador indican dife-
rent es nd ices de absorcin de 2-DG, confo rm e representa la
escala en la parte inferi or.
(Cortesa de l Brookhave n Nation al l ab orat ory y la Sta te University
de Nueva York, Stony Broo k.)
Otro inconvenien te d e la TE P es la rel ativam ente
baja resoluci n espacia l de las im gen es (la im agen es
borrosa). La resoluci n tem p o ral es as im ismo re la tiva-
me nte baja porq ue h a n d e obte nerse mu estra s d e los
positro nes que va emitie n do e l ce reb ro du r an te b as-
ta nte tie m po, lo que impli ca que p ro bablem ente pasen
desapercibidos aco ntecimie ntos rpid os, efmeros, q ue
suceden e n e l cerebro. Esta s d esventajas no se d an e n la
RM fu ncio nal, que se d escribe a co ntin uaci n . N o o bs-
tante, la exploraci n co n TEP ofrece algo que la ex p lo-
ra cin con RM func io nal n o pued e h a ce r : es tima la
co n ce n trac i n de dete rm inadas su stan cias qumicas e n
d iversas partes d el e ncfa lo. Este proced imi ento se d es-
cribir ms adela nte e n es te captu lo .
El m to do d e n e u r o im ag en co n m ej o r re solu-
cin tempora l y espac ia l se co noce co mo resonancia
magntica funcional (RM f) . Los ingenieros h an llevado a
ca bo mod ificaciones de la RM existente y su software que
p ermiten a los e q u ipos obte ner imgenes q u e indica n el
grado d e m e tabo lism o regio nal. La acti vidad cereb ra l se
evala indirect ame n te al d e tec ta r los n ivel es de oxgeno
e n los vasos sanguneos del e ncfa lo. El aumento d e ac ti-
vid ad de una regin del e ncfalo es timula el aporte sa n-
guneo a di ch a regi n , lo que eleva el n ivel d e oxigeno en
sang re local. El t rm in o tcnico para referirse a este tipo
d e ex ploraci n es BOW1 : sefial depe ndie n te de l nive l de
oxgeno e n sa ngre. La RMf tie n e una resoluci n mayor
q ue la T EP y la exploraci n se puede realizar mucho
m s r pidame n te. As p ues, proporciona u n a in form a-
cin m s detalla da acerca d e la actividad e n un a regin
de te rmi n ada del cerebro. En los ca p tulos sig uie ntes de
este libro se expondr n much os es tud ios d e n eu ro im a-
ge n q ue em plean RMf (vase la Figura 2.28 ) .
Estimulacin de la actividad neural
Hasta aq u, esta secci n se h a dedicado a los m to d os de
in vestigaci n que eva la n la actividad de region es espe-
cficas del encfalo . Pero a vec es se q uiere cambia r arti-
ficial m en te la ac tividad de d ich as regio nes para o bservar
qu e fectos tien en es tos ca mbios e n la co nd ucta d e l
1 Blo od oX)'gell leoel-dependent,
Estas im genes de RMf del encfalo humano mu estran un
aume nt o localizado del prom edi o de la activ idad neural en
varon es (izquierda) y mu j eres (derec ha) mi entras d iscernan
si un par de palabras escritas rim aba.
(De Shaywitz, B, A. Ycols.: Nature, 1995 , 373 , 607-6 09. Re produ ci-
do con au to rizacin.)
resonancia magnti ca fu nc io nal (RMf) Mtodo de neuroim agen
fu ncional. Es u na m od ificacin del pro cedim iento de RM q ue per-
mit e calcula r el meta bol ismo region al en el enc falo , por lo gene ral
detectando cam bios en el nivel d e oxgeno en sang re.

a n im al. Por ejemplo, las ratas h e m b ra copula rn con
ra ta s macho solo si ci ertas hormo nas sexuales femen i-
nas est n p re se ntes , p ero si se ex tirp a n los ovarios d e
la rata, la p rdida d e esas hormonas sup rimi r su co n-
duc ta sexual. En anteri o res estud ios , el auto r hall que
las lesio nes d el HVM alte ra n esta co n d uc ta . Ta l vez si
se activ a e l HVM se co m pe ns a r la fa lta d e hormonas
sexuales femeninas y la rata vo lver a co p u lar.
Estim ulacin elctrica y qumica
Cmo se p ueden ac tivar las n euronas? Se puede h acer
med ia n te estim u lac i n elctrica o q umica. La estim u la-
cin e lc trica imp lica sim p le men te p asar un a corriente
elctrica a tr avs d e un ca ble in sertado e n e l e ncfalo,
co m o se vio en la Figura 2.22; y la e stim ulaci n qumi ca
se e fec ta por lo gene ra l in yec ta n d o en el e nc falo una
peq ue a ca n tid ad d e un aminocido excitador, co m o el
cid o can ico o el c ido glu tm ico. El cido glu tm ico tador en u na de termin ad a regi n d el cerebro ex cita las
(g lutamato) es e l prin cipal n eurotra n smi sor exc itad o r
que se e nc ue nt ra en el en c falo , y am b as sus ta nc ias esti-
mulan los re ceptores glu ta m a t rgicos, activando as las
n euron as e n las que se local izan es tos receptores .
La inyeccin d e su stancias e n el e nc falo puede h ace rse
mediante un d ispositivo permanentemente unido al cr-
neo, de modo que la co n d uc ta d e l ani mal pueda o bse r-
varse e n re pe tidas ocasiones. Se col oca tina c n u la d e
m etal (la c n ula gua) en el e nc falo d el an im al y se ~ja
con ce mento su extremo supe rio r al cr n eo . Das desp us ,
Sefija perm an entem ent e al crneo una cnula gua y posteri orm ent e pu ede insert arse a su t ravs en el encfalo una cnu la ms
est recha. Mediante este disposit ivo pueden infu nd ir se sustancias en el encfalo .
Gua de la cnu la
(a)
Fu ndam ento s de fisiologa de la conducta 55
se co loca una cnula ms fin a d e una lo ngitud ad ecu ad a
dentro d e la cn u la gu a y lu ego se inyec ta una sustancia
e n el encfalo . Corno e l ani mal tie ne lib e rtad de movi-
m ien to s, se puede n obse rvar
los efectos d e la inyeccin en su
co n d ucta (vase la Figura 2.29) .
Animacin 2.3
En M)'Ps)'chKit 2.3 , Implantacin
Implantacin de uno cnulo de una cnula , pued e verse este
p rocedim iento.
El princi pal in conveni en te de la estim u laci n qu-
mi ca es que resu lta algo m s compleja q ue la elctrica:
se requiere n cn ulas, tubos, bo m b as o jeri ngas especia-
les y so luc io n es es te r iliza das d e am inocidos excitadores.
No o bsta n te , tien e una clara ventaja sobre la elctrica:
activ a lo s somas ce lu la res, pe ro no los axo nes . Puesto
qu e so lo lo s som as ce lu la res (y por supuesto sus den-
dritas) contien en rece p to res glu ta ma t rg icos , se puede
esta" seguro d e que la in yeccin d e u n amino cid o e xci-
c lu las all lo calizad as, pe ro n o los axo nes de otras n e u-
ronas que casualme nte p asan p o r la regi n . As pues, lo s
efec tos de la es timulaci n qu mi ca so n ms circ unsc ritos
qu e los d e la e stim u lac i n elctr ica .
Como se habr n o tad o , se acaba d e dec ir q ue e l
c id o can ico, d esc rito a ntes co mo un a n e u rot o xi n a ,
p uede ut ilizarse para es tim u la r a las neuronas. Estas dos
ap licacio n es e n re alid ad n o so n co nt ra d ictorias. El cid o
can ico prod uc e le sio n e s excitotxicas al es timular las
neuronas h asta d estruirlas. Mi en tras que las d o sis altas
~ Sustancia
qu mica
Tubo de
plstico
(b)
 @

Capnulo 2 Mtodos y proredlmientcs deinvestigoci n

de una solucin co n ce n trad a destruyen las n euronas, las

d osis b ajas d e una so lu cin diluida sol o las es tim u la .
Y resp ect o a lo s resultad os del ex perime n to q u e se
estaba e x p o n ie n d o ? De h ech o (c o mo se ver e n el Cap-
tul o :, la es ti m u lac i n d e l II VM sus tituye la ac ci n de
la s h orm onas se xu ales femenin as . Por lo tanto, q uiz
las h orm onas se xu ales femeninas ejerzan sus efectos e n
di ch o ncleo. En la secci n fi nal d e es te captulo se ver
c m o co m p ro bar esta hiptesis.
Cua n do se in ye ct an su sta ncias e n el e ncfa lo a tra-
vs d e c n u las, las susta ncias se difund e n por una regin
que incluye mu chos tipos diferen tes d e n e uronas: n e u-
ronas exc itado ras, n euronas inhibidoras, int e r n e u ro-
nas que form an p arte d e circ u itos lo cal e s, n euron as
d e p ro yeccin que se co m u n ica n con d iferentes regio-
nes d el e ncfalo y n eunm as que liberan o respo nd e n
a un a a m plia ga ma d e n eurotran smisores y neuro mo-
dul ad ores. La es tim u lacin de una regin esp ecifica del
ce re b ro con elec t ric id ad o co n una su stan cia qumica
e xc ita do ra afecta a todas estas n euronas y no es proba-
bl e qu e el re sultado se a sim ila r a la actividad ce re b ra l
normal , que implica la activa cin y la inhibi ci n coordi-
nada de muchas neuronas diferentes. Lo id eal seda que
p u d i ram os estim u la r o inhibir los g r u pos n euronales
q ue n os in teresa n e n una regin dada d el ce re b ro .
Pued en inse rta rse prot en as fotosensib les en me mbranas
neural es m ediante virus con m od ificacin gentica . (a) La luz
azu l pr ovoca que los cana les in icos ChR2 despol aricen la
m embran a y la lu z ama rill a qu e los tra nspo rta dores NpHR la
hip erpol aricen. (b) El grfico mu estra los efectos de d if er en -
tes lo ngit udes de onda de lu z sobre el pote ncia l de m em bra-
na al act ua r sob re las pro tenas ChR2 o Np HR. (c) Los pu lsos
de lu z azu l (f lechas azules) prod ujero n pot enciales de ac-
ci n; los de luz am arill a, los efectos inh ibi do res d e la hip er-
pol ar izaci n .
(Parte (a) modificada de Hausser, M. y Srnith , S.L. Nature, 200 7. 446.
617-619; Ypartes(b) y (e) modificadas de Zhang, E; wa ng, L. P.; Braun er,
M.; ti ewa ld, J, E; Kav, K.; watzk e, N.; w ood , P. G.; Bamberg, E.; Nagel,
G.; Gottsehalk, A.. y n elsserot h. K. Natu re, 2007 . 446 , 633-639, )
Exte rio r de la clu la
ChR2 NpHR
Luz azul O- ea2 Luz amarilla
00- Na

Fotoestimulacin
Los recient es ava nces cie n tfic os estn proporcionando @\
los m edio s para est im ula r o in h ib ir tip os especficos d e o Transportador
de iones
neuro nas e n regio nes es pecfica s d el e ncfalo (Bo yde n y
(a)
co ls., 20 0!'l; Zh ang y co ls., 2007) . En much os o rga n ism os
- in cl uso e n organismos unicel ulares ta les como las algas Despolarizacin Hiperpolarizacin
y las bact eri as- ha n evo lu cionado protenas fotose ns i- 1,0
bl es. Los in vestigadores h an d escubi erto que un a d e estas
pro tenas, la Rodopsina-ca nal-Z (ChR2), que se e n cue ntra 0 ,8
c:
'O
en las alga s verdes, co n tro la un ca nal inico que, cuando '
ro 0,6
se a bre , permite e l fluj o a travs de e lla de ion es de sodio, >
."B - NpHR

..
p otasi o y calcio. C ua ndo una luz azul in cid e en un ca nal <t 0 ,4
i ni co d e ChR2 , el ca nal se abre y la co rrien te d e iones de
sod io y calcio ca rga dos p ositivamente d espolariza la mem- 0 .2
b ra na. U n a segunda prot ena fotosensible , cu yo nomb re
lat ino es N atronomonas pharaonis hal orhodopsin (N PIIR ), O
se e nc ue n tra e n una bacteria y co ntrola un transporta- 32 5 425 525 625 725
d or que in gresa cloruro d entro de la c lu la cua n d o es (b) Longitud de onda (nm)
activada por una luz az u l. Esta en trad a d e iones ca rgad os
n egativame n te hiperpolariza la m embrana. La acci n de Potenciales de accin
a m bas prote nas fo tose ns ibles co mie nz a y termina m uy /\
r pid amente c ua nd o se e n cien de y apaga una lu z de lo n-
Se aplica una
gitud d e o n da a p ro p iad a (Va se la Figura 2.30) . luz amarilla
Se pu ed e introdu cir Ch R2 y NpH R e n neuro nas
in co rporando los ge nes que las co d ifica n al ge n o ma de
vir us inoc uos. Lu ego se inyect an los virus e n el cerebro,
d ond e in fectan a las n euronas y co m ie n za n a e xp resa rse t t t t t t t t t t
las prot enas. q ue estn insertadas e n la m em b rana d e la (e) Tiempo - - - - - - -_
 Fundamentos de fi siologa de la co n du cta 57

clula. Lo s ge nes se pued en m od ificar d e m an era que las n euron as induc ie ndo corrie ntes e lctricas en e l tejido
protenas se ex presen so lo e n tip os es pecficos d e n eu- ce re b ra l, En la estimulacin magntica transcraneal
ronas . De es te m odo, los inves tigad o res pueden o bse r- (EMT) se utiliza un a b obin a electro magn tica, que p or
var lo s efe ct os d e activ ar o d es activar tipos es p ecficos d e lo gen eral tien e la form a d el nm ero 8 , p ara estim u la r
neuro nas e n una regi n conc re ta del e ncfalo . n euronas de la corte za cereb ra l hum ana. La bobi na de
Por sup uesto , d ado q ue la C h R2 y la !\'pHR so n acti- es tim u lac i n se coloca so bre la parte su perior del cr-
vadas p o r la lu z. los in ve stigadores n e cesitan h a ce r p en e- n e o d e m odo que e l p u nto de c ruce en med io del 8 se
trar lu z e n e l cerebro . Si las neu ro nas que expresa n es tas lo cal ice just o e nc ima d e la re gin que se q u ie re estim u-
protenas fotose ns ib les se lo cal izan e n la co rteza ce re - lar, y lo s pulso s d e actividad e lctrica e nvan cam p os
bral, se puede tal adrar un peq ueo o rificio e n e l c r neo magn ticos que activan las n euro n as corticales . En la
y ad he rir so b re l d iodo s e m iso res d e luz (D EL) . Para Figura 2. 31 se muestra la b obina elec tro magn tica q u e
act iva r las pro te nas fot ose n sibl es e n las m embranas d e se utiliza para la es tim u lac i n m agn tica tr an scran e al y
neu ro nas sit uadas e n la p rofund id ad del e ncfa lo, se c mo se sit a so b re la cabeza d e la p erson a (vase la
pueden im p la n ta r lib ra s p ticas m edian te ci r uga es te - Figura 2.31 ).
reotxica, como si fue ran electrodos o cnulas, y la luz Los efectos d e la EMT son muy parecidos a los d e
se puede tra ns m it ir median te d ic has li bras . la es ti m ulac i n di re cta d el encfalo a l descubi erto. Por
La p uesta a p un to d e es tos pro cedimientos h a d es-
p ertado gra n inters e n tre los n euro ci entfic os ya que
ofrece n una va d e estudio d e las fun cion es d e circ u i-
tos ne u ra les especficos e n e l e nc fa lo . Al gun os inv es-
Pulsos elctricos aplicados med iante la bobina producen un
tigado res es t n est ud ia n do el posibl e uso cl n ico d e las
campo magntico que estimula la regin de la cort eza ce-
protenas fo tosensibles. Por e je m plo, Bi y cola borado res rebral situada bajo el punto marcado con una X en medi o
(2006 ) u tilizaro n u n virus p a ra in sertar ge nes de Ch R2 de la fi gura.
en las c lu las ga nglio na res d e la retina d e una ce pa d e
ratones ciegos cu ya ret ina ca reca d e fo to r rece p to re s. (Fotografa por cort esa del Kastn er t.ab., Princeton University, Prin-
Las c lu las ganglionares d e la retina so n n euronas que ceton, Nueva jer sey)
re ci ben inform a cin d e lo s fotorre cept o res y tran smi-
ten esta informacin p o r e l n e rvio p tico a los ci rc u itos
cere b ra les implicado s e n la visi n . Bi y su equipo e nco n-
traron q ue las c lu las ga ngl io na res se h a ca n se nsi b les a
la luz: a l es ti m u la r la retina con u n des te llo d e lu z azul
se registraba n p oten ciales e lc tr icos e n la corte za visual.
Como se ex po n d r e n el Ca p tu lo 3, la retina co n tie ne
una can ti dad cons ide rab le d e circ u itos n eu ral es qu e
analiza n la info rmaci n p rocede nte d e los for orre cepto-
res antes de q u e esta se enve a tr avs d el ne rvio pt ico
a o tras partes de l cerebro , de m odo que el sim p le h e cho
d e hace r se ns ib les a la luz a las c lulas ga nglio na res n o
garantiza q ue la ceguera ca usada por la falta d e Iot orre-
cep to res res ta u re e l dise o d e la visi n. Sin e m b a rgo,
admin istr a r selec tiva me n te Ch R2 y !\'pI-IR (y o tros tipos
d e proten as fotosensibl es to dava p or d escubrir) a tipos
es p e cficos d e n eu ron as de la re tina p u ede llevar fin al-
m ente a l desarrollo de med ios para trata r a lg u nos tip os
d e ceg ue ra. E n e l Ca ptulo l O se a naliza n otros p osibles
usos clnicos de las pro te n as fo tosensibles -por ej e m -
plo, e n e l tratami ento d e e n fe r med a des n eurol gicas
ta les como la e n fe r medad d e Parkinson-.

Estimula cin magntica transcraneal estimulacin elctrica transcraneal (EM T) Esrimulacin de la

Com o se vio a ntes e n es te ca ptu lo, la acti vidad n eu-
ral ind uce ca m pos m a gn tico s qu e pu ed e n d ete ctarse
m e dia n te magn et o en ce fal o grafa. De m odo pare cido ,
puede n e m p le a rse ca m pos m a gn ticos p al-a esti m u la r
corteza cerebra l m ed iante campos magn tico s. que se producen
aplicando pul sos elctricos mediant e una bobi na electromagntic a
situa da cerca del crn eo. Int erfiere en la func in de la regi n cere-
bral que se estimula.
58 Cap tu lo 2 Mtodos y procedimien tos deinvestigocin
ejemplo, co mo se expond r e n el Captulo 3, la esti m ula-
ci n d e una re bri n especfica de la co rte za visual d e aso-
ciacin alte ra la ca p acid ad d e una persona pa ra d et ectar
Registro y estimulacin de la actividad
neural
Cuando loscircuitosneuronalesdesempeansusfunciones
habituales, su actividad elctrica y metablica y sus secre-
ciones qumicas aumentan. As pues, observando estos
procesos mientras un animal percibe diversos estmulos o
lleva a ca bo diversas conductas, se pueden hacer alguna s
inferencias ace rca de las funciones que realizan diferen-
tes regiones cerebrales. La actividad elctrica de neuronas
indi viduales puede registrarse mediante microelectro-
dos. Lo s registros crnicos requieren unir el electrodo a
un zca lo elctrico, el cual se fij a al crneo mediante un
adhesivo plstico. Los macroelectrodos registran la acti-
vidad de grandes grupos de neuronas. Rara vez estos se
sitan profundamente en el encfalo humano, sino que lo
msfrecuente es que se coloquen sobre el cuero cabelludo
y su actividad se registre por medio de un polgrafo.
La actividad metablica pued e estimarse inyectando al
animal 2-DG radioactiva, la cual se acumula en las neuro-
nas metablicamente activas. La autorradiografa detecta
la radioactividad: se colocan secciones enceflicas sobre el
portaobjetos del microscopio, se recubren con una emul-
sin fotogrfica, se dejan reposar cierto tiempo y luego se
revelan como los negativos fotogrficos. Cuando las neu-
ronas son estimuladas sintetizan la protena nuclear Fos.
La prese ncia de Fos, puesta de manifiesto por un mtodo
es pecial de tincin, aporta otra va para descubrir cules
MTODOS NEUROQuMICOS
En ocasio nes lo que n os int eresa n o es la actividad m etab-
lica ge n eral d e una d et e rminada regin d el e ncfalo sino
la localizacin d e n e u ro nas que tengan un tipo especfico
d e re ce p tor o que p roduzcan un tip o especfico de n euro-
tr a ns m isores o n eurom odulad ores. Tambi n podramos
q ue re r estim a' la ca ntidad d e aq ue llas sus tan cias qumi-
ca s qu e segregan las neuronas d e una regi n determi-
nada del e n c fa lo e n d et erminadas circ u nstancias.
Deteccin de neuronas que producen
sustancias neuroqumicas especficas
Suponga mos que se ave rig ua que una d eterminada sus-
tanc ia q um ica afec ta a la co n d uc ta. Cmo se p odra
el m ovimiento d e los es tm ulos visuales. Ad ems, co mo se
ver e n el Ca p t u lo 11, la EMT se ha utili zad o para trata r
los sn to mas d e tras to rnos m en tal es co mo la de p res i n .
son las regiones activas del encfalo. La actividad metab-
lica de diversas regiones del cerebro humano in vivo puede
evidenciarse con el mtodo de 2-DG, pero para detectar las
region es activas se utiliza una exploracin con TEP. La RM
funcional (RMf) informa de la actividad cerebral local esti-
mando el nivel regional de oxgeno en sa ngre. La tcnica
de RMf ti ene una resolucin es pacia l y temporal mucho
ms alta que la de TEP.
Los investigadores pueden estimular varias regiones
del encfalo impl antando un macroelectrodo y aplicando
una estimulacin elct rica moderada. Alternativamente,
pueden implantar una c nula gua en el encfalo. Cuando
el animal se ha recuperado de la int ervencin quirr-
gica , insertan una c nula ms fina e inyectan una solu-
cin dilu ida de un aminocido excitador en el encfalo.
La ventaja de este procedimiento es que solo se estimu-
lan aquellas neuronas cuyos somas celulares se localizan
en las proximidades: los axones que atraviesa n la regin
no resultan afectados. Se pueden utili zar virus para apor-
tar genes para protenas fotosensibles que producen una
despolarizacin o una hiperpolarizacin de la membrana
de neuronas especficas cuando las protenas son estimu-
ladas por la luz. La estimulacin magntica transcraneal
induce actividad elctrica en la corteza cerebral humana,
que altera temporalmente el funcionamiento de los circu i-
tos neurales que se localizan all.
En la Tabla 2.2 se resu men los mtodos de investiga-
cin expuestos en este apartado.
lle gar a d es cubri r los circ u itos n e u ra les resp on sable s de
los e fec tos d e la sus ta ncia? Pa ra res po n de r a esta pre-
gunta , pondremos un ejem p lo co n cre to. Los m di co s
revel aron hace varios aii.os q u e los gra njeros q ue h ab an
es ta d o e xp ues tos a d et ermin ad o s tip os d e in se c tici-
das (o rga nofo sfa tos ) tenan ensueos particularm ent e
intensos y extra ii.os e incluso d eca n ten er alucinacio-
n es cuan do es ta ba n desp iertos. U n a posibl e e xp lica ci n
d e es tos sn to mas es que la sus tancia estim u la los circ u i-
tos n eurales qu e controla n la fase REM d e l sueo , aq ue-
lla e n la que oc u rre n principal m en te los e ns ueii.os. (Al
fin y al ca bo, los sueii.os son alucinacio nes q ue se tie n e n
esta n do dormido ).
La prim era pregunta a pl antea rse es c mo fu nc io na n
los ins ect icidas o rg anofosfa tados, y los fa rm a c lo g o s tie-
n en la respuesta : es tas susta nci as inhiben la ace tilcoli-
n esterasa (ACh E) . Las susta ncias q u e inhiben la AChE
son potentes ago n istas co linrgi cos, y al inhibir la AChE,
 Fundame nto s de f isi ol og a de la co n d ucta 59

Registrar la activi dad elctr ica de Microelectrodos de vid rio o de metal Puede hacerse una im plant acin crnica
neuronas i ndivi duales de microeledrodos de metal para registrar
la activi dad neural del animal cuando se
mueve

Registrar la activi dad elctrica de Macroelectro dos de metal En seres huma nos, por lo general se
regio nes del cerebro ad hie ren al cuero cabellu do con una pasta
especial

Registrar los camp os magnti cos Magnetoe ncefalog rafa; utiliza un Puede determ inar la localizacin de
inducidos por la act ividad neural neuromagnet metr o qu e contiene un a u n grupo de neuro nas que descargan
serie de SQU ID sincroniza damente

Registrar la actividad metablica de
regiones del cerebro
Autorra diografa con 2-DG Evala el consumo local de gluco sa
Medi da de la protena Fos Identifica las neuronas que se han
estimulado recientem ente
TEPcon 2-DG Evala la activi dad metablica regional
del cerebro humano
RM funcio nal Eva la la activi dad meta b lica regio nal
del cerebro hu ma no ; mejor resol ucin
espacial y te m poral que la de TEP

Medir los neurotransmisores y Micro dilisis Puede anali zarse una amplia variedad de
neuromo dulado res liberados por las sustancias
neuronas

Determinar las sustancia s neuro qumicas TEP Puede localizar cualqu ier sustancia
existe ntes en el cerebro hu mano in vivo radioactiva en el cerebro hu ma no

Estimu lar la act ividad neural Estimulac in el ctrica
Esti mulaci n qum ica con un ami nocido
excita dor
Estimu lacin magntica t ranscraneal
Estimula las neuro nas cercanas a la punta
del electro do y los axones qu e at raviesan
la regin
Estimu la solo las neuronas prx ima s a
la pu nta de la cnula, no los axones que
atraviesa n la regin
Estimula las neuronas de la corteza
cerebral humana con una bob ina
electro magntica situada sobre la cabeza

fre na n la rpida d estruccin de AC h d espu s d e q u e
h aya sid o libe rad a por los botones terminales, y as p ro -
longan e l tiempo dura nte e l q ue se producen pote nc ia-
les p ostsin pticos e n las sinapsis colin rgic as .
Aho ra que e n te n de mos la acci n d e lo s in secti cidas,
sabemos que es tas sus ta ncias act an a niv el d e las sinap-
sis co lin rg icas. Qu m tod os n euroqumicos se d ebe-
ran u tilizar para d escubrir el lugar d e acci n de es tas
susta ncias e n e l e ncfalo? Exi st en tre s posibilidad es: se
p o d r an buscar n euronas que conti en en ace tilco lin a, se
p o d ra buscar la e n zim a ace tilc o lineste rasa (la c ua l ha
d e es ta r presente en las m embra nas postsinpticas d e las
c lu las que rec ibe n aferencias sinpticas de las n e u ro n as
colin rgicas) o se p odran buscar receptores d e ace tilco-
lin a oExam inemos es to s tres m todos.
E n p ri mer lu g a r co n side ra re m o s los m tod o s
m ediante los que se pueden lo caliz ar susta nc ias ri euro-
q um ica s esp ec fic as . co m o lo s n eu ro tr an smisores y los
n eurornoduladores. (En nuestr o caso, n os interesa la
acetilco lina ) . H ay tr es m odo s bsicos d e lo cali za r sustan-
cias n euroqumi ca s e n el encfalo: lo caliz ar las sustancias
mismas, local izar las enzi mas que las sin tetizan o lo caliz a r
e l AR.N mensajero inv o lu crado e n su s n te sis.
Los p ptidos (o las protenas) pu eden lo cali zarse
dire cta m ente p o r medio d e m todos inmunocitoqumi-
cos, que se d esc ribi e ro n en la prim era seccin d e es te
60 Captulo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigocin
ca p tulo . Se expone n seccio nes d e tejido cereb ral a u n
antic ue r po para el p ptid o , asociad o a u n tinte (p or lo
general, uno fluo resce nte) . y desp us se examinan las
seccio n es al mic roscopio usa nd o lu z de u na dete rm i-
nada lo ngi tu d de onda . Por ejemplo. e n la Figura 2.32
puede verse la local izaci n e n el p rose n cfalo de axo nes
que co n tie n e n vasopresina, u n neurotransm isor p ep t-
di co . En ella se m uestra n dos co n ju n tos de axones: un o ,
agr u p ad o e n to rno al tercer ventr culo e n la base del
ce reb ro . apa re ce e n co lor pard o ; el o tro, di sp erso e n el
rea se ptal la teral, tien e e l asp ect o d e cade n as de fibras
doradas (co mo pu ede a p rec iarse , una seccin ce reb ral
b ie n te id a puede se r bon ita ) (vase la Figura 2.32) .
Pe ro lo q ue interesa aq u es la acetilco lina, qu e no
es u n p ptido. Por e llo , n o se pueden u tili zar m todos
inmunocitoq umicos para lo cal iza r este n e u ro transmi so r,
El pptido pudo verse media nte inm unocitoqumica . La mi-
crofotografa muest ra parte de una seccin fronta l a travs
del prosencfalo de una rata . Lasfibras dorad as y ocres son
axon es y boton es ter mina les que contiene n vasopresina, un
neurotran smisor peptdico.
(Co rtesa de Gee rt Oevries, Unive rsity 01 Massa chu setts.)
a unque pueden usa rse pa ra localizar la e nz ima que lo
sinteti za. La sn tesis de ace tilcolina se log ra g ra cias a la
e n zima co lina acetiltransferasa (ChAT ) . Por lo tanto,
ca si co n to d a seguridad las neuronas que contienen esta
e n zima segrega n ACh . En la Figura 2. 33 pued en verse
n euron as co lin rgicas de la protuberan cia id e n ti fica-
d as m ediante inmu n oci to q u m ica : e l tejido cerebral se
e x p uso a un a nticu erpo de la ChA f unido a un tinte
flu orescente . De h ech o , in vestigacio n es realizadas utili-
zando muchos d e lo s m todos descritos e n es te captulo
indican que di chas n e u ronas intervie n en e n el co n trol
del sue o REM (vase la Figura 2.33) .
Otra fo rma indirecta d e local iza r una sus ta ncia es u ii-
lizar una tcnica co nocid a co m o hibridacin in si/u: tod os
los p ptid os y prot en as (incluid as , por supuesto , todas
las e nz imas) se sin tetizan conform e a la info rmaci n co n-
tenida e n los cro mosomas. Cuando se va a sintetizar una
prot en a co nc re ta, se co pia la informaci n necesaria ele un
cro mosoma e n un segmento de .-\RN m e nsajero, el cual
sale d el ncleo y se d esplaza hasta los ribosomas, donde
tien e lugar la sn tesis d e p rote nas. (Este proceso se ilu s-
tr e n la Figura 2.6) . La [rmula (estruc t ura qum ica ) d e
Una e nzima, responsable de la sntes is de un neurotransmi-
sor, se localiza med iante inmunocitoqumica. La mi croo -
tografa muestra una seccin a travs de la protub eran cia.
Las neuronas en color naranja contien en colina acetiltrans-
ferasa , lo cual implica qu e produ cen (y por lo ta nto segre-
gan ) acetilcolina .
(Co rte sa d e Dav id A. Mo rila k y Roland Ciara ne llo: Nancy Prit zker
Lab o rato ry 01 Deve lopm enta l a nd Molec ula r Neurobio logy, De-
partm ent 01 Psychiatry a nd Beh avio ra l Scie nces, Sta nlo rd Univer-
sity Schoo l 01 Medicin e.)
hibridacin in situ Prod ucc i n de ARN comple mentario de un
ARN men sajero d et erm in ad o con el fin d e d etect ar el ARN m cn -
saje ro .
 Fundam cnt os dc fisiologa dc la co nducta 61

la pmtena est codificada en trminos de una secu en cia

especfica d e bases d e nucletidos que componen el ARN
m ensajero. Si se co noce es te c d igo (yen la mayora d e Se expuso el tejido a ARN radioactivo, el cual se une al ARN
los casos es as), lo s bi l ogos moleculares pueden sinteti- mensajero responsable de la sntesi s de vasopr esina, un
za r un se gmento d e ARN radio acti vo que co ntie ne un a pptido. La localizacin del ARN radioactivo, puesta de ma -
sec ue nc ia d e nucle tid os co m ple me ntaria d e la sec ue n- nifiesto por la autorradiografa , pued e verse com o puntos
cia d el ARN mensaj e ro, Las seccio nes de tejido ce re bra l blancos. Las neuronas marcadas se sit an en un pa r de n-
cleo s del hipotlamo.
se expone n al ARN radio activo , que se ad h ie re a las m ol -
culas del ARN m en saj ero apropiado . Se utilizan e n to n- (Cort esa de Geert DeVri es, Uni ver sity 01 Massachusett s.)
ces la a u to r rad iog rafa (desc rita.e n la segunda sec cin d e
este ca p tu lo) para poder ver d nd e se lo caliza el ARN
m ensajero y, POl- deduccin, la d e las c lulas que produ-
cen la prote na cuya sn tes is ini cia el ARN.
En la Figura 2.34 se ex p lica co n un g rfico e l m t odo
de h ibridacin in situ y e n la Figura 2.35 se muestra la
locali zacin d el ARN m e n saje ro resp onsabl e d e la snte-
sis de un p p tid o , la vasop res ina, puesta d e manifi esto
med ia n te es te m todo . La iluminacin lat eral d e lo s por-
taobjetos para el mi cro scopio h ace que los grnulos d e
pla ta d e la e m u lsi n fot ogrfica aparez can co mo punto s
bl ancos (va nse las Figuras 2.34 y 2.35) .

Localizacin de receptores
especficos
que actan unind ose a recep to res. La local izaci n de
Los n euro transmisores, los n euromoduladores y las h o r-
es tos re ceptores p ue d e d eterm in a rse sig u ie ndo dos pm-
monas t ra ns fie re n sus me ns ajes a las c lu las so bre las
ce d im ie n tos diferentes.
En uno d e e llos se utiliza la a u to r ra d iografa. Pa ra
ello, se e xp o ne n secciones d e tejido cereb ra l a u na solu-
ci n que contiene un ligando radioact ivo para un rece p-
Este esquema simplificado explica cmo se utiliza la hibrida- tor e sp ec fico . Despus se e n j llagan las secciones, d e
cin in situ para localizar el ARN mensajero responsable de manera que la nica radioactividad que queda e n e llas
la snt esis de una protena o de un pptido determinados.
es la d e las molculas d el ligando q u e se h a un id o a sus
receptores . POl- ltim o , se u tiliza n m t od os a utorradio-
g rficos para lo cali za r e l ligando radioactivo - y, por lo
ARN radioactiva tanto, los receptores-oEn la Figura 2.36 se p res enta un
complementario del ARN e je m p lo d e lo s resultad os d e este procedi m iento . Pu ed e
mensajero que interesa
verse e l a u to rrad iograma d e u n a seccin d el e ncfalo de
una rata que se ba e n un a so luci n co n m o r fin a ra dio-
activa, la c ual se uni a los rece pto res p ara lo s o p io ides
d el e n c falo (vase la Figura 2.36) .
En e l segundo procedimi en to se a p lic a la in rn u no-
cito q u m ica , de m od o que los receptores so n pro tenas
y, por lo tanto, se pu eden p roducir a n tic ue rpos frente a
ellos. Se exp o ne n las seccio nes d e teji do ce re b ra l al anti-
cue r p o adecuado (ma rc ado con u n tinte flu o resce n te ) y
ARN radioactiva se o b se rva n las seccio nes a l mi croscopio con u na lu z de
ligado al ARN una d eterminada longitud d e onda.
mensajero Se a p lica el m todo d e local iza cin d e rece pto res a
la primera lnea d e in vestigacin q ue se cons ider a n tes
e n es te captulo: la fu n ci n del hipot l am o ve n tro rne-
ARN mensajero dial (l-IVM) en la co n d uc ta sexual d e las ratas h embra .
Segn se vio , las lesiones d el I-IVM a bo le n esta co n d uc ta,
62 Captulo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigacin
En est a secci n horizontal, la zona rostral se sita arriba .
Se int ro duce el encfa lo en una est uf a de incubacin con
un a solucin que cont ien e morfina radioactiva , un ligan-
do para lo s receptores opioid es. Los receptores se destacan
como reas bl an cas.
(De Herkenham, M. A. YPert, C. B. journal DI Neuroscience, 1982, 2,
1129-1149. Rep rodu cido con autoriza cin .)
aunque tambin se vio que la co n d uc ta n o oc urre si se
extirpan los ovarios d e la rata , pe ro q ue pu ede ac tivarse
est im ula ndo e l B V M e lctrica men te o con aminocidos
excitadores. Estos res ultados sugieren que las h ormonas
sexuales prod ucidas por lo s ovarios ac ta n sobre las n eu-
ro nas del HVI\L
Dich a hiptesis sugie re dos ex perimen tos. Prim e ro,
se podra u til iza r el proced im iento re p resen tad o e n la
Fig ura 2 .29 pal-a inyecta r u n a peque a cantidad d e la
ho rmona sexual adec uada e n el BV:\-1 d e ra tas h embra
cu yos ovarios se h a n extir pado previ a m e n te ; com o se
ver en el Captu lo 5, es te procedimi e n to es eficaz: la
hormona reactiva la conduc ta sex ual d el ani mal. En un
segundo experime n to se podra u tili zar la tcn ica d e
autorradiografa p a ra locali zar los rece pto res d e la h or-
mona sexual, para lo cual se expon d r a n seccio nes d el
en cfalo de la rata a la hormo n a ra d ioac tiva, se e nj ua-
garan y se efec tua ra la a utor ra d iogra fa. Si se hi ciera
esto , se encon tra ra efectivamente radioac tiv idad e n
e l I-IVI\L (Y si se co m p a raran las seccio nes ce re b rales
d e l-atas macho y h e mbra , se obte n dra n pruebas d e
la e xiste ncia d e un m ayor n m ero d e re cep tores h or-
m onales e n los encfalo s d e las h embras). Ta m b i n se
podra rec u rrir a la inmun o cito qu mica p ara lo cali za r
los recepto res d e las h orm on as, )' se co nseg u ir a n lo s
mi sm os resultados.
Estimacin de las sustancias
qumicas que segrega el cerebro
Sa be mos que la cocan a -u n a droga p articularm ente
ad ic tiva- bl oque a la rea bsorci n de la d opa min a , lo
que su giere que la co nce n tracin extracelu la r d e d opa-
min a a u me nta e n cie rtas regio n es del e ncfalo cuando
un a p ersona tom a cocana . Pal-a estimar la ca n tidad d e
d opamin a e n una regi n d ete rminada d el e ncfa lo, se
utili za un m todo de n om inado microdilisis.
La di lisis es un p roceso m edi an te e l cual se se pal-an
sus tan cias m ediante un a me m b rana a rt ific ial que es p er-
meab le para un as m ol culas ), no pa ra o tras. U na so nda
de mi crodilisis co ns ta d e u na peq ue a c n u la met-
lica co n la que se in trodu ce u n a so luc i n e n un a sec-
ci n d el tubo d e di lisis -un frag me n to d e m emb ran a
a rtific ial co n form a d e cilin d ro, se lla da e n su parte infe-
l-ior-. Mediante un a segun da pequea c n ula m et li ca
se re tira la so luci n d espus d e que es ta h aya circ u lado
a travs d e la bol sa. En la Figu ra 2.3 7 se represen ta es te
tip o d e so n d a (vase la Figura 2.3 7) .
Se utili za ciruga es tereotx ica p al-a co loca r un a
sond a d e mi c rodi li sis e n el encfalo d e un a rata , de
m odo que e l ex t re mo d e la sonda se site e n la regi n
que n os interesa . Se b ombea lu ego un a p eque a ca n-
tidad d e un a so luci n sim ila r a l lquid o ext race lu la r
a travs d e una d e las p eque as c n u las m e tli cas e n
e l tubo d e di li sis, e l lqui d o circ u la p or este y a tra-
vies a la segunda c n ul a m e tli ca , de la cual se recoge
p ara a na liza rlo. A m edida q ue e l lquid o circ u la po r
el tubo d e di li sis va recogie ndo m ol culas pro ceden-
tes d el lquido e xtracelu la r d el e ncfalo, las c uales so n
imp ul sadas a tra vs d e la m embrana p or la fue rza d e
difusin.
Con un m todo extre madame n te sens ib le, se ana-
liza e l co n te n ido d el lquid o q ue h a ci rc u la do p o r e l
tubo d e di li sis. Este m t odo es ta n se nsi ble que pued e
d ete ct ar n eurotran smisores (y sus prod uc to s d e d eg ra-
d aci n ) que h an sido lib el-ado s po r los boton es te rmi-
n al es y d esde el espacio sin p tico se h an di sp ersad o e n
microdilisis Proced im iento pa ra an aliza r las susta ncias qumicas
que se h allan en el lq uido int ersticial gracias a u n pequeo tubo ,
hecho co n un a mem br ana semi permeable, q ue se impla nta en el
enc falo.

Se infunde le nta me nte una solucin salina diluida en el
t ubo de microdilisis, donde capta molculas del lquido ex-
t racelula r que se difund en e n l. Despus se analiza el con-
ten ido del tubo.
(Modificado de Hernndez, L.; Stanley, B. G., Y Hoebel, B. G. Lif e
Sciences, 1986,39,2629-2637.)
r- Se bombea el fluido a travs
de una cnula insertada
Cemento
n Se recoge el flu ido
y se analiza
dental
1,1
Crneo
! /
-.i - - -- - - - - .. - -. - . - -1..ij-.- ------.-- -----.-/
....
- v, --.....
! . n '--.,.~,
iL UbOde dilisis-------. I',l l,
T Las sustancias del fluido
--+- ~ extracelularse difunden
i1 a travs del tubo de dilisis
el resto d el lquido e x tracelu la r. Pu ede o bse rva rse que
la ca n tid ad de d opamin a e xiste n te e n e l lquid o e xt ra-
ce lu lar d el ncl eo accu mbens, localizado e n el pro sen c -
falo basal, a u men ta c ua n do se in yecta coc a na a la rat a .
De h echo , se e nc ue nt ra que la ca n tidad d e d opamina
en e sta regi n aum enta c ua n d o se le administra c u al-
q uie r droga adictiva, co m o h erona , ni cotina o a lco h o l.
In cluso se ve un aumen to d e la se crecin de d opamina
cuan do el a n im al se d edi ca a una actividad pl acentera
tal co mo co mer cuando est h ambri ento, b eber cua n do
est se d ie n to o una activid ad sex ual. Estas o bse rvacio-
n es a poya n la co ncl usi n d e que la lib eraci n d e d opa-
mi na e n e l ncl e o accu mbens jue ga un p ap el e n e l
refue rzo .
En un os c u a n tos casos e xce pc io nale s ( po r eje m -
p lo , c u a n d o se d eterminan las su stan ci as qu mi cas
p re sentes en el ce re b ro d e personas co n una h emo-
rragia ce re b ral o un traumatismo c ra ne oe nce f lico) se
ha a p lica do el procedimi ento d e mi croelili sis a l es tu-
dio de l ce re b ro hum an o, p ero , p or ra zon es ticas, n o
se hace co n fin es d e inves tigac i n . Afortunadam ente
existe un m edio n o lesivo d e estim ar susta nc ias n euro-
qumicas ex iste ntes e n e l ce l-eb ro human o: e l e q u ipo
d e T EP, que, aunque es ca ro , tambi n es vers til , se
p uede utilizar para lo cali zar cualquier susta ncia radi o-
activa que e m ita positron es.
En la Figura 2. 38 se presentan im gen es ele TEP elel
ce re b ro d el Sr. B., el hombre cuyo caso se d es cribi
Fundam ento s d e fis iologa d e la conducta 63
Las imgenes muestran la absorcin de levodopa (l-dopa)
radioactiva en los ncleos basales de un paciente con enfer-
medad de Parkinson provocados por una sustancia qumi ca
txica, antes y despus de recibir un trasplante de neuronas
dopaminrgicas fetales : (a) imagen previa a la interv encin
y (b) imagen obtenida 13 meses de spus de la intervencin.
La elevada absorcin de levodopa indica que el trasplante
fetal estaba segregando dopamina .
(Modificado de Widner, H.; Tetrud, J. ; Rehncrona, S.; Snow, B.; Brun-
din, P. ; Gustavii, B.; Bjorklund, A.; Lindvall, O., y Langston , J. W. New
England journal oI Medicine, 1992 , 327, 1556-1563. Imgenes re-
producidas con autorizacin.)
Encfalo
" '\
(a) (b)
al co m ie n zo d e este ca ptu lo . Medi ante in stru m e n -
tal este re o t xic o se le trasplan ta ron n e uro n as fe ta-
le s se cretoras d e d opamin a e n lo s ga n glios basa les y,
co m o se e xp us o, se le reali z un a e x p lo r aci n TE P
ante s d e la in terven cin qu ir rgi ca y ot ra algo m s
ele un a o d espus. Se le adm in istr u na inyecci n de
l-d opa radioacti va u n a h ora a ntes de qu e se rea lizara
ca d a e xp lo rac in, que es abso rbida por lo s term ina-
le s d e la s n eu ron a s do pam in rgicas, d o n d e se con-
vie rte e n dopam in a . As pues, la rad ioac tividad que se
obse rva e n las imge nes ind ica la prese ncia d e termi-
nales sec re to res d e do pa m ina e n los ga nglios basales .
Las imgenes mu estran la ca n tidad d e radi o act ivid a d
a n te s (parte a) y d espu s (p a rte b ) d e que se le h icie ra
e l trasplante . Com o se pued e ver, lo s ncle os basales
co n te n a n bastante m s dopamin a tras la inte rve n ci n
quirrgi ca (v ase la Figura 2.38) .
Nos g usta ra p o d e r clecir qu e el p ro cedimi e n to de
tr asplante fet al h a c u ra do a p e rso n as afec tadas p o r la
e n fe rmed ad d e Parkinson ya aq ue llas cuyo ce re b ro fue
da ado p or la d ro ga co ntam inada . Lamen tabl eme n te ,
com o se expondr e n el Ca p t u lo 10 , lo s efec tos te ra-
p uticos ele! traspl ante suele n se r temporales y, con e l
tiempo , es fre cu ent e que su rjan gl'aves efec tos colate-
ra les .
64 Capfuilo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigocin

Mtodos neuroqumicos autorradiografa para poner de manifiesto la distribucin

Los mtodos neuroqumicospueden uti lizarse para deter-
min ar la localizacin de una enorme variedad de sus-
tancias qumi cas en el encfalo. Con ellos se pueden
identif icar las neuronas que segregan un neurotransmi-
sor o un neuromodulador determinado y aquellas que
ti enen receptores que responden a la presencia de estas
sustancias. Los pptidosy las protenas pueden localizarse
directamente, mediante mtodos inmunocitoqumicos: se
expone el tejido a un anticuerpo que est unido a una
molcu la que se hace fluorescente baj o una luz de una
determinada longitud de onda. Tambin pueden detec-
tarse otras sustancias mediante localizacin inmu nocito-
qumica de una enzima que se requiere para su sntesis.
Asimismo, los pptidos y las protenas pueden localizarse
por medio del mtodo de hibridacin in situ, el cua l reve la
la presencia del ARN mensajero que dirige su sntesis.
Los receptores de las sustancias neuroqumicas pue-
den localizarse de dos formas. El primer mtodo utiliza la
de un ligando radioactiva, al cual se ha expuesto el tejido.
El segundo se sirve de la inmunocitoqumica para detec-
tar la presencia de los receptores mismos, que son prote-
nas. Combi nando mtodos de tincin se pueden localizar
neuronas que tienen un recepto r determinado o un pp-
tido determinado y que asimismo establecen conexion es
con regiones determinadas del encfalo.
Las secreciones de neurotransmisores y neuromodula-
dores se pueden determinar implantando el ext remo de
una sonda de microdilisis en una regin determinada
del cerebro. Se puede emplear una exploracin con TEP
para llevar a cabo observaciones similares en el cerebro
humano: se inyecta al sujeto un marcador radioactiva, tal
como una droga que se une con un receptor determinado
o una sustancia qumica que se incorpora a un neurotras-
misar determinado, y posteriormente una exploracin TEP
revela la localizacin del marcador en el cerebro.
En la Tabla 2.3 se ofrece un compendio de los mto-
dos de investigacin explica dos en este apartado.

Estim ar los neurotransmisor es o Micro di lisis Puede analizarse una amp lia serie de
neuromodul ador es liberados por las sustancias
neuron as

Identifi car las neuronas que producen
un neurotransmi sor o neuromod ulado r
determ inado
Localizacin media nte inmunocitoq umica
de un ppt ido o una protena
Localizacin mediant e inmunoci toqumica
de la enzima respon sabl e de la sntesis de
una sustancia
Requiere un anti cuerpo especfico
til si la sustanci a no es un pptido o un a
prot ena

Mtodo s genti cos Estudios con gemelos Comparand o el nd ice de concord ancia
de gemelos monocigt icos y dicigt icos
puede esti marse si un rasgo se hereda
Mutac iones dirigidas Inactivacin , i nserci n o aumento de la
expresi n de un gen
Oligonuclet idos antisent ido Se un en al ARN mensajero; im pid en la
sntesis de prot ena

ve n ir d e familia , lo que su giere que los fact ores gen -

MTODOS GENTI COS
To da co n d uc ta est d et erm inada por interacciones e n tre
e l ce re b ro d e un individuo y su entorno. Mu chas carac-
tersti cas co m po rt ame n tale s - como el tal ento, las varia-
bl es d e p ers on alidad y los trastornos m ental es-e- parecen
ticos pueden ser un factor important e e n e l d esarro-
llo d e diferen cias fisio lgicas que , e n ltima in sta n cia ,
son r espo n sables d e di chas ca rac te rs ticas. En a lg u-
nos casos, la relacin co n fac tores gen ti cos est mu y
clara: un gen d efectuoso interfiere e n el d esarroll o ce re -
bral y un a anomala n eurol gi ca provo ca a lte rac io nes

co m p o rta m e n ta les. En otros cas o s, la relaci n e ntre
here ncia y cond ucta es m ucho m s sut il y p ara e viden-
cia rla h an d e e m p learse m todo s ge n ticos especia les .
Estudios con gemelos
Un m to d o muy efica z p ara eva lu a r la influencia d e la
he re ncia e n un ra sgo co nc re to co ns iste e n co m pa ra r el
ndice de concorda ncia d e es te rasgo e n pares d e ge melos
mo nocig tic os y dicigti co s. Los ge melo s m onocigti co s
(univite lin os) tienen un ge n o tip o id ntico : es d ecir, sus
cromoso mas, y los ge nes que co n tie ne n, son id nticos.
Po r el co n tra rio, la semej anza ge n tica e n tre gemel o s
dicig ticos (b ivite linos) es, p or trmin o m edio , de! 50
por cie n to . Lo s inv estigadores es tu d ia n las hi storias cln i-
cas para id entifi car pares d e ge melos e n los que al m eno s
uno de e llos tenga e l rasgo -por ejem p lo, el di agnsti co
de un d et erminado tras torno m en tal-. Si a a m bos ge me-
los se les ha diagnosticado este tr ast orno , se d ice que so n
concorda ntes. Si so lo uno d e ellos h a recibido este d iag-
n stico , se di ce que son dis cordan tes. As pues, si un tras-
torno tie ne una base ge ntica, e! porce n ta je d e ge melos
m onocigticos que so n co n co rd a n tes e n cuanto al diag-
n stico ser su perior al de los d icigticos. Por e jemplo,
co m o se ver e n el Ca ptu lo 11, e l n d ice d e co ncorda n-
cia para la esq ui zofrenia e n ge m elos es al m en o s cua tro
veces mayor e n los m ono cigti cos que e n los di cig ticos,
dato que ap o rta una s lida p rueba d e que la esq u izo -
fre n ia es un rasgo h er editario. En es tud ios co n ge melos
se h a e nco n tra do que los fac to res ge n ticos influyen e n
m uchas ca rac te rsticas in divid u ales, e ntre ellas rasgos d e
p erson alid ad, prevalencia d e la o be sid ad , in ciden cia d el
alco holism o y una a m p lia se rie de tr astorn os m ental es .
Estudios sobre adopcin
Otro m todo para eva luar el ca rc te r h ereditario d e un
rasgo d e com po rt a m ie nto co nc re to es co m para r p erso-
nas que fue ro n adoptadas e n un a poca te m p ra na d e
la vid a co n sus p adre s biolgicos y sus p adres ado pti-
vo s. Todos lo s rasgo s d e com po rtam ie nto estn infl u i-
d os e n cierto g ra do p OI' factores hereditarios , factores
a m b ie n ta les y u na in te raccin e n tre facto res h eredita-
rios y a m b ie n ta les. Los fac to res a m bien ta les so n ta nto d e
tipo social co mo bi ol gi co . Po r eje mplo , la salud d e la
madre , su n u tricin o e l co n su m o d e drogas d u rante el
e m ba ra zo so n facto res am b ie ntales pren atal es; y la di e ta
d el ni o , su a te ncin m dica y su e nto rno social ( ta n to
d entro co mo fue ra d el h ogar) so n fact ores a m b ie nta-
les posnatales . Si se ado p ta a un ni o po co d espus d e
que n a zca, los fact ores ge n ticos es ta r n asociad os co n
los padres biol gicos, lo s fac to res ambi ental es pren at a-
les co n la madre bi ol gica y la mayo ra d e los fac to res
ambie n ta le s p osnatal es co n lo s p adres adop tivos .
Fu n d amentos de fi siolog a d e la co n d u cta 65
Los estud ios de ado pcin re quieren q ue e l investiga-
dor co nozca la identidad de los padres d e las person as
que se est n estudian do y pued a evaluar el rasgo co m p o r-
ta me ntal en los p ad res biolgicos y e n los adoptivos. Si
los individuos estud iados se parecen notablemente a su s
p adres bio lgicos, se llega a la conclusi n d e que el rasgo
probablem en te es t influi d o p or facto res ge nticos. Para
asegu ra rse, se h an d e d escarta r po sibl es dife re ncias e n el
e n to r no prena tal d e lo s ni os adoptados . Si, en vez d e
ello , los individu os se parecen a sus padres adoptivos, se
co ncl uye que el ra sgo est influid o p or factores am b ien-
tal es. (H a b r a que realiza r m s estudios pa ra d e term in a r
cules podran se r exactame nte estos facto res ambienta-
les) . Po r su p ues to , es posib le q ue in terve n ga n tanto lo s
fact ores h eredi ta ri os co mo los a mbie n ta les, en cuyo caso
los individuos es tu d iados se parecern tan to a los p adres
ado pt ivos co mo a los bio lgi cos.
Mutaciones dirigidas
Un m todo ge n tico desarrollado por bilogos mol ecu la-
res h a puesto en manos de los neurocientficos un p ode-
roso ins trumento. Las mutaciones dirigidas consisten e n
ge nes tra nsfo rmados q ue se producen en el lab o ra to-
rio y se in se rtan en cromosomas de ratones. Estos gen es
m u tados (tam b i n llamad os genes knockout) 2 son d efec-
tuosos -n o pued en p rod ucir una protena q ue sea Iun-
cio na l- . En much os casos, el objetivo d e la mutaci n es
un a e n zim a que con trola una reaccin q u m ica esp ec-
fica . POI' e jem plo, e n e l Capt u lo 8 se ve r que la fa lta
d e una e n zima d et e rminad a int erfiere en e! aprendizaj e,
dato que sugie re que la e nzi ma es, e n p a rte , respo ns a-
b le d e los ca m b io s e n la es truc tura de sin a ps is n ecesa rios
p ara que tenga lu ga r e! a pre ndizaje. En otros casos, e l
o bje tivo d e la mutacin es u n a p ro te na que por s mism a
d esempe a una til fu ncin e n la clu la . Po r ejem p lo,
e n e l Ca ptu lo 13 se ver que un tipo co n cre to de recep-
tor pal<l los o p io ides inte rvien e en lo s efectos reforzan-
te s y a nalgsicos d e estos. Los inv estigadores pued en
in cluso p roducir kno ckout s condicionales que provocan que
los ge nes d el a n imal dej en de exp re sal' un determ in ado
ge n cuan do se le sumin istra un a d et erminada droga , lo
que pe rm ite que el gen objetivo o so b re el que se ac t a se
exprese n ormalme n te durante el d esarrollo d el anim al y
posteriormente sea suprimido, Los investigadores pueden
asi mismo vale rse d e m todos d e ingeniera gen ti ca pam
insertar ge nes en e l ADN' d el ratn , genes qu e pueden
~ O genes suprimidos. (N. de /(1 7:)
mutacin dirigida Alteraci n d e un gen (tam b in llamado "ge n
knockout>.) que se pro d uce en laborato rio y se inserta en los crom o-
so mas d e un ratn. Este gen no pued e producir u na protena fun -
cion al.
66 Captulo 2 Mtodos y procedimientos deinvestigacin
d ar lu gar a un a u me n to de la prod uccin d e protenas
q ue se e nc ue n tra n normalm ente e n la especie h usp ed "
o p uede n p roducir prot en as co m pletame n te nuevas.
Oligonucletidos antisentido
Otro m t odo gc n tico impli ca la produccin d e m ol cu -
las que bl oq ue an la p roduccin d e protenas co d ifica das
po r d et erm inados ge nes m edian te la in yeccin d e oligo-
nucIetidos an tiselltid o,,:l. El tip o m s fre c ue n te d e o li-
go n ucle tidos a u tise n tid o son cade n as mod ificadas d e
ADN o d e ARI\' que se unirn co n m olculas espec ficas
:\ O d e h ebra co m p le menta ria . (N. ti!' In 7:)
Da do que los genes diri gen el desarrollo de un organismo,
los mtodos genticos resultan de gran utili dad en los
estudios de la fisiologa de la conducta. Los est udios con
gemelos comparan el ndice de concordancia de geme-
los monocigticos (univitelinos) y dicigticos (bivitelinos)
en cuanto a un rasgo concreto. Un mayor ndice de con-
cordancia en los gemelos monocigticos es una prueba
de que el rasgo est influido por la herencia. En los estu-
dios sobre adopcin se compara a individuos adoptados
durante la infancia con sus padres biolgicos y sus padres
adoptivos. Si los individuos se parecen a sus padres biol-
gicos, es prueba de que se debe a factores genticos. Si se
parecen a sus padresadoptivos, es prueba de que int ervie-
nen factores del entorno familiar.
Las mutaciones diri gidas permiten a los neurocien-
lficos estud iar los efectos de la falta de una protena
concreta - por ejemplo, una enzima, una protena estruc-
tural o un receptor- sobre las caractersticas fisiolgica sy
comportamentales de un animal. Los genes que cau san la
Manual de labo ra to ri o
"'ellm a n , 1'.: la borator; Exnrises in I'hyJiow,:im/l'sJfh ology. Bos ion :
Allyn a nd Baco n. 1mH .
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Covern me u t Printin g Ofi ce Sto ck Nu m bc : 01 7-02'1-00491-0) .
d e ARN m ensajero (ARN m) e im p ide n que produzcan
su protena . U n a ve z que las mo lc ulas d e ARNrn estn
bl oquead as d e es te modo, son d estr u idas p o r enzimas
que hay e n la c lu la . El trmin o a n tise n tid o se re fie re
al h ech o d e que los o ligo nucletidos sintticos co n tie-
nen una secue n cia de bases co mple men ta rias a las que
co n tie ne un ge n d e te rmin ado o m ol c ula d e AR Nm.
(Co mo se puede ap recia r, est e m todo se parece al que
se utiliza e n la hib rid acin in si /u) .
oligonucletido a n t isc n tid o Cadena m odifi cad a d e ADN o de
ARN qu e se un e con u na mol cula esp ecfica d e ARN mensajero e
im p ide que p roduzca su protena.
produccin de protenas extraas o aumentan la produc-
cin de protenas innatas se pueden insertar en el genoma
de estirpes de animales.Losoligonucletidosantisentido
se pueden utilizar para bloquear la produccin de deter-
mi nadas protenas.
En la Tabla 2.3 se resu men los mtodos de investiga-
cin que se han expuesto en este apartado.
Cuestiones a considerar
1. Posiblemente haya ledo nuevas publi caciones sobre
estudios de la base gentica de los rasgos comport a-
mentales humanos o lo haya visto en televisin. Qu
se qui ere decir, en realidad, cuando un laboratorio
informa del descubrimiento de, supongamos, un gen
de la timidez?
2. Al parecer, a la mayora de las ratas no lesgusta el sa bor
del alcohol, pero los investigadores han criado algunas
ratas que llegan a beber una gran cantidad de este. Se
le ocurre alguna manera de ut ilizar a estos animales
para investigar el posible papel de los factores genti-
cos en el alcoholismo en los seres humanos?
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M todos hi stol gicos
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Rrcmt P IVf.,'7"'('SS . ~ l1 e\'a York : Ple u u m Pre ss, 1989.

OTROS RECURSOS )
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