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INSTITUTOPOLITCNICONACIONAL

UNIDADPROFESIONALINTERDISCIPLINARIADE
BIOTECNOLOGA

MANUALDEPRCTICAS

LABORATORIODEREMEDIACINDESUELOS

Elaboradopor:

M.enC.CinthyaPamelaDelRoGalvn

IBT.SoniaMichelGonzlezBaos

Conlacolaboracinde:

Dra.ClaudiaGuerreroBarajas

Mxico,D.F.Abrilde2009
Revisin1.0
Remediacin de suelos y acuferos UPIBI-IPN

NDICE

1. TECNICAS DE MUESTREO................................................................................................................ 3
2. DETERMINACIN DE HUMEDAD DEL SUELO ........................................................................... 6
3. DETERMINACIN DE PH DEL SUELO........................................................................................... 9
4. DETERMINACIN DE SLIDOS VOLTILES ............................................................................ 13
5. DETERMINACIN DE CONDUCTIVIDAD DEL SUELO ........................................................... 16
6. DETERMINACIN DE TEXTURA DEL SUELO ........................................................................... 19
7. DETERMINACIN DE PERMEABILIDAD DEL SUELO ............................................................ 25
8. CUENTA DE MICROORGANISMOS VIABLES POR DILUCIN EN PLACA ........................ 33
9. ACTIVIDAD DESHIDROGENASA EN EL SUELO ....................................................................... 38
10. PROPUESTA DE REMEDIACIN DE UN SITIO CONTAMINADO.......................................... 43

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Remediacin de suelos y acuferos UPIBI-IPN

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UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA
LABORATORIO DE REMEDIACIN DE SUELOS Y ACUFEROS

1. TECNICAS DE MUESTREO
Objetivos
El alumno conocer cuales son las diferentes tcnicas de muestreo de
suelo
El alumno explicar la relacin la importancia de cada una de las
tcnicas de muestreo de suelos contaminados para la remediacin de
los mismos.

Introduccin

Material y reactivos
Pala
Bolsa plstica
Palangana
Etiquetas
Plumn

Desarrollo experimental
PASOS A SEGUIR EN EL MUESTREO DE SUELOS.

El anlisis de suelos ser tan bueno como la calidad de las muestras tomadas,
pues la muestra enviada al laboratorio, debe de ser de 0,5 a 1,0 kg.

1. Recorra el rea a muestrear y haga un plano o croquis sencillo de las


superficies ms o menos homogneas.

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2. Registre lo siguiente:
CRITERIO RESULTADO
Apariencia fsica
Clase de manejo recibida
anteriormente
Coloracin del suelo
Arenoso o pesado
Partes altas o bajas, planas o
inclinadas
Vegetacin alta, media o baja

3. Recorra los lotes al azar en forma de zig-zag y cada 15 o 30 pasos (si la


rea a muestrear es pequea cada 15 o 30 cm), tome una submuestra
limpiando la superficie del terreno y depositndola en la palangana. Las
submuestras deben ser tomadas entre 20 y 30 cm de profundidad. Luego
de tener todas las submuestras en la palangana se mezclan
homogneamente y se toma 1 kg aproximadamente.

4. Para identificar la muestra se debe colocar: el nombre del propietario,


nombre del lugar, ubicacin geogrfica, nmero de muestra y lote.
5. Recomendaciones cuando se tomen muestras para anlisis de suelos:

Evite muestrear suelos muy mojados.

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Use bolsas plsticas nuevas y limpias, no de papel.


No fume durante la recoleccin de muestras, para evitar contaminarlas
con las cenizas del cigarro, ricas en potasio.
No tome muestras en reas recin fertilizadas, sitios prximos a
viviendas, corrales, cercas, caminos, lugares pantanosos o erosionados,
reas quemadas, lugares donde se amontonan estircol, fertilizantes,
cal u otras sustancias que pueden contaminar la muestra.

Referencias

Apha-Awwna-Wpcf., Mtodos Normalizados para el anlisis de aguas potables y


residuales, Ediciones Diaz de Santos, S.A, pp 2-87.
Olivia Franco- Minerva Jurez, Manual de prcticas de qumica ambiental II,
UPIBI-IPN, 2006.
Hctor M. Coraspe*; Sergio Tejera, Procedimiento para la toma de muestras de
suelos, TAI FONAIAP Estacin Experimental Trujillo, Pampanito.

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2. DETERMINACIN DE HUMEDAD DEL SUELO

Objetivo
Realizar la tcnica para determinar la humedad contenida en la muestra de suelo

Introduccin

La humedad del sitio a tratar es un factor importante para la eleccin de una


tecnologa en particular. Una alta humedad puede impedir el movimiento de aire a
travs del suelo, lo que afecta los procesos de biorremediacin, as como provocar
problemas durante la excavacin y transporte, adems de aumentar costos
durante el uso de mtodos de remediacin trmicos (Van Deuren et al. 1997)

La humedad del suelo se calcula por la diferencia de peso de una misma muestra
hmeda y secada en la estufa hasta obtener peso constante.

Material y equipo

Muestra de suelo
Cpsulas de porcelana
Estufa
Desecador
Balanza analtica

Procedimiento

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1. Utilizar una cpsula de porcelana a peso constante. Para ello se coloca en


la estufa a 100C durante 24 horas. Posteriormente colocar en un
desecador para que se enfre.

2. Pesar la cpsula de porcelana que est a peso constante y registrar el peso

3. Tarar la balanza y agregar a la cpsula de porcelana aprox. 2 g de suelo.


Registrar el peso exacto del suelo agregado a la cpsula.

4. Dejar en un horno a 100C por 24 h. Posteriormente colocar en un


desecador para que se enfre y pesar. Registrar el peso.

Realizar el procedimiento por duplicado

Resultados

Registrar los siguientes datos:

Muestra 1 Muestra 2 Promedio


Peso de la cpsula
(g)
Peso del suelo
hmedo (g)
Peso de la cpsula
+ suelo seco (g)

Obtener el peso del suelo seco mediante la diferencia de peso de la siguiente


manera:

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Peso del suelo seco = (Peso de la cpsula + suelo hmedo) (Peso de la cpsula
+ suelo seco)

Peso _ suelo _ hmedo Peso _ suelo _ sec o


% _ de _ humedad _ perdida _ del _ suelo = *100
Peso _ suelo _ hmedo

EL porcentaje de humedad del suelo se obtiene de la siguiente manera:

% humedad del suelo = 100 - % humedad perdida del suelo

Reportar el porcentaje de humedad del suelo promediando los valores obtenidos


de las 2 muestras

Discusin

Discutir la influencia de la humedad del suelo en un proceso de remediacin.

Referencias

Eweis, J.B., Ergas, S.J., Chang, D.P.Y., Schroeder, E.D. 1999. Principios de
biorrecuperacin. Ed. Mc Graw-Hill. Espaa.

Muoz, I.D., C.A. Mendoza, G.F. Lpez, A.A. Soler, M.M. Hernndez. 2000.
Manual de mtodos de anlisis de suelos. UNAM-Iztacala. Mxico, D.F.

Volke-Sepulveda, T. y Velasco-Trejo, J.A. 2002. Tecnologas de remediacin para


suelos contaminados. Secretara de Medio Ambiente y Recursos Naturales-
Instituto Nacional de Ecologa (SEMARNAT-INE). Mxico.

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3. DETERMINACIN DE pH DEL SUELO

Objetivo

Determinar el pH de una muestra de suelo


Explicar la relacin entre la disponibilidad de nutrientes y el pH como factor para la
remediacin del suelo.

Introduccin

El pH es la medida de la concentracin de iones de hidrgeno [H+]. Un suelo


puede ser cido, neutro o alcalino, segn su valor de pH.

La Fig. 1 muestra la relacin entre la escala de pH y el tipo de suelo. El rango de


pH de 5.5 a 7.5 incluye la mayora de las plantas; pero algunas especies prefieren
suelos cidos alcalinos. Sin embargo, cada planta necesita un rango especfico
de pH, en el que poder expresar mejor su potencialidad de crecimiento.

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NEUTRO
CIDO ALCALIN
MUY MUY
FUERTE FUERTE FUERTE
FUERTE
MODERADO
MODERADO ADECUADO

SUELO
ESCALA
DE pH
3 4 5 6 7 8 9 10 11

Fig.1 Tipos de suelo segn valor de pH.

El pH tiene una gran influencia en la disponibilidad de nutrientes y la presencia de


microorganismos y plantas en el suelo.

Por ejemplo, los hongos prefieren condiciones cidas mientras que la mayora de
las bacterias, especialmente aquellas que facilitan nutrientes a las plantas, tienen
preferencia por suelos moderadamente cidos o ligeramente alcalinos. De hecho,
en condiciones de fuerte acidez, la fijacin de nitrgeno y la mineralizacin de
residuos vegetales se reducen.

Las plantas absorben los nutrientes disueltos en el agua de suelo y la solubilidad


de los nutrientes depende en gran medida del valor pH. Por este motivo, la
disponibilidad de elementos es diferente a diferentes niveles de pH.

Material
Muestra de suelo Seco
Potencimetro
Balanza analtica

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Esptula
Agitador de vidrio magntico
Probeta de 50 ml
Vaso de precipitado de 250 ml
Agua destilada
Soluciones reguladoras de pH 4 y pH 7

Procedimiento
1. Pesar en la balanza analtica con la ayuda de la esptula 15 g de suelo.
2. Colocar el suelo en el vaso de precipitado.
3. Adicionar 37.5 ml de agua destilada.
4. Agitar durante 5 minutos con la ayuda de la varilla de vidrio
5. Calibrar el potencimetro con las soluciones reguladoras de pH 4 y pH 7.
6. Enjuagar el electrodo con agua destilada e introducir en la muestra y
cuando la lectura se mantenga constante registrar el valor de pH.
7. Sacar el electrodo de la muestra y enjuagar con agua destilada.

Resultados

Reportar el promedio de dos mediciones as como la desviacin estndar


Registrar los resultados en la siguiente tabla:

Fuente de Temperatura
Valor de pH
extraccin ambiental (C)
de suelo

Discusin

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Discutir la importancia del valor de pH en el suelo para la aplicacin de estrategias


de remediacin en un sitio contaminado

Referencias
Hanna Instruments. Manual y anlisis de suelo. Ciencia y Gestin del suelo,
Versin 12, pp.5-7.

J.F Tah Luit (1987) El anlisis qumico de suelos, Universidad Autnoma de


Chapingo, Primera Edicin.

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4. DETERMINACIN DE SLIDOS VOLTILES


Objetivos
El alumno determinar los slidos voltiles del suelo
El alumno explicar la importancia de los slidos voltiles como factor
para la remediacin del suelo.

Introduccin

Los slidos voltiles son la porcin de la materia orgnica que puede eliminarse o
volatilizarse cuando una materia orgnica se quema en un horno mufla a una
temperatura de 550C.
Los slidos voltiles Biodegradables son: La porcin de slidos voltiles de
materia orgnica que son biodegradables.

El contenido de slidos voltiles se interpreta en trminos de materia orgnica,


teniendo en cuenta que a 55050C la materia orgnica se oxida formando el gas
carbnico y agua que se volatilizan. Sin embargo, la interpretacin no es exacta
puesto que la prdida de peso incluye tambin prdidas debido a descomposicin
o volatilizacin de ciertas sales minerales como por ejemplo las sales de amonio o
carbonato de magnesio.
La determinacin de slidos voltiles es de gran utilidad en modelos de
compostaje y otros mtodos de biorremediacin para el tratamiento de residuos
que contengan materia orgnica por medio del cual se dispone un residuo.

Material y reactivos
Suelo seco
Balanza analtica, con sensibilidad de 0.0001 g
Estufa elctrica

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Mufla
Desecador
Capsulas de porcelana
Pinzas para crisol

Desarrollo experimental

DETERMINACIN DE SLIDOS SUSPENDIDOS VOLTILES.


1. Tomar una muestra de suelo y retirar los fragmentos grandes, pulverizar si
es necesario.
2. Con la ayuda de las pinzas para crisol tomar del desecador una capsula de
porcelana que esta a peso constante, registrar el peso.
3. Colocar la capsula en la balanza analtica, tarar la balanza y pesar 3 g de
suelo.
4. Introducir las capsulas de porcelana en la estufa a una temperatura de
105C, por 24 h.
5. Colocar la capsula de porcelana en el desecador, dejar que enfre y pesar.
6. Llevar la capsula a la mufla a una temperatura de 550C durante 1 h.
7. Dejar enfriar, sacar la capsula colocarla en el desecador y determinar su
masa.
8. Realizar los clculos correspondientes de acuerdo a la siguiente frmula:

%SSV= ((A-D)*100)/A-B Donde:

%SSV: Slidos Suspendidos Voltiles


A: Peso del suelo seco + placa, mg
B: Peso de la placa
D: Peso del suelo + placa despus de ignicin, mg

Resultados y discusin

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De acuerdo al porcentaje de slidos suspendidos voltiles, explicar la importancia


de este parmetro como factor para la remediacin del suelo.

Bibliografa

Apha-Awwna-Wpcf., Mtodos Normalizados para el anlisis de aguas potables y


residuales, Ediciones Diaz de Santos, S.A, pp 2-87.
Olivia Franco- Minerva Jurez, Manual de prcticas de qumica ambiental II,
UPIBI-IPN, 2006.

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5. DETERMINACIN DE CONDUCTIVIDAD DEL SUELO

Objetivos

Determinar la conductividad de una muestra de suelo


Explicar la importancia de la determinacin de la conductividad elctrica en el
anlisis de suelos para la remediacin del mismo.

Introduccin

La determinacin de la conductividad elctrica se utiliza normalmente para indicar


la concentracin total de los componentes ionizados en las soluciones.

Las sales solubles en el suelo determinan la presencia en solucin de una serie de


combinaciones de los cationes: calcio, magnesio, sodio, potasio y de los aniones:
carbonatos, bicarbonatos, cloruros, sulfatos, entre otros. El valor de la
conductividad est relacionado con la suma de los cationes o aniones y en general
tienen correlacin con los slidos totales disueltos. El origen de estas sales
solubles es la meteorizacin de los minerales primarios, pero la presencia de sales
en grandes cantidades es debida a procesos concretos como drenaje oblicuo,
intrusin salina, condiciones topogrficas, entre otras.

La conductividad elctrica del suelo depende de la capacidad de las partculas del


suelo de conducir electricidad. A mayor superficie especfica, mayor es la
capacidad del suelo para conducirla. Las arcillas tienen mayor superficie
especfica y por lo tanto tienen una conductividad elctrica ms alta.

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La conductividad elctrica de un suelo es alterada, entre otros, por factores como


la porosidad, el contenido de humedad, la salinidad, la capacidad de intercambio
catinico y la materia orgnica.

Material

Muestra de suelo
Conductmetro
Agitador de vidrio o magntico
Probeta de 25 ml
Vaso de precipitado de 100 ml
Agua destilada
Balanza analtica

Procedimiento

1. Pesar 20 g de la muestra de suelo y colocarlo en el vaso de precipitado


2. Adicionar suficiente agua destilada hasta observar s mm de agua por
encima de la superficie del suelo teniendo precaucin de no hacer espuma
y tapar con papel aluminio
3. Dejar reposar durante 24 horas
4. Decantar el agua
5. Introducir el electrodo del conductmetro en el lquido decantado y tomar la
lectura directamente del aparato (en milisiemens).
6. Realizar el procedimiento por duplicado

Resultados

Reportar el promedio de dos mediciones as como la desviacin estndar


Registrar los resultados en la siguiente tabla:

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Fuente de extraccin
Nmero de muestra Conductividad (ms)
del suelo

Discusin

Discutir la importancia de la conductividad en un suelo contaminado y su influencia


para proponer estrategias de remediacin.

Referencias

Domnech, X. y Peral, J. (2006) Qumica ambiental de sistemas terrestres. Ed.


Revert. Espaa

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6. DETERMINACIN DE TEXTURA DEL SUELO

Objetivo

Determinar la composicin textural de una muestra de suelo

Introduccin

Los suelos se clasifican en funcin de su tamao de partcula, siendo sus tres


principales componentes las arcillas (< 0.002 mm), los limos (0.002 - 0.05 mm) y
las arenas (0.05 - 2.0 mm). Es importante considerar esta propiedad, ya que la
relacin rea/volumen de los diferentes tipos de partcula, tienen un impacto
directo sobre las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas del suelo, y por
consiguiente en las tecnologas de remediacin. En general, los materiales no
consolidados (arenas y gravas finas) son ms fciles de tratar (Van Deuren et al.
1997, Eweis et al. 1998)

El mtodo de Bouyoucos es el ms usado en la determinacin de texturas y est


basado en el clculo de la velocidad de sedimentacin de las partculas, utilizando
el principio de la ley de Stokes que establece lo siguiente: la densidad de una
solucin acuosa en reposo vara directamente con la cantidad de partculas en
suspensin que se van asentando de acuerdo a su dimetro y al tiempo
transcurrido

Material

Muestra de suelo seco

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Balanza
Agitador mecnico
Pipeta de 10 ml
Probeta de 1000 ml
Hidrmetro de Bouyoucos
Termmetro
Cronmetro

Reactivos

Solucin de metasilicato de sodio al 5%. Pesar 5 g de metasilicato de sodio


nonahidratado (Na2SiO39H2O), disolverlo en agua destilada y aforar a 100
ml.
Solucin de oxalato de sodio al 5%. Pesar 5 g de oxalato de sodio
((COONa)2), disolverlo en agua destilada y aforar a 100 ml.
Solucin de perxido de hidrgeno al 10%. Diluir 33 ml de perxido de
hidrgeno concentrado (H2O2) hasta completar un volumen de 100 ml con
agua destilada. Esta solucin debe ser conservada en refrigeracin.
Solucin de cido clorhdrico diluido. Diluir 20 ml de cido clorhdrico
concentrado (HCl) hasta completar un volumen de 100 ml con agua
destilada.

NOTA: Los reactivos de sodio para la determinacin de textura pueden ser


sustituidos al agregar 10 ml de una solucin de hexametafosfato de sodio
((NaPO3)6) al 10%. Que se prepara pesando 10 g del reactivo y diluyndolo en
100 ml de agua destilada.

Procedimiento

1. Para eliminar la materia orgnica tratar al suelo con la solucin de perxido


de hidrgeno en una proporcin de 15 ml de reactivo por cada 50 g de

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suelo, dejndolo secar durante 24 horas a una temperatura de 80C antes


de la determinacin de la textura.
2. Si el suelo es rico en carbonatos (ms de 2%), tratarlo con la solucin de
cido clorhdrico diluido agregando el reactivo en pequeas proporciones
hasta eliminar la efervescencia provocada por la liberacin de burbujas de
CO2.
3. Pesar 50 g de suelo libre de materia orgnica y carbonatos.
4. Colocar en el vaso del agitador mecnico.
5. Agregar 5 ml de la solucin de metasilicato de sodio y 5 ml de solucin de
oxalato de sodio.
6. Aforar con agua de la llave hasta la segunda ranura del vaso.
7. Agitar durante 10 minutos en el agitador mecnico.
8. Pasar la solucin a la probeta de 1000 ml.
9. Aforar a 1000 ml con agua de la llave.
10. Agitar 1 minuto el suelo en la probeta.
11. Dejar reposar 40 segundos y tomar la primera lectura con el hidrmetro.
12. Medir la temperatura.
13. Dejar reposar 2 horas y tomar la segunda lectura.
14. Medir nuevamente la temperatura.
15. De acuerdo a los valores de temperatura registrados, agregar 0.2 a las
lecturas por cada grado centgrado despus de 20C, o restrselos en caso
contrario.

Clculos

% de limos + % de arcillas = (1 lectura / g de suelo) * 100


% de arenas = 100 (% de limos + % de arcillas)
% arcilla = (2 lectura / g de suelo ) * 100
% de limos = (% de limos + % de arcillas) - % de arcillas

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Con los porcentajes obtenidos determinar la clase textural que le corresponde al


suelo, de acuerdo al tringulo de texturas.

Fig. 1 Tringulo de texturas del sistema de clasificacin de la USDA


(Departamento de Agricultura de Estados Unidos de Amrica)

Determinacin manual de textura del suelo

Otra tcnica para la determinacin de la textura del suelo en campo puede


realizarse de manera sencilla aplicando un poco de agua al suelo y manipulndolo
tal como se indica en la Fig. 2

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Fig. 2 Procedimiento para determinar manualmente la textura del suelo

Resultados
Reportar el porcentaje de arena, limo y arcilla del suelo trabajado as como la
composicin textural a la que corresponde.

Discusin
Discutir la importancia de la textura del suelo en los procesos de remediacin de
acuerdo a la composicin textural determinada en la prctica y el impacto que
tiene sobre la seleccin y efectividad de las tecnologas de remediacin.

Referencias

Eweis, J.B., Ergas, S.J., Chang, D.P.Y., Schroeder, E.D. 1999. Principios de
biorrecuperacin. Ed. Mc Graw-Hill. Espaa.

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Muoz, I.D., C.A. Mendoza, G.F. Lpez, A.A. Soler, M.M. Hernndez. 2000.
Manual de mtodos de anlisis de suelos. UNAM-Iztacala. Mxico, D.F.

Volke-Sepulveda, T. y Velasco-Trejo, J.A. 2002. Tecnologas de remediacin para


suelos contaminados. Secretara de Medio Ambiente y Recursos Naturales-
Instituto Nacional de Ecologa (SEMARNAT-INE). Mxico.

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7. DETERMINACIN DE PERMEABILIDAD DEL SUELO

Objetivos

Determinar la capacidad de permeabilidad de un suelo a travs del clculo


del coeficiente de permeabilidad k y de la velocidad media de filtracin.

Introduccin

La permeabilidad se define como la capacidad de un material para permitir que un


fluido lo atraviese sin alterar su estructura interna. Se afirma que un material es
permeable si deja pasar a travs de l una cantidad apreciable de fluido en un
tiempo dado, e impermeable si la cantidad de fluido es despreciable.

La velocidad con la que el fluido atraviesa el material depende de tres factores


bsicos:

La porosidad del material;


La densidad del fluido considerado, afectada por su temperatura;
La presin a que est sometido el fluido.

Para ser permeable, un material debe ser poroso, es decir, debe contener
espacios vacos o poros que le permitan absorber fluido. A su vez, tales espacios
deben estar interconectados para que el fluido disponga de caminos para pasar a
travs del material

La permeabilidad en el suelo tiene un efecto sobre el costo de excavacin,


construccin y trabajos de remediacin, haciendo ms o menos redituable dichas
operaciones de acuerdo a la capacidad de permeado del suelo.

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Ley de Darcy

El flujo de agua a travs de un medio poroso est gobernado por la Ley de Darcy,
quien investigo las caractersticas del flujo de agua a travs de filtros de material
Ferrero. Utilizando diversos dispositivos, de dise, Darcy encontr que para
velocidades pequeas, el caudal es:

Es posible relacionarlos de tal forma que:

V= k* i

La cual es conocida como la Ley de Darcy

Coeficiente de permeabilidad

Los estudios de Darcy utilizan un valor de velocidad v, dicha velocidad es la


velocidad de descarga que se define como la cantidad de agua que circula en una
unidad de tiempo a travs de una superficie perpendicular a la lnea de filtracin.

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En arenas firmes y saturadas y en otros suelos compuestos de arenas finas,


donde la circulacin del agua no afecta la estructura del material, la velocidad v
puede ser determinada por:

= Peso especfico del agua (KN/m3)

El valor de k expresado en cm/s, puede ser considerado como la velocidad del


agua a travs de un suelo cuando est sujeta a un gradiente hidrulico unitario.

Permemetro de Carga Constante

En este permemetro (Fig.1), los niveles de agua a la entrada y a la salida se


pueden mantener constantes a travs de una bomba y una cuba hidrulica. N este
caso, la prdida de carga h depende nicamente de la diferencia entre los niveles
de agua, as mismo las dimensiones de la celda del permemetro pueden ser
medidas y el agua a la salida de este tambin puede ser colectada y medida con
el fin de determinar el coeficiente de permeabilidad k.

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Figura 1. Permemetro de carga constante

Permemetro de Carga Variable


En este permemetro, la cantidad de agua escurrida es medida en forma indirecta,
por medio de la observacin entre la cada del nivel de agua en un tubo recto
colocado sobre la muestra y el tiempo transcurrido.

Figura 2. Permemetro de carga variable

7.1.1.

Materiales, reactivos y equipo

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Permemetro
Celda del permemetro
Cuba hidrulica
Bomba de recirculacin
Probeta de 500 ml
Flexmetro
Termmetro
Cronmetro
Balanza Granataria
Agua
Muestra de suelo
Suelo poroso (material de empaque)
1.1.1.1.
Metodologa

1.- Ensamblar el permemetro y verificar que todas las conexiones se encuentren


correctamente, ya sea un experimento a carga variable o carga constante.
2.- Tomar las dimensiones de la celda (Dimetro interno y longitud total)
3.- Colocar material de empaque en la base de la celda del permemetro
aproximadamente 1.5 cm de longitud.
4.- Pesar la muestra de suelo y colocarla en la celda hasta aproximadamente 2.5
cm antes del borde.
5.- Colocar material de empaque arriba de la muestra de suelo aproximadamente
1.5 cm despus de este y presionar un poco para eliminar aire del interior.
6.- Medir las longitudes de los empaques en la cara superior e inferior en la celda,
as como la longitud que ocupa la muestra de suelo dentro de la celda.
7.- Colocar la tapa de la celda correctamente y volver a presionar un poco.
8.- Llenar el depsito de agua hasta la marca y colocar la pinza para evitar que
circule por el momento.

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 29


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9.- Colocar el depsito de agua a una altura aproximada de 1.7 m, la celda del
permemetro a 1 m del suelo y el recipiente para la recepcin de agua a una
altura media entre el depsito de agua y la celda del permemetro.
10.- Permitir el paso de agua a travs de la muestra, abriendo la pinza
correspondiente, verificando que no quede aire en las conexiones de la manguera
y regulando la cantidad de agua que pasa hacia la celda para que no haya un
contra flujo y se bote la tapa de la celda.
11.- Mantener constante el nivel de agua en el depsito de agua a travs de la
cuba y la bomba.
12.- Cuando el caudal sea uniforme, iniciar la recoleccin de agua en el depsito y
al desbordarse este, comenzar a medir el flujo obtenido con la probeta y el
cronmetro.
13.- Tomar las medidas de alturas de trabajo correspondientes y registrarlas.
14.- Al terminar, recircular agua por el permemetro para lavarlo y limpiarlo.

Resultados

De acuerdo a los datos registrados del suelo y del experimento, realizar los
clculos necesarios para obtener el valor de k y de Vmf a partir de la Ley de
Darcy.

Para el experimento de Carga Constante se tiene:

Vmf = V/n

Donde:

Q = Caudal filtrado
D (m) = Dimetro del

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 30


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permemetro
A (m2) = rea del permemetro
h (m) = Diferencia de alturas
L (m) = Longitud de empaque
i = Gradiente piezomtrico
n (KN - s/cm2) = Viscosidad del agua
k (cm/s) = Coeficiente de
permeabilidad
V (m/s) = Velocidad final del permeado
Vmf = Velocidad media de avance del agua
n = Porosidad del suelo

Para el experimento a Carga Variable se tiene:

Vmf = V/n

Donde:

Q = Caudal filtrado
n = Porosidad del suelo
a (m2) = rea de la manguera
L (m) = Longitud de empaque
h1 (m) = Altura 1 en un tiempo 1
t1 (s) = Tiempo 1
h2 (m) = Altura 2 en un tiempo 2
t2 (s) = Tiempo 2
k (cm/s) = Coeficiente de permeabilidad

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V (m/s) = Velocidad final del permeado


Vmf = Velocidad media de avance del agua

*Utilizar el programa de Excel como ayuda.

Cuestionario

1. Menciona algunos ejemplos de roca permeable.

2. Cules son los factores que influyen en el coeficiente de permeabilidad de


suelo?

3. Reporta los coeficientes de permeabilidad de distintos suelos.

4. Qu es un permemetro?

Conclusiones

Concluya con respecto a los objetivos planteados y sus resultados, mximo media
cuartilla.

Referencias

1. Angelote, S. (2006) Permeabilidad de suelos, Geologa y Geotecnia.


Universidad Nacional del Rosario, Facultad de ciencias exactas, Ingeniera
y Agrimensura. Lugar. Pgs. 3 26.

2. Snchez-San Romn, F.J. (ao) Flujo en medios porosos: Ley de Darcy.


Artculo T080. Pg.3. Lugar

3. Rodrguez, N.J. (2008) Trabajo prctico de laboratorio Nm. 5.


Permeabilidad. U.N.N.E, Facultad de Ingeniera. Ctedra de Geotecnia.
Mxico. Pgs. 1 - 4.

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8. CUENTA DE MICROORGANISMOS VIABLES POR DILUCIN EN PLACA

Objetivo

Realizar el conteo en placa de las colonias de bacterias y de hongos a partir de


una muestra de suelo

Introduccin

El suelo est formado por cinco componentes principales: materia mineral, agua,
aire, materia orgnica y organismos vivos. La porcin viviente del suelo constituye
menos del 1% del volumen total; an as, esta porcin es indudablemente esencial
para el funcionamiento del ecosistema.

El suelo contiene cinco grupos principales de microorganismos: bacterias,


actinomicetos, hongos, algas y protozoarios. El suelo, como ecosistema, incluye a
estos grupos microbianos as como a los constituyentes orgnicos e inorgnicos
de un determinado lugar.

Debido al diminuto tamao de las bacterias y a que los otros cuatro grupos poseen
clulas grandes o filamentos extensos, las bacterias representan mucho menos de
la mitad de la masa celular microbiana total. En suelos aireados adecuadamente
predominan bacterias y hongos, mientras que en los ambientes que contienen
poco o nada de oxgeno, slo las bacterias son responsables de casi todos los

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 33


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cambios qumicos y biolgicos. Aunque los otros grupos llevan a cabo muchas
transformaciones similares a las que realizan las bacterias, stas sobresalen
porque son capaces de crecer rpidamente y de descomponer una gran variedad
de sustratos.

Se han desarrollado varias tcnicas para el estudio de la biomasa microbiana,


principalmente para bacterias y hongos, cada una con ventajas propias. Sin
embargo, ningn procedimiento aislado describe por completo y en forma
adecuada la composicin genrica de la flora. La tcnica usada con ms
frecuencia para contar los microorganismos del suelo es el recuento en placa en el
cual se colocan diluciones de un suelo sobre un medio de agar adecuado.

Material

Muestra de suelo
Tubos de vidrio de 15 ml con 9 ml de solucin salina estril al 0.85%
Balanza
Micropipetas de 1 ml y de 20 l
Vrtex
Esptula
Campana de flujo laminar o rea estril
Papel aluminio estril
Cajas Petri con medio de cultivo (agar nutritivo y agar papa dextrosa PDA)
Incubadora

Procedimiento

1. En condiciones estriles agregar 1 g de suelo a un tubo que contenga 9 ml


de solucin salina estril. Agitar dicho tubo con vrtex por alrededor de 1
minuto.

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 34


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2. Tomar 1 ml de ese tubo y transferirlo a otro que contenga 9 ml de la


solucin salina y agitarlo en vrtex
3. Repetir el procedimiento de manera sucesiva hasta alcanzar la dilucin 10-7
asegurndose de utilizar una punta de micropipeta diferente entre cada
dilucin.
4. Tomar 20 l de las diluciones 10-2 a 10-7 e inocular en las placas con agar.
Cada dilucin se colocar en una cuarta parte de la caja Petri, previamente
etiquetada.
5. Para el conteo de bacterias, se utilizar agar nutritivo y para el conteo de
hongos se utilizar agar papa dextrosa (PDA)
6. Una vez inoculadas las placas con agar, dejar que se seque la gota
depositada para evitar que el lquido se desplace por la caja y se mezcle
con las otras diluciones depositadas en la misma placa.
7. Cada dilucin se sembrar por duplicado en cada medio de cultivo.
8. Incubar de manera invertida las placas en la incubadora. Las de agar
nutritivo por 24 horas a 37C y las de PDA por 48 horas a 28C.
9. Transcurrido el tiempo de incubacin realizar el conteo de las colonias
donde sea posible y registrar el nmero de colonias y la dilucin
correspondiente.

Clculos

Los datos se reportan en UFC/g ss (unidades formadoras de colonias por gramo


de suelo seco), por lo que es necesario realizar el clculo a partir del volumen
inoculado en la placa. Por lo tanto, se tiene lo siguiente:

1 1
NC
UFC / g _ suelo _ sec o = FD V
P FH

Donde:

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 35


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NC = Nmero de colonias contadas en la placa


FD = Factor de dilucin correspondiente al tubo de donde se tom la alcuota (10-2
a 10-7)
V = Volumen de la alcuota inoculada (en ml)
P = Peso de la muestra de suelo (aprox. 1 g)
FH = Factor de correccin de humedad

% _ humedad _ del _ suelo


FH = 1
100

Resultados

Reportar las UFC/g ss del promedio de los 2 conteos realizados, as como la


desviacin estndar de cada uno, tanto para bacterias como para hongos.

Discusin

Discutir la importancia de la actividad microbiolgica del suelo en un tratamiento


biolgico de remediacin, as como la influencia de los factores ambientales para
este tipo de tecnologa y la relevancia del nmero de microorganismos presentes
en el suelo.

Referencias

Alexander, M. 1994. Introduccin a la microbiologa del suelo. AGT Editor, S.A.


Mxico.

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 36


Remediacin de suelos y acuferos UPIBI-IPN

Eweis, J.B., Ergas, S.J., Chang, D.P.Y., Schroeder, E.D. 1999. Principios de
biorrecuperacin. Ed. Mc Graw-Hill. Espaa.

Fernndez, L.C., Rojas, N.G., Roldn, T.G., Ramrez, M.E., Zegarra, H.G., Uribe,
R., Reyes, R.J., Flores, D., Arce, J.M. (2006) Manual de tcnicas de anlisis de
suelos aplicadas a la remediacin de sitios contaminados. IMP, SEMARNAT, INE.
Mxico

Volke-Sepulveda, T. y Velasco-Trejo, J.A. 2002. Tecnologas de remediacin para


suelos contaminados. Secretara de Medio Ambiente y Recursos Naturales-
Instituto Nacional de Ecologa (SEMARNAT-INE). Mxico.

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9. ACTIVIDAD DESHIDROGENASA EN EL SUELO

Objetivo

Determinar la actividad de la enzima deshidrogenasa en una muestra de suelo

Introduccin

Las deshidrogenasas son enzimas presentes en todos los organismos vivos. Estas
enzimas participan en diversas reacciones transfiriendo pares de electrones. En
reacciones catablicas las deshidrogenasas catalizan la transferencia de pares de
electrones de un sustrato a NAD+ formando NADH. Luego el NADH transfiere los
electrones a otro compuesto, sirviendo as como intermediario en la transferencia
de electrones. Como las deshidrogenasas tambin participan en los sistemas de
transferencia de electrones de organismos aerobios, la actividad de estas enzimas
se usa como una medida de la respiracin junto con la actividad metablica. Las
deshidrogenasas no son activas en el suelo como enzimas extracelulares.

La tcnica para medir la actividad de la deshidrogenasa consiste en incubar el


suelo mezclado con una solucin de inhibidor competitivo NAD+, cloruro 2,3,5-
trifeniltetrazolio (TTC) en un medio con poco oxgeno. Este elemento sirve como
ltimo aceptor de electrones en la respiracin. La exclusin del oxgeno favorece
la transferencia de los electrones al TTC, reduciendo el compuesto soluble en
agua amarillo plido al compuesto insoluble rojo trifenil formazan (TPF).

En suelos frtiles, no se requiere de adicin de nutrientes, y de hecho una de las


ventajas del ensayo de deshidrogenasa respecto a otros ensayos enzimticos es

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 38


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que no requiere modificaciones y no estimula ningn grupo de microorganismos


en particular.

Despus de la incubacin, se realiza una extraccin con solvente para remover el


TPF del suelo. Como estndar se utiliza metanol, aunque tambin se ha utilizado
acetona y triclorometano (cloroformo).

Luego de la extraccin, la concentracin de TPF en el suelo se determina por


espectrofotometra. El analito disuelto, es decir el TPF, absorbe la luz en la regin
visible del espectro en una longitud de onda de 485 nm. El grado en el cual el TPF
absorbe la luz a 485 nm es una funcin lineal de la concentracin de TPF en el
solvente. Por lo tanto, se puede elaborar una curva una curva de calibracin con la
absorbancia leda de las soluciones estndar preparadas con concentraciones
conocidas de TPF.

PRIMERA ETAPA

Material

24 g de de suelo seco
1 tubo tipo Falcon de 50 ml con tapa (para el blanco)
4 tubos tipo Falcon de 50 ml con tapa para cada tipo de suelo
Balanza analtica
Esptula
Agua desionizada
1 ml de solucin de TTC al 3% (p/v) por cada tubo
1 pipeta de 1 ml
Vrtex

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 39


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Reactivos

Solucin de TTC al 3%. Pesar 3 g de TTC en 60 ml, disolverlo en agua


desionizada y aforar a 100 ml. Probablemente no todo el TTC se disuelva,
por lo que puede filtrarse con papel filtro. El TTC es un compuesto
fotosensible a una longitud de onda corta (ello permite la reduccin a TPF),
por lo tanto no se exponga a la luz excesivamente.

Procedimiento

1. Para cada tipo de suelo, pesar 6 g de suelo seco en cada uno de los
4 tubos. A 2 de ellos agregar 0.5% de glucosa (0.03 g). A las otras 2
muestras no se les agregar glucosa. Elaborar un blanco sin
adicionar suelo.
2. Adicionar 1 ml de TTC al 3% y 2.5 ml de agua desionizada a cada
tubo, incluyendo al blanco. Mezclar el contenido de cada tubo con
ayuda de un vrtex y colocar la tapa a cada tubo. Incubar por 1
semana.

SEGUNDA ETAPA

Material

Suelo incubado de la etapa 1


Metanol
Probeta de 10 ml
1 embudo por cada tubo con suelo
1 papel filtro por cada tubo con suelo
1 tubo falcon de 50 ml por cada tubo con suelo incubado

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 40


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1 soporte universal con arillo


Matraces aforados para realizar las diluciones de la curva tipo
Espectrofotmetro (485 nm)

Reactivos

Metanol

Procedimiento

1. A cada tubo, agregar 10 ml de metanol, mezclar y transferir la suspensin a


un embudo con papel filtro. Dicho embudo se colocar previamente en el
arillo del soporte universal. Colectar el filtrado en un tubo Falcon de 50 ml.
2. Lavar el tubo que contena el suelo con 10 ml ms de metanol y agregar
nuevamente al papel filtro. Repetir el procedimiento hasta que el filtrado sea
transparente (que ya no sea de color rojo).
3. Registrar el volumen de solvente utilizado para cada muestra, ya que esa
cantidad ser utilizado para calcular el factor de dilucin de la muestra.
4. Leer la absorbancia en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 485
mn. Utilizar el blanco para ajustar a cero. Si al leer la absorbancia de una
muestra la lectura es mayor a 1, realizar una dilucin con la intencin de
que las lecturas estn en el intervalo de 0 a 1.
5. Para elaborar la curva patrn, preparar soluciones de TPF y metanol a 0, 5,
10, 15, 20 y 25 g/ml y leer la absorbancia a 485 nm. Con los datos
obtenidos, realizar una regresin lineal para tener la ecuacin de la curva y
de esta manera interpolar los datos obtenidos con las muestras de suelo.

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 41


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Resultados

Expresar los resultados en g TPF/ g suelo seco. Reportar el promedio de dos


duplicados y considerar el volumen de metanol utilizado en cada muestra para
utilizarlo como factor de dilucin.
Mostrar los datos en una tabla mostrando los valores obtenidos de cada muestra,
tal como la que se muestra a continuacin

Muestra Abs (485 nm) Volumen de metanol


aadido

Discusin

Discutir la importancia de la determinacin de actividad deshidrogenasa en el


suelo y la aplicacin de la tcnica para la remediacin de suelos contaminados.

Referencias

Alef, K. y Nannipieri, P. (eds.) 1995. Methods in applied soil microbiology and


biochemistry. Academic Press. London, GB; San Diego, CA, USA.. 576 p.

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10. PROPUESTA DE REMEDIACIN DE UN SITIO CONTAMINADO

Objetivo

Realizar una propuesta de tecnologa de remediacin de un sitio contaminado de


acuerdo a los resultados obtenidos de la caracterizacin del suelo a lo largo del
curso de remediacin de suelos.

Introduccin

La Ley General para la Prevencin y Gestin integral de los Residuos define a la


remediacin como un conjunto de medidas a las que se someten los sitios
contaminados para eliminar o reducir los contaminantes hasta un nivel seguro
para la salud y el ambiente o prevenir su dispersin en el ambiente sin
modificarlos.

En Mxico existe actualmente una gran cantidad de sitios contaminados con


diferentes tipos de compuestos, tanto orgnicos como inorgnicos, debido
principalmente a las actividades de la industria minera y petroqumica, adems de
la disposicin clandestina y derrames de residuos peligrosos. Antes de considerar
el uso de una tecnologa de remediacin para un sitio en particular, es
indispensable contar con informacin del sitio y llevar a cabo su caracterizacin,
as como la del contaminante a tratar. Posteriormente, la tecnologa puede
elegirse con base en sus costos y a la disponibilidad de materiales y equipo para
realizar el tratamiento (Surez y Ramrez, 2006).

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 43


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En la actualidad existe una gran variedad de tecnologas de remediacin


disponibles para aplicar de acuerdo a la naturaleza del contaminante y las
caractersticas del suelo, tales como mtodos fsicos, qumicos, biolgicos y
trmicos, los cuales pueden ser in-situ, ex-situ u on-site.

Para la seleccin adecuada de una tecnologa de remediacin con buenas


perspectivas de xito, es indispensable considerar tanto las propiedades del
contaminante como las del sitio contaminado. En general, dentro de los factores a
considerar se encuentran los siguientes: (i) procesos qumicos (reacciones de
hidrlisis, oxidacin, reduccin, fotlisis); (ii) procesos fsicos o de transporte
(sorcin, adveccin, dispersin, difusin) (Volke y Velasco, 2002)

Material y equipo

Resultados de las prcticas 1-6 (caracterizacin del suelo)


Informacin referenciada

Procedimiento

1. Asignar a cada equipo un contaminante problema. Se recomienda sean los


principales contaminantes con los que se presenta el mayor nmero de
casos en Mxico, tales como petrleo y sus derivados, metales pesados,
agroqumicos, entre otros.
2. De acuerdo a los resultados obtenidos de la caracterizacin del suelo
(llevada a cabo en las prcticas 1-6), realizar una propuesta para la
remediacin del suelo caracterizado si se encontrara contaminado con el
compuesto asignado.

Del Ro-Galvn y Gonzlez-Baos, 2009 44


Remediacin de suelos y acuferos UPIBI-IPN

Resultados y discusin

Entregar por escrito un reporte que contenga los siguientes puntos:


Introduccin (fuentes de contaminacin, caractersticas del contaminante)
Antecedentes (sitios en Mxico contaminados por el compuesto asignado,
tecnologas de remediacin aplicadas histricamente al tipo de
contaminante asignado)
Tabla resumen con resultados de caracterizacin del suelo
Anlisis de resultados (sealar la relacin de las caractersticas obtenidas
del suelo y el tipo de contaminante)
Tecnologa de remediacin propuesta (Justificar la tecnologa elegida desde
el punto de vista tcnico, econmico, ambiental, social, legal y destacar las
ventajas respecto a otras tecnologas que podran ser aplicadas)
Conclusiones
Referencias

Referencias

Ley General para la Prevencin y Gestin Integral de los Residuos (LGPGIR)


2006. Mxico.

Surez-Herrera, M.A. y Ramrez-Lara, E. (2006) Tecnologas utilizadas en la


remediacin de sitios contaminados. Revista salud pblica y nutricin.
Edicin Especial No. 11. II Congreso de Ciencias Farmacuticas de la
Conferencia Hispanoamericana de Facultades de Farmacia (COHIFFA) y el
VIII Congreso Regional de Qumicos Frmaco Bilogos. Mxico.

Volke-Sepulveda, T. y Velasco-Trejo, J.A. 2002. Tecnologas de remediacin para


suelos contaminados. Secretara de Medio Ambiente y Recursos Naturales-
Instituto Nacional de Ecologa (SEMARNAT-INE). Mxico.

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