Biparticin o microciruga de embriones

Fotos: Biotecnologa de la Reproduccin, Facultad de Veterinaria (Universidad de la Repblica, Uruguay)

Produccin de mellizos idnticos: se hace dividiendo los embriones en 2 mitades iguales
y obteniendo dos terneros. Se hace con un embrin que podemos obtener por cultivo in
vitro o por transferencia de embriones. Los embriones deben estar en el da 7 o 7 y
(mrula compacta o blastocisto).
Aplicaciones de la tcnica:
- Aumenta la eficiencia en un programa de transplante de embriones, ya que
aumenta el nmero de terneros obtenido por cada vaca donante, adems de reducir los
costos.
- Reduce el intervalo intergeneracional
- Permite la disponibilidad de animales idnticos para un programa de pruebas de
progenie.
- Aumenta el progreso gentico, disminuye la varianza.
- Investigacin bsica: se prueban varios medios de cultivo para los
hemiembriones para ver en cuales se desarrollan mejor.
- Para ver interaccin:
* Genotipo-ambiente
* Genotipo-ao (las mitades se implantan en aos diferentes)
* Efectos de las receptoras (se implantan dos mitades en 2 receptoras diferentes
y se ven las variaciones)

Ventajas: permite planear el momento en que se producen los mellizos.

Desventajas: No se puede prever xito individual de la tcnica. Organizacin compleja y
personal calificado.

Se usan embriones de calidad buena y muy buena, para obtener altos porcentajes de
preez. Se pueden usar mrulas o blastocistos. Las mrulas tienen la ventaja que son
todas iguales y es ms fcil cortar la misma cantidad en 2 partes. En el blastocisto, para
cortar, tenemos en cuenta el macizo celular interno (que en cada mitad quede un 50%
de este).
Materiales: lupa, micropipetas de vidrio (de corte y de sostn), micromanipuladores (se
pueden usar de 1 a 4), microbistur, medio de biseccin (sin suero fetal; sirve para que
el embrin se adhiera a la placa y as lo podamos cortar).
Toda la tcnica se realiza debajo de la lupa. Las pipetas de sostn chupan el embrin por
presin y lo sostienen. El embrin se pega a la placa de Petri y luego se posiciona y se
corta.
En el corte se puede herrar hasta en un 10%. Los embriones cortados se dejan
cultivando durante 4 horas para ver su expansin.
El xito de la tcnica se evala si obtenemos una diferencia en el porcentaje de preez
de menos del 10% con respecto al porcentaje de preez implantando embriones
enteros.
Se obtiene un 25% en mellizos idnticos en el caso de implantar embriones de calidad
buena y muy buena. Si lo hacemos con embriones de calidad media o regular,
tendramos el 15% solamente.
La tasa media de preez es de un 50-60%.
Se necesitan 3 a 4 embriones enteros para obtener 1 par de mellizos idnticos.
La prdida de masa celular no debe ser mayor al 10%.
La produccin de mellizos idnticos por medio de esta tcnica, nos permite aumentar
entre 0,6-0,7 a 1,0-1,1 terneros por embrin obtenido.
Se incrementa la eficacia en un programa de transferencia de embriones entre un 30 y
un 40%.

Determinacin del sexo de los embriones: atravs de biopsia del embrin y luego por la
tcnica de PCR

Texto: Gissel Escudero

Gemelos idnticos obtenidos por biparticin de embriones (Japn)

Leer ms: http://www.reproduccionveterinaria.com/tecnologias-y-biotecnologias-de-la-
reproduccion/biparticion-o-microcirugia-de-embriones/

Qu es una Transferencia de Embriones?

Es una tcnica para el mejoramiento gentico del ganado, consiste en provocar

que una vaca o novilla "donadora", mediante un tratamiento hormonal e
inseminacin con un toro probado con un alto valor gentico, produzca varios
embriones que siete das despus le son extrados para ser transferidos a otras
hembras receptoras, que previamente fueron sincronizadas con el calor de la
"donadora". La receptora no transmite ninguna caracterstica gentica a la cra
y slo sirve para mantenerla hasta el parto y durante la lactancia.

Por qu se Realiza la Transferencia de Embriones?

En condiciones normales, cada vaca produce una sola cra al ao, lo cual
significa que cuando mucho producir 6 a 8 becerros durante su vida. A travs
de la inseminacin artificial se pueden obtener miles de cras de un toro; con la
transferencia de embriones se han llegado a tener ms de cien cras de una
vaca durante su vida productiva, lo cual facilita el mejoramiento gentico, con
el consecuente incremento de la produccin de carne y/o leche.

Qu otras Ventajas tiene la Transferencia de Embriones?

Permite hacer una rigurosa seleccin por el lado materno logrando un progreso
gentico acelerado.

Se pueden obtener cras de novillas que an no alcanzan la edad y peso para

cargarse, ya que ser la receptora quien se encargue de mantener la preez y
parir la cra.

Es posible obtener becerros de vacas de alta calidad que por enfermedad o

edad avanzada ya no son capaces de producir por si mismas una cra.

Con la ayuda de la biparticin de embriones se pueden obtener partos

gemelares y aumentar la cosecha de becerros, sin el riesgo de obtener hembras
estriles ya que ambas cras, por proceder del mismo embrin, sern del mismo
sexo.

Es una excelente ayuda para evaluar la capacidad fertilizadora de los

sementales, as como para determinar si son portadores de algunos defectos
hereditarios.

A travs de congelamiento de embriones y de la fertilizacin en el laboratorio se

pueden tener cras de donadoras que ya murieron.

Existen algunas Desventajas en este Procedimiento?

Normalmente se requiere de una fuerte inversin inicial debido al alto costo de
las hormonas, equipo y mano de obra, as como de la alimentacin de
donadoras y receptoras antes y despus de la transferencia.

El procedimiento est constituido por infinidad de detalles que deben realizarse

a la perfeccin para lograr buenos resultados, por lo que se debe contar con
personal altamente capacitado para llevarlo a cabo.

La principal desventaja es la imposibilidad para predecir los resultados, ya que

hay mucha variacin en la produccin de embriones por cada donadora;
adems de que muy fcilmente una pequea falla en el proceso reduce
drsticamente el porcentaje de gestacin.

Es Redituable hacer Transferencia de Embriones?

A pesar de los altos costos que tiene un programa de esta naturaleza, si se

efecta cuidando los detalles se obtendr un nmero de cras que permitir
recuperar la inversin y obtener buenas ganancias, ya que los becerros son
muy bien cotizados, tanto por su calidad gentica, como por el hecho de haber
sido procreados a travs de esta tcnica.

El procedimiento de la transferencia de embriones est formado por

estos puntos:

1.- Seleccin de donadoras, sementales y receptoras.

2.- Superovulacin e inseminacin de las donadoras.
3.- Sincronizacin estral donadora - receptoras.
4.- Recoleccin y evaluacin embrionaria.
5.- Transferencia a la receptora.
6.- Congelacin, refrigeracin y microciruga embrionaria.

Qu Caractersticas deber tener una Donadora?

Desde el punto de vista gentico, debe ser un animal sobresaliente en cuanto a

produccin de carne y/o leche, evaluando esto tanto en base a su propia
produccin como las de sus hijos e hijas. No debe descuidarse el aspecto del
tipo del animal, ya que muchas veces es lo que da mayor valor comercial a las
cras.

Adems debe ser un animal con buenos antecedentes reproductivos,

presentando ciclos estrales de duracin normal, con buena fertilidad
(cargndose con uno o dos servicios o en un mximo de dos empadres), sin
defectos anatmicos en el aparato reproductor.

En el aspecto sanitario, debern estar libres de enfermedades, especialmente

aquellas que afectan la funcin reproductiva; segn la regin, debern estar
sometidas a un estricto programa de vacunacin y desparasitacin para
garantizar un buen estado de salud.

Debern estar en perfectas condiciones fsicas, ni gordas ni flacas, para obtener

los resultados esperados.

De preferencia deben emplearse en este programa toros probados, en

produccin y tipo, para garantizar la calidad de las cras. Si se emplea un toro
no probado, los becerros resultantes quiz tengan menos valor que todo lo que
se invirti para producirlos.

Cmo se Selecciona a una Receptora?

Prcticamente seguimos los mismos puntos que en las donadoras, pero se

pueden emplear animales de cualquier raza o cruza (el cruzamiento aumenta la
fertilidad), sin importar su produccin, pero teniendo en cuenta que se trate de
animales jvenes, sanos, con buen desarrollo corporal, especialmente de la
pelvis (ya que muchas veces tendrn que parir becerros muy pesados), en
perfecto estado nutricional, dciles y fciles de manejar y con una produccin
de leche suficiente para criar hasta el destete a su becerro.

Qu Significa Superovulacin?

Es el trmino empleado al referirnos a la produccin de ms de una ovulacin

(que es lo que sucede normalmente), mediante la aplicacin de hormonas que
estimulan a los ovarios de la vaca, con la finalidad que al inseminarla produzca
un nmero mayor de embriones.

Para esto se usa una hormona (FSH), que hace que en ambos ovarios de la vaca
se desarrollen varios folculos, los cuales ovulan despus de que la donadora
sale en calor al aplicarle otra hormona, prostaglandina, dos das despus de
haber empezado a inyectarle FSH; sta se le inyecta cada 12 horas por va
subcutnea durante 4 das.

Normalmente en estos programas se emplea la inseminacin artificial de la

donadora, dando un servicio a las 12 horas y otro a las 24 horas de detectado el
celo. Esta doble inseminacin se debe a que el perodo de ovulacin puede
llegar a ser de hasta 24 horas en las donadoras superovuladas.

Cmo se Sincronizan los Calores entre la Donadora y la Receptora?

Para sincronizar los estros entre la donadora y la receptora se pueden utilizar

sincronizadores de estro inyectados (prostaglandinas), aplicndose dos veces
con intervalo de 11 das, de tal forma que la segunda aplicacin se realice un
da despus de haber empezado a superovular a la donadora. Tambin se
pueden emplear sincronizadores en forma de implante, que se colocan
subcutneamente en la oreja de cada receptora 7 das antes de iniciar la
superovulacin y se retiran dos das despus de haberla comenzado. Con
cualquiera de estos mtodos, las receptoras deben estar en celo al mismo
tiempo que la donadora o cuando mucho un da antes o uno despus que ella;
si manifiestan el estro en cualquier otro da no ser posible utilizarlas para la
transferencia.

Cmo se Recolectan los Embriones?

Mediante un sencillo lavado de tero de la donadora, empleando para ello una

solucin salina a la que se adiciona albmina srica y antibiticos.
Primeramente se le aplica anestesia epidural en la base de la cola para evitar
las contracciones del recto y que permita la manipulacin del tero durante los
15 a 20 minutos que dura el lavado. Se introduce hasta el tero una sonda de
hule ltex que se fija mediante el inflado de un globo que tiene cerca de la
punta. Con ayuda de mangueras de hule se introducen unos 100-200 mililitros
de la solucin al tero y por palpacin se da masaje a los cuernos uterinos para
desprender los embriones y se extrae la solucin hacia un filtro que retiene a
los embriones, dejando pasar slo el lquido. El proceso se repite varias veces
hasta agotar un litro de solucin para tener la seguridad de que salieron los
embriones.

Si el lavado se hizo en forma adecuada es muy poco probable que quede algn
embrin en el tero, pero para mayor seguridad se aplican prostaglandinas a la
donadora para provocarle un calor y evitar que quede cargada.

Los embriones son microscpicos, por lo cual necesitamos localizarlos en el

laboratorio con la ayuda de un microscopio estereoscpico. Una vez terminado
el lavado, el filtro se vaca en un recipiente de plstico y se enjuaga con
solucin a presin. El recipiente se revisa a 15 aumentos y al localizar cada
embrin se va pasando con una pipeta a otro recipiente ms pequeo que
contiene la misma solucin con ms albmina.

Slo sirven para transferencia aquellos embriones que estn en un estado de

desarrollo de mrula o blstula, que es lo normal a los 7 das despus de la
fecundacin. Los vulos que no fueron fecundados y los embriones de escaso
desarrollo son desechados.

En base a qu se Clasifican los Embriones?

Los embriones transferibles son muy parecidos entre s, pero pueden tener
cierta diferencia en su desarrollo y en sus caractersticas morfolgicas. En base
a esto se les clasifica de la siguiente manera:

CALIDAD 1.- Excelente, sin ningn defecto.

CALIDAD 2.- Bueno, con defectos leves.
CALIDAD 3.- Regular, con defectos mayores, pero apto para ser
transferido.

Los embriones de estas tres calidades pueden ser transferidos en "fresco"

(inmediatamente) o refrigerados (a 4C hasta por 24-48 horas), pero slo los de
calidad 1 y 2 pueden ser congelados, ya que los de calidad 3 no resisten la
congelacin.

Qu Mtodos se emplean para Transferir los Embriones?

Actualmente ya no es necesario operar a las receptoras para transferirles el

embrin. Se emplea un mtodo no quirrgico muy sencillo, parecido a una
inseminacin artificial. Con la receptora anestesiada epiduralmente, se
introduce el embrin en una pajilla similar a las empleadas para el semen y se
deposita con un aplicador en la parte ms profunda de el cuerno uterino del
mismo lado donde se encuentra el cuerpo lteo (palpado previamente), que es
el lugar en que ovul y ser el responsable de mantener la gestacin.
Normalmente se transfiere un solo embrin por receptora, ya que si le
depositan dos se corre el riesgo de que nazcan un macho y una hembra y sta
puede resultar estril.

Cmo se Refrigeran y Congelan los Embriones?

La refrigeracin nos permite tener viables los embriones hasta por 24-48 horas,
colocndolos dentro de recipientes en un refrigerador casero o de laboratorio,
que nos de una temperatura de 4C (sobre cero).
Para la congelacin, que mantiene viables a los embriones durante aos, se
requiere aadir 10% de glicerol a la solucin salina para que proteja al embrin
durante el proceso de congelacin. El embrin se coloca en una pajilla
previamente identificada con los datos de la donadora y del embrin, y con la
ayuda de un congelador manual, o una congeladora computarizada, se enfra
lentamente hasta -7C (bajo cero), se provoca que empiece a formarse hielo en
la solucin, luego se enfra ms lentamente hasta -35C; finalmente se pasan
las pajillas al tanque con nitrgeno lquido a -196C, donde se almacenarn los
embriones hasta ser descongelados y transferidos.

Los embriones se descongelarn en forma parecida a la descongelacin del

semen, colocando la pajilla a temperatura ambiente por 12 segundos y en bao
mara a 37C durante 10 segundos. Posteriormente se extrae el embrin de la
pajilla y, observndolo al microscopio, se pasa por varias soluciones con
concentraciones decrecientes de un azcar, sacarosa, para retirarle el glicerol
que se le puso antes de congelarlo, se vuelve a evaluar la calidad del embrin y
se transfiere a la receptora. Si se emple etiln - glicol para la congelacin, no
es necesario retirrselo y simplemente se descongela el embrin y se transfiere
directamente a la receptora.

La biparticin embrionaria consiste en dividir los embriones de calidad 1 2 por

la mitad para formar dos hemiembriones y aumentar as el nmero de cras de
cada donadora. La biparticin se efecta con un aparato llamado
micromanipulador, que nos permite sujetar el embrin para cortarlo por la
mitad con una micronavaja. Las dos mitades resultantes pueden transferirse
una a cada receptora o las dos a la misma, ya que ambas cras sern del mismo
sexo.

Qu Resultados se Obtienen Normalmente de estas Tcnicas?

Podemos esperar los siguientes promedios:
- 4 5 embriones transferibles por donadora superovulada.
- 33% de las donadoras superovuladas no producen embriones.
- 65 a 70% de gestacin con embriones frescos o refrigerados calidad
1 y 2.
- 30 a 35% de preez con embriones frescos o refrigerados calidad 3.
- 50 a 60% de gestacin con embriones congelados.
- 50 a 65% de gestacin con embriones bipartidos
- 3 4 superovulaciones seguidas de cada donadora (con intervalo de 60 a 90
das), antes de cargarla para darle un ao de descanso reproductivo.

En resumen, la transferencia de embriones, es una tcnica reproductiva para

acelerar el mejoramiento gentico de los hatos aprovechando los vientres de
animales de menor calidad para llevar a trmino gestaciones de becerros con
alto potencial gentico. Es una tcnica que bien aplicada puede significar un
gran avance en el progreso gentico de los hatos ganaderos y que actualmente
tiene la ventaja de poder realizarse completamente a nivel de campo, sin
necesidad de operar a los animales.