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Facultad de Ciencias
ESTIMACION DEL CRECIMIENTO CELULAR POR METODOS INDIRECTOS
Bsicas
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Estudiantes del Programa de Biologa, Facultad de Ciencias Bsicas, Universidad del Atlntico Km 7
Antigua va Puerto Colombia
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Resumen:
En la realizacin de la prctica de laboratorio se efectu la determinacin de la turbidez (turbidimetra)
mediante el uso del espectrofotmetro (Lector de ELISA), tomando como objeto de estudio: caldo ms
extracto y bacteria. Esto se realiz con el fin de controlar y estimar el crecimiento bacteriano frente
diversos agentes (flores 1, flores 2, macroalgas 1, macroalgas 2, neem biotec 1 y neem biotec 2). Los
resultados fueron graficados y comparados con literatura cientfica.
Palabras claves: Turbidimetra, espectrofotmetro, macroalgas, neem biotech.

Introduccin la placa del mismo cultivo esta correlacin se


Cuando un haz de luz paralelo golpea una puede utilizar en estimaciones futuras del
partcula en suspensin, parte de luz es nmero de bacterias obtenidas directamente por
reflejada, parte es diseminada, parte es turbidimetra. En una suspensin microbiana la
absorbida y parte es trasmitida. La turbidimetra cantidad de microorganismos est directamente
es aquella que mide la luz dispersada como un relacionada con la turbiedad o densidad ptica
decrecimiento de la luz transmitida a travs de [1].
la solucin, utilizando para ello un
espectrofotmetro [1]. Este equipo utiliza las Metodologa
propiedades de la luz y su interaccin con otras En un microplato de 96 pocillos, enumerado en
sustancias, para determinar la naturaleza de las forma horizontal del 1 al 12 y en forma vertical
mismas y se usa en el laboratorio con el fin de de la letra A hasta la letra H, cada grupo
determinar la concentracin de una sustancia en adiciono dos muestras de un mismo extracto.
una solucin, permitiendo as la realizacin de Para ello a cada grupo el profesor le asigno dos
anlisis cuantitativos. Adems de ellos, tambin respectivos pocillos y una sustancia a evaluar.
se puede determinar como una medicin El grupo 1 tuvo asignado los pocillos 1D, 2D y el
logartmica del instrumento denominada extracto Flores 1, el grupo 2 pocillos 4D, 5D y el
absorbancia, o como un valor derivado del extracto Flores 2, grupo 3 pocillos 7D, 8D y
porcentaje de transmisin [2]. extracto Macroalgas 1, grupo 4 pocillos 10D,
Los mtodos de dispersin de la luz son las 11D y extracto Macroalgas 2, en nuestro caso
tcnicas ms utilizadas para monitorear el como grupo 5 los pocillos asignados fueron 1E,
crecimiento de los cultivos bacterianos. Para los 2E y el extracto Neem biotec 1 y al grupo 6 se le
bilogos moleculares, bioqumicos y fisilogos fue asignado los pocillos 4E, 5E y extracto
bacterianos una medida del crecimiento, es el Neem biotec 2. Adems de ello se aplicaron los
incremento de biomasa. La absorbancia es controles C-, C+, H2O y BLK, ubicados en los
aquella, que se utiliza para graficar el pocillos 1G, 2G; 5G, 5G; 7G, 8G y 2H.
crecimiento bacteriano o celular. Cuando las Luego de esto se procedi por grupo a llenar en
bacterias estn en fase logartmica de los pocillos correspondientes, 170L de caldo
crecimiento o de declinacin la representacin con ayuda de una micropipeta a la cual se le
de la absorbancia frente al tiempo forma una cambia la punta para agregar 10L de extracto;
lnea casi recta. Si las lecturas de la por ultimo realizando nuevamente el cambio de
absorbancia son compatibles con el recuento en la punta se agrega 20L de bacteria. Al terminar
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el procedimiento, el microplato se introdujo en el
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lector ELISA a las 8:30 para su respectivo
conteo, el cual se volvi a realizar en 5
intervalos de una hora, obteniendo los datos
desde el T0 (tiempo cero) hasta el T6 y siendo
estos promediados, calculado su desviacin
estndar, graficados y tabulados.

Resultados

Tabla 1. Tiempos tomados a partir del lector


ELISA, en el crecimiento de las bacterias.
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Tabla 2. Tiempos promedios entre los tiempos bacterias requieren para crecimiento. Los
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de cada extracto, desviacin estndar de cada resultados obtenidos de la prctica de
tiempo promedio y extracto y diferencia de los laboratorio y evidenciados en las tablas y grafica
tiempos (T0-T0, T0-T1, T0-T2 y as sucesivamente (D.O vs tiempo) nos muestran que los cultivos
hasta llegar al T0-T6) que ms contribuyeron al crecimiento de la
bacteria E.Coli, fueron a los que se les adiciono
extracto de flores y macroalgas, esto se puede
Figura 1. Crecimiento de la bacteria. deducir ya que las macroalgas en general,
cuentan con una presencia de macronutrientes
como: H, C, N, O, F, Na, K, Mg y
0.2 micronutrientes: Mn, Cu, Co, Zn, Mo y en el
C- caso de las Flores estas cuentan con la
0.15 C+ presencia de macronutrientes: N, P, K, Ca, Mg,
Agua S y micronutrientes: B, Co, Fe, Mn, Zn y las
0.1
bacterias necesitan nutrientes (H2O, CO2,
Ext. 1
fosfor, azufre, nitrgeno), sales minerales (ion
Ext. 2
potasio, ion magnesio, ion calcio, ion hierro y
0.05 Ext. 3 cantidades minsculas de Mn, Co, Mo, Zn, Ni,
Ext 4 para su crecimiento. De igual manera en los
0 Ext 5 resultados obtenidos y evidenciados en la
0 1 2 3 4 5 6 7 8 Ext 6 grfica se observa que al cultivo que se le
-0.05
agrego extracto de neem-biotec es el que
muestra un menor crecimiento en comparacin
a las Macroalgas 1, 2 y Flores 1, 2.
Anlisis Este extracto presenta unas propiedades y
Los mtodos turbidimetricos (pticos), son actividades antimicrobianas contra la E.Coli.
mayormente utilizados en las prcticas de Esto se debe a que las sustancias
laboratorio. Estos consisten en la medicin de la antibacterianas de origen microbiano
cantidad de la luz dispersada o transmitida a (antibitico) puede actuar como microbiostatico,
travs de un cultivo bacteriano. Las es decir que inhibe en el crecimiento de
suspensiones bacterianas dispersan la luz al microorganismos y se denominara
igual que cualquier partcula pequea bacteriosttico [3].
suspendida en agua [1]. Lo cual se pudo
observar en los resultados obtenidos en este
laboratorio, adems de ello se resalta que una Bibliografa
medida del crecimiento bacteriano es el
incremento de biomasa. [1] Mara de los ngeles Aquiahualt Ramos
Desde el punto de vista biosinttico, las y Mara de Lourdes Prez Chabela. Manual
bacterias se pueden dividir en auttrofas, las de prcticas del laboratorio de Microbiologa
cuales crecen sintetizando sus materiales a general, primera edicin: 2002, Universidad
partir de sustancias inorgnicas sencillas y Autnoma Metropolitana, Iztapalapa.
hetertrofas, en estas su fuente de carbono es
orgnica. Sean las bacterias auttrofas o [2] Ordonez Smith, Guias oracticas para
hetertrofas, todas necesitan captar una serie laboratorio de bacteriologa, editorial
de elementos qumicos, que se pueden Panamericana.
clasificar en macronutrientes (C, H, O, N, P, S,
K, Mg) y micronutrientes (Co, Cu, Zn, Mo) [3]. [3] Michael T Madigan, John M. Martinko Y Jack
Dichos nutrimientos, son los que las clulas o Parker, Biologa de microorganismos, 10edicin,
editorial Pearson Pertice Hall.
ANEXOS

1 Qu factores biticos y abiticos controlan el crecimiento celular?

Los factores abiticos que influyen en el crecimiento celular, son el pH, el oxgeno y la
temperatura. Los factores biticos, La disponibilidad de agua, La acides o alcalinidad de un
medio, la temperatura.
2 Cul fue el extracto que produjo la mayor inhibicin del crecimiento de E. coli?

Segn los resultados que arroj la grfica, el extracto que ms inhibi el crecimiento de la
bacteria fue el #3, es decir, el extracto de macroalgas 1.
3 A qu se puede atribuir el efecto inhibitorio del extracto seleccionado en la
pregunta anterior?

Si se dice que el extracto posee un efecto inhibitorio, se puede intuir que este tiene
actividad antimicrobiana. Segn estudios realizados por la UdeA (Universidad de Antioqua),
se le puede atribuir a los extractos metanolicos de algunas macroalgas que se encuentran
en el Caribe colombiano, ese efecto inhibitorio.
- (http://www.redalyc.org/pdf/1698/169818107005.pdf - Estudio de la actividad
antimicrobiana de los extractos alcohlicos de algunas macroalgas del Caribe Colombiano)