Clase 9-10. Núcleo y Replicación ADN

22/10/2016
Ncleo / Replicacin del ADN
Ncleo interfsico. ADN y cromatina. Replicacin del ADN. Cuadro comparativo entre replicacin
entre procariotas y eucariotas.
Facultad de Medicina Humana - BCyM 2016 - II 22/10/2016
Ncleo
Las clulas diferenciadas (eucariotas o procariotas) contienen

gran informacin gentica, por consiguiente las clulas disponen
de mecanismos que les permiten expresar dicha informacin de
manera selectiva.
Es muy importante que las clulas controlen la expresin gnica,

y por lo tanto se aseguran que ciertas protenas se sinteticen
mientras que otras no; en donde intervienen el ncleo,. Sitio
donde se localiza gran parte de la maquinaria reguladora
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La correlacin de Genmica Funcional con el

ncleo de la clula: La Nueva Frontera
Morfologa de los ncleos celulares
http://webs.uvigo.es/mmegias/5-celulas/4-nucleo.php
Distintos tipos de ncleos. A. Clulas epiteliales de la vescula biliar de humanos con los ncleos redondeados. B Monocito
de la sangre con el ncleo arrionado. C. Neutrfilos de la sangre con los ncleos multilobulados. D. Vista parcial de una
clula muscular multinucleada, con los ncleos situados en zona perifrica (flechas).
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NCLEO
Descubierto por Robert Brown, 1831.

Visibles al microscopio ptico.
Diversas formas.
Promedio (CEA): 6 um
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ESTRUCTURA DEL NCLEO
Facultad de Medicina Humana - BCyM 2016 - II

http://legacy.hopkinsville.kctcs.edu/instructors/Jason-Arnold/VLI/Module%202/m2cellstructure/m2cellstructure_print.html 22/10/2016
Watson (1959)
10% / especie
/ tipo de clula
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Ac. Nucleicos, protenas, enzimas y minerales
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Envoltura nuclear
Doble membrana concntricas separadas
por un espacio (10-50 nm).
Continuacin del RER.
Donde se fusiona la envoltura nuclear :

poros nucleares
Funcin:
Aislar y proteger el material gentico de

molculas que puedan daar su estructura
o interferir con su funcin.
Permite el intercambio selectivo de

materiales
Lmina nuclear
En la superficie interna de la envoltura

nuclear, complejo proteco, apoyo
estructural y anclaje de cromatina
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Lmina nuclear
La superficie interna de la envoltura nuclear de las clulas animales.
Su funcin es brindar apoyo mecnico a la envoltura nuclear de DNA y sirve como punto de unin para
las fibras de cromatina de la periferia nuclear.
http://www.nature.com/nrm/journal/v6/n1/fig_tab/nrm1550_F1.html
12
Lmina nuclear
Facultad de Medicina Humana - BCyM 2016 - II http://www.jci.org/articles/view/37679/figure/1 22/10/2016
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Complejo del Poro Nuclear
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A B
(a) (b)
FIGURA 12-5 Micrografa electrnica de barrido de un C
complejo de poro nuclear de envolturas nucleares aisladas de
un oocito de anfibio.
(a) Cara citoplsmica de la envoltura nuclear que muestra los

grnulos citoplsmicos perifricos de un complejo de poro
nuclear. (b) Cara nuclear de la envoltura nuclear que muestra
una apariencia semejante a una canasta en la parte interna
de la porcin del complejo. (c) Cara nuclear de la envoltura
que muestra la distribucin de los NPC y los sitios donde las
porciones intactas de la lmina nuclear (NEL) se conservan. En
todas estas micrografas las envolturas nucleares aisladas se
fijaron, deshidrataron y cubrieron con metal. (TOMADA DE M.
W. GOLDBERG Y T. D. ALLEN, J. CELL BIOL. 119:1431, 1992;
MEDIANTE AUTORIZACIN DE DERECHOS RESERVADOS DE LA ROCKEFELLER (c)
UNIVERSITY PRESS.)
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Complejo del poro nuclear
Fusiones de la envoltura nuclear.

Dimetro: 60 int 120 ext (nm).
Nmero de acuerdo a la funcin celular.
Aparato complejo en forma de canastilla Complejo del poro
nuclear (CPN)
Permite el trfico selectivo de molculas en ambas direcciones:
a) del citoplasma al ncleo: iones, nucletidos para la sntesis de
ADN, protenas.
b) del ncleo al citoplasma: ARNm, ARNr
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- Simetra octagonal
- Protenas nucleoporina
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Trafico molecular a travs del complejo del poro nuclear
125000 kd
50-100 proteins
20 kd
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Transporte a travs del poro

Molculas que se importan dentro del
ncleo:
Protenas para ensamblar los

ribosomas.
Factores de transcripcin requeridos
en la activacin o inactivacin de los
genes.
Factores de empalme necesarios en el
proceso de maduracin de los
ribosomas.
Molculas exportadas desde el ncleo

al citoplasma incluyen:
Las subunidades ribosomales
ARNm
ARN de transferencia
Factores de transcripcin que son
devueltos al citoplasma para ser
reutilizados.
http://biologia.laguia2000.com/citologia/transporte-a-traves-de-la-envoltura-nuclear-exportacion
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Transporte a
travs del poro
Nuclear Signal
Localization (NSL)
Protenas sintetizadas
en el citoplasma
Nuclear export signal
Componentes que
salen del ncleo
Molculas de mayor
tamao
Importinas
Exportinas
20
(a)
FIGURA 12-7 Importacin de protenas del citoplasma al ncleo.
(a) Pasos propuestos de la importacin de protenas al ncleo segn se describe en el texto. Las protenas que portan una
seal de localizacin nuclear (NLS) se unen a un receptor heterodimrico (importina /) (paso 1) para formar un complejo
que se relaciona con los filamentos citoplsmicos (paso 2). El receptor del complejo de carga se mueve a travs del poro
nuclear (paso 3) y al interior del nucleoplasma donde interacta con la Ran-GTP y se disocia (paso 4). La subunidad de
importina , en relacin con Ran-GTP, se transporta de nuevo al citoplasma, donde Ran-GTP se hidroliza (paso 5). Despus
Ran-GDP se transporta de nuevo al ncleo, donde se convierte en Ran-GTP. En cambio, la importina se transporta de
Facultad
regreso de Medicina Humana - BCyM 2016 - II
al citoplasma. 22/10/2016
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FIGURA 12-7 Importacin de protenas del

citoplasma al ncleo.
(b) La nucleoplasmina es una protena presente

en grandes concentraciones en el nucleoplasma
de los oocitos de Xenopus. Cuando las partculas
de oro se cubren con protena nucleoplasmina y
se inyectan dentro del citoplasma de los oocitos
de Xenopus, puede verse que se unen a los
filamentos citoplsmicos (CF) que se proyectan
desde el anillo externo del complejo del poro
nuclear. Tambin se observa que varias partculas
transitan a travs del poro nuclear (NP) hacia el
ncleo. (A: CON BASE EN UN MODELO DE M. OHNO ET
AL., CELL 92:327, 1998; B: TOMADA DE W. D.
RICHARDSON ET AL., CELL 52:662, 1988; CON
AUTORIZACIN DE CELL PRESS, CORTESA DE A. D. MILLS.)
(b)
22
Nucleoplasma
Matriz acuosa (80% agua) del interior del

ncleo donde se encuentran:
Cromatina
Nuclolo
ARN
Protenas, etc.
Estructura similar al citoplasma celular.
Se dan los procesos de replicacin del

ADN y transcripcin del ARN
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Nuclolo
Estructura densa y esfrica en el interior
del ncleo
Formada por tres zonas: fibrilar denso,

granular y centro fibrilar.
Tiene lugar la sntesis del ARN

ribosmico y las subunidades del
ribosoma
24
Nuclolo
CF: centro fibrilar

CFD: componente fibrilar denso
CG: componente granular
Procesamiento tardo de los ARNr y

ensamblaje de las partculas pre-
ribosomales
Localizacin de genes que codifican
para el ARNr y complejos Localizacin de genes que
multiprotecos codifican para el ARNr y
procesamiento inicial de los ARNr
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Nuclolo
CF Centro Fibrilar :
Fibrillas de 50 de diametro
Contiene los genes que codifican para:
a) Pre ARNr
b) ARN Polimerasa 1
c) ADN topoisomerasa 1
d) Factor de transcripcin UBF
CFD Componente fibrilar denso:

compuesto por protena Fibrilarina
involucrada en metilacin de ribosas del
ARN r en los primeros estados del
procesamiento de ARNr.
CG : Componente Granular
Grnulos de 15-20 nm
Se ensamblan las partculas pre-
ribosomales
Presencia de fosfoprotenas nucleolares B23
y NOP 52 que participan en la biognesis
temprana de los ribosomas.
26
Nuclolo
(otras funciones)
Recientemente se obtuvieron evidencias

de otras funciones del nucleolo adems
de la sntesis de ribosomas.
Participara en el transporte y/o

recambio de algunos ARNm
Mutantes de Saccharomyces cereviciae
acumulan ARNms en el ncleo y en
muchas se observa fragmentacin o
alargamiento del nuclolo lo que indica
http://unblogbiotecnologico.blogspot.com/2013/04/organismos-modelo-levaduras.html
una correlacin entre el nuclolo y
exportacin de ARNms al citoplasma
Se identific un gen MTR3 que codifica
para una protena que al estar mutada
se produce la acumulacin de ARNms en
el nuclolo
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Nuclolo
(otras funciones)
Varios cidos nucleicos y antgenos virales

interactan con protenas del nuclolo en clulas
humanas infectadas :
Virus de inmunodeficiencia tipo 1
El transporte de ARN viral lo realiza la protena
REV que se localiza principalmente en el nucleolo
Virus de leucemia T
La protena REX acta como regulador de la post-
transcripcinal del virus y se ubica en el nucleolo
Participa en la biognesis de la partcula de

reconocimiento del pptido seal (PRS).
Interviene en el procesamiento del ARN que
forma parte del PRS y el ensamblaje
Participa en el control del envejecimiento celular.
28
Cromatina
Constituida por ADN y
protenas (histonas y no
histonas)
Unidad bsica : nucleosomas
Dos tipos: Eucromatina y

Heterocromatina
Eucromatina Heterocromatina
Grado de descondensacin Mayor Menor
Expresin gnica Se expresa No se expresa
Ubicacin en el ncleo En la zona interna En la zona perifrica
Captacin del colorante Leve Intensa
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Composicin qumica de la cromatina
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EMPAQUETAMIENTO DE LA CROMATINA: ESTRUCTURA

TERCIARIA: NUCLEOPROTENAS
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Estructura de la formacin de un
cromosoma
http://www.dicyt
.com/data/29/17
229.png
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Estructura del ADN

Estructuras terciarias
Niveles de compactacin de los cromosomas eucariticos
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Watson & Crick
1953 publicacin/ 1962 Premio Nobel
Descubrimiento de la estructura tridimensional del

ADN
ADN consta de dos cadenas de nucletidos,
enrollados alrededor de un eje central.
Esqueleto azcar-fosfato-azcar-fosfato en el
exterior; bases en el interior.
Cadenas unidas por puente de hidrogeno.
A=T y G=C
Cadenas antiparalelas.
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Estructura qumica de los nucletidos
Formados por tres componentes: Grupo fosfato, Azcar (5C), base nitrogenada
ADENINA
Forman parte del ADN y del ARN
GUANINA
CITOSINA
TIMINA Forma parte del ADN
URACILO Forma parte del ARN
ADN: A,G,C,T
ARN: A,G,C,U
PENTOSA
RIBOSA DESOXIRRIBOSA
ARN ADN
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Apareamiento de bases
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Estructura secundaria (Doble hlice)
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Cuando hablamos de replicacin del ADN, se

mencionan tres caractersticas:
Semiconservativa
Bidireccional
Discontinua o Asimetrica
48
Replicacin del ADN

Replicacin del ADN (o sntesis
de ADN): Produccin de una
copia exacta de si mismo.
Sucede previo a la divisin
celular, en Interfase (fase S).
Se replica cada cadena del ADN,
que es usada como molde para
generar una nueva cadena
complementaria.
El ADN hijo (replicado) consiste
en una cadena original de ADN
y una cadena recin sintetizada.
La replicacin del ADN es semi-
conservativa.
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Las dos cadenas del ADN se replican.

49
Cada cadena del ADN se usa como molde para generar una nueva cadena
mediante complementaridad de bases.
Replicacin del ADN
50
Replicacin del ADN
1. Desenrrollamiento
El ADN se desenrrolla para permitir que la replicacin
ocurra.
2. Elongacin
Una cadena nueva de ADN es sintetizada usando
una cadena original como molde.
3. Trmino
La sntesis de ADN se completa y
la nueva molcula de ADN
asume su estructura de doble
hlice.
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Control de la Replicacin del ADN
Replicacin del ADN est altamente

regulado.
Cada paso de la replicacin est

controlado por una enzima
Enzimas involucradas
Helicasa Girasa (Topoisomerasa) Protenas estabilizadoras de

cadena simple
ADN polimerasa III Primasa
ADN polimerasa I Ligasa

52
Replicacin del ADN
Comienza en sitios especficos

(orgenes de replicacin, oriC)
Desenrrollamiento del ADN (dsDNA

a ssDNA)
Las cadenas recin sintetizadas

crecen en sentido 5 a 3 por adicin
de nucleotidos.
dNTPs se unen al grupo 3-OH del

ltimo nucletido de la cadena en
crecimiento, perdiendo dos fosfato.
Varias enzimas involucradas.
Al ser cadenas antiparalelas, una se

replicada de forma continua (cadena
lder) y otra de forma discontinua
(cadena retrasada).
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FASE DE INICIACIN
A partir de los puntos de iniciacin se originan
las denominadas burbujas de replicacin, las
cuales presentan dos zonas con forma de Y
llamadas horquillas de replicacin que se van
abriendo gradualmente a medida que se
sintetiza nuevas hebras complementarias de
ADN
Burbujas de
replicacin
3
5
3 5
Horquillas de
Facultad de Medicina Humana - BCyM 2016 - II
replicacin 22/10/2016
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FASE DE INICIACIN
Para que el proceso se lleve a cabo con la
mxima celeridad, la duplicacin
comienza simultneamente en muchos
puntos de la doble cadena, puntos de
iniciacin (oriC) en los que abundan las
secuencias GATC.
...ACGTGATCGGGCTA....ACCGATCACATCGG.....AGGCGATCTTACG...
...TGCACTAGCCCGAT....TGGCTAGTGTAGCC .... TCCGCTAGAATGC...
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Replicacin del ADN

Helicasa: rompe los puentes de
hidrgenos y separa las cadenas
de ADN
Topoisomerasa: elimina la
supertorsin que se origina por la
apertura del ADN. Corta una de
las hebras, desenrrolla y vuelve a
unirla.
Protenas estabilizadoras de
cadena simple: se unen a hebras
abiertas del ADN
(monocatenarias) evitando que se
vuelvan a unir entre ellas,
permitiendo que las cadenas sean
utilizadas como moldes para la
replicacin.
56
Replicacin del ADN
Primasa: sintetizan una

secuencia corta de ARN
(primer) que es necesaria para
que las ADN polimerasas
empiencen a agregar
nucleotidos.
ADN polimerasa III: a partir

del primer (cebador), el ADN
polimerasa empieza a agregar
nucleotidos en sentido 5-3.
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Cadena lder
5 3'
Enzimas hacen crecer la nueva cadena de ADN '
Overall direction
of replication
slo en direccin 5 a 3.
La cadena lder es sintetizada de forma contnua.
Solo se necesita de un primer para su sntesis. Horquilla de

replicacin
ADN polimerasa III
Helicasa
La cadena progenitora provee el

La cadena lder es
molde para sinteitzar la nueva
sintetizada continuamente
cadena
3' en direccin 5' a 3' por la
ADN polimerasa III. 5'
5'
58
Cadena retrasada
5' 3'
Como la polimerasa solo puede Primasa

Overall direction
sintetizar en sentido 5a 3, la cadena

of replication
retrasada se sintetiza por pedazos

(fragmentos).
A medida que el ADN se abre, la

ADN polimerasa III extiende
el primer con fragmentos
primasa va agregando primers para cortos de ADN y forman los
fragmentos de Okazaki
que la ADN polimerasa pueda agregar
Helicasa
nucletidos.
La cadena retrasada se replicacin de

forma discontinua (Fragmentos de
Okasaki). Primer
(RNA )
La nueva cadena complementaria se

3' sintetiza discontinuamente en
fragmentos de 1000-2000 bp largo 5'
29
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Fragmentos Okazaki
5' 3'
Overall direction
ADN polimerasa I: elimina los primers de
of replication
ARN y los reemplaza con nucletidos de
ADN.
ADN ligasa: Une los fragmentos de

Okasaki , sella los huecos en la cadena
retrasada.
ADN polimerase I
ADN ligasa une

los fragmentos
vecinos en
cadenas largas.
La cadena retrasada est

formada por fragmentos
3' (Fragmentos de Okazaki), los
cuales despus se unen. 5'
3'
60
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E. coli Ligasa
Rotura en la cadena despus del ltimo

nucleotido sustituido.
Ligasa, sella la rotura

Enlace fosfodister, entre el 3-OH del
ultimo reemplazo y el 5-P del primero.
62
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http://www.youtube.com/watch?v=-EGKrYdQEHQ
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Componentes necesarios para la replicacin en clulas

bacterianas
Facultad http://www.mhhe.com/sem/Spanish_Animations/sp_dna_replication.swf
de Medicina Humana - BCyM 2016 - II 22/10/2016
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Modos de Replicacin
Replicones (unidades de replicacin), Origen de replicacin
Replicacin Theta:
ADN circular, desenrrolla en el origen de replicacin (1) para formar ssDNA

(moldes) para las nuevas. Burbujas de replicacin.
Replicacin por circulos rodantes
Virus, factor F de E. coli, un origen de replicacin.
Replicacin eucariota lineal
A partir de miles de origenes de replicacin,

forma simultnea.
66
Replicacin por crculos rodante
Replicacin Theta ()
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22/10/2016
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Replicacin del ADN procariota
Iniciacin
Un nico oriC (245 pb E.coli)
Protenas de iniciacin se unen al oriC
Desenrollamiento seccin corta del ADN
Permite que la helicasa y las protenas de unin a cadena simple se unan al ADN.
68
Replicacin Lineal
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ADN POLIMERASAS
- ADN polimerasa : actividad primasa, inicia la sntesis mediante ARN primer y adiciona 30-40 nucleotidos de ADN.
- ADN polimerasa (delta): continua sntesis
70
Diferencias de replicacin del ADN

Procariotas Eucariotas
- Un solo sitio de origen - Varios sitios de origen
- Una solo burbuja de replicacin - Varias burbujas de replicacin
- Replicacin bidireccional y/o - Replicacin bidireccional
unidireccional
- ARN cebador formado por 50 - ARN cebador con 9 nucletidos
nucletidos
- Fragmentos de Okasaki con 200 - Fragmentos de Okasaki de 1000 a
nucletidos 2000 nucletidos
- La velocidad de replicacin 500 - La velocidad de replicacin 50
nucletidos por segundo nucletidos por segundo
- No tiene histonas - Duplicacin de histonas
35
22/10/2016
71
72
GRACIAS!!!
36

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Ncleo / Replicacin del ADN

Las clulas diferenciadas (eucariotas o procariotas) contienen

Es muy importante que las clulas controlen la expresin gnica,

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Morfologa de los ncleos celulares

Descubierto por Robert Brown, 1831.

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ESTRUCTURA DEL NCLEO

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Ac. Nucleicos, protenas, enzimas y minerales

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Continuacin del RER.

Donde se fusiona la envoltura nuclear :

Aislar y proteger el material gentico de

Permite el intercambio selectivo de

En la superficie interna de la envoltura

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Complejo del Poro Nuclear

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(a) Cara citoplsmica de la envoltura nuclear que muestra los

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Complejo del poro nuclear

Fusiones de la envoltura nuclear.

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Trafico molecular a travs del complejo del poro nuclear

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Transporte a travs del poro

Protenas para ensamblar los

Molculas exportadas desde el ncleo

Nuclear export signal

FIGURA 12-7 Importacin de protenas del

(b) La nucleoplasmina es una protena presente

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Matriz acuosa (80% agua) del interior del

Estructura similar al citoplasma celular.

Se dan los procesos de replicacin del

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Formada por tres zonas: fibrilar denso,

Tiene lugar la sntesis del ARN

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CF: centro fibrilar

Procesamiento tardo de los ARNr y

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CFD Componente fibrilar denso:

Recientemente se obtuvieron evidencias

Participara en el transporte y/o

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Varios cidos nucleicos y antgenos virales

Participa en la biognesis de la partcula de

Participa en el control del envejecimiento celular.

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Unidad bsica : nucleosomas

Dos tipos: Eucromatina y

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Composicin qumica de la cromatina

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EMPAQUETAMIENTO DE LA CROMATINA: ESTRUCTURA