SESIN # 9

AGONISTAS Y ANTAGONISTAS EN EL LEON DE COBAYO.

Simulacin computarizada para comprender el efecto de los frmacos y la
estimulacin elctrica sobre el sistema nervioso entrico.

Ttulo original: Guinea Pig Ileum. David Dewhurst, Philip Larkman and Stewart Cromar. RECAL alternatives
repository-powered by Labyrinth. Published by the Learning Technology Section - last updated 11/5/2010.
Copyright 2010 - College of Medicine and Veterinary Medicine, The University of Edinburgh. All rights reserved*

*Traduccin y adaptacin: Rosa Ventura-Martnez, Claudia Gmez Acevedo,

Jacinto Santiago Meja

Departamento de Farmacologa
Facultad de Medicina, UNAM. 2016

1
I. INTRODUCCIN

Introduccin (i) coordinan la actividad muscular del leon, y los

neurotransmisores involucrados.
Para el desarrollo de esta prctica es necesario
utilizar un programa que simula una 2. Comprende los fundamentos de emplear
preparacin de leon aislado de cobayo, la cual rganos aislados (in vitro) en el estudio del
ha sido ampliamente utilizada en diversos efecto de los frmacos agonistas y
estudios farmacolgicos. El programa es antagonistas.
verstil y puede ser utilizado por los estudiantes
de pregrado que estn cursando farmacologa. 3. Interpreta la relacin entre la concentracin
administrada y el efecto contrctil del tejido a un
Se sugiere que antes de iniciar con el ejercicio agonista, solo o en presencia de un antagonista.
computarizado los alumnos lean la informacin
de la prctica en el Manual Impreso y 4. Establece el efecto de diversos antagonistas
desarrollen los ejercicios correspondientes a la en presencia de estimulacin elctrica
INTRODUCCIN (pginas 189-190), as como transmural.
los de la EVALUACIN PREVIA (pginas 192-
193). 5. Predice cmo los frmacos con mecanismos
y sitios de accin conocidos afectan la motilidad
intestinal; y sus implicaciones clnicas.
II. OBJETIVOS DE LA SESIN
Las contracciones del leon se muestran en una
pantalla mvil que se asemeja al registro real,
por lo que los estudiantes pueden medir
1. Comprender los componentes que forman
directamente en el monitor la respuesta
parte del sistema nervioso entrico y los
contrctil del tejido.
neurotransmisores involucrados en el control de
la contraccin intestinal.
La Figura 1 muestra las partes que constituyen
el modelo del leon de cobayo. Se puede
2. Determinar las curvas dosis respuesta
explorar cada parte del modelo colocando el
graduales de dos agonistas sobre el leon
puntero en las diferentes zonas (lneas
aislado de cobayo.
punteadas amarillas) de la imagen.
3. Determinar el efecto de un antagonista
Bsicamente se compone de:
sobre la respuesta del leon de cobayo a un
agonista.
a) cmara de rgano aislado (organ bath), en
donde se encuentra inmerso el tejido;
4. Determinar la liberacin de diversos
neurotransmisores en el leon de cobayo a la
b) el leon (ileum), que es el tejido que se
estimulacin transmural de alta y baja
emplea en este modelo y se encuentra en la
frecuencia utilizando diverso frmacos
cmara de rgano aislado;
(corresponde a los experimentos 4 y 5, que son
opcionales).
c) solucin Tyrode para el bao del tejido (wash,
Tyrodes solution), que llena continuamente a la
cmara de rgano aislado y se emplea para
III. COMPETENCIAS
lavar al tejido despus de la administracin de
algn frmaco;
Al final de esta sesin, el estudiante.
d) sistema de registro polgrafo (pen
recorder), que muestra la actividad contrctil del
1. Describe cmo las neuronas intrnsecas
tejido;
(sistema nervioso entrico) y extrnsecas
(sistema nervioso simptico y parasimptico)

2
e) soluciones estndar de los frmacos
(standard drug solutions), que se administran
en la cmara de rgano aislado para determinar
la respuesta del tejido;
f) un cronmetro (timer), que determina el
tiempo que tarda el tejido en producir la
respuesta contrctil despus de ser estimulado.
La Figura 2 muestra la imagen de un corte del
leon en tercera dimensin (3D). Para conocer
cada una de las partes que constituyen el leon
pulse el recuadro de mostrar (show) que se
encuentra en la parte inferior de la imagen.

Figura 2. Corte de un segmento de leon en

tercera dimensin.

Figura 1. Partes que constituyen el modelo Introduccin (iii)

del leon de cobayo.
Motilidad del intestino delgado
Introduccin (ii) Corte transversal del leon: Mecanismos de
control de la motilidad intestinal.
leon de cobayo. Estructura y Fisiologa
La Figura 3 muestra el corte de un segmento de
El leon es la porcin distal del intestino leon en segunda dimensin (2D). Para conocer
delgado. Esta constituido por la serosa; dos los detalles de los mecanismos involucrados en
capas de msculo liso, una capa longitudinal el control de la motilidad intestinal debes colocar
externa y una circular interna; dos plexos el cursor sobre los nmeros de la imagen.
nerviosos; la submucosa; la mucosa
muscularis; y, la mucosa, que contiene las
vellosidades. Las contracciones del msculo
liso circular (contracciones segmentales)
mezclan el contenido del lumen; y las
contracciones del msculo longitudinal
producen las contracciones peristlticas que se
superponen a las de segmentacin e impulsan
el quimo a los largo del intestino.

Un plexo nervioso es una red de nervios que se

encuentra entre los tejidos. En el intestino
existen dos plexos nerviosos: el de Auerbach y
el de Meissner. La estimulacin elctrica del
leon activa las fibras nerviosas de ambos
plexos.

3
Figura 3. Corte en 2D de un segmento de leon.
La motilidad del intestino delgado est
controlada al menos por tres mecanismos:
1. Control miognico. Actividad inherente al
msculo liso
La actividad rtmica del msculo liso intestinal
(el ritmo elctrico basal REB) se debe a la
despolarizacin espontnea de las clulas del
msculo liso lo que produce la propagacin de
ondas elctricas llamadas ondas lentas. Estas
despolarizaciones inducen descargas en espiga
(potenciales de accin musculares) que
disparan la actividad contrctil. La tensin que
se genera est relacionada con el nmero de
espigas asociadas con cada onda lenta. La
repolarizacin de esta onda lenta produce la
relajacin del msculo (Figura 3, nmero 1).
2. Control neuronal. Actividad nerviosa
intrnseca y extrnseca
La actividad rtmica de las ondas lentas se
modifica por efecto de las neuronas y las
hormonas. Tanto la capa muscular longitudinal
como la circular estn inervadas por el sistema
nervioso entrico (SNE), que consiste en
numerosas neuronas intrnsecas organizadas
en dos plexos de tejido nervioso. El ms
prominente se conoce como plexo mientrico o
de Auerbach y se ubica entre las capas del
msculo circular y longitudinal. El otro se
conoce como plexo de Meissner submucoso
y est ubicado entre la capa de msculo
circular y la submucosa. Muchas neuronas
intrnsecas son colinrgicas y su estimulacin
provoca la contraccin del msculo. Los
receptores intestinales, como
aquellos que responden al estiramiento, envan
seales a las neuronas intrnsecas iniciando
reflejos locales. Adems, las neuronas
extrnsecas que provienen de las fibras del
sistema nervioso autnomo, hacen sinapsis con
neuronas intrnsecas del sistema nervioso
entrico. Las fibras parasimpticas
preganglionares (vagales) provienen del ncleo
vagal dorsal del tallo cerebral y hacen sinapsis
con las neuronas intrnsecas en el tracto
gastrointestinal, las cuales son fibras
postganglionales del sistema nervioso
parasimptico. Cada fibra preganglionar inerva
varios miles de fibras postgangionares. Las
fibras simpticas provienen de los ganglios
mesentricos celiaco y superior, y llegan al
intestino por los nervios esplcnicos terminando
en las neuronas intrnsecas o directamente en
las clulas del msculo liso (Figura 3, nmero
2).
3. Control hormonal. Accin de las sustancias
circulantes o liberadas localmente
Varias hormonas afectan la motilidad intestinal,
por ejemplo, la gastrina y la colecistoquinina
(CCK) estimulan la motilidad, mientras que el
glucagn pancretico y el enteroglucagn la
inhiben. Aparentemente no existen neuronas
serotonrgicas (que contienen 5-
hidroxitriptamina o serotonina) ni
histaminrgicas (que contienen histamina) en
ninguno de los plexos del sistema nervioso
entrico; aunque las clulas del msculo liso
contienen receptores para ambos
neurotransmisores. Si se adiciona histamina a
la preparacin de leon aislado, ste se contrae
(Figura 3, nmero 3).
Introduccin (iv)
Farmacologa de las clulas del msculo liso
intestinal
La noradrenalina (NA) o norepinefrina es el
principal neurotransmisor inhibitorio y al ser
liberada de las fibras simpticas
postganglionares, acta sobre los
adrenoreceptores inhibitorios en la membrana
del msculo liso produciendo relajacin. La
acetilcolina (ACh) es el principal
neurotransmisor excitatorio de la sinapsis
ganglionar y es liberada de las fibras
parasimpticas postganglionares. Acta sobre
los receptores colinrgicos nicotnicos de las
neuronas entricas y los muscarnicos del
msculo liso produciendo contraccin. Cuando
se agrega a la preparacin del leon ACh o
cualquier otro agonista que interactu
directamente con los receptores localizados en
la membrana del msculo liso se produce una
contraccin inmediata inducida por el aumento
transitorio de la concentracin de calcio
intracelular; mientras que, como ya se
mencion, la adicin de noradrenalina a la
preparacin produce relajacin. La ACh
estimula predominantemente a los receptores
colinrgicos muscarnicos del msculo liso, ya
que los receptores colinrgicos nicotnicos en
las fibras nerviosas postganglionares son
4
mucho menos sensibles.

Los receptores para 5-HT e histamina tambin

estn presentes en la membrana del msculo
liso. Las evidencias indican que las fibras
nerviosas que utilizan histamina no terminan en
el intestino delgado; mientras que las
interneuronas que utilizan 5-HT si estn
presentes en el plexo mientrico del tracto
gastrointestinal.

La Figura 4 muestra un corte en segunda

dimensin (2D) de un segmento de leon. Para
mostrar detalles de los neurotransmisores y los
componentes involucrados en la motilidad
intestinal pulse el recuadro de mostrar (show)
que se encuentra en la parte inferior de la Figura 4. Corte en segunda dimensin (2D) de
imagen. un segmento de leon.

Introduccin (v). Ejercicio

5
 Introduccin (vi). Ejercicio
IV. MTODOS
Mtodos (i)
Preparacin
Para el desarrollo de los experimentos se
proporciona un segmento de leon de cobayo
colocado dentro de una cmara para rgano
aislado, de manera que permite registrar las
contracciones intestinales inducidas por
frmacos y por estimulacin elctrica
transmural. Debido a que esta preparacin
muestra poca actividad espontnea en su
estado basal, es idnea para estudiar el efecto
de ciertos frmacos sobre la actividad contrctil,
su relacin dosis-respuesta y el efecto de sus
antagonistas. Adems, la estimulacin elctrica
(transmural) del intestino causa la liberacin de
neurotransmisores desde el sistema
nervioso entrico. A frecuencias bajas (0.1
Hz) se produce la liberacin de acetilcolina,
contrayendo al leon; mientras que a
frecuencias altas (10 Hz) se produce la
liberacin de sustancias que modifican la
motilidad intestinal.
En esta preparacin y bajo ciertas condiciones,
las clulas musculares responden a diversos
estmulos durante varias horas. El tejido debe
estar suspendido en una solucin fisiolgica
como la solucin Tyrode, a una temperatura de
37 1C y con oxgeno (la solucin debe
aerearse con oxgeno o aire comprimido).
Mtodos (ii)
Mtodo
Se sacrifica el cobayo con un golpe en la nuca.
6
Se hace una incisin abdominal y se localiza la
porcin del leon. Se obtiene un segmento (1-2
cm) de leon y se coloca en una cmara de
rgano aislado con solucin Tyrode. Es
importante no manipular al tejido con
instrumental metlico y evitar estirarlo
demasiado. Se coloca el tejido en la cmara de
rgano aislado colocndole un electrodo de
metal de tal manera que atraviese la luz
intestinal del segmento. El extremo superior del
intestino se fija a un transductor isotnico. El
transductor isotnico mide cambios en la
longitud del msculo ms que cambios en la
tensin, por lo que la deflexin de la pluma es
proporcional a la amplitud de la contraccin.
Esta repuesta contrctil se expresa como R
(unidades arbitrarias). La luz intestinal debe
estar abierta por ambos lados. Se coloca un
segundo electrodo en la cmara de rgano
aislado, en contacto con la solucin Tyroide.
Ambos electrodos se conectan a un estimulador
para permitir la estimulacin transmural de la
preparacin. Una vez colocado el tejido en la
cmara de rgano aislado, ste debe estar
constantemente aereado con O2 y a una
temperatura de 37C (figura 4). La solucin
Tyroide es una solucin fisiolgica que
contiene: 137 mM de NaCl, 3 mM de KCl, 2 mM
de CaCl2, 0.5 mM de MgCl26H2O, 12 mM de
NaHCO3, 0.5 mM de Na2HPO4, y 1 mM de
glucosa. Es una solucin esencialmente
compuesta por cloruro de sodio (NaCl), similar
en composicin al fluido extracelular.
Como ya se mencion anteriormente, un
transductor isotnico mide cambios en la
longitud del msculo; mientras que un
transductor isomtrico mide cambios en la
tensin muscular del tejido que debe estar a una
tensin fija.
Figura 4. Esquema que representa el sistema
de registro del leon de cobayo al ser
estimulado.
Aparatos
Para realizar estos experimentos se dispone de:
i. Un estimulador con los siguientes
controles:
Frecuencia de estimulacin (0.1 Hz o 10 Hz).
Duracin del estmulo (1 min. (0.1 Hz) o 5 min.
(10 Hz)).
Intensidad del estmulo/voltaje (OFF-14 V).
Al variar las condiciones de estimulacin se
activan diversas fibras nerviosas. A frecuencias
bajas, se activan principalmente fibras
colinrgicas provocando una contraccin de las
fibras del msculo liso longitudinal; en
consecuencia, el intestino se acorta. A
frecuencias altas durante un tiempo prolongado
(5 min.), la estimulacin produce la liberacin de
encefalinas que modifican la contraccin (ver
experimentos).
Nota que el pulso del estmulo permanece fijo a
1 mseg.
ii. Facilidad de lavado
En un experimento real, los frmacos
administrados son eliminados de la preparacin
reemplazando completamente la solucin
Tyrode de la cmara de rgano aislado.
Normalmente, la solucin se cambia dos veces
en cada procedimiento experimental, esto es,
despus de la administracin de cada frmaco
o estmulo elctrico aplicado; adems, existe un
intervalo fijo de 3 min entre cada administracin.
En el programa de la computadora existe un
lavado automtico que instantneamente
elimina las trazas de cualquier frmaco
administrado al bao o liberado por
estimulacin elctrica (este proceso de lavado
simulado se muestra en la hoja de registro
logbook).
Los antagonistas, en particular la atropina,
requieren de mltiples lavados para removerlos
de la cmara. En este programa el proceso de
7
lavado simulado se realiza inmediatamente,
pero para representar dicho procedimiento, se
registra en el logbook como lavados mltiples.
iii. Una hoja de registro colocada a una
velocidad apropiada para desplegar las
contracciones del tejido
Los agonistas se preparan con solucin salina
al 0.9% y se agregan a la cmara de rgano
aislado en un volumen de 0.5 ml. Los
antagonistas, a la concentracin requerida, se
agregan a la solucin Tyrode en la solucin del
bao de cada experimento en particular.

En esta serie de experimentos se evala la Frmacos disponibles:

amplitud de la contraccin ms que la forma de
la respuesta. Por esta razn, la hoja de registro Agonistas: Acetilcolina, histamina, clonidina,
se desplaza a una velocidad baja. morfina.
Antagonistas: Atropina, mepiramina,
iv. Administracin de diversos frmacos en fentolamina, naloxona.
un rango amplio de concentraciones (1x10-9
a 8x10-6 M)

V. EVALUACIN PREVIA (PRETEST)

Pretest (i)

De acuerdo a los antecedentes revisados sobre la preparacin de leon aislado,

qu fibras nerviosas estn presentes en el tejido?. Responde Verdadero o Falso
Fibras nerviosas simpticas post-ganglionares Verdadero Falso
Fibras nerviosas simpticas pre-ganglionares Verdadero Falso
Fibras nerviosas parasimpticas post-ganglionares Verdadero Falso
Fibras nerviosas parasimpticas pre-ganglionares Verdadero Falso

Pretest (ii)

A continuacin se enlistan algunos receptores que se encuentran en las clulas

del msculo liso del leon de cobayo y las respuestas que pueden producirse al ser
estimulados. Responde Verdadero o Falso a las siguientes aseveraciones
Receptores a histamina/relajacin Verdadero Falso
Receptores 5-HT/contraccin Verdadero Falso
Receptores colinrgicos muscarnicos/contraccin Verdadero Falso
Adrenoceptores/relajacin Verdadero Falso

8
Pretest (iii)

Con relacin a la composicin de la solucin Tyrode en la que se encuentra

inmerso el tejido en la cmara de rgano aislado, responde verdadero o falso a las
siguientes aseveraciones

Es similar en composicin al fluido intracelular Verdadero Falso

Es similar en composicin al fluido extracelular Verdadero Falso
Esencialmente es una solucin de cloruro de sodio Verdadero Falso
Esencialmente es una solucin de cloruro de potasio Verdadero Falso
Es importante que contenga glucosa y oxgeno para que Verdadero Falso
las clulas del msculo liso realicen apropiadamente sus
actividades metablicas

Pretest (vi)

Responde verdadero o falso a las siguientes aseveraciones. Un transductor

isotnico:

Mide cambios en la longitud del tejido Verdadero Falso

Mide cambios en la tensin del tejido Verdadero Falso
Ejemplifica un balance entre palancas Verdadero Falso
Ejemplifica cambios en la resistencia de tejido Verdadero Falso

Pretest (v)
Calcula la concentracin de mepiramina en el
Se agreg 0.2 ml de histamina a una bao de rgano aislado y anota la respuesta
concentracin de 1.0x10-5 M a la cmara que con 2 decimales usando el siguiente formato:
contiene la solucin Tyrode de manera que el 1.43x10-5 M. Respuesta:_________M.
volumen final es de 10 ml.
Calcula la concentracin de histamina en el
bao de rgano aislado y anota la respuesta VI. MENU DE EXPERIMENTOS
con 2 decimales usando el siguiente formato:
1.43x10-5 M. Respuesta:_________M.
Es obligatorio desarrollar los experimentos 1, 2
Pretest (vi) y 3; as como discutir sus resultados. Los
experimentos 4 y 5 son OPCIONALES.
Se agreg 0.1 ml de mepiramina a
una concentracin de 2.5x10-6 M a la cmara Experimento 1. Efecto de frmacos sobre el
que contiene la solucin Tyrode de manera que leon aislado de cobayo.
el volumen final es de 10 ml.

9
Experimento 2. Curva dosis-respuesta de
acetilcolina.
Experimento 3. Curva dosis-respuesta y efecto
de antagonistas.
Experimento 4. Estimulacin transmural del
leon de cobayo.
Experimento 5. Efecto de la estimulacin
elctrica transmural de alta frecuencia sobre el
leon.
VII. DESARROLLO DE EXPERIMENTOS
Experimento 1: Efecto de los frmacos sobre
el leon aislado de cobayo (i)
Parte 1. Determine la dosis estndar de
acetilcolina e histamina que produzcan
aproximadamente el 75% de la repuesta.
Selecciona una concentracin baja del agonista
para comenzar con un incremento en la dosis
en una escala logartmica.
Estudia los trazos y completa la tabla que muestra el efecto de
diferentes antagonistas sobre la respuesta tanto de acetilcolina
como de histamina. Responda si no hubo efecto (N) o se bloqueo
el efecto (B)
Acetilcona y atropina
Acetilcona y mepiramina
Histamina y atropina
Histamina y mepiramina
Experimento 2. Curva dosis-respuesta para
acetilcolina.
Antecedentes.
En el experimento 1 se muestra que el tamao
de la respuesta del leon de cobayo vara segn
las concentraciones de acetilcolina. A
concentraciones bajas (subumbrales) no se
observa ninguna respuesta, mientras que a
concentraciones altas se produce una
Anota la respuesta usando el siguiente formato:
1x10-9
Respuesta________________M de ACh y
___________________M de histamina.
N.B. Necesita poner los valores tanto para
acetilcolina como para histamina antes de
presionar Enter (el margen de error es 2%)
(Recuerda que la repuesta mxima es variable).
Parte 2. Efecto de los antagonistas. Determine
el efecto de los antagonistas atropina y
mepiramina sobre el efecto de acetilcolina
(ACh) e histamina. Las concentraciones de ACh
e histamina que se utilizan son las que
producen una contraccin sub-mxima (75%),
que se determinaron en la parte 1 del
experimento.
En cada experimento los antagonistas son
adicionados a la cmara de rgano aislado y
permanecern durante 5 minutos antes de
adicionar el agonista.
N B
N B
N B
N B
respuesta mxima. El incremento de la dosis de
acetilcolina por arriba de este nivel (dosis
supramxima) no producir una mayor
contraccin. Por el contrario, la respuesta que
se registra puede ser menor debido al proceso
de desensibilizacin.
La grfica de la respuesta del tejido contra la
concentracin del frmaco produce una
hiprbola similar a la curva velocidad-sustrato
de una reaccin catalizada enzimticamente
10
(Figura 5a). En farmacologa, la concentracin
del frmaco se grafica en escala logartmica, lo
cual transforma la hiprbola en una curva
sigmoidea simtrica (Figura 5b). De esta
manera, entre el 0.3 y el 0.7 de la respuesta
mxima, la relacin es lineal.
Figura 5. Curva dosis respuesta de un agonista
con las dosis expresadas en escala aritmtica
(a, hiprbola) y logartmicas (b, sigmoidea).
La afinidad es una medida de la fuerza con la
que un frmaco se une a un receptor y el
parmetro que la representa es la constante de
disociacin, KA (tambin conocida como la
constante de equilibrio).
La KA es medida en unidades de concentracin
y est relacionada a la proporcin de receptores
ocupados por un frmaco de acuerdo a la
ecuacin de Hill-Langmuir.
A /K A
y
1 A /K A Parte 3. Compare los puntos elegidos (*) con la
En donde y es la proporcin de receptores
ocupados y [A] es la concentracin del
frmaco A. De esta ecuacin se puede observar
que KA es la concentracin del frmaco a la cual
la mitad de los receptores estn ocupados.
Cuando la concentracin del frmaco A es igual,
KA equivale a 0.5. As, a un valor bajo de KA la
afinidad es alta, as como la fuerza con que se
une el frmaco al receptor.
La recproca de la constante de disociacin (1/
KA), conocida como la constante de afinidad,
puede tambin ser utilizada cuando se discute
la afinidad de un frmaco.
Al menos en teora, es relativamente fcil medir
la afinidad de agonistas por sus receptores. Sin
embargo, en la prctica es mucho ms difcil, ya
que no se puede asumir que la respuesta es
directamente proporcional a la ocupacin del
receptor. Adems, la concentracin del
agonista en los receptores es la misma que la
que se encuentra en la cmara de rgano
aislado.
Otro parmetro que se utiliza tambin para
comparar las potencias de diferentes agonistas
es la dosis efectiva 50 ED50. La ED50 es la
dosis del agonista que produce el 50% de la
respuesta mxima.
Experimento
Parte 1. Determine experimentalmente la
mxima respuesta del tejido (en unidades R) a
acetilcolina y antala en el espacio inferior.
Parte 2. Determinar experimentalmente las
dosis adecuadas de ACh para construir una
curva dosis-respuesta. Para graficar una curva
dosis-respuesta necesita determinar la
concentracin de ACh que solo produzca una
contraccin y la que produzca una contraccin
mxima (obtenido de la parte 1, 1x10-6 M a
8x10-6 M). Ahora debe seleccionar 4
concentraciones ms entre stas, De esta
manera, deber tener un total de 6
concentraciones.
Cuando est seguro de sus ltimas 6 elecciones
presione submit values (enviar valores).
curva dosis-respuesta terica. Piense que hizo
una seleccin adecuada de las dosis? Si no es
as, regrese a la parte 2 del experimento e
intntelo de nuevo.
Observe sus resultados y presione Show
(mostrar) para trazar la curva dosis respuesta
terica.
Informacin adicional
Como se indic previamente, un parmetro til
para comparar la potencia de los diferentes
agonistas es la ED50. Podemos estimar este
valor de una grfica de respuesta contra la
dosis (escala aritmtica, Fig. 5a) por la lectura
de la abscisa, la dosis a la cual se obtiene el
50% de la respuesta. Este estimado est sujeto
a inexactitudes porque el 50% de la respuesta
se encuentra sobre la fase de incremento
empinado de la curva de una hiprbola
rectangular haciendo muy difcil leer con alto
11
grado de resolucin la dosis apropiada sobre la
abscisa. Por el contario, al graficar los
logaritmos de las dosis contra las respuestas,
en lugar de las dosis en escala aritmtica, la
grfica muestra una curva sigmoidea, la cual,
como se mencion, es lineal entre
aproximadamente 0.3 y 0.7 de la respuesta
mxima, facilitando as la estimacin de la ED50.
La seleccin de dos respuestas con dosis
conocidas del agonista que entran en este
rango nos permite calcular la pendiente del
rango lineal a partir de la siguiente ecuacin:
(R1 R2)
Pendiente
(log X1 log X2 )
Donde R1 y R2 son las respuestas a las
concentraciones X1 y X2 del frmaco,
respectivamente.
Una vez que se determina la pendiente
podemos utilizar la misma ecuacin para
calcular adecuadamente la ED50.

Pregunta 1. Explique Por qu cuando se incrementa la dosis de acetilcolina por arriba de un cierto
nivel no se produce un incremento en el tamao de la respuesta?

__________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________

Compare su respuesta con la del modelo que se muestra al presionar la instruccin enter.

Experimento 3. Curva dosis respuesta y el

efecto de los antagonistas El protocolo experimental es el siguiente:

Muchos antagonistas en uso clnico que 1) Probar el efecto de una concentracin

antagonizan los efectos de los
neurotransmisores qumicos son mediadores
de procesos fisiolgicos/patolgicos. Un
antagonista competitivo se combina con el
mismo sitio receptor del agonista y su unin
puede ser irreversible, parcial completamente
reversible. Los antagonistas competitivos no
estimulan al receptor cuando se unen a l, pero
previenen el acceso del agonista y bloquean su
accin. Los antagonistas fisiolgicos son
frmacos agonistas que se combinan y
estimulan a los receptores mediadores de un
efecto opuesto; p.ej., la ACh se combina con
receptores muscarnicos en el leon de cobayo
mediando la contraccin muscular mientras que
la adrenalina se combina con los
adrenoreceptores mediando relajacin
muscular.
En este experimento podr determinar el efecto
de un antagonista competitivo (atropina) sobre
la respuesta del leon a la acetilcolina sobre los
receptores muscarnicos.
conocida (efectiva) de acetilcolina sola.
2) Lavar completamente la preparacin.
3) Adicionar una concentracin conocida
(efectiva) del antagonista por 5 min* a la
preparacin del ilen.
4) Probar el efecto de la misma concentracin
de la acetilcolina (como en el paso 1).
5) Lavar completamente la preparacin
(recuerde que para remover el antagonista se
requiere de mltiples lavados en un
experimento real).
6) Repetir el paso 1.
* Periodo de incubacin suficiente para permitir
que el antagonista se mezcle de manera
homognea en la cmara de rgano aislado.
Parte 1. Adicione atropina al bao seguido de
una dosis estndar de acetilcolina (8x108 M).
Compare la respuesta a acetilcolina en la
presencia de atropina con el control (agonista
solo). Determine la dosis de atropina que

12
produzca una reduccin mayor del 50% en la
respuesta a la acetilcolina.
Escribe la respuesta usando el siguiente
formato 1x10-9:
___________________________________
___________________________________
N.B. Necesita poner los valores tanto para
acetilcolina como para histamina antes de
presionar Enter.
(El margen de error es 2%)
Parte 2. Ahora construya una curva dosis
respuesta de acetilcolina en la presencia de
atropina en una concentracin de 4x10-9 M. El
programa lava automticamente la preparacin
entre cada dosis.
Parte 3. Compare los puntos elegidos con la
curva terica. Considere que elegi los puntos
adecuados para una CDR?
_____________________________________
_____________________________________
En la presencia de un antagonista competitivo
reversible (atropina) podemos observar que la
grfica dosis-respuesta del agonista en Log10 se
desplaza hacia la derecha en forma paralela
(Figura 6).
Figura 6. Curva dosis respuesta de un agonista
solo y en presencia de diferentes dosis de un
antagonista competitivo reversible.
La ocupacin del receptor al agonista (A) en la
presencia de un antagonista irreversible
competitivo (B) puede describirse por una
modificacin de la ecuacin Hill-Langmuir.
A B /K A
y
1 A B /K A [B]/KB
En donde y es la proporcin de receptores
ocupados por el agonista, [A]B y KA son la
concentracin y la constante de disociacin del
agonista, respectivamente; y, [B] y KB son la
concentracin y constante de disociacin del
antagonista, respectivamente.
Esta ecuacin implica que la ocupacin del
receptor por el agonista se reduce en presencia
de un antagonista; sin embargo, el incremento
de la concentracin del antagonista puede
superar el bloqueo y restaurar la ocupacin del
receptor. La presencia del antagonista desplaza
la curva dosis-respuesta del agonista hacia la
derecha sin alterar su pendiente o respuesta
mxima. Estas propiedades pueden observarse
en los datos experimentales. Para la misma
amplitud de la respuesta, el mismo nmero de
receptores deben estar ocupados por el
agonista, independientemente de la presencia
del antagonista. Bajo stas condiciones, las dos
formas de la ecuacin de Hill-Langmuir en la
ausencia y presencia del antagonista, son
equivalentes y pueden ser expresadas de la
siguiente manera:
A B / [A] - 1 [B] / K B
En donde [A] y [A]B son las concentraciones del
agonista que producen la misma amplitud de la
respuesta en ausencia y presencia del
antagonista, respectivamente. Esta ecuacin es
conocida como la ecuacin de Schild y [A]B/[A]
expresa la proporcin de la dosis; adems
implica que el desplazamiento hacia la derecha
de la dosis en Log10 del agonista inducido por el
antagonista depende de la afinidad del
antagonista por el receptor y la concentracin
utilizada.
As, determinando las concentraciones del
agonista que producen la misma amplitud de la
respuesta en la ausencia y presencia de una
concentracin conocida del antagonista,
podemos obtener un estimado de la constante
de disociacin del antagonista (KB).
El clculo de la ED50 de la acetilcolina sola y en
la presencia de atropina nos permite estimar la
constante de disociacin de la atropina sobre
13
los receptores muscarnios del leon de cobayo
utilizando la ecuacin de Schild.
Parte 1. Calcule la ED50 (con dos decimales).
Escribe la respuesta utilizando el siguiente
formato: 1x10-9.
N.B. Necesita colocar los valores tanto de
acetilcolina como de histamina antes de
presionar Enter
(El margen de error es 2%).
Frmula:
(R1 R50%)
Pendiente
(log X1 log X50% )
Sabemos que:
R1 es 22, la respuesta mxima es 60, la
pendiente es 36.67 y el Log[X1]=-7.00.
Utiliza los botones Show/Hide de abajo para
obtener informacin adicional.
Parte 2. Calcule la proporcin de la dosis (DR).
ED50 con antagonista
Frmula: DR
ED50 sin antagonista
Sabemos que:
ED50 (con antagonista)=1.59x10-7
ED50 (sin antagonista)=3.24x10-8
Utilice los botones Show/Hide de abajo para
mostrar informacin adicional.
Parte 3. Calcule la constante de disociacin
(KB) para atropina (con dos decimales). KB es la
concentracin del frmaco que ocupa el 50% de
los receptores.
Escriba la respuesta usando el siguiente
formato 1.43x10-5 M.
Morfina
Clonidina
Atropina
Naloxona
Fentolamina
__________________________________
Ecuacin de Gaddum-Schild:
1 [B]
DR
KB
Donde DR es la proporcin de la dosis, [B] es la
concentracin de atropina y KB es la constante
de disociacin de la atropina.
Sabemos que DR=5 y [B]=4x10-9 M (dosis que
produce una reduccin mayor al 50% en la
respuesta a ACh).
Utilice los botones Show/Hide de abajo para
mostrar informacin adicional.
Experimento 4. Estimulacin transmural del
leon de cobayo
Parte1. Determine el voltaje del estmulo al cual
se produce una respuesta submxima.
Para las tres partes de este experimento se
utilizar una frecuencia de estmulo de 0.1 Hz (6
estmulos, 0.1 ms de duracin, por minuto a
intervalos de 10 s), sta ser la configuracin
estndar a menos que se especifique otra cosa.
Parte 2. Determine el efecto de diferentes
frmacos sobre la respuesta a la estimulacin
transmural (frecuencia de estmulo de 0.1 Hz y
un voltaje ptimo de 10V).
Analice los trazos y completa la tabla para el
efecto de cada uno de los frmacos sobre la
estimulacin transmural a 0.1 Hz. Seleccione la
respuesta adecuada: (N) sin efecto, (PB)
bloqueo parcial, , (B) bloqueo total.
N PB B
N PB B
N PB B
N PB B
N PB B
14
Estos resultados sugieren que (contesta verdadero o falso):

La estimulacin transmural (0.1 Hz) causa la liberacin de opioides Verdadero Falso

La estimulacin transmural (0.1 Hz) causa la liberacin de Verdadero Falso
acetilcolina
La estimulacin transmural (0.1 Hz) causa la liberacin de Verdadero Falso
noradrenalina
La activacin de los adrenoreceptores causa que el leon se relaje Verdadero Falso

La activacin de los receptores opioides causa que el leon se Verdadero Falso

contraiga

Informacin adicional
La estimulacin transmural de baja frecuencia
del leon de cobayo libera ACh por activacin de
las terminales nerviosas parasimpticas. La
ACh produce contraccin del msculo liso del
leon al actuar sobre sus receptores
muscarnicos. Si se liberarn opioides, la
naloxona bloqueara cualquier efecto sobre la
preparacin, y esto no sucede. De manera
similar parecera que esta estimulacin no
produce la liberacin de noradrenalina de las
terminales nerviosas simpticas. El bloqueo
parcial observado por morfina y clonidina
sugiere que la activacin de los receptores
opioides y los adrenoreceptores por ligandos
exgenos bloquea parcialmente el tamao de la
contraccin producida por la estimulacin
transmural de baja frecuencia.
Parte 3. Determine el efecto de la fentolamina
(10-7 M) y naloxona (10-7 M) sobre la respuesta
de la clonidina y morfina, respectivamente.
De los trazos que muestran los efectos de la
naloxona y la fentolamina sobre las acciones de
la morfina y clonidina. Selecciona la respuesta
adecuada: (N) sin efecto, (PB) bloqueo parcial,
, (B) bloqueo total.

Morfina y naloxona N PB B
Clonidina y fentolamina
N PB B

Atropina y fentolamina
N PB B
Clonidina y naloxona
N PB B

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Estos resultados sugieren lo siguiente (contesta verdadero o falso):

Naloxona antagoniza el efecto de la morfina exgena sobre Verdadero Falso

los efectos de la estimulacin transmural (0.1 Hz)

Fentolamina no tiene efecto sobre los efectos de la clonidina Verdadero Falso

exgena en los efectos de a estimulacin transmural (0.1 Hz)

Naloxona bloquea los adrenoreceptores del msculo liso del Verdadero Falso
leon

Clonidina acta como un agonista sobre los receptores Verdadero Falso

opioides del msculo liso del leon

Informacin adicional Parte 2. Determine el efecto de la naloxona bajo

Tanto la morfina como la clonidina producen
relajacin del tejido, disminuyendo as la
contraccin producida por la estimulacin
transmural. El efecto relajante de ambos
agonistas es revertido por sus antagonistas
especficos (naloxona y fentolamina;
respectivamente), mostrando una recuperacin
del efecto contrctil del tejido producido por la
estimulacin transmural. La fentolamina es un
antagonista que acta a travs de los
receptores adrenrgicos alfa, impidiendo de esa
manera el efecto de la clonidina.
Experimento 5. Efecto de la estimulacin
transmural de alta frecuencia en el leon
el siguiente protocolo experimental:
i) Estimular a 0.1 Hz durante un minuto-
CONTROL.
ii) Adicionar naloxona (10-7 M) a la cmara de
rgano aislado sin estimular al tejido.
iii) Esperar 5 minutos y estimular otra vez a 10
Hz durante 5 minutos.
iv) Estimular a 0.1 Hz durante 1 minuto.
v) Lavar vigorosamente.
vi) Estimular a 0.1 Hz durante un minuto.

Parte1. Control. La estimulacin transmural del Parte 3. Determine el efecto de la fentolamina

leon de cobayo a alta frecuencia (10 Hz) induce
la liberacin de sustancias que modifican el
efecto de la ACh liberada por la estimulacin de
baja frecuencia (0.1 Hz). Los siguientes
experimentos se realizan bajo el siguiente
protocolo experimental:
i) Estimular al tejido con 0.1 Hz durante
un minuto-respuesta basal (RB).
ii) Estimular a 10 Hz durante 5 minutos.
iii) Estimular a 0.1 Hz durante un minuto-
respuesta postestimatoria (RPE).
bajo el siguiente protocolo experimental.
i) Estimular a 0.1 Hz durante un minuto-
CONTROL.
ii) Adicionar fentolamina (10-7 M) a la cmara
de rgano aislado sin estimular al tejido.
iii) Esperar 5 minutos y estimular otra vez a 10
Hz durante 5 minutos.
iv) Estimular a 0.1 Hz durante 1 minuto.
iv) Lavar vigorosamente

iv) Lavar vigorosamente v) Estimular a 0.1 Hz durante un minuto.

v) Estimular a 0.1 Hz durante un minuto.

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Parte 4. Evaluacin

La estimulacin del leon a una frecuencia de 0.1 Hz libera ACh Verdadero Falso
causando que el leon se contraiga

La estimulacin del leon a una frecuencia de 10 Hz libera una Verdadero Falso

sustancia que modifica la respuesta del leon a la ACh

Las sustancias liberadas incrementan la respuesta del leon a la Verdadero Falso

liberacin de ACh

Naloxona bloquea el efecto de las sustancia liberadas Verdadero Falso

Las sustancias liberadas incrementan la respuesta del leon a la Verdadero Falso
liberacin de ACh

Informacin adicional V. LECTURAS RECOMENDADAS

La estimulacin del leon a alta frecuencia (10

Hz) libera sustancias que reducen el efecto de
la ACh liberada de terminales nerviosas por
estimulacin elctrica de baja frecuencia (0.1
Hz). Sabemos, de experimentos previos, que
tanto morfina como noradrenalina tienen
efectos similares; sin embargo, como solo la
naloxona revierte estos efectos, los resultados
sugieren que la estimulacin a alta frecuencia
del tejido libera encefalinas endgenas, pero no
noradrenalina.
Golan DE, Tashjian AH, Armstrong EJ,
Armstrong AW. Principles of pharmacology: the
pathophysiologic basis of drug therapy. 2a. Ed.
Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins,
2005.
Rang HP, Dale MM, Ritter JM, Gardner P.
Pharmacology. 5a. Ed. New Cork: Churchill
Livingstone, 2003.
Rodrguez Carranza R. Farmacodinamia. En:
Gua de Farmacologa y Teraputica. 2
edicin. Rodrguez R, Campos AE, Vidrio H
(eds). McGraw-Hill Interamericana, 2009:28-37.
e). McGraw-Hill Interamericana, 2009: 28-37.

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