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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA

DE MXICO
FACULTAD DE QUMICA

MANUAL DE PRCTICAS

BIOQUMICA CLNICA
(CLAVE 1807)

MXICO, D. F. 2009
El laboratorio clnico es un ambiente dinmico que esta continuamente cambiando
para a satisfacer las necesidades de salud pblica. El presente manual ser de
mucha utilidad como recurso informativo en la formacin de los alumnos en el
rea de Bioqumica Clnica. El aspecto valioso de la informacin es que tiene un
enfoque actual de los procesos habituales de laboratorio como la tendencia
tecnolgica de la automatizacin, lo que permite enfrentar el reto de manejar
pruebas mas sensibles, especficas y efectivas en el monitoreo de la salud y la
enfermedad. Adems, la posibilidad de obtener resultados a tiempo y el costo-
beneficio que representa.
Es recomendable la introduccin de la terminologa actual, completar la
informacin acerca de los organismos y guas de regulacin de las buenas
prcticas de laboratorio
La elaboracin de ste manual estuvo a cargo de la Q.F.B Rosalinda Velzquez
Salgado a travs de su seccin de Bioqumica Aplicada
CONTENIDO

PRLOGO

INTRODUCCIN

UNIDAD I
1. INFORMACIN SOBRE EL CONTROL DE CALIDAD EN EL LABORATORIO
CLNICO
1.1Etapa preanaltica
1.1 Etapa analtica
1.1.Etapa Post-analtica
1.2Toma de muestra
1.3Estudio de la variacin en condiciones de rutina

UNIDAD II
2. PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL.
2.1 Determinacin de cido rico. Mtodo enzimtico.
2.2 Determinacin de Urea. Mtodo enzimtico
2.3 Determinacin de Creatinina . Bossnes- Taussky.
2.4 Determinacin de sodio/potasio/cloro . Mtodo In Selectivo
2.5 Determinacin de pH, pPO2, pCO2 . Gasometra
2.6 Examen general de orina (EGO)

UNIDAD III
3.METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y LPIDOS
3.|. Determinacin de Glucosa. Mtodo enzimtico (GOD-PAD)
3.2. Determinacin de Colesterol total. . Mtodo enzimtico (CHOD-PAD)
3.3. Determinacin de Triglicridos. Mtodo enzimtico

UNIDAD IV
4. METABOLISMO SEO Y MINERAL
4.1Determinacin de Calcio. Mtodo Colorimtrico
4.2Determinacin de Fsforo. Mtodo UV

UNIDAD V
5. PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPTICO. Mtodo colorimtrico
5.1 Determinacin de Bilirrubina. Mtodo DMSO Total y Directa
5.2 Albmina. Mtodo verde de Bromocresol
5.3 Protenas totales. Mtodo de Biuret
5.4. INTRODUCCIN A LA ENZIMOLOGA CLNICA.
5.5 Determinacin de fosfatasa Alcalina. Mtodo cintico
5.6 Determinacin de gama Glutamiltransferasa. GGT Mtodo cintico
5.7. Determinacin de aspartato aminotransferasa GOT (ASAT ) . Mtodo cintico
5.8 Determinacin de alanino aminotransferasa GPT ( ALAT) . Mtodo cintico.
5.9 Determinacin de lactato deshidrogenada ( LDH). Mtodo cintico.
UNIDAD VI
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO PANCRATICO.
6.1 Determinacin de lipasa. LPS Mtodo cintico
6.2 Determinacin de - amilasa. AMY Mtodo cintico

UNIDAD VII
7. PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO CARDACO.
7.1 Determinacin de alanino aminotransferasa GPT. Mtodo cintico.
7.2 Determinacin de creatin cinasa CK. Mtodo cintico.
7.3 Determinacin de lactato deshidrogenada. LDH. Mtodo cintico.

PRUEBAS AUTOMATIZADAS
Autoanalizador utilizado en Qumica Clnica

8. BIBLIOGRAFA

Glosario
PRLOGO

La Bioqumica Clnica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicacin


de la Ciencia Qumica para contribuir a la resolucin de problemas de salud.
La funcin del laboratorio de Bioqumica Clnica es realizar anlisis, tanto
cualitativos como cuantitativos, en fluidos corporales como sangre, orina, lquido
seminal, lquido cefalorraqudeo, etc. Para que los resultados de dichos anlisis
sean tiles a los mdicos en el diagnstico, tratamiento y seguimiento de una
enfermedad, stos debern realizarse bajo un estricto control de calidad logrando
niveles ptimos de precisin y exactitud, caractersticas deseables en cualquier
resultado de diagnstico.
Los objetivos del curso son:
1. Que el alumno sea capaz de realizar el anlisis de productos biolgicos
incluyendo una adecuada manipulacin de los especmenes, desde la toma
y/o recepcin de muestras hasta la entrega de resultados.
2. Que el alumno adquiera una formacin y preparacin en Bioqumica que le
permita afrontar los retos que encontrar en su vida profesional, ante el
creciente nmero de tcnicas que continuamente se estn desarrollando
para la deteccin y cuantificacin de metabolitos de inters en la medicina
moderna.
3. Que el alumno realice los procedimientos correctos tanto en forma manual
como automatizada utilizando un equipo mecanizado.
4. Que el alumno adquiera los elementos formativos que le permitan
desarrollar una actitud y pensamientos crticos, y de independencia en el
trabajo.
Este proceso de enseanza incluye: planeacin, seleccin, elaboracin y
ejecucin analtica, evaluacin y resolucin de problemas con la metodologa
empleada, aplicacin e interpretacin de programas de control de calidad,
interpretacin de grficas y correlacin de los datos obtenidos con las alteraciones
que se presentan en el organismo en los diferentes cuadros patolgicos.

Este manual fue elaborado con base en la Norma Oficia Mexicana NOM -166-
SSA-1-1997 que actualmente se encuentra en revisin Proy- NOM -007-SSA1-
2006, para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos , misma
que pretende lograr que los laboratorios clnicos establezcan programas de
aseguramiento de la calidad de sus servicios .

El curso de la asignatura prctica de Bioqumica Clnica hace nfasis en el control


de calidad. Las prcticas estn diseadas con el propsito que los alumnos
dispongan de un conjunto de habilidades que les permitan la aplicacin flexible de
las tcnicas manuales y adems utilicen equipos semiautomatizados como
automatizados, (equipo de uro-anlisis, gasmetro, in selectivo y autoanalizador
para qumica clnica que con ms frecuencia se emplean en las actividades
propias del mbito profesional.
Los residuos originados en las prcticas permanecern en el laboratorio 301
hasta que sean recogidos y tratados en la facultad de qumica en el programa
Unidad de Gestin Ambiental a cargo de la Dra. Elvira Santos Santos.
Los residuos biolgico infecciosos como Punzo-cortantes, algodn con sangre,
se recolectan y almacenan en los contenedores de deposito temporal (Lab.301) en
recipientes rgidos o bolsas de color rojo dependiendo del desecho, con el
emblema RPBIs y son llevados cada mircoles por el personal auxiliar de
laboratorio o laboratorista al camin de recoleccin de RPBIs. Los residuos
como sangre, plasma, suero, paquete globular, materiales con sangre o sus
derivados se tratan internamente en el laboratorio de acuerdo a la NOM-087-
ECOL-SSA1-2002.(12)

TRATAMIENTO DE RESIDUOS TXICOS:

Los desechos que se produzcan en cada sesin de prctica deben


recolectarse en recipientes previamente etiquetados con el siguiente emblema:

Universidad Nacional Autnoma de Mxico


Facultad de Qumica
Facultad de Qumica

RESIDUO

( ) Lquido_______________ CARACTERISTICA:
( ) Slido________________ Corrosivo ( )
Reactivo ( )
Explosivo ( )
Txico ( )
Laboratorio_______________ Inflamable ( )
Responsable______________

_______________________
Fecha

Unidad de Gestin Ambiental


INTRODUCCIN

Los nuevos mtodos analticos se desarrollan con el fin de mejorar la exactitud y la


precisin de los mtodos existentes, tambin tiene el propsito de permitir el
manejo de equipo automatizado, para reducir los costos de los reactivos o de la
mano de obra, o para medir un compuesto nuevo. En cualquier caso, se debe
verificar experimentalmente el rendimiento analtico en el laboratorio clnico
mismo, aun si se cree que el mtodo nuevo es una mejora con respecto a los
mtodos anteriores. La extensin de los experimentos y la interpretacin de los
datos van a depender del propsito de la evaluacin y de quien la realiza, pero el
fundamento bsico y el diseo experimental son similares en todas las
evaluaciones.
El proceso de evaluar un mtodo es distinto del proceso rutinario para el control de
calidad, despus de haber sido introducido en la rutina diaria. El control de calidad
rutinario (diario) es un proceso establecido por medio del cul se detectan los
incrementos en los errores analticos de un mtodo con el fin de evitar la liberacin
de datos incorrectos de los pacientes. El control de calidad rutinario detecta los
errores slo cuando estos son superiores a los errores presentes registrados en el
momento que se establecieron los intervalos para los controles. El uso del control
de calidad rutinario no le permite al investigador determinar la magnitud de los
errores inherentes del mtodo o de decidir si son aceptables.

EVALUACIN DE MTODOS
En Mxico las metas de calidad las rige el Reglamento de Ley General de Salud ,
que indica en su artculo 158 los laboratorios debern emplear reactivos y
medios de la ms alta calidad y se cuenta con organismos que acreditan la
competencia tcnica, como la Entidad Mexicana de Acreditacin (EMA),adems
de CLIA `88. Es necesario experimentar la evaluacin de los mtodos para
establecer los errores analticos inherentes del mtodo y relacionarlos con los
requisitos mdicos o reglamentarios.
Las evaluaciones de los mtodos en la mayora de las veces son realizadas por
el personal del laboratorio en los hospitales y laboratorios comerciales. Estas
evaluaciones se hacen con el fin de determinar si el rendimiento del mtodo
cumple, primariamente con los requisitos de aplicacin mdica dispuestas para el
usuario y, secundariamente las metas de calidad especificadas por CLIA88 se
cumplen para tener un rendimiento exitoso en las pruebas de aptitud
La decisin de aceptar o rechazar un mtodo posible para el laboratorio se debe
basar en la capacidad del mtodo para cumplir con los requisitos del usuario final,
el mdico, que por otra parte que es quien usa los resultados de la prueba del
laboratorio.
Caractersticas del mtodo
El paso siguiente en el proceso de seleccin, es la definicin de las caractersticas
metodolgicas ideales que permitirn que el mtodo seleccionado tenga buena
probabilidad de xito en el laboratorio. Estas caractersticas incluyen la
metodologa preferida, que tendr potencialmente la especificidad qumica
necesaria (libre de interferencias) y sensibilidad qumica (capacidad de detectar
cantidades pequeas o pequeos cambios en la concentracin del compuesto
analizado). Tambin es importante la capacidad de usar estndares acuosos para
calibrar (libertad de efectos de matriz). La eleccin de reactivos, temperatura,
tiempo de reaccin, tiempo de medicin y tipo de medicin (como mtodos de
determinacin de un punto, dos puntos o cinticos), son caractersticas de un
mtodo que deben definirse. La IFCC abreviatura de Internacional of Federation
Clinical Chemistry and laboratory Medicine y AACC asociacin Americana de
Qumica Clnica han desarrollado una serie de recomendaciones para los
mtodos empleados en qumica clnica, la familiaridad del operador con el
procedimiento del mtodo; la estabilidad de los calibradores, controles y reactivos;
y la linealidad de la respuesta a travs de todo el intervalo de trabajo.

Error aleatorio y error sistemtico


Por lo general, los errores que afectan el rendimiento de los procedimientos
analticos se clasifican en aleatorios o sistemticos. Los factores que contribuyen
al error aleatorio, son los que afectan la reproducibilidad de la medicin. Entre
estos se incluyen: (1) la inestabilidad del instrumento, (2) variaciones en la
temperatura, (3) variaciones en los reactivos y calibradores (y la estabilidad de la
curva de calibracin), (4) variabilidad en las tcnicas de manejo como el pipeteo,
mezcla y control de los tiempos y (5) variabilidad en los operadores. Estos
factores sobreponen sus efectos entre s a diferentes tiempos. Algunos producen
fluctuaciones muy rpidas y, otros, ocurre en perodos ms largos de tiempo.
Por consiguiente, el error aleatorio (RE) tiene componentes diferentes de variacin
que estn relacionados con la disposicin actual del laboratorio. El componente
de variacin dentro de una corrida (c.v .wr) es causado por etapas especficas en
el proceso, tales como la precisin en el pipeteo y variaciones a corto plazo de la
temperatura y la estabilidad del instrumento. La variacin intradiaria entre corridas
(c.v br) es causada por la inestabilidad de la curva de calibracin o por diferencias
en recalibracin que ocurren a travs del da, variaciones a ms largo plazo en el
instrumento, cambios pequeos en las condiciones del laboratorio durante el da y
la fatiga del personal del laboratorio. El componente intradiario de variacin es
causado por variaciones en el instrumento que ocurren a travs de los das,
cambios en los calibradores y reactivos (especialmente s se abren frascos nuevos
cada da) y cambios en el personal de da a da. Aunque no es un componente
aleatorio real de variacin, cualquier variacin en la curva de calibracin a travs
del tiempo tambin afectar de manera considerable el componente intradiario de
variacin. Estos componentes se pueden combinar de tal manera que se puede
obtener un clculo de la varianza total del mtodo.
Entre los trminos usados para indicar el error aleatorio se incluyen precisin,
imprecisin, reproducibilidad y repetibilidad. En cada uno de los casos se refieren
a la dispersin aleatoria de los resultados de las mediciones alrededor de algn
punto de tendencia central.
El error sistemtico (ES) describe el error que es consistentemente alto o bajo. Si
el error es consistentemente bajo o alto en la misma cantidad,
independientemente de la concentracin se designa como error sistemtico
constante. Si el error es consistentemente bajo o alto en una cantidad
proporcional a la concentracin del compuesto analizado, se conoce como error
sistemtico proporcional.
Los factores que contribuyen al error sistemtico constante son independientes de
la concentracin del compuesto analizado, y la magnitud del error es constante a
travs de todo el intervalo de la concentracin del compuesto analizado. El error
sistemtico constante es causado por una sustancia interferente presente en las
muestras o los reactivos, provocando una seal falsa. El error puede ser positivo
o negativo. Una reaccin entre una sustancia interferente y los reactivos causada
por una falta de especificidad es un ejemplo de error sistemtico constante.
Otra causa de un error sistemtico es una sustancia interferente en la reaccin
entre el compuesto analizado y los reactivos. Se observa este tipo de error en los
mtodos enzimticos que usan reacciones acopladas oxidasa-peroxidasa en las
cuales el perxido de hidrgeno formado es destruido por agentes reductores
endgenos, tales como el cido ascrbico. Las sustancias interferentes tambin
pueden inhibir o destruir el reactivo de modo que queda en cantidad mayor para
reaccionar con el compuesto analizado. Una fuente no qumica de error
sistemtico constante es el error causado por el uso de blancos inapropiados de la
muestra o los reactivos.
La causa ms frecuente de error proporcional es la asignacin incorrecta de la
cantidad de sustancia en el calibrador. Si el calibrador tiene ms compuesto
analizado que la indicada en el rtulo, todas las determinaciones desconocidas
darn bajas; una menor cantidad del compuesto que el rotulado provocar un error
positivo. El error ser proporcional al error de calibracin original. El error
proporcional tambin puede ser causado por una reaccin secundaria del
compuesto analizado. El porcentaje de la sustancia a determinar que participa en
la reaccin secundaria, ser el porcentaje de error en el mtodo.

Error constante calculado a partir de estudios de interferencia


El estudio de interferencia mide el error constante causado por la presencia de
una sustancia sospechosa de interferir con el mtodo en estudio. Para realizar
este estudio se toma una muestra a la cual se le ha agregado el interferente. El
volumen de esta adicin debe ser pequeo, menos del 10% del volumen de
muestra para que el efecto sobre la matriz de la muestra sea mnimo. Con el fin
de compensar la dilucin de la muestra se debe preparar una muestra de lnea de
base mediante la adicin de una cantidad igual del solvente usado para el
interferente, en otra alcuota de la muestra. A continuacin se deben analizar las
dos muestras, por lo menos por duplicado. La diferencia entre los resultados en
las dos muestras se puede atribuir a la interferencia causada por la sustancia
aadida.
El lmite de cuantificacin (LQ) que es el valor mnimo de la magnitud que puede
estimarse con una impresicin aceptada (habitualmente el 10%) (IUPAC).
EL lmite de deteccin (LD) que es el valor mnimo de la magnitud para el cual la
probabilidad de que el valor estimado no exceda al valor crtico es
(habitualmente 0.05).
El valor crtico (Lc)que es el valor mnimo de la estimacin de una magnitud para
el cual la probabilidad de que el valor verdadero de la magnitud sea cero es
(habitualmente 0.05).En el laboratorio clnico, los interferentes ms frecuentes son
hemlisis, lipemia e ictericia .
Un esquema para estudiar los efectos de la hemlisis consiste en tomar dos
muestras de sangre. Una es centrifugada y analizada directamente (muestra de
base) y los glbulos rojos del otro tubo son traumatizados fsicamente para romper
las membranas celulares con el fin de obtener una cantidad elevada de
hemoglobina srica. La muestra hemolizada es analizada despus de
centrifugarla. La diferencia entre las dos muestras se atribuye a los efectos de la
Se puede simular una hemlisis ligera, moderada o severa dependiendo del
volumen de glbulos rojos traumatizados. Este enfoque tiene ms coherencia con
los problemas encontrados en el laboratorio, que el enfoque en el cual se aade
hemoglobina pura a la muestra. Sin embargo, el procedimiento no es vlido si los
glbulos rojos contienen el compuesto analizado.
Se pueden estudiar los efectos de la lipemia dividiendo una muestra lipmica en
dos porciones; una se analiza directamente y la otra se somete a
ultracentrifugacin antes de su anlisis para eliminar las lipoprotenas.
La eleccin de sustancias a probar es casi infinita. Para todos los mtodos
espectrofotomtricos se debe determinar los efectos de hemlisis, ictericia y
lipemia. Tambin se deben ensayar otras sustancias que hayan sido reportadas
como interferentes para mtodos similares. El pipeteo debe ser (1) preciso, para
que las muestras de lnea de base y las que contienen el interferente reflejen el
mismo grado de dilucin y (2) exactas con el fin de aadir una cantidad conocida
de sustancia interferente. Nuevamente, resulta importante que la concentracin
del compuesto analizado en la muestra est cercana a los niveles de decisin
mdica. Se debe aadir la sustancia considerada como posible interferente, de tal
manera que su concentracin final sea la mxima fisiolgicamente esperada. Si
no se producen errores a esta concentracin tan elevada, se puede asumir que
concentraciones menores no afectarn de manera adversa el rendimiento del
mtodo. Si el error es demasiado grande a la concentracin mxima de sustancia
interferente, es conveniente comprobar las interferencias a concentraciones
menores. Una muestra ligeramente ictrica puede ser aconsejable, pero una
francamente ictrica, no. Se recomienda que estos estudios de interferencia sean
realizados tambin al mismo tiempo con un mtodo comparativo, con el fin de
verificar la tcnica experimental.

Medidas cinticas.
Un mtodo frecuentemente usado para la correccin de la interferencia espectral
es la medicin de una tpica reaccin de punto final, como lo es la reaccin
cintica de dos puntos. Si se monitorea la absorbancia de una reaccin
colorimtrica no instantnea en funcin del tiempo, se observa una curva de
reaccin. Una reaccin de punto final se monitorea a un solo punto de tiempo,
cuando la reaccin casi se ha completado .Si no hay interferencias espectrales, la
curva de reaccin debera pasar por el origen. Si existe este tipo de interferencia,
la curva ser paralela a la original, pero sesgada hacia valores ms elevados
debido al color endgeno de la muestra. Si se usa un blanco de muestra para
restar el color endgeno, se obtendr una lnea idntica a la de la muestra que no
contiene interferencias.
En un ensayo cintico de dos puntos, la absorbancia es medida a dos puntos
diferentes de tiempo; cuando (1) el desarrollo final de color no ha ocurrido y de
hecho puede ser pequeo y, (2) cuando la respuesta de absorbancia versus
tiempo es todava lineal.
La lectura inicial se toma realmente cuando casi no ha ocurrido formacin de
color. De esta manera, cualquier absorbancia a este tiempo es principalmente
ocasionada por interferentes espectrales endgenos. Despus de un tiempo
corto se toma una segunda lectura cuando se ha formado solamente una
pequea cantidad de color y la respuesta de absorbancia versus tiempo es todava
lineal .Esta absorbancia por lo tanto incluye la del color endgeno original y la del
color producido debido a la reaccin analtica especfica. Al substraer la primera
lectura de la segunda, la delta de absorbancia calculada (DA) es causada
solamente por el color especfico formado por la reaccin analtica. En la curva
estndar basada en los anlisis cinticos se grafica el cambio en la absorbancia
(DA) versus la concentracin .En esta curva estndar la presencia de un
interferente coloreado, no reactivo, endgeno, no tiene efecto. Por consiguiente
no se necesita hacer una medicin separada de blanco de muestra; una reaccin
cintica de dos puntos es por s misma un blanco cuando no hay cambio en la
naturaleza del interferente durante la reaccin. Esta es una tcnica importante
cuando se estn desarrollando anlisis qumicos automatizados en un gran
nmero de muestras.

Anlisis bicromtico.
Muchos instrumentos de uso corriente emplean diferentes tcnicas para la
correccin de interferencias espectrales. Esta tcnica involucra la medicin de la
absorbancia de una mezcla de reaccin a dos longitudes de onda diferentes
simultneamente. Estas son la longitud de onda principal (1) y otra longitud de
onda cercana 2. y, 1 es la longitud de onda a la cual el cromgeno tiene la
mxima absorcin. En 2 hay un mnimo de absorcin del cromgeno. Como la
reaccin es monitoreada simultneamente a dos longitudes de onda, sta es
conocida como anlisis bicromtico. Esta tcnica est basada en la premisa que
aunque un compuesto puede dar una interferencia espectral, la absorbancia
mxima del interferente ser diferente de la de la reaccin analtica verdadera.
Adems, este procedimiento se realiza bajo la presuncin que la absorcin
causada por el compuesto interferente es aproximadamente la misma en 1 que
en 2. Aunque la absorbancia medida a 1 ser producida por ambas, la
reaccin analtica y el interferente, la absorbancia a la segunda longitud de onda (
2) ser causada solamente por el interferente. El uso de este procedimiento
permite tambin que cada muestra sea utilizada como su propio blanco para el
color endgeno.
Otro mtodo similar para la correccin de la interferencia de fondo es la medicin
de la absorbancia a la longitud de onda primaria Amax y a dos longitudes de onda
adicionales, generalmente equidistantes del pico, A1 y A2. Las lecturas de
absorbancia a estas dos ltimas longitudes de onda son promediadas par dar la
absorbancia de fondo promedio en la muestra. Esta tcnica para la correccin de
la absorbancia de fondo de las sustancias interferentes es conocida como la
correccin de Allen.

Dilucin.
Como se discuti en el caso de la turbidez, la dilucin de una muestra que
contiene interferentes espectrales puede algunas veces reducir el problema. Se
debe ser cuidadoso en no diluir en exceso el compuesto deseado o el cromgeno
a una concentracin por debajo del nivel mnimo detectable para ese ensayo.
Muchas diluciones deben ser analizadas simultneamente para determinar la
dilucin ms efectiva.

Interferencias qumicas
Todas las interferencias que se discutieron hasta ahora han sido interferencias
espectrales causadas por compuestos que no participan en la reaccin qumica
analtica. Sin embargo, muchas interferencias reaccionan con las sustancias
analizadas. Los productos de reaccin de estas interferencias generalmente
provocan interferencias positivas, aunque se han observado interferencias
negativas.
Los tipos de interferentes reactivos qumicamente, no especficos pueden variar
ampliamente,. El cido rico produce una interferencia positiva, y la bilirrubina y el
cido ascrbico producen interferencias negativas en los mtodos de glucosa
oxidasa usados para medir la glucosa. La reaccin de picrato alcalino para la
medicin de creatinina presentan ambas interferencias positivas (cetonas,
protenas) y negativas (bilirrubina).

Correccin de las interferencias qumicas


La eliminacin de muchos de los interferentes qumicos no especficos se logra
frecuentemente por medio de una o ms de las siguientes tcnicas:
1. Diluyendo el interferente.
2. Aumentando la especificidad de la reaccin.
3. Removiendo el interferente.
4. Monitoreando un ensayo por medicin cintica.
5. Monitoreando un ensayo por medicin bicromtica.

La dilucin de la muestra es un mtodo efectivo en los casos de los interferentes


que no reaccionan a la misma velocidad o producen la misma intensidad de color
que el compuesto analizado. La interferencia por protenas se minimiza en
muchos analizadores automatizados por una dilucin grande de la muestra.
El aumento de especificidad de una reaccin analtica es a menudo lograda por el
uso de enzimas especficas como reactivos. Los ejemplos de este mtodo
incluyen: la medicin de glucosa por hexocinasa o glucosa oxidasa, cido rico
por uricasa, y urea por ureasa. Las reacciones con base inmunoqumica son
tambin usadas para aumentar la especificidad del anlisis. Un ejemplo sera la
medida de teofilina por inmunoensayo enzimtico comparado con otros mtodos,
los cuales emplean absorbancia ultravioleta.
La separacin de un interferente del compuesto analizado puede lograrse por el
uso de: una muestra libre de protenas, extraccin lquido-lquido, o cromatografa
de adsorcin o particin. Las muestras libres de protenas fueron originalmente
preparadas por precipitacin de las protenas del suero y separacin de la muestra
libre de protenas por filtracin o centrifugacin.

Los mtodos de laboratorio logran confiabilidad diagnstica una vez realizados los
protocolos de validacin clnica, a travs de emplear grupo de pacientes en
quienes se conoce la presencia o ausencia de niveles normales de lo que
cuantifica el mtodo.
1. INFORMACIN SOBRE EL CONTROL DE CALIDAD EN EL LABORATORIO
CLNICO.

El laboratorio clnico es un servicio mdico indispensable, cuya importancia ha


ido creciendo y desarrollndose a lo largo de los aos hasta ocupar un lugar
central en la medicina.
La meta fundamental de los laboratorios clnicos es proporcionar datos
confiables acerca de la composicin de muestras obtenidas de pacientes, de tal
forma que puedan contribuir al diagnstico, tratamiento y seguimiento de diversas
enfermedades. La obtencin de datos verdaderamente confiables, requiere de la
rigurosa aplicacin de diferentes tcnicas de control de calidad, teniendo siempre
presente que el mejor sistema de control es el que permite prevenir, identificar y
corregir los errores. Cuando no se dedica la atencin suficiente a la calidad, se
pueden presentar deficiencias serias.(1)
Un laboratorio clnico debe tener como uno de sus propsitos principales, la
produccin de datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones
analticas que sean precisas, exactas y adecuadas para tal fin; conduciendo esto a
resultados confiables. Para concretar este propsito se hace necesario la
utilizacin de programas de control de calidad interno y externo, entre otros
elementos, se debe recordar que se puede tener buena o mala calidad en todo
tipo de sistemas analticos ya sean stos manuales o automatizados, por lo que se
debe tener mucho cuidado en ambos casos.(4)
La meta de un sistema de control de calidad deber ser que: La variacin en
las determinaciones que se llevan a cabo en el laboratorio sea lo suficientemente
pequea para que no se afecte la utilidad .(1)
La realizacin de cualquier procedimiento analtico puede estar amenazada por
cometer un sin nmero de errores, algunos de los cuales pueden llegar a tener
consecuencias realmente serias.
Actualmente, frente a la demanda creciente de los usuarios del laboratorio
clnico (mdicos y pacientes) y como resultado del avance cientfico y tecnolgico,
se requiere controlar la operacin total, incluyendo las etapas pre-analtica,
analtica y post-analtica.(5)

1.1 ETAPA PREANALTICA

Las pruebas de laboratorio que miden un compuesto analizado en un


espcimen de sangre u otro fluido corporal, son solicitadas por los mdicos para
evaluar el estado del paciente. Se asume que el resultado analtico obtenido es
representativo de la concentracin real del compuesto analizado en el paciente.
Desafortunadamente, hay numerosos factores que pueden invalidar esta
suposicin. Un nmero de errores no analticos pueden tambin cambiar la
concentracin de uno o ms compuestos analizados en un espcimen de tal forma
que los resultados no reflejan la condicin fisiolgica del individuo. stos factores
son llamados colectivamente fuentes de error pre-analtico. De la misma forma
en que al controlar la temperatura, la longitud de onda, y tiempo de incubacin se
limitar el error analtico, el error pre-analtico tambin puede ser controlado.
Es responsabilidad de los laboratorios tomar medidas que minimicen las
fuentes de error, desarrollando procedimientos estandarizados referidos a la
preparacin del paciente, la recoleccin de la muestra, los mtodos de transporte
y la preservacin de la misma. (6)

1. Causas de Variacin Previas a la Recolecta

A) Variables del ciclo biolgico

Variacin cclica se refiere a los cambios en la concentracin de los


compuestos analizados, que ocurre de forma predecible a ciertas horas del da,
semana o mes. El estudio de estos cambios cclicos es llamado "cronobiologa".
La variacin rtmica es tpica de muchas funciones biolgicas; la variacin diurna
en el metabolismo de drogas y la incidencia de infarto al miocardio son dos
ejemplos de la importancia de este campo. La variacin cclica ms reproducible
es la circadiana, la cual ocurre durante el transcurso de un solo da.
La variacin cclica durante un perodo de tiempo mayor que un da
(infradiana), tambin puede afectar los resultados en las pruebas de laboratorio.
La variacin circanual, la cual ha sido reportada en algunas sustancias, est
relacionada con cambios en la dieta debido a la estacin, o con la variacin del
clima.
Infradiana:mayor que un da (ejemplo, ciclo menstrual)
Circadiana :alrededor de un da
Ulfradianos :menmor de 24 hr

Pruebas Sujetas a Variacin Diurna

Fosfatasa cida *
ACTH
Catecolaminas
Cortisol (y otros esteroides adrenales)
Gastrina*
Hormona del Crecimiento*
Tolerancia a la Glucosa
Hierro
Osteocalcina*
Hormana Paratiroidea*
Prolactina*
Renina/aldosterona
TSH*
*Ms alta en pasado meridiano ( PM) y las otras, ms altas en (A.M.)

Pruebas Afectadas por la Ingestin de Alimentos


Cloro*
Gastrina
Glucagn
Glucosa
Hormona del Crecimiento
Insulina
Calcio Ionizado
Fosfato *
Potasio *
Triglicridos
pH en Orina
*Ms bajo despus de los alimentos; todos los dems, ms altos. (6)

B)Variables fsicas relacionadas con el paciente

El ejercicio fsico es una causa comn controlable de variacin en los


resultados de las pruebas de laboratorio.
Dentro de las pruebas qumicas de rutina se ha observado que: el potasio, el
fsforo, la creatinina y las protenas sricas son significativamente alterados por
un perodo breve de ejercicio. Con el ejercicio regular, hay un aumento en las
enzimas relacionadas con la actividad muscular y un aumento en la concentracin
de cido rico en sangre. El ejercicio intenso, como correr en un maratn,
produce una rpida elevacin en la concentracin del potasio, cido rico,
bilirrubina y enzimas musculares, mientras que la concentracin de glucosa y
fsforo disminuyen significativamente. En personas sometidas a entrenamiento
para competencias de distancias largas, las concentraciones de gonadotropina y
esteroides sexuales estn marcadamente disminuidas, mientras que la
concentracin de prolactina est aumentada.
La postura es una causa de variacin preanaltica fcilmente controlable. En la
posicin de pie, se observa que un incremento en la presin hidrosttica causa
prdida de agua y electrlitos procedentes del compartimiento del lquido
intravascular, lo que a su vez da como resultando un aumento en la
concentracin de protenas. (1)

Procedimientos para minimizar las variables en el paciente

a) Variables biolgicas cclicas.


El laboratorio deber determinar cuales de las pruebas realizadas tienen
cambios significativos de concentracin, ya sean cclicos o relacionados con la
ingesta de alimento. En condiciones ptimas, los especmenes para estas pruebas
debern ser colectados tan pronto como el paciente despierte y que est todava
en ayunas. Si hay un patrn de variacin ultradiana, como lo hay para la mayora
de las hormonas pituitarias, se debern colectar varios especmenes a intervalos
mayores del ciclo usual, para proveer una nocin exacta sobre la produccin de
hormonas.

b) Variables fsicas.
Si se estn colectando muestras para medir compuestos analizados, que son
afectados por el ejercicio, es necesario interrogar al paciente para saber si ha
realizado ejercicios vigorosos en las ltimas 24 a 48 horas. Cualquier historia de
ejercicio vigoroso deber ser anotada en la forma de requisicin e incluirse en el
reporte final. Otra alternativa ser pedirle al paciente que regrese despus para la
toma de esa muestra. Antes de la toma de muestra el estado de estrs es difcil
de controlar; sin embargo, los mdicos debern estar informados sobre aquellas
pruebas que pueden estar afectadas, as como de la magnitud del cambio
inducido por el estrs, ya sea fsico o mental. Hay casos donde resulta
recomendable que el laboratorio solicite asesora especial antes de llevar a cabo
pruebas que son severamente afectadas por el estrs del paciente, tales como las
pruebas de funcin adrenal o pituitaria, metabolitos de catecolaminas, anlisis de
lpidos y prueba de tolerancia a la glucosa. Los efectos provocados por la postura
pueden minimizarse pidiendo a los pacientes ambulatorios, que permanezcan
sentados por lo menos 15 minutos antes de la extraccin de la sangre. Para los
anlisis que sufren alteraciones por la dieta, incluyendo las mediciones de
tolerancia a la glucosa, hidroxiprolina, 5-HIAA y los metabolitos de las
catecolaminas urinarias, es recomendable proveer al paciente con las indicaciones
por escrito, antes de ser programado para la colecta de la muestra. Si pruebas
tales como la medicin de renina y aldosterona, tolerancia a la glucosa, orina de
24 horas, grasa en heces de 72 horas, requieren de una preparacin especial del
paciente, resulta buena prctica citar entes al paciente antes para entregarle una
explicacin detallada en una hoja impresa. (6)

2. Causas de Variacin en la Recolecta de Sangre

Tcnicas para la recolecta de sangre

El uso incorrecto de los procedimientos para obtener especmenes puede


inducir errores significativos en los resultados finales de las pruebas de
laboratorio; los errores relacionados con la colecta de muestras en el laboratorio
son las causas ms comunes de resultados errneos. En hospitales de
enseanza, la flebotoma es llevada a cabo por una variedad de individuos
(enfermeras, asistentes de mdicos y estudiantes) quienes tienen un
entrenamiento formal limitado o incluso carecen de l, en tcnicas de flebotoma.
En la mayora de los laboratorios, los especmenes son colectados usando
tubos al vaco y agujas especialmente diseadas, que simultneamente permiten
la puncin de la vena y del tapn del tubo. Los tubos para colecta son hechos: de
vidrio, plstico los cuales estos ltimos son usados con ms frecuencia; ambos
son apropiados para la mayora de las pruebas. Muchos tubos estn cubiertos con
silicn, el cual reduce la adhesin del cogulo, permitiendo mejor separacin del
suero y de las clulas. Los tapones estn tpicamente hechos de hule.
En nios y adultos con difcil acceso venoso, puede hacerse una puncin
capilar para la obtencin de la muestra. Ciertos micro tubos especiales, que
contienen anticoagulantes pueden llenarse por capilaridad. La contaminacin de la
muestra con fluidos de tejido es una causa potencial de preocupacin en todos los
procedimientos de coleccin capilar de sangre, ya que el fluido tisular virtualmente
no contiene protenas y, por lo tanto, no tiene compuestos analizados unidos a
protenas. Este tipo de contaminacin puede ser minimizado usando solo la
sangre que fluye libremente del sitio de puncin. (6)

Tipos de muestras de sangre

Las diferencias que existen entre sangre arterial, venosa y capilar, son causas
ocasionales de resultados errneos. La sangre arterial es la fuente de nutrientes
para todos los tejidos del cuerpo y es la mejor muestra para el anlisis de la
distribucin de sustancias necesarias para los tejidos corporales como el oxgeno.
La sangre venosa difiere de la sangre arterial en que tiene menores
concentraciones de sustancias usadas en el metabolismo, tales como oxgeno y
glucosa, y ms altas concentraciones de productos de desecho tales como: cidos
orgnicos, amoniaco y dixido de carbono.
Si sitios especficos como el pie se mantienen tibios, se pueden obtener
muestras de sangre capilar que son muy parecidas a las de sangre arterial. En
estados de poca perfusin tisular y en los neonatos, sin embargo, hay una
diferencia significativa entre la presin parcial de oxgeno (PO2) de la sangre
capilar y la arterial. (6)

a) Errores relacionados con preservativos y anticoagulantes

Los preservativos y anticoagulantes son ampliamente usados para colectar


muestras de sangre, orina y otros fluidos corporales. Cuando se extrae sangre del
cuerpo y se deja coagular, sta se separa en una fase lquida llamada suero y en
un cogulo slido conteniendo clulas sanguneas y fibrina. Si se aade un
anticoagulante como la heparina, la fase lquida es llamada plasma. El suero y el
plasma son similares en muchos aspectos. El suero difiere del plasma en que
carece de fibrina, disminuyendo el total de protena en un promedio de 3 g/L. En
la coagulacin, las plaquetas liberan potasio al suero; la concentracin de potasio
en el plasma es aproximadamente de 0.2-0.3 mmol/L ms bajo que el potasio en
suero. Por razones desconocidas, la concentracin de fsforo es ms baja en
plasma por un promedio de 2 g/L. En pacientes con algunos trastornos
hematolgicos estas diferencias son exageradas. Con estas pocas excepciones,
el suero y el plasma heparinizado son usados indistintamente para pruebas de
laboratorio. La seleccin del tipo de muestra depende de la instrumentacin,
mtodos de ensayos y de la necesidad de rapidez en los resultados.
El EDTA, contenido en el tubo utilizado para la recoleccin de muestras en
hematologa, es usado tambin para algunos ensayos qumicos porque la
quelacin de los cationes divalentes inactiva muchas enzimas y conduce a
cambios in vitro de hormonas peptdicas y lpidos. La quelacin de cationes tales
como el hierro, magnesio y calcio, sin embargo, causa una disminucin artificial de
los resultados en la mayora de los ensayos colorimtricos y reduce la actividad de
enzimas, que requieren cationes activadores (fosfatasa alcalina y creatin cinasa).
La contaminacin de muestras con anticoagulantes, especialmente EDTA, es un
problema comn en muchos laboratorios. Debido al potencial del EDTA para
interferir en muchos ensayos, los recomendable ser qu los tubos conteniendo
EDTA deban llenarse al ltimo. Si se est usando anticoagulante lquido, es
importante asegurarse que sea proporcional la cantidad de sangre y
anticoagulante. (6)

b) Errores relacionados con los tubos separadores de suero

Los tubos separadores de suero y plasma son usados por muchos laboratorios
para simplificar el proceso de separacin del suero (o plasma) de los elementos
celulares. Los tubos separadores de suero y plasma, contienen un gel
relativamente inerte e impenetrable, el cual tiene una densidad intermedia entre
los elementos celulares y el plasma o suero. Durante la centrifugacin, el gel se
levanta desde el fondo del tubo y forma una barrera mecnica que evita que los
cambios metablicos afecten las concentraciones plasmticas. Los tubos que
contienen estos geles pueden ser centrifugados y almacenados sin ser
destapados, reduciendo as el riesgo de producir aerosoles infecciosos y evitando
en forma simultnea la evaporacin. Algunos agentes teraputicos se adsorben en
el gel, disminuyendo falsamente las concentraciones de antidepresivos tricclicos y
ciertas drogas antiarrtmicas como el flecainide. Con estas excepciones, la
mayora de sustancias en plasma no son afectadas por el uso de geles
separadores. (6)

c) Errores relacionados con las tcnicas de recolecta inadecuada

Torniquetes.
El uso de los torniquetes constituye una importante causa, adems
controlable, de variacin en los resultados de pruebas de laboratorio. Los
torniquetes son ampliamente usados en flebotomas para bloquear el retorno
venoso, causando dilatacin de las venas y haciendo ms fcil la identificacin de
un sitio de venopuncin. Los torniquetes a menudo se permanecen colocados
durante el proceso de venopuncin asumiendo que la continua dilatacin venosa
permitir una colecta ms rpida de la muestra y evitar el "colapso" de la vena.
Aunque los torniquetes hacen el proceso de flebotoma ms fcil, la
disminucin en el flujo de sangre que stos inducen, causa cambios en los
resultados de las pruebas de laboratorio que pueden predecirse. Un minuto
despus de aplicar el torniquete, el incremento de presin causa prdida de agua
y electrlitos del plasma hacia el espacio del fluido extracelular, produciendo una
elevacin en la concentracin de protenas, clulas y sustancias unidas a clulas y
protenas. Si un torniquete se deja por 5 minutos, la elevacin en la concentracin
puede alcanzar hasta 15%. La magnitud de estos efectos puede diferir entre el
primero y el ltimo tubo colectados, mostrando una hemoconcentracin mayor en
las ltimas muestras. (6)

Hemlisis.
La hemlisis ocurre cada vez que hay un trauma en los relativamente frgiles
eritrocitos, ya sea durante la colecta o con menor frecuencia despus de la
flebotoma. Una causa poco comn de hemlisis, es cuando se lleva a cabo la
flebotoma antes de que se seque el alcohol o cualquier otro desinfectante usado.
Frecuentemente, la hemlisis es causada por un flujo turbulento no laminar,
durante el proceso de colecta. Dentro de los tamaos de agujas que comnmente
se utilizan, la hemlisis no es causada por el uso de agujas muy grandes o muy
pequeas. El flujo no laminar ocurre comnmente cuando la sangre se mueve
muy lentamente o demasiado rpido a travs de la aguja. Si la sangre se extrae
con una jeringa, al sacar el embolo con fuerza o al inyectar la sangre en los tubos
usando presin en el embolo, generalmente se produce hemlisis. En forma
similar, el flujo de sangre lento de una vena colapsada que es depositado a un
tubo con vaco a menudo produce una muestra hemolizada. La turbulencia en un
tubo conteniendo sangre tambin puede causar hemlisis despus de haber
terminado la colecta; los transportadores mecnicos y centrfugas en mal estado
son causas raras de hemlisis.
La hemlisis altera los resultados de las pruebas de laboratorio. De manera
importante el contenido de los glbulos rojos es liberado, incrementando la
concentracin de sustancias intracelulares tales como lactato deshidrogenasa (LD
H), potasio y magnesio, mientras que disminuye la concentracin de solutos
extracelulares como el sodio. (6)

Contaminacin con fluidos intravenosos


A muchos de los pacientes hospitalizados,por prescripcin mdica se les
administra fluidos intravenosos, los cuales tpicamente tienen una concentracin
ms alta de glucosa, drogas y algunos electrlitos, que los que estn presentes en
la sangre. La contaminacin con fluidos intravenosos ocurre, cuando la sangre es
extrada de una vena conectada a la vena que tiene el catter. Aunque pudiera
parecer que una vena en el antebrazo es suficientemente distante del catter, hay
una gran cantidad de interconexiones. Cualquier extraccin de sangre de una
vena que se encuentre en el mismo lado donde est instalado un catter, corre el
riesgo de experimentar contaminacin por fluidos. (6)

c)Errores relacionados con la identificacin del paciente y la muestra


correspondiente.

Debido a que no hay forma de probar que una muestra sin etiqueta pertenece a
un paciente dado, resulta esencial la identificacin apropiada de las muestras.
Mientras que el etiquetado puede parecer la parte ms simple de la colecta de
muestras, en la mayora de los laboratorios es la causa ms comn de resultados
errneos. Muchos errores se cometen cuando se etiquetan muestras de pacientes
con nombres similares (6)

3. Causas de Variacin Posteriores a la Recolecta

La causas de variacin posteriores a la recolecta son ms fcilmente


controladas por el laboratorio que las variaciones relacionadas con la flebotoma,
ya que es posible desarrollar criterios para las condiciones aceptables de
almacenamiento y manejo de muestras despus de la colecta, durante el tiempo
que las muestras estn en posesin del laboratorio. Dentro de las variables en el
manejo de muestras que afectan los resultados de las pruebas estn: transporte,
separacin del suero de los elementos celulares y las condiciones de
almacenamiento. (6)

Transporte de las muestras

Errores relacionados con el transporte de muestras.


Comnmente las muestras son transportadas por los flebotomistas o por los
mensajeros. Una tardanza razonable en la transportacin, por lo general es bien
tolerada por la mayora de los compuestos analizados, ya que los cambios
metablicos ocurren relativamente despacio a temperatura ambiente. As, la
tardanza hasta de una hora no cambia la concentracin de la mayora de los
compuestos analizados. La glucosa, a menudo considerada una de las sustancias
ms lbiles en la sangre disminuye de 2 a 3% por hora, a temperatura ambiente,
en tubos sin inhibidores glucolticos como el fluoruro. Los productos del
metabolismo (como lactato, amonio y el ion hidrgeno) se acumulan en el plasma
despus de la toma de la muestra, a menos que las reacciones enzimticas sean
retardadas. (6)

Procedimiento para minimizar errores de transportacin


Para minimizar la variacin posterior a la colecta, los especmenes deben ser
entregados y almacenados rpidamente despus de la toma de muestras. Los
compuestos analizados que estn sujetos a cambios de concentracin in vitro a
temperatura ambiente, inmediatamente deben ser transportados en hielo al
laboratorio. Las instrucciones de manejo deben ser claras; en muchos casos, las
muestras son colocadas incorrectamente sobre hielo, transportadas sobresaliendo
de un recipiente con hielo o sumergidas en hielo sin agua. Debido a que un slido
conduce calor ms lentamente que un lquido, las muestras manejadas de esta
manera, no se enfriarn tan rpido y pueden mostrar cambios en la concentracin
del compuesto analizado.
Aunque el enfriamiento de las muestras durante su transporte minimiza muchos
cambios artificiales en la concentracin de compuestos analizados, el enfriamiento
tambin incrementa la liberacin de potasio de las clulas.
Para una sustancia que sufre cambios en la concentracin debidos al
metabolismo in vitro, debe indicarse un tiempo especfico tolerable de retraso. (6)

Procesamiento de muestras

Errores originados debido al procesamiento incorrecto de las muestras


La centrifugacin es el mtodo ms comnmente usado para la separacin
inicial del suero y las clulas. En general, la centrifugacin de muestras por 5 a 10
minutos a 1000-2000 G es adecuada para la completa separacin del suero y
eritrocitos, incluyendo las muestras que contienen geles separadores de suero o
plasma. Las muestras para obtener suero deben ser centrifugadas nicamente
hasta que la formacin del cogulo sea completa (al menos 20 a 30 minutos
despus de su colecta). Se debe tener la precaucin de revisar que realmente el
cogulo se haya formado, ya que puede haber razones fisiolgicas para que
ocurran tiempos prolongados de formacin del cogulo. Por ejemplo, las muestras
de pacientes de dilisis pueden continuar coagulndose por horas despus de la
colecta debido a la heparina empleada en la preparacin de los pacientes para
dilisis. Con tubos que no contienen geles separadores, es necesaria una etapa
adicional para completar la separacin. Antes de la centrifugacin, los objetos
tales como perlas de vidrio, tapones o cualquier otro objeto mecnico puede ser
adicionado a los tubos para realizar la misma funcin que el gel. El suero debe ser
separado de las clulas, de otra manera, las clulas sanguneas continuarn
llevando a cabo sus funciones metablicas y alterarn la composicin del
espcimen. (6)

Almacenamiento de muestras

Errores originados debidos al almacenamiento inadecuado de muestras


Una vez que el suero o plasma ha sido separado de las clulas, la mayora de
las sustancias en un perodo de 2-3 das muestran pequeos cambios en la
concentracin cuando se mantienen a 4 C. Para com puestos analizados lbiles,
incluyendo, enzimas y algunas otras sustancias, las muestras deben ser
congeladas para prevenir cambios relacionados con el almacenamiento. Los
compuestos analizados que pueden ser intrnsecamente estables en
almacenamiento, tambin pueden cambiar en presencia de otros compuestos.
La evaporacin puede incrementar la concentracin de la muestra. Cuando
una muestra no est cubierta, la velocidad de evaporacin es afectada por la
temperatura, humedad, movimiento del aire y el rea superficial de la muestra. (6)

Procedimientos para minimizar errores por almacenamiento.


Los errores por almacenamiento pueden ser evitados seleccionando
adecuadamente la hora, la temperatura y las condiciones de almacenamiento. La
mayora de los compuestos analizados son estables, cuando se almacenan
refrigeracin durante 72 horas. Si un compuesto analizado no es estable, las
muestras deben ser congeladas, hasta su anlisis. La mayora de especmenes
pueden almacenarse a -70 C sin que sean afectadas las concentraciones de los
compuestos analizados, ms que cuando sean congelados por varios aos. A las
temperaturas estndares de congelacin de 10 a 2 0 C, la mayora de las
sustancias sern estables por perodos ms cortos. Debe evitarse la
descongelacin y recongelacin repetidas de muestras; esto es especialmente
problemtico con los congeladores modernos "libres de escarcha", los cuales
peridicamente incrementan la temperatura de congelacin para permitir la fusin
de la escarcha. Los compuestos analizados que son susceptibles a ciclos
repetidos de congelacin y descongelacin, como el complemento, debern ser
almacenados en otro tipo de congeladores. Las muestras congeladas deben ser
descongeladas lentamente a temperatura ambiente o en un bao de agua a 37 C,
y entonces ser mezcladas meticulosamente antes de su anlisis. (6)
Criterio para el rechazo de especmenes

Para evitar el reporte de resultados falsos, cada laboratorio debe establecer el


criterio para el rechazo de especimenes. Un espcimen debe ser rechazado
cuando los resultados obtenidos en su anlisis no representan el estado del
paciente. La causa ms comn de rechazo de un espcimen se origina por una
identificacin inadecuada. Los especimenes debe tener el nombre del paciente y
nmero de identificacin tanto en la muestra como en la requisicin. Los
especimenes que no son extrados por el personal del laboratorio debern ser
cuidadosamente revisados antes de ser aceptados en el laboratorio. En
especmenes que requieren manejo especial, las causas ms comunes de
rechazo son la colecta y/o transporte inadecuado.
Cada laboratorio deber tener una lista de muestras alternativas aceptables
para cada prueba; por ejemplo, el manual del laboratorio puede sugerir la colecta
de suero para una prueba en particular, pero una muestra de plasma heparinizado
puede ser una alternativa aceptable. Si las muestras contienen otros
anticoagulantes o preservativos, deben ser rechazadas (aunque sean tiles para
otros anlisis). Cuan las muestras se manejen en tubos que contienen
anticoagulantes o preservativos, se indicar la proporcin hay entre los mismos .
Esto es ms crtico con preservativos en soluciones lquidas, pero puede ocurrir
tambin con anticoagulantes en polvo. Los tubos que no tengan la proporcin
apropiada no deben ser aceptados para anlisis. Para pruebas que requieren una
preparacin especial del paciente y si sta no se llev a cabo, las muestras deben
ser rechazadas. Si una prueba es afectada por hemlisis, los especmenes
hemolizados deben rechazarse. As mismo, si el resultado de una prueba es
afectado por lipemia (y la muestra no puede ser clarificada por ultra centrifugacin
antes del anlisis), este resultado de la prueba no deber ser reportado. Aunque
muchos mdicos se quejen cuando el laboratorio no les reporta el resultado de las
pruebas que solicitaron para sus pacientes, si hay alguna duda a cerca de la
validez de un resultado este no debe ser reportado. Los resultados errneos
pueden conducir al tratamiento inadecuado del paciente. (6)

1.2 ETAPA ANALTICA

En la fase analtica se realizan las mediciones y observaciones en funcin de


los procesos o protocolos que cubre el laboratorio. Cada procedimiento de anlisis
describir no slo las mediciones y observaciones implementadas en el
laboratorio, sino tambin la verificacin de las caractersticas de ejecucin, que
pretende la persona que elabor el procedimiento o el fabricante del sistema
analtico. Los procedimientos, materiales de sistema de control, varan segn la
especialidad. Algunas veces los valores obtenidos son variables continuas
(mtodo cuantitativo), en otros casos las variables son discretas (semi-
cuantitativas y cualitativas), pero en todos los casos, en la fase analtica se debe
considerar la medicin u observacin y un procedimiento de control. La seleccin
del procedimiento se basa en los criterios de practicabilidad y confiabilidad. Los
aspectos de practicabilidad incluyen la educacin y el entrenamiento requerido,
disponibilidad de reactivos, los requerimientos instrumentales, el tiempo de
ejecucin, el costo y la seguridad. El personal encargado de elaborar los
procedimientos con base en un estndar de operacin, debe cuidar estos
aspectos al igual que la industria que los adapte a su versin comercial y es
importante tomarlos en cuenta antes de seleccionar un procedimiento que se vaya
a implementar en el laboratorio. Los criterios de confiabilidad describen la
ejecucin analtica del mtodo cuando se utiliza en condiciones rutinarias y son los
siguientes: la exactitud en la ejecucin, la precisin (expresada como una
desviacin estndar o coeficiente de variacin), la veracidad (expresada como
desviacin), la linealidad, la especificidad analtica, la interferencia analtica, el
lmite de deteccin, el intervalo de medicin y el error total. Las caractersticas
anteriores pueden variar de un laboratorio a otro, ya que la implementacin de
cada uno de ellas modifica las condiciones ptimas. La etapa o fase analtica en
qumica clnica, tambin incluye otros aspectos como son: la calibracin, los
estndares de calibracin, los mtodos de medicin, la capacidad de rastrear los
resultados para validarlos, los clculos para los resultados, la utilizacin de curvas
de medicin, el uso de relaciones tericas para algunas magnitudes, las
transformaciones de resultados para hacerlos ms informativos al mdico, el uso
de computadoras y analizadores, los procedimientos que permiten monitorear la
ejecucin de un procedimiento de medicin con el propsito de una accin
correctiva, el uso de materiales o sueros control y la preparacin del mismo, el
establecimiento de los lmites de control, la realizacin de grficas de control, la
interpretacin de las mismas, el uso de reglas de control, el archivo de todo lo
relativo al control de calidad para posteriores requerimientos, entre otros
aspectos.(7)

1.3POST-ANALTICA

La preservacin de la calidad post-analtica es el proceso para verificar la


calidad en todos los procedimientos que se llevan a cabo cuando el reporte sale
del laboratorio y queda en manos del mdico o profesional al cuidado de la salud.
Adems de utilizar intervalos de referencia correctos, las reas de preservacin de
la calidad post-analtica incluyen:
 Verificacin de los clculos en los reportes finales.
 Revisin de los resultados de la prueba para detectar posibles errores de
trascripcin.
 Que los reportes sean fciles de leer e interpretar.
 Procedimientos para informar al mdico de resultados que requieran de
atencin inmediata.
 Vigilar que se reporten en el momento preciso los valores en el expediente
del paciente.
 Verificar que el medico interprete en forma correcta las pruebas de
laboratorio.
 Mantener una interaccin constante con el personal responsable de la
institucin, con el fin de asegurar que el paciente reciba cuidados directos
de buena calidad como resultado de las pruebas de laboratorio.
En general, la vigilancia de esta parte de la preservacin de la calidad se
realiza de dos maneras. Estas observaciones suelen relacionarse con reportes de
laboratorio incorrectos o con que transcurre demasiado tiempo, desde que se
solicita la prueba de laboratorio hasta que se reciben los resultados finales. El otro
tipo de vigilancia de la calidad en esta rea, se practica mediante la valoracin
continua del impacto de los resultados y procedimientos del laboratorio dentro de
la institucin en la cual brinda sus servicios. El objetivo de estas valoraciones
continuas es promover la excelencia en los cuidados para los pacientes, por
medio de las relaciones humanas con todos los departamentos de la institucin.
Los programas de preservacin de la calidad a nivel institucional toman la forma
de crculos de calidad, comits para preservacin de la calidad o comits
revisores. El objetivo de estos grupos no es resolver problemas sino evitar que
ocurran. Adems es necesario que el laboratorio tenga algn mtodo para
preservar en forma continua la calidad, verificando peridicamente su capacidad
para funcionar como un departamento de buena calidad. Esto puede incluir la
evaluacin de los espacios disponibles en el laboratorio para asegurar eficacia en
los servicios, revisar el grado de preparacin del personal y apoyarlo, para que
participe en actividades de actualizacin de conocimientos y continuar con su
formacin profesional.
Todos los miembros del personal de laboratorio son responsables de que se
preserve la calidad dentro del mismo. Esto ser una forma de convivencia y una
actitud evidente en todos los niveles de prctica. La calidad debe extenderse ms
all de los confines fsicos del laboratorio e incluye la responsabilidad de los
servicios hacia cualquier mdico que ordene una prueba y una preocupacin
permanente para que el paciente reciba tratamiento eficaz como resultado de los
datos que arroja el laboratorio.(5)

Una vez que se propicie un aseguramiento de la calidad de los estudios en


cada una de las etapas anteriores, se podrn obtener resultados concretos
respaldados con bases slidas, es decir, se podr afirmar entonces que se tiene
un laboratorio con la adecuada estructura operativa y administrativa.
1.4 FLEBOTOMA

PUNCIN VENOSA
1.0 INTRODUCCIN

La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del


laboratorio clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio
y sus pacientes, y respecto a la muestra sangunea: la enorme importancia que
conlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de su origen, y el
correcto envasado y transporte constituyen factores fundamentales en la
evaluacin e informe de los exmenes a realizar.(11)
El organismo utiliza la sangre para el transporte de oxgeno, alimento, residuos
y otros materiales que hay en el interior del cuerpo, y tambin para regular la
temperatura corporal, los lquidos y el equilibrio cido bsico. Debido a las
mltiples funciones de la sangre dentro del cuerpo, los exmenes de sta o de
sus componentes pueden suministrar indicios claves para el diagnstico de
muchas condiciones mdicas.
La sangre est compuesta de una porcin lquida (plasma) y de una porcin
celular; el plasma contiene varias substancias que estn disueltas en el lquido. El
suero es lo que queda, cuando el fibringeno se ha separado del plasma (lquido
que queda despus de que se deja coagular la sangre en un tubo de ensayo). La
porcin celular de la sangre consta principalmente de glbulos rojos, pero tambin
tiene glbulos blancos y plaquetas.(8)
Los tubos al vaco han reemplazado a las jeringas. Estos tubos pueden estar
siliconados para evitar la hemlisis de la muestra, vienen preesterilizados por
irradiacin y presentan tamaos de 2 a 30 mL. Durante la recoleccin de la
sangre y hasta que el suero es separado de los glbulos rojos, debe reducirse la
posibilidad de hemlisis (utilizando agujas de calibre adecuado, tubos limpios y
secos, un mezclado suave, etc.) ya que la hemlisis produce la elevacin in vitro
de la concentracin de los metabolitos del suero, al liberarse estos de los
eritrocitos, p.ej. fsforo , sodio, hemoglobina, protenas totales, lpidos, enzimas,
bilirrubinas, etc., tambin puede provocar un efecto de dilucin de los
componentes qumicos del suero, al liberarse sustancias del interior de los
eritrocitos.(9)
Si se toma varias muestras de sangre, con tubo al vaco y una sola puncin
venosa hay que tener precaucin de poner los tubos en un orden definido para
evitar la contaminacin cruzada entre tubos.
El orden recomendo de la toma, cuando se efecta una recoleccin mltiple
de muestras es el siguiente:
 Tubos sin anticoagulante (Rojo).
 Tubos para pruebas de coagulacin. (Azul).
 Tubos con otros anticoagulantes (Lila, Verde, Verde-Gris y Amarillo).(10)

Cuadro I
TUBOS DE FLEBOTOMA Y SU APLICACIN

Muestras Tipo de Color del Bases qumicas Aplicacin


Anticoagulante tapn
Tubos de flebotoma
Plasma. Citrato. Azul. Captura calcio. Coagulacin.
Plasma. EDTA. Lila. Captura calcio. Hematologa.
Plasma. Heparina. Verde. Inhibe trombina. Qumica.
Plasma. Citrato. Negro. Captura calcio. Coagulacin.

Agentes antiglucolticos
Suero. Yodoacetato. Gris. Inhibe la gliceral- Glucosa,
dehdo-3-fosfato cido lactico
deshidrogensa.
Plasma parcial. Fluoruro. Gris. Inhibe la enolasa. Glucosa.

Tubos especiales
Suero. Ninguno. Azul. Libre de Oligoelementos,
Brillante. contaminantes. metales pesados.
Suero. Ninguno. Marrn. Libre de plomo. Plomo.
Suero. Separador de Gris/rojo. Barrera de gel. Qumica.(10)
suero.

Sistema de tubo colector(9)

CUADRO 1

2.0 OBJETIVOS

 Definir y realizar los procedimientos necesarios para minimizar los errores


en la toma de muestras.

 Definir y aplicar adecuadamente el procedimiento para la puncin venosa.


 Validar la enorme importancia para obtener una muestra apropiadamente
colectada, su correcto envasado y transporte.

 Realizar la puncin venosa entre los alumnos y utilizar el modelo brazo


mecnico para manejo de material utilizado en la punci

3.0 MATERIAL

Para desinfectar la piel:

 Alcohol isoproplico al 70%.


 Algodn.
 Gasas.

Para puncin de la vena

 Ligadura de goma de ltex (2-5 mm de dimetro por 35-40 cm. de largo).


 Tubos al vaco correctamente identificados.
 Soporte para tubos VACUTAINER
 Agujas desechables estriles calibre 20, 19 o 18.(9)
 recipiente para desechos punzo cortantes
 bolsas rojas para desechos biolgicos

4.0 CONDICIONES DE LA TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA

 Es necesario que la persona que va a tomar la muestra adopte actitud de


confianza, autoseguridad y equilibrio. Conocer y realizar los procedimientos
necesarios para minimizar los errores en la toma de muestras.
 Debe explicar brevemente al paciente las maniobras que va a realizar para
obtener la mayor colaboracin posible. Debe tranquilizarse al paciente para
disminuir el estado de estrs.
 Revisar que todo el material est listo (tubos rotulados, torundas de
algodn, alcohol, ligaduras, jeringa, gradilla, tapones).
 El paciente y el operador deben estar en posicin confortable y en un sitio
con buena iluminacin.
 El paciente debe estar sentado en una silla y debe extender el brazo sobre
el borde de una mesa, encima de una toalla desechable, para tener acceso
fcil y cmodo a la fosa antecubital. Evitar el uso de bancos altos sin
respaldo.
 Es necesario tener en cuenta el tipo de anlisis, el volumen de la muestra y
la edad del paciente.
 Para volmenes pequeos de muestra es recomendable utilizar el lbulo de
la oreja, pues en caso de utilizar los dedos de la mano se corre el riesgo de
infecciones por contaminacin en el trabajo de laboratorio.
 Para un volumen mayor, el sitio ms adecuado es la vena que se encuentra
en el pliegue anterior de la flexin del codo, se recomienda utilizar la vena
mediana baslica o ceflica ver la Figura1
 En los pacientes obesos las venas que se observan azulosas son
demasiado superficiales y pequeas y es mejor no utilizarlas.
 Es conveniente que el paciente no mire mientras se est realizando la
puncin.(9)

5.0 SELECCIN DEL SITIO DE PUNCIN


FIGURA 1

VENAS SUPERFICIALES DEL BRAZO


1. V. Ceflica.
2. V. Baslica.
3. V. Media baslica.
4. V. Mediana ceflica.
5. V. Radial accesoria.
6. V. cubital superficial.
7. V. Radial superficial.(9)

6.0 PROCEDIMIENTO PARA LA PUNCIN VENOSA

6.1 DESARROLLO DE LA PRCTICA:


1. Verificar que las etiquetas coincidan con la solicitud de las pruebas.
2. Se identifica al paciente comprobando su nombre completo y fecha de
nacimiento. Si se encuentra inconsciente, debe de verificarse su identidad a
travs de una enfermera o un familiar. No se debe extraer muestra alguna
sin identificar adecuadamente al paciente.
3. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que el paciente no
ha ingerido alimentos. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el
procedimiento.
4. Se debe colocar adecuadamente al paciente, segn se encuentre sentado o
en decbito prono, para tener acceso fcil a la fosa antecubital.
5. Se debe preparar todo el material, incluidos los tubos, la ligadura, los
objetos para limpiar la piel, las jeringas; cuando sea necesario, la aguja
estril y el dispositivo para fijarla.
6. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms
palpables.
7. Se selecciona la vena adecuada para la puncin (fig. 1 )
8. Se limpia la zona de la puncin con una torunda humedecida con alcohol
isoproplico al 70%. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la
limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento espiral.
9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de
puncin. No dejarlo ms de un minuto.
10. Se fija la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con
ayuda de los dedos pulgar y medio o ndice y pulgar.
Se realiza la venopuncin: a) se penetra la piel con la aguja formando un ngulo
de 15 con el brazo y con el bisel hacia arriba, se sigue la direccin de la vena; b)
se introduce la aguja con suavidad pero con rapidez para reducir las molestias. No
hay que enterrar la aguja; c)si se utiliza una jeringa , se tira hacia atrs del
mbolo, con tensin lenta y uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su
interior; d)si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la
vena se dirigir el tubo todo lo posible hacia delante apoyndose en el dispositivo
de sujecin (de la misma forma en que se introduce el mbolo de una jeringa). Al
mismo tiempo mantenga firmemente la aguja en su lugar. Una vez que se haya
llenado el tubo, se retira cogindolo por su extremo y tirando suavemente de l. Se
mezcla la sangre con el anticoagulante por inversin suave. Si la muestra ha sido
extrada con jeringa se transferir la sangre a los tubos correspondientes despus
de retirar la aguja.

7.0 CRITERIOS DE LABORATORIO PARA ESPECMENES INACEPTABLES

Las causas ms frecuentes de rechazo de especmenes sanguneos son:

1. Identificacin inadecuada. Cada laboratorio debe determinar la cantidad


mnima de informacin del paciente que debe ser incluida en la solicitud de
laboratorio y en el recipiente de la muestra. Esta informacin incluye
generalmente nombre, direccin, habitacin, nmero de identificacin, sexo ,
edad. El flebotomista debe verificar visual y verbalmente la identidad del
paciente, comparando su nombre con el de la pulsera de identificacin, la
prueba requerida y las etiquetas. El tubo y la solicitud de laboratorio deben
volverse a controlar para verificar su identidad luego de ser recibidos. Las
diferencias entre el nombre de la solicitud del laboratorio y el envase de la
muestra es causa de rechazo de sta.

2. Volumen de sangre inadecuado recogido en tubos o jeringas con


aditivo. La cantidad de aditivo adicionada a un tubo al vaco presupone que
ste se llenar totalmente con sangre. Si se extrae menos sangre de la
requerida, la cantidad excesiva de aditivo tiene el potencial de afectar
adversamente la exactitud de los resultados de las pruebas. El EDTA y
citrato de sodio para hematologa y coagulacin son inaceptables con
menos del 100% del llenado del tubo. No se han investigado
recomendaciones de tolerancia absoluta para otros aditivos. Hasta ahora, el
lineamiento solamente puede alterar sobre los posibles efectos perjudiciales
de los aditivos en exceso.

3. Utilizacin de tubos de recoleccin inadecuados. En general, el suero es


la muestra preferida para la mayora de los anlisis bioqumicos. Los tubos
de fluoruro de sodio diseados para la muestra de glucosa son inapropiados
para la mayor parte de los otros procedimientos. Los agentes quelantes son
inaceptables para las determinaciones enzimticas la mayora de la veces.
La heparina es tal vez el anticoagulante que menos afecta los
procedimientos de laboratorio, aunque esto depende en gran parte del
mtodo.

4. Hemlisis. La hemlisis puede ser el resultado de una venipuntura difcil o


de un manejo impropio del espcimen recolectado. La hemlisis tambin
puede resultar de un proceso de la enfermedad que causa la destruccin
intravascular de los eritrocitos. La hemlisis visible es inaceptable (mayor a
200 mg/L de hemoglobina) cuando se analizan estas sustancias utilizando
ciertos mtodos. El grado de interferencia depende del grado de hemlisis,
la concentracin de la variable analtica y la metodologa empleada.

5. Transporte inapropiado. Las muestras para determinacin de cido lctico,


gases en sangre, amonio y otros procedimientos donde existe una
significativa susceptibilidad de stas al deterioro, no deben ser analizadas si
no son transportadas al laboratorio en hielo y dentro de un tiempo
preestablecido.

6. Tiempo preanaltico permisible. Cuando el tiempo mximo permisible es


excedido, deben tomarse medidas. La falsificacin de los resultados ser
asumida mdicamente. El responsable del laboratorio marcar el resultado
obtenido con una nota apropiada, o se negar a llevar a cabo la prueba. La
ltima medida es especialmente aconsejable cuando la conclusin mdica
puede deducirse del resultado, lo cual es una desventaja para el
paciente.(9)
1.5 ESTUDIO DE LA VARIACIN EN CONDICIONES DE RUTINA (VCR)

1.0 INTRODUCCIN

Todos los laboratorios de salud deben tener un sistema para valorar la calidad
de su trabajo. La experiencia ha demostrado que entre los laboratorios que han
aceptado esta recomendacin, existen muchos que han elegido mtodos de
ensayo de la variacin de los resultados que persiguen ms la satisfaccin y la
seguridad que la informacin veraz y completa sobre su calidad.
Existen tres posibles causas de variacin en el laboratorio de la salud. Una de
ellas es la debida a errores al azar. Como ejemplos pueden citarse:
 Error en la lectura de los instrumentos.
 Errores aleatorios en los clculos.
 Errores de trascripcin incluyendo la transposicin de nmeros.
 Colocacin incorrecta de la coma decimal.
 El uso de un espcimen incorrecto del paciente debido al intercambio de
especimenes.
 El uso de un reactivo o patrn preparado incorrectamente.
Las otras dos causas de variacin son la precisin: concordancia entre los
resultados de una serie de mediciones. Y la exactitud: concordancia entre la
medida de una serie de mediciones y el valor verdadero.

VARIACIN EN CONDICIONES PTIMAS:


La variacin de las condiciones ptimas (VCO) es la menor variacin que
puede obtenerse para un mtodo analtico concreto en un laboratorio individual.
Deben realizarse aproximadamente 20 anlisis para obtener la (VCO). El
objetivo es intentar repetir los anlisis en las condiciones analticas tan ideales y
constantes como sea posible. Han de aplicarse estrictamente todas las medidas
preventivas necesarias. Algunas son:
 Usar el mismo aparato para todas las determinaciones.
 Usar reactivos recin preparados y verificados.
 Realizar los anlisis sobre un material homogneo y estable.
 Verificar las lecturas del instrumento y los clculos.
 Realizar los anlisis en el menor intervalo de tiempo posible.
 Controlar cuidadosamente la temperatura y el tiempo.
 Evitar cambios bruscos en las condiciones ambientales; luz, temperatura,
humedad.
 Asegurarse de que todos los reactivos estn correctamente mezclados.
 Utilizar personal experimentado.(13)
En resumen en el tratamiento de los resultados deben calcularse la media y la
desviacin estndar y ms importante an, deben representarse grficamente los
resultados individuales en una grfica control como lo indica la siguiente grfica :
Grfica de control en ptimas condiciones de variacin.(M: media ; S:
desviacin estndar).

En est grfica de control se han trazado cinco lneas horizontales, una


corresponde al valor medio de los valores observados, y dos lneas por encima y
dos por de bajo de la media correspondiendo a dos y tres desviaciones estndar
de la media.
En la valoracin de la VCO deben buscarse tendencias y anormalidades en la
distribucin de los resultados, buscar su causa y resolver el problema antes de
pasar al siguiente nivel.(13)

VARIACIN EN CONDICIONES DE RUTINA:


Otra etapa en las tcnicas de control de calidad es determinar la varianza en
condiciones de rutina (VCR). Esta es la variacin de los resultados de una tcnica
cuando el material es analizado en condiciones de trabajo similares a las que se
encontrar cotidianamente.
Este tipo de control consta de dos partes. La primera se refiere al anlisis del
material de control cuando previamente se conocen los valores del mismo
(VCRC). La segunda se refiere al anlisis de materiales cuyos valores no son
conocidos (VCRN).
Con frecuencia la variacin en condiciones de rutina ser mayor que la
obtenida en condiciones ptimas. Para la mayora de las tcnicas colorimtricas la
razn entre ambas variaciones es de 2. Esto se debe a la dificultad de mantener
las condiciones analticas en situacin totalmente estable durante un perodo
prolongado de tiempo en condiciones de rutina.
Dentro de la variacin en condiciones de rutina con valores desconocidos
deben tomarse en cuenta tres componentes esenciales:
 Utilizar ms de un nivel de concentracin del material de control.
 Asegurarse de que los valores esperados son desconocidos para el
operador.
 Colocar el material de control al azar dentro de las series de anlisis de la
misma forma en que se colocan los sueros de los pacientes.(13)
Para el estudio de la variacin en condiciones de rutina se utilizar la
determinacin cuantitativa de albmina.
La albmina tiene varias funciones en el torrente sanguneo incluyendo
nutricin, mantenimiento de la presin onctica y transporte de sustancias como
Ca ++, bilirrubina, cidos grasos, drogas y esteroides.
Valores bajos en suero pueden resultar de mal nutricin en enfermedades del
hgado, un incremento en el catabolismo, incremento en la excrecin en, orina o
heces, o un cambio de distribucin entre los compartimientos intravascular y
extravascular. Valores altos en suero pueden resultar de deshidratacin o
quemaduras severas.(5)

2.0 OBJETIVOS

 Proporcionar resultados de anlisis con exactitud y con precisin, de tal


manera que se puedan obtener conclusiones y tomar decisiones basadas
en una informacin que tenga niveles aceptables de error.

 Realizar 20 repeticiones de una muestra control comercial determinando


protena o cualquier analito en condiciones de rutina y determinar el
coeficiente de variacin que debe ser menor a 5%. El analito a evaluar se le
informar al alumno antes de la prctica.

 analizar estadsticamente los resultados obtenidos de la misma muestra


para establecer el grado de precisin y exactitud.

 Determinar las fuentes de variacin analtica ms frecuentes en el trabajo


del laboratorio.

 Manejar e interpretar adecuadamente las cartas control de Levey-Jennings.


GRFICAS Y CARTAS DE CONTROL :

Cada equipo reportar los resultados obtenidos en el procedimiento de la


determinacin de albmina en el pizarrn.
Los datos de los controles de cada equipo representaran los anlisis diarios de
las mezclas de control de calidad de un laboratorio (cada equipo representara un
da diferente de un mes). A partir de los datos reportados:

 Calcule la media, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de


sus resultados.
 Grafique sus resultados en las cartas control de Levey-jennings, resaltando
los lmites de alerta (x 2s).

Realizar la carta de control de calidad:


NOMBRE__________________________________________
MATERIA______________ EQUIPO__________FECHA____
COMPONENTE_____________________________________
METODO_______________UNIDADES__________________
LONGITUD DE ONDA______nm. APARATO______________

(SIGUIENTE TABLA 1)
tabla1
FECHA No. DE DETER- VALORES INDI- DESVIACIONES DEL CUADRO DE LAS
2
MINACIONES VIDUALES Xi VALOR MEDIO Xi-X DESVIACIONES (Xi-X)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
25
n= Xi= (Xi- X)2

Calculado el:__________Firma:________________
Cul sera su conclusin, respecto de la precisin con la que se trabaja en el
laboratorio?

Superior x + 2s
Lmites de alerta

Inferior x 2s

Superior x + 3s

Limites de control
Inferior x 3s

Realizar grafico de Levey-Jennings:

NOMBRE__________________________________________
MATERIA______________ EQUIPO__________FECHA____
COMPONENTE__________ ______________________
MTODO_______________UNIDADES__________________
LONGITUD DE ONDA________APARATO________________
DATOS DEL CONTROL UTILIZADO:
MARCA: NIVEL: LOTE: CADUCIDAD:

(SIGUIENTE GRFICO 2)
Grfico 2 de Levey-Jennings

x + 2S

x + 1S

MEDIA x

x - 1S

x - 2S
UNIDAD II
2. PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL
2.1 CIDO RICO
Mtodo enzimtico colorimtrico

1. INTRODUCCIN

El cido rico en los mamferos es el metabolito final del catabolismo de las


bases pricas y su elevacin est asociada a la gota, es decir, los reumatismos
hiperuricmicos. En los pacientes con tal disfuncin, aparecen cristales de
cido rico en las articulaciones y en los tendones, lo que origina las
manifestaciones reumticas caractersticas.
Niveles altos de cido rico estn tambin asociados a patologa renal por
retencin de productos nitrogenados, asocindose en estos casos a valores
tambin altos de urea y de creatinina.
2. OBJETIVO
 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de cido
rico en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de cido rico y comparar con el valor
de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de cido rico en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO

El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de hidrgeno que


en presencia de POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosceo.

Uricasa
c. rico + 2H20 + 02 Alantona + CO2 + 2H202
POD
2H202 + 4AF + DCPS Quinona + 4H20

4-AF = 4 aminofenazona
DCPS = 2,4,diclorofenol sulfonato

Guardar en refrigeracin a 2-8 C. Estos productos son, solamente, para uso de


laboratorio y pruebas "in vitro".

4. PREPARACIN
4.1MUESTRA CLNICA
MUESTRA
Suero, plasma u orina.
Orina: Diluir la orina al 1:10 con agua destilada, mezclar y seguir la tcnica.
Multiplicar el resultado por 10.
4.2 REACTIVOS Y MATERIAL
1Micropipeta de 1 mL
1Micropipeta de 50 L.
1Piseta con agua desionizada o destilada
2Celdas de plstico de 3 ml
4 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

EQUIPO
Fotmetro con filtro de lectura de: 520 nm.
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Fosfatos pH 7.4, 50 mM
Sol. Tampn 2-4 DCPS, 4 mM
Reactivo 2 Uricasa 60U/L
Vial Enzimas Peroxidasa 660 U/L
Ascorbato-Oxidasa 200 U/L
4 - Aminofenazona 1Mm

Standard Sol. c. rico 6.0 mg/dL

PREPARACION Y ESTABILIDAD
Disolver, con agitacin suave, el contenido del vial de enzimas R.2 con un poco de
R.1 tampn, una vez disuelto el liofilizado retornar al frasco original de tampn,
homogeneizar la solucin. Esta solucin es estable 1 mes a 2-8C o 10 das a
temperatura ambiente, protegida de la luz.

5. PROCEDIMIENTO
TECNICA
Longitud de onda: . . . . . . . 520 nm (490-550)
Temperatura : . . . . . . . . . . 25/30/37C
Paso de luz : . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Ajuste del cero con blanco de reactivo.

Blanco Estndar Muestra


Estndar 25 L
Muestra 25 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
Mezclar e incubar durante 5 min a 37C 10 min a temperatura ambiente.

Efectuar las lecturas de las densidades pticas del estndar y de la muestra frente
al blanco del reactivo. Coloracin estable como mnimo 30 min.
Clculo

Conc. Muestra mg/dL = D.O. Muestra / D.O. Estndar X Conc. estndar

Estndar= 6.0 mg/dL


mg/dL x 59 485 = mol/L

Cuando la muestra sea orina, multiplicar el resultado por 10. Si la concentracin


de la muestra es superior al lmite de linearidad (25mg/dL) diluir sta a la mitad y
el resultado final se multiplicar por 2.

Lmite de Seguridad Biolgica

Mujeres Hombres
Suero o plasma
mg/dL 2.5 - 6.0 3.4 -7.0
mmol/L 148 - 357 202 416

Orina de 24 horas
mg/dL 250 - 750
mmol/L 14,872 - 44,616

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores


de referencia, considerando edad, sexo, estado nutricional y dems
factores.

CONSIDERACIONES IMPORTANTES:
-Si la muestra de orina es turbia, calentarla a 60C para disolver el cido rico.
-El cido rico en suero es estable de 3 a 5 das en T de 2-8C.
-Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no afectan los
resultados de la prueba.
-Se sugiere procesar junto con las muestras algn suero control valorado con
niveles normal y anormal que le permitir tener un control de la exactitud y
precisin de los resultados.
-La hemlisis (hasta 100mg/dL de hemoglobina) y la bilirrubina hasta
20mg/dL, no interfieren en los resultados.
-El estndar es muy vido a contaminarse, cuidar mucho su manipulacin,
ya que los agentes reductores tienden a disminuir la respuesta del color, mientras
que los oxidantes generan aparicin de color, aumentando las lecturas de los
blancos.
-Los detergentes son inhibidores enzimticos, asegrese de que el material de
vidrio este perfectamente lavado y enjuagado con agua desionizada.
CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y Patolgico. Sueros control valorados.

2.2 CREATININA
Mtodo colorimtrico-cintico

1. INTRODUCCIN
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de
la creatina por prdida de una molcula de agua. A su vez, la creatina se produce
por hidrlisis del fosfato de creatina, por accin de la creatin-fosfo-kinasa (CPK),
apareciendo como metabolitos de dicha reaccin el fosfato energtico y la
creatina. El radical fosfato puede aportar energa directamente por dicha reaccin
o a travs de su acoplamiento a una molcula de ADP para formar ATP y
posterior hidrlisis por accin de ATPasa.

La eliminacin de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi exclusivamente


a travs de la filtracin glomerular, siendo un importante ndice del funcionalismo
renal. A diferencia de la urea, la eliminacin de creatinina por la orina no viene
afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una misma persona es muy
constante su eliminacin diaria con casi independencia de la dieta alimenticia,
siendo la masa muscular el factor condicionante ms directo de su excrecin total
por da. En resumen, podemos decir que la eliminacin de creatinina en un
intervalo de 24 horas es un valor constante, dependiente principalmente de la
masa muscular del individuo, y que por otro lado el clculo del aclaramiento de la
creatinina ser un parmetro directo del funcionalismo renal.

2.OBJETIVOS

 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de


creatinina en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la creatinina y comparar con el valor
de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de creatinina en una muestra biolgica

3.FUNDAMENT0 DEL MTODO

La reaccin qumica aplicable para fotometra es la descrita por Jaffe, basada en


el color anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato
alcalino. Hay varias substancias en el suero y orina que actan como cromgenos
inespecficos, lo que es un problema principalmente para el clculo del
aclaramiento. Por este motivo tiene una gran importancia la adecuacin de todas
las variables de la reaccin, muy especialmente el pH, con el fin de obtener la
mxima sensibilidad para la creatinina y la mnima interferencia de cromgenos.
Adaptando la reaccin a una medida cintica, se logra una gran especificidad
debido a que la creatinina reacciona con el picrato alcalino con ms rapidez que
los cromgenos (metilguanidina, picramato,), por lo que la medida del incremento
de color en un breve perodo de tiempo inicial de la reaccin valorarn
principalmente creatinina, con poca influencia de los cromgenos inespecficos,
por esto es recomendable, de ser posible, la determinacin cintica.

4.PREPARACIN
4.1MUESTRA CLNICA
Suero o plasma heparinizado.
La creatinina en suero y plasma tiene una estabilidad de al menos de 24 horas a
2-8C.
Orina .Diluir previamente a 1:50 con agua destilada, multiplicar el resultado por 50.

4.2REACTIVOS Y MATERIAL
Material necesario
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 200 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml
5 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta
Gradilla.

EQUIPO
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 490-510 nm.
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Ac. pcrico 17.5 mmol/L
Reactivo 2 Hidrxido sdico 0.29 mol/L
Estndar Sol. Creatinina 2.0 mg/Dl

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
Los reactivos estn listos para su uso.
Son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad indicada en el
envase.

Mezcla reactiva:
Mezclar ambos reactivos a partes iguales segn necesidades.
Esta mezcla es estable 10 das a temperatura ambiente.
5. PROCEDIMIENTO

5.1TCNICA

Longitud de onda: . . . . . . . 490 nm (490-510)


Temperatura : . . . . . . . . . . 25/30/37C
Paso de luz : . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Ajuste del cero con blanco de reactivo.

Blanco Estndar Muestra


Estndar 200 L
Muestra 200 L
Reactivo 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL
Mezclar e incubar 5 min a 37C 10 min a temperatura ambiente.

Mezclar y poner en marcha el cronmetro.


Anotar la D.Optica a los 30 segundos (E1) y a los 90 segundos (E2).
Lectura a 492 nm (490-510)

6. RESULTADOS

6.1 Clculos
mg/dL creatinina = . Extincin muestra/ . Extincin estndar x conc. estndar
= conc. muestra

mg/dL x 88.4 = mol/L

DEPURACION DE CREATININA
Depuracin de creatinina

CC(ml/minuto/1.73 m2)= U x V x 1 x 1.73


P T AS

U= Concentracin de orina en mg/dL

V= Volumen

P= Concentracin plasmtica en mg/dL

T= Tiempo en minutos

1.73= Factor estandarizado

AS= Superficie corporal en m2


Valor de referencia Mujeres 70 130 mL/min Hombres 70 140 mL/min

6.2 Linealidad
Hasta valores de 15 mg/dL (1326 mol/L)
Para valores superiores se deber diluir a 1:2 con sol. salina, multiplicando el
resultado por 2.

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


Suero. 0.7 - 1.4 mg/dL (61.8 - 132.6 mol/L)
Orina. 15 a 25 mg/Kg/24 h
NOTA: En orina debe multiplicar los valores de referencia por los Kg que pesa el
paciente.

DEPURACIN
Hombres: 97 - 137 mL/min
Mujeres: 88 - 128 mL/min

OBSERVACIONES
La hemlisis interfiere en el test.
No utilizar sueros lipmicos.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.
2.3 UREA
MTODO CINTICO "UREASA-GLDH".

1. INTRODUCCIN
Urea y amonaco

La concentracin sangunea de amoniaco es superior en los infantes que en los


adultos, debido a que el desarrollo de la circulacin heptica se termina despus
del nacimiento. La hiperamonemia es una entidad que se presenta con
frecuencia debido a defectos congnitos en el ciclo de la urea. El error innato del
metabolismo ms comn es la deficiencia en ornitina transcarbamilasa. La
hiperalimentacin es una causa mucho ms frecuente de hiperamonemia en
infantes. Con frecuencia, se diagnostica el sndrome de Reye por un amoniaco
sanguneo elevado en ausencia de otra causa demostrable.
Los pacientes adultos muestran elevadas concentraciones de amonaco
sanguneo en las etapas terminales de: la cirrosis heptica, la falla heptica y la
necrosis del hgado aguda y subaguda. Se presagia el comienzo de la
encefalopata heptica por una elevacin en el amonaco sanguneo. Se ha
demostrado que la medicin en lquido cefalorraqudeo (LCR) de la glutamina,
correlaciona bien con el desarrollo de la encefalopata heptica. Tambin se
puede utilizar la medicin de la glutamina en el LCR, para diferenciar la
encefalopata heptica de la sptica. Sin embargo, no es comn la medicin de la
glutamina en el LCR. La excrecin de amonaco urinario se eleva con la acidosis
y se disminuye en la alcalosis, puesto que la formacin de sales de amonio es un
mecanismo importante para excretar el exceso de iones hidrgeno. Daos en los
tbulos renales distales, tal como ocurre en la falla renal, la glomerulonefritis, el
hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison, conllevan a una excrecin de
amonaco disminuida sin presentar cambios en los niveles sanguneos de
amonaco.
Puesto que la urea se sintetiza en el hgado, en la enfermedad heptica sin dao
en la funcin renal, se presenta nitrgeno ureico srico bajo, aunque la relacin
urea a creatinina se puede conservar normal. La elevacin en el nitrgeno ureico
srico no implica necesariamente dao renal, puesto que la deshidratacin puede
llevar a concentraciones de nitrgeno ureico tan altas como 600 mg/L. En los
infantes que reciben una frmula alta en protenas pueden tener niveles de
nitrgeno ureico de 250 a 300 mg/L. Naturalmente, enfermedades como la
glomerulonefritis aguda, la nefritis crnica, el rin poliqustico y la necrosis renal
elevan el nitrgeno ureico.

2. OBJETIVOS

 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de urea en


una muestra biolgica
 Establecer los valores de referencia de la urea y comparar con el valor de
nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de urea en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO

La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea dando amonio y CO2. El amonio formado


se valora mediante una reaccin enzimtica (GLDH), pasando NADH a NAD+.
La disminucin de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la
concentracin de urea.
Ureasa
Urea + H2O +2H+ 2 NH3 + CO2

GLDH
2NH3 + -cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ + 2L-glutamato

4. PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA


Suero o plasma heparinizado.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 200 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml
5 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

EQUIPO
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 340 nm.
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tampn TRIS pH 7.8, 80 mmol/L

Reactivo 2 Ureasa 3750 U/L


Vial enzimas GLDH 6000 U/L
NADH 0.32 mmol/L
-cetoglutarato 6 mmol/L

Estndar Sol. Urea 50 mg/dl

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solucin tampn R.1
El reactivo al uso es estable un mnimo de 4 semanas a +2+8C 7 das a
+15+25C.

5. PROCEDIMIENTO

5.1 TCNICA
Termperatura: 25/30/37C
Longitud de onda: 340 nm. /334 nm
Paso de luz: 1 cm
Lectura: frente a agua destilada

Blanco Estndar Muestra


Estndar 10 L
Muestra 10 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Pipetear en un tubo:
Muestra o estndar . . . . . . . . . . . . . . . 0.01 mL
Reactivo al uso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.00 mL
Mezclar y anotar la disminucin de extincin entre los 30 y los 90 segundos
( Extincin)

6.0 RESULTADOS
6.1Clculo
Con las diferencias de extincin anotadas, aplicar la siguiente
ecuacin:
. Extincin muestra/ . Extincin estndar x conc. estndar = conc. muestra

Factor de conversin : mg/dL x 0.1665 = mmol/L

6.2Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL (83.25 mmol/L)
Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con solucin
salina, multiplicando el resultado por 2.

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


Suero: de 15 a 45 mg/dL
Orina: de 20 a 35 g/24 horas

NOTAS:
Muestra: Suero, plasma o orina..
La orina diluirla a 1:50 con agua destilada.
No emplear suero o plasma turbios o hemolizados.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico
Sodio / Potasio / Cloro

1.0 INTRODUCCIN

SODIO:
La prueba del sodio srico es una medida del catin principal (electroltico, carga
positiva) en el espacio vascular, componente del lquido extracelular.
Deber considerarse una medida proporcional, la proporcin entre sodio y agua,
ms que una medicin directa del sodio corporal total. El sistema amortiguador del
bicarbonato de sodio es uno de los principales controles renales de las
concentraciones de iones hidrgeno, que convierten al sodio en un catin
importante para la conservacin del equilibrio acidobsico corporal y tambin para
la distribucin del agua corporal.
La hipernatremia significa un exceso de sodio en la sangre, esto se advierte
cuando hay vmito profuso, succin nasogstrica, enfermedades infecciosas como
traqueobronquitis, diarrea acuosa profusa, diabetes inspida, aldosteronismo
primario, ingestin inadecuada de agua libre, alimentos con alto contenido de
solutos.
La hiponatremia significa una deficiencia sangunea de sodio o una deplecin de
sal, que por lo general indica un aumento excesivo de agua respecto a la
elevacin del sodio; esto sucede en: diarrea o vmito donde se pierde ms sodio
que agua, drenado de fstulas intestinales, uso prolongado de diurticos,
enfermedad de Addison, insuficiencia renal crnica con acidosis, retencin
anormal de agua, ingestin excesiva de agua y restitucin inadecuada de sal.(18)

POTASIO:
El potasio es el catin principal del lquido intracelular. Un desequilibrio en el nivel
de potasio tiene un efecto directo sobre la irritabilidad muscular, la funcin
miocardiaca y la respiracin.
La hiperpotasemia se define como una concentracin plasmtica mayor de 5.5
mEq/L. Con una funcin renal adecuada es virtualmente imposible permanecer en
un estado de hiperpotasemia pues el potasio es excretado con suma facilidad por
el rin. Por tanto, un incremento significativo de potasio se encuentra
principalmente en casos de insuficiencia renal grave con azotemia; tambin
podra haber aumento con una administracin desmedida de potasio si hay
excrecin urinaria inadecuada, con el uso excesivo de diurticos antagonistas de
la aldosterona.
La hipopotasemia se define como una concentracin srica menor de 3.5 mEq/L.
Los sndromes de deficiencia de potasio son bastante comunes. Si esta deficiencia
es grave, se producen cambios funcionales y estructurales renales en el rin, los
cuales perpetan el desequilibrio hidroelectroltico y acidobsico. Se tiene
disminucin de potasio en: estados diarreicos, perdidas abundantes de lquidos
gastrointestinales, diuresis masiva, pacientes postoperatorios con prdidas
mltiples de potasio, pacientes despus de tratamiento de cetoacidosis diabtica,
respuesta a la tensin, falta de ingestin adecuada de potasio, sndrome de
malabsorcin donde el intestino no es capaz de absorber nutrientes.(18)

CLORO:
El cloro, el principal anin extracelular, ejerce un efecto directo sobre la presin
osmtica, la distribucin del agua y el equilibrio entre aniones y cationes. Los
niveles bajos de cloro son causados por pielonefritis crnica, crisis del sndrome
de Addison, acidosis metablica y vmito prolongado. Se observan niveles altos
de cloro en la deshidratacin, insuficiencia cardiaca congestiva,
hiperparatiroidismo y el tratamiento prolongado a base de cloro o la ingestin
repetida de dicha sustancia.(6)

2.0 OBJETIVOS

 Determinar la concentracin en una muestra biolgica de sodio / potasio /


cloro utilizando el mtodo de in selectivo.

 Destacar la importancia de los iones sodio, potasio y cloro en el


metabolismo humano y su relacin con diversas patologas.

3.0 FUNDAMENTO DEL MTODO

El mtodo para determinar sodio / potasio / cloro basado en el ion selectivo, utiliza
como elemento sensor del ion Cl- plata/cloruro de plata o sulfuro de plata y la
medicin de Na+ / K+ emplea membranas de intercambio inico de vidrio para el
sodio y membranas de intercambio inico liquidas que incorporan valiomicina para
el potasio.
Hay dos formas generales para medir la potenciometra por electrodo in
selectivo (ISE) en muestras clnicas, la directa y la indirecta. Los sistemas
potenciomtricos directos miden la actividad del in en una muestra sin diluir,
mientras que los sistemas ISE indirectos miden la actividad del in en una muestra
prediluida.(6)

4.0 PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA:

 Sangre entera o plasma.


 La muestra debe recolectarse en ayuno.
 La muestra debe recolectarse en tubo colector de sangre con heparina de
litio.
 Si se trata de sangre entera la muestra debe mezclarse mediante inversin
y rotacin del tubo.
 Para plasma se mezcla mediante inversin y se centrifuga el espcimen
dentro de una hora a partir de la recoleccin.
 La sangre entera debe analizarse antes de transcurrida una hora a partir de
su recoleccin; despus de este perodo de tiempo, se podra obtener
niveles falsamente elevados de potasio. No enfriar ni refrigerar las
muestras.
 El plasma debe analizarse dentro de un periodo de 4 horas a partir de su
extraccin. Es necesario dejar que las muestras refrigeradas alcancen la
temperatura ambiente de la habitacin y que sean centrifugadas antes del
anlisis.(19)

Nota:

 No agitar los tubos


 Se recomienda utilizar material de plstico de un solo uso para evitar
contaminaciones.
 La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis
permisible.(9)

4.2 REACTIVOS:

 Se utilizan los reactivos para el analizador de in selectivo. Dependiendo


del modelo.(19)

4.3 EQUIPO:

El alumno debe consultar el manual del analizador de in selectivo para utilizarlo


correctamente siguiendo paso a paso las instrucciones de operacin.

5.0 PROCEDIMIENTO

5.1 DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Encender el analizador.
2. Seguir los pasos que va indicando el analizador primero una calibracin a 2
puntos que se efecta despus de instalar o cambiar sensores, mdulo de
reactivos u otros componentes y posterior el anlisis de la muestra como se
indica en el siguiente diagrama:(19)
CALIBRAR?

ANALIZAR MUESTRA? CALIBRACION


EXITOSA
YES NO

YES NO
LIMP. DIARIA?
SUBIR MUESTREADOR
PARA ANALIZAR

SONDA EN MUESTRA?

YES NO

ASPIRANDO...

RETIRAR MUESTRA ANALIZANDO... Na+/K+/Cl-


REST MUESTREADOR
NO YES

Nota:
 Todos los mtodos de anlisis de cloruro muestran una interferencia
positiva con otros haluros.
 La nica interferencia con haluros clnicamente importante es con el
bromuro, el cual se suministra en algunas preparaciones farmacuticas.
 Para Sodio / Potasio la interferencia de la muestra puede ser por protenas
o lpidos.(19)

5.2 TRATAMIENTO DE RESIDUOS:


Los desechos que se producen en esta prctica se colectan en un colector
incluido dentro del analizador.
Los residuos biolgico infecciosos como Punzo-cortantes, algodn con sangre,
se recolectan y almacenan en los contenedores de deposito temporal (Lab.301) en
recipientes rgidos o bolsas de color rojo dependiendo del desecho, con el
emblema RPBIs y son llevados cada mircoles por el personal auxiliar de
intendencia al camin de recoleccin de RPBIs. Los residuos como sangre,
plasma, suero, paquete globular, materiales con sangre o sus derivados se tratan
internamente en el laboratorio de acuerdo a la NOM-087-ECOL-SSA1-2002.(12)
6.0 VALORES DE REFERENCIA

 El intervalo de referencia para el cloruro en suero o plasma es de 98 a 107


mmol/L o mEq/L.
 Sodio 135 - 145 mmol/L mEq/L.
 Potasio 3.6 - 5.0 mmol/L mEq/L.
 Cloruro 98 mmol/L o mEq/L

Nota:
Estos intervalos fueron obtenidos utilizando mtodos indirectos. Cuando se
miden por mtodos directos estos intervalos sern algo mayores que cuando se
miden mediante tcnicas indirectas. Los valores de potasio plasmtico pueden ser
de 0.1 a 0.2 mmol/L mEq/L menores que los correspondientes valores sricos.(6)

GASOMETRIA

Pendiente
2.6 EXAMEN GENERAL DE ORINA (EGO)
1.0 INTRODUCCIN

Los anlisis de orina realizados en el laboratorio clnico, puede proporcionar


una informacin amplia, variada y til del rin de un individuo y de las
enfermedades sistmicas que pueden afectar este rgano excretor. Por medio de
este anlisis, es posible elucidar tanto desrdenes estructurales (anatmicos)
como desrdenes funcionales (fisiolgicos) del rin y del tracto urinario inferior,
sus causas, y su pronstico. La realizacin cuidadosa del examen de orina, por
parte del laboratorio, ayuda al diagnstico diferencial de numerosas enfermedades
del sistema urinario. Usualmente, los datos de laboratorio obtenidos por medio de
este anlisis, se logran sin dolor, dao o tensin para el paciente. Esta es la razn
por la cual, la realizacin e interpretacin correcta del anlisis de orina, por parte
del laboratorio permanecer siempre como una herramienta esencial de la prctica
clnica.
En la actualidad, se practican tres tipos de exmenes de orina: anlisis de orina
por tira hmeda, empleado generalmente por los mdicos en sus consultorios y
por los pacientes en sus casas; tamizaje de anlisis hmedo de la orina,
comnmente llamado anlisis bsico o rutinario de orina; y citodiagnstico de la
orina, que es una evaluacin citolgica especializada del sedimento urinario que
correlaciona con los anlisis realizados por medio de la tira reactiva. El anlisis de
orina realizado con la tira hmeda es un ensayo de primera etapa para la
deteccin y monitoreo de pacientes con anormalidades qumicas. Los pacientes
diabticos a menudo monitorean permanentemente su propia enfermedad,
buscando signos de glucosuria, proteinuria, e infecciones del tracto urinario,
mediante pruebas realizadas en casa.(20)
El anlisis de orina hmedo o rutinario, proporciona, a costos razonables, un
tamizaje adecuado para la deteccin de anormalidades qumicas y morfolgicas
presentes en la orina. Este procedimiento se compone de dos partes: 1) un
anlisis macroscpico, en el cual se determinan las caractersticas fisicoqumicas
(apariencia, gravedad especfica y la medicin de los constituyentes qumicos por
medio de la tira), y 2) un examen microscpico del sedimento, en campo claro o
contraste de fases, para verificar hematuria, piuria, cilindruria, cristaluria, y otros
signos. Por medio de este simple examen de orina, un uromicroscopista
experimentado puede detectar y monitorear muchas entidades que afectan al
rin y al tracto urinario inferior.
Recientemente, el citodiagnstico de la orina ha ganado aceptacin mdica
como un anlisis nuevo, ms sensible en el diagnstico de ciertas patologas
renales y del tracto urinario inferior. Como este anlisis requiere mayor inversin
de tiempo debido a la preparacin de coloraciones, debe reservarse para
pacientes sintomticos con enfermedades renales, del tracto urinario inferior, o
neoplasias.(6)
2.0 OBJETIVOS

 Establecer el mtodo adecuado de recoleccin de especimenes de orina


para un anlisis especfico.

 Discutir las propiedades fsicas ms importantes de la orina y sus


relaciones con la enfermedad.

 Identificar los constituyentes qumicos ms importantes de la orina, como


cuantificarlos y como confirmar su presencia.

 Describir mtodos adecuados para estandarizacin de los especimenes de


orina y de los hallazgos microscpicos ms comunes.

3.0 FUNDAMENTO

El anlisis de orina rutinario, se basa en un procedimiento que se compone de


dos partes: 1) un anlisis macroscpico, en el cual se determinan las
caractersticas fisicoqumicas (apariencia, gravedad especfica y la medicin de los
constituyentes qumicos por medio de la tira como protenas, glucosa, cetonas,
pH), y 2) un examen microscpico del sedimento, en campo claro o contraste de
fases, para verificar hematuria, piuria, cilindruria, cristaluria, y otros signos. (20)

4.0 PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA

El cuidado en la recoleccin de la orina y su entrega rpida en el laboratorio,


son cruciales para obtener una informacin ptima. La orina debe ser colectada en
un recipiente limpio, estril, que tenga un cierre seguro para prevenir posibles
derramamientos, evaporacin o contaminacin.
Estos recipientes deben rotularse con el nombre del paciente, fecha y hora de
recoleccin.
Para que los datos del uroanlisis sean precisos, es esencial que la orina sea
examinada dentro de las dos horas siguientes a su recoleccin o preservada de
alguna manera, usualmente por refrigeracin (2 a 8 C). Se pueden usar fijadores
o preservativos adecuados, siempre y cuando se entiendan claramente sus
efectos sobre la orina y sobre los ensayos en ella realizados. Si la orina es
recolectada sin preservativos y permanece a temperatura ambiente se empezar a
descomponer. Los preservativos actan impidiendo los cambios qumicos
asociados a la descomposicin y previniendo el crecimiento y metabolismo de los
microorganismos. El tolueno, fenol, timol y preservativos cidos son usados
frecuentemente para los anlisis qumicos de la orina. Otras formas de
preservacin incluyen el ajuste del pH y la proteccin de la luz. Para preservar las
estructuras celulares puede emplearse etanol (95%), hay tambin disponibles
fijadores comerciales como Mucolex . Los laboratorios son responsables de la
seleccin adecuada del tipo y cantidades de preservativo de la de orina necesarios
para preservar las estructuras celulares.(6)
Para cuantificar diversos aspectos de la funcin renal, frecuentemente se
emplean anlisis de orina recolectada durante un determinado perodo de tiempo.
La orina debe reflejar la excrecin en un intervalo de tiempo medido con precisin.
Estos especmenes no deben incluir la orina que se encuentra en la vejiga antes
de la iniciacin de la recoleccin. En la toma de muestras de orina de 24 horas, se
debe desechar la orina de la primera miccin de la maana del da en el cual se
inicia la recoleccin y recolectar toda la orina producida durante 24 horas,
incluyendo la primera orina de la maana del segundo da.
La primera orina de la maana es usualmente la mejor para el anlisis porque
es la orina ms concentrada.
Las muestras deben estar libres de secreciones vaginales u otra clase de
partculas extraas.
Este procedimiento puede modificarse si no es necesario el examen
bacteriolgico de la muestra. La recoleccin del chorro medio sin el lavado previo
y sin usar un envase estril, proporciona una muestra satisfactoria para el examen
de rutina. (20)

4.2 REACTIVO

Reactivo (Tincin de Sternheimer-Malbin) comercial

TINCIN DE STERNHEIMER MALBIN

Para sedimento urinario. Facilita la identificacin de las clulas.

Mtodo
Se vuelve a suspender el sedimento en el tubo de centrifuga y se aade una gota
del colorante; se espera tres minutos. Luego se pone una gota sobre un
portaobjetos, se cubre y se examina al microscopio.

Resultados
Hemates: Color rosado
Leucocitos: Prpura oscuro con ncleo rojo oscuro.
Granulaciones: Citoplasmticas violetas.
Clulas brillantes: Son leucocitos neutrfilos incoloros o de color azul
claro.
Son caractersticos de polinefritis.
Clulas renales: Ncleo prpura oscuro, con un estrecho citoplasma de
color prpura-anaranjado.
Clulas vesicales: Ncleo azul oscuro y citoplasma azul claro.
Clulas epiteliales
de descamacin: Ncleo prpura, citoplasma rosado o
violeta.
Cilindros hialinos: Rosado o prpura claro.
Cilindros finamente
granulosos: Cilindros rosados, con granulaciones de color
prpura.
Cilindros grasos: Color rosado, gotas de grasa incoloras.
Cilindros hemticos: Cilindro rosado, hemates incoloros o lila claro.
Cilindros creos: Prpura claro u oscuro.

4.3 EQUIPO

 Microscopio ptico.
 Centrfuga clnica.
EQUIPO DE UROANALISIS SPIN LAB

Nota:
El alumno debe consultar el manual del microscopio ptico y centrifuga para
saber cuales son las instrucciones de operacin, datos y caractersticas de
funcionamiento de los instrumentos.

4.4 MATERIAL

 Envases desechables para orina.


 1 probeta graduada de 50 ml.
 4 tubos para centrifuga de 13 x 100mm.
 2 tubos de ensayo de 13 x 100mm.
 4 portaobjetos.
 4 cubreobjetos.
 2 pipetas serolgicas graduadas de 10 ml.
 2 pipetas Pasteur.
 2 bulbos de goma.
 Tiras reactivas comerciales.
 Colorante de Sternheimer-Malbin.

5.0 PROCEDIMIENTO

EXAMEN FSICO DE LA ORINA

Volumen.
El volumen urinario est influenciado por la ingesta de lquidos; por los solutos
excretados, principalmente, sodio y urea; por la prdida de fluidos en la
transpiracin y la respiracin; y por el estado de los sistemas cardiovascular y
renal. Normalmente un adulto excreta de 750 a 2000 mL en 24 horas. Aunque el
volumen de orina de un espcimen recolectado al azar no tiene importancia
clnica, el volumen del espcimen recibido debe ser anotado para efectos de
documentacin y estandarizacin.(6)

Olor.
Una orina normal fresca no tiene mal olor. Un olor desagradable, puede indicar
que el espcimen es demasiado viejo para obtener un anlisis preciso. Un olor
ftido en un espcimen recolectado desde hace ms de dos horas (y no
preservado o refrigerado) indica que el espcimen es inadecuado. El olor puede
tambin dar seales de ciertas anormalidades de la orina. Un olor parecido al
amoniaco, es sugestivo de presencia de bacterias degradadoras de la urea, un
olor a frutas indica la presencia de acetona (cetonas), un olor dulce es sugestivo
de la presencia de glucosa u otros azcares, un olor ftido es sugestivo de pus o
inflamacin. El olor es importante en la deteccin clnica de la enfermedad
llamada orina de miel de maple (un defecto metablico congnito).(6)

Apariencia (color y turbidez).


El color de la orina esta determinado, en gran medida, por su grado de
concentracin. Las orinas normales varan ampliamente de colores, desde
incoloras hasta amarillo oscuro. La interpretacin del color es subjetiva y vara
segn el laboratorio que la examine. Para que el analista describa
adecuadamente el color de la orina, puede emplear como puntos de referencia
una escala estandarizada de colores, evitando el uso de trminos ambiguos como
pajizo o sangriento.
La orina roja es, tal vez, la coloracin de mayor importancia clnica. Este color
puede ser producido por hemoglobina urinaria o mioglobina, eritrocitos intactos,
eritrocitos hemolisados, o hemoglobina libre (hemlisis). En la glomerulonefritis
aguda el color caracterstico de la orina es pardo rojizo. Normalmente una orina
fresca es clara. Cuando la orina se deja reposar, se precipitan cristales amorfos,
generalmente uratos, produciendo turbidez. La turbidez de la orina debe ser
registrada y explicada mediante la evaluacin microscpica.(6)
Gravedad especfica.
La gravedad especfica de la orina es una medida parcial de la capacidad del
rin para concentrar orina. Su rango normal es de 1.003 a 1.035 g/mL. Los
valores iguales o superiores a 1.020 indican una buena funcin renal y la
excrecin de una cantidad aumentada de solutos disueltos excretados por los
riones. Valores de densidad especfica iguales o superiores a 1.035 indican la
presencia de solutos extraos, lo cual debe ser investigado. Una disminucin de
la gravedad especfica se observa en pacientes quienes usan diurticos.
Las sustancias de alto peso molecular afectan la gravedad especfica en un
grado mayor que la producida por simples cristaloides. Esto es importante cuando
la orina contiene molculas grandes como glucosa, protenas o medios de
contraste radiogrficos. Cuando se presentan niveles elevados de glucosuria o
proteinuria, es necesario aplicar factores de correccin para ajustar la gravedad
especfica a un valor ms representativo; se debe restar 0.004 por cada 10 g/l de
glucosa y 0.003 por cada 10 g/l de protena. Valores de 1.040 o superiores estn
asociados con la presencia de medios de contraste radiogrficos o preservativos.
La gravedad especfica se puede medir empleando un hidrmetro y un
recipiente apropiado. El uso de los hidrmetros tiene varias limitaciones: 1)
requieren un volumen grande de orina (10 a 15 mL); 2) estn calibrados para ser
usados a 20 C, si la orina no est a esta temperat ura de referencia se deben
aplicar factores de correccin; 3) los hidrmetros no pueden ser recalibrados. Por
estas razones, los laboratorios ya no emplean estos elementos.
La mayora de los laboratorios poseen refractmetros que relacionan la
densidad de una solucin con la gravedad especfica. El uso de estos
refractmetros tiene algunas ventajas: 1) requieren solo una o dos gotas de orina;
2) tienen la temperatura compensada; 3) las lecturas estn menos afectadas por la
densidad que las de los urinmetros; y 4) poseen un tornillo para calibrar a cero.
Su gran desventaja es el costo.
Mtodo de la tira reactiva.
Las tiras reactivas disponen de un mtodo colorimtrico indirecto para medir la
gravedad especfica. Este mtodo usa una tira que contiene un electrolito
pretratado que muestra un cambio de pH de acuerdo a la concentracin inica de
la orina. Este ensayo es rpido, sencillo y no requiere equipos adicionales.(6)

Osmolalidad.
El rin normal es capaz de producir orina con un rango de 50 a 1200 mOs/Kg.
Los rangos de la osmolalidad en orina oscilan desde 1/6 a cuatro veces la
osmolalidad del suero normal (280-290 mOs/Kg). La osmolalidad es medida por
un osmmetro.
La osmolaridad est determinada por el nmero de partculas por unidad de
masa, mientras la gravedad especfica es un reflejo de la densidad (tamao o
peso) de las partculas en suspensin

Generalmente la gravedad especfica y la osmolaridad son directamente


proporcionales de un modo lineal, aunque hay excepciones importantes. Por
ejemplo, si a un paciente se le administran medios de contraste yodados por
pielografa intravenosa, la gravedad especfica puede elevarse hasta 1.070 o
1.080, mientras que la osmolalidad permanecer dentro de los lmites normales.
Las partculas de contraste tienen una masa lo suficientemente grande para elevar
la gravedad especfica, pero hay muy pocas molculas presentes que puedan
producir un notable incremento en la osmolalidad.(6)

EXAMEN QUMICO DE LA ORINA

Anlisis por tira reactiva.


Los anlisis por tira reactiva han permitido a los laboratorios de uroanlisis
producir resultados qumicos semicuantitativos de una manera rpida, exacta y
eficiente. En general, los anlisis de orina adecuadamente realizados por medio
de tiras reactivas, son sensibles, especficos y econmicos.
Los anlisis realizados por medio de tiras reactivas deben efectuarse en orinas
bien mezcladas y equilibradas a la temperatura ambiente. Cada parmetro
qumico debe ser evaluado en un intervalo de tiempo especfico, de acuerdo a lo
indicado en las instrucciones del fabricante. Deben tomarse del envase,
solamente el nmero de tiras requerido para los anlisis inmediatos y el envase
debe taparse nuevamente asegurando que la tapa quede bien ajustada. Las tiras
reactivas deben ser almacenadas en un lugar fresco (no refrigeradas). El medio
ambiente debe estar libre de humedad. Nunca se deben usar tiras para orina
caducadas o expuestas al aire.
Despus de sumergir la tira reactiva en la orina, se debe remover el exceso de
orina golpeando la tira suavemente en el borde del recipiente que contiene el
especimen. Se debe comparar individualmente la reaccin de cada zona reactiva
con su correspondiente en la carta de colores, bajo una iluminacin adecuada. Los
resultados positivos de las tiras reactivas pueden requerir confirmaciones por
mtodos qumicos y microscpicos. La informacin proporcionada por los
fabricantes debe ser revisada para identificar fuentes de inhibidores y resultados
falsos positivos y negativos.(20)

pH Urinario.
Aunque el mtodo estndar para la medicin del pH emplea electrodos de vidrio,
el pH urinario, usualmente, es medido con indicador de papel, debido al hecho de
que pequeos cambios en el pH son de poca importancia clnica. La mayora de
los laboratorios de uroanlisis emplean tiras reactivas multitest con dos
indicadores, rojo de metilo y azul de bromotimol. Estos indicadores proporcionan
un rango de pH de 5.0 a 9.0, el cual se manifiesta por un cambio de color de
naranja(cido) a verde y azul (alcalino). El rango de pH urinario es 4.7 a 7.8. Las
muestras de orina extremadamente cidas o alcalinas, usualmente indican
especmenes mal recolectados.
El pH es importante para el manejo clnico de las piedras o cristales.(20)
Protenas.
Las personas sanas pueden tener una excrecin diaria de protenas de 100
mg/da, una fraccin muy pequea del contenido de protenas plasmticas. La
mayora de la protena en la orina es albmina que pasa la membrana glomerular,
pero tambin pueden estar presentes protenas de peso molecular pequeo como
las globulinas. Una vez filtradas las protenas son casi completamente
reabsorbidas en el tbulo proximal. La proteinuria, por lo tanto, puede ser el
resultado tanto de un incremento en la filtracin como de una disminucin en la
reabsorcin (funcin tubular).
Las tiras reactivas son un procedimiento de tamizaje para la proteinuria. Como
la especificidad de las tiras reactivas est limitada a la deteccin de albmina, es
altamente recomendable que el laboratorio procese simultneamente una prueba
por tira reactiva y una prueba de precipitacin por cido para la deteccin de todos
los tipos de protenas. Las tiras reactivas son sensibles al pH y dependen de la
presencia de protenas para la generacin de color. La presencia de la protena
en la tira cambia el pH del medio de contraste impregnado en la zona reactiva,
producindose el cambio de color
pH 3
Azul de tetrabromofenol Resultados positivos (azul verdoso)
Protena

pH 3
Azul de tetrabromofenol Resultados negativos (amarillo)
Sin protena

Un resultado positivo o dbilmente positivo debe ser confirmado por otros


mtodos ms especficos como el cido tricloroactico o el cido sulfosaliclico.
Un resultado dbilmente positivo y uno fuertemente positivo pueden indicar la
presencia de frmacos o protenas de Bence Jones.(6)

Azcares.
1.Ensayos enzimticos.
El ensayo de la tira reactiva es un excelente anlisis especfico para glucosa.
Detecta la oxidacin de la glucosa a cido glucnico:

Glucosa oxidasa
Glucosa + Oxgeno del aire ambiental Acido glucnico y
perxido de hidrgeno

Peroxidasa
Perxido de Hidrgeno + Cromgeno Cromgeno oxidado + H2O
Una clase de tira reactiva emplea o-toluidina como el cromgeno indicador de la
reaccin.

2. Reduccin del Cobre

Calor
Iones Cpricos + Glucosa Oxido cuproso + Hidrxido cuproso
(o sustancias reductoras)
lcali (rojo) (amarillo)

La tableta Clinitest (Ames Division) brinda la posibilidad de detectar otros


azcares. Este es un ensayo basado en la reduccin del cobre que mide el total
de sustancias reductoras presentes en la orina. Adems de glucosa, el Clinitest
puede detectar azcares como galactosa, lactosa y pentosa.(6)

Cetonas.
El trmino cuerpos cetnicos incluye tres componentes qumicos diferentes
pero muy relacionados: cido acetoactico, cido beta hidroxibutrico y acetona.
Los ensayos realizados por medio de tiras reactivas emplean la reaccin de
nitroprusiato de sodio que detecta acetona y cido acetoactico pero no beta
hidroxibutrico, el cuerpo cetnico primario. Es importante saber que el reactivo de
nitroprusiato de sodio reacciona principalmente con el cido acetoactico; la
acetona tiene solo un 20% de reactividad comparada con el cido acetoactico:

pH alcalino
Acido acetoactico + Nitroprusiato de sodio + Glicina Color prpura

La determinacin de cetonas es importante en el monitoreo de la diabetes y de


la cetoacidosis y debe realizarse siempre que se determinen azcares.(6)

Sangre y mioglobina.
Una orina roja indica usualmente la presencia de eritrocitos, hemoglobina o
mioglobina. La hematuria, a menudo, representa una combinacin de eritrocitos
intactos (ms de 5 por campo de alto poder), eritrocitos fragmentados y
hemoglobina libre. La hematuria gruesa o macroscpica implica hemorragia o
sangrado fresco, lo que en un medio de orina cida, da como resultado una
apariencia de roja a parda, turbia, o ahumada.
El mtodo empleado por la tira reactiva para determinar hemoglobina o
mioglobina se fundamenta en una actividad semejante a la de las peroxidasas:
Mioglobina
o hemoglobina
Perxido de Hidrgeno (H2O2) + Cromgeno Cromgeno oxidado
(azul) + H2O

Un ensayo positivo indica la presencia de hematuria, hemoglobinuria o


mioglobinuria, siendo necesario un anlisis microscpico para confirmar la
presencia de eritrocitos. La presencia en la orina de agentes oxidantes como los
yoduros y bromuros, puede causar resultados falsos positivos; grandes cantidades
de cido ascrbico (usado en algunos antibiticos) pueden producir resultados
falsos positivos en algunas tiras reactivas.
La mioglobina es una porfirina ferrosa similar a la hemoglobina; se encuentra,
comnmente, en la orina en pacientes con traumas severos que involucran
destruccin muscular. Cuando la mioglobina es liberada a la circulacin, es
rpidamente excretada por el rin. Al igual que la hemoglobina, su presencia
producir orinas de apariencia rosada a roja.(6)

Bilirrubina.
Orinas espumosas, de color amarillo a pardo, u oscuras son sugestivas de la
presencia de bilirrubina conjugada. La orina normal no contiene bilirrubina. Los
pacientes ictricos con enfermedad hepatocelular como hepatitis o enfermedad
obstructiva como cirrosis biliar pueden tener bilirrubina conjugada en la orina.
El mtodo empleado por las tiras reactivas para determinar bilirrubina se basa
en la reaccin de diazoacin.
cido
Bilirrubina glucornido + Sal de diazonio Azobilirrubina (pardo)

Los resultados negativos de orinas sospechosas y los resultados positivos


cuestionables provenientes de orinas coloreadas, deben ser confirmados
empleando tabletas de Ictotest (Ames Division, Miles Laboratories). El Ictotest
emplea la misma reaccin de diazoacin que las tiras reactivas. Se pueden
encontrar resultados falsos negativos, en orinas no frescas porque la bilirrubina
urinaria puede hidrolizarse u oxidarse por accin de la luz.(6)

Urobilingeno.
El urobilingeno es un compuesto coloreado, resultado de la reduccin de la
bilirrubina por accin de las bacterias en el intestino. Las orinas normales
contienen pequeas cantidades de urobilingeno. El urobilingeno se encuentra
disminuido en nios deficientes en bacterias intestinales; en pacientes despus de
la administracin de antibiticos que reducen la flora intestinal, y en pacientes con
enfermedades obstructivas hepticas. Se encuentra un aumento del urobilingeno
en pacientes con anemias hemolticas (aumento de formacin de bilirrubina) y
disfuncin heptica.
El mtodo empleado por las tiras reactivas para la determinacin del
urobilingeno vara segn el fabricante. Algunos emplean la reaccin de Erlich,
usando p-dimetilaminobenzaldehdo en una reaccin simple de color con el
profobilingeno. Esta reaccin no es especfica para urobilingeno, pudindose
encontrar resultados falsos positivos con otros compuestos que tambin
reaccionan con el reactivo de Ehrlich. Otros emplean una reaccin especfica para
el urobilingeno: el urobilingeno reacciona con un compuesto de diazonio
producindose un color rojo.
Para la determinacin del urobilingeno es necesario un espcimen fresco
porque el compuesto es sensible a la luz. El espcimen preferido par la
determinacin cuantitativa del urobilingeno urinario es una orina recolectada
durante las dos primeras horas de la tarde. Este tiempo de recoleccin se debe a
los patrones de excrecin diurna del urobilingeno.(6)

Nitritos.
El ensayo de nitritos es empleado en los laboratorios de uroanlisis para
detectar bacteriuria. El mtodo empleado en las tiras reactivas para determinar
nitritos se basa en la reduccin de nitratos a nitritos por la accin enzimtica de
ciertas bacterias presentes en la orina. En un pH cido los nitritos reaccionan con
el cido p-arsanlico formando un compuesto de diazonio, el cual a su vez
reacciona con N-(1- naftil) etilndiamina produciendo un color rojo. El ensayo de
nitritos debe ser realizado en especmenes recolectados en la primera orina de la
maana o en una muestra de orina que haya sido recolectada despus de 4 horas
o ms, a partir de la ltima evacuacin de la vejiga, con el fin de permitir que
durante este tiempo los microorganismos metabolicen el nitrato dentro de la vejiga.
En orinas pasadas o viejas, el ensayo de nitritos puede ser positivo como
resultado de la contaminacin con bacterias despus de la miccin. La prueba de
nitritos es especfica para organismos gram negativos, sin embargo, se pueden
obtener resultados falsos negativos si estn presentes microorganismos como
enterococos, estreptococos o estafilococos.(6)

Esterasa leucocitaria.
La presencia de leucocitos (piuria) es un indicador de inflamacin clnicamente
importante. El mtodo empleado para la determinacin de leucocitos intactos y
lisados en las tiras de orina est basado en la presencia de esterasas
intracelulares. Estas enzimas catalizan la hidrlisis de los steres, liberando
componentes que son luego empleados en una reaccin de color. La intensidad
de la reaccin de color es directamente proporcional a la cantidad de leucocitos
presentes en el espcimen. La presencia de tricomonas y agentes oxidantes
pueden producir falsos positivos.(6)

Melanina.
Las orinas normales no contienen melanina. La melanina se encuentra en
orinas de pacientes con melanoma maligno. Los pacientes con esta neoplasia
maligna excretan precursores incoloros de melanina (melangenos), los cuales al
ser expuestos al aire se polimerizan formando un pigmento oscuro de melanina.
Los anlisis para tamizaje emplean cloruro frrico que oxida los melangenos a
melanina, la cual vuelve la orina a un color pardo oscuro.(6)

EXAMEN MICROSCPICO DE ORINA

Una identificacin microscpica precisa del sedimento urinario es importante


para el reconocimiento temprano de infecciones, procesos inflamatorios, y
neoplasias que pueden afectar el tracto urinario. Est en debate s todos los
especmenes de orina se deben someterse rutinariamente al anlisis
microscpico, el cual exige mayor inversin de tiempo. En su lugar, la mayora de
los trabajadores del laboratorio, estn de acuerdo en que el examen microscpico
de orina solo debe practicarse a pacientes sintomticos, cuando el mdico lo
requiera especficamente y cuando se encuentre un anlisis macroscpico
anormal, es decir, cuando se encuentre hematuria, proteinuria o piuria (resultado
de nitratos o esterasa positivos).(21)

Microscopa de campo claro de una orina no teida.


La microscopa de campo claro no coloreada emplea luz reducida para delinear
los elementos ms translcidos de la orina, como, cilindros hialinos, cristales y
filamentos de moco.
La identificacin precisa de leucocitos, macrfagos, clulas del epitelio tubular
renal, y clulas que contienen inclusiones virales puede ser muy difcil en
preparaciones no coloreadas. Para confirmar los resultados deben emplearse
tcnicas citolgicas y preparaciones teidas.
Procedimiento
La orina debe examinarse mientras est fresca, algunas clulas y cilindros
pueden desintegrarse en un lapso de una a tres horas. La refrigeracin de 2 a 8
C por 48 horas, usualmente previene la desintegracin de las clulas y entidades
patolgicas. Con propsitos de estandarizacin, cada espcimen de orina debe
concentrarse de diez a veinte veces. El examen se realiza de la siguiente manera:
1. Mezcle bien el espcimen.
2. Ponga un volumen fijo (10, 12, 15 mL) de orina en un tubo de centrfuga
graduado.
3. Centrifugue a 1500 rpm o aproximadamente 80 G por 5 minutos.
4. Extraiga el sobrenadante por decantacin cuidadosa o aspiracin hasta un
volumen fijo: 1ml y 0.4 mL, son los ms comunes. Resuspenda el sedimento
golpeando suavemente en el fondo del tubo.
5. Ponga una gota el sedimento resuspendido en un rea de una lmina
estandarizada.
6. Examine con bajo poder (100x) y luz atenuada. Ajuste el enfoque fino
permanentemente mientras se explora al azar el rea cubierta. Durante la revisin
evale el espcimen en busca de clulas epiteliales transicionales y escamosas,
cristales, moco, bacterias, levaduras y artefactos. Elabore el reporte de acuerdo a
los protocolos del laboratorio. La identificacin posterior de cilindros, clulas
epiteliales renales, eritrocitos y leucocitos debe ser refinada empleando el objetivo
de alto poder.
7. Examine, al menos, diez campos empleando luz tenue. Asegrese de
examinar los bordes porque a menudo los cilindros se encuentran a lo largo de los
bordes del cubre objeto. Los cristales anormales, cuando estn presentes, deben
contarse con el objetivo de bajo poder. Una bacteriuria visible en bajo poder debe
ser reportada, por lo menos, con 2+.
8. Examine, al menos, diez campos con alto poder (440x) y reporte con valores
numricos eritrocitos, leucocitos, y clulas del epitelio tubular renal.
9. Reporte todos los conteos (promedio de 10 campos) y evale
cualitativamente de acuerdo a la terminologa estandarizada.(21)

Microscopa de campo claro con tinciones supravitales.


El detalle celular se realiza en sedimentos teidos. Es frecuente el uso de un
colorante de cristal violeta-safranina O para la evaluacin rpida de ciertos
elementos celulares.

Procedimiento
1. Aadir una o dos gotas de colorante violeta-safranina O a,
aproximadamente, 1 mL de sedimento de orina precentrifugado y concentrado a
ese volumen.
2. Mezclar con una pipeta y poner una gota de esta suspensin en una
laminilla.

Muchos laboratorios de uroanlisis recomiendan el uso de la microscopa de


contraste de fases para una mejor deteccin de los elementos formados ms
translcidos del sedimento urinario. Los cilindros hialinos, moco, y bacterias
pueden escapar a la deteccin empleando la microscopa convencional, no teida,
bajo campo claro. La microscopa de contraste de fases tiene la ventaja de
endurecer los contornos inclusive de los elementos ms efmeros, haciendo ms
sencilla su deteccin. Siempre se logra un detalle morfolgico mejor de los
elementos formados (notablemente en cilindros y clulas) con el uso de un
microscopio de contraste de interferencias.(21)

Cristales.
Los cristales urinarios son vistos comnmente. Usualmente los cristales no
estn presentes en orinas frescas recin obtenidas y en general, la formacin de
los cristales es considerada como un artefacto del sistema de recoleccin. Los
cristales se forman cuando varios constituyentes qumicos llegan a saturarse o
sufren un cambio en su solubilidad, cuando la orina es almacenada a
temperaturas ms bajas. Ciertas sustancias qumicas, como la albmina,
previenen la cristalizacin. Cuando la orina se calienta a 37 C, la mayora de los
cristales desaparecen. Aquellos cristales que todava permanecen, tienen
importancia diagnstica, cuando se correlacionan con sntomas clnicos.
Los tipos de cristales urinarios dependen del pH de la orina fresca. La cistina,
cido rico, leucina, y tirosina son los cristales de mayor importancia diagnstica y
por tanto deben ser identificados. Debido a la limitada relevancia clnica de los
cristales, algunos laboratoristas estn de acuerdo en que no debe desperdiciarse
tiempo en su identificacin especfica. La formacin de muchos cristales est
inducida por varios medicamentos y su importancia clnica no es clara an.(21)

Organismos.
En un espcimen de orina bien recolectado y procesado, la presencia de
organismos es importante desde el punto de vista clnico. Se reportan,
frecuentemente, bacterias, hongos, parsitos, y clulas infectadas con virus. Los
organismos vistos en un espcimen de orina son microscpicamente reconocibles
como estructuras intra o extracelulares. Con la microscopa de campo claro se
detectan fcilmente bacterias, hongos y parsitos.
La deteccin de bacterias intracelulares fagocitadas y hongos, organismos de
Toxoplasma, y cuerpos de inclusin viral, usualmente requieren procedimientos
citolgicos.
La identificacin exacta de los organismos ayuda en el diagnstico clnico
diferencial de infecciones del sistema urinario. Las preparaciones coloreadas son
importantes en la evaluacin de organismos, identificacin de clulas inflamatorias
asociadas, en la valoracin de la exfoliacin epitelial, y en la formacin de cilindros
renales con el fin de identificar su localizacin. Se deben emplear tcnicas
microbiolgicas para confirmar y clasificar completamente algunos organismos
urinarios.(21)

Bacterias.
La orina de individuos normales es estril y no contiene bacterias. Algunas
bacterias pueden estar presentes por contaminacin durante la recoleccin o por
almacenamiento prolongado. Se puede determinar una concentracin de menos
de 103 bacterias/mL, cuando se han visto bacterias en un espcimen de orina
centrifugado pero no en el espcimen sin centrifugar. La presencia de bacterias
en un espcimen sin centrifugar indica que hay una concentracin mayor de 103
bacterias/mL. La presencia de 105 bacterias/ml o ms sugiere una infeccin de
tracto urinario. Este nmero corresponde a 10 o ms bacterias por campo de alto
poder. La identificacin de bacterias, cocos o bacilos puede hacerse por
microscopa de campo claro o por contraste de fases. Ocasionalmente hay
dificultad en diferenciar bacterias de cristales amorfos.(21)
Hongos.
Las infecciones del tracto urinario (ITU) producidas por hongos son comunes
en pacientes diabticos, en aquellos que toman medicamentos desde el
nacimiento, o en aquellos que han recibido terapia intensiva con antibiticos o
terapia inmunosupresora. En la mayora de las ITUs de pacientes no
inmunocomprometidos, se ha observado un patrn inflamatorio asociado.
Candida albicans es el hongo ms comn, identificndose como levadura o
micelio. En general, la apariencia de gemacin de levadura indica que el hongo ha
coexistido con el husped, mientras que la forma micelar aparece durante la
invasin al tejido. Las levaduras de Candida albicans son altamente retractiles y
miden de 3 a 5 m. Suelen ser confundidas con eritrocitos. A diferencia de los
eritrocitos, las levaduras no son lisadas por cidos.(21)

Parsitos.
La presencia de parsitos en la orina indica contaminacin fecal o vaginal. La
Trichomona vaginalis, un flagelado, es el parsito que ms comnmente se
observa en la orina. La incidencia de este tipo de parsito en mujeres es muy alta
pudiendo producir vaginitis severa. En el hombre, el parsito causa una uretritis
asintomtica. Debido a la motilidad de este organismo oval, la microscopa de
campo claro es empleada como la forma ms sencilla y rpida de identificacin.
Los tricomnidos inmviles pueden ser confundidos con leucocitos o clulas
epiteliales.
Se han encontrado huevos de helmintos (Enterovius vermicularis) en la orina de
nios por contaminacin fecal. Morfolgicamente un huevo de helminto est
rodeado por una cpsula con dos capas, transparente y delgada, pudindose ver,
enrollado dentro de ella, un embrin. En la orina, tambin pueden encontrarse
huevos de trematodos.(21)
Clulas infectadas de virus.
Con una frecuencia cada vez mayor, se encuentran cambios celulares inducidos
por virus en el sedimento de orina de pacientes inmunocomprometidos. Se deben
emplear tcnicas citolgicas para asegurar la identificacin de citomegalovirus,
herpes simplex y Polyomavirus, los cuales producen clulas con inclusiones
intranucleares diagnsticas, siendo estas las infecciones virales ms comunes del
sistema urinario. Las clulas de inclusin viral deben distinguirse de las clulas de
inclusin provenientes de fuentes no virales, como la exposicin a metales
pesados (plomo y cadmio) y de cambios celulares degenerativos no
especficos.(21)

Eritrocitos.
Una orina normal, examinada con objetivo de alto aumento, no debe contener
ms de unos cuantos eritrocitos. Estas clulas aparecen en la orina despus de
lesiones vasculares o trastornos del rin o del tracto urinario inferior. La
presencia de eritrocitos acompaada de cilindros hemticos o eritrocitos
dismrficos es sugestiva de sangrado del parnquima renal o del glomrulo. La
deteccin urinaria de eritrocitos dismrficos, especialmente acantocitos, es un
marcador morfolgico importante de sangrado glomerular o tubular. Su
cuantificacin ayuda en el diagnstico y manejo del paciente. Cuando se
examinen orinas de mujeres, es importante evitar la contaminacin con sangre
menstrual.
Los eritrocitos miden, aproximadamente, 7 m de dimetro, tienen forma de
discos biconcavos los cuales aparecen de un color amarillo plido cuando se
examinan bajo microscopa de campo claro. En ocasiones, las tiras reactivas
pueden detectar hemoglobina en ausencia de eritrocitos en el examen
microscpico. Una posible explicacin de esta discrepancia es la presencia de
orinas alcalinas o hipotnicas, ambas pueden causar lisis de los eritrocitos. En
ausencia de estas condiciones, es muy sugestivo que el pigmento que aparece en
la orina (puede ser hemoglobina o mioglobina) se origine por filtracin desde la
sangre.(21)

Leucocitos.
La velocidad de excrecin normal de eritrocitos en la orina es de 1 leucocito por
cada 3 campos con objetivo de alto aumento, 3000 clulas/mL, o ms de 200,000
clulas/hora. Un elevado nmero de leucocitos (piuria) est asociado a
numerosos procesos inflamatorios e infecciosos del tracto urinario. La mayora de
los leucocitos vistos por microscopa de campo claro son neutrfilos segmentados.
La identificacin de linfocitos, clulas plasmticas, y eosinfilos requiere de
coloraciones especiales.
Se ha mostrado que una velocidad de excrecin en exceso de 400,000
clulas/hora siempre indica una infeccin del tracto urinario. Esta velocidad
corresponde a ms de 10 neutrfilos por campo de alto poder. Los pacientes con
infecciones activas del tracto urinario superior tienen, frecuentemente, ms de 50
neutrfilos por campo de alto poder o una velocidad de excrecin de leucocitos
que excede 2 o an 3 millones/hora.(21)

Clulas del epitelio tubular renal.


En el nefrn estn alineados varios tipos de clulas del epitelio tubular renal y
las clulas enfermas o viejas estn constantemente siendo arrojadas a la orina.
Aunque ellas representan la exfoliacin renal real, la presencia de ms de dos
clulas del epitelio tubular renal por campo de alto aumento indican dao o lesin
activa de los tbulos renales.
Hay grandes dificultades en la identificacin precisa de las clulas de los
tbulos renales, especialmente, para diferenciarlas de las clulas mononucleares
comnmente encontradas en la orina. Por microscopa de campo claro, las
clulas tubulares renales son poligonales y de tamao ligeramente menor que los
leucocitos.(21)

Cuerpos grasos ovales.


Los cuerpos grasos ovales son clulas del epitelio tubular renal que estn
llenas de lpidos absorbidos o que han sufrido cambios degenerativos celulares. A
menudo los cuerpos grasos ovales son asociados con proteinuria y lipiduria y son
caractersticos del sndrome nefrtico y diabetes mellitus.(21)

Clulas epiteliales de transicin.


En la orina normal se pueden encontrar unas pocas clulas de transicin
(uroteliales). Un gran nmero de clulas transicionales puede indicar procesos
inflamatorios de la vejiga, cateterizacin o estados patolgicos malignos
Por microscopa de campo claro, las clulas transicionales aparecen redondas
u ovaladas, miden de 40 a 60 m, y tienen un ncleo localizado centralmente. Los
bordes citoplsmicos de esas clulas aparecen engrosados y rgidos. Cuando los
ncleos de las clulas transicionales llegan a agrandarse o a tornarse irregulares,
se recomienda emplear tcnicas citolgicas con el fin de detectar enfermedades
malignas del sistema urinario.(21)
Clulas epiteliales escamosas.
Las clulas epiteliales escamosas se alinean en la porcin distal del tracto
urinario inferior y en el tracto genital femenino. Las clulas escamosas son las
clulas ms grandes encontradas en la orina. Tienen un citoplasma grande y
plano con un ncleo pequeo. Frecuentemente, una o ms hileras de esas clulas
pueden plegarse. La presencia de clulas escamosas en la orina usualmente
indica contaminacin (vaginal, en mujeres y uretral en hombres no circuncidados)
o metaplasia escamosa de la vejiga, y representan el tipo menos importante de
clulas epiteliales encontradas en la orina.(21)

Fragmentos de tejidos en la orina.


En la orina, pueden observarse algunos conglomerados o fragmentos de
material de apariencia slida. Debido a su gran tamao, este material es
identificado en la inspeccin inicial de la orina. Es de color generalmente blanco o
bronceado. Es muy importante establecer la identidad de este material para un
diagnstico seguro. Esto implica transferirlo a un fijador apropiado con el fin de
preservarlo para una evaluacin citolgica o histolgica. La necrosis papilar renal
o los tumores de la vejiga son las entidades mas frecuentemente responsables de
desprender grandes fragmentos de tejido en la orina.(21)

Espermatozoides.
Los espermatozoides pueden ser fcilmente reconocidos en la orina de un
hombre despus de la eyaculacin o en la orina de una mujer por contaminacin
vaginal despus del coito. Su identificacin es de limitada importancia clnica y la
presencia de espermatozoides, generalmente, no es reportada.(21)

Cilindros renales.
Los cilindros renales (urinarios) son estructuras cilndricas que se organizan en
el nefrn y su importancia proviene de su localizacin. Estn formados por
uromucoide (mucoprotena de Tamm-Horsfall), que est siempre presente en la
orina, usualmente en suspensin. Este uromucoide es producido por las clulas
del epitelio tubular renal de la seccin ascendente del asa de Henle. Los cilindros
se forman como consecuencia del estancamiento de la orina y de la precipitacin
del uromucoide. El incremento en la concentracin de protenas, sales, y un pH
urinario bajo son algunos de los factores que contribuyen a su formacin. Debido
a que la precipitacin de esta protena depende de la concentracin y composicin
de la orina, los cilindros se forman ms fcilmente en la porcin distal del nefrn y
en los ductos colectores del rin, donde la orina es ms concentrada. En
pacientes con protena de Bence Jones (mieloma mltiple), los cilindros pueden
formarse en los tbulos convolucionados proximales.
Estas formaciones cilndricas presentes en la orina reflejan las formas (largas o
cortas) y dimetros (delgados y gruesos) de los lmenes de los tbulos renales en
donde se formaron. Su nmero y propiedades cuantificables aportan valiosos
indicios sobre la naturaleza de la enfermedad del parnquima renal.
Microscpicamente, los cilindros se caracterizan por la apariencia de su matriz
(hialina, granular, crea), por los constituyentes celulares (eritrocitos, leucocitos, o
clulas del epitelio tubular renal) o por el tipo de material particulado embebido en
la matriz (grnulos finos, gruesos o fibrina).
La identificacin exacta de los cilindros, especialmente de los tipos celulares,
es difcil cuando se hace en preparaciones hmedas no coloreadas visualizadas
en microscopios bajo la luz directa o campo claro. Se necesita un microscopista
hbil para evitar las interpretaciones errneas. La visualizacin de los cilindros
mejora con el empleo de microscopios con contraste de fases, de filtros de
contraste o coloraciones especiales.
Para propsitos diagnsticos de enfermedad renal, los cilindros se han
clasificado como fisiolgicos o patolgicos.(21)
Grasas.
Las grasas se encuentran en la orina de pacientes quienes han presentado
embolismo graso despus de lesiones severas con aplastamiento seo,
degeneracin grasa del rin o sndrome nefrtico. La grasa aparecer en la
superficie de la orina recolectada en la ltima parte de la miccin. En el sedimento
urinario se pueden encontrar clulas epiteliales vacuoladas. La identificacin de
las gotas de grasa se facilita empleando coloraciones especiales para grasa como
Oil Red O o Sudn III.(21)
UNIDAD III
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y LPIDOS

3.1 GLUCOSA
Mtodo enzimtico (GOD-PAD)
1.0 INTRODUCCIN

Los carbohidratos se definen como aldehdos y cetonas polihidroxlicos


(aldosas y cetosas, respectivamente). Los carbohidratos simples como la glucosa
se denominan monosacridos. Dos monosacridos ligados por un puente llamado
glucosdico forman un disacrido. Ms de dos monosacridos unidos por puentes
glucosdicos se denomina polisacrido. Los carbohidratos de la dieta consisten de
monosacridos tales como la glucosa, fructosa y galactosa; de disacridos tales
como la sacarosa, lactosa y maltosa y de polisacridos tales como el almidn. Las
enzimas intestinales convierten a los disacridos y polisacridos en
monosacridos.
La principal funcin bioqumica de la glucosa es la de proporcionar energa
para los procesos de la vida. El adenosn trifosfato ("ATP") es la fuente de energa
universal para las reacciones biolgicas. La oxidacin de la glucosa por las vas
glucoltica y del cido ctrico es la fuente principal de energa para la biosntesis
del ATP.
El sistema para regular los niveles de glucosa sangunea funciona para lograr
dos fines. El primero es para almacenar glucosa en exceso en relacin a las
necesidades corporales inmediatas en un reservorio compacto (glucgeno) y el
segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera que mantenga el
nivel de glucosa sangunea. La regulacin de la glucosa sangunea es esencial
para mantener al cerebro, cuya fuente energtica primaria es la glucosa,
abastecido por una cantidad constante de la misma. La funcin de la insulina es
desviar la glucosa extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la
forma de macromolculas (como el glucgeno, lpidos y protenas). Es as que la
glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de
necesidad.
En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en perodos de ayuno, una
serie de agentes hiperglucemiantes acta en las vas metablicas intermediarias
para formar glucosa a partir de las macromolculas almacenadas. De esta forma
las protenas y el glucgeno son metabolizados para formar glucosa-6-fosfato
(gluconeognesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hgado y liberada a la
sangre para mantener los niveles de glucosa sangunea.
Los agentes hiperglucemiantes ms importantes son el glucagn, la epinefrina,
el cortisol, la tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales.
El comportamiento de cada uno de estos agentes es diferente en la regulacin de
la glucosa sangunea; mientras que la insulina favorece el metabolismo anablico
(sntesis de macromolculas), estas hormonas, en parte, inducen el metabolismo
catablico para romper grandes molculas.(6)
Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del lmite
superior normal para una edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores
altos de glucosa srica en ayunas se relacionan con suma frecuencia con la
presencia de diabetes sacarina, el numero de enfermedades y trastornos
fisiolgicos que pueden llevar a incrementos mayores es vasto. El aumento de la
concentracin de glucosa srica se dan en: respuesta a la tensin, enfermedad
de Cushing, diabetes mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crnica,
administracin de algunos frmacos como diurticos clorotiacdicos porque
suprimen la secrecin de insulina, coma hiperosmolar no cetnico.

La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentracin de


glucosa en ayunas, menor al lmite inferior normal para el grupo de edad y esto
sucede en: enfermedad heptica, desnutricin, posgastrectoma, tolerancia
deficiente a la glucosa, administracin excesiva de insulina, hipoglucemia
funcional o espontnea, ingestin de alcohol en ayunas.

Debido a que la concentracin de glucosa srica por lo general se vuelve


anormal slo cuando hay un trastorno grave de esta interaccin, el verificar la
glucosa srica ayuda a evaluar la funcin e integridad del sistema.(15)

La prueba de glucosa en ayunas evala de modo aproximado la capacidad del


cuerpo para regular la glucosa y proporciona informacin acerca de la clase de
anormalidad, si es que la hay. No se tomarn alimentos ni bebidas, excepto agua,
cuando menos por ocho horas antes de tomar la muestra.(5)

2.0 0BJETIVOS

 Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su


relacin con diversas patologas.

 Determinar la concentracin de glucosa en estado basal y posprandial en


una muestra biolgica mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.

3.0 FUNDAMENTO DEL MTODO

La enzima glucooxidasa cataliza la oxidacin de glucosa a gluconato y perxido


de hidrgeno. La concentracin de glucosa es proporcional al H2O2, este puede
medirse aparendolo con un indicador de peroxidasa.
La determinacin de glucosa se efecta mediante el mtodo de Trinder segn
las siguientes reacciones:

GOD
Glucosa + O2 + H2O H2O2 + Gluconato

POD
2H2O2 + Fenol + 4-AF Quinona + 4H2O .

Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa


POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona.(14)

4.0 PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA:

 Suero o plasma venoso.


 La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho
horas cuando menos antes de la prueba.
 La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo para suero el
cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA
anticoagulante para obtener plasma.
 La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el
suero y plasma.(9)
 La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 das a 2-8C.(14)

Nota:
 Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o
fluoruro no afectan los resultados.
 La hemlisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.(14)
 La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible.(9)
 No se han observado interferencias por hemoglobina(4 g/L); bilirrubina
(20mg/L); creatinina (100mg/L), galactosa (1g/L).(14)

4.2 REACTIVOS

REACTIVO 1 TRIS pH 7.4 92 mmol/L


Tampn Fenol 0.3 mmol/L

REACTIVO 2 Glucosa oxidasa 15000 U/L


Vial de enzimas
Peroxidasa 1000 U/L
4-Aminofenazona 2.6 mmol/L
ESTNDAR Sol. Glucosa 100 mg/L
CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparacin:
 Disolver los enzimas del R.2 en el contenido del R.1.
 Esta solucin monorreactiva es estable 1 mes a 2-8C 7 das a 15 25C,
al abrigo de la luz.
Nota:
 Cada reactivo deber ser etiquetado: colocar las iniciales de la persona que
lo prepar, contenido, concentracin, nmero de lote, fecha de preparacin,
fecha de caducidad y requerimientos de almacenamiento.
 No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
 No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.(14)

4.3 EQUIPO

 Espectrofotmetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.


 Centrifuga.

4.4 MATERIAL

5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.


1 micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

5.0 PROCEDIMIENTO

5.1 CONDICIONES DE ENSAYO

 Longitud de onda: 505nm (490-550)


 Temperatura: 30/37C
 Cubeta: 1cm. Paso de luz
 Ajuste a cero con blanco de reactivo.

5.2 DESARROLLO DE LA PRCTICA:

1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Estndar Muestra Muestra Control


Estndar -- 10L -- --
Muestra -- -- 10L --
Muestra Control -- -- -- 10L
Reactivo 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

2. Mezclar e incubar 10 min a 37C 30 min a temperatura ambiente.


3. Leer la absorbancia (A) a 505nm.
4. Coloracin estable 30 minutos a temperatura ambiente.(14)

6.0 RESULTADOS

6.1 CLCULOS:
Abs. Muestra
mg /dL Glucosa = x Conc. estndar.
Abs. Estndar

mg/dL x 0.0555 = mmol


Concentracin del estndar: 100 mg/dL.(14)

6.2 LINEALIDAD DEL MTODO:

 El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL.

 Si la concentracin de glucosa es superior, diluir la muestra a 1:2 con


solucin salina 0.9% y multiplicar el resultado por 2.(14)

7.0 VALORES DE REFERENCIA

mg/dL mmol/L
 Suero o plasma 55-110 3.05 - 6.11
 Neonato nacido a trmino 30-60 1.07-3.3 (14)
3.2 COLESTEROL TOTAL
Mtodo enzimtico (GOD-PAD)

1.0 INTRODUCCIN

El colesterol es una sustancia hidrfoba, insoluble en medio acuoso y por tanto


insoluble en el plasma sanguneo.
El colesterol se sintetiza sobre todo en el hgado, pero tambin en la piel,
intestino, glndulas suprarrenales, el ovario, el testculo, el rin y el pulmn.
Todas las sustancias que en el organismo producen cido actico pueden ser
precursoras del colesterol (cidos grasos, glucosa, algunos aminocidos, etc.). El
colesterol es esencial para el funcionamiento normal del organismo ya que es:
 Componente estructural esencial de membranas de todas las clulas
animales y partculas subcelulares.
 Precursor de cidos biliares.
 Precursor de hormonas esteroides.
 Precursor de vitamina D.
Debido a la atencin que se ha dado a los alimentos libres de colesterol, es
interesante observar que el organismo produce la mayor parte del colesterol en
forma endgena. Las fuentes dietticas aportan tan slo de 150 a 300 mg diarios
mientras que el hgado sintetiza 1.5 g al da. De hecho el exceso de carbohidratos
y protenas de la dieta se utiliza para producir molculas de acetato, que
posteriormente sirven para producir colesterol y cidos grasos. Los lpidos
endgenos que genera el hgado son transportados posteriormente en forma de
lipoprotenas para su uso en todo el cuerpo. La circulacin sistemtica de
colesterol es posible gracias a la formacin de complejos solubles por unin a
protenas, las lipoprotenas sricas y entre ellas las de tipo low density
lipoproteins (LDL) son las que representan el mayor porcentaje, con
aproximadamente un 60-70% del total.
El colesterol es un constituyente primario de las lipoprotenas de baja densidad
(LDL), pero puede encontrarse tambin en lipoprotenas de alta densidad (HDL) y
en las de muy baja densidad (VLDL).
Las diversas lipoprotenas y apoprotenas asociadas, cuando se analizan
directa o indirectamente, producen datos diagnsticos tiles para el analista, ya
que es posible determinar el riesgo de coronariopata.
Clnicamente es importante, ya que existe una relacin entre la concentracin
del colesterol plasmtico y la presencia de problemas cardacos coronarios.
Los mtodos analticos que se emplean actualmente utilizan colesterolesterasa
para el colesterol y permite examinar lotes grandes de muestras con exactitud y
rapidez.(5)
Las concentraciones sricas de colesterol disminuyen en: desnutricin,
esteatorrea, hepatitis, hipertiroidismo, personas con infeccin aguda y anemia,
cncer.
Las concentraciones sricas de colesterol aumentan en: hiperlipoproteinemia,
cncer de la cabeza del pncreas, hipotiroidismo, sndrome nefrtico, el tercer
trimestre del embarazo, predisposicin gentica.(15)
2.0 OBJETIVOS
 Explicar la importancia del colesterol en el metabolismo humano y su
relacin con diversas patologas.

 Determinar la concentracin de colesterol en una muestra biolgica


mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.

3.0 FUNDAMENTO DEL MTODO

La colesterol esterasa hidroliza los steres de colesterol presentes en la


muestra dando colesterol libre y cidos grasos, en una posterior oxidacin
enzimtica mediante la colesterol oxidasa se forma H2O2 y colesterona. El H2O2
se valora por la reaccin Trinder, mediante un cromgeno, fenol y 4-
Aminoantipirina, en presencia de Peroxidasa, formando una quinonimina cuya
coloracin, encarnada, es proporcional a la concentracin de colesterol presente
en la muestra.

Colesterol Esterasa
steres de colesterol + H2O Colesterol + cidos grasos.

Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 4-colesterona + H2O2

Peroxidasa
2H2O2 + 4-amino-antipirina + fenol Quinonimina + H2O.(14)

4.0 PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA

 El paciente debe encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin ejercicio


vigoroso) y bajo su dieta ordinaria del da anterior a la prueba.
 Suero.
 La muestra debe recolectarse en ayuno total excepto agua, durante un
lapso de 12 a 14 horas antes de la prueba.
 La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el
cual no contiene anticoagulante.
 La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm para separar el suero.
 La estabilidad de la muestra es de una semana guardada, tapada y a 2-8 C
3 meses congelada a -20 C. (9)
Nota:
 La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si existe hemlisis.
d) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
e) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible.
f) Si existen interferencias
 No interfieren en el ensayo los siguientes compuestos y concentraciones:
Ac. Urico 1.5 mmol/L
Ac. Saliclico 3.6 mmol/L
Paracetamol 0.66 mmol/L
Fenobarbital 0.4 mmol/L
Glucosa 28 mmol/L
Cafena 52 mol/L
Ac. Nicotnico 0.16 mmol/L
Cortisona 5 mmol /L
El c. Ascrbico por enzima de 300 mol/L interfiere negativamente.(14)

4.2 REACTIVOS

REACTIVO 1 Tampn pH 6.9 90mmol/L


Fenol 26 mmol/L
REACTIVO 2
Vial enzimas
Peroxidasa 1250 U/L
Colesterol esterasa
Colesterol oxidasa 300 U/L
4-Aminoantipirina 0.4 mmol/L
ESTNDAR Solucin Colesterol 200 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparacin:
 Disolver con agitacin suave el contenido del vial de enzimas R.2 con un
poco de R.1 amortiguador, una vez disuelto el liofilizado retornar al frasco
original del amortiguador, homogeneizar la solucin.
 Esta solucin es estable 4 meses en refrigeracin 2-8C 40 das a 15-
25C protegido de la luz.

Nota:
 Cada reactivo deber ser etiquetado: las iniciales de la persona que lo
prepar, el contenido, la concentracin, el nmero de lote, la fecha de
preparacin, la fecha de caducidad y requerimientos de almacenamiento.
 No se debern usar reactivos fuera de la fecha indicada.
 No se pipetearn los reactivos con la boca y evitar el contacto con piel y
ojos.(14)

4.3 EQUIPO
 Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 500-550nm. El alumno debe
consultar el manual del espectrofotmetro que va a utilizar para saber
cuales son las instrucciones de operacin y los datos y caractersticas de
funcionamiento del instrumento.
 Centrifuga.
 Bao de agua a 25 o 37C.

4.4 MATERIAL

5 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm


1Micropipetas de 1mL
1Micropipeta de 10L
 Puntas para micropipeta.
 Gradilla.
5.0 PROCEDIMIENTO

5.1 CONDICIONES DE ENSAYO

 Longitud de onda.505nm (500-550)


 Cubeta.1 cm paso de luz
 Temperatura.25 37C
 Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

5.2 DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Estndar Muestra Muestra Control


Estndar -- 10L -- --
Muestra -- -- 10L --
Muestra Control -- -- -- 10L
Reactivo al uso 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

2. Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 10 min a temperatura ambiente.


3. Ajustar el aparato a cero con el blanco de reactivos.
4. Leer a 505nm (500-550) la densidad ptica del estndar y de la muestra.
5. La coloracin ser estable durante 60 min.

Nota:
Se deber procesar junto con las muestras algn suero control valorado con
niveles normal y anormal, que le permitir tener un control de la exactitud y
precisin de los resultados.(14)
6.0 RESULTADOS

6.1 CLCULOS

Abs de la muestra
X Concentracin del estndar (200 mg/dl)= Concentracin
Abs del estndar de colesterol.

Factor de conversin: mg/dL x 0.0258 = mmol/L (SI).

6.2 LINEALIDAD DEL MTODO

 Hasta valores de 600 mg/dL o 15.4 mmol/L.


 Para concentraciones superiores la muestra se diluye 1:2 con solucin
salina 0.9%, multiplicando el resultado por 2.(14)

7.0 VALORES DE RIESGO

 Valores sospechosos desde 220 mg/dL o 5.7 mmol/L.


 Valores elevados desde 260 mg/dL o 6.7 mmol/L.(14)
3.3 TRIGLICRIDOS
Mtodo enzimtico (GOD-PAD)
MTODO ENZIMTICO

1.0 INTRODUCCIN

Las fuentes de lpidos pueden ser exgenas o endgenas, sus vas


metablicas hacia todas las reas del organismo y procedentes de ellas
constituyen una red compleja de reacciones qumicas en las que participan
molculas individuales y lipoprotenas de gran tamao.
Los triglicridos estn constituidos por glicerol y cidos grasos. Estos forman
parte de las 5 clases de lipoprotenas que transportan a los lpidos en el plasma:
quilomicrones, constituidos casi totalmente por triglicridos dietticos;
lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL); lipoprotenas de densidad intermedia
(IDL); lipoprotenas de baja densidad (LDL), conocidas tambin como lipoprotenas
beta y lipoprotenas de alta densidad (HDL), tambin conocidas como
lipoprotenas alfa.
Aproximadamente del 40% del consumo de caloras en la dieta consta de
lpidos y alrededor del 35% provienen de lpidos animales y el 5% de lpidos
vegetales poli-insaturados. Los triglicridos constituyen una porcin importante
del (98 a 99%) de los lpidos animales y el resto son colesterol y otros lpidos.(6)
Los padecimientos en los cuales predominan los triglicridos son: xantoma
eruptivo, lipemia retiniana, organomegalia, pancreatitis, intolerancia a la glucosa,
hiperuricemia, aterosclerosis prematura, diabetes mellitus insulinopnica,
disglobulinemia, lupus eritematoso, embarazo, uso de hormonas, enfermedad por
almacenamiento de glucgeno, alcoholismo, enfermedad de Gaucher, mieloma.
Los incrementos en los valores de triglicridos en el infarto miocrdico pueden
durar un periodo tan prolongado como de un ao. Las concentraciones de
triglicridos en si, tienen poco valor de prediccin y aumentan despus de la
ingestin de grasa.(15)

2.0 OBJETIVOS

 Realizar la determinacin de triglicridos sricos en una muestra biolgica


con un mtodo enzimtico.

 Destacar la importancia de los triglicridos en el metabolismo humano y su


relacin con diversas patologas.
3.0 FUNDAMENTO DEL MTODO
Los triglicridos son hidrolizados enzimticamente a glicerol, el cual, mediante
Glicerol cinasa y Glicerol-P-oxidasa, libera el perxido de hidrgeno que se valora
mediante la reaccin de Trinder, de acuerdo a las siguientes reacciones.

LPL
Trigliceridos + H2O Glicerol + Acidos grasos.

GK
Glicerol + ATP Glicerol-3-P + ADP.

GPO
Glicerol-3-P + O2 Dihidroxiacetona-P + H2O2.

POD
H2O2 + 4-AF + p-clorofenol Quinona + H2O.

La cantidad de la quinona formada es proporcional a la concentracin de


triglicridos.
Abreviaturas: LPL = Lipoproteinlipasa; GK = Glicerol Cinasa ; GOP = Glicerol-
P-oxidasa; POD = Peroxidasa.(14)

4.0 PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA

 Suero
 El paciente deber encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin
ejercicio vigoroso) y bajo su dieta ordinaria del da anterior a la prueba.
 La muestra debe recolectarse en ayuno total de 12 a 14 horas antes de la
prueba, excepto agua.
 La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el
cual no contiene anticoagulante.

Para separar el suero la muestra debe centrifugarse durante 10 minutos a


3500rpm.(9)

Nota:
 Los triglicridos son estables en suero 3 das a 2-8C o una semana a 15-
25C.(14)
 La muestra ser inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si existe hemlisis.
d) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
e) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible.(9)

4.2 REACTIVOS
REACTIVO 1 Tampn GOOD pH 7.5 50mmol/L
Tampn p-clorofenol 2mmol/L
REACTIVO 2 Lipoproteinlipasa 150000 U/L
Vial enzimas
Glicerol Kinasa 500 U/L
Glicerol-P-oxidasa 2500 U/L
Peroxidasa 440 U/L
4-Aminofenazona 0.1 mmol/L
ATP 0.1 mmol/L
ESTNDAR Sol. Triglicridos 200 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparacin:
 Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solucin tampn
R.1

Nota:
 El reactivo al uso es estable 6 semanas a 2-8C o una semana a 15-25C.
 Cada reactivo deber ser etiquetado con los siguientes datos: iniciales de la
persona que lo prepar, contenido, concentracin, nmero de lote, fecha de
preparacin, fecha de caducidad y requerimientos de almacenamiento.
 Los reactivos no debern utilizarse fuera de la fecha indicada.

No se debern pipetear los reactivos con la boca y se debe evitar el
contacto con piel y ojos.(14)

4.3 EQUIPO

 Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 500-550nm. El alumno


deber consultar el manual del espectrofotmetro que va a utilizar para
aplicar correctamente las instrucciones de operacin, datos y
caractersticas de funcionamiento del instrumento.
 Centrifuga.
 Bao de agua a 25 o 37C.

4.4 MATERIAL

5 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm


1 Micropipetas de 1mL
1 Micropipeta de 10L
Puntas para micropipeta.
Gradilla.
5.0 PROCEDIMIENTO

5.1 CONDICIONES DE ENSAYO

 Longitud de onda.505nm (490-550)


 Temperatura: 25/ 30/37C
 Cubeta.1 cm paso de luz
 Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

5.2 DESARROLLO DE LA PRCTICA:

1. Pipetear en tubos de ensayo:


Blanco Estndar Muestra Muestra Control
Estndar -- 10L -- --
Muestra -- -- 10L --
Muestra Control -- -- -- 10L
Reactivo al uso 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

2. Mezclar e incubar 5 min a 37C 10 min a temperatura ambiente.


3. Medir la densidad ptica a 505 nm (490-550), frente al blanco de reactivos.
4. El color ser estable durante 30 min.(14)

6.0 RESULTADOS

6.1 CLCULOS
Absorbancia de la muestra
X Conc. del estndar = Conc. muestra
Absorbancia del estndar

Factor de conversin: mg/dL X 0.0113 = mmol/L


Conc. Estndar: 200mg/dL.

6.2 LINEALIDAD DEL MTODO

 El mtodo es lineal hasta valores de 1000mg/dL (11.3mmol/L).


 Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con
solucin salina 0.9%, multiplicando el resultado por 2.(14)

7.0 VALORES DE REFERENCIA

 Valores sospechosos a partir de 150 mg/dL (1.7 mmol/L).


 Valores elevados a partir de 200 mg/dL (2.26 mmol/L).(14)

UNIDAD IV
UNIDAD IV
METABOLISMO OSEO Y MINERAL

4.1 CALCIO
Mtodo Colorimtrico
1.0 INTRODUCCIN

El calcio y el metabolismo mineral representan un delicado y complejo proceso


biolgico que comprende muchos componentes interrelacionados. El metabolismo
homeosttico normal depende de la disponibilidad de los substratos minerales y
de las interacciones de los tejidos como los del hueso, el rin y el tracto
gastrointestinal con las hormonas calciotrpicas HPT, calcitonina (CT).
El calcio es el quinto elemento ms abundante en el cuerpo humano. El cuerpo
humano contiene cerca de 1200 g de calcio en las personas adultas y
aproximadamente 28 g en los neonatos (recin nacidos a trmino). Casi todo el
calcio del cuerpo (99%) reside en el hueso. El remanente reside en los fluidos del
cuerpo y tiene un papel crtico muy importante en un sin nmero de procesos
fisiolgicos incluyendo la contraccin muscular, la neurotransmisin, el transporte
de membrana, las reacciones enzimticas, la secrecin hormonal y la coagulacin
sangunea. En la circulacin, el calcio existe en tres formas: 45% del calcio srico
total es la forma biolgicamente activa de calcio inico, 45% est unido a la
protena principalmente albmina y 10% est unido a complejos aninicos (fosfato,
lactato, citrato).
La acidez gstrica, la aportacin suficiente de vitamina D, son factores que
regulan la absorcin y retencin del calcio. En el adulto, el calcio diettico es
absorbido por el intestino mediante protenas especficas unidas al calcio. Este
proceso est bajo el control activo de la vitamina D. La mayora del calcio que se
absorbe se deposita en los huesos. La principal ruta de excrecin de calcio en el
cuerpo es a travs de los riones.(18)
Se encuentran valores altos de calcio en el hiperparatiroidismo, lesiones
osteolticas, acidosis tubular renal y se encuentra disminuido en el
hipoparatiroidismo, raquitismo, insuficiencia renal.(15)

2.0 OBJETIVOS

 Determinar la concentracin de calcio en una muestra biolgica mediante el


mtodo analtico colorimtrico cresolftalena complexona.

 Conocer la importancia del calcio en el metabolismo humano y su relacin


con diversas patologas.

3.0 FUNDAMENTO DEL MTODO

El calcio con la cresolftalena en un medio alcalino forma un complejo violeta,


cuya intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de calcio
existente en la muestra.(14)
4.0PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA

 Suero
 La muestra debe recolectarse en ayuno.
 La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo.
 La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el
suero.(9)
 El calcio en suero permanece estable durante: 10 das a 2-8C durante 8
meses a 20C. (14)

Nota:
 Se recomienda utilizar material de plstico de un solo uso para evitar
contaminaciones. En caso de utilizar material de vidrio deber lavarse con
cido ntrico diluido a la mitad con agua destilada, enjuagar varias veces
con agua destilada y secar antes de su uso.
 Trazas de detergente utilizados en el laboratorio pueden quelar la reaccin
e invalidarn la determinacin.
 No se deben emplear plasmas obtenidos con agentes anticoagulantes que
se complejan con el calcio, como EDTA, oxalato,..
 Al obtener el suero se deber separar el cogulo lo antes posible, para
evitar el trasiego de iones calcio hacia los hemates.(14)
 La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis
permisible.(9)

4.2 REACTIVOS

REACTIVO 1 Tampn etanolamina 500 mmol/L

REACTIVO 2 Cresolftalena 0.62 mmol/L


Cromgeno 8-hidroxiquinolena 69 mmol/L
STANDAR Sol. Calcio 10 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparacin:
 Mezclar segn la proporcin: 50 vol. de R.1 y 1 vol. de R.2.
 La estabilidad del reactivo es de 5 das a 2-8C.

Nota:
 En refrigeracin ambos reactivos pueden permanecer estables hasta su
fecha de caducidad, indicada en el envase.
 Cada reactivo deber ser etiquetado con los siguientes datos: las iniciales
de la persona que lo prepar, el contenido, la concentracin, el nmero de
lote, la fecha de preparacin, la fecha de caducidad y requerimientos de
almacenamiento.
 No se debern usar reactivos fuera de la fecha indicada.
 No se pipetearn los reactivos con la boca y debe evitar el contacto con
piel y ojos.(14)

4.3 EQUIPO
 Espectrofotmetro o analizador para lecturas de 550-590 nm. El alumno
deber consultar el manual del espectrofotmetro que va a utilizar para la
aplicacin correcta de las instrucciones de operacin, datos y
caractersticas de funcionamiento del instrumento.
 Centrifuga.

4.4 MATERIAL

5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.


1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

5.0 PROCEDIMIENTO

5.1 CONDICIONES DE ENSAYO

 Longitud de onda: 570nm (550-590)


 Temperatura: 25/ 30/37C
 Cubeta: 1cm. Paso de luz
 Ajuste a cero con blanco de reactivo.

5.2 DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Estndar Muestra Muestra Control


Estndar -- 10L -- --
Muestra -- -- 10L --
Muestra Control -- -- -- 10L
R.1 Tampn 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
R.2 Color 1 gota 1 gota 1gota 1gota

2. Mezclar y esperar 5 min. a temperatura ambiente.


3. Leer frente a blanco de reactivos.
4. Coloracin estable 40 minutos.(14)

6.0 RESULTADOS

6.1 CLCULOS

Abs. Muestra
mg /dL Calcio = x Conc. Estndar.
Abs. Estndar

mg/dL x 0.25 = mmol.(14)

6.2 LINEALIDAD DEL MTODO

 El mtodo es lineal hasta valores de 15 mg/dL.

 Si la concentracin de calcio es superior, diluir la muestra a 1:2 con


solucin salina 0.9% y multiplicar el resultado por 2.(14)

7.0 VALORES DE REFERENCIA

 Suero recin nacidos 8.0-13.0 mg/dL (2.00-3.25 mmol/L).


 Nios 10.0-12.0 mg/dL (2.50-3.00 mmol/L).
 Adultos 9.0-11.0 mg/dL (2.25-2.75 mmol/L).(14)

4.2 FSFORO

1.0 INTRODUCCIN

El hueso en humanos contiene de 80 a 85% del fsforo corporal total;


aparentemente 9% se encuentra en msculo y el resto est en las vsceras y
lquido extracelular. La concentracin intracelular de fsforo (fosfatos y fsforo
inorgnico) es mayor que la de los niveles extracelulares. El fsforo abunda en el
organismo como anin intracelular y extracelular. Intracelularmente, existe en
forma de fosfato orgnico en combinacin con lpidos y protenas. En forma de
fosfolpidos y fosfoprotenas, el fsforo es esencial para la integridad estructural de
la membrana celular y es un componente importante de los cidos nucleicos y de
los nucletidos de alta energa como ATP. La mayor parte del fosfato extracelular
(850) % se localiza en los huesos, donde se combina con el calcio en la
hidroxiapatita. Casi 85% del fosfato srico existe como monofosfato inorgnico o
fosfato dicido. En estas formas acta como principal amortiguador del sistema
urinario para facilitar la excrecin de H+. El restante 12 a 15% est enlazado con
protenas. El fsforo del suero existe principalmente en forma de fosfato
inorgnico.(18)
La hiperfosfatemia es muy a menudo el resultado de la disminucin de la
excrecin renal de los iones fosfatos, como ocurre en la insuficiencia renal aguda y
crnica, particularmente cuando la relacin de la filtracin glomerular est reducida
en menos del 25% de lo normal. La hiperfosfatemia tambin puede resultar de un
aumento de la carga de fosfato corporal, la cual puede en turno resultar de los
enemas y los laxantes conteniendo fosfatos, transfusiones de sangre o
hiperalimentacin, como el resultado de la destruccin masiva celular posterior a
la lisis por terapia citotxica (sndrome de lisis tumoral), o por lesiones de tejido
(hipertermia, hipoxia, o lesiones por choque), las cuales resultan en randomiolsis
y hemlisis. La reabsorcin tubular renal de fosfatos es responsable de la
hiperfosfatemia observada en el hipoparatiroidismo, hipertiroidismo,
hipogonadismo y exceso de hormona de crecimiento. La hipofosfatemia
moderada, la cual se define como la concentracin de fsforo en suero entre 10 y
25 mg/L en los adultos, es generalmente asintomtica. En los nios, las
concentraciones de fsforo en suero por abajo de 40 mg/L son a menudo
consideradas anormales. La hipofosfatemia puede resultar de una disminucin en
la reabsorcin intestinal de fosfato o por un aumento en la prdida urinaria de
fosfatos y un desplazamiento endgeno del fsforo inorgnico de los
compartimientos de los fluidos extracelulares a los intracelulares.(6)

2.0 OBJETIVOS

 Determinar la concentracin de fsforo en una muestra biolgica mediante


el mtodo analtico fosfomolibdato UV.
 Conocer la importancia del fsforo en el metabolismo humano y su relacin
con diversas patologas.
3.0FUNDAMENTO DEL MTODO

El fsforo es cuantificado segn la reaccin siguiente:


Molibdato amonico + Sulfrico Complejo fosfomolibdato
La absorcin mxima del complejo se mide a 340 nm.(14)

4.0PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA


 Suero
 La muestra debe recolectarse en ayuno.
 La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo.
 La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el
suero.(9)
 El fsforo en suero es estable durante 10 das a 2-8C 8 meses a
20C. (14)

Nota:
 Se recomienda utilizar material de plstico de un solo uso para evitar
contaminaciones.
 La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si el suero presenta hemlisis.
c) Si la identificacin es inadecuada.
d) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
e) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis
permisible.(9)

4.2 REACTIVOS

Los reactivos son proporcionado por la casa comercial SPINREACT, cdigo


1001155.

REACTIVO Acido sulfrico 210 mM


Molibdato amnico 0.40 mM
Detergente
ESTNDAR Sol. Fsforo 5.0 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.

Nota:
 El reactivo est preparado para su uso.
 Cada reactivo deber ser etiquetado con los siguientes datos: las iniciales
de la persona que lo prepar, el contenido, la concentracin, el nmero de
lote, la fecha de preparacin, la fecha de caducidad y requerimientos de
almacenamiento.
 No se debern usar reactivos fuera de la fecha indicada.
 No se pipetearn los reactivos con la boca y se evitar el contacto con piel
y ojos.(14)

4.3 EQUIPO

 Espectrofotmetro o analizador para lecturas de 340nm. El alumno deber


consultar el manual del espectrofotmetro que va a utilizar para aplicar
correctamente las instrucciones de operacin, datos y caractersticas de
funcionamiento del instrumento.
 Centrifuga.
4.4 MATERIAL

5 ubos de ensaye de 13 X100mm.


1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

5.0 PROCEDIMIENTO

5.1 CONDICIONES DE ENSAYO

 Longitud de onda: 340 nm


 Temperatura: 25/ 30/37C
 Cubeta: 1cm. Paso de luz
 Ajuste a cero con blanco de reactivo.

5.2 DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Pipetear en tubos de ensayo:


Blanco Estndar Muestra Muestra Control
Estndar -- 10L -- --
Muestra -- -- 10L --
Muestra Control -- -- -- 10L
Reactivo 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

2. Mezclar e incubar exactamente 5 min a 25/ 30/37C.


3. Leer frente a blanco de reactivos.(14)

6.0 RESULTADOS

6.1 CLCULOS

Abs. muestra
X conc. estndar = concentracin de fsforo
Abs. estndar

mg/dL x 0.323 = mmol/ L


Conc. estndar : 5.0 mg/dL (1.8 mmol/L).(14)

6.2 LINEALIDAD DEL MTODO

 El mtodo es lineal hasta valores de 15 mg/dL (4.84 mmol/L).


 Si la concentracin de la muestra es superior, se diluir a 1:2 con agua
destilada y el resultado final se multiplicar por 2.(14)

6.3 Lmite de seguridad


biolgica

 Mujeres 1.5-6.8 mg/dL (0.48-2.19 mmol/L).


 Hombres 2.1-5.6 mg/dL (0.68-1.80 mmol/L).
 Nios 4.0-7.0 mg/dL (1.29-2.26 mmol/L).(14)

UNIDAD V

PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPTICO

El hgado es el rgano principal que se encarga del metabolismo de los


carbohidratos, protenas, lpidos, porfirinas y cidos biliares. Es capaz de
sintetizar la mayora de las protenas del cuerpo con excepcin de las
inmunoglobulinas, producidas por el sistema de las clulas plasmticas
linfocticas. El hgado es tambin el sitio principal para el almacenamiento del
hierro, glucgeno, lpidos y vitaminas. El hgado juega un papel importante en la
desintoxicacin de los xenobiticos y la excrecin de los productos metablicos
finales como bilirrubina, amonaco y urea.

Alteraciones de la funcin heptica durante la enfermedad

Ictericia
La ictericia es una condicin general provocada por el metabolismo anormal o la
retencin de la bilirrubina. La ictericia le produce una coloracin amarilla a la piel,
membranas mucosas y escleras. Se puede observar la ictericia tpicamente con
niveles de bilirrubina srica de aproximadamente 50 mg/dL. Los tres tipos
principales de ictericia son: la preheptica, la heptica y la postheptica.
La ictericia preheptica es el resultado de las anemias hemolticas agudas o
crnicas. La ictericia heptica incluye los trastornos del metabolismo de la
bilirrubina y los defectos en el transporte tales como: la enfermedad de Crigler-
Najer, el sndrome de Dubin-Johnson y la enfermedad de Gilbert, as como la
ictericia fisiolgica del recin nacido y enfermedades que provocan la injuria o la
destruccin hepatocelular.
Cada una de las enfermedades especficas del metabolismo de la bilirrubina
representa un defecto en una de las etapas del procesamiento heptico de la
bilirrubina srica. Por lo tanto, la enfermedad de Gilbert es causada por un
defecto en el transporte de la bilirrubina de la albmina plasmtica al hepatocito.
Aunque se presentan niveles elevados de bilirrubina no conjugada en este
desorden familiar, no se elevan los niveles de bilirrubina conjugada. Un dao en la
conjugacin con el UDP- glucornido, causada por una deficiencia de la enzima
UDP-glucoroniltransferasa tambin provocar un incremento grande en la
bilirrubina no conjugada. Cuando la deficiencia congnita, se conoce como la
enfermedad de Crigler-Najer.
Sin embargo, las deficiencias en la glucoronil transferasa se encuentran con
mayor frecuencia en la ictericia neonatal o fisiolgica. La actividad de esta enzima
es una de las ltimas funciones que se activan en la vida prenatal, ya que la
bilirrubina no conjugada formada por el feto es eliminada por la placenta a la
sangre materna.
La ltima etapa en el procesamiento heptico de la bilirrubina es la etapa de
postconjugacin en la cual se excreta el glucornido de bilirrubina de los
microsomas hepticos a los canalculos. La dificultad en realizar este proceso,
llamado el sndrome de Dubin-Johnson, provoca grandes incrementos en la
bilirrubina conjugada srica y la orina muestra presencia de bilirrubina.
Se ha promocionado la medicin de la bilirrubina delta como una mejor manera de
evaluar la hiperbilirrubinemia resultante de la enfermedad heptica obstructiva. La
fraccin tiene una vida media srica mayor que las otras fracciones. Si se
encuentra elevada en concentraciones significativas, puede provocar un descenso
aparentemente ms lento en la cada de la bilirrubina srica dando una falsa
impresin de una falta de progreso a medida que la enfermedad heptica
responde al tratamiento.
La ictericia heptica incluye los desrdenes caracterizados por dao hepatocelular
o necrosis, tales como hepatitis o cirrosis. La ictericia postheptica es causada
generalmente por una enfermedad obstructiva biliar provocada por espasmos o
contracciones del tracto biliar, la oclusin dctil por clculos o compresin por
enfermedad neoplsica. Puesto que en estas enfermedades las funciones
hepticas de transporte y conjugacin de la bilirrubina son normales, el incremento
mayor en la bilirrubina srica implica a la fraccin conjugada. Debido a la
imposibilidad de ser excretada adecuadamente por el hgado, en estos
desrdenes aumenta la fraccin de bilirrubina conjugada en el suero, con el
resultado de la aparicin de bilirrubina en la orina. Si la enfermedad hepatocelular
es suficientemente severa para provocar ictericia, se aumentan tanto las
fracciones de bilirrubina conjugadas como no conjugadas. La razn es el dao
general en el metabolismo de la bilirrubina
5.1 BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA.
MTODO DMSO

1. INTRODUCCIN

La bilirrubina se origina por degradacin del grupo hem de la hemoglobina, que a


su vez aparece en el plasma como consecuencia de la destruccin de los glbulos
rojos en el sistema retculo endotelial. La hemoglobina, una vez liberada en el
interior del eritrocito, se combina con las haptoglobinas, protenas plasmticas
especficas para su transporte. En una primera etapa y tras su liberacin de la
haptoglobina, se forma, por accin de una oxigenasa, un grupo formilo, con lo que
se rompe el anillo tetrapirrlico del hem, formndose el compuesto denominado
biliverdina, que en una etapa posterior y por accin de una reductasa se
transforma en bilirrubina.
Desde un punto de vista analtico y clnico, interesa conocer los niveles de
bilirrubina total y diferenciar cuantitativamente la "bilirrubina libre" o preheptica
que aumenta principalmente en procesos de tipo hemoltico, de la "bilirrubina
conjugada" o heptica que est incrementada en la disfuncin heptica y ms
concretamente en fallos de los mecanismos de su eliminacin, a travs del
sistema biliar, cuyo primer paso es introducirse del hepatocito a los canalculos
biliares.

2. OBJETIVOS
 Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de
bilirrubina en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la bilirrubina total y directa y
comparar con el valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de bilirrubina en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Casi todas las tcnicas de cuantificacin de la bilirrubina se basan en la reaccin
de Malloy-Evelyn, que valora colorimtricamente por la formacin de
azobilirrubina, de color rojo cereza, cuando a la bilirrubina se la hace reaccionar en
determinadas condiciones con el cido sulfanlico diazotado.
La bilirrubina conjugada, muy polar, reacciona en medio acuoso con el reactivo de
diazotacin, por lo que se le llam directa, pues al poner en contacto el suero y el
reactivo apareca directamente el color. Sin embargo, la bilirrubina libre, poco
polar, no da directamente la reaccin y es preciso aadir un tercer reactivo -que
inicialmente fue el metanol- para que produzca la reaccin de diazotacin con la
consiguiente aparicin del color; por este motivo se llam bilirrubina indirecta.
4. PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLINICA


Suero
La estabilidad de la muestra, una vez separada de los hemates y protegida de la
luz, es de 3 meses a -20C, 4 das a 2-8C o un da de 20 a 25C

4.2 REACTIVOS Y MATERIAL

Material necesario
5 ubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 200L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

Fotmetro termoestable a 37C con filtro de 546 nm.

Reactivo 1 Acido sulfanlico 30 mmol/L


(BD) Bilirrubina directa Acido clorhdrico 150 mmol/L
Reactivo 2 Acido sulfanlico 30 mmol/L
(BT) Bilirrubina total Acido clorhdrico 50 mmol/L
Dimetilsulfxido 7 mol/L
(DMSO)
Reactivo 3 Nitrito de sodio 29 mmol/L

PREPARACION Y ESTABILIDAD
Todos los reactivos estn listos para su uso.
Son estables hasta su fecha de caducidad indicada en el envase.

5. PROCEDIMIENTO
5.1TCNICA
Longitud de onda BT Total 546 nm
BD Directa 578 nm
Temperatura 25/30/37C
Cubeta 1 cm paso de luz
Lectura frente a aire o agua destilada
Blanco
Total Directa
R.1 Bilirrub. directa -- -- 1.5 mL 1.5 mL
R.2 Bilirrub. total 1.5 mL 1.5 mL
R.3 Nitrito sdico -- 50 L 50 L
Muestra 100 L 100 L
Mezclar y esperar 5 min exactamente a temperatura ambiente.
Leer las densidades pticas.

6. RESULTADOS

6.1Clculo (Total o Directa)

Con calibrador
Abs muestra - Abs blanco muestra
X conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina
Abs calibrador - Abs blanco calibrador

Con factor
Abs muestra - Abs (blanco muestra) x factor* = mg / dL de bilirrubina en la muestra

*Factor: Concentracin del calibrador


Abs calibrador - Abs blanco calibrador

Factor terico: Bilirrubina (T) = 19.1; Bilirrubina (D) = 14


Factor de conversin: mg/dL x 17.1 = mol / L.

6.2Linearidad
Este mtodo es lineal hasta valores de 20 mg/dL
Para valores superiores diluir la muestra 1:2 con solucin salina y repetir la
determinacin multiplicando el resultado por 2.

6.3 Lmites de Seguridad Biolgica


Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dL (17.1 mol/L)
Bilirrubina directa: hasta 0.3 mg/dL (5.1 mol/L)
Recin nacido:
Bilirrubina total: mayor 5.8 mg/dL (<100 mol/L)

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y Patolgico.
5.2 ALBMINA
MTODO COLORIMTRICO
VERDE DE BROMOCRESOL

1. INTRODUCCIN
La albmina es una protena globular que puede ser definida por cinco
caractersticas: 1) es soluble en sulfato de amonio 2.03 mol/L a 23C y a pH
superior a 6, cuando es dializada contra agua destilada; 2) la migracin de la
protena en un campo electrofortico es 6.0 unidades de movilidad de Tiselius
buffer de barbital en el cual una unidad de movilidad es 10-5 cm2.V-1.seg-1; 3) el
peso molecular es aproximadamente 66,000 daltons y sedimenta a una velocidad
de 4.5 S; 4) no posee carbohidratos y 5) la albmina es el componentes principal
del suero humano normal. La albmina humana ha sido aislada y purificada hasta
el punto de poder determinar su secuencia. Est formada por 584 aminocidos y
el peso molecular calculado para esta secuencia es 66,248 daltons. La protena
tiene diversas funciones; desempea un papel importante en el mantenimiento de
la presin osmtica coloide de la sangre, en el transporte de varios iones, cidos y
hormonas y en la nutricin. Los valores bajos de albmina pueden explicar la
toxicidad de algunos frmacos en niveles bajos cuando slo se mide la
concentracin total de stos en suero. En los sueros hipoalbuminmicos, la forma
libre (activa) de la droga puede ser mucho mayor que en los sueros con niveles
normales de albmina, debido a la gran diferencia en la capacidad de unin entre
los dos tipos de sueros. La mayor cantidad de droga libre puede causar entonces,
una respuesta txica.
En la desnutricin, los niveles plasmticos de albmina disminuyen mucho ms
que los de la gammaglobulina. Otras de las funciones importantes de la albmina
es el mantenimiento del 75% de la presin osmtica coloide del plasma. Las
alteraciones de los niveles sricos de albmina pueden tener origen en un gran
nmero de secuelas patlogicas y en consecuencia no son especficas, aunque s
resultan tiles para evaluar el estado del paciente.
La hiperalbuminemia usualmente es atribuible a deshidratacin o
hemoconcentracin. La hipoalbuminemia en general se debe a 1) hemodilucin, 2)
sntesis inferior a la prdida y 3) enfermedades que causan una gran prdida de
albmina.
La hemodilucin puede ser causada por el desequilibrio de electrlitos. La menor
sntesis puede ser atribuida a la incapacidad para obtener nutrientes debido a una
desnutricin, malabsorcin o a una incapacidad del hgado para la sntesis de
albmina ocasionadas por enfermedades como hepatitis crnica o aguda. Con
frecuencia los niveles bajos de albmina son debidos a grandes prdidas como en
el caso de sndrome nefrtico, enteropata con prdida proteica o lesiones
cutneas exudativas. Si grandes reas de la superficie cutnea estn destruidas
se producen severas prdidas por ellas. El esfuerzo fsico, hipertensin, infeccin
del tracto urinario y la enfermedad cardaca congestiva puede tambin aumentar
la excrecin urinaria de albmina.
Los mtodos de fijacin de colorantes son los ms usados para la determinacin
de albmina srica. La albmina tiene la propiedad de fijarse a una amplia
variedad de aniones orgnicos, incluyendo molculas complejas de colorantes.
Las tcnicas de fijacin de colorantes, se basan en un desplazamiento del mximo
de absorcin del colorante cuando est unido a la albmina. Este desplazamiento
permite que el color resultante sea medido en presencia de un exceso de
colorante, lo cual junto con la alta afinidad de fijacin con la albmina permite que
todas las molculas de esta protena tomen parte de la reaccin. Se ha empleado
una gran variedad de colorantes incluyendo naranja de metilo, cido 2-(4-
hidroxiazobenceno)benzoico, verde de bromocresol y prpura de bromocresol. La
reaccin con verde de bromocresol se lleva a cabo usualmente a pH 4.2-4.5 y se
mide a 620 630 nm. La Asociacin Americana de Qumica Clnica recomend
un mtodo con verde de bromocresol. En este procedimiento la absorbancia del
verde de bromocresol unido a la albmina se mide a 628 nm en un buffer de
succinato. La prpura de bromocresol reacciona con la albmina a pH 5.2 y su
desplazamiento de color se mide a 603 nm.
Existen tambin refractmetros clnicos que cuentan con escalas graduadas para
medir la concentracin de protenas totales.

.
2. OBJETIVOS
 Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de
albmina en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la albmina y comparar con el valor
de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de albmina en una muestra biolgica

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Prueba colorimtrica en la que la albmina se combina con el verde de
bromocresol a determinado pH producindose un cambio de color del indicador,
de amarillo verdoso a verde azulado.
4. PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLNICA


Suero o plasma

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipeta de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

EQUIPO
Fotmetro con filtro de lectura de: 630 nm.
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo Solucin de Verde Bromocresol a pH 4.2
Estndar Albmina 5.0 g/dL

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
El reactivo est listo para su uso. Ser estabe hasta su fecha de caducidad.
Se recomienda protegerlo de la luz.
5. PROCEDIMIENTO

5.1TCNICA
Blanco Standard Muestra
Standard 5 L
Muestra 5 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Mezclar y esperar 10 minutos a temperatura ambiente.


Ajustar el aparato a cero con el blanco y efectuar las lecturas de las densidades
pticas del estndar y muestra a 630 nm.
La coloracin es estable durante 1 hora.

6. RESULTADOS

6.1Clculo
Albmina (g/dL) = Abs muestra
X Conc. Estndar (g/dL)
Abs estndar

6.2 Linearidad
Hasta valores de 6.0 g/dL
Valores superiores se diluirn a la 1:2 con solucin salina.

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


Suero: de 3.5 a 5.0 g/dL

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y Patolgico. Sueros control valorados.
5.3 PROTENAS TOTALES
MTODO COLORIMTRICO - "BIURET".

1. INTRODUCCIN

Protenas sricas en la evaluacin de la funcin heptica.


Para la sntesis de las protenas sricas se requiere un hgado sano en plenas
funciones, excepto en el caso de las gamma globulinas. El hgado tiene la
capacidad de duplicar la produccin y salida de protenas durante las
enfermedades asociadas con prdida de protenas. En consecuencia, no debe
sorprender que las mediciones de protenas totales no se alteren sino hasta que
haya ocurrido una disminucin extensiva de la funcin heptica.
La albmina se disminuye en la enfermedad heptica crnica y generalmente se
acompaa por un incremento en las globulinas beta y gamma, debido a la
produccin de IgG e IgM en la hepatitis crnica activa y de la IgM e IgA en la
cirrosis biliar o alcohlica respectivamente. Se debe hacer nfasis en que estas
inmunoglobulinas no son producidas en el hgado sino por las clulas plasmticas
del sistema reticuloendotelial. Se puede facilitar la identificacin de estas
subclases de gamma globulinas mediante la inmunoelectroforesis. Sin embargo,
una disminucin en la albmina srica no es especfica para la enfermedad
heptica, puesto que la albmina tambin disminuye en la malabsorcin, la
desnutricin, la enfermedad renal, el alcoholismo y las enfermedades malignas.
La fraccin alfa1 de las globulinas sricas se disminuye en la enfermedad heptica
crnica y cuando esta fraccin est ausente, o casi, indica que una deficiencia en
la alfa1-antitripsina puede ser la causa de la enfermedad heptica. Las protenas
sricas, globulina alfa2 y beta se aumentan en la ictericia obstructiva. Este
incremento en la alfa2-globulina y la beta globulina en la ictericia obstructiva est
asociada con interferencias en el metabolismo normal de las lipoprotenas. Por
consiguiente, no se puede hacer claramente el fenotipo de un desorden lipdico en
presencia de enfermedad heptica. El uso del colesterol de alta densidad para
evaluar el riesgo de la enfermedad coronaria se obvia en los pacientes con
enfermedad heptica alcohlica, obstruccin biliar y necrosis heptica aguda.
El hgado produce los factores de coagulacin y estos pueden disminuir
significativamente en la presencia de enfermedad heptica. El fibringeno
plasmtico est presente normalmente en una concentracin de 2 a 4 g/L. Una
disminucin en el fibringeno plasmtico indica una enfermedad heptica severa y
est asociada con concentraciones disminuidas de otros factores de coagulacin,
especialmente la protrombina. Puesto que la sntesis de la protrombina ocurre en
el hgado, y requiere de la vitamina liposoluble K, se puede incrementar el tiempo
de protrombina, en la enfermedad obstructiva biliar, la cirrosis o necrosis heptica,
la falla heptica, el sndrome de Reye, los abscesos hepticos, la deficiencia de
vitamina K y la hepatitis. Se puede diferenciar la enfermedad intraheptica
asociada con una disminucin en el factor de coagulacin, de la enfermedad
obstructiva intraheptica con una absorcin disminuida de vitamina K, observando
la respuesta del tiempo de protrombina a la administracin exgena de vitamina K.
2. OBJETIVOS
 Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de
protenas en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de protenas y comparar con el valor
de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de protenas.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Los grupos -CO-NH- unidos entre s dan una reaccin con formacin de color
violeta con las sales cpricas en medio alcalino, siendo la ms representativa y
simple la que da con el Biuret -NH2-CO-NH-CO-NH2. Es en la actualidad el
mtodo colorimtrico ms exacto y simple para la determinacin de protenas
totales.

4. PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLINICA


Suero, plasma.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS


Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

Fotmetro termostable a 37C con filtro de 540 nm.

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tartrato K-Na 15 mmol/L
Yoduro sdico 100 mmol/L
Yoduro de potasio 5 mmol/L
Sulfato de cobre II 5 mmol/L
Standard Sol. Protenas 7 g/dL

ESTABILIDAD
A temperatura ambiente la estabilidad es hasta la fecha de caducidad indicada en
el envase.
5. PROCEDIMIENTO

5.1TECNICA
Blanco Estndar Muestra
Estndar 25 L
Muestra 25 L
R.1 Biuret 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Mezclar e incubar 15 min a 30-37C. Dejar enfriar 5 minutos a temperatura


ambiente. Leer, frente al blanco de reactivo, a 540 nm. Coloracin estable 30
minutos.

6. RESULTADOS

6.1Clculo
Abs muestra
X 7 (Conc. Estndar) = g/L de protenas totales
Abs estndar

1 g/ dL = 10 g/L

6.2 Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 15 g/dL (150 g/L)

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


Recin nacidos : 5.2 - 9.1 g/dL
Nios (hasta 3 aos) : 5.4 - 8.7 g/dL
Adultos : 6.7 - 8.7 g/dL

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.
5.4 ENZIMAS DE INTRES CLNICO

Las enzimas biolgicas permiten que las reacciones metablicas procedan con
rapidez. Las enzimas con significado clnico funcionan en forma intracelular.
Cuando se produce algn dao a los tejidos por enfermedades o lesiones, se
liberan enzimas a la circulacin y su actividad puede medirse como indicador de
dichos daos.
La actividad enzimtica vara de acuerdo con la ubicacin celular. Por lo tanto, el
patrn de elevacin enzimtica es til para detectar y diferenciar diversas
enfermedades. Adems existen varias isoenzimas en las que se observa una leve
diferencia estructural de la enzima que depende del tejido primario en el cual se
sintetiza. Esta diferencia estructural permite separar las enzimas totales en todas
sus formas isoezimticas. Por este motivo, en vez de la determinacin de una sola
enzima, las bateras de pruebas enzimticas que constan del anlisis de dos o
ms enzimas o isoenzimas en vez de la determinacin de una sola enzima,
ofrecen una mayor sensibilidad y especificidad diagnsticas para la deteccin de
afecciones. La batera enzimtica caracterstica para diversas afecciones
cardiacas estn conformadas de anlisis de CK, isoenzima CK, LDH, isoenzima
LDH y AST. La isoenzima CK-MB y el patrn isoenzimtico invertido de LDH
proporcionan mayor informacin diagnstica para detectar el infarto al miocardio.
Las enzimas que se solicitan para el diagnstico de afeciones hepticas incluyen
AST, ALT, GGT y ALP. De ellas la AST y la ALT se elevan ms en afecciones
hepatocelulares, mientras que la GGT y la ALP indican, con mayor frecuencia,
afecciones hepatobiliares. La batera de pruebas enzimticas para afecciones
pancreticas estn conformadas de anlisis de AMS y LPS; la CK total y la CK-MN
son los indicadores ms especficos de afecciones musculares.
A medida que se cuente con tecnologa ms avanzada, los anlisis enzimticos
ofrecern una sensibilidad y especificidad diagnsticas an mayores, con
capacidad para distinguir y detectar mejor las isoenzimas y las isoformas de las
mismas.
La importancia radica indudablemente en la seleccin adecuada de las
metodologas ms modernas, especficas y sensibles, para evaluar las enzimas
presentes.
Para las determinaciones enzimticas se pueden emplear fundamentalmente dos
clases de mtodos: directos e indirectos. En los primeros se mide la desaparicin
de los sustratos enzimticos o la aparicin de uno de los productos de la reaccin,
por ejemplo:
Fosfatasa
a) p-nitrofenilfosfato Lactato + NAD

La actividad de la fosfatasa puede determinarse directamente dentro del rango de


la luz visible ( = 405 nm) midiendo la intensidad del color del p-nitrofenol liberado
por hidrlisis del p-nitrofenilfosfato, como resultado de la accin de la fosfatasa. En
este caso, uno de los productos formados, (p-nitrofenol) por ser colorido permite
medir directamente la actividad enzimtica.

b) La desaparicin de un compuesto no colorido, por transformarse en otro


tambin incoloro. Este tipo de reacciones debe medirse a longitudes de onda
especficas para el compuesto cuya desaparicin se est controlando, por
ejemplo:
LDH
Piruvato + NADH2 Lactato + NAD
MDH
Oxalacetato + NADH2 Malato + NAD
HBDH
Cetobutirato + NADH2 Hidroxibutirato + NAD

en estas reacciones lo que se mide es la oxidacin de la coenzima en su forma


reducida (NADH2), que absorbe especficamente a 340 nm. Por la accin de las
deshidrogenasas anteriores, la coenzima pasa a su forma oxidada (NAD) que se
absorbe a 340 nm sino a 260 nm (mtodo UV).
.En los mtodos indirectos, como su nombre lo indica, la actividad de la enzima se
determina slo en forma indirecta. Para ello es necesario acoplar dos o ms
reacciones, en una de las cuales intervenga la enzima que se desea determinar.
Esta cataliza generalmente la transformacin de un sustrato a un metabolito
intermedio (producto de la reaccin), cuya concentracin se determina por la
accin de una segunda enzima, de la cual ese metabolito es sustrato. La segunda
enzima llamada enzima auxiliar, debe adicionarse generalmente durante la
determinacin, en tal forma que al final de la reaccin lo que se mide es el
resultado del acoplamiento de dos reacciones enzimticas.
Como ejemplo de este tipo de determinaciones por mtodos indirectos podemos
mencionar las determinaciones de ALT, AST y CK, por mtodos (UV). A diferencia
de los mtodos colorimtricos directos, como en el caso de la ALT, no se
determina el piruvato formado, sino que ste se emplea a su vez como sustrato de
una enzima auxiliar (LDH), que como se indic debe adicionarse en la reaccin:

ALT
1) Cetoglutarato + L-alanina Glutamato + Piruvato
LDH
2) Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+

En este caso se han acoplado las reacciones 1 y 2 midiendo la transformacin de


NADH y H+ a NAD, que como puede verse slo est relacionada indirectamente
con la enzima ALT.
En el caso de la creatinina fosfocinasa (CPK) o creatinina cinasa (CK) como
tambin se le denomina, no solo se acoplan dos reacciones sino tres:
CK
3) Creatinina fosfato + ADP Creatinina + ATP
HK
4) ATP + Glucosa ADP + Glucosa 6-Fosfato
G-6PDH
5) Glucosa 6-Fosfato + NADP 6 Fosfogluconato + NADPH + H+

Para medir la actividad de la enzima que cataliza la fosforilacin del ADP en ATP,
es decir creatinina cinasa, es necesario emplear el ATP resultante, como donador
de grupos fosfato que requiere la hexocinasa (HK) para formar glucosa 6-fosfato.
Este compuesto tiene que ser empleado todava en una tercera reaccin como
sustrato de otra enzima auxiliar, la deshidrogenasa de glucosa 6-fosfato (G-
6FDH). Esta segunda enzima auxiliar es la que a su vez reduce la coenzima
NADP (en su forma oxidada) hasta NADPH2 y es la que puede ser medida a
una longitud de onda a 340 nm.

Fosfatasa alcalina (EC 3.1.3.1). ALP

La fosfatasa alcalina realmente es un grupo de enzimas que hidrolizan los steres


de monofosfatos a un pH alcalino. El pH ptimo para estas enzimas es
generalmente de aproximadamente 10. No se conocen los substratos naturales
para la fosfatasa alcalina. La enzima ha sido identificada en la mayora de los
tejidos corporales y se localiza generalmente en las membranas celulares. La
actividad ms alta de la fosfatasa alcalina se observa en el hgado, los huesos, el
intestino, el rin y la placenta, y se han identificado por lo menos 11 isoformas
diferentes de la fosfatasa alcalina en el suero. Puesto que la fosfatasa alcalina
contiene normalmente cantidades significativas de cido silico, la mayora de
estas formas mltiples de la enzima son el resultado de diferentes grados de
sialacin. Se sabe que la enzima producida por la placenta tiene una composicin
proteica diferente de las otras composiciones enzimticas.
La medicin de la fosfatasa alcalina srica es til para diferenciar la enfermedad
hepatobiliar de la enfermedad osteognica. La actividad de la fosfatasa alcalina
aumenta mucho (10 veces) como resultado de una sntesis localizada en la
membrana despus de una obstruccin extrahepatobiliar tal como la colestasis o
los clculos biliares. La obstruccin biliar intraheptica tambin se ve
acompaada por una elevacin de la actividad de la fosfatasa alcalina srica, pero
el grado de incremento es mucho menor (2 a 3 veces). La enfermedad heptica
que produce necrosis de las clulas del parnquima no eleva la fosfatasa alcalina
srica a menos que la enfermedad heptica est asociada con dao a los
canalculos o con estasis biliar.
Es muy complicada la interpretacin de la medicin de la fosfatasa alcalina srica,
debido a que la actividad de la enzima puede aumentar en ausencia de
enfermedad heptica. Los desrdenes ms comunes que producen una elevacin
de la fosfatasa alcalina son las enfermedades seas, como la enfermedad de
Paget, el raquitismo y la osteomalacia. Tambin se incrementa la actividad de la
fosfatasa alcalina srica durante la pubertad debido al crecimiento acelerado de
los huesos y durante el tercer trimestre del embarazo debido a la liberacin de la
fosfatasa alcalina por la placenta.

Gama-glutamiltransferasa (EC 2.3.2.2). GGT


La GGT (o GT) es una enzima localizada en la membrana que juega un papel
importante en el metabolismo del glutatin y en la reabsorcin de los aminocidos
del filtrado glomerular y de la luz intestinal. El glutatin (g-glutamilcisteinilglicina)
en presencia de la GGT y un aminocido o pptido transfiere el glutamato al
aminocido formando un enlace pptido en el cido g- carboxlico, dando, por
consiguiente, cisteinilglicina y el pptido g-glutamil correspondiente.
Aunque la mayor actividad de la GGT se presenta en el tejido renal, la elevacin
de la GGT es generalmente el resultado de la enfermedad heptica. La GGT
srica se eleva antes que las otras enzimas hepticas en enfermedades como la
colecistitis aguda, la pancreatitis aguda, la necrosis heptica aguda y subaguda, y
neoplasias de sitios mltiples que cursan con metstasis hepticas. Puesto que la
GGT es una enzima microsomal heptica, la ingestin crnica de alcohol o drogas
como los barbitricos, los antidepresivos tricclicos y los anticonvulsionantes
inducen la produccin de enzimas microsomales. Estas elevaciones inducidas por
drogas preceden cualquier otro cambio en las enzimas del hgado, y si se
suspende la ingestin de la droga en ese momento los cambios del hgado son
generalmente reversibles. La GGT permite la diferenciacin de las enfermedades
hepticas de otras condiciones en las cuales se eleva la fosfatasa alcalina srica
puesto que los niveles de GGT son normales en la enfermedad de Paget, el
raquitismo y la osteomalacia y en los nios y mujeres embarazadas sin
enfermedad heptica. Puesto que la prstata tiene una actividad significativa de
GGT, la actividad srica es mayor en hombres sanos que en mujeres. La mayor
utilidad de la GGT est en el diagnstico de colestasis causadas por la ingestin
crnica de alcohol o drogas, colestasis mecnicas o virales, metstasis hepticas,
desrdenes seos con elevaciones de la fosfatasa alcalina.

5-Nucleotidasa (EC3.1.3.5).NTD
La 5-Nucelotidasa (NTD) es una enzima localizada en los microsomas y las
membranas celulares que cataliza la hidrlisis de los steres 5-fosfato
nuclesidos. La enzima srica tiene un pH ptimo aparente de 7.5:

NTD
Nuclesido-5-monofosfato + H2O Nuclesido + Pi

Al igual que la GGT, la NTD srica se eleva en las enfermedades hepatobiliares


tales como: obstruccin por clculos del ducto biliar, colestasis biliar, cirrosis y
enfermedad obstructiva causada por crecimiento neoplsico. Sin embargo, la
NTD no se eleva generalmente en dao heptico inducido por drogas.ref Por esto
es til medir la NTD junto con la GGT para seguir el curso de la quimioterapia en
neoplasias del hgado. Puesto que la NTD no se eleva en la enfermedad sea, al
igual que la GGT es til para diferenciar las causas hepticas para la elevacin en
la fosfatasa alcalina, derivadas de otros factores, tales como las enfermedades
seas, el embarazo y crecimiento normal.

Deshidrogenasa lctica (EC 1.1.1.27). LDH


La deshidrogenasa lctica est presente en muchos tejidos. La LDH cataliza la
interconversin de piruvato y lactato:

LDH
+
NAD + H + Lactato Piruvato + NADH+ H+

La mayor actividad de la LDH se presenta en el rin y el corazn, y la menor en


el pulmn y el suero. La LDH se localiza en el citoplasma celular y es por lo tanto
liberada al suero, cuando las clulas se daan o necrosan.
Cuando solamente est implicado un rgano especfico, como el hgado, la
medicin de la LDH total puede ser til. La LDH se incrementa en las hepatitis
virales o txicas, en la obstruccin biliar extraheptica, en la necrosis aguda del
hgado y en la cirrosis del hgado. Sin embargo, en condiciones en las que
puedan estar implicadas varios rganos la medicin del LDH total es menos til
que la medicin de las isoenzimas de la LDH. Las isoenzimas LDH5 y LDH4 son
las responsables de la actividad primaria del hgado, mientras que las isoenzimas
LDH1 y LDH2 son las responsables por la actividad predominante de la LDH en el
corazn y el rin. Puesto que los glbulos rojos tambin contienen mucha LDH1,
se debe evitar el anlisis de muestras de suero bemolizadas. En las condiciones
hepticas, la electroforesis de la LDH muestra que la elevacin en la LDH total se
debe a la liberacin de LDH4 y LDH5 al suero.

Aspartato aminotransferasa (EC 2.6.1.1) y alanino aminotransferasa (EC


2.6.1.2).
Las transaminasas ASAT y ALAT catalizan la conversin de aspartato y
alanina a oxaloacetato y piruvato respectivamente. En el hgado se encuentran
los niveles ms altos de ALAT, mientras que la ASAT se encuentra presente en el
corazn, msculo esqueltico e hgado en cantidades similares. La actividad en el
suero tanto de la ASAT como de la ALAT aumentan rpidamente durante el
comienzo de la ictericia viral y permanecen elevadas por 1 a 2 semanas. En las
hepatitis txicas tambin se elevan la ALAT y la ASAT, pero la LDH se eleva
mucho ms, como resultado de la necrosis celular heptica. En los pacientes con
hepatitis crnica activa tambin se observan aumentos en la ASAT y ALAT.
La necrosis heptica aguda se acompaa por incrementos significativos en
las actividades de tanto la ALAT como de la ASAT. El aumento en la actividad de
la ALAT es generalmente mayor que el incremento en la actividad de la ASAT. En
la cirrosis del hgado, las actividades de las transaminasas sricas generalmente
no se elevan por encima de 300 U/L, sin importar la causa de la enfermedad
cirrtica. Las elevaciones de las ALAT y ASAT sricas observadas en el sndrome
de Reye, son atribuibles directamente al dao heptico, y el incremento de la
ALAT es generalmente mayor que el incremento en la ASAT. Tambin se
incrementan las transaminasas en la actividad neoplsica.
En el diagnstico de la enfermedad del hgado, la medicin de los niveles
sricos de ASAT y ALAT es valiosa. Sin embargo, la mejor manera de usar estos
anlisis es junto con otros anlisis de enzimas como la LDH y la creatina cinasa, y
con otras mediciones de la funcin renal y heptica como la urea sangunea, la
creatinina, el amonaco y la bilirrubina. Esto es importante cuando se establece el
diagnstico, puesto que la ALAT y la ASAT estn presentes en otros tejidos
adems del hgado, y la actividad srica de estas enzimas puede reflejar una
enfermedad orgnica en tejidos distintos al hgado. Las actividades sricas de la
ALAT y la ASAT se elevan en el infarto del miocardio, infarto renal, distrofia
muscular progresiva y otro gran nmero de enfermedades que solamente afectan
al hgado de una manera secundaria, como la enfermedad de Gaucher, la
enfermedad de Niemann-Pick, la mononucleosis infecciosa, la leucemia
mieloctica, la cetoacidosis diabtica y el hipertiroidismo.

Otros compuestos analizados para hgado

Bilirrubina
El anlisis de la bilirrubina srica es til para diferenciar la causa de la
ictericia. La ictericia preheptica es el resultado de un incremento grande de la
bilirrubina no conjugada debido a la liberacin y el metabolismo aumentado de la
hemoglobina despus de la hemlisis. Se observa un incremento nulo o
moderado en la bilirrubina conjugada debido a que el transporte de la bilirrubina al
hgado y la formacin del conjugado con el glucornido limitan el proceso.
Adicionalmente, debido a los niveles de bilirrubina conjugada que son excretados
por el hgado, se elevan las concentraciones de urobilingeno urinario y urobilina
fecal, pero la bilirrubina urinaria (la cual es nicamente la forma conjugada
libremente soluble) est ausente. En contraste la ictericia postheptica obstructiva
se caracteriza por grandes aumentos en la bilirrubina conjugada srica. La
bilirrubina delta, bilirrubina unida covalentemente a la albmina, tambin se eleva
en este desorden. La medicin de la bilirrubina delta, como prueba diagnstica no
ha logrado una aceptacin generalizada. La acumulacin de la bilirrubina en el
suero se produce como consecuencia de una excrecin biliar disminuida despus
de la conjugacin de la bilirrubina, ms que por una carga aumentada de
bilirrubina causada por hemlisis. La excrecin heptica de los metabolitos de la
bilirrubina es baja y se puede evidenciar usualmente la bilirrubina urinaria. La
ictericia heptica presenta un patrn intermedio en el cual las bilirrubinas sricas
conjugadas y no conjugadas se incrementan al mismo grado con presencia de
bilirrubina conjugada en la orina. Sin embargo, la concentracin fecal de urobilina
est disminuida.

Colesterol.
El colesterol srico est compuesto de: colesterol libre y el esterificado.
Puesto que la esterificacin se realiza en el hgado la enfermedad intraheptica o
la obstruccin biliar se caracterizan por un incremento del colesterol libre y
ocasionalmente por un desplazamiento en el perfil de cidos grasos libres del
suero, aunque el colesterol total permanece usualmente sin modificar. El
colesterol total puede disminuir hasta valores inferiores al rango de referencia en
la enfermedad crnica asociada con la destruccin del parnquima celular.

cidos biliares.
En la enfermedad se altera la secrecin y produccin de cidos biliares. El
suero contiene 1 a 2 mg/mL de cidos biliares en el adulto sano. En la
enfermedad hepatobiliar, las concentraciones de cidos biliares sricos se pueden
elevar hasta 1000 veces. Tambin se pueden elevar significativamente en otras
enfermedades como hepatitis, cirrosis, enfermedad heptica inducida por drogas y
el hepatoma. Las concentraciones de cidos biliares sricos se encuentran
normales en la enfermedad de Gilbert, la hemocromatosis y la enfermedad
poliqustica del hgado. La medicin de los cidos biliares es til para el
diagnstico de la disfuncin heptica mnima cuando los otros parmetros aun
estn sin modificar.

Triglicridos.
Los triglicridos sricos se deben medir en una muestra en ayunas. Los
incrementos son relativamente inespecficos; la disfuncin heptica causada por
hepatitis, obstruccin biliar extraheptica y cirrosis se asocia con un incremento en
los triglicridos sricos, pero as sucede tambin en enfermedades como la
pancreatitis aguda, infarto del miocardio, falla renal, gota, anemia perniciosa y
diabetes mellitus. Los cidos grasos libres tambin son no especficos. Estn
disminuidos en la hepatitis crnica, la falla renal crnica y la fibrosis qustica. Las
concentraciones de cidos grasos libres se elevan en el sndrome de Reye, la
encefalopata heptica y la hepatitis crnica activa, pero tambin en el infarto del
miocardio, la falla renal aguda, el hipertiroidismo y el feocromocitoma.

Protenas sricas en la evaluacin de la funcin heptica.


Se requiere un hgado sano en pleno funcionamiento para la sntesis de las
protenas sricas, excepto las gamma globulinas. El hgado tiene la capacidad de
duplicar la produccin y salida de protenas durante las enfermedades asociadas
con prdida de protenas. En consecuencia, no debe sorprender que las
mediciones de protenas totales no se alteren, sino hasta que haya ocurrido una
disminucin extensiva de la funcin heptica.
La albmina se disminuye en la enfermedad heptica crnica y
generalmente se acompaa por un incremento en las globulinas beta y gamma,
debido a la produccin de IgG e IgM en la hepatitis crnica activa y de la IgM e IgA
en la cirrosis biliar o alcohlica respectivamente. Se debe hacer nfasis en que
estas inmunoglobulinas no son producidas en el hgado, sino por las clulas
plasmticas del sistema reticuloendotelial. Se puede facilitar la identificacin de
estas subclases de gamma globulinas mediante la inmunoelectroforesis. Sin
embargo, una disminucin en la albmina srica no es especfica para la
enfermedad heptica puesto que la albmina tambin disminuye en la
malabsorcin, la desnutricin, la enfermedad renal, el alcoholismo y las
enfermedades malignas.
La fraccin alfa1 de las globulinas sricas se disminuye en la enfermedad
heptica crnica y cuando esta fraccin est ausente, o casi, indica que una
deficiencia en la alfa1-antitripsina puede ser la causa de la enfermedad heptica.
Las protenas sricas, globulina alfa2 y beta se aumentan en la ictericia
obstructiva. Este incremento en la alfa2-globulina y la beta globulina en la ictericia
obstructiva est asociada con interferencias en el metabolismo normal de las
lipoprotenas. Por consiguiente, no se puede hacer claramente el fenotipo de un
desorden lipdico en presencia de enfermedad heptica. El uso del colesterol de
alta densidad para evaluar el riesgo de la enfermedad coronaria se obvia en los
pacientes con enfermedad heptica alcohlica, obstruccin biliar y necrosis
heptica aguda.
El hgado produce los factores de coagulacin y stos pueden disminuir
significativamente en la presencia de enfermedad heptica. El fibringeno
plasmtico est presente normalmente en una concentracin de 2 a 4 g/L. Una
disminucin en el fibringeno plasmtico indica una enfermedad heptica severa y
est asociada con concentraciones disminuidas de otros factores de coagulacin,
especialmente la protrombina. Puesto que la sntesis de la protrombina ocurre en
el hgado, y requiere de la vitamina liposoluble K, se puede incrementar el tiempo
de protrombina, en la enfermedad obstructiva biliar, la cirrosis o necrosis heptica,
la falla heptica, el sndrome de Reye, los abscesos hepticos, la deficiencia de
vitamina K y la hepatitis. Se puede diferenciar la enfermedad intraheptica
asociada con una disminucin en el factor de coagulacin, de la enfermedad
obstructiva intraheptica con una absorcin disminuida de vitamina K, observando
la respuesta del tiempo de protrombina a la administracin exgena de vitamina K.

Urea y amonaco en la evaluacin de la funcin heptica.


La concentracin sangunea de amoniaco es superior en los infantes que en
los adultos, debido a que el desarrollo de la circulacin heptica se termina
despus del nacimiento. La hiperamonemia es una entidad que resulta poco
frecuente debido a defectos congnitos en el ciclo de la urea. El error innato del
metabolismo ms comn es la deficiencia en ornitina transcarbamilasa. La
hiperalimentacin es una causa mucho ms frecuente de hiperamonemia en
infantes. Con frecuencia, se diagnostica el sndrome de Reye por un amoniaco
sanguneo elevado en ausencia de otra causa demostrable.
Los pacientes adultos muestran concentraciones elevadas de amonaco
sanguneo en las etapas terminales de la cirrosis heptica, la falla heptica, y la
necrosis del hgado aguda y subaguda. Se presagia el comienzo de la
encefalopata heptica por una elevacin en el amonaco sanguneo. Se ha
demostrado que la medicin en lquido cefalorraqudeo (LCR) de la glutamina,
correlaciona bien con el desarrollo de la encefalopata heptica. Tambin se
puede usar la medicin de la glutamina en el LCR, para diferenciar la
encefalopata heptica de la sptica. Sin embargo, no es comn la medicin de la
glutamina en el LCR. La excrecin de amonaco urinario se eleva en la acidosis y
se disminuye en la alcalosis, puesto que la formacin de sales de amonio es un
mecanismo importante para excretar el exceso de iones hidrgeno. Daos en los
tbulos renales distales, tal como ocurre en la falla renal, la glomerulonefritis, el
hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison, conllevan a una excrecin de
amonaco disminuida sin presentar cambios en los niveles sanguneos de
amonaco.
Puesto que la urea se sintetiza en el hgado, se presenta nitrgeno ureico
srico bajo, en la enfermedad heptica sin dao en la funcin renal, aunque la
relacin urea a creatinina se puede conservar normal. La elevacin en el
nitrgeno ureico srico no implica necesariamente dao renal, puesto que la
deshidratacin puede llevar a concentraciones de nitrgeno ureico tan altas como
600 mg/L, y los infantes que reciben una frmula alta en protenas pueden tener
niveles de nitrgeno ureico de 250 a 300 mg/L. Naturalmente, enfermedades
como la glomerulonefritis aguda, la nefritis crnica, el rin poliqustico y la
necrosis renal elevan el nitrgeno ureico.

5.5 FOSFATASA ALCALINA


METODO CINTICO OPTIMIZADO.

1. INTRODUCCIN
La fosfatasa alcalina se encuentra ampliamente distribuida en los del cuerpo
humano. Su fuente de importancia clnica incluye hgado, hueso, placenta,
intestino, bazo y rion. Aunque se desconoce su funcin biolgica precisa,
aparentemente participa en el transporte de membrana, ya que est unida a la
membrana celular. En el hgado, la actividad de la ALP se localiza en la membrana
celular que une el borde sinoidal de las clulas del prenquima a los canliculos
biliares. En los huesos la actividad de la ALP se localiza en la menbrana celular
que une el borde sinoidal de las clulas del parnquima a los canalculos. En los
huesos, su actividad se confina a los osteoblastos.
El aumento de actividad de fosfatasa alcalina en suero se observa en diversas
afecciones; sin embargo, su significado clnico se relaciona principalmente con la
deteccin de enfermedades seas y hepticas. La actividad de la ALP es til para
el diagnstico diferencial de enfermedades hepticas. La fosfatasa alcalina suele
elevarse ms en caso de afecciones de los conductos biliares, que en las que se
produce principalmente la lesin hepatocelular. Por lo tanto en la enfermedad
heptica colsttica u obstruccin hepatobiliar, la ALP suele incrementarse hasta
10 o 15 veces ms que los valores normales, pero en general slo se observan
leves elevaciones de 2 a 3 veces los valores normales en afecciones
hepatocelulares como hepatitis. Adems, la sntesis de esta enzima se estimula
por la colestasis.
Otras afecciones hepticas que tambin incrementan la actividad de la fosfatasa
alcalina son: la mononucleosis infecciosa, la colangiolitis, la cirrosis total,
carcinoma hepatocelular primario y carcinoma heptico metasttico secundario,
tambin incrementan la actividad de la fosfatasa alcalina.
La ALP tambin se sintetiza en las clulas osteoblsticas, en donde se produce la
formacin de hueso. Por tanto, en afecciones seas con incremento de actividad
osteoblstica, en general los niveles de fosfatasa alcalina se elevan.
En algunas afecciones que incluyen hipotiroidismo, escorbuto, hipofosfatemia,
Kwashiorkor (nio rojo), cratinismo y anemia grave, se observa reduccin de la
actividad de fosfatasa alcalina.
Es muy complicada la interpretacin de la medicin de la fosfatasa alcalina srica,
debido a que la actividad de la enzima puede aumentar en ausencia de
enfermedad heptica. Tambin se incrementa la actividad de la fosfatasa alcalina
srica durante la pubertad debido al crecimiento acelerado de los huesos y,
durante el tercer trimestre del embarazo debido a la liberacin de la fosfatasa
alcalina por la placenta

2. OBJETIVOS
 Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin
de la enzima fosfatasa alcalina ALP en una muestra biolgica
 Establecer los valores normales de referencia de la actividades de
esta enzima y comparar con el valor de nuestra muestra problema a
analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si
tenemos valores altos o bajos de estas enzimas en una muestra
biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO

Se mide la actividad de la fosfatasa alcalina con un mtodo cintico que utiliza un


tampn de 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP). En la reaccin, la fosfatasa alcalina
cataliza la hidrlisis del sustrato incoloro ster de fosfato orgnico, el p-
nitrofenilfosfato, a un producto de color amarillo (p-nitrofenol y fosfato). Esta
reaccin ocurre a un pH alcalino de 10.3.

ESQUEMA DE LA REACCIN QUMICA

ALP
p-Nitrofenilfosfato + H2O p-Nitrofenol + Fosfato
(incoloro) pH 10,3, Mg++ (amarillo)
S015176L.EPS

4. PREPARACIN

4.1MUESTRA CLNICA
Suero, plasma heparinizado.
La actividad del enzima debe ser determinada rpidamente o bien separar el suero
de los hemates.
La prdida de la actividad enzimtica es menor de un 10% entre 2 a 3 das a 15-
25C o durante 1 mes a -20C.

4.3 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 50L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla

Equipo
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 405 nm.
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tampn dietanolamina (DEA) pH 10,4 1 mmol/L
Tampn Cloruro de magnesio 0.5 mmol/L
Reactivo 2 p-nitrofenilfosfato pNPP) 10 mmol/L
Comprimidos/polvo

5. PROCEDIMIENTO
5.1TECNICA
Longitud de onda . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25/30/37C
Cubeta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Lectura . . . . . . . . . . . . . . . frente aire o agua destilada

Macro-test Semimicro-test
Reactivo al uso 3.0 mL 1.2 mL
Muestra 50 L 20 L
Mezclar y anotar la extincin. Poner en marcha el cronmetro.
Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos.
Calcular el valor medio = E/min

6. RESULTADOS

Clculo
E/min x 3300 = U/L

Linealidad
Si el E/min, es superior a 0.250 se repetir la determinacin diluyendo la muestra
a 1:10 con solucin salina 0.9%.

Lmite de Seguridad Biolgica


25C / 30C / 37C
Nios < 400 U/L < 480 U/L < 645 U/L
Adultos 60-170 U/L 73-207 U/L 98-279 U/L

Factores de conversin de temperaturas


Temp. Temperatura deseada
Reaccin 25C 30C 37C
25C 1.00 1.22 1.64
30C 0.82 1.00 1.33
37C 0.61 0.75 1.00

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.

5.6 GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA GT


MTODO CINTICO. SUSTRATO CARBOXILADO.

1. INTRODUCCIN
La GGT (o -GT) es una enzima localizada en la membrana que juega un papel
importante en el metabolismo del glutatin y en la reabsorcin de los aminocidos
del filtrado glomerular y de la luz intestinal. El glutatin (-glutamilcisteinilglicina)
en presencia de la GGT y un aminocido o pptido transfiere el glutamato al
aminocido formando un enlace pptido en el cido - carboxlico, formando, por
consiguiente, cisteinilglicina y el pptido -glutamil correspondiente.
Aunque la mayor actividad de la GGT se presenta en el tejido renal, la elevacin
de la GGT generalmente es un indicador de la enfermedad heptica. La GGT
srica se eleva antes que las otras enzimas hepticas en enfermedades como la
colecistitis aguda, la pancreatitis aguda, la necrosis heptica aguda y subaguda, y
neoplasias de sitios mltiples que cursan con metstasis hepticas. Puesto que la
GGT es una enzima microsomal heptica, la ingestin crnica de alcohol o drogas
como los barbitricos, los antidepresivos tricclicos y los anticonvulsivantes
inducen la produccin de enzimas microsomales. Estas elevaciones inducidas por
drogas preceden cualquier otro cambio en las enzimas del hgado y si se
suspende la ingestin de la droga en ese momento, los cambios del hgado son
generalmente reversibles. La GGT permite la diferenciacin de otras
enfermedades hepticas en las cuales por sus condiciones se eleva la fosfatasa
alcalina srica, puesto que los niveles de GGT son normales en la enfermedad de
Paget, el raquitismo y la osteomalacia y en los nios y mujeres embarazadas sin
enfermedad heptica. Asimismo, puesto que la prstata tiene una actividad
significativa de GGT, la actividad srica es mayor en hombres sanos que en
mujeres. La mayor utilidad de la GGT est en el diagnstico de colestasis
causadas por la ingestin crnica de alcohol o drogas, colestasis mecnicas o
virales, metstasis hepticas, desrdenes seos con elevaciones de la fosfatasa
alcalina, pero en los que la GGT es normal y desrdenes de msculo esqueltico
en los cuales la transaminasa ASAT est elevada pero la GGT est normal.

2. OBJETIVOS
 Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la
gama glutamiltrasferasa en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la enzima GGT y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de GGT en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Se mide la actividad de la -glutamil transferasa mediante un mtodo cintico
enzimtico. En la reaccin, la -glutamil transferasa cataliza la transferencia de un
grupo gamma-glutamil desde el sustrato incoloro gamma-glutamil-p-nitroanilina, al
aceptor, glicilglicina, y genera un producto coloreado, la p-nitroanilina.

ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA

-glutamil-p-nitroanilina + glicilglicina GGT -glutamil-glicilglicina + p-nitroanilina


S015223L.EPS

4. PREPARACIN

4.1 MUESTRA CLINICA


Solamente utilizar suero. No utilizar plasma.
La -GT es estable en el suero 8 horas a 15-25C, 3 das a 2-8C y un mes
congelado a -20C.

4 MATERIAL Y REACTIVOS
Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 200L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla
Equipo
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 405 nm.
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Sol. Tampn TRIS pH 8.25 100 mmol/L
Reactivo 2 Glicilglicina 100 mmol/L
Comprimidos/ L--glutamil-3-carboxi-
Polvo p-nitroanilida 3 mmol/L

La estabilidad del monoreactivo es de 21 das a 2-8C o 5 das a temperatura


ambiente.

5. PROCEDIMIENTO
5.1 TCNICA
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . .. 405 nm
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . 25/30/37C
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . ..1 cm. paso de luz.
Lectura: . . . . . . . . . . . . . . ..frente aire o agua destilada
Macro-test Semimicro-test
Reactivo al uso 2.0 mL 1.0 mL
Suero 200 L 100 L
Mezclar, esperar 1 minuto. Anotar la lectura y poner en marcha el cronmetro.
Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos.
Calcular el valor medio de los incrementos de extincin por minuto. (E/min)

6. RESULTADOS
Clculo
A 405 nm
E/min x 1190 = (U/L)

Linealidad
El mtodo es lineal hasta actividades de 250 U/L. Para valores superiores, se
diluir la muestra a 1:10 con solucin salina 0.9%.

Lmite de Seguridad Biolgica


25C 30C 37C
Mujeres 4-18 U/L 5-25 U/L 7-32 U/L
Hombres 6-28 U/L 8-38 U/L 11-50 U/L

Factores de conversin de temperaturas


Temp. Temperatura deseada
Reaccin 25C 30C 37C
25C 1.00 1.37 1.79
30C 0.73 1.00 1.30
37C 0.56 0.77 1.00
NOTAS
La hemlisis interfiere en el test.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.

5.7 ASPARTATO AMINOTRANSFERASA GOT (AST)


MTODO CINTICO U.V.

1. INTRODUCIN
Aspartato aminotransferasa y alanino aminotransferasa
Las transaminasas ASAT y ALAT catalizan la conversin de aspartato y alanina a
oxaloacetato y piruvato respectivamente. En el hgado se encuentran los niveles
ms altos de ALAT, mientras que la ASAT se encuentra presente en el corazn,
msculo esqueltico e hgado en cantidades similares. La actividad en el suero de
tanto la ASAT como la ALAT aumenta rpidamente durante el comienzo de la
ictericia viral y permanece elevada por 1 a 2 semanas. En las hepatitis txicas
tambin se elevan la ALAT y la ASAT, pero la LDH se eleva mucho ms como
resultado de la necrosis celular heptica. En los pacientes con hepatitis crnica
activa tambin se observan aumentos en la ASAT y ALAT.
La necrosis heptica aguda se acompaa por incrementos significativos en las
actividades tanto la ALAT y la ASAT. El aumento en la actividad de la ALAT es
generalmente mayor que el incremento en la actividad de la ASAT. En la cirrosis
del hgado las actividades de las transaminasas sricas generalmente no se
elevan por encima de 300 U/L, sin importar la causa de la enfermedad cirrtica.
Las elevaciones en las ALAT y ASAT sricas observadas en el sndrome de Reye,
son atribuibles directamente al dao heptico, y el incremento en la ALAT es
generalmente mayor que el incremento en la ASAT. Tambin se incrementa la
actividad de las transaminasas en la actividad neoplsica.
En el diagnstico de la enfermedad del hgado, la medicin de los niveles sricos
de ASAT y ALAT es valiosa. Sin embargo, la mejor manera de usar estos anlisis
es junto con otros anlisis de enzimas como la LDH y la creatina cinasa, y con
otras mediciones de la funcin renal y heptica como la urea sangunea, la
creatinina, el amonaco y la bilirrubina. Esto es importante cuando se establece el
diagnstico puesto que la ALAT y la ASAT estn presentes en otros tejidos
adems del hgado y la actividad srica de estas enzimas puede reflejar una
enfermedad orgnica en tejidos distintos al hgado. Las actividades sricas de la
ALAT y la ASAT se elevan en el infarto del miocardio, infarto renal, distrofia
muscular progresiva y otro gran nmero de enfermedades que solamente afectan
al hgado de una manera secundaria, como la enfermedad de Gaucher, la
enfermedad de Niemann-Pick, la mononucleosis infecciosa, la leucemia
mieloctica, la cetoacidosis diabtica y el hipertiroidismo.
2. OBJETIVOS

 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la


aspartato aminotransferasa en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la enzima AST y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de AST en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Se mide la actividad de la aspartato aminotransferasa mediante un mtodo
cintico enzimtico. En la reaccin, la aspartato aminotransferasa cataliza la
transaminacin reversible de L-aspartato y -cetoglutarato a oxaloacetato y L-
glutamato. Luego, el oxaloacetato se reduce a malato en presencia de malato
deshidrogenasa (MDH), con la oxidacin concurrente de dinucletido de
nicotinamida adenina reducida (NADH) a dinucletido de nicotinamida adenina
(NAD).

ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA

AST
L-Aspartato + -cetoglutarato Oxaloacetato + L-glutamato
MDH
Oxaloacetato + NADH + H+ Malato + NAD+
S015186L.EPS

4. PREPARACION

4.1 MUESTRA CLINICA


Suero o plasma heparinizado.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 200L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla

Equipo
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 340 nm.
centrfuga
Cronmetro

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tampn TRIS pH 7.8, 80 mmol/L
Tampn L-Aspartato 200 mmol/L
Reactivo 2 NADH 0.18 mmol/L
Comprimido LDH 800 U/L
MDH 600 U/L
-cetoglutarato 12 mmol/L

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
El monoreactivo es estable 72 horas a 18-25C 21 das a 2-8C.

5. PROCEDIMIENTO
5.1 TCNICA
Temperatura : . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25/30/37C
Longitud de onda : . 340 nm Hg334 nm Hg 365 nm
Cubeta : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz.
Lectura frente aire o agua destilada.
Macrotest Semimicrotest
Reactivo al uso 2.0 mL 1.0 mL
Muestra 200 L 100 L
Mezclar, esperar 1 minuto. Anotar la lectura y poner en marcha el cronmetro.
Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos.

Calcular el valor medio de los incrementos de extincin por minuto ( E/min)

6. RESULTADOS

6.1 Clculos
340 nm E/min x 1750= U/L
334 nm E/min x 1790= U/L
365 nm E/min x 3240= U/L

6.2 Linealidad
Si la E/min a 340 nm 334 nm es superior a 0.150 bien
a 365 nm es superior a 0.080, la muestra deber diluirse a
1:10 con solucin salina 0.9%. Deber tenerse en cuenta
esta dilucin al hacer el clculo.

Lmite de Seguridad Biolgica


25C / 30C / 37C
Hombres hasta 19 U/L 26 U/L 38 U/L
Mujeres hasta 16 U/L 22 U/L 31 U/L

Factores de conversin de temperaturas


Temp. Temperatura deseada
reaccin 25C 30C 37C
25C 1.00 1.37 2.08
30C 0.73 1.00 1.54
37C 0.48 0.65 1.00

OBSERVACIONES
La hemlisis interfiere en la determinacin .

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL Normal y Patolgico.

5.8 ALANINA AMINOTRANSFERASA (GPT) ALT


MTODO CINTICO U.V.

1. INTRODUCCIN

Los valores de alanina aminotransferasa se utilizan en el diagnstico y tratamiento


de ciertas enfermedades hepticas (p. ej., hepatitis viral y cirrosis) y cardacas.

2. OBJETIVOS
 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la
alanina aminotransferasa en una muestra biolgica
 Establecer los valores de referencia de la enzima ALT y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de alt en una muestra biolgica

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Se mide la alanina aminotransferasa con un mtodo cintico. En la reaccin, la
alanina aminotransferasa cataliza la transaminacin reversible de un grupo amino
de la L-alanina al -cetoglutarato con formacin de piruvato y L-glutamato. Luego,
el piruvato se reduce a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) con
la oxidacin concurrente de alfa-dinucletido de nicotinamida adenina reducido
(NADH) a dinucletido de nicotinamida adenina (NAD).

ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA

ALT
L-alanina + a-cetoglutarato Piruvato + L-glutamato
LDH
Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
S015177L.EPS

La oxidacin de NADH a NAD es directamente proporcional a la actividad de GPT.

4. PREPARACION

4.1 MUESTRA CLINICA


Suero o plasma heparinizado.
4.2 MATERIAL Y REACTIVO

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 200L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla

Equipo
Fotmetro termostatable a 37C con filtro de 340 nm.
Cronmetro
Centrfuga

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tampn TRIS pH 7.8, 100 mmol/L
Tampn L-Alanina 500 mmol/L
Reactivo 2 NADH 0.18 mmol/L
Comprimidos LDH 1200 U/L
-cetoglutarato 15 mmol/L

5. PROCEDIMIENTO

5.1TCNICA
Temperatura :.......................... 25/30/37C
Longitud de onda:.....................340 nm Hg334 nm. Hg 365nm
Cubeta :....................................1 cm. paso de luz.
Lectura frente aire o agua destilada.
Macrotest Semimicrotest
Reactivo al uso 2.0 mL 1.0 mL
Muestra 200 L 100 L
Mezclar, esperar 1 minuto. Anotar la lectura y poner en el cronmetro. Repetir la
lectura a 1, 2 y 3 minutos.
Calcular el valor medio de los incrementos de extincin por minuto ( E/min)

6. RESULTADOS
6.1 Clculos
340 nm E/min x 1750= U/L
334 nm E/min x 1790= U/L
365 nm E/min x 3240= U/L

6.2 Linealidad

Si la E/min a 340 nm 334 nm es superior a 0.150 bien a 365 nm es superior a


0.080, la muestra deber diluirse en proporcin de 1:10 con una solucin salina
0.9%. Deber tenerse en cuenta esta dilucin al hacer el clculo.

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


25C 30C 37C
Hombres hasta 22 U/L 29 U/L 40 U/L
Mujeres hasta 18 U/L 22 U/L 32 U/L

Factores de conversin de temperaturas


Temp. Temperatura deseada
Reaccin 25C 30C 37C
25C 1.00 1.32 1.82
30C 0.76 1.00 1.39
37C 0.55 0.72 1.00

OBSERVACIONES
La hemlisis interfiere en el test.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL Normal y Patolgico.
5.9 LACTATO DESHIDROGENASA LDH.
MTODO CINTICO U.V

1. INTRODUCCIN
Cuando solamente est implicado un rgano especfico, como el hgado, la
medicin del la LDH total puede ser til. La LDH se incrementa con las hepatitis
virales o txicas, en la obstruccin biliar extraheptica, en la necrosis aguda del
hgado y en la cirrosis del hgado. Sin embrago, en condiciones en las que
puedan estar implicadas varios rganos, la medicin del LDH total es menos til
que la medicin de las isoenzimas de la LDH. Las isoenzimas LDH5 y LDH4 son
las responsables de la actividad primaria del hgado, mientras que las isoenzimas
LDH1 y LDH2 son las responsables por la actividad predominante de la LDH en el
corazn y el rin. Puesto que los glbulos rojos tambin contienen mucha LDH1,
se debe evitar el anlisis de muestras de suero bemolizadas. En las condiciones
hepticas, la electroforesis de la LDH muestra que la elevacin en la LDH total se
debe a la liberacin de LDH4 y LDH5 al suero.
La mayor actividad de la LDH se presenta en el rin y el corazn, y la menor en
el pulmn y el suero. La LDH se localiza en el citoplasma celular y es por tanto
liberada al suero cuando las clulas se daan o necrosan.
Los valores de lactato deshidrogenasa se utilizan en el diagnstico y tratamiento
de enfermedades hepticas tales como la hepatitis viral aguda, la cirrosis y el
carcinoma heptico metastsico, tambin en enfermedades cardacas como el
infarto del miocardio, y tumores de pulmn o de rin.

2. OBJETIVOS
 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la
lactato deshidrogenasa en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la enzima LDH y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de LDH en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


El reactivo LDH se utiliza para medir la actividad de la lactato deshidrogenasa con
un mtodo cintico enzimtico. En la reaccin, la LDH cataliza la oxidacin
reversible de L-lactato a piruvato con la reduccin concurrente de dinucletido de
nicotinamida adenina (NAD) a dinucletido de nicotinamida adenina reducido
(NADH).

La deshidrogenasa lctica est presente en muchos tejidos. La LDH cataliza la


interconversin de piruvato y lactato:
ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA

LD
L-Lactato + NAD+ Piruvato + NADH + H+
S015239L.EPS

Slo para uso en diagnstico in vitro.

La oxidacin de NADH a NAD+ acompaada por una disminucin de absorbancia


a 340 nm es directamente proporcional a la actividad de LDH.

4. PREPARACION

4.1 MUESTRA CLINICA


Suero.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 50L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla
Equipo
Pipetas de 2 mL y 200 L
Fotmetro termostatable a 37C con filtro de 340 nm.
Cronmetro

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tris pH.7.5, 50 mmol/L
Tampn Piruvato 0.6 mmol/L
Reactivo 2
Comprimidos NADH 0.18 mmol/L

El reactivo de trabajo es estable 5 das a 2-8C 24 horas a temperatura


ambiente.
La muestra puede ser conservada 48 horas a 2-8 C.

5. PROCEDIMIENTO

5.1 TCNICA
Longitud de onda: . . . 340 nm o 334 365 nm
Temperatura: . . . . . . . 25/30/37C
Cubeta: . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz.
Lectura: . . . . . . . . . . . . frente aire o agua destilada

25 C /30C /37C
Reactivo al uso 3.0 mL 1.5 mL
Muestra 100 L 50 L
Mezclar y esperar 1 minuto.

Verter la mezcla en la cubeta, leer la extincin y poner en marcha el cronmetro.


Repetir la lectura a 1,2 y 3 minutos despus.

Calcular (E/min)

6. RESULTADOS
6.1 Clculo
A 25 y 30C
340 nm (E/min) x 4925 = U/L
334 nm (E/min) x 5020 = U/L
365 nm (E/min) x 9120 = U/L
A 37C
340 nm (E/min) x 9690 = U/L
334 nm (E/min) x 9880 = U/L
365 nm (E/min) x 17950 = U/L

6.2 Linealidad
Si el E/min a 340 nm es superior a 0.150 bien si a 365 nm es superior a 0.080,
repetir la prueba diluyendo la muestra a 1:10 con solucin salina 0.9%.

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


25C 30C 37C
120-240 U/L 160-320 U/L 230-460 U/L

Factores de conversin de temperaturas


Temp. Temperatura deseada
Reaccin 25C 30C 37C
25C 1.00 1.33 1.92
30C 0.75 1.00 1.43
37C 0.52 0.70 1.00

NOTAS
La hemlisis interfiere en test.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.
UNIDAD VI
FUNCIN GSTRICA, PANCREATICA E INTESTINAL

6.1 AMILASA
AMY PRUEBA CINTICA- CNPG3

1. INTRODUCCIN
El pncreas puede ser la glndula maestra del cuerpo si se consideran los
graves trastornos digestivos y metablicos que aparecen cuando se pierden sus
funciones exocrinas y endocrinas. El principal trastorno al que conduce la prdida
de la funcin endocrina es la diabetes mellitus, que cuenta con mayor morbilidad y
mortalidad que todas las otras enfermedades pancreticas juntas. Las pruebas de
laboratorio importantes a este respecto, son la determinacin de glucosa en
sangre, fructosamina y hemoglobina A1c con objeto de conocer el control
glucmico a corto y largo plazo. La prdida de la funcin exocrina es comn en la
fibrosis qustica y en algunos sujetos con ataques repetidos de pancreatitis
generalmente causados por el abuso crnico del alcohol. El pncreas tiene una
gran reserva y la prdida de la funcin produce sntomas slo despus de que
85% de las clulas acinares se ha perdido. Existen algunas pruebas de funcin
pancretica que junto con la de grasa en materia fecal son las ms importantes.
Las pruebas en suero, como la tripsina inmunorreactiva, son las menos sensibles
y menos especficas a pesar de ser las ms fciles de realizar.
La pancreatitis aguda es una de las principales emergencias mdicas; el
alcoholismo y las enfermedades del tracto biliar son las causas predominantes,
aunque slo tenemos algunas evidencias conjeturales de cmo se inicia una
pancreatitis. Los cambios observados en las enzimas pancreticas como amilasa
y lipasa pueden ser de moderados a intensos, desafortunadamente slo es posible
obtener una estimacin gruesa de la gravedad del padecimiento con los estudios
de laboratorio. La pancreatitis crnica generalmente es la secuela de mltiples
brotes de la enfermedad aguda y los resultados de laboratorio normalmente no
son muy tiles para el diagnstico. El adenocarcinoma de pncreas, la forma
comn de la enfermedad maligna, es funesta para casi todos los pacientes debido
a la naturaleza invasiva del cncer y su progresin rpida y silenciosa. No existen
pruebas adecuadas de escrutinio para el cncer pancretico y la muerte se
presenta tpicamente de seis meses a un ao del diagnstico. Las neoplasias de
los islotes de Langerhans son un reto bioqumico para su diagnstico. Excepto los
gastrinomas que producen el sndrome de Zollinger-Ellison, la mayora de estos
tumores no son malignos pero pueden poner en peligro la vida debido a la
liberacin no controlada de factores endocrinos y la estimulacin a sus rganos
blancos. Para establecer el diagnstico se requiere realizar pruebas que
determinen las hormonas normalmente producidas en las clulas del islote de
Langerhans y otros factores.
La amilasa alfa (AMS) es una metaloenzima que requiere calcio y pertenece a la
clase de hidrolasas. La reaccin enzimtica que cataliza la amilasa alfa es la
hidrlisis aleatoria de enlaces glicosdicos alfa-1,4 internos del almidn, glucgeno
y otros polmeros de la glucosa. Los productos de digestin de la amilasa, que es
una mlecula de almidn lineal que contiene slo enlaces alfa 1,4, son maltosa,
maltotrinosa y otras dextrinas.
Las principales fuentes tisulares de esta enzima son las glndulas salivales y las
clulas acinares del pncreas. La actividad de amilasa alfa no es especfica para
estos tejidos, ya que tambin se encuentra en el epitelio intestinal, trompas de
Falopio, mucosa del cuello uterino, endometrio y tejido del seno durante la
lactancia. La principal funcin de la amilasa alfa se debe a la fraccin pancretica,
que ayuda a la digestin del almidn, glucgeno y sus productos de
descomposicin en el intestino delgado. La AMS de la saliva inicia la digestin de
almidn en la cavidad oral, pero su accin termina con rapidez a consecuencia del
pH cido del jugo gstrico durante la deglucin.
Durante aos los niveles de -amilasa en suero nos han evidenciado la necesidad
de su determinacin para el diagnstico de pancreatitis aguda. Las primeras
tcnicas estaban basadas en los cambios de la absorcin mxima del complejo
entre el almidn y el yodo, ya que la -amilasa degrada al almidn. Otros mtodos
estn basados en la produccin de p-nitrofenol a partir de sustratos oligosacridos
especficos con grupos bloqueantes en el azcar terminal. Estos mtodos utilizan
una variedad de enzimas para hidrolizar la corta cadena de oligosacridos para
producir p-nitrofenol.
Estas enzimas contienen una actividad residual de -amilasa que reducen
significativamente la estabilidad del reactivo. El mtodo que presentamos no utiliza
enzimas, evitando as este problema de estabilidad.
Se han desarrollado ensayos de apareamiento enzimtico que permiten
condiciones de hidrlisis ms controladas y congruentes, y que tambin pueden
adaptarse a instrumentos automatizados.

2. OBJETIVOS
 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la
amilasa en una muestra biolgica
 Establecer los valores de referencia de la enzima AMY y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de AMY en una muestra biolgica.

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


Se mide la actividad de la amilasa con un mtodo cintico enzimtico. En la
reaccin, la amilasa cataliza la hidrlisis del sustrato definido (maltotetraosa) a
maltosa. La velocidad de formacin de maltosa se mide mediante el uso de tres
reacciones relacionadas que catalizadas por la maltosa fosforilasa (MP), la
-fosfoglucomutasa (PGM), y la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH), dan
como resultado la produccin de -dinucletido de nicotinamida adenina reducido
(NADH) a partir de -dinucletido de nicotinamida adenina (NAD).

ESQUEMA DE LA REACCIN QUMICA

Amilasa
Maltotetraosa + H2O 2 maltosa
MP
Maltosa + fosfato glucosa + glucosa-1-fosfato
PGM
Glucosa-1-fosfato glucosa-6-fosfato
G6PDH
Glucosa-6-fosfato + NAD+ 6-fosfogluconato + NADH + H+
S015182L.EPS

La cantidad de CNP formado puede ser detectado espectrofotomtricamente a


405 nm dando una medida directa de la actividad de la -amilasa de la muestra.
La reaccin no est inhibida por factores endgenos.

4. PREPARACION
4.1 MUESTRAS CLINICAS
Suero, plasma heparinizado u orina. Otros anticoagulantes como el citrato o EDTA
no son recomendables. Una vez efectuada la extraccin, centrifugar y separar el
suero lo antes posible. La -amilasa es estable en la muestra durante una semana
a temperatura ambiente (20-25C) y varios meses cua ndo la muestra se guarda
bien tapada y refrigerada a 2-8C.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipeta de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 20L.
1 Micropipeta de 200 L
Puntas para micropipeta.
Gradilla
Pipeta de 2 mL
Equipo
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 405 nm.
Cronmetro

COMPOSICIN DEL REACTIVO


MES tampn pH 6.0, 100 mmol/L
2-Cl-4-Nitrofenil--D-maltotriosido (CNPG3) 2.25 mmol/L
Cloruro de sodio 350 mmol/L
Acetato de calcio 6 mmol/L
Tiocianato de potasio 900 mmol/L
Azida de Sodio 0.095%

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
El reactivo est listo para su utilizacin.
Si el frasco no se ha abierto y se ha guardado a 2-8 C, el reactivo ser estable
hasta la fecha de caducidad. Una vez abierto el reactivo ser estable 60 das
siempre y cuando se tape inmediatamente despus de su uso diario y se guarde a
2-8C.

5. PROCEDIMIENTO

5.1 TECNICA
Longitud de onda . . . . . . . . . 405 nm
Temperatura . . . . . . . . . . . ..37C
Cubeta . . . . . . . 1 cm de paso de luz
Cero frente a agua destilada

Reactivo 1.0 mL
Muestra o control 20 L
Orina 10 L

Mezclar y leer.

Medir el incremento de la absortividad por minuto durante 1, 2 y 3 minutos A/min

6. RESULTADOS

6.1 CALCULO
Calcular la actividad de la -amilasa de la muestra usando el siguiente factor:
Suero, plasma
Actividad (U/L)= A/min x 3954
Orina
Actividad (U/L)= A/min x 7908
Unidades SI: U/L X 0.01667= kat/L

6.2 LINEALIDAD
Este mtodo es lineal hasta 2000 U/L. Si la muestra es superior, debe diluirse la
muestra con solucin salina 1:2 y repetir el ensayo, multiplicando el resultado por
2.

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


Suero, plasma < 90 U/L
Orina <450 U/L
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de
referencia dependiendo de la localizacin.

.
NOTAS:
Debido al contenido en -amilasa de la saliva y el sudor, para reducir la posibilidad
de contaminacin, no pipetear el reactivo con la boca, ni tener en contacto la
muestra y el reactivo con la piel. No se deben procesar muestras hemolizadas.
Contiene tiocianato de potasio. Evitar su inhalacin o contacto del reactivo con la
piel y los ojos. Si ocurre lavar la piel y los ojos con abundante agua y consultar al
mdico.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.

6.2 LIPASA

1. INTRODUCCIN

La lipasa (LPS) es una enzima que pertenece a las hidrolasas, hidroliza los
steres de glicerol de triglicridos de cidos grasos de cadena larga. La lipasa
hidroliza preferencialmente los enlaces estricos de los carbonos 1 y 3 de la
molcula de triglicridos y produce dos molculas de cido graso y una molcula
de 2-monoglicrido.
Se observa actividad de lipasa en pncreas mucosa intestinal, estmago,
leucocitos y tejido adiposo. Sin embargo, slo la lipasa pancratica tiene
significado clnico; su principal funcin consiste en hidrolizar los triglicridos de la
dieta que han sido emulsificados por cidos biliares y ayudan as a la absorcin de
grasas en el intestino delgado.
Como la lipasa se produce principalmente las clulas acinares del pncreas, su
utilidad clnica se relaciona casi de manera exclusiva con el diagnstico de
laboratorio de pancreatitis aguda. Otras afecciones en las cuales se incrementa la
actividad de lipasa incluyen intoxicacin aguda con alcohol y traumatismos
accidentales o quirrgicos del abdomen.

2. OBJETIVOS
 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la lipasa
en una muestra biolgica.
 Establecer los valores de referencia de la enzima LPS y comparar con el
valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si tenemos
valores altos o bajos de LPS en una muestra biolgica

3. FUNDAMENTO DEL MTODO


La lipasa pancretica en presencia de colipasa, desoxicolato, adems de iones
calcio, hidroliza el sustrato 1-2-O-dilauryl-rac-glycerol-3-glutrico acido-(6' -
metilresorufina)-ester, segn la secuencia de las siguientes reacciones:
1-2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutrico cido-(6' -metilresorufina)-ester
>1-2-O-dilauril-rac-glycerol + glutricoacido-6'-metilresorufina
ester (no estable) > cido glutrico + Metilresorufina

4. PREPARACION

4.1 MUESTRA CLINICA


Suero fresco no hemolizado o plasma.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS

Material necesario
5 tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 Micropipeta de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10L.
Puntas para micropipeta.
Gradilla
Equipo:
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 580 nm.
Cronmetro

CONTENIDO DEL EQUIPO


Reactivo 1 Tampn TRIS pH: 8.4, 40 mmol/L
Colipasa 40 000 U/L
Desoxicolato 1.8 mmol/L

Estabilizante
Reactivo 2 Tartrato pH: 4.0, 1.6 mmol/L
Sustrato 0.24 mmol/L
Cloruro de calcio 0.1 mmol/L
Detergente
Estndar Lipasa

PREPARACIN Y ESTABILIDAD
R.1 y R.2, ambos reactivos estn listos para su uso. Agitar suavemente el R.2
antes de su uso. Estndar: reconstituir el vial con 1 mL de agua bidestilada.
La estabilidad es de 10 das a 2-8 C 3 meses congelado a -20C. Se
recomienda congelar alcuotas.
5. PROCEDIMIENTO

5.1 TECNICA
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . 580 nm
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . 37C
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz

Blanco Estndar Muestra


Agua destilada 10 L
Estndar 10 L
Muestra 10 L
R.1 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
R.2 100 L 100 L 100 L

Mezclar e incubar 1 minuto a 37C.


Efectuar una lectura inicial al primer minuto y repetir lecturas despus de 1 y los 2
minutos siguientes.
Calcular el incremento de extincin (E/min) del blanco, estndar y muestra.

6. RESULTADOS

6.1 Clculo
Restar a las lecturas (E/min) efectuadas del estndar y muestras, el incremento
del blanco (E/min).
E/min muestra x actividad estndar = U/L Lipasa
E/min estndar

6.2 Linealidad
El mtodo es lineal hasta actividades de: 250 U/L

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


U/L metilresorufin a 37C : < 30 U/L

NOTAS:
La actividad de la lipasa en U/L metilresorufin a 37C, puede ser convertida en U/L
turbidimtrico a 37C con triolena como sustrato, multiplicando el resultado por
6.2.
A fin de evitar contaminaciones se recomienda no utilizar las cubetas y utensilios
que se hayan usado para la determinacin de triglicridos.

CONTROL DE CALIDAD
SPINTROL. Normal y patolgico.
UNIDAD VII
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO CARDIOVASCULAR

1. INTRODUCCIN
El metabolismo altamente anaerbico del corazn le permite usar como
combustible muchos substratos normalmente presentes en el plasma, y la
absorcin cardaca de la mayora de estos substratos es proporcional a su
concentracin arterial una vez que ciertos niveles son excedidos. En trminos
generales, el corazn usa los cidos grasos libres como su combustible
predominante. Tambin consume importantes cantidades de glucosa y lactato, as
como cantidades ms pequeas de piruvato, cuerpos cetnicos y aminocidos.
La mayor parte de la energa para la funcin cardaca se obtiene de la
descomposicin de metabolitos a travs del ciclo del cido ctrico y la fosforilacin
oxidativa. Estas vas enzimticas se encuentran principalmente en las
mitocondrias, representando aproximadamente un 35% del volumen total del
msculo cardaco.

Enzimas en las clulas miocardiacas


Varias enzimas encontradas en el tejido miocrdico son clnicamente importantes
debido a que su liberacin en el torrente sanguneo puede estar relacionada con el
dao y la muerte de las clulas miocrdicas.

Creatina cinasa
La enzima responsable de la regeneracin del ATP es la creatina cinasa.Tiene un
peso molecular de 85,000 daltones y existe en diversas formas isoenzimticas. La
creatina cinasa (CC) es un dmero, compuesto de las dos subunidades M
(msculo) y B (cerebro). Las tres isoenzimas formadas a partir de estas
subunidades se encuentran en el citosol. Estas isoenzimas se abrevian como
MM, MB, y BB. Si comparamos la actividad de la enzima en varios tejidos, el
msculo esqueltico tiene por mucho la mayor actividad, poseyendo unas 50,000
veces la concentracin de la CC srica. La isoenzima esqueltica predominante
es la isoenzima MM, con slo trazas de las isoenzimas MB y BB en la mayora de
las fibras musculares. El componente MB, sin embargo, est incrementado en
ciertos trastornos musculares, particularmente en la distrofia muscular tipo
Duchenne y en la polimiositis. La actividad de CC del msculo esqueltico medida
en unidades internacionales es aproximadamente de 2000 U/g, comparada con la
actividad del msculo cardaco de 500 U/g. En suero normal, por lo menos el 95%
de la CC presente es del tipo MM que probablemente se deba principalmente a
fugas del msculo esqueltico, particularmente durante la actividad fsica. Debido
a esto, la actividad de la CC srica en personas activas saludables muestra una
distribucin asimtrica inclinada hacia valores ms altos. Adems, los valores son
ms bajos en las mujeres que en los hombres y son ms bajos en la maana que
en la noche. Los valores tienden a ser ms bajos en pacientes hospitalizados,
posiblemente debido a que el reposo en cama reduce la cantidad de enzimas
liberadas del msculo.

Isoformas de CC
Las isoenzimas CC-MM y CC-MB en suero pueden ser fraccionadas en subtipos o
isoformas mediante tcnicas de alta resolucin, tales como electroforesis de alto
voltaje o enfoque isoelctrico. Las isoformas de CC-MM y CC-MB se forman en la
sangre mediante la ruptura enzimtica irreversible del aminocido del COOH
terminal, un residuo de lisina, de la subunidad M o de las subunidades de las
isoenzimas del tejido. Para la CC-MM, esta ruptura involucra la remocin sucesiva
de los residuos terminales de lisina de cada subunidad M, dando lugar a tres
isoformas llamadas MM3 (forma tisular, o Mlisina Mlisina), MM2 (o MlisinaM), y
MM1 (o MM). La CC-MB, que tiene una sola subunidad M, consiste de dos
isoformas en la circulacin, la llamada MB2 (forma de tejido, o MlisinaB), y MB1 (o
MB). Es de notar que la secuencia amino terminal de la subunidad B de la CC es
similar al de la subunidad M, sin embargo, la ruptura de la lisina terminal de la
subunidad B de la CC-MB permanece controversial.

Lactato deshidrogenasa
La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima tisular ubicua que cataliza la
reduccin de piruvato a lactato usando nicotinamida adenina dinucletido (NAD).
La LDH de un peso molecular de aproximadamente 140,000 daltones y es un
tetrmero compuesto de cuatro subunidades con peso molecular de 35,000
daltones cada una. Las subunidades, que son de dos tipos, H (corazn) y M
(msculo), se combinan para formar las cinco isoenzimas de LDH. La principal
isoenzima (HHHH) tiene una actividad mxima en presencia de bajas
concentraciones de piruvato, pero se inhibe por exceso de piruvato. Por contraste,
la principal isoenzima muscular (MMMM) exhibe actividad mxima en presencia de
una mayor concentracin de piruvato y se inhibe menos por exceso de piruvato.
El corazn metaboliza los cidos grasos y los carbohidratos a una velocidad
aproximadamente constante con oxidacin completa del piruvato a travs del ciclo
de Krebs del cido ctrico. Por lo tanto, el corazn tiene una baja concentracin
tisular de piruvato y lactato y rpidamente convierte el lactato del plasma en
piruvato. Por contraste, el msculo, con rpidas demandas de incrementos de
energa durante el ejercicio, tiene que contender con rpidos incrementos en
piruvato y lactato de tejido causados por el metabolismo anaerbico.

La LDH se encuentra en el citosol de todas las clulas humanas y por lo tanto


tendra poca especificidad para el diagnstico a no ser por el hecho de que las
isoenzimas estn presentes en diferentes proporciones en cada tejido. El corazn
y los eritrocitos contienen principalmente LDH1 y LDH2, mientras que el msculo
esqueltico y el hgado contienen LDH5 y en menor grado LDH4. El suero normal
contiene principalmente LDH2, con menores cantidades de LDH1 y de las otras
isoenzimas. Si las enzimas son liberadas del tejido cardaco al suero, a menudo
vemos un cambio en la proporcin de LDH1 a LDH2. La vida media de la LDH es
diferente para cada isoenzima; la isoenzima 1 (HHHH), tiene una vida media de
aproximadamente 100 horas, mientras que la isoenzima 5 (MMMM) tiene una vida
media de slo 10 horas. La importancia de esto es evidente en la discusin de la
liberacin de las enzimas durante el infarto al miocardio.

Aspartato aminotransferasa
La aspartato aminotransferasa (ASAT) cataliza la transferencia de un grupo amino
entre el cido asprtico y el piruvato para formar oxaloacetato (alfa cetoglutarato) y
alanina. Esta enzima ubicua es esencial en el metabolismo intermedio y permite
que los aminocidos cido asprtico y cido glutmico se degraden en el ciclo de
Krebs. La enzima existe en dos formas estructuralmente diferentes; una se
encuentra principalmente en el citoplasma y la otra en las mitocondrias. La forma
citoslica es la que se encuentra en el suero. Su vida media en el suero es
probablemente de alrededor de 20 horas. El hgado tiene la mayor actividad
enzimtica, con aproximadamente 85 U/g de tejido, mientras que el corazn posee
75 U/g y el msculo esqueltico cerca de 50 U/g.

Protenas contrctiles
Los marcadores bioqumicos ms comnmente usados para lesin del miocardio
estn involucrados con el metabolismo de las clulas, son solubles y estn
localizados en el compartimento citoslico de las clulas. Debido a estas
propiedades, una gran proporcin de estos marcadores citoslicos son liberados
rpidamente en la circulacin despus de una lesin celular. Por contraste, la
naturaleza y funcin de las protenas estructurales determina que sean solubles;
por consiguiente una proporcin relativamente pequea est libre en el citosol y
disponible para su rpida liberacin poco despus de una lesin celular. A esta
pequea proporcin disponible para liberacin se le denomina el reservorio
citoslico.
A pesar de la desventaja terica de su insolubilidad, se ha generado bastante
inters en las siguientes protenas estructurales: troponina I, troponina T, y las
cadenas ligeras de miosina. La base de este inters clnico surge de la
identificacin y purificacin de formas cardacas de estas protenas con alta
especificidad tisular, que se discuten adelante con mayor detalle, han permitido el
desarrollo de ensayos inmunolgicos para la determinacin de lesiones
miocrdicas.

Miosina, actina y troponina


Las protenas miosina y actina forman la mayor parte del aparato contrctil de las
clulas musculares. Juntas constituyen el 80% de la protena de las clulas
musculares. Las protenas reguladoras troponina y tropomiosina, en asociacin
con la actina polimerizada, forma los filamentos delgados del sarcmero. La
troponina consiste de un complejo de tres subunidades: troponina C, troponina I, y
troponina T.

Troponina T (TnT)
La protena troponina T, de 37 kilodaltones, tiene un reservorio citoslico que
constituye cerca del 6% de su concentracin intracelular total. A pesar de
encontrarse tanto en el tejido esqueltico como en el corazn, la TnT est siendo
usada exitosamente como un marcador para la enfermedad cardaca isqumica
debido a que un subtipo encontrado en el tejido miocrdico tiene una homologa
de solamente 60% con la forma del msculo esqueltico. Se han desarrollado
anticuerpos altamente especficos que discriminan entre los subtipos de los
msculos cardacos y esquelticos.

Troponina I (TnI)
Al igual que la TnT, la TnI es parte integrante del aparato contrctil estructural
tanto del msculo esqueltico como del miocrdico. Se cree que el reservorio
citoslico de TnI es el mismo que el de TnT, esto es, cerca del 6% de la
concentracin total de TnI de las clulas. La TnI, con un peso molecular de 21
kilodaltones, es ligeramente ms pequea que la TnT. El subtipo cardaco de la
TnI tiene varias regiones de aminocidos que difieren substancialmente de la
forma del msculo esqueltico. Estas regiones sirven como base para los
inmunoensayos cardacos especficos.

Cadenas ligeras de Miosina (CLMs)


La miosina es una molcula de filamentos largos (540 kD) compuesta por seis
cadenas de pptidos, dos de las cuales son pesadas (230 kD) y cuatro son ligeras
(CLMs), con pesos moleculares en el rango de 26 kD. Las CLMs estn formadas
por dos componentes, la cadena ligera de miosina-1 y la cadena ligera de miosina-
2, que juntas constituyen el filamento grueso del aparato contrctil en el msculo
esqueltico y miocrdico. Las CLMs de fuentes cardacas y no cardacas pueden
ser diferenciadas usando anticuerpos especficos para CLMs cardacas. Debe
notarse que el reservorio citoslico para las CLMs es de 0.5% de la cantidad total
de clulas, y solamente cerca del 10% del reservorio citoslico para TnT o TnI.

7.1Creatin-kinas
Creatincinasa
Mtodo cintico UV. NAC activado

1. INTRODUCCIN

Se encuentra ms abundancia de CK en el msculo esqueltico. Las otras fuentes


en que se encuentra, por orden de mayor a menor actividad, son: cerebro, recto,
estmago, vejiga, colon, tero, prstata, intestino delgado y rin. Se detectan
cantidades despreciables en hgado, placenta y tejido tiroideo.
La CK se eleva principalmente cuando hay afecciones o enfermedades que
afectan el tejido msculo esqueltico, el miocardio o el cerebro. Se observan
notables incrementos de CK total en infarto agudo al miocardio, en afecciones del
msculo esqueltico y despus de un choque o colapso circulatorio. En general la
CK se eleva en infarto agudo al miocardio y es de gran utilidad clnica para
detectarlo. La CK total comienza a incrementarse despus de 15 horas de ocurrir
un infarto agudo al miocardio. La actividad mxima se observa a las 24 horas y
regresa a la normalidad a los 3 das. La miocarditis tambin provoca actividad
notablemente alta de CK durante la fase inflamatoria de la afeccin.
La CK se eleva adems en diversas enfermedades o lesiones del msculo
esqueletico.
Los valores de creatincinasa y sus isoenzimas se utilizan en el diagnstico y
tratamiento de los infartos de miocardio y de miopatas como la distrofia muscular
progresiva tipo Duchenne.
La creatincinasa (CK) es una enzima del citoplasma y la mitocondria que cataliza
tanto la formacin de ATP como la fosforilacin reversible de creatinina, con el
ATP como grupo donador de fosfato. La CK requiere activadores metlicos,
particularmente Mg2+ , para que la enzima alcance toda su actividad cataltica.

CK
Creatinina + ATP Fosfato de creatinina + ADP

La actividad de CK es de particular importancia en el tejido muscular, en donde


cataliza la sntesis de fosfato de creatinina, una molcula que almacena enlaces
de alta energa. Para efectuar una contraccin muscular se utiliza el grupo fosfato
para formar ATP a fin de proporcionar de inmediato energa a los msculos.
Hay diversos mtodos analticos para determinar la actividad de CK ya sea
mediante la reaccin hacia la derecha (creatinina fosfato de creatinina) o la
reaccin inversa. Estos mtodos son anlisis de punto final o cinticos, en los que
se emplean tcnicas de espectrofotometra, fluorescencia o bioluminiscencia. El
mtodo de referencia para el anlisis de CK es el de Oliver y Rosalki, un anlisis
cintico en el que se emplea la secuencia de reaccin inversa.

CK
Fosfato de creatinina + ADP Creatinina + ATP

HK
ATP + glucosa Glucosa-6-fosfato + ADP

G-6-PDH
+
Glucosa-6-fosfato + NADP 6-fosfatogluconato + NADPH + H+

En donde HK = hexocinasa y G-6-PDH = deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato.

2. OBJETIVOS
 Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la
Creatin cinasa
 Establecer los valores de referencia de la enzima CK y comparar con
el valor de nuestra muestra problema a analizar.
 Definir cuales son las principales patologas que se presentan si
tenemos valores altos o bajos de CK.

3. FUNDAMENTO DE LA METODOLOGA
Se mide la actividad de la creatincinasa mediante un mtodo cintico
1,2,3,4
enzimtico. En la reaccin, la creatincinasa cataliza la transferencia de un
grupo fosfato del sustrato fosfato de creatina al difosfato de adenosina (ADP). La
subsiguiente formacin de trifosfato de adenosina (ATP) se mide mediante el uso
de dos reacciones asociadas, catalizadas por la hexocinasa (HK) y la glucosa-6-
fosfato deshidrogenasa (G6PDH), lo que produce dinucletido de nicotinamida
adenina reducida (NADH) a partir del dinucletido de nicotinamida adenina (NAD).
El ensayo (CK) contiene el activador monotioglicerol.

ESQUEMA DE LA REACCIN QUMICA

CK
Fosfato de creatina + ADP Creatina + ATP
HK
ATP + glucosa Glucosa-6-fosfato + ADP
G6PDH
Glucosa-6-fosfato + NAD+ 6-Fosfogluconato + NAD+ + H+
S015197L.EPS

4. PREPARACIN
4.1 MUESTRA CLINICA
Suero, plasma heparinizado con EDTA.

4.2 MATERIAL Y REACTIVOS


Material necesario
Pipetas de 2 mL y 200 L
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 340 nm.
Cronmetro

CONTENIDO DEL EQUIPO

Reactivo 1 Imidazol pH 6.7, 100 mmol/L


Tampn Glucosa 20 mmol/L
Acetato Magnesio 10 mmol/L
EDTA 2 mmol/L

Reactivo 2 ADP 2 mmol/L


Comprimidos AMP 5 mmol/L
Diadenosin-5-P 10 mmol/L
NADP+ 2 mmol/L
Hexoquinasa (HK) 2500 U/L
G-6-PDH 1500 U/L
N-acetilcisteina 20 mmol/L
Creatin-fosfato 30 mmol/L

La estabilidad del monoreactivo es de 5 das a 2-8C 24 horas a temperatura


ambiente.

La actividad de la CK en suero disminuye un 10% al cabo de


un da a 2-6C 1 hora a 15-25C.

5. PROCEDIMIENTO
5.1 TECNICA
Longitud de onda . . . . . . 340 nm ,334 nm, 365 nm
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25/30/37C
Cubeta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Lectura . . . . . . . . . . . . . . frente aire o agua dest.

25-30C 37C
Reactivo al uso 2.5 mL 2.5 mL
Muestra 100 L 50 L
Mezclar e incubar 2 minutos.

Verter la solucin a la cubeta, leer la extincin y poner en marcha el cronmetro.


Repetir la lectura a 1,2 y 3 minutos. Calcular E/min.

6. RESULTADOS
6.1 Clculo
A 25/30C
340 nm E/min x 4127 = U/L
334 nm E/min x 4207 = U/L
365 nm E/min x 7429 = U/L

A 37C
340 nm E/min x 8095 = U/L
334 nm E/min x 8260 = U/L
365 nm E/min x 14751 = U/L

6.2 Linealidad
A 334 nm y 340 nm hasta E/min de 0.250
A 365 nm hasta E/min de 0.140
Para valores superiores, se diluir la muestra a 1:10 con solucin salina 0.9%

6.3 Lmite de Seguridad Biolgica


25C 30C 37C
Hombres 10-80 U/L 15-130 U/L 24-195 U/L
Mujeres 10-70 U/L 15-110 U/L 24-170 U/L

Factores de conversin de temperaturas


Temp. Temperatura deseada
Reaccin 25C 30C 37C
25C 1.00 1.56 2.44
30C 0.64 1.00 1.56
37C 0.41 0.63 1.00

NOTAS
La hemlisis interfiere en la prueba a concentraciones superiores a 200
mg/dL de hemoglobina.
UNIDAD VIII
EQUIPO AUTOMATIZADO UTILIZADO EN QUMICA CLNICA

1.0 INTRODUCCIN

El trmino automatizacin se refiere a la tcnica, mtodo o sistema para hacer


funcionar o controlar un proceso mecnico o productivo por medios automticos
como dispositivos electrnicos. Cuando se aplica a la qumica clnica, la palabra
automatizacin se refiere a un mtodo mecnico para llevar a cabo procesos
analticos. La mayora de los instrumentos analticos automticos se disean para
efectuar los pasos repetitivos en la determinacin de diversas concentraciones de
analitos o sustancias problema en muestras de pacientes, principalmente suero,
con un mnimo de intervencin del operador. Existe gran cantidad de instrumentos
automatizados y cada uno de ellos tiene algo que ofrecer para mejorar el
funcionamiento del laboratorio, por lo que es necesario valorar con exactitud las
necesidades especficas del laboratorio y sus objetivos.
Cada sistema automatizado incluye diversos pasos, que reflejan los que se llevan
a cabo en el anlisis manual.

Necesidad de informacin del mdico

Paciente

Laboratorio

Obtencin de la muestra

Preparacin de la muestra

Preparacin del reactivo Identificacin de muestra

Transporte del reactivo (R) R+M Muestreo (M)


Reaccin
Medicin

Datos
Tipos de errores
Confusin de muestras:
Muestras etiquetadas en el rea administrativa con nmeros de entrada
equivocados.
Sueros transferidos a tubos mal marcados en el rea de preparacin de muestra.
Cuando una muestra se sac de la rueda de muestras del autoanalizador, y al
introducir una muestra de urgencia se anota un nmero incorrecto de la copa y se
asignan valores falsos a todas las muestras en la rueda.
Intercambio de tubos analticos durante la toma de muestra con pipeta, o
colocacin errnea de pipetas en los soportes de las mismas de las cuatro
posiciones del espectrofotmetro.

Fallas tcnicas de los aparatos


Lecturas de cuadros incorrectas:
Lecturas incorrectas de los mximos del autoanalizador
Lecturas incorrectas de la curva estndar
Lectura de la curva estndar asignada a una muestra equivocada
Lecturas de la curva estndar equivocada

Dilucin y errores de clculo:


Olvidos de los analistas para corregir los resultados en la dilucin.
Muestras diluidas por el analista de primer turno y analizadas por un analista del
segundo turno, que no fue informado de la dilucin anterior.

Reactivo y solucin estndar:


Agua destilada en lugar de amortiguadora, para preparar un reactivo.
Medidor de un pH estandarizado con amortiguador equivocado.
Reactivo contaminado.
Uso de sustrato o solucin estndar caducado.
Problemas por instrumentos:
Reloj lento para una reaccin medida.
Registrador no calentado adecuadamente; lectura blanco inestable.
Utilizacin de balanzas descalibradas para pesar cualquier sustancia, estndares.

Otros:
Muestras dejadas a temperatura ambiente.
El analista del primer turno deja muestras para ser analizada por el analista del
segundo turno y este ltimo no se presenta a trabajar. El anlisis de la muestra
queda pendiente para el siguiente da, lo que por otra parte dependiendo de la
muestra obligar a tomar la decisin de realizar o no el anlisis.
La exposicin prolongada de la luz de la habitacin puede destruir constituyentes
como la bilirrubina.
2.0 OBJETIVOS
 Qu el alumno maneje correctamente el equipo automatizado y realice las
determinaciones correspondientes a la asignatura de anlisis clnicos
(dependiendo de los reactivos en stock).
 Que el alumno lleve a cabo las cartas de control de calidad y las interprete.

3.0 FUNDAMENTO

Los equipos por su moderna tecnologa se ajustan adecuadamente a las


necesidades: flexibilidad, seguridad y economa. Asimismo, las caractersticas y
diseo hacen de los autoanalizadores adaptables a mltiples usos. Pueden
utilizarse como auto-analizadores principales en la Qumica Clnica diaria o bien
como analizadores de inmunoprotenas y en el anlisis de drogas.

Los autoanalizadores en general, integran un diseo ptimo superior de gran


precisin junto con un bajo mantenimiento y un volumen inferior de reactivos.

Qumica Clnica.
Protenas especiales.
Drogas de abuso.
Monitorizacin de drogas teraputicas
Electrlitos.
180 tests/hora.
300 tests con mdulo ISE.
Autonoma de 4.5 horas.
Incorporacin de sensores de nivel
Random acces.
Carga continua.
Test de incompatibilidad.
Identificacin por cdigos de barras.

Sencillez: mayor facilidad de manejo gracias al nuevo sistema de software


integrado basado en el sistema Windows.

Instrucciones de mantenimiento integradas en el software.

Aprendizaje fcil y rpido.

Control de calidad: los resultados del control de calidad se almacenan en la


memoria y pueden visualizarse fcilmente en la pantalla.

El software efecta el clculo de la desviacin principal y el coeficiente de


variacin.

Validacin de los resultados mediante sistema Westgard.

Integracin: Se integra perfectamente en su laboratorio.

La conexin bidireccional al servidor permite recibir instrucciones y transmitir


resultados al sistema principal.

CARACTERSTICAS TCNICAS

Dependiendo de la marca y modelo los autoanalizadores cuentan con:

SISTEMA DE REACTIVOS

Rotor con 24 posiciones para contenedores de 25 L y 8 posiciones para


contenedores de 5 L. Todas las posiciones pueden ser asignadas como
R1 o R2. Se incluyen adaptadores para los contenedores de 5 L en las
posiciones de 25 L.
5 pares de posiciones para 25 L pueden usarse con contenedores de 50
L.
Volumen de reactivo 1 entre 110 y 400 L.
Volumen de reactivo 2 entre 0 y 180 L.
Rotor de reactivos refrigerado aprox.12 por debajo de la temperatura
ambiente.
Cnula de reactivos atemperada con sensor de nivel y agitador integrados.
Consumo medio de reactivo por test: 250 L.
SISTEMA DE MUESTRAS

Rotor de muestras que contiene en el segmento exterior 51 posiciones para


muestras y/o calibradores y 24 posiciones interiores para: 3 urgencias, 1
blanco, 9 calibraciones, 5 muestras peditricas, 4 controles, 1 solucin
lavado y 1 activador ISE.
Carga continua.
Todas las posiciones pueden contener tubos primarios de 5 L o copas de
muestra.
Disponibles rotores especiales (opcional) para tubos KADE y SARSTEDT.
Volumen de muestra entre 1 y 30 L por test.
Cnula de muestra con sensor de nivel y agitador integrados.

CAPACIDAD

Modo mono:

Hasta 180 test/hora (modo mono)


Hasta 300 test/hora con unidad ISE.

Modo dual:

Hasta 133 test/hora (modo dual)


Hasta 220 test/hora con unidad ISE.

PREDILUCIN MUESTRAS (solo modo dual)

Diluciones programables: 1:5, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50 con 3 diluyentes
posibles.

SISTEMA DE PIPETEO

Jeringas Hamilton y vlvula de bloqueo.


Jeringa de reactivo: 1000 L.
Jeringa de muestra: 100 L.

ROTOR DE REACCIN

Rotor semi-desechable con 48 posiciones de lectura. Paso de luz de 7 mm.


Volumen mnimo de medicin de 220 L.
Temperatura de trabajo 37C controlado por elementos Peltier.

ESTACIN DE LAVADO

Lavado de cubetas con 4 x 500 L de agua.


La unidad est equipada con sensor de lquido.
FUENTE DE LUZ

Lmpara de cuarzo-ioduro 12V-20W. (Puede variar de acuerdo al modelo).

LONGITUDES DE ONDA

Seleccin automtica mediante una rueda de filtros (340, 405, 436, 505,
546, 578, 620 nm).
Ancho medio de banda de 8 a 12 mm.

RANGO FOTOMTRICO

-0.1 a 3.0 Absorbancia.

MODOS ANALTICOS

Medicin cintica con chequeo de linealidad.


Medicin bicromtica de punto final con o sin blanco de reactivo bicromtico
y/o correcin por blanco de muestra.
Medicin a dos puntos.
Grfica de los puntos de medicin.
Curvas de calibracin no-lineales.

CONDICIONES DE TRABAJO

15-32C
Humedad mxima 80%.

CAPACIDAD DE MEDICIN (MODO MONO)


(Puede haber variacin de acuerdo al modelo)

Absorbancia de reactivo (bicromtica) antes de la adicin de la muestra.


Cintica durante 7 minutos despus de la adicin de la muestra.
Punto final (bicromtico) 11.5 minutos despus de la adicin de la muestra.
Cinticas a 2 puntos.

CAPACIDAD DE MEDICIN (MODO DUAL)


(Puede haber variacin de acuerdo al modelo)

Absorbancia de reactivo (bicromtica) antes de la adicin de la muestra.


Cintica 1 a 4.5 minutos despus de la adicin de la muestra (puede usarse
como blanco muestra en cintica 2).
Cintica 2 a 4 minutos despus de la adicin del reactivo 2.
Cintica 1+2 a 8.5 minutos despus de la adicin de la muestra.
Blanco de muestra (bicromtico) antes de reactivo 2.
Punto final (bicromtico) 4.5 o 11.5 minutos despus de la adicin de la
muestra.
Cintica 1, Cintica 2 o Cintica 1+2 que pueden medir en un tiempo
mnimo o bien 2 mediciones para las determinaciones a 2 puntos.

MODOS DE CLCULO

Chequeo de efecto prozona para determinaciones inmunolgicas.


Definicin de cut-off.

CONTROL DE CALIDAD

Pueden definirse hasta 15 controles, 3 por test.


Reglas Westgard
Grficos de Levey-Jennings.

STANDARDS

CE, Certificado CB.

IDIOMAS

Ingls, Alemn, Espaol, Francs, Italiano y Holands.

DIMENSIONES
(Varan de acuerdo al modelo)

115 x 49 x 56.

OPCIONAL

PC(requisitos mnimos)

Pentium 133 Mhz; 32 MB RAM


VGA Monitor 640 x 480 pixels
Hard disk: 1GB
Floppy: 3.5" (1.44 MB)
CD Rom Drive
Windows 95 o 98
2 puertos serie: 1 para el instrumento y otro para el HOST.
1 puerto para la impresora.

IMPRESORA

El programa puede trabajar con 2 impresoras: una para informeas y otra


para datos de calibracin y del sistema.
Pueden usarse las impresoras compatibles con Windows.

OTROS

Lector de cdigo de barras.


Contenedor para desechos concentrados.

4.0 PREPARACIN
Depender del autoanalizador.
5.0 PROCEDIMIENTO
El equipo cuenta con un software integrado con las indicaciones de trabajo, o
parmetros.

ANEXO
GLOSARIO

Acidosis. pH del fluido corporal anormalmente bajo. Respiratoria -causada por


una PCO2 anormalmente alta; Metablica-causada por una concentracin de
bicarbonato anormalmente baja.
Acidosis lctica. Acidosis (pH sanguneo bajo) causado por exceso de cido.
Adipsia. Ausencia de sed.
Aditivo. Sustancia qumica que al aadirse a una muestra causa uno o ms
cambios en sus propiedades fsicas o qumicas.
Adsorber. Acoplamiento de una sustancia qumica a una superficie slida.
Aerosol. Una fina niebla producida por la atomizacin de un lquido.
Agua corporal total (ACT). Toda el agua contenida en el cuerpo, tanto dentro
como fuera de las clulas, incluyendo aquellas contenidas en los sistemas
gastrointestinal y genito-urinario.
Agua extracelular (AEC). Agua externa a las membranas; anatmica: toda agua
externa a las membranas celulares; fisiolgica: plasma y agua corporal en la cual
pequeos solutos pueden difundirse; excluye la porcin transcelular del agua
anatmica extracelular; incluye el plasma y el fluido intersticial.
Agua intracelular (AIC). Agua contenida en las clulas del cuerpo; agua dentro
de las membranas celulares.
Agua libre. Agua que no contiene soluto.
Agua transcelular. La porcin de agua extracelular que est rodeada por una
membrana epitelial, cuyo volumen y composicin se determinan por la actividad
celular de esa membrana.
Alcalosis. pH del fluido corporal anormalmente alto; respiratoria: causada por una
PCO2 anormalmente baja; metablica: causada por una concentracin de
bicarbonato anormalmente alta.
Albuminuria. Incremento en la concentracin de albmina en la orina.
Aldosterona. Hormona mineralocorticoide secretada por la corteza adrenal que
influye en el metabolismo del sodio y el potasio.
Alcuota. Una pequea parte de una determinada muestra, la cual tiene la misma
composicin qumica.
Aminoaciduria. Exceso de uno o ms aminocidos en la orina.
Anlisis bicromtico. Monitoreo espectrofotomtrico de una reaccin a dos
longitudes de onda. Usado para corregir el color de fondo.
Anlisis cintico. Anlisis en el cual el cambio del parmetro que se est
controlando con respecto al tiempo est relacionado con la concentracin, como el
cambio de absorbancia por minuto. Las mediciones son hechas muy
tempranamente en el perodo de reaccin.
Anlisis hmedo de orina. Prueba de tamizaje de la orina que combina una
valoracin fisicoqumica y un examen del sedimento urinario en una preparacin
hmeda no coloreada.
Anlisis de orina por tira hmeda. Examen qumico de la orina empleando tiras
reactivas de prueba para la determinacin de albmina, glucosa, cetonas,
bilirrubina, hemoglobina, bacterias, leucocitos, y otros constituyentes qumicos.
Anlisis de punto final. Monitoreo de una reaccin despus de que sta se ha
completado esencialmente.
Anlisis por tira reactiva. Uso de tiras de prueba conteniendo reactivos qumicos
para determinar si hay concentraciones patolgicas de diversas sustancias en la
orina.
Anastamsis. Conexin de dos vasos sanguneos.
Angiognesis. Una complicacin de la diabetes mellitus. Proliferacin anormal de
los vasos sanguneos en un tejido tal como las lentes del ojo.
Angiopata. Una complicacin de la diabetes mellitus que se manifiesta como un
dao en las membranas basales de los vasos sanguneos.
Angiotensina. Polipptido vasopresor producido por la accin enzimtica de la
renina sobre el angiotensingeno. Una enzima convertidora del pulmn extrae dos
aminocidos C-terminales del decapptido inactivo angiotensina I para formar el
octapptido biolgicamente activo angiotensina II.
ANSI (American Nacional Standard Institute). Miembro de la organizacin
internacional para la estandarizacin.
Anticoagulante. Una sustancia que puede suprimir, retrasar o evitar la
coagulacin de la sangre impidiendo la formacin de fibrina.
Anticuerpos de las clulas de los islotes (ACI). Anticuerpos frecuentemente
encontrados en la diabetes tipo I que sugieren un origen autoinmune.
Antisptico. Una sustancia qumica la cual reduce el nmero de bacterias.
Arterial. Relacionado con o derivado de las arterias, los vasos que conducen
sangre del corazn a los tejidos del cuerpo.
Bacteriuria. Presencia de bacterias en la orina.
Bilirrubinuria. Presencia de bilirrubina en la orina.
Blanco de muestra. Muestra ms diluyente; usada para corregir la absorbancia
de la mezcla completa de reaccin para el color endgeno de la muestra.
Blanco de reactivo. La mezcla de reaccin menos la muestra: usado para restar
el color del reactivo endgeno de la absorbancia de la reaccin completa (ms la
muestra).
Clculos. Concreciones anormales, usualmente compuestos de sales, presentes
en el sistema urinario u otros tejidos; una piedra renal.
Capilar. Relacionado con un vaso sanguneo muy delgado en los tejidos donde
los nutrientes son depositados y los productos de desecho son removidos por la
sangre.
Catter. Un tubo de hule o plstico que conecta una cavidad del cuerpo con la
superficie del cuerpo.
Cateterizacin. Insercin de un instrumento delgado, flexible y tubular en la
vejiga o urter para obtener o sacar orina.
Clulas plidas. Neutrfilos de tincin tenue, hinchados y degenerados, que se
encuentran en la orina diluida, los cuales tienen grnulos citoplasmticos que
presentan un movimiento browniano caracterstico.
Cetoacidosis diabtica. Una complicacin de la diabetes mellitus caracterizada
por hiperglucemia, hiperosmolaridad, pH bajo, cetonuria y cetonemia, y letargo o
coma.
Cetona. Cualquier compuesto que contiene un grupo carbonilo -CO- y grupos de
hidrocarburos unidos al carbono del grupo carbonilo.
Cetonemia. Exceso en la sangre, de cetonas y de derivados de cetocidos.
Cetonuria. Exceso en la orina, de cetonas y de cetocidos derivados. Presencia
de cetonas en la orina, las cuales son un producto intermedio del metabolismo de
las grasas, como ocurre en la diabetes mellitus.
Cilindros. Estructura cilndrica formada como resultado de conglutinacin de
clulas y precipitacin de protenas en el lumen de los tbulos convolucionados
distales y ductos colectores del nefrn, los cuales son expulsados en el sedimento
urinario.
Cilindros hialinos. Cilindros transparentes formados de mucoprotena.
Cilindruria. Presencia de cilindros en la orina.
Cirrosis. Enfermedad progresiva del hgado caracterizada por el dao a las
clulas del parnquima heptico.
Citodiagnstico de orina. Anlisis especializado de orina que combina una
valoracin fisicoqumica y un examen del sedimento urinario concentrado teido
para Papanicolaou.
CLIA o CLIA88. La Reforma para el Mejoramiento de los Laboratorios Clnicos
(CLIA88 por sus siglas en ingls), reglamenta el funcionamiento de los
laboratorios clnicos en los Estados Unidos. Esta ley se interpreta mediante
regulaciones administrativas desarrolladas por organizaciones certificadoras.
Cogulo. Agregacin de clulas sanguneas unidas por fibrina, una protena
polimerizada.
Coma no cetsico heperglucmico hiperosmolar (CNHH). Una complicacin
de la diabetes mellitus caracterizada por hiperglucemia, heperosmolaridad, pH
bajo, niveles normales de cetocidos y letargo o coma.
Control de la calidad externo. Programa en el cual una institucin externa
provee muestras desconocidas para su anlisis. (Vea: Survey o proficiency testing
specimen. Encuesta o especmenes para ensayos de aptitud).Los resultados son
remitidos a los laboratorios participantes con una evaluacin de rendimiento:
aceptable o no aceptable. En el CLIA88 este proceso se conoce con el nombre
de ensayos de aptitud.
Control de calidad interno. Programa analtico que verifica la aceptabilidad y
estabilidad de los resultados del laboratorio, mediante la utilizacin de muestras
controles.
Correccin de Allen. Anlisis multicromtico de una reaccin para corregir la
absorbancia de fondo. Adems de la Amax (absorbancia mxima) del cromforo,
se monitorean dos longitudes de onda para restar la absorbancia de fondo
promedio.
Cristales amorfos. Precipitado de sales no cristalino, granular, sin importancia
patolgica.
Desviacin estndar usual (DEU). Es el promedio de los valores de las
desviaciones estndar de 3 a 6 meses, basados en datos consecutivos de control
de calidad. Es un estimado de la precisin, que un sistema analtico es capaz de
alcanzar.
Desviacin estndar (DE). Es un indicador descriptivo de la extensin de la
dispersin de una poblacin de resultados de ensayos o de un conjunto de datos.
Desviacin estndar mensual. Desviacin estndar calculada con los valores de
control de la calidad diarios durante un mes.
Diabetes inspida. Excrecin crnica de grandes cantidades de orina
hipoosmtica causada por la incapacidad de concentrar la orina debido a la
carencia de la produccin, secrecin o efecto de la hormona antidiurtica, HAD.
Diabetes gestacional. Intolerancia a la glucosa que ocurre en algunos
embarazos.
Diferencia significativa. Aquella que se demuestra estadsticamente que est
ms all del lmite de variabilidad esperado; clnicamente es una diferencia
suficientemente grande para influir en una decisin mdica; operacionalmente es
una diferencia estadsticamente significativa que el personal que realiza el ensayo
y los supervisores consideran suficientemente grande para requerir una
investigacin.
Disacrido. Dos monosacridos ligados por una unin glucosdica.
Diurtico. Un agente que promueve la produccin de orina.
EDTA. cido etilendiaminotetraactico, es un agente quelante de calcio, de uso
comn. Acta como anticoagulante y preservativo, uniendo calcio y otros cationes.
Por sus propiedades quelantes, es capaz de inactivar varias enzimas necesarias
para la formacin del cogulo y para la degradacin de protenas y lpidos en
sangre.
Eritrocituria. Presencia de eritrocitos en orina.
Eritrocituria dismrfica. Presencia de fragmentos de eritrocitos en el sedimento
de orina indicativos de hematuria renal (glomerular y tubular).
Estndar primario. Substancias qumicas de la ms alta pureza conocida, que
pueden ser usadas para producir calibradores para sistemas analticos.
Estasis. Una disminucin en el flujo de sangre en una parte del cuerpo.
Evaporacin. Transformacin de agua en vapor
Extracelular. Fuera de las clulas.
Flebotoma. Puncin de una vena con una aguja con el propsito de obtener una
muestra de sangre.
Fluido intersticial (FI). Agua extravascular, extracelular.
Fuera de control. Condicin en la cual un sistema de anlisis es rechazado para
ser utilizado en la atencin de los pacientes, debido a los resultados de control de
la calidad o a otros indicadores. Esta circunstancia debe ser declarada
formalmente por el director del laboratorio o por el supervisor tcnico.
Funguria. Presencia de hongos en la orina.
Glucoltico. Relacionado con el proceso del metabolismo de la glucosa.
Gluconeognesis. Produccin de glucosa a partir de cido pirvico.
Glucosa. Un aldehdo polihidroxlico de seis carbonos; fuente principal de energa
en los organismos. Su metabolismo produce adenosn trifosfato.
Glucosilacin. Reaccin en la cual la glucosa se une covalentemente a la
protena.
Glucosuria. Cantidades excesivas de glucosa urinaria.
Gravedad especfica. El peso de una sustancia comparada con un volumen igual
de otra sustancia tomada como estndar.
Grupo semejante. Cuando se utiliza en programas de control externo, indica el
grupo de laboratorios que utilizan mtodos iguales o similares.
HDL. Lipoprotenas de alta densidad. Estos complejos lipo-proteicos se llaman
tambin alfa-lipoprotenas y son las ms densas de las lipoprotenas. Su acrnimo
ms usado es HDL por "High-Density Lipoprotein."
Hematuria. Presencia de sangre en la orina.
Hemoconcentracin. El proceso de incremento en la concentracin de las
clulas, protenas y ocasionalmente otros compuestos analizados en sangre a
travs de la prdida de agua, ya sea in vitro o in vivo.
Hemoglobinuria. Presencia de hemoglobina libre en la orina.
Hemlisis. Ruptura de glbulos rojos, liberando al suero o plasma los contenidos
en ellos.
Heparina. Un anticoagulante el cual inhibe directamente la formacin de fibrina.
Hidrmetro. Instrumento empleado en medir la gravedad especfica de un fluido.
Hiperaldosteronismo. Trastorno causado por la secrecin excesiva de
aldosterona y caracterizada por alcalosis hipopotasmica, debilidad muscular,
hipertensin, poliuria, polidipsia y concentraciones normales o elevadas de sodio
plasmtico.
Hipercloremia. Concentracin anormalmente alta de cloruro plasmtico.
Hipernatremia. Concentracin anormalmente alta de sodio plasmtico.
Hiperosmtica. Que denota una presin osmtica efectiva mayor que la del
plasma.
Hiperpotasemia. Concentracin anormalmente alta de potasio plasmtico.
Hipertnica. Que denota una presin osmtica terica mayor que la del plasma.
Hiponatremia. Una concentracin anormalmente baja de sodio plasmtico; por
dilucin: hiponatremia causada por un exceso de agua (con respecto al sodio) en
el compartimento extracelular.
Hipopotasemia. Concentracin anormalmente baja de cloruro plasmtico.
Hiposmtico. Que denota una presin osmtica efectiva menor que la del
plasma.
Hipotnico. Que denota una presin osmtica terica menor que la del plasma.
Hormona antidiurtica (/HAD). Hormona peptdica de la neurohipfisis que
acta en el tbulo colector del rin para permitir un incremento de la reabsorcin
de agua y por lo tanto una disminucin de la excrecin de agua libre por el rin.
Tambin se conoce como vasopresina.
Ictericia. Referente al color anaranjado impartido a la muestra debido a la
presencia de bilirrubina.
IDL. Lipoprotenas de densidad intermedia. Este complejo lipoproteico tiene una
densidad entre VLDL y LDL, es de una vida media relativamente corta y en la
sangre de una persona sana estn en muy bajas concentraciones. En personas
con disbetalipoproteinemia su concentracin en sangre es elevada. Su acrnimo
ms usado es IDL por "Intermediate-Density Lipoprotein."
Infradiano. Cambios en la concentracin de compuestos analizados que ocurren
con menos frecuencia que una vez al da.
Interferente. Cualquier fenmeno qumico o fsico que pueda interferir o detener
una reaccin o proceso.
Intraindividual. Dentro de una sola persona.
Intravenoso. Dentro de una vena; generalmente se refiere a los fluidos
intravenosos, en donde el agua contiene medicamentos, glucosa, o electrlitos
que son administrados a un paciente a travs de un catter insertado en una vena.
In Vitro. Literalmente, en vidrio; ocurre en una situacin artificial, como en un
tubo de ensaye.
In vivo. Ocurre en un organismo vivo.
LDL. Lipoprotenas de baja densidad. Este complejo lipoproteico es tambin
llamado beta-lipoprotena y es el producto final del catabolismo de la VLDL. Es el
mayor transportador del colesterol. Su acrnimo ms usado es LDL por "Low-
Density Lipoprotein."
Levadura. Microorganismo unicelular nucleado que se reproduce por gemacin.
Lmites de accin. Rangos de valores establecidos para las mezclas de control
de calidad. Si los resultados estn por fuera de estos lmites puede existir un
deterioro en la calidad de los sistemas analticos, que debe ser investigado por el
tcnico.
Lmites de control. Lmites numricos, (expresados en las unidades de los
ensayos), dentro de los cuales deben hallarse los valores de una muestra de
control, para que el ensayo pueda ser considerado vlido o dentro de control.
Lipemia. Presencia de partculas de lpidos (generalmente lipoprotenas de muy
baja densidad) en la muestra, que le dan a la muestra un aspecto turbio.
Lipoprotenas. Complejo lpido (apoprotena)-protena correspondiente a unas
familias de macromolculas con conocidas propiedades fsicas qumicas y
fisiolgicas conocidas.
Materiales de referencia certificados (MRC). Un material de referencia, que
tiene uno o ms de sus valores garantizados por un procedimiento vlido. Est
acompaado o respaldado por un documento expedido por un organismo
certificador. El material tiene una alta pureza del componente especificado.
Mtodo. El principio metodolgico usado en la elaboracin de un ensayo: el
fundamento qumico o fsico del mismo.
Mtodo de referencia. Un mtodo investigado profundamente, en el cual se da
una descripcin precisa y clara de los procedimientos y condiciones necesarias
para la determinacin exacta de uno o ms valores. La exactitud y precisin
documentadas para al mtodo se corresponden con la utilizacin del mtodo para
evaluar la exactitud de otros mtodos, para medir valores de la misma propiedad,
o para asignar valores a materiales de referencia.
Mtodo definitivo. El mtodo analtico que ha sido sometido a la investigacin y
evaluacin de todas las fuentes de inexactitud incluyendo la inespecificidad.
La magnitud de la imprecisin final del mtodo y el sesgo, expresados en la
declaracin de incertidumbre, son compatibles con el propsito e implementacin
final del mismo. El valor final de un mtodo definitivo es tomado como valor
verdadero.
Mioglobinuria. Presencia de hemoglobina en la orina, esta es una protena que
se combina con el oxgeno de las clulas musculares.
Monosacrido. Un aldehdo o acetona polihidroxlico tal como la
glucosa,fructosa o manosa.
Nefritis. Inflamacin del rin.
Neuropata. Una complicacin de la diabetes mellitus atribuida al dao de los
glomrulos y capilares asociados con el glomrulo.
Oliguria. Excrecin anormalmente baja de orina, o sea, menor de 400 mL/ da en
un adulto.
Osmol. El nmero total de moles de un soluto en solucin despus de su
disociacin.
Osmolaridad. Concentracin osmtica expresada en osmoles o miliosmoles de
soluto por litro de solvente.
Osmosis. Movimiento de agua a travs de una membrana semipermeable de una
solucin con baja concentracin de partculas de soluto a una solucin con alta
concentracin de partculas de soluto.
Piuria. Cantidad anormal de leucocitos en orina.
Plasma. La parte lquida de la sangre en el torrente sanguneo; es una muestra
obtenida de sangre mediante la colecta con un anticoagulante, con una
centrifugacin posterior de la muestra.
Polidipsia. Consumo excesivo de fluido secundario a una sed extrema; polidipsia
psicognica secundaria a un trastorno psiquitrico, sin una lesin orgnica
demostrable.Un sntoma de la diabetes mellitus.
Polifagia. Hambre constante. Un sntoma de la diabetes mellitus.
Polisacrido. Un carbohidrato compuesto de ms de dos monosacridos unidos
por puentes glucosdicos.
Poliuria. Prdida urinaria excesiva. Un sntoma de la diabetes mellitus.
Porfirinas. Un grupo de derivados del pirrol libres de hierro o magnesio que se
encuentran universalmente en todas las clulas. Estos compuestos constituyen la
base de los pigmentos respiratorios en animales y plantas.
Postprandial. Despus de comer.
Presin osmtica coloidal. La presin osmtica efectiva del plasma y el fluido
intersticial a travs del endotelio capilar, mayormente resultante de la presencia de
protena.
Procedimiento. Grupo de instrucciones para utilizar un mtodo, que genera un
resultado analtico.
Proteinuria. Incremento en la concentracin de protena en la orina.
Protelisis. El proceso de degradacin de las protenas, el cual puede ocurrir por
reacciones qumicas o procesos enzimticos.
Pseudohiperpotasemia. Concentracin plasmtica de potasio anormalmente
alta en una muestra obtenida de un paciente, en ausencia de una verdadera
elevacin de la concentracin plasmtica de potasio en ese paciente.
Quelacin. El proceso de unin de una molcula orgnica (quelante) con
mltiples iones metlicos.
Quilomicrones. Grandes complejos lipoproteicos formados en el intestino y que
tienen una importante funcin en el transporte de grasas (mayormente
triglicridos dietarios).
Rechazo falso. Rechazo de una serie porque los resultados de control de la
calidad indican un problema analtico que no est realmente presente.
Rechazo verdadero. Rechazo de una corrida analtica porque los especmenes
de control indican que existe un problema real.
Recuento de Addis. Anlisis cuantitativo del sedimento urinario, en el cual se
cuantifica el nmero de eritrocitos, leucocitos y cilindros en un espcimen de orina
recolectado en un determinado tiempo.
Revisin delta. Comparacin de la concentracin de un compuesto analizado en
la muestra de un individuo, con la misma concentracin existente en la muestra
anterior, de la misma persona.
Semipermeable. Permeable a ciertas molculas pero no a otras; generalmente
permeable al agua.
Separador de suero. Un componente mecnico que separa fsicamente el suero
y las clulas (los separadores de plasma separan plasma de las clulas),
previniendo los cambios en la concentracin de los compuestos analizados sricos
debido al metabolismo celular.
Sndrome de secrecin inapropiada de la hormona antidiurtica. Conjunto de
hallazgos, incluyendo la hipotonicidad del plasma, hiponatremia e hipertonicidad
de la orina con excrecin continuada de sodio, el cual es producido por una
excesiva secrecin de HAD y que mejora con la restriccin de agua.
Suero. La parte lquida de la sangre que queda despus de que se ha formado
un cogulo.
Tendencia. Cambio gradual en los resultados de las muestras de control de la
calidad, que sugiere un problema con el sistema analtico o con el material de
control.
Torniquete. Un dispositivo mecnico (como una banda ancha de hule) usada en
la superficie de una extremidad la cual comprime las venas, hacindolas aparecer
ms grandes mediante la prevencin del retorno de sangre al corazn y pulmones.
Turbidez. Dispersin de luz en un lquido que contiene partculas suspendidas.
Ultradiano. Cambios en la concentracin de los compuestos analizados los
cuales ocurren en un perodo de tiempo mucho menor que un da.
Urobilingeno. Grupo de compuestos incoloros formados por la reduccin de la
bilirrubina conjugada por la accin de bacterias intestinales. Cerca del 1% del total
del urobilingeno producido pasa a la orina.
Valor asignado. Es el valor medio, establecido para un compuesto analizado en
una mezcla de control de calidad.
Variabilidad inherente. Los valores de las mediciones repetidas de un mismo
material varan alrededor de una media. La desviacin estndar mide la magnitud
de esta variabilidad.
Variacin cclica. Cambios en concentracin de compuestos analizados los
cuales ocurren repetitivamente, en una forma predecible, durante un perodo dado
de tiempo.
Variacin circadiana. Cambios en la concentracin de compuestos analizados
la cual ocurre durante el transcurso de un da.
Variacin preanaltica. Factores que alteran los resultados de una prueba de
laboratorio y que ocurren antes de realizar la prueba.
Virus. Agente que se autorreplica, consta de una estructura fundamental de
cidos nucleicos encapsulados por una cubierta de protenas. Este
microorganismo puede multiplicarse solamente dentro de las clulas de su
hospedero.
VLDL. Lipoprotenas de muy baja densidad tambin llamadas pre-beta
lipoprotena.(1)

5. BIBLIOGRAFA:

1. TERRS Speziale Arturo M; Clnica y Laboratorio: Ciencia y Tecnologa; 2


ed; ed. Graphimedic S.A. de C.V; Mxico 2002.

2. PRESIDENCIA DE LA REPBLICA; CGEA, Gua tcnica para la


elaboracin de manuales de procedimientos; Coleccin guas tcnicas, serie
organizacin y mtodos nm. 9.

3. Mxico, Secretara de Salud, Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997,


para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos, Diario
Oficial de la federacin, ao 2000. Internet: http://www.salud.gob.mx/

4. El gerenciamiento del laboratorio de anlisis clnicos con la visin de la


calidad total.
Internet: http://www.sarda.org.ar/Revista%20sard%c3%A1/2002/28-33.pdf

5. ANDERSON, Shauna C, Susan Cockayne; Qumica Clnica; 1 ed; trad. Ma.


Teresa Aguilar; ed. Interamericana-McGraw-Hill; Mxico, 1995.

6. KAPLAN, A. Lawrence, Amadeo J. Pesce; Qumica Clnica Teora, anlisis y


correlacin; 3 ed; trad. Tania Carren Valencia; ed. Javier Ortega Cesea;
Mxico 1996.
7. GONZLEZ Buitrago J.M., Arilla Ferreriro E., Rodrguez-Segada M.,
Sanchez Pozo A; Bioqumica Clnica; 1 ed; ed. McGraw-Hill; Mxico, 1998.

8. Examen de sangre.
Internet:http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/esp_imagepages/100
26.htm

9. MORN Villatoro Luis; Obtencin de muestras sanguneas de Calidad


analtica; 1 ed; ed. Mdica Panamericana S.A. de C.V; Mxico D.F. 2001.

10. BECTON, DICKINSON DIAGNOSTICS; BD Vacutainer Oder of Draw for


Multiple Tube Collections. Internet: www.bd.com/vacutainer.

11. A.A. Madrid, C.S.C.;Laboratorio Clnico, Manual de Flebotoma. Internet:


www.ilustrados.com/documentos/manualflebotomia.doc

12. Norma-Oficial Mexicana Nom-087-ECOL-SSA1-2002 Proteccin Ambiental-


Salud ambiental-Residuos peligrosos biolgico-Infecciosos-Clasificacin y
especificaciones de manejo.
Internet:http://www.salud.gob.m/unidades/cdi/nom/087ecolssa.html
13. WHITEHEAD T.P.; Manual, Principios de Control de Calidad (Lab/76.1);
Organizacin Mundial de la Salud; Qumica Clnica 1984.

14. Reactivos para diagnostico clnico, Bioqumica Clnica, Productos.


Internet: http://www.spinreact.com/

15. TRESELER Kathleen Morrison; Laboratorio clnico y pruebas de


diagnstico; 3 ed; trad. Dr. Jorge Mrigo; ed. El manual moderno; Mxico, D.F,
1998.

16. AYRES H. Gilbert; Anlisis Qumico Cuantitativo;2 ed;ed. Harla S.A de


C.V.; Mxico 1970.

17. FLASCHKA H.A.; Qumica Analtica Cuantitativa; 9.ed; trad. Antonio Eroles
Gmez; ed. Continental S.A. de C.V; Mxico 1984.

18. GRAW Allan, Cowan Robert A; Bioqumica Clnica; 2a. ed; ed.
A.Hamabata;Mxico D.F. 2003.

19. BAYER; Manual de usuario Rapidchem 744/754.

20. GRAFF Sister Laurine; Anlisis de Orina, Atlas a color; 1 ed; trad. Pablo
Rubn Koval; ed. Mdica Panamericana S.A; Mxico 1983.

21. ALTHOF Klinder Heintz; Sedimento Urinario; 6.ed; ed. Mdica


Panamericana; Mxico 2003.