EVALUACIN DEL CONTROL BIOLGICO DE Periplaneta americana (Blattidae,

Linnaeus) POR INGESTIN DEL HONGO Metarhizium anisopliae (Clavicipitaceae,

Metchnikoff) Y CIDO BRICO.

LAURA YAMILE GUERRERO GARCA

LUZ NGELA CADENA FERNNDEZ

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
TECNOLOGIA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
BOGOTA D.C
2016
 EVALUACIN DEL CONTROL BIOLGICO DE Periplaneta americana (Blattidae,
Linnaeus) POR INGESTIN DEL HONGO Metarhizium anisopliae (Clavicipitaceae,
Metchnikoff) Y CIDO BRICO.

LAURA YAMILE GUERRERO GARCA

Cdigo 20092085021
LUZ NGELA CADENA FERNNDEZ
Cdigo 20092085009

Proyecto de grado en modalidad de investigacin presentado como requisito parcial para optar
por el ttulo de
TECNLOGAS EN SANEAMIENTO AMBIENTAL

DIEGO TOMAS CORRADINE MORA

Mdico Veterinario
M.Sc. Salud Pblica
Director

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
TECNOLOGIA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
BOGOTA D.C
2016
 Nota de aceptacin:

______________________________

______________________________

______________________________

______________________________

______________________________

______________________________

______________________________
Firma del director

______________________________
Firma del jurado

Bogot D.C., Julio de 2016

 Agradecimientos

A nuestros padres que siempre sern gua en el camino, fuerza en la adversidad, ejemplo de

perseverancia y a quienes queremos hacer sentir orgullosos con nuestros logros.

A nuestro director de grado Diego Tomas Corradine, por su constante apoyo en todo este largo

camino, y su supervisin durante todo el proyecto, para que tuviese los mejores resultados.

A todos los profesores que hicieron parte de nuestra formacin como profesionales integrales,

e incentivaron la bsqueda de nuevas tecnologas sustentables, que acrecienten nuestra labor

como saneadores ambientales.

 Contenido

Resumen ......................................................................................................................................... 10
Abstract .......................................................................................................................................... 11
Introduccin ................................................................................................................................... 12
1. Objetivos ................................................................................................................................ 13
1.1 Objetivo general ................................................................................................................... 13
1.2 Objetivos especficos ........................................................................................................... 13
2. Marco terico ......................................................................................................................... 14
2.1 Marco conceptual. ............................................................................................................... 15
2.2 Cucaracha Periplaneta americana ..................................................................................... 15
2.3 Ciclo de vida de la Periplaneta americana ......................................................................... 16
2.4 Clasificacin taxonmica de la Periplaneta americana. .................................................. 19
2.5 Morfologa de la cucaracha Periplaneta americana. ......................................................... 20
2.6 Importancia en la salud pblica........................................................................................... 23
2.7 Mtodos de control .............................................................................................................. 25
2.7.1 Control qumico ............................................................................................................ 25
2.7.2 Estrategias de bajo riesgo para el control de cucarachas. ............................................ 33
2.7.3 Control biolgico ......................................................................................................... 35
2.8 Resistencia y adaptabilidad. ................................................................................................ 37
2.9 Hongos Entomopatgenos ................................................................................................... 42
2.10 Mecanismo de accin de los hongos entomopatogenos. ................................................... 45
2.11 Factores que regulan el crecimiento de hongos entomopatogenos. ................................... 48
2.12 Taxonoma de Metarhizium anisopliae. ............................................................................. 49
2.13 Caracterizacin morfolgica del hongo Metarhizium anisopliae. ..................................... 51
2.14 Ciclo de vida de Metarhizium anisopliae........................................................................... 54
2.14.1 Colonizacin y reproduccin. ..................................................................................... 54
2.15 Usos del Hongo Metarhizium anisopliae ........................................................................... 56
2.16 Marco legal......................................................................................................................... 57
3. Metodologa ........................................................................................................................... 60
3.1 Obtencin de la cucaracha Periplaneta americana.............................................................. 60
3.2 Crianza de las cucarachas .................................................................................................... 61
3.3 Diseo de las jaulas. ............................................................................................................. 61
3.4 Obtencin del hongo Metarhizium anisopliae ..................................................................... 62
3.5 Prueba de reactivacin del hongo ........................................................................................ 62
 3.6 Prueba de germinacin ......................................................................................................... 63
3.7 Preparacin de la solucin madre del hongo Metarhizium anisopliae ................................ 64
3.8 Preparacin de las concentraciones del hongo Metarhizium anisopliae para bioensayos. .. 65
3.9 Bioensayos. .......................................................................................................................... 66
3.10 Lecturas de mortalidad ...................................................................................................... 67
3.11 Estadstica .......................................................................................................................... 68
4. Resultados .............................................................................................................................. 70
4.1 Resultados prueba de germinacin de la cepa del hongo Metarhizium anisopliae.............. 70
4.2 Resultados prueba de reactivacin del hongo ...................................................................... 70
4.3 Bioensayos T1 concentracin (106), T2 concentracin (109) y T3 concentracin (1012);
resultados de mortalidad tratamientos con solo accin del hongo ............................................. 71
4.4 Bioensayo T4 resultado con el cido brico ....................................................................... 73
4.5 Resultados de mortalidad bioensayos T5 concentracin 109 ms cido brico y T6
concentracin 1012 ms cido brico .......................................................................................... 74
5. Anlisis estadstico ..................................................................................................................... 76
5.1 Comparaciones de varianza (ANOVA) entre grupos experimentales ................................. 76
6. Anlisis de resultados ............................................................................................................. 80
Conclusiones .................................................................................................................................. 83
Recomendaciones ........................................................................................................................... 84
Bibliografa.90
 ndice de tablas

Tabla 1 Clasificacin taxonmica de la Cucaracha domstica Periplaneta

americana ....................................................................................................................................... 19

Tabla 2 Agentes patgenos que trasmite la cucaracha Periplaneta

americana, ...................................................................................................................................... 23

Tabla 3 Especies de helmintos que trasmite la cucaracha Periplaneta americana ................. 24

Tabla 4 Especies de protozoarios patgenos que trasmite la cucaracha Periplaneta

americana ............................................................................................................................... 24

Tabla 5 Insecticidas Orgnicos e inorgnicos ................................................................................ 26

Tabla 6 Factores que influyen en la velocidad de desarrollo de resistencia .................................. 38

Tabla 7 Concentracin de la Dilucin 10 6, prueba de germinacin ............................................. 64

Tabla 8 resultado de prueba de germinacin. ................................................................................ 70

Tabla 9 Anlisis de ANOVA para los bioensayos de los tratamientos individuales ..................... 76

Tabla 10 Anlisis de ANOVA para los bioensayos de los tratamientos en accin ........................ 77

Tabla 11 Resultados de la prueba T para medias pareadas de los 3 tratamientos principales ....... 78
 ndice de figuras

Figura 1. Cucaracha Periplaneta americana................................................................................. 16

Figura 2. Ootecas de cucaracha Periplaneta americana ............................................................... 16

Figura 3. Diferentes etapas de desarrollo de Periplaneta americana ............................................ 17

Figura 4. Ninfas intermedias de Periplaneta americana ............................................................... 18

Figura 5. Partes del cuerpo de la cucaracha. ................................................................................. 20

Figura 6. Vista lateral de hembra y macho de Blatella germanica, indicando los segmentos

abdominales. ........................................................................................................................... 21

Figura 7. Partes internas de hembra de Periplaneta americana. ................................................... 22

Figura 8. Estructura y composicin de la cutcula de insectos y forma de penetracin de hongos

entomopatgenos .................................................................................................................... 47

Figura 9. Hongos entomopatgenos divisin taxonmica. ............................................................ 50

Figura 10. Conidias de la especie Metarhizium anisopliae. .......................................................... 50

Figura 11. Insecto atacado por la enfermedad muscardina verde del hongo Metarhizium

anisopliae. .............................................................................................................................. 52

Figura 12. Hongo Metarhizium anisopliae color olivo a amarillo verdoso. .................................. 53

Figura 13. Hongo Metarhizium anisopliae color miel o amarillo plido y pigmento amarillo ..... 54

Figura 14. Hongo Metarhizium anisopliae registro en Colombia ................................................. 57

Figura 15. Recoleccin de ninfas y adultos de la cucaracha Periplaneta americana. ................... 60

Figura 16. Conservacin y alimentacin de ninfas y adultos de la cucaracha Periplaneta

americana. .............................................................................................................................. 61

Figura 17. Diseo de las jaulas para la conservacin de ninfas y adultos. ..................................... 62

Figura 18. Procedimientos para la realizacin de los bioensayos. ................................................. 67

Figura 19. Infeccin del hongo Metarhizium anisopliae en especmenes adultos y en ninfas de la

cucaracha Periplaneta americana.. ........................................................................................ 68

Figura 20. Cucarrn (coleptera) afectado por la patognesis del hongo Metarhizium anisopliae..

................................................................................................................................................ 71

Figura 21. Resultados porcentajes de mortalidad tratamientosT1 (concentracin 106), T2

(concentracin 109) y T3 (Concentracin 1012). Fuente las autoras. ..................................... 72

Figura 22. Porcentajes de mortalidad tratamiento T4 con slo accin del cido brico. ............... 73

Figura 23. Bioensayo T5 (concentracin 109) y T6 (concentracin 1012) ms cido brico

resultados de mortalidad......................................................................................................... 74
 10

Resumen

En zonas rurales es comn utilizar insecticidas o plaguicidas para combatir la infestacin de

insectos que afectan la salud pblica. Una de las plagas ms difciles de controlar son las

cucarachas por sus mltiples capacidades de adaptacin y resistencia a mtodos de control. Sin

embargo el uso de estos insecticidas no son benficos para el medio donde son aplicados, ni para

la salud de quien los manipule, es por eso que se evalu el uso del hongo entomopatgeno

Metarhizium anisopliae como alternativa para el control biolgico de la cucaracha Periplaneta

americana, una cucaracha comn en las viviendas, y que son un peligro inminente para la salud

pblica. Para mejorar la accin del hongo en un corto periodo de tiempo, se analiz la accin

conjunto del cido brico, y a la vez se evalu el uso de este como posible insecticida para la

cucaracha. Se utiliz el hongo en solucin acuosa para garantizar su consumo, y se identific que

la dosis ms adecuada est entre 109 conidias/ml y 1012 conidias/ml, en un tiempo de exposicin

de 5 das al tratamiento, para garantizar un porcentaje de letalidad mayor al 50%. Adems que el

cido brico es el mejor mtodo inorgnico para el control de la cucaracha, eliminando el 90% de

ellas en 3 das en combinacin con un cebo atrayente (comida). Se evidenci que se puede

potencializar la accin del hongo, usando en conjunto con el cido brico y un fagoestimulante,

el cual garantiza que las cucarachas van a tener contacto directo con el polvo y el hongo.

Ninguno de los mtodos anteriormente utilizados representa un peligro para la salud pblica, ni

para plagas secundarias que se puedan ver afectadas de manera indirecta, por esta razn se puede

contemplar el uso de entomopatogenos como un mtodo de biocontrol sustentable y eficiente,

para la cucaracha Periplaneta americana.

PALABRAS CLAVE: Biopesticidas, Control biolgico, insecticida, plagas, cucarachas,

cucaracha Periplaneta americana, hongo entomopatgeno, hongo Metarhizium anisopliae.

 11

Abstract

In rural areas it is common to use insecticides or pesticides to control insect infestation

affecting public health. One of the most difficult pests to control cockroaches is multiple

capabilities for their adaptation and resistance to control methods. However, the use of these

insecticides are not beneficial to the environment in which they are applied, or health of the

person who handled, is why the use of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae

was evaluated as an alternative for the biological control of Periplaneta american ockroacha

common cockroach in homes. To improve the action of the fungus in a short time, the whole

action of boric acid was analyzed, and while using this as possible cockroach insecticide was

evaluated, considering that does not affect public health. the fungus was used in aqueous solution

to ensure its consumption, and identified the most appropriate dose is between 109 conidia / ml

and 1012 conidia / ml, in an exposure time of 5 days following treatment, to ensure higher

percent lethality 50%. Besides that boric acid is the best method for inorganic cockroach control,

eliminating 90% of them in 3 days in combination with an attractant (food). It was evidenced that

can potentiate the action of the fungus, used in conjunction with boric acid and a phagostimulant,

which guarantees that cockroaches will have direct contact with dust and fungus. None of the

previously used methods represents a danger to public health or to secondary pests that may be

affected indirectly, for this reason you can see the use of entomopathogenic as a method of

sustainable and efficient biocontrol, for Periplaneta american cockroach.

KEYWORDS: Pesticides, Biological control, insecticide, pest, cockroaches, cockroach

Periplaneta americana, entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae.

 12

Introduccin

Para el cuidado del medio ambiente se necesitan tecnologas ecolgicas, que eviten que las

plagas sean un problema para la salud pblica. El uso de plaguicidas constituye uno de los

principales problemas para el medio ambiente y las personas que los manipulan, es muy frecuente

su uso para plagas como la cucaracha.

Periplaneta americana se considera una plaga para la salud pblica porque enfermedades

producidas por organismos como las bacterias, se pueden establecer en el cuerpo de las

cucarachas y propagarse en la comida. Diversas y severas enfermedades de tipo digestivo, se han

transmitido de manera experimental, enfermedades como diversos tipos de gastroenteritis son

transmitidas por las cucarachas provocando nauseas, dolores abdominales, vmito, diarrea,

disentera y otras enfermedades. El excremento y mudas tambin contienen numerosos alrgenos

que afectan los ojos y la piel de los seres humanos (Ponce, 2005).

En el presente trabajo se busca una alternativa ecolgica y eficiente para su biocontrol, con el

uso de hongos entomopatgenos, en este caso el hongo Metarhizium anisopliae, quien en

estudios anteriores (Ramrez, 2013) Cebos para el Control de la cucaracha alemana Blattella

germanica (Dictyoptera: Blattellidae) formulados con hongos entomopatgenos y cido brico

demostr ser efectivo para el control de la cucaracha alemana, en compaa y en ausencia del

cido brico. En este proyecto se realizaron los cebos y adicion el hongo en forma de polvo,

adems del cido.

En el presente proyecto se evalu la capacidad infectiva del hongo en forma acuosa, con

concentraciones conocidas y con el cido brico mezclado con la comida y sin ella, para

garantizar que el insecto consuma el hongo y as halla un mejor efecto sobre el insecto.
 13

1. Objetivos

1.1 Objetivo general

Evaluar el control biolgico de la Periplaneta americana (cucaracha americana) por ingestin

de una solucin acuosa del hongo Metarhizium anisopliae con y sin cido brico, como

alternativa del control a nivel de laboratorio.

1.2 Objetivos especficos

Identificar la capacidad de infeccin del hongo Metarhizium anisopliae por ingestin de

una solucin acuosa en Periplaneta americana a nivel de laboratorio.

Determinar cul es la concentracin ms efectiva del hongo Metarhizium anisopliae en

nmero de Conidias/ mililitro para el control de la cucaracha americana Periplaneta americana

a nivel de laboratorio.

Evaluar la efectividad de la accin patgena del hongo Metarhizium anisopliae cuando

se usa de manera conjunta con cido brico para el control de Periplaneta americana.
 14

2. Marco terico

Las cucarachas representan una de las principales plagas urbanas a nivel mundial por ser

transmisores mecnicos de microorganismos patgenos, adems de inducir reacciones alrgicas a

individuos susceptibles. Se conocen ms de 45 patgenos que pueden transmitir a travs de patas,

heces y regurgitamientos (Salehzadeh, 2007).

Para su control se aplican pesticidas e insecticidas qumicos, pero se ha comprobado el

desarrollo de resistencia a stos, por lo que se dificulta su control, adems de ser txicos para el

hombre, el ambiente e insectos no plaga.

El control con qumicos inorgnicos, en su mayora desecadores, es adecuado y poco txico,

pero de baja residualidad. El uso de hongos entomopatgenos en el control de plagas urbanas ha

sido enfocado a aquellas especies de importancia dentro de la Salud Pblica. Se ha demostrado

que las cucarachas son susceptibles a dos especies de hongos principalmente, B. bassiana e

Isarea (Paecilomyces) farinosus (Damas Buenrostro, 2012).

En la investigacin de Ramrez (2013) se presenta como el hongo entomopatgeno

Metarhizium anisopliae se aplica para el control de cucarachas de la especie Blattella germanica.

A pesar de que el uso de Metarhizium anisopliae ha dado resultados satisfactorios para el control

de este tipo de plagas, hay muy pocos estudios frente a Periplaneta americana y el hongo

Metarhizium anisopliae.

Es necesario implementar nuevas alternativas para alentar el control biolgico de este tipo de

plagas, incrementando la velocidad de muerte del insecto, tratando de mejorar la efectividad de

los hongos entomopatgenos ya que ocasionan una muerte lenta y quiz, desagradable a la vista

del consumidor. Ya que en el caso del hongo Metarhizium anisopliae el insecto infectado

presenta una apariencia verdosa ocasionada por la enfermedad denominada muscardina verde,
 15

que es la formacin de un micelio blanquecino y posteriormente masas de conidios, en forma de

columna de color verde (Martnez de Carrillo, lvarez , & Ramos, 1996).

2.1 Marco conceptual.

2.2 Cucaracha Periplaneta americana

Uno de los insectos ms comunes es la cucaracha, se han encontrado fsiles los cuales

evidencian que las cucarachas han existido ms o menos desde 300 millones de aos. Son uno de

los grupos de animales ms exitosos, debido a que las cucarachas se adaptan fcilmente al medio

ambiente en el que estn y se adaptan con facilidad a vivir junto con los humanos. Tambin son

uno de los insectos que ms se encuentran al rededor del mundo ya que se pueden encontrar

cerca de 3,500 especies de cucarachas (De jorge, 2010).

La cucaracha de la especie Periplaneta americana (Figura 1) se caracteriza por ser una

especie grande, los adultos tienen un tamao que van desde los 34 a los 53 mm de largo, son de

color rojizo-marrn con variaciones substanciales en patrones de coloracin claro a oscuro, en la

superficie superior del pronoto tiene un listn marrn- amarillo. Ambos, machos y hembras,

tienen alas completas. A diferencia de las hembras, las alas de los machos se extienden un poco

despus del abdomen. Las ninfas son similares en apariencia pero ms pequeas y no tienen alas.

La cucaracha Periplaneta americana es capaz de volar pero, lo hacen en raras ocasiones (Jacobs,

2002).
 16

Figura 1. Cucaracha Periplaneta americana. Imagen tomada de http://plagastop.com.

2.3 Ciclo de vida de la Periplaneta americana

La cucaracha pertenece al grupo de insectos con metamorfosis incompleta o hemimetbola,

es decir del huevo nace la larva que se llama ninfa idntica al insecto adulto, consta de tres

etapas, huevo, ninfa en sus diversos estadios y el adulto. Los huevos de las cucarachas estn

acomodados en forma pareada, dentro de una cmara llamada ootecas (Figura 2), la cual presenta

forma de frijol y es de estructura coricea, la cual puede ser expulsada o bien la hembra puede

traerla consigo hasta la eclosin de las ninfas (Ponce, 2005). Las hembras sueltan o pegan las

ootecas de 8 mm de largo a sustratos en unas horas o en das despus de su formacin. Cada

ooteca tiene unos 12-16 embriones.

Figura 2. Ootecas de cucaracha Periplaneta

americana. Foto tomada por autoras.
 17

Las ninfas completan su desarrollo en 13 a 14 meses, pasando por 13 mudas (Figura 3). Los

adultos viven unos 15 meses.

Figura 3. Diferentes etapas de desarrollo de Periplaneta

americana, Imagen tomada de http://www.plagiser.com.

La cucaracha Periplaneta americana es una especie peri-domstica, es decir puede vivir con

o sin la ayuda directa de las actividades humanas; como la mayora de los artrpodos necesitan de

mucha agua para vivir, esta especie en especial requiere ambientes de mucha humedad, pueden

sobrevivir a ambientes secos siempre y cuando tenga acceso a agua. Las cucarachas son activas

por la noche cuando buscan alimento, agua y se aparean. Pueden ser vistas durante el da

principalmente cuando hay una alta infestacin o cuando les falta alimento y agua (Ogg, Ogg,

Ferraro, & Jeff, 2006). Las cucarachas pueden exhibir preferencias y discriminar cuando tienen

otra opcin. Cuando estas son privadas de comida y agua, ellas pueden vivir por 5 das hasta 42

das (hembra Periplaneta americana). Cuando se les ofrece comida seca pero no agua viven mas

o menos 5 das, pero si solo se les ofrece agua suelen vivir ms tiempo. La mayora de especies

suelen vivir de dos a tres meses solamente con agua. Son tpicos carroeros y omnvoros, y
 18

comen gran variedad de materia orgnica muerta o en descomposicin, que incluye excrementos

de aves y algunas pueden digerir la madera. Otras comen plantas y tambin es usual el

canibalismo y la depredacin (Hutchins, 2003).

Los sitios en los que ms frecuentemente se multiplican son edificios, ticos, huecos en los

rboles, los sistemas de alcantarillado municipal, pozos spticos, etc. La cucaracha Periplaneta

americana, al ser del orden Blattodea, es omnvora en condiciones ptimas la hembras pueden

vivir de 14 a 20 meses, algo ms que los machos. La cucaracha Periplaneta americana vive

generalmente en reas hmedas y con temperaturas clidas, alrededor de 29 C, no soportando

las temperaturas bajas (Arce & Enciso, 2009).

Las fases inmaduras o ninfas, (Figura 4) son ms pequeas y ms oscuras que las adultas, y

las ninfas tienen una raya caf claro a lo largo del rea media de la espalda. Como se reproducen

rpidamente, son muy difciles de controlar.

Una sola hembra apareada puede producir una infestacin de miles de cucarachas nuevas en

menos de un ao (Ogg, Ogg, Ferraro, & Jeff, 2006).

Figura 4. Ninfas intermedias de Periplaneta

americana. Imagen tomada por autoras.

Existen tres tipos de comportamiento social de las cucarachas: gregarias (agregacin),

subsocial (atencin para las ninfas), y solidaria (comunicacin especialmente durante el cortejo)
 19

que es mediada por feromonas. La visin aparentemente juega un papel pequeo o insignificante

en el reconocimiento sexual, el cortejo y la cpula, a pesar de que algunas especies tienen ojos

grandes, bien desarrollados y pigmentados. Un ejemplo del comportamiento gregario, se ha

encontrado en algunas familias dpteras las cuales presentan grupos mixtos donde se integran

larvas con adultos, sean o no padres y hermanos, las especies domsticas Periplaneta americana

(linnaeus) y Blattella germanica (linnaeus), son ejemplos famosos de este tipo de conductas

(Arce & Enciso, 2009).

Para Mc Gavin, (2002), existen algunos registros de la predacin de las cucarachas. Entre los

artrpodos, hormigas y araas son los ms importantes predadores del trpico. Pedazos de

cucarachas han sido encontrados en el estmago de peces, salamandras, ranas, sapos, tortugas y

lagartos. Muchas especies de aves comen estos insectos, y un ave (cucarachero) es aparentemente

especializado en cucarachas. Algunos mamferos predadores son zarigeyas, puercoespines,

simios, roedores y gatos. La clasificacin taxonmica de la cucaracha se observa en la tabla 1.

2.4 Clasificacin taxonmica de la Periplaneta americana.

Tabla 1

Clasificacin taxonmica de la Cucaracha domstica Periplaneta americana

Reino Animal

Filum Artrpodo

Subfilum Hexapodo

Clase Insecta

Subclase Pterygota insecto alado

Infraclase Neoptera insecto con alas plegadas

Orden Dictyoptera
 20

Suborden Blattaria

Superfamilia Blattoidea

Familia Blattidae

Subfamilia Blattinae

Gnero Periplaneta Burmeister, 1838

Especie Periplaneta americana (Linnaeus, 1758)

Nota: Adaptada Arce Barrera, Alejandro (2009).

2.5 Morfologa de la cucaracha Periplaneta americana.

Las cucarachas son insectos (Phylum Arthropoda, Clase Insecta) pertenecientes al suborden

Blattaria (Figura 5). La morfologa de su cuerpo quitinizado y aplanado dorsoventralmente est

dividida en cabeza, trax y abdomen. En la cabeza se deben distinguir dos antenas largas y

filiformes, dos ojos compuestos y un aparato bucal masticador. El trax tiene tres segmentos. El

primero de ellos pronotum esconde casi toda la cabeza de la cucaracha, los diferentes patrones

de colocacin de esta placa quitinizada se pueden confundir con un par de ojo. Del segundo

segmento mesonotum y del tercero metanotum se desprenden las alas. El primer par de alas est

modificado en tegminas (alas de apariencia coricea). No todas las especies tienen las alas

completamente desarrolladas, pues tambin se presentan adultos con alas cortas (braqupteras) o

ausentes (pteras). Sin embargo, se debe tener cautela, pues muchos individuos pteros

corresponden tan solo a los estados inmaduros (Chapman, 1998).

Figura 5. Partes del cuerpo de la cucaracha, Imagen tomada de http://www.bioticanet.com.

 21

Siguiendo con estas caractersticas, cada uno de los tres segmentos torcicos se originan un

par de patas delgadas y espinosas para as tener un total de seis que les permiten correr casi sobre

cualquier tipo de superficie, caminar en el techo, o escalar en materiales tan lisos como el vidrio,

ayudndose con estructuras especializadas (uas) al final de sus tarsos (Chapman, 1998). El

abdomen consiste de 10 segmentos, al final de ste se encuentran rganos sensoriales, los cerci

(Figura 6), que responden tanto a movimientos del aire como a vibraciones y en los machos

adicionalmente a los cerci, se observan otros rganos sensoriales llamados estilos que proveen un

potencial tctil durante los intentos de cpula. Los segmentos finales del abdomen difieren entre

machos y hembras, los primeros tienen rganos que vierten durante la cpula y que agarran a la

hembra; stas por su parte tienen apndices que utilizan en la ovoposicin y la formacin de las

ootecas (Jaramillo & Crdoba, 1999).

Figura 6. Vista lateral de hembra y macho de Blatella germanica, indicando los

segmentos abdominales, imagen tomada de Bell, (1981).
 22

Mucho ms pequeos que los de los vertebrados pero no menos eficientes son sus sistemas

internos. Estos le proveen a la cucaracha respiracin, circulacin, digestin, excrecin,

reproduccin y funciones sensoriales. Las cucarachas y todos los insectos respiran por medio de

un sistema de trqueas (Figura 7). Este es un sistema de tubos que salen al exterior en aberturas

denominadas espirculos los cuales se encuentran distribuidos por pares en cada uno de los

segmentos torcicos y abdominales que estn conectados internamente a unos tubos o trqueas

que se extienden por todos el cuerpo; estos tubos terminan en porciones cerradas y ms pequeas

(traqueolas) que penetran los tejidos (Jaramillo & Crdoba, 1999).

Figura 7. Partes internas de hembra de Periplaneta americana, imagen tomada de Bell,

(1981).

La circulacin de este tipo de insectos es abierta y carece de venas o arterias (Mc Gavin,

2000). Los fluidos corren a travs de la cavidad corporal llevando nutrientes del sistema digestivo

a los tejidos y removiendo desechos que son llevados a los rganos excretores. Una vez que la

comida pasa a travs de las partes bucales y recorre todo el sistema digestivo realizando la

digestin y la absorcin de nutrientes, los desechos son excretados en forma de heces por el ano.

La reproduccin involucra machos que producen esperma y hembras productoras de huevos,

la fertilizacin es interna. El sistema nervioso de las cucarachas consta de dos cerebros ya que
 23

poseen dos pares largos de ganglios nerviosos en la cabeza, y un ganglio simple al final del

abdomen. Estos dos centros sensoriales estn conectados por fibras gigantes. Estas fibras llevan

los impulsos diez veces ms rpido que los nervios ordinarios. Esta caracterstica es lo que las

hace ser tan rpidas y hbiles (Jaramillo & Crdoba, 1999).

2.6 Importancia en la salud pblica

Las cucarachas son importantes transmisores mecnicos de importancia en salud pblica, por

ser portadoras de microorganismos patgenos para el hombre. Las especies de mayor

importancia en el continente americano son Periplaneta americana y Blattella germanica.

Las cucarachas pueden transmitir agentes patgenos como bacterias (Tabla 2), hongos,

helmintos (Tabla 3), protozoarios (Tabla 4), y virus de manera mecnica, causando disenteras,

gastroenteritis y neumonas, entre otras. Adems, se ha relacionado las reacciones de tipo

alrgicas en humanos con la presencia de heces fecales, saliva, cutcula y huevos de las

cucarachas en individuos susceptibles (Damas Buenrostro, 2012).

Algunos de los agentes patgenos que trasmite la cucaracha son:

Tabla 2

Agentes patgenos que trasmite la cucaracha Periplaneta americana

Bacillus subtilis agente causal de la conjuntivitis

Escherichia coli Agente causal de la diarrea gastroenteritis y

envenenamiento de alimentos
Salmonella,

Salmonella typhi,
Agente causal de la tifoidea

Nota: Adaptada Ramrez Prez, (1989).

 24

Los huevos de siete especies de helmintos han sido observados en asociacin natu ral con

las cucarachas. En la tabla 3 se presentan a las siguientes especies.

Tabla 3

Especies de helmintos que trasmite la cucaracha Periplaneta americana

gusanos-gancho (Ancylostoma duodenale)

Necator americanus

gusano redondo gigante (Ascaris lumbricoides)

Ascaris

gusano-alfiler (Enterobius vermicularis)

gusanos-cinta (Hymenolepis spp.)

gusano-ltigo (Trichuris trichiura).

Nota: Adaptada Ramrez Prez, (1989).

Se han sealado cinco protozoarios patgenos del hombre de los cuales pueden ser

portadoras las cucarachas en la tabla 4 se incluyen las siguientes especies:

Tabla 4

Especies de protozoarios patgenos que trasmite la cucaracha Periplaneta americana

Balantidium coli

Entamoeba histolytica

Giardia intestinalis

Toxoplasma gondii

Trypanosoma cruzi

Nota: Adaptada Ramrez Prez, (1989).

 25

Las alergias en los seres humanos pueden presentarse por cuatro maneras (Ramrez

Prez, 1989):

Por contacto con el insecto cuando camina sobre la persona o se toca.

Por inhalacin de sustancias emitidas por las cucarachas.

Por ingestin de alrgenos cuando se comen alimentos parcialmente

consumidos por cucarachas.

Por picadura, cuando los alrgenos entran en el organismo al morder el insecto al

hombre. Si una cucaracha se desliza durante la noche en la boca de alguna persona en busca

de partculas de alimento, se desarrolla en la zona de contacto lo que se conoce con el

nombre de Herpes blattae.

Las cucarachas tambin pueden ser provocadoras del asma. Algunas investigaciones

cientficas han demostrado que del 23 al 60 por ciento de las personas que viven e n las reas

urbanas y con asma eran alrgicas a las cucarachas. Aproximadamente el 50 por ciento de

los casos de asma son causados por alergias. Estos estudios han demostrado que la mayora

de los asmticos que son alrgicos a los alrgenos de las cucarachas tendrn un ataque de

asma despus de una sola inhalacin de alrgenos (Ogg et al., 2006).

2.7 Mtodos de control

2.7.1 Control qumico

El uso del control qumico es el primer recurso contra plagas. Sin embargo, se dificulta su uso

debido al potencial desarrollo de resistencia de estos insectos a los insecticidas o plaguicidas

qumicos de uso comn, tambin los daos a la salud y el medio ambiente (Stephenson, 1993).
 26

Los plaguicidas o Insecticidas son aquellas sustancias o mezclas, en cualquier estado fsico,

cuya finalidad sea la de controlar, combatir y prevenir plagas o enfermedades y en general tienen

el objetivo de proteger al hombre de organismos que afectan su ambiente, animales o alimentos

(Manahan, 2007).

En el transcurso del tiempo se han utilizado una amplia gama de insecticidas y plaguicidas de

diferentes grupos qumicos, la tabla 5 muestra una lista de los plaguicidas ms usados y algunas

de sus caractersticas ms importantes.

Tabla 5

Insecticidas Orgnicos e inorgnicos

Clase Qumica Insecticidas Formulacin Modo De Accin Daos a la Salud

D.D.T. Polvo, lquido Sistema nervioso Pueden producir cncer,
Aldrin Sinapsis colinrgica esterilidad, abortos y
Diedrin defectos de nacimiento,
Clordano algunos se acumulan en
Tiodan la grasa del cerebro , en
Lindano el hgado y la piel de
Organoclorados Mirex personas y animales.
Heptacloro Tambin afectan a los
P.C.N.B peces, camarones,
almejas y aves que se
alimentan de
organismos
contaminados.
Bendiocard Polvo, aerosol, Sistema nervioso La mayora son
Dioxacarb spray, cebo inhibidor de insecticidas y
Propoxur Acetilcolinesterasa nematicidas, algunos
Temik permanecen mucho
Lannate tiempo en el ambiente,
Carbamatos Baygn tambin afectan el
Sevn sistema nervioso central
Vidate y producen muchas
Furadn intoxicaciones a veces
mortales en personas y
animales.

Clase Qumica Insecticidas Formulacin Modo De Accin Daos a la Salud

 27

Amidinohidrazona Hidrametilnona Cebo Sistema respiratorio

celular
Inhibidor de transporte
de electrones
Avermectina Cebo Sistema nervioso
Macrociclico
Disruptor canal de
lactona glicosido
cloro
Fipronil Cebo Sistema nervioso Fenilpirazoles
Disruptor de canales
Fenilpirazoles
de cloruro asociado a
GABA
Benzonil fenil Flufenoxuron Spray. Cebo Sistema metablico Benzonil fenil
Urea (IGR) Inhibidor sntesis de Urea (IGR)
quitina
Fenoxicarb Spray, cebo Sistema metabolico Varios (IGR)
Varios (IGR) Hidropene Disruptor de
Piriproxifen funcin hormonal
cido brico Polvo, cebo Tejido Inorgnicos
Inorgnicos Disruptor celular

Nota: Adaptacin de Gonzlez, (2004).

El trmino "plaguicida" es una palabra compuesta que comprende todos los productos

qumicos utilizados para destruir las plagas o controlarlas.

Un factor importante durante la revolucin verde ha sido el desarrollo y aplicacin de

plaguicidas para combatir una gran variedad de plagas insectvoras y herbceas las cuales han

generado la disminucin del volumen y calidad de la produccin de alimentos. El uso de

plaguicidas coincide con la "era qumica", que ha transformado la sociedad desde la dcada de

1950. En lugares donde se practica el monocultivo intensivo, los plaguicidas constituyen el

mtodo habitual de lucha contra las plagas (Ongley, 1997).

La contaminacin del ambiente por plaguicidas e insecticidas se da por aplicaciones directas

en los cultivos agrcolas, derrames accidentales, lavado inadecuado de tanques contenedores,

filtraciones en los depsitos de almacenamiento y residuos depositados y dispuestos en el suelo.

Los restos de estos plaguicidas se dispersan en el ambiente y se convierten en contaminantes para

 28

los sistemas biticos (animales y plantas principalmente) y abitico (suelo, aire y agua)

amenazando su equilibrio y representando un peligro de salud pblica.

Cuando los plaguicidas ingresan en las cadenas alimentarias se distribuyen a travs de ellas, se

concentran en cada nicho ecolgico y se acumulan sucesivamente hasta que alcanzan una

concentracin letal para algn organismo, incluso llegando a niveles superiores de la red trfica.

Al introducirlos en el medio ambiente pueden seguir diversos caminos: atmsfera, suelo y agua,

pudiendo intercambiarse de un sistema a otro formando un ciclo (Gonzlez, 2004).

El impacto ambiental de los plaguicidas en los suelos propiamente ecotoxicolgicos derivados

de la aplicacin de los plaguicidas a los suelos comprenden los siguientes:

Degradacin de los plaguicidas en el suelo: "Muchos plaguicidas se disipan

rpidamente en los suelos. Se trata de un proceso de mineralizacin y el resultado es la

conversin del plaguicida en compuestos ms simples, como H2O, CO2 y NH3. Parte de este

proceso es el resultado de reacciones qumicas, por ejemplo hidrlisis y fotolisis, el principal

instrumento de mineralizacin es el metabolismo y catabolismo microbiolgico. La microbiota

del suelo utiliza los plaguicidas como fuente de carbono y otros nutrientes. Algunos productos

qumicos, por ejemplo, el 2,4-D) se descomponen muy rpidamente en el suelo, mientras que

otros resisten durante ms tiempo. Algunos productos qumicos son muy persistentes y tardan

mucho tiempo en descomponerse (atrazina)" (Stephenson, 1993).

Persistencia de plaguicidas en suelos. Los plaguicidas en los suelos y en la biota pueden

persistir desde unos das hasta aos. La persistencia de un contaminante se puede definir como la

propiedad de un compuesto para retener sus caractersticas fsicas, qumicas y funcionales en el

medio a travs del cual es transportado o distribuido por un periodo limitado despus de su

emisin. Los plaguicidas que persisten ms tiempo en el ambiente tienen una mayor probabilidad
 29

de interaccin con otros elementos del sistema. Por otro lado, si su vida media y su persistencia

es mayor a la frecuencia con la que se aplica, el plaguicida tiende a acumularse tanto en los

suelos como en la biota (Badii & Abreu, 2006).

La Reaccin del suelo ante la contaminacin. El suelo tiene mecanismos de defensa

ante todos los agentes contaminantes, pero muchos de estos mecanismos estn basados en la

precipitacin, adsorcin y fijacin de esos agentes, que no constituyen una destruccin de los

mismos sino que se elimina su biodisponibilidad que puede volver, por ello se puede considerar

que existe una bomba que puede explotar en cualquier momento, cuando las condiciones del

suelo cambien. As se conoce por bomba qumica de tiempo a la rpida liberacin de sustancias

almacenadas durante un tiempo, o de sus productos de descomposicin (Gonzlez, 2004).

Los plaguicidas contaminan tanto los ambientes terrestres como los acuticos. En los

ambientes terrestres contaminan los suelos y la biota terrestre cuando se aplican directa y

deliberadamente o se precipitan de la atmsfera, esto es por consecuencia de las aspersiones

areas, otro factor puede ser por el uso para riego de aguas contaminadas.

El agua es contaminada por plaguicidas, ya sea porque se aplican directamente a un cuerpo de

agua, o bien porque se encuentran en precipitaciones atmosfricas o en los corrimientos de tierras

y cultivos. Tanto los plaguicidas solubles en el agua como los insolubles interaccionan con la

biota acutica. Sin embargo, los hidrosolubles persisten en el medio, y los insolubles se adsorben

a las partculas no solubles, a los sedimentos y se concentran en la biota acutica (Badii & Abreu,

2006).

Cualquiera que sean las fuentes, la contaminacin de las aguas producen:

Alteraciones fsicas: color, olor y sabor, temperatura, materiales en suspensin,

conductividad y espumas.
 30

Alteraciones qumicas: pH, oxgeno disuelto (OD), materia orgnica biodegradable

(Demanda Bioqumica de Oxgeno DBO), materiales oxidables (Demanda Qumica de Oxgeno

DQO), nitrgeno total, fsforo total, aniones (cloruros, nitratos, nitritos, fosfatos, sulfuros,

cianuros y fluoruros), cationes (sodio, calcio y magnesio), amonio, metales pesados y compuestos

orgnicos (Gonzlez, 2004).

Es muy normal que cuando comienza a usarse un nuevo plaguicida los resultados que se

obtienen sean muy buenos y se consiga controlar las plagas con poca cantidad del producto. Pero

al cabo de un tiempo suelen empezar a surgir problemas que disminuyen la utilidad de estos

productos y hacen necesario buscar nuevos plaguicidas. Este tipo de problemas generan las

siguientes consecuencias:

Resistencia gentica. Algunas plagas no mueren a pesar de ser fumigadas con

plaguicidas, esto se debe a que son ms fuertes o producen sustancias que bloquean el plaguicida.

Estas plagas se reproducen dando lugar a otras que tampoco son afectadas por los plaguicidas.

Esta situacin se conoce como resistencia a plaguicidas. Cada vez ms plagas nacen con esta

resistencia, hasta que hay una poblacin entera de plagas resistentes que no pueden ser

eliminadas con los mismos productos qumicos (Conant & Fadem, 2008).

Alteraciones en el ecosistema. Otro de los principales problemas asociados al uso de

plaguicidas es que estos matan no solo a la plaga, sino tambin a otros insectos beneficiosos

como abejas, mariquitas y otros organismos. De esta forma pueden hacer desaparecer a los

enemigos naturales de la plaga o provocar que estos se trasladen a otros lugares porque ya no

encuentran alimento en ese campo y, despus de un breve periodo, la poblacin de la plaga surge

y adems en mayor cantidad que antes al no tener enemigos naturales (Prim, 1998).
 31

Provocar la aparicin de nuevas plagas. Las alteraciones en el ecosistema han

provocado, en algunas ocasiones, que organismos que hasta ese momento no eran plagas, al

desaparecer otras especies que mantenan controlado su nmero, se hayan convertido en nuevas

plagas (Prim, 1998).

Acumulacin en la cadena trfica (Bioacumulacin). Algunos plaguicidas tienen

estructuras qumicas muy estables y tardan aos en descomponerse a formas menos txicas. En

las zonas en las que se aplican estas sustancias las concentraciones del producto son cada vez

mayores y aunque haya pasado tiempo desde la ltima aplicacin el plaguicida seguir presente.

En muchos casos estos productos son, adems, difciles de eliminar por los organismos porque

son poco solubles en agua y tienden a acumularse en los tejidos grasos. Cuando unos organismos

van siendo consumidos por otros el plaguicida se va acumulando en mayores proporciones en los

tramos finales de la cadena trfica. De esta forma un plaguicida que se encuentra en

concentraciones muy bajas, nada peligrosas, en un bosque o un lago, termina estando en

concentraciones decenas o cientos de veces ms altas en los tejidos grasos de los animales, como

aves rapaces, peces o mamferos depredadores que estn situados en lo ms alto de la cadena

trfica (Prim, 1998).

Efectos sinrgicos. Se habla de sinergia cuando el efecto provocado por dos sustancias

juntas es mayor que la suma de los efectos que producira cada una por separado. Este efecto se

ha comprobado en varios plaguicidas que cuando estn juntos son mucho ms dainos que la

suma de sus efectos separados (Gonzlez, 2004).

Movilidad en el ambiente. Otra fuente de problemas en el uso de plaguicidas es que no

permanecen en el lugar en el que se han depositado sino que se esparcen a travs del agua, del

suelo y del aire, a veces a grandes distancias (Gonzlez, 2004).

 32

Una persona expuesta a los plaguicidas puede mostrar ms de una seal de enfermedad.

Algunas seales se presentan en cuanto una persona se expone al plaguicida. Otras seas

aparecen despus de varias horas, das e incluso aos ms tarde. Si una persona sufre o no daos

por los plaguicidas, el tipo de dao para su salud, dependen (Conant & Fadem, 2008):

Del tipo de producto qumico.

De la cantidad a la que se expuso la persona.

Del tiempo que dur la exposicin.

De la edad, peso, altura y sexo de la persona expuesta.

Del estado general de salud en el momento de la exposicin.

El peligro de los plaguicidas es mayor en los momentos en que los cuerpos se estn

desarrollando o cambiando rpidamente (Conant & Fadem, 2008):

Cuando el beb se est formando en el tero.

Cuando un nio est creciendo rpidamente.

Cuando un adolescente est experimentando cambios rpidos.

Cuando una persona mayor ya no tiene suficiente capacidad fsica para filtrar los venenos.

Los efectos de los plaguicidas en la persona pueden ser graves, tales como defectos de

nacimiento o cncer. Otros efectos pueden ser ms difciles de detectar, como lo pueden ser las

dificultades de aprendizaje, crecimiento lento, alergias, dificultad para embarazarse y

enfermedades persistentes. Con frecuencia es difcil saber si la causa de un problema de salud o

el deterioro de una enfermedad se deba a los plaguicidas. Pero se ha logrado comprobar que el

uso de qumicos causan diferentes enfermedades, aunque resulta muy difcil probar que la

exposicin a estos qumicos sean los responsable de alguna enfermedad, dado que estamos

expuestos a tantas sustancias qumicas bajo diferentes circunstancias. Sin embargo, muchas
 33

enfermedades son ms comunes en lugares donde la gente est regularmente expuesta a

productos txicos (Conant & Fadem, 2008).

Seales de envenenamiento por plaguicida

Pupilas pequeas (como punta de alfiler)

Nariz y boca: Escurrimiento de nariz, babeo

Pecho y pulmones: Dolor, problemas para respirar, tos

Estmago: Dolor, diarrea, nusea y vmitos

Cabeza y ojos: Dolor de cabeza, problemas de la vista, pupilas pequeas, lgrimas

Brazos y piernas: Calambres o dolor, contracciones musculares

Manos: Uas quebradizas, prdida de sensacin y picazn en los dedos

Piel: Picazn, sarpullido, hinchazn, enrojecimiento, ampollas, ardor, exceso de sudor.

Otras seales de envenenamiento por plaguicida son: Confusin, debilidad, dificultad para

caminar, dificultad para concentrarse, tic muscular, inquietud, ansiedad, dificultad para dormir y

pesadillas.

2.7.2 Estrategias de bajo riesgo para el control de cucarachas.

Uso de trampas: se pueden utilizar siempre y cuando tengas una poblacin de plagas

pequeas, si se ha hecho un previo sellamiento de los posibles huecos donde puedan esconderse

y se ubican muchas trampas en los lugares donde se identifica la infeccin.

Uso de feromonas de cucarachas: estas se encuentran en las heces de las cucarachas y

son capaces de atraer a otras, esta feromona de atraccin sirve como cebo para las trampas o

el uso de desecantes (Ogg et al., 2006).

 34

Uso de cambios de temperatura: las cucarachas no pueden resistir cambios bruscos de

temperatura, si tiene la oportunidad de enfriar por varios das o calentar demasiado el lugar de

infestacin, en media hora las cucarachas estarn muertas (Ogg et al., 2006).

Uso de polvos desecantes: hay sustancias que desecan cualquier insecto o animal que

tenga contacto con ellas, el cuerpo de un insecto se compone de sustancias liquidas, una capa

cerosa es quien protege sus cuerpos y evita que se pierda la humedad. Los desecantes acaban con

esta capa.

Algunos de estos desecantes se muestran a continuacin.

Tierra diatomcea: La Tierra de Diatomeas es un fino talco de color blanco

apagado, proviene de los restos fosilizados de fitoplancton marino. Cuando es aplicado sobre un

insecto que tiene un exoesqueleto (como chinches, hormigas o pulgas) compromete su

recubrimiento ceroso provocando su muerte. Pero no hace dao a los mamferos.

gel slice: el slice es una sustancia qumicamente inerte que no es abrasiva, la cual se

usa como un agente deshidratador porque la partculas pequeas absorben la humedad y los

aceites.

cido brico: el cido brico se deriva del brax y usualmente se combina con un agente

que no permite que se endurezca. Las cucarachas mueren porque el cido brico es un veneno

estomacal con accin lenta; como el cido brico tambin absorbe la cera de la cutcula de la

cucaracha, tambin pueden morir por deshidratacin. Aunque el cido brico es relativamente

seguro para los humanos y otros mamferos, si puede ser peligroso si se ingiere accidentalmente

y se debe mantener lejos de la comida de los nios y las mascotas. Estudios recientes han

demostrado que la humedad y las reas levemente mojadas no tienen ningn efecto en la

efectividad del cido brico.

 35

Reguladores del crecimiento de los insectos RCI: estos agentes alteran el crecimiento y

el desarrollo de insectos, y son menos txicos a los humanos y a otros organismos que no son su

objetivo. Sus efectos se han evidenciado en las ninfas algunas afectan la fertilidad de las

cucarachas adultas (Ogg et al., 2006).

2.7.3 Control biolgico

El uso de enemigos naturales tambin llamado control biolgico se ha presentado como una

alternativa para reducir el impacto de insectos plaga. Desde su inicio en 1888 por el entomlogo

Charles Valentine Riley (Hernandz, 2014) este tipo de control plantea la utilizacin de

organismos vivos o sus producto, lo cuales tienen la capacidad de infectar, intoxicar o alterar su

metabolismo para as afectar su ciclo de vida, reproduccin y longevidad.

La mayora de las plagas tienen varios enemigos naturales y la abundancia de estos es muy

grande. Estos enemigos naturales se pueden clasificar en tres grandes grupos: parsitos,

depredadores y patgenos.

Los parsitos son insectos entomfagos que atacan a una sola presa u hospedero. Entre los

insectos existe un tipo especial de parasitismo que acaba con la muerte del hospedero y recibe el

nombre particular de parasitoide. Los parasitoides son aquellos insectos cuyo desarrollo tiene

lugar sobre o dentro de otro insecto fitfago. Es una relacin de parasitismo que slo se presenta

en insectos. El parasitoide se come vivo al insecto plaga, rompe el tegumento y la larva se

convierte en pupa y de aqu en adulto. Ejercen un papel muy importante en el control de plagas

(Badii & Abreu, 2006).

Los depredadores son otros insectos o caros que no causan dao al cultivo pero capturan y se

alimentan de otros insectos y caros fitfagos plaga. Difieren de los parasitoides porque atacan a

varias presas durante su vida. En la mayora de los casos son las larvas y los adultos de los
 36

depredadores los que buscan activamente a sus presas y se alimentan de ellas (Badii & Abreu,

2006).

Los entomopatgenos son microorganismos que producen enfermedades a los insectos (Senz

& Rodrguez, 1999), siendo un agente causal muy diverso. Penetran en la especie plaga a travs

del tubo digestivo o del tegumento dando lugar a la expresin de la enfermedad que provoca la

muerte del hospedante. Los entomopatgenos son los nicos que no buscan de forma activa a sus

presas, a excepcin de los nematodos (Badii & Abreu, 2006).

Los hongos entomopatgenos constituyen un grupo de aproximadamente 750 especies, los

cuales se dispersan en el ambiente siendo capaces de infectar poblaciones de artrpodos e

insectos. Pertenecen a los phylum Blastocladiomycota, y Ascomycota y al subphylum

Entomophthoromycotina. Dentro de los Ascomycota, en especial del Orden Hypocreales,

encontramos las especies entomopatgenos ms distribuidas e importantes, Beauveria bassiana y

Metarhizium anisopliae (Espada & Garca, 2011).

El uso de microorganismos entomopatgenos segn Hoffmann y Frodsham, (1993) ha

demostrado ser una buena opcin para el control de cucarachas se han reportado principalmente

hongos los cuales generan enfermedades en gran variedad de artrpodos, entre los que destacan

Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, farinosus, Moniliformis moniliformis y especies de

Aspergillus y la bacteria Bacillus thuringiensis. Estos representan una alternativa de biocontrol

de plagas de insectos de importancia en salud.

Estos hongos a diferencia de otros microorganismos no requieren ser ingeridos para ejercer su

accin patgena, ya que penetran a travs de cutcula debido a su capacidad para excretar

enzimas (proteasas, quinasas, lipasas, lipooxigenasas). En el interior se desarrollan invadiendo el

hemocele y estructuras vitales, ocasionando la muerte del insecto (Espada & Garca, 2011).
 37

Una de las mayores ventajas del uso de los entomopatgenos para Goettel y Roberts, (1992),

es que son seguros para la salud e inducen resistencia en menor grado comparado con los

qumicos; adems que en el caso de algunos, se puede dar la transmisin de insecto a insecto

(auto-diseminacin del agente de biocontrol).

Debido a que las cucarachas son insectos sociales, su control con empleo de entomopatgenos

representa una gran ventaja, una diferencia es que con los qumicos no se genera una trasmisin,

en cambio con los microorganismos la dispersin puede permanecer por un tiempo prolongado.

En algunos casos se permite aplicar otros productos los cuales no se hayan utilizado

anteriormente y requerir de menos aplicaciones para obtener resultados similares. Otra ventaja se

podra dar si las dosis que se utilizan son relativamente bajas. Sin embargo, el uso de este tipo de

control presenta tambin desventajas como:

a) mayor tiempo para causar la muerte.

b) costos elevados para su produccin.

c) diferencias en la susceptibilidad en diferentes fases de desarrollo; o bien verse afectado por

factores ambientales como radiacin solar, humedad, temperatura, lavado por lluvia o tener una

vida de anaquel menor a la de los qumicos (Damas Buenrostro, 2012).

2.8 Resistencia y adaptabilidad.

El control qumico con insecticidas neurotxicos est actualmente limitado por el desarrollo de

resistencia, la cual ha sido demostrada en un amplio rango de insecticidas que incluyen

organoclorados, organofosforados, carbamatos y recientemente piretroides, y sta se traduce en

una disminucin de la efectividad.

En la tabla 6 se presentan algunos factores que influyen en la velocidad de desarrollo de

resistencia.
 38

Tabla 6

Factores que influyen en la velocidad de desarrollo de resistencia

Factores que influyen en la velocidad de desarrollo de resistencia

Factores genticos Factores biolgicos Factores operacionales Aplicacin

Nmero y Nmero de Insecticida Umbral de aplicacin.

frecuencia de generaciones por ao.
alelos R. naturaleza qumica
relacin entre Modo de aplicacin.
Dominancia y/o Movilidad/migracin.
insecticidas usados
recesividad de
alelos R residualidad/formulacin Alternancia de
Monogamia/poligamia productos.
Expresividad e
interaccin de
alelos Capacidad de refugio

Nota: tomada de Taiariol (2009).

Los insectos pueden deshacerse rpidamente de infecciones microbianas produciendo una

variedad de molculas inducidas por el sistema inmune, incluyendo pptidos y polipptidos

antibacterianos y anti fngicos. Esto especialmente para las cucarachas (Daz, Enrquez, &

Bisset, 2003).

Se ha mencionado que presentan el sistema inmunolgico mejor desarrollado por lo que

pueden resistir temperaturas de 4C sin morir; una vez que se les retira de esas condiciones y

pasados 20 minutos, se normalizan completamente sus funciones. Pueden adaptarse a un ayuno

total de agua y comida por un mes, mantenindose en estado de diapausa (casi detencin total de

actividades metablicas), soportan dos meses con slo agua y cinco meses a base de comida, ya

que pueden absorber la humedad directamente de los alimentos a travs de su cuerpo; incluso el

resto de su organismo puede sobrevivir dos semanas sin cabeza. Tambin es sorprendente su

poder adaptativo a la accin de los insecticidas (Pedraza E. M., 2011).

 39

La resistencia puede ocurrir mediante mecanismos fisiolgicos o bioqumicos un ejemplo de

esto es el estudio realizado con el escarabajo Zophobas atratus, se observ en la hemolinfa la

aparicin de la actividad de un antibacterial potente de este coleptero en un ensayo de

crecimiento de inhibicin en placa. De la hemolinfa se aislaron tres pptidos (ac), lo que

probablemente explicaba sta actividad. Entre ellos, el pptido a era bactericida contra las

bacterias Gram negativas, mientras que los pptidos b y c, contra las Gram positivas (Damas

Buenrostro, 2012).

En el caso de las cucarachas para Jomori y Natori, (1992), los primeros reportados fueron

pptidos que se unan a lipopolisacridos, similares a la respuesta inmune humoral, a nivel de

hemocele.

Estos pptidos, con capacidad de unirse a lipopolisacridos, se reportaron en diferentes

insectos y posteriormente se denominaron pptidos antimicrobianos (PAM). Dentro de los PAMs

reportados en las cucarachas, el ms conocido es la lectina, producida en el hemocele (So Young

Lee, 2002).

Posteriormente, se encontr que este PAM estaba involucrado en la regeneracin de las patas

en la cucaracha. Esto permiti suponer que juega un papel muy importante en la curacin despus

de la infeccin por agentes patognicos que causan problemas a nivel de cutcula. Posteriormente

se encontr un pptido muy pequeo de 10 kD, que ayudaba a incrementar la actividad

regenerativa. En cuanto a respuesta celular, en forma generalizada se ha reportado a los

hemocitos como los responsables de regular el sistema inmunitario en insectos. Su actividad est

relacionada con la produccin de profenol-oxidasa (PPO), y su relacin con algunos PAM, como

la defensina. Otras protenas relacionadas en la respuesta inmune es la 5-hydroxytriptamina y la

octopamina, que se ha visto que mejoran el efecto de la fagocitosis y formacin de ndulos por

parte de los hemocitos en la cucaracha Periplaneta americana (Damas Buenrostro, 2012).

 40

Tambin las modificaciones de conducta de una poblacin o especie generan resistencia. En

esta interaccin se seleccionan individuos que por distintos mecanismos bioqumicos y

fisiolgicos son capaces de tolerar mayores dosis del compuesto. En algunos casos, ms de un

mecanismo puede estar presente en una poblacin, situacin conocida como multi-resistencia

(Taiariol, 2009). Surge como resultado de cada interaccin insecto-insecticida, focos o cepas

resistentes. Como esta capacidad est determinada genticamente, es heredable a nuevas

generaciones que seguirn sobreviviendo al tratamiento con insecticida mientras seguir

disminuyendo la proporcin de individuos susceptibles en la poblacin. De esta manera el

insecticida acta como una fuerza selectiva que concentra en la poblacin individuos resistentes.

Los genes que confieren resistencia existen en el genoma de la poblacin como un carcter

pre-adaptativo y la capacidad de desarrollo de resistencia depende de la variabilidad gentica de

la especie. Cipermetrina fue uno de los primeros piretroides en ser ampliamente usado para el

control de Blattella germanica por los profesionales del control de plagas, siendo tambin uno de

los primeros piretroides que desarrollo problemas de control causada por resistencia en

poblaciones de campo (Taiariol, 2009).

Otros factores de resistencia son:

Barreras de penetracin, es un mecanismo de resistencia a compuestos lipoflicos en

general por lo que afecta a la mayora de los grupos de insecticidas, donde hay un decaimiento en

la penetracin

Detoxificacin metablica en piretroides, organofosforados y carbamatos citocromo P-

450-monooxigenasa dependiente y enzimas hidrolticas.

La insensibilidad nerviosa a insecticidas ciclodienos, este mecanismo provee resistencia

cruzada a todos los ciclodienos

 41

Resistencia a piretroides y a DDT conocida como kdr (knock-down resistance)

insensibilidad, actuando sobre canales de sodio.

Muchos reportes sobre resistencia a insecticidas en Blattella germanica han determinado

mecanismos de resistencia como penetracin reducida, sitios blancos alterados, mecanismos de

detoxificacin y recientemente, la resistencia por conducta (Taiariol, 2009). Un ejemplo de esta

es La plasticidad del sistema sensorial de las cucarachas para evolucionar y adaptarse a los

cambios ambientales ha sorprendido ya que estos insectos han cambiado sus receptores del gusto

para que la glucosa, ingrediente usado como atrayente en cebos, les resulte amarga y les repela

(Katsumata, Jules, & Coby, 2013).En lugar de papilas gustativas, las cucarachas poseen pelos,

con los que perciben el gusto, en diversas partes de su cuerpo. Estudios se han concentrado en

estudiar los pelos situados en el rea alrededor de la boca y dos tipos de clulas nerviosas que

perciben sabores y responden emitiendo seales elctricas al cerebro. Uno de estos tipos de

clulas responde slo a azcares y otras sustancias dulces, mientras que el otro slo responde a

sustancias amargas. Cundo una molcula de algo dulce entra en contacto con un detector del

dulce, este dispara impulsos elctricos y el cerebro de la cucaracha percibe dulzor, incitndola a

comer. Lo mismo sucede con los detectores de sustancias amargas, que hacen que la cucaracha

evite esa sustancia, de algn modo, las cucarachas han conseguido cambiar, de manera que la

glucosa activa sus detectores de sustancias amargas y, cuando la prueban, la repelen porque les

sabe amarga. Este comportamiento es heredado, y no algo aprendido por un individuo de la

especie durante su breve vida (Katsumata, Jules, & Coby, 2013).

Otro sitio de ataque para las cucarachas son los canales de cloruro asociados a receptores de

GABA, donde acta entre otros insecticidas los fenilpirazoles (Fipronil), toxicidad posible de

antagonizar con algn sinergismo, como Butxido de Piperonilo.

 42

La resistencia fisiolgica predomina sobre la resistencia por conducta en poblaciones

seleccionadas por medios convencionales, sin embargo alteraciones de la conducta que afecten la

respuesta hacia insecticidas pueden acompaar, el desarrollo de resistencia fisiolgica (Taiariol,

2009).

2.9 Hongos Entomopatgenos

Los hongos entomopatogenos son organismos vivos los cuales producen una patognesis letal

en gran variedad de insectos por lo cual son ampliamente utilizados, ya que a diferencia de otros

agentes entomopatgenos, no necesitan ser ingeridos por el insecto para controlarlo. Estos

microorganismos pueden infectar a los insectos de forma directa, es decir a travs de la cutcula,

ya que ejercen mltiples mecanismos de accin cuando estos penetran hacia el interior de la

cutcula, confirindoles una alta capacidad para evitar que el hospedero desarrolle resistencia

(Samson, 1988).

Gupta, (1995) reporta que estos hongos pueden producir metabolitos secundarios que

tienen capacidad bioactiva, es decir que pueden producir una respuesta txica en diferentes

organismos.

Los hongos entomopatogenos ms utilizados son Aschersonia, Akanthomyces, Beauveria,

Entomopthora, Erynia, Eryniopsis, Fusarium, Hirsutella, Isaria, Metarhizium, Paicelomyces,

Verticillium y Zoophthora (Tanada, 1993). La mayora de estos hongos son patgenos obligados

( que requieren un insecto vivo para sobrevivir ) o facultativos ( no requieren de un insecto

debilitado , ellos pueden invadir el insecto o no) y algunos son simbiticos (asociacin con el

insecto y de esta maneta obtienen beneficios ); los hongos entomopatogenos ms utilizados en el

control de plagas son B. bassiana y Metarhizium anisopliae los cuales han demostrado tener

ms de 100 hospederos (Damas Buenrostro, 2012) y ser muy eficaces en el manejo de plagas.
 43

Las propiedades que poseen los hongos entomopatogenos derivan de las caractersticas del

organismo, son importantes como agentes de control (Valadaresinglis & Peberdy, 1997); sus

principales caractersticas son: Un alto poder residual antes durante y despus de la preparacin

tambin conservan su virulencia.

El hongo Metarhizium anisopliae se encuentra en la naturaleza, en rastrojos de cultivos,

estircol, en el suelo, las plantas, etc. logra buen desarrollo en lugares frescos, hmedos y con

poco sol. Los hongos entomopatgenos constituyen el grupo de mayor importancia en el control

biolgico de insectos plaga, principalmente en los chupadores o succionadores ya que estos no

pueden ingerir patgenos que infectan a travs del tracto digestivo (Hajek, 1994).

El hongo Metarhizium anisopliae ataca naturalmente ms de 300 especies de insectos de

diversos rdenes. Entre las plagas afectadas por este hongo se encuentra el salivazo de la caa de

azcar (Aeneolamia varia), y chinches plagas de diversos cultivos (Matabanchoy Solarte & Bust,

2012). Segn investigaciones Sandino, (2003) los insectos muertos por este hongo son cubiertos

completamente por micelio, el cual inicialmente es de color blanco pero se torna verde cuando el

hongo esporula.

Comprendiendo el por qu en algunas ocasiones se tienen diferencias en la susceptibilidad de

algunos insectos a los hongos entomopatgenos, se ha vinculado la inactivacin de las toxinas a

causa de la actividad enzimtica. Pero tambin se ha reportado que la presencia de

microorganismos, habitantes comunes en el intestino, como especies de Enterococcus y

Enterobacter, contribuyen a la activacin enzimtica (Damas Buenrostro, 2012).

Segn Damas Buenrostro, (2012) Algunos entomopatgenos son capaces de producir

pptidos que ayudan a neutralizar al sistema inmunitario celular de los insectos. En el caso de la

cucaracha adulta de Periplaneta americana se ha presentado una respuesta adaptativa del tipo

humoral, evidenciando especificidad cuando se inmunizan con ciertas protenas, y que la

 44

inmunizacin con microorganismos atenuados, como Pseudomonas aeruginosa, generan mayor

proteccin contra infecciones de esta misma bacteria (Faulhaber & Karp, 1992). Tambin se ha

establecido una relacin entre la susceptibilidad de la Periplaneta americana a infecciones por

entomopatgenos con el estado de desarrollo de las cucarachas y a la produccin de enzimas

como parte de la respuesta del sistema humoral.

Los antecedentes de estudios en Periplaneta americana se reportan a ms de 40 aos, para

Rheins y Karp, (1985) Es importante destacar la relacin entre la disminucin del complejo de

protenas del sistema inmune humoral y la fase del insecto, donde este complejo disminuye en

ninfas tempranas y adultos viejos. Recientemente se ha visto que estos componentes ayudan en

la respuesta inmune de los insectos contra bacterias, hongos y virus (Iwanaga, 2005). Dentro de

este complejo de proteinasas se encuentra la fenoloxidasa (PO), como parte de la cascada de

melanizacin en el sistema inmune de los artrpodos, y se ha encontrado en la hemolinfa y

cutcula en forma inactiva, llamada profenoloxidasa (PPO) (Ashida, 1995). La PPO se activa a

partir de la oxidacin por efecto de la L-DOPA (3-(3,4-dihidroxifenil)-L-alanina) en PO (Lee,

2002). La forma activa de PPO, la PO, tambin es conocida como tirosinasa, y es catalizadora de

dos reacciones sucesivas; la primera es la hidroxilacin de monofenoles a O-difenol, y la

segunda es la oxidacin de O-difenol a O-quinina (Sugumaran, 2002). La produccin de los

intermediarios de quinonas txicas y O-quinonas por PO, es decir el paso inicial de la cascada

bioqumica de la biosntesis de melanizacin, y es importante en la esclerotizacin cuticular,

cicatrizacin de heridas, y en la encapsulacin de cuerpos extraos como parte de la defensa

inmune (Lee, 2002). Desde tiempo atrs, se report que la PO es una enzima altamente activa en

la cutcula y en la hemolinfa, antes de la muda de la Periplaneta americana, y se vuelve menos

activa durante y despus de la muda tambin llamada ecdisis (Damas Buenrostro, 2012).
 45

2.10 Mecanismo de accin de los hongos entomopatogenos.

El uso de los hongos entomopatgenos en el campo comenz a fines del siglo XIX, un

ejemplo de esto es Brasil el cual inicio el uso del hongo a partir de 1964, despus de la aparicin

epizotica del Metarhizium anisopliae sobre salivazos (Cercpidos) de la caa de azcar. Este

adquiri importancia por parte de los investigadores ya que se ha aplicado este entomopatgeno

hasta en 100.000 ha/ao de caa de azcar para el control de (Mahanarva) posticata (Lecuona,

1996).

Ferron (1975) seala: los hongos entomopatogenos fueron los primeros microorganismos

descritos como causantes de enfermedades en insectos, pueden infectar insectos acuticos y

terrestres; presentan una fase vegetativa que consiste en una sola clula (levadura y cuerpos

hifales). La pared de las hifas es uninucleada o con segmentos multinucleados, los cuales pueden

transformarse en numerosos ncleos y ser separados por paredes transversales (Bridge, 1993).

La reproduccin de este tipo de entomopatogenos influye en las infecciones hacia los

insectos, est dividida en sexual y asexualmente; la reproduccin asexual es por medio de esporas

o por medio de conidios; la reproduccin sexual de muchos hongos ocurre por la fusin de hifas.

Los hongos atacan a insectos maduros y en algunos casos a los inmaduros (ninfa o larva), quienes

son a menudo ms infectados que los del estado maduro; en el caso de estado de pupa

frecuentemente no sufre ataques, salvo raras excepciones. Los hongos ingresan al insecto

hospedero principalmente a travs del tegumento o cutcula (Bazn Tene, 2002).

La infeccin del hongo sobre los insectos y caros, se inicia al adherirse el conidio a la cutina,

y posteriormente germina y penetra al tubo germinativo en la cutcula; la penetracin de la hifa a

travs de la epicutcula, se realiza por medio de un doble proceso uno enzimtico y el otro

mecnico, que actan en forma simultnea. La epicutcula est constituida por varias capas
 46

(epicutcula interna, epicutcula externa, capa de polifenoles, capa de ceras y capa cementante)

que tienen sus propias caractersticas; la exterior es muy frgil, presenta resistencia a la

degradacin enzimtica y evita el paso de enzimas degradadoras de la cutcula; se forma por

lipoprotenas polimerizadas estabilizadas mediante quinosas. Esta composicin la hace dura pero

los hongos poseen enzimas degradantes que les permiten modificar la unidad estructural del

hospedero; adems, inhiben el proceso selectivo o enzimtico del hospedero y utilizan su

complejo enzimtico de quitinasas y lipasas. Cuando el hongo logra romper la epicutcula, las

estructuras penetrantes del hongo pueden extenderse y facilitar an ms la accin de las enzimas

degradantes (Pinto, 1997).

Despus de la penetracin emiten un tubo germinal, algunas especies de hongos penetran la

cutcula directamente y en otras produce un botn adhesivo llamado apresorio, el hongo invade

rganos internos y segrega micotoxinas, las cuales son responsables de disminuir la fecundidad y

viabilidad de huevos incubados (Kaaya G. P., 1993).

En el caso del Metarhizium anisopliae la cutcula del hospedero tiene efecto sobre la

germinacin y el comportamiento de la patogenicidad (Bogo, 1996).

La cutcula sirve para regular o detener las fases del proceso de infeccin sobre la superficie,

un pequeo tubo que penetra crece del apresorio que est bien anclado y penetra en la

cutcula por lo general con la ayuda de fuerzas mecnicas, o de enzimas mientras que un

nmero de conidias se adhieren al insecto vivo 24 horas post inoculacin. Esta penetracin es

frecuentemente seguida por una reaccin, probablemente debido a cambios en la actividad

de la fenol oxidasa causada por el hongo. Por otra parte, Pinto (1997) mencionan que

Metarhizium anisopliae produce enzimas quitinolticas que han sido implicadas en la digestin

de la cutcula de los insectos y caros durante el proceso de infeccin y seala que en los

protoplastos se lleva a cabo el proceso enzimtico.

 47

El integumento del insecto (Figura 8) est compuesto esencialmente de protenas y quitinas

asociadas con lpidos y compuestos fenlicos. La epicuticula o capa ms externa del

integumento contiene lpidos (cidos grasos y parafina) cuyas actividades antifngicas se han

demostrado, pero en concentraciones ms altas que aquellas presentes en el integumento de

insectos.

Figura 8. Estructura y composicin de la cutcula de insectos y forma de penetracin de hongos entomopatgenos.

Imagen tomada de Montesinos, (2008).

Vilcinskas (1997) reportan efectos de la infeccin de Metarhizium anisopliae por tres

metabolitos secundarios presentes en los hongos, las Dextruxinas A y E, y Cytochalasina D, que

se utilizaron en un experimento, para infectar larvas y propiciar cambios en el ncleo pinoctico.

Los plasmatocitos tratados con destruxinas in vitro exhibieron alteraciones similares en su

morfologa y citoesqueleto. Los cambios se debieron a las destruxinas, sobre todo, durante el

proceso de micosis. Por su parte, Bittencourt (1999) indican que las destruxinas y el cido

helvlico del Metarhizium anisopliae pueden ser inducidas para aumentar su produccin y

hacerlas ms virulentas. La sustancia inductora es el ciclopeptlido (Bazn Tene, 2002). La

 48

destruxina, qumicamente son depsipptidos cclicos que poseen un hidroxicido y cinco residuos

de aminocidos, en el caso de la destruxina se han aislado cinco anlogos denominados de A a la

E que difieren en el grupo R de los residuos hidroxicidos (Franco Chvez, Rodrguez Navarro,

Cervantes Mayagoitia, & Barranco Florido, 2012).

Algunos de los efectos de dichas toxinas son:

Inducir la despolarizacin de la membrana debido a la apertura de los canales de Ca+2

causando parlisis tetnica y muerte.

Causan cambios morfolgicos y del cito esqueleto de los plasmocitos del insecto in vitro,

que afecta parte de la respuesta inmune como la encapsulacin y la fagocitosis.

Reducir la expresin de pptidos antimicrobianos que tienen un papel importante en la

respuesta inmune humoral de los insectos.

Inducen tambin cambios estructurales en las clulas epiteliales que ocasionan la ruptura

de la membrana.

Estrs oxidativo en las clulas.

Inhiben la tasa de secrecin de fluidos en los tubos de Malpighi (Franco Chvez et

al.,2012).

Todos estos efectos muestran a los hongos entomopatogenos que tiene varios mecanismos de

infeccin en los insectos, son alternativas biolgicas de control contra las cucarachas.

2.11 Factores que regulan el crecimiento de hongos entomopatogenos.

Las condiciones ambientales y en particular la humedad y la temperatura, son muy

importantes en la infeccin y la esporulacin del hongo; en general, la alta humedad (90 %) es

 49

requerida para la esporulacin y desarrollo del micelio (Fargues J. D., 1981). La humedad del

microambiente que rodea la espora, tiene una fuerte influencia en la germinacin cuando la

temperatura ambiental es de 10 a 35 grados centgrados, los cuales son favorables para la

infeccin del hongo (Fuxa, 1987). La germinacin, el crecimiento, la esporulacin y la virulencia,

son caractersticas de los hongos que pueden ser afectados por la temperatura, luz ultravioleta y la

humedad (Bazn Tene, 2002). La temperatura es uno de los principales factores que limitan el

crecimiento de los hongos entomopatgenos; el requerimiento trmico vara segn la regin

geogrfica de origen, a un rango amplio de temperatura de 8 a 35 grados centgrados; el umbral

mximo ocurre entre 35 y 37 grados, la temperatura ptima se considera de 20 a 30 grados

Celsius (Fargues & Vey, 1974) y (Fargues, Oueraogo, Goettel, & Lomer, 1997).

2.12 Taxonoma de Metarhizium anisopliae.

La mayora de los hongos entomopatogenos se clasifican dentro de la divisin Eumycota, que

se caracteriza por no formar plasmodio o pseudoplasmodio y por presentar una fase asimilativa

tpicamente filamentosa. La subdivisin Deuteromycotina, se caracteriza por no presentar un

estado sexual, por lo que se conocen como hongos imperfectos y estn integrados en tres clases:

Hyphomyceres, Blastomycetes y Coelomycetes. La ms importante es Hyphomyceres, por que

abarca la mayora de las especies conocidas como patgenas de insectos (Ignoffo, 1996).

La divisin taxonmica (figura 9) de los hongos entomopatgenos hecha por Ainsworth

(1973), la cual separa los hongos en dos divisiones:

 50

Figura 9. Hongos entomopatgenos divisin taxonmica, hecha por Ainsworth (1973).

El gnero Metarhizium est clasificado dentro del grupo Phyalosporaceae, muy prximo del

genero Penicilium; las esporas del Metarhizium anisopliae (figura 10) son alargadas y se forman

en cadenas originadas en filides; las conidias ms jvenes de la clase del conidiforo, presentan

una pigmentacin verde y su tamao permite diferenciar la especie Metarhizium anisopliae y

Metarhizium flavoviridae (Avila de Moreno, 1988). Son importantes enemigos naturales de

muchas plagas de insectos y otros artrpodos (Kaaya G. P., 1993), como el escarabajo

depredador de la familia Carabiridae (Stanphylinidae), donde se han observado buenos niveles

de infeccin (Bazn Tene, 2002).

Figura 10. Conidias de la especie Metarhizium anisopliae. Foto tomada por

autoras.

El Metarhizium anisopliae (deuteromicetes: Moniliales), es un hongo imperfecto

(Hyphomyceres) que tiene una reproduccin asexual. Fue uno de los primeros microorganismos

que se usaron para el control de los insectos plagas. Primero se aisl por Metschnikoff en 1879,
 51

del escarabajo gallo del trigo; dicho aislado fue el Anisoplia austriaca (Herbst) (Coleptera:

Scarabeidae) descrito por Sorokin (Lezama Gutierrez, 1995) citado por el autor (Bazn Tene,

2002) Se le considera un agente de alto potencial en el control biolgico de plagas agrcolas

(Ferron, 1981). Es una especie de hongo cosmopolitan que no infecta animales de sangre caliente

y tampoco existen reportes de sensibilidad humana al mismo (Kaaya G. P., 1995) citado por

(Bazn Tene, 2002).

2.13 Caracterizacin morfolgica del hongo Metarhizium anisopliae.

El gnero Metarhizium fue descrito por Sorokin en 1883 y con base en sus caractersticas

morfolgicas se han descrito las variedades Metarhizium anisopliae variedad anisopliae y

variedad majus. (Padilla Melo, Bernal Uribe, Vlez Arango, & Montoya Restrepo, 2000).

Segn Veen (1968) la evidencia del ataque de Metarhizium anisopliae sobre insectos, en

condiciones naturales, ha sido descrita como "muscardina verde" (Sorokin, 1984), (figura 11) en

ms de 200 especies de insectos, exhibiendo diferentes grados de especificidad, la cual est

influenciada por las caractersticas del patgeno y de la cutcula del hospedante como lo

menciona Hall, R. A, (1982). Durante la patognesis, el Metarhizium anisopliae tiene la

capacidad de sintetizar enzimas extracelulares que pueden degradar polmeros de la cutcula

(protenas, lpidos y quitina), permitiendo el aprovechamiento de nutrientes para su crecimiento

(Padilla Melo, Bernal Uribe, Vlez Arango, & Montoya Restrepo, 2000).
 52

Figura 11. Insecto atacado por la enfermedad muscardina verde del hongo Metarhizium anisopliae. Imagen tomada
por Plos Genetics, enero 2011.

El hongo Metarhizium anisopliae presenta una colonia pegada al medio, completamente

redonda, de colores olivceo, amarillento, verdoso, marrn oscuro, dependiendo del aislamiento,

con un revs incoloro a marrn, a veces verdoso citrino. Los conidiforos nacen del micelio y son

irregularmente ramificados con dos a tres ramas en cada septo, miden de 4 a 14 de longitud x

1.5 a 2.5 de dimetro. Las filides son cilndricas en forma de clava, adelgazados en el pice,

miden de 6 a 13 de longitud y de 2 a 4 de dimetro. Las conidias son unicelulares, cilndricas y

truncadas, formadas en cadenas muy largas, hialinas a verde olivceo, miden de 3.5 a 9 de

longitud x 1.5 a 3.5 de dimetro (Arahana, 2013).

El Metarhizium anisopliae asimila muy bien las fuentes de carbono orgnico e inorgnico y no

exige requerimientos especiales de carbohidratos, registran como medios ideales de crecimiento

de este entomopatgeno los sustratos SDA (Saboraud dextrosa agar) y PDA (Agar papa

dextrosa), y para la produccin masiva el sustrato ms comnmente usado es el arroz. vila y

Umaa, (1988), registran que las esporas de Metarhizium anisopliae cultivadas en arroz, al cabo

de 18 o 20 das de incubacin se encuentran en ptimas condiciones para su utilizacin como

agente de control. El Metarhizium anisopliae se caracteriza por ser mesfilo, con una temperatura

ptima para germinacin y crecimiento de 25 a 30C, una mxima de 32 a 35C y una mnima de
 53

10 a 12C como lo sugiere Schaeferffenberg, (1964). Como lo detalla Rombach, (1987) las

colonias del Metarhizium anisopliae en PDA presentan un crecimiento de micelio con borde

blanco y con grupos de conidiforos que se tornan coloreados al multiplicarse las conidias, con

diferentes variaciones de color de olivo a amarillo verdoso (figura 12), de olivo a verde,

decolorada en el revs, de color miel o amarillo plido y pigmento amarillo que se difunde en el

medio (figura 13). Este pigmento no es esencial para el crecimiento y desarrollo, por esto puede

considerarse un metabolito secundario; sin embargo, algunos pigmentos juegan un papel

importante en la resistencia de las esporas en ambientes desfavorables como lo plantea (Gonzlez

Garcia, Flrez, & Bustillo, 1993).

Figura 12. Hongo Metarhizium anisopliae color olivo a amarillo verdoso. Imagen tomada por autoras.
 54

Figura 13. Hongo Metarhizium anisopliae color miel o amarillo plido y pigmento amarillo. Imagen tomada por
autoras.

2.14 Ciclo de vida de Metarhizium anisopliae

En general los hongos entomopatgenos desarrollan las siguientes fases sobre su hospedante

(Castillo Zeno, 2006): Germinacin, Formacin de apresorios, Formacin de estructuras de

penetracin.

2.14.1 Colonizacin y reproduccin.

El proceso se inicia cuando la espora o conidias del Metarhizium anisopliae se adhiere a la

cutcula del insecto, luego desarrolla un tubo germinativo y un apresorio, con ste se fija en la

cutcula y con el tubo germinativo o haustorio (hifa de penetracin) se da la penetracin al

interior del cuerpo del insecto. La germinacin ocurre aproximadamente a las 12 horas post-

inoculacin y la formacin de apresorios se presenta de 12 a 18 horas post-inoculacin

(Vicentini, 1996). En la penetracin participa un mecanismo fsico y uno qumico, el primero

consiste en la presin ejercida por la estructura de penetracin, la cual rompe las reas

esclerosadas y membranosas de la cutcula. El mecanismo qumico consiste en la accin

 55

enzimtica, principalmente proteasas, lipasas y quitinasas, las cuales causan descomposicin del

tejido en la zona de penetracin, lo que facilita el ingreso del hongo. Despus de la penetracin,

la hifa se ensancha y ramifica dentro del tejido del insecto, colonizando completamente la

cavidad del cuerpo del insecto, esto sucede en 3 o 4 das despus de la inoculacin. A partir de la

colonizacin se forman pequeas colonias y estructuras del hongo, lo que corresponde a la fase

final de la enfermedad del insecto, ocurre 4 o 5 das despus de la inoculacin (Hajek, 1994).

Otra forma mediante la cual el hongo puede causar la muerte del insecto, es mediante la

produccin de toxinas. Los hongos entomopatgenos tienen la capacidad de sintetizar toxinas que

son utilizadas en el ciclo de la relacin patgeno-hospedante. Entre estas toxinas se han

encontrado dextruxinas, demetildextruxina y protodextruxina, las cuales son sustancias de baja

toxicidad, pero de mucha actividad txica sobre insectos, caros y nematodos segn (Sandino,

2003). Las destruxinas afectan varios organelos tales como mitocondria, retculo endoplsmico y

membrana nuclear, paralizando las clulas y causando disfuncin del intestino, tbulos de

Malpighi, hemocitos y tejido muscular. La esporulacin del Metarhizium anisopliae ocurre en 2 a

3 das, dependiendo de las condiciones de temperatura y humedad relativa del ambiente. La

infeccin por el entomopatgeno puede ser afectada principalmente por la baja humedad relativa

y por la falta de habilidad para utilizar los nutrientes disponibles sobre la superficie de la cutcula

o por la falta de factores necesarios para el reconocimiento de un hospedero susceptible o sitio de

infeccin penetrable. El reconocimiento de un hospedero susceptible involucra signos qumicos y

topogrficos. Tambin puede fracasar la invasin del hongo por la presencia de compuestos que

inhiben como lo son fenoles, quinonas y lpidos en la superficie de la cutcula (Hajek, 1994). Los

sntomas que causan los entomopatgenos son variables: las ninfas disminuyen sus movimientos,

disminuyen la produccin de espuma y pueden abandonar los lugares de ataque. Los adultos

infectados presentan movimientos lentos, no se alimentan, reducen su radio de vuelo y las

 56

hembras no ovipositan. Pueden morir en lugares distantes de donde fueron contaminados. El

ciclo total de la enfermedad es de 8 a 10 das. Despus de la muerte, los individuos presentan un

crecimiento micelial blanco seguido por la tpica esporulacin verde. En algunas ocasiones no se

presenta la esporulacin sobre el tegumento, solamente se ve la presencia de micelio y se debe a

condiciones inadecuadas de humedad durante el proceso de esporulacin (Lecuona, 1996).

2.15 Usos del Hongo Metarhizium anisopliae

Por la eficiencia en el control de plagas y vectores, se puede producir bioinsecticidas a partir

de diferentes gneros y especies de hongos entomopatogenos en este caso el Metarhizium

anisopliae. Para lograr obtener un avance mayor en la produccin de hongos entomopatgenos

como plaguicidas, para (Jackson, 1997) es la biotecnologa una expectativa sobre el estudio de

los hongos. Las investigaciones sobre fisiologa y gentica, la actividad insecticida y la

toxicidad de los metabolitos, es un objetivo en espera; del cual, se requiere conocer una respuesta

estable de los factores ambientales, en relacin al crecimiento, al uso del sustrato y a la

produccin de conidias de Metarhizium anisopliae (Bazn Tene, 2002).

En la figura 14 muestra un registro de hongos entomopatogenos en Colombia, el

Metarhizium anisopliae se relaciona con el insecto husped, el cultivo que afecta el insecto y

en la localidad en donde fue encontrado (Bustillo Pardey, 2001).

 57

Figura 14. Hongo Metarhizium anisopliae registro en Colombia. Imagen tomada de Pardey, 2001.

2.16 Marco legal

Ley 9 de 1979

Cdigo Sanitario Nacional. Incluye normas generales sobre la produccin, formulacin,

almacenamiento, distribucin, movilizacin y aplicacin de los plaguicidas.

Decreto 775 de 1990

Reglamenta los Ttulos III, V, VI, VII y XI de la Ley 09 de 1979, sobre uso y manejo de

plaguicidas.
 58

Decreto 1847 de 1991

Reglamenta la Ley 09 de 1979 sobre uso y manejo de plaguicidas con el objeto de evitar que

afecten la salud de la comunidad, la sanidad animal y vegetal o causen deterioro al medio

ambiente.

Decreto 1443 de 2004

Por el cual se reglamenta parcialmente el Decreto-ley 2811 de 1974, la Ley 253 de 1996, y la

Ley 430 de 1998 en relacin con la prevencin y control de la contaminacin ambiental por el

manejo de plaguicidas y desechos o residuos peligrosos provenientes de los mismos, y se toman

otras determinaciones.

Resoluciones 00375 de 2004 y 000698 de 2011.

Instituto Colombiano Agropecuario, reglamenta los requisitos para el registro de

productores y el registro de venta de los bioinsumos elaborados con agentes microbiales, sin

embargo estas regulaciones deben ser complementadas con Normas Tcnicas que sirvan de

apoyo a la produccin y al control de calidad de estos productos.

Norma Tcnica Colombiana NTC 4422-1

Bioinsumos para uso agrcola. Agentes biolgicos para el control de plagas y enfermedades.

Norma Tcnica Colombiana NTC 4422-2

Agentes biolgicos para el control de plagas. Agentes microbianos a base de hongos y

bacterias.

Requisitos para la produccin, el empaque y almacenamiento de agentes biolgicos a base de

nematodos, hongos, bacterias, virus e insectos benficos empleados en el control de plagas y

enfermedades.
 59

Resolucin 000698 4 de febrero del 2011

Por medio de la cual se establecen los requisitos para el registro de departamentos tcnicos de

ensayos de eficacia, productores e importadores de bioinsumos de uso agrcola y se dictan otras

disposiciones.

Artculo 1. Objetivo. Establecer los requisitos para el registro y control de las personas que

produzcan, produzcan por contrato, importen y/o realicen ensayos de eficacia, as como para el

registro de los bioinsumos de uso agrcola.

Artculo 3. Definiciones. Para efectos de la presente resolucin.

 60

3. Metodologa

El siguiente proyecto corresponde a una investigacin experimental a nivel de laboratorio,

que se llev a cabo en la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas en la Facultad de Medio

Ambiente y Recursos Naturales, en los laboratorios de zoonosis y microbiologa, donde se evalu

la patognesis producida por el hongo entomopatgeno Metarhizium anisopliae sobre la

cucaracha peri domestica Periplaneta americana en todos sus estadios y tambin utilizando el

hongo en conjunto con el cido brico. Con base en la preparacin de una solucin acuosa en

tres distintas concentraciones del hongo: 106 conidias/ml, 109 conidias/ml y 1012 conidias/ml, las

cuales tambin se evaluaron en conjunto con el cido brico. Se realizaron seis tratamientos

experimentales o bioensayos, los cuales contaron con tres repeticiones y un control o testigo. A

continuacin se describen los procesos llevados a cabo para la evaluacin de las mortalidades

sobre las cucarachas.

3.1 Obtencin de la cucaracha Periplaneta americana

Las ninfas y adultos de la cucaracha Periplaneta americana se recolectaron en el municipio

de Anolaima en Cundinamarca, en una casa la cual report infestaciones del insecto en cocinas,

baos, etc. Se trasportaron en recipientes plsticos hasta el laboratorio de zoonosis (Figura 15)

de la Facultad del Medio Ambiente y Recursos Naturales de la Universidad Distrital Francisco

Jos de Caldas.

Figura 15. Recoleccin de ninfas y adultos de

la cucaracha Periplaneta americana. Fuente
las autoras.
 61

3.2 Crianza de las cucarachas

La crianza de las cucarachas Periplaneta americana (Figura 16) se realiz en recipientes de

vidrio de 30cm por 15 cm libres de cualquier suciedad, las cuales fueron conservados en una

incubadora a 27C para garantizar la temperatura ambiental constante similar a la del medio de

origen, se dejaron en reposo durante 5 das para su adaptacin antes de iniciar los bioensayos.

Figura 16. Conservacin y alimentacin de ninfas

y adultos de la cucaracha Periplaneta americana.
Fuente las autoras.

3.3 Diseo de las jaulas.

Para tener una buena visibilidad de los especmenes recolectados se realizaron cajas de vidrio

de 30 cm por 15 cm con unas tapas las cuales tenan una malla mosquitera que rodeaba todo el

recipiente (Figura 17), para evitar que los ejemplares se salieran; as mismo se colocaron en su

interior unos recipientes plsticos con 5 ml de capacidad en donde se les administrara el agua y

posteriormente la solucin con el hongo, y otras ms grandes donde se les administrara

alimentos ricos en almidn y azcares como galletas, pan, etc (Ponce, 2005).
 62

Figura 17. Diseo de las jaulas para la

conservacin de ninfas y adultos. Fuente autoras.

3.4 Obtencin del hongo Metarhizium anisopliae

La cepa del hongo Metarhizium anisopliae fue donada por la Universidad de los Andes; esta

se encontraba almacenada e inactiva en el reservorio de laboratorio de Micologa y Fitopatologa

(J-204) del Departamento de Ciencias Biolgicas de la Universidad de Los Andes, en donde se

aisl una muestra y se incub por dos meses. La cepa se encontraba sembrada en agar PDA

(Agar papa dextrosa), incubada a una temperatura de 25C. El auxiliar de laboratorio de la

Universidad de los Andes entreg la muestra en caja de Petri y recomend sembrar las rplicas

en el mismo medio y a la misma temperatura (Obando B & Bustillo , 2013).

En la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas en la Facultad del Medio Ambiente y

Recursos Naturales, en el laboratorio de microbiologa se sembraron cuatro rplicas (A1-A4) de

la cepa obtenida del hongo Metarhizium anisopliae en medio PDA, a una temperatura de 25C

durante 8 das.

3.5 Prueba de reactivacin del hongo

La prueba de reactivacin del hongo es importante ya que debido a las condiciones de la cepa

donada (inactiva y almacenada), es indispensable probar si an se encuentran su mecanismo de

 63

infeccin activo, antes de empezar a trabajar con la cepa, como mtodo de control. Se realiz un

bioensayo en un insecto hospedante con la finalidad de comprobar su viabilidad y pureza.

Para iniciar se consiguieron tres especmenes de los llamados cucarrn (coleptera), que

son los insectos ms vulnerables a la accin del hongo, dado que en su cutcula poseen algunas de

las caractersticas para ser infectado por el hongo de forma ms sencilla (Arboleda, 2003).

Se procede con la seleccin de adultos de los insectos a ser evaluados, que deben estar vivos y

activos; libres de enfermedades. Se desinfectan con una solucin de hipoclorito de sodio al 0,5%

durante dos (2) a diez (10) minutos dependiendo del insecto y se lavan con agua destilada estril.

Despus de este lavado, se seleccionan los insectos que se encuentren ms activos. Y en tres cajas

de Petri con la siembra del hongo Metarhizium anisopliae Se introducen en estas y una vez

hecho el contacto se hace seguimiento por cinco (5) das. Se toman los insectos con tres (3)

repeticiones y un testigo que no entra en contacto con el hongo.

3.6 Prueba de germinacin

Esta prueba sirve para verificar el buen desarrollo del crecimiento del hongo. Se tomaron tres

rplicas del hongo las cuales se enumeraron en A2 a A4 en las cajas de agar PDA, y al ver su

crecimiento, se inici la prueba de germinacin. Se llen la caja de Petri con la rplica del hongo

con 15 ml de agua destilada y con ayuda de un asa redonda se raspo el contenido para agregarlo

a un beaker. Luego se diluyo hasta 10-6 conidias/ml y se procedi a hacer el conteo en la cmara

de Neubauer de la concentracin obtenida del hongo (Gmez Pereira & Mendoza Mora, 2004).

Al hacer el conteo se obtuvieron los siguientes resultados que se observan en la tabla 7:

 64

Tabla 7

Concentracin de la Dilucin 10 6 prueba de germinacin

CONTEO DE CONIDIAS/ml Dilucin 106

Cuadros de la Cmara de Neubawer
A B C D E Suma
Numero de 35 46 42 48 42,75
Conidias
PROMEDIO 42,75

Nota: Fuente las autoras.

Para hallar la concentracin de la dilucin se utiliz la siguiente formula:

Concentracin: # Conidias * 10000

5* factor de disolucin

Realizando el clculo anterior la concentracin final fue de 8,5 por 10 10 conidias/ml.

Luego en una caja de agar PDA se dibujaron 5 crculos por la parte posterior y se sembraron

10 microlitros de la dilucin con la concentracin conocida en cada uno de los crculos,

transcurridas 24 horas se agreg azul de lactofenol para detener la germinacin. Con ayuda del

microscopio se cont en cada uno de los crculos las conidias germinadas, aquellos cuyo tubo

germinativo era el doble de grande que el dimetro de la conidia (Gmez Pereira & Mendoza

Mora, 2004). Finalmente se obtuvo un porcentaje de las conidias germinadas; lo cual comprueba

que el hongo tiene un crecimiento favorable y era viable para realizar los bioensayos.

3.7 Preparacin de la solucin madre del hongo Metarhizium anisopliae

Para la preparacin de la solucin madre se tomaron tres cajas sembradas del hongo

Metarhizium anisopliae en agar PDA (Agar Papa Dextrosa) ya esporulado, se rasparon las

esporas con la ayuda de una asa redonda adicionando 20 ml de agua destilada por cada caja y

con Tween 80 para lograr separlas entre s (Caedo T. , 2004) al 0,1% hasta un volumen

conocido.
 65

3.8 Preparacin de las concentraciones del hongo Metarhizium anisopliae para

bioensayos.

Para las concentraciones finales de los tratamientos se tom como referencia el documento de

Gabriela Hernndez Ramrez (2013) CEBOS PARA EL CONTROL DE LA CUCARACHA

ALEMANA Blattella germanica (DICTYOPTERA: BLATTELLIDAE) FORMULADOS CON

HONGOS ENTOMOPATOGENOS Y ACIDO BRICO. del cual se tom como referencia la

concentracin que mostr mejores resultados que fue 106 conidias/ml , y as se plantearon tres

concentraciones a evaluar, un valor mayor 109 conidias/ml y otro ms grande 1012 conidias/ml.

Para la preparacin de las soluciones para cada tratamiento y su respectiva repeticin se saca

una nueva solucin madre.

Para el primer tratamiento la solucin de concentracin 106 se tomaron tres tubos de ensayo

cada uno con 9 ml de agua destilada, en cada 3uno de los tubos se realiz una dilucin de 10 -1
-3
hasta llegar a 10 para as realizar el conteo en la cmara de Neubauer y llegar a la

concentracin final 106. De estos tres tubos de ensayo ya con el agua destilada se extrajo 1 ml de

la solucin madre, el cual se agreg al primer tubo 10-1 posteriormente este tubo se tap y se

llev al agitador tipo vortex por 1 minuto. Al finalizar del tubo 10-1 se extrajo 1 ml y se agreg al

tubo de 10-2, se realizaron los mismos procedimientos hasta llevarlo a 10 -3. Al finalizar las

diluciones se tom de los ltimos tubos (10-2 o 10 -3) un micro litro para realizar el conteo en la

cmara de Neubauer.

Este proceso se repite igual para las concentraciones 109 y 1012 con sus respectivas

repeticiones.
 66

3.9 Bioensayos.

Se llevaron a cabo en el laboratorio de zoonosis; las soluciones finales con las concentraciones

deseadas (106, 109 y 1012) se sirvieron en las copitas de 5 ml, esta solucin se renovaba cada dos

das para revisar la efectividad de la solucin, hay que tener en cuenta que por cada tratamiento y

sus repeticiones se manejaban diez especmenes de cucarachas cada uno con su respectivo control

o testigo el cual contaba con la misma cantidad, para as tener un total de 267 especmenes

expuestos en los tratamientos.

Los primeros tres tratamientos se enumeraron T1 (106), T2 (109 ) y T3 (1012) en los cuales

solo se utiliz la solucin acuosa del hongo Metarhizium anisopliae en sus diferentes

concentraciones, T4 fue el tratamiento donde se utiliz 4 gr. de cido brico mezclado en la

comida de las cucarachas y los tratamientos T5 (109 ms cido brico) y T6 (1012 ms cido

brico) fue en donde la solucin acuosa del hongo Metarhizium anisopliae trabajo en conjunto

con el cido brico, pero sta vez el cido brico no se mezcl con la comida de las cucarachas.

En la figura 21 se presenta un diagrama del procedimiento que se sigui para el desarrollo de los

bioensayos.
 67

Figura 18. Procedimientos para la realizacin de los bioensayos. Fuente las autoras.

3.10 Lecturas de mortalidad

Se realizaron lecturas de mortalidad los das 1, 3 y 5, despus de iniciar el tratamiento,

tomando como criterio el crecimiento del hongo el cual sucede a los 3 o 4 das y la fase final de

aparicin de pequeas colonias y estructuras del hongo al 4 y 5 da, dadas estas condiciones se

considera como muerta una cucaracha por accin del hongo cuando se observa falta de

movimientos y aparicin de un micelio blanco ( Figura 19) que es la hifa la cual se ensancha y

ramifica dentro del tejido del insecto, especialmente en las articulaciones de segmentos del
 68

exoesqueleto de la cucaracha (Hajek, 1994). Estos fueron los especmenes que se consideraron

para el porcentaje de mortalidad.

Figura 19. Infeccin del hongo Metarhizium anisopliae en especmenes adultos y en ninfas de la cucaracha
Periplaneta americana. Foto autoras.

3.11 Estadstica

Para realizar el anlisis de los resultados de los bioensayos con el hongo, luego con el cido

brico y finalmente en combinacin, se plantearon los siguientes modelos matemticos y

estadsticos:

Promedio de mortalidades de cada tratamiento por bioensayo, en los diferentes

tratamientos de slo accin del hongo, uno para el tratamiento con cido brico y otros para los

tratamientos del cido brico y el hongo en solucin acuosa.

Desviacin Estndar de cada promedio, para verificar que las medias de todos los

porcentajes de mortalidad se asemejan y no existe diferencia entre los resultados obtenidos de

cada tratamiento.
 69

Anlisis de varianza (ANOVA) para un factor: se realiz con el fin de verificar

diferencias significativas entre los promedios de mortalidad de cada tratamiento individual;

accin del hongo en solucin acuosa, accin del cido brico mezclado con la comida de las

cucarachas y en combinacin del hongo y cido brico (Baron & Tellez, 2015). Para la

realizacin de esta prueba se plantean dos hiptesis:

- Hiptesis Nula Ho: no hay una diferencia significativa entre los promedios de mortalidad

de los bioensayos propuestos, las medias de los valores son equivalentes. Los valores de las

concentraciones no inciden en la mortalidad de los especmenes.

- Hiptesis Alterna H1: los resultados de los bioensayos de los tratamientos comparados,

representan diferencia entre ellos, las medias no son equivalentes. Los valores de las

concentraciones si inciden en la mortalidad de los especmenes.

Anlisis de comparaciones pareadas: con esta prueba podemos demostrar si hay,

diferencias significativas entre los tratamientos propuestos y el testigo, especificando que cada

tratamiento fue efectivo frente a la mortalidad de la cucaracha.

En esta prueba se evaluaron los resultados de cada tratamiento en accin individual y en

conjunto, ms la combinacin de ambos con su respectivo testigo.

 70

4. Resultados

4.1 Resultados prueba de germinacin de la cepa del hongo Metarhizium anisopliae

Despus de realizar el conteo en la cmara de Neubauer se obtuvieron los siguientes resultados

(tabla 8) de conidias germinadas.

Tabla 8

Resultado de prueba de germinacin

PORCENTAJE DE GERMINACION DILUCIN 106

NMERO DE CONDIAS GERMINADAS

Crculo 1 Crculo 2 Crculo 3 Crculo 4 Crculo 5 Promedio

100 100 92 72 100 92,8

Segn el promedio de conidias germinadas 92,8 % se demuestra que la cepa del hongo esta en

ptimas condiciones para trabajar los bioensayos y los resultados no se vern afectados por el

crecimiento del mismo o que la cepa se encuentre muy vieja (Caedo & Ames, 2004).

4.2 Resultados prueba de reactivacin del hongo

Despus de haber infectado a los especmenes con el hongo por contacto de la cepa en la caja

de Petri, se realiz el seguimiento de los especmenes cada 4 horas, alimentndolos con pasto y

agua. Se registr un porcentaje de 80% de mortalidad para dicha prueba, y despus de 6 a 8 das

se pudo apreciar el crecimiento del micelio blanco que posteriormente tom una coloracin

verde dentro del insecto como se evidencia en la figura 20.

 71

Figura 20. Cucarrn (coleptera) afectado por la

patognesis del hongo Metarhizium anisopliae.
Fuente las autoras.

4.3 Bioensayos T1 concentracin (106), T2 concentracin (109) y T3 concentracin

(1012); resultados de mortalidad tratamientos con solo accin del hongo

Despus de realizar los primeros bioensayos, y consultar cada 24 horas el nmero de

cucarachas muertas, se realiz un promedio por bioensayo de las mortalidades finales registradas

para cada tratamiento y el testigo; se calcul un promedio general del bioensayo (Figura 21)

registrados 5 das despus de aplicar el tratamiento.

 72

PORCENTAJES DE MORTALIDAD
TRATAMIENTOS T1, T2 Y T3
8%
53%
1
77%
0%

0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90%

TESTIGO PORCENTAJE MORTALIDAD
TRATAMIENTO T3
TRATAMIENTO T2
TRATAMIENTO T1

Figura 21. Resultados porcentajes de mortalidad tratamientosT1 (concentracin 10 6), T2 (concentracin 109) y T3
(Concentracin 1012). Fuente las autoras.
En la figura 21 se registran los promedios de las mortalidades presentadas en los tres tratamientos

iniciales donde slo actuaban las conidias del hongo en solucin acuosa; el tratamiento que tuvo

menor efectividad fue T1 de concentracin 106 conidias/ml, con porcentajes de 0% de mortalidad

despus de 5 das de iniciar el tratamiento, el segundo tratamiento que segn la grfica 1 tuvo

mejor efecto de mortalidad sobre la cucaracha fue T3 concentracin de 1012 conidias/ml con un

porcentaje de mortalidad de 53% superando por 3 puntos la mitad del total de especmenes

evaluados.

El tratamiento que tuvo un mejor porcentaje de mortalidad fue T2 la concentracin de 109

conidias/ml con un 77% de los especmenes muertos despus de 5 das de iniciar el tratamiento.

El comportamiento del testigo fue de un porcentaje de mortalidad de 8% durante los tratamientos

de slo la accin del hongo; corrobora que la causa de la mortalidad en los dems tratamientos

fue a causa del tratamiento con el hongo, y que factores externos no afectaron significativamente

la muerte de las cucarachas.

 73

4.4 Bioensayo T4 resultado con el cido brico

Para continuar se procedi hacer el bioensayo con el tratamiento T4 adicionando 4 gr. de

cido brico mezclados en la comida de las cucarachas (ricos en almidn). Se realizaron tres (3)

bioensayos en las mismas condiciones que los anteriores y se obtuvieron los siguientes resultados

(figura 22):

PORCENTAJES DE MORTALIDAD TRATAMIENTO CON

CIDO BRICO
TRATAMIENTOS

100,0%
100%
3% TRATAMIENTO
TESTIGO

0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%

% MORTALIDAD

Figura 22. Porcentajes de mortalidad tratamiento T4 con slo accin del cido brico. Fuente las autoras.

Segn la figura 22 se obtuvieron resultados del 100% de cucarachas muertas por accin del

cido brico en las tres (3) repeticiones del tratamiento, pero en un tiempo de 3 das y al

comparar los resultados con los resultados del testigo en el cual se obtuvo un porcentaje de

mortalidad de 3% se afirma que el tratamiento con el cido fue el que caus el 100% de las

muertes de las cucarachas.

Al comparar las figuras 21 y 22 de los tres (3) tratamientos iniciales de manera independiente

se identifica que el mejor tratamiento para realizar el biocontrol de la cucaracha Periplaneta

americana es el T4 el cido brico en combinacin con la comida de la cucaracha, con

 74

porcentajes del 100% de mortalidad, seguido el tratamiento T2 (109) con un porcentaje de

mortalidad del 77% y el tercer tratamiento que fue efectivo para el control de la cucaracha es T3

(1012) con un porcentaje de 53%. Los testigos para estos tratamientos se mantuvieron por debajo

del 8%, sugiriendo que la causa de muerte en los diferentes tratamientos fue la accin del hongo

en solucin acuosa y el cido brico en combinacin con la comida de las cucarachas.

4.5 Resultados de mortalidad bioensayos T5 concentracin 109 ms cido brico y T6

concentracin 1012 ms cido brico

Para evaluar la accin en conjunto del cido brico y el hongo, se establecieron 2 bioensayos

con las concentraciones que presentaron mejores resultados de accin patgena individual frente

a la mortalidad de la cucaracha Periplaneta americana, fueron los tratamiento T2 y T3, a

continuacin se presentan los resultados obtenidos por los tratamientos T5 y T6 en accin en

conjunto (figura 23).

PORCENTAJES DE MORTALIDAD TRATAMIENTOS

T5Y T6
TRATAMIENTOS

20%

1 83% TESTIGO
Tratamiento T6
100%
Tratamiento T5

0% 20% 40% 60% 80% 100% 120%

PORCENTAJES DE MORTALIDAD

Figura 23. Bioensayo T5 (concentracin 109) y T6 (concentracin 1012) ms cido brico resultados de mortalidad.
Fuente las autoras.
 75

En los resultados de los tratamientos T5 y T6 se evidenci la accin en conjunto del cido

brico y el hongo; comparando las figuras 21 y 23, los porcentajes de mortalidad aumentaron, en

la concentracin de 109 con el cido brico llegando a un porcentaje del 100% de mortalidad para

las tres (3) repeticiones el cual se present en 5 das, y para la concentracin de 1012 con el cido

brico un porcentaje del 83% de cucarachas muertas al trascurrir 5 das del tratamiento.

Comparado la figura 22 y 23 no se identifica un aumento del porcentaje de mortalidad, ya que

el tiempo del tratamiento T4 (adicin de cido brico mezclado con la comida) es de 3 das para

un porcentaje total del 100%, mientras que en los tratamientos con el hongo en solucin acuosa

transcurrieron 5 das para que estos presentaran muertes de los especmenes, teniendo en cuenta

que la concentracin que presento ms muertes fue la concentracin 109 conidias/ml. Los testigos

mantuvieron un rango similar a los dems testigos de los dems tratamientos que fue del 21% de

cucarachas muertas por efectos externos al tratamiento.

 76

Anlisis estadstico

5.1 Comparaciones de varianza (ANOVA) entre grupos experimentales

El primer grupo para comparar los resultados expuestos, son los tratamientos que se realizaron

con solo accin patgena del hongo en solucin acuosa, entre sus diferentes concentraciones. Los

resultados se describen en la tabla 9:

Tabla 9

Anlisis de varianza de un factor, tratamientos individuales

RESUMEN
Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
tratamiento 0,06333333
3 2,3 0,766666667
10 9 3
tratamiento 0,25333333
3 1,6 0,533333333
10 12 3
tratamiento
3 0 0 0
10 6
0,00583333
Testigo 3 0,25 0,083333333
3
tratamiento
3 3 1 0
(cido brico)

ANLISIS DE
VARIANZA
Suma de Grado Valor
Origen de las Promedio de
cuadrado s de F Probabilidad crtico para
variaciones los cuadrados
s libertad F
Entre grupos 2,22 4 0,557333333 8,64082 0,002775587 3,478049
Dentro de los
0,645 10 0,0645
grupos

Total 2,874 14
Nota: Anlisis de ANOVA para los bioensayos de los tratamientos en accin conjunta. Fuente las autoras.
 77

Los valores de anlisis de varianza reflejan que el valor de la probabilidad es menor que 0,05

por tanto se acepta la hiptesis alterna (p= 0,027), donde los resultados de los valores entre

grupos experimentales si tienen una diferencia amplia y se infiere que los valores de las

concentraciones si interfieren en la mortalidad de las cucarachas (Baron & Tellez, 2015).

Para los tratamientos que se hicieron en accin conjunta del cido brico y la solucin acuosa

del hongo se obtuvieron los siguientes resultados (Tabla 10):

Tabla 10

Anlisis de varianza de un factor, Tratamientos del hongo y cido brico

RESUMEN
Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
tratamiento
3 3 1 0
T5
tratamiento
3 2,5 0,833333333 0,083
T6
Testigo 3 0,6 0,2 1,1555
ANLISIS DE VARIANZA
Valor
Origen de las Suma de Grados Promedio de Proba
F crtico
variaciones cuadrados de libertad los cuadrados bilidad
para F
Entre grupos 1,06888 2 0,534444444 19,24 0,0024 5,1432
Dentro de los
0,16666 6 0,027777778
grupos

Total 1,2355 8

Nota: Anlisis de ANOVA para los bioensayos de los tratamientos en accin conjunta. Fuente las autoras.

Con respecto a los tratamientos realizados con la combinacin de hongo y cido brico, se

identific que tambin hubo una diferencia significativa con respecto a la media de los valores,

con un grado de libertad de dos (2) entre grupos, seis (6) dentro de los grupos y el p=0,0024. Se

acepta la hiptesis alterna, aceptando que la diferencia en las concentraciones del hongo y los

tratamientos, si afecta significativamente la mortalidad de las cucarachas.

 78

Para los tres tratamientos se acepta la hiptesis alterna; sus varianzas no son equivalentes. Para

determinar diferencias significativas en los tres grupos de tratamientos y su respectivo testigo se

realiz una comparacin de muestras pareadas obteniendo los siguientes resultados para los

tratamientos (Tabla 11):

Tabla 11

Prueba t para medias de dos muestras emparejadas tratamientos con slo accin del hongo

Variable 1 Variable 2

Media 0,43333333 0,08333333

Varianza 0,02111111 0,00583333

Observaciones 3 3
Coeficiente de correlacin de Pearson -0,97622104
Diferencia hipottica de las medias 0
Grados de libertad 2
Estadstico t 2,74954542
P(T<=t) una cola 0,05536673
Valor crtico de t (una cola) 2,91998558
P(T<=t) dos colas 0,11073346
Valor crtico de t (dos colas) 4,30265273

Prueba t para medias de dos muestras emparejadas

Variable 1 Variable 2
Media 1 0,03333333
Varianza 0 0,00333333
Observaciones 3 3
Coeficiente de correlacin de Pearson #DIV/0!
Diferencia hipottica de las medias 0
Grados de libertad 2
Estadstico t 29
P(T<=t) una cola 0,00059347
Valor crtico de t (una cola) 2,91998558
P(T<=t) dos colas 0,00118694
Valor crtico de t (dos colas) 4,30265273
 79

Prueba t para medias de dos muestras emparejadas

Variable 1 Variable 2
Media 0,91666667 0,2
Varianza 0,02083333 1,1556E-33
Observaciones 3 3
Coeficiente de correlacin de Pearson -3,1402E-16
Diferencia hipottica de las medias 0
Grados de libertad 2
Estadstico t 8,6
P(T<=t) una cola 0,00662632
Valor crtico de t (una cola) 2,91998558
P(T<=t) dos colas 0,01325264
Valor crtico de t (dos colas) 4,30265273
Nota: Resultados de la prueba T para medias pareadas de los 3 tratamientos principales. Fuente las autoras.

En los resultados obtenidos en la comparacin de los promedios de los primeros 3 bioensayos

y los respectivos testigos, por grupo experimental observamos similitudes como el T estadstico

para los tratamientos realizados con slo concentracin del hongo en solucin acuosa estos

fueron 2,74 mientras que el T crtico fue de 4,3. Para el tratamiento de concentracin del hongo

en solucin acuosa y cido brico no mezclado con la comida el valor crtico de T estadstico es

29 y el T es 4,3 lo que refleja una total diferencia entre los grupos experimentales comparados

con la media, aceptando la hiptesis alterna dado que el valor del F calculado en las tablas es

mayor que el F crtico, para ambos clculos los tratamientos si se ven directamente afectados por

la variacin de la concentracin del hongo en accin con el cido brico y que con respecto a su

testigo tambin se ve una diferencia alta entre el grupo que fue expuesto al tratamiento y el

testigo. Para el grupo experimental de cido brico se obtuvo una T estadstico de 8,6 mientras

que el T crtico fue de 4,3 lo que refleja una diferencia alta entre los grupos del testigo y los

especmenes con el tratamiento. La correlacin de Pearson se refleja como un error en la frmula,

significa que el valor es negativo, por lo tanto los valores de este tratamiento tienen una relacin

indirecta, mientras que uno aumenta el otro disminuye (Baron & Tellez, 2015).
 80

5. Anlisis de resultados

En cuanto a la efectividad de la solucin acuosa del hongo Metarhizium anisopliae segn los

datos obtenidos en la figura 21 se refleja que el tratamiento que tuvo mejores resultados fue T2

concentracin 109 conidias/ml, respecto al tiempo el cual fue de 5 das, el porcentaje de

mortalidad de las cucarachas con respecto a la infeccin generada por el hongo fue del 77%,

adems en la tabla 9 despus de realizar la prueba ANOVA se tuvieron resultados

estadsticamente significativos, pues la hiptesis nula se rechaz en estos tratamientos con un

valor de P menor al 0,05, por consiguiente los resultados representan diferencias con respecto a la

media y sugieren que los diferentes concentraciones del hongo si afectan significativamente la

mortalidad de las cucarachas.

El tratamiento que tambin mostr promedios de mortalidad fue el tratamiento T3 de

concentracin 1012, y al igual que los resultados obtenidos por la anterior concentracin y los

mostrados por el anlisis de la variable ANOVA son estadsticamente representativos. La

concentracin que no tuvo ningn efecto fue 106 conidias/ml; estos resultados se asocian a

mecanismos de resistencia fisiolgicos de la cucaracha, como son la respuesta inmune humoral

la cual es ampliamente utilizada por varios insectos y la cucaracha es un ejemplo de adaptacin

a este sistema. Recordemos que la inmunidad humoral es el principal mecanismo de defensa

contra los microorganismos extracelulares y sus toxinas, hay que tener en cuenta que las clulas

no son las que atacan estos antgenos si no las macromolculas o protenas entre los pptidos

antimicrobianos encontrados dentro de las cucarachas, el ms conocido es la lectina encontrado

en el hemocele; la cual hace parte del sistema circulatorio del insecto (Jomori T., 1992). Tambin

se ha evidenciado una respuesta adaptativa del tipo humoral cuando se presenta inmunizacin
 81

por parte de microorganismos atenuados, un ejemplo es Pseudomonas aeruginosa, pero esto

ocurre en la cutcula de los insectos.

En el caso de este estudio se evit el contacto con la cutcula, tratando de inocular las

cucarachas con el hongo en el agua que beban, generando que las concentraciones entraran de

forma ms fcil y completas al sistema, generando una patognesis interna del hongo al hemocele

y posteriormente a la hemolinfa (Jomori & Natori, 1992).

Los resultados obtenidos por la concentracin de 1012 conidias/ml se asocian a la capacidad de

modificar la conducta de la poblacin de cucarachas; estas alteraciones de la conducta afectan la

respuesta hacia insecticidas y pueden acompaar el desarrollo de resistencia fisiolgica (Barbosa,

2007). Por ejemplo en el tratamiento con la concentracin 1012 conidias/ml se observ una

resistencia por conducta a concentraciones altas del hongo, provocando una aversin al agua

(Taiariol, 2009). De acuerdo a las observaciones hechas de las diferentes concentraciones, las

cucarachas no agotaron el total de la solucin acuosa en el tratamiento T3 de concentracin 1012

conidias/ml, por eso se relacionan las dos concentraciones con menores resultados en este caso

(1012 conidias/ml y 106 conidias/ml) esto ocurre por la capacidad de resistencia de las

cucarachas, tanto fisiolgicas y de conducta, logrando as repercutir en los resultados de

porcentajes de mortalidad de los tratamientos.

Comparando el estudio con los resultados mostrados por Hernndez Ramrez (2013),

Susceptibilidad de ninfas y adultos de Blattella Germanica a Metarhizium anisopliae y

Beauveria bassiana donde el mtodo de aplicacin fue inoculacin directa en la especie y al

cabo de 8 das se apreciaron porcentajes por encima del 80% de letalidad, se muestra una

efectividad mayor a una concentracin ms alta del hongo y con una forma de infeccin

diferente, en medio acuoso.

 82

La mejora del mtodo de aplicacin se evidencia en el tiempo de letalidad de la cucaracha y

los porcentajes de mortalidad para las soluciones en medio acuoso con slo accin del hongo en

el presente estudio, soportados por la prueba ANOVA de un slo factor y la T Student para la

comparacin de los tratamientos y su testigo. Sealando un tiempo de letalidad de 5 das y un

porcentaje de mortalidad de 77%.

Pero al comparar los tratamientos obtenidos en la grfica 22 de la accin del cido brico en

conjunto con la comida de las cucarachas, se observ un aumento de los porcentajes de

mortalidad de un 100% en 3 das, mostrando ser el mejor tratamiento para controlar la

Periplaneta americana.

Al comparar los resultados de la figura 23, se evidencia la accin en conjunto del cido brico

y la solucin acuosa del hongo; se increment el porcentaje de mortalidad hasta 100% de las

cucarachas muertas en 5 das despus de iniciar el tratamiento. La variacin del cido brico

fuera de la comida si disminuy el efecto del cido, pero con ayuda del hongo en solucin acuosa

se lograron resultados del 100% de cucarachas muertas. El cambio ms significativo observado

en los resultados de la figura 22 es el tiempo de letalidad, que paso de 3 a 5 das. Se deben a las

variaciones de la forma de exposicin del cido brico fuera de la comida de las cucarachas,

como en los ltimos tratamientos ya no es necesario el contacto con el cido brico, las

cucarachas no ingieren el cido brico fcilmente. Se ha comprobado que es un veneno estomacal

con accin lenta, el cido absorbe la cera de la cutcula de la cucaracha y esta muere por

deshidratacin (Ogg et al., 2006), lo cual ayudara a la accin del hongo de invadir la cucaracha

sin resistencia, para colonizar el interior del insecto y realizar la patognesis.

 83

Conclusiones

Se comprueba por medio de las mortalidades obtenidas en los bioensayos que el hongo

entomopatgeno Metarhizium anisopliae tiene efectos patgenos sobre Periplaneta americana,

en solucin acuosa en concentraciones de 109 conidias/ml y 1012 conidias/ml, ya que comparando

las mortalidades de los testigos se evidenci que las condiciones de laboratorio fueron ptimas

para el crecimiento del hongo; se alcanzaron mortalidades por encima del 50%.

Se identifica el efecto infectivo del cido brico para cucarachas americanas, con

mortalidades de 100% en 3 das de exposicin al tratamiento, comparando las figuras 21, 22 y 23

se muestra que es el mejor tratamiento para el control de las cucarachas mezclando el polvo con

las comida de las mismas.

La accin del cido brico en conjunto con el hongo Metarhizium anisopliae potencializa

el efecto patgeno del hongo, alcanzando porcentajes de mortalidad del 100% en 5 das, despus

de haber iniciado del tratamiento. La accin del cido brico no se inhibe con la accin del

hongo. se encontr diferencia estadstica significativa entre los resultados obtenidos en las

mortalidades de las seis concentraci

El hongo entomopatgeno Metarhizium anisopliae tiene efectos patognicos sobre la

Periplaneta americana en diferentes estadios ninfales, logrando controlar en una concentracin

de 109 conidias/ml un 77% de los especmenes evaluados en segundo tratamiento del estudio

realizado.

En concentraciones mayores a 1012 conidias/ml el hongo Metarhizium anisopliae pierde

efecto sobre Periplaneta americana, debido a sus capacidades de modificacin de conducta,

generando una aversin a la concentracin del hongo dentro de la solucin acuosa.

 84

Recomendaciones

Se recomienda hacer un estudio con ootecas de la Periplaneta americana, para

determinar si inhibe su crecimiento.

No se recomienda hacer bioensayos del hongo en concentraciones mayores a 1012

conidias/ml en solucin acuosa, para el control de la Periplaneta americana.

Se recomienda hacer ms repeticiones de los bioensayos para tener una mejor distribucin

de los datos y un promedio ms especfico de los resultados, y as lograr una mayor exactitud en

la concentracin ideal para el control de la Periplaneta americana.

Se recomienda ampliar el rango de estudio de las concentraciones del hongo entre 109

conidias/ml y 1012 conidias/ml.

 85

Bibliografa

Ainsworth, G. C. (1973). The Fungi. An advanced treatise. Vol. IV B. A taxonomic review with
keys: Basidiomycetes and lower fungi. (Vol. IV).
Arahana, V. S. (2013). Diversidad gentica de una coleccin de hongos entomopatgenos de
Ecuador utilizando un enfoque AFLP modificado. Avances en Ciencias e Ingenieras.,
5(1).
Arboleda, J. W. (2003). Efecto de la toxina beauvericina sobre Hypothenemus hampei. Manejo
integrado de plagas y agroecologa, 68, 71-76. Retrieved from
https://www.researchgate.net:
https://www.researchgate.net/profile/Arnubio_Valencia2/publication/228761687_Efecto_
de_la_toxina_beauvericina_sobre_Hypothenemus_hampei/links/09e4150bcc2c0c388f000
000.pdf
Arce, B. A., & Enciso, Q. S. (2009). Efecto del fruto de la planta vigure (Solanum Mammosum)
sobre la cucararacha peridomestica (Periplaneta Americana). Bogota: Universidad de la
Salle. Retrieved from La salle.edu.co.
Ashida, M. B. (1995). Role of the integument in insect defense: pro-phenol oxidase cascade in
the cuticular matrix. Proceedings of the National Academy of Sciences, 92(23), 10698-
10702. Retrieved 2016, from sciencedirect:
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1534580705004727
Avila de Moreno, U. (1988). Aspectos de la biologa y patogenicidad del hongo Metarhizium
anisoplae (Metchnikoff) Sorokin, sobre Aeneolamia varia (F). Revista ICA (Colombia),
155-161.
Badii, M. H., & Abreu, J. L. (2006). Control biolgico una forma sustentable de control de
plagas. Daena: International Journal of Good Conscience, 82-89. Retrieved 11 2015,
from http://datateca.unad.edu.co:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/356017/Lecturas_complementarias/ACT_8_contro
l_biologico.pdf
Badii, M. H., & Landeros, J. (2015). Plaguicidas que afectan a la salud humana y la
sustentabilidad. Culc y T, 19. Retrieved from CULCyT:
http://openjournal.uacj.mx/ojs/index.php/culcyt/article/view/454/433
Barbosa, A. E. (2007). Inibidores de alfa amilase e suas aplicacoes no controle da broca-do-cafe
(Hypothenemus hampei). . Londrina, Brasil.: Instituto Agronmico do Paran.
Baron, J., & Tellez, F. (2015). Apuntes de Bioestadistica. Retrieved from Apuntes de
Bioestadistica: http://www.bioestadistica.uma.es/baron/apuntes/ficheros/cap05.pdf
Bazn Tene, M. (2002). Efecto del Metarhizium anisopliae(Deuteromycotina:Hyphomycetes) en
el contro biologico de Boophilus microplus Canestrini (Acari:Ixodidae)en ganado bovino
estabulado. Tecomn, Colima: Universidad de Colima.
Bell, J. (1981). The laboratory cockroach. Gran Bretaa: Chapman and Hall.
Bittencourt, V. R. (1999). Mecanismo de infeco do fungo Metarhizium anisopliae no carrapato
Boophilus microplus em condies experimentais. Cincia Rural, 351-354.
Bogo, M. R. (1996). Double-stranded RNA and isometric virus-like particles in the
entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae. Mycological Research, 100(12), 1468-
1472.
 86

Bridge, P. D., Williams, M. A., & Prior, C. &. (1993). Morphological, biochemical and
molecular characteristics of Metarhizium anisopliae and M. flavoviride. Microbiology,
139(6), 1163-1169.
Bustillo Pardey, A. E. (2001). Hongos en insectos y posibilidades de uso en el control biolgico
de plagas en Colombia. SEMINARIO sobre Uso de Entomopatgenos en Colombia., 30-
54. Bogot, bogot, Colombia.: Socolen. Retrieved Noviembre 11, 2015, from
researchgate.net:
http://www.researchgate.net/publication/275462138_Hongos_en_insectos.y_posibilidades
_de_uso_en_el_control_biolgico_de_plagas_en_Colombia
Caedo, T. (2004). Manual de laboratorio para el manejo de Hongos Entomopatgenos. Lima,
Per: Centro Internacional de la Papa (CIP), Lima, Per, 62 p.
Carrillo, M. M., lvarez, C., & Ramos, J. (1996). Metarhizium anisopliae: Control alternativo
para el perforador del fruto del Tomate. Fonaiap Divulga; Revista de difusin de
tecnologa agrcola y pesquera del Fonaiap, 54.
Castillo Zeno, S. (2006). Uso de Metarhizium anisopliae para el control biolgico del
salivazo(Aeneolamia spp. y Prosapia spp.) en pastizales de Brachiaria decumbens en El
Petn, Guatemala. Turrialba, Costa Rica.: Catie.
Chapman, R. F. (1998). The Insects: Structure and Function. Cambridge University Press.
Conant, J., & Fadem, P. (2008). Gua comunitaria para la salud ambiental. Berkeley, California,
EE. UU: Hesperian. Retrieved from hesperian:
https://store.hesperian.org/prod/Community_Guide_to_Environmental_Health_Spanish.ht
ml
Damas Buenrostro, G. (2012). Aislamientos y efectividad de beauveria bassiana villemin para el
control biolgico de la cucaracha urbana Periplaneta americana. Mexico: Doctoral
dissertation, Universidad Autnoma de Nuevo Len.
De Jorge, J. (2010). As eran las cucarachas hace 300 millones de aos. ABC, p. 15.
Daz, C., Enrquez, D., & Bisset, J. A. (2003). Estado de la resistencia a insecticidas en cepas de
terreno de la especie Blattella germanica (Dictyoptera: Blattellidae) procedentes del
municipio Pinar del Ro. Revista Cubana de Medicina Tropical, 55(3), 10. Retrieved from
http://scielo.sld.cu.
Espada, E. N., & Garca, R. L. (2011). Biocontrol de garrapatas: hongos entomopatgenos.
Reduca, 22-23. Retrieved from http://revistareduca.es.
Fargues, J. D. (1981). Immunological characterization of the entomopathogenic hyphomycetes
Beauveria and Metarhizium. Mycopathologia, 75(2), 101-108.
Fargues, J., & Vey, A. (1974). Modalits d'infection des larves deLeptinotarsa decemlineata
parBeauveria bassiana au cours de la mue. Entomophaga, 311-323.
Fargues, J., Oueraogo, A., Goettel, M. S., & Lomer, C. J. (1997). Effects of Temperature,
Humidity and Inoculation Method on Susceptibility of Schistocerca gregaria to
Metarhizium flavoviride. Biocontrol Science and Technology., 345-356.
Faulhaber, L. M., & Karp, R. D. (1992). A diphasic immune response against bacteria in the
American cockroach. Immunology., 378381.
Ferron, F. (1975). pathogenese, less champignon entomopathogens. Bolletin.Strop.INRA. Station
de reserches de litte biologique, Versaller France., 13-27.
Ferron, P. (1981). Pest control by the fungi Beauveria and Metarhizium. London: Academic
Press.
Franco Chvez, K. G., Rodrguez Navarro, S., Cervantes Mayagoitia, J. F., & Barranco Florido,
J. E. (2012). Enzimas y toxinas de hongos entomopatgenos, su aplicacin potencial
 87

como insecticidas y fungicidas. Sociedades Rurales, Produccin y Medio Ambiente, vol

12( N 23), 143-160. Retrieved from Universidad Autonoma Metropolitana:
http://bidi.xoc.uam.mx/resumen_articulo.php?id=8595&archivo=5-599-
8595jkj.pdf&titulo_articulo=Enzimas%20y%20toxinas%20de%20hongos%20entomopat
%C3%B3genos,%20su%20aplicaci%C3%B3n%20potencialcomo%20insecticidas%20y%
20fungicidas
Fuxa, J. R. (1987). Ecological considerations for the use of entomopathogens in IPM. Annual
review of entomology, 32(1), 225-251.
Goettel, M. R. (1992). Mass production, formulation and field application of entomopathogenic
fungi. Canada: Estacin de Investigacin de Agricultura de Canad.
Gmez Pereira, P., & Mendoza Mora, J. (2004). Guia para la produccion de Metarhizium
anisopliae. El Triunfo, Guayas, Ecuador: Cincae,centro de investigacin de la caa de
azucar del Ecuador.
Gonzlez Garcia, M. T., Flrez, F. J., & Bustillo, A. E. (1993). Desarrollo de un bioensayo para
evaluar la patogenicidad de Beauveria bassiana sobre Hypothenemus hampei. Cenicaf,
44, 93-102.
Gonzlez, P. (2004). Riesgos quimicos por uso de plaguicidas en el medio ambiente. federacion
de serveis i administacions pbliques. Retrieved Noviembre 11, 2015, from
www.ccoo.cat: http://www.ccoo.cat/fsap/s_gene/ccoogene/salut/riesgosma.pdf
Grzimerk, B. (2003). Grzimeks animal life; Encyclopedia. Canada: Michael Hutchins.
Gupta, R. S. (1995). Phylogenetic analysis of the 90 kD heat shock family of protein sequences
and an examination of the relationship among animals, plants, and fungi species.
Molecular biology and evolution., 12(6), 1063-1073.
Hajek, A. E. (1994). Interactions between fungal pathogens and insect hosts. Annual review of
entomology., 39(1), 293-322.
Hall, R. A. (1982). Guidelines for the registration of entomogenous fungi as insecticides.
Entomophaga., 27(2), 121-127.
Hernndez, R. G. (2013). Cebos para el control de la cucaracha Alemana Blattella germanica
formulados con hongos entomopatogenos y acido borico. Montecillo, texcoco, Edo. de
Mxico.
Hernandz, V. (2014). Estudios de caso control biolgico en invernaderos. Liberacin
inoculativa: encarsia formosa para control de moscas blancas en hortalizas. Retrieved
Enero 10, 2016, from Universidad Autonoma de Guerrero:
http://controlbiologicouagro.blogspot.com.co
Hoffmann, M. P. (1993). Natural enemies of vegetable insects pests. Cornell University. Ithaca,
NY: Cooperative Extension.
Hutchins, M. (2003). Grzimeks animal life; Encyclopedia. Insects. (Vol. vol 3). Canada: Michael
Hutchins.
Ignoffo, M. M. (1996). Double-stranded rna and isometric virus-like particles in the .
Mycological Research, 100.
Iwanaga, S. L. (2005). Recent advances in the innate immunity of invertebrate animals. BMB
Reports, 38(2), 128-150.
Jackson, M. A. (1997). Optimizing nutritional conditions for the liquid culture production of
effective fungal biological control agents. Journal of Industrial Microbiology and
Biotechnology., 19(3), 180-187.
 88

Jacobs, S. B. (2002). PeennState College of Agricultural Sciences. Retrieved enero 10, 2016,
from PeennState College of Agricultural Sciences:
http://ento.psu.edu/extension/factsheets/es/es-american-cockroaches
Jaramillo , G. I., & Crdoba, H. (1999). Biologa de las Cucarachas: Agentes Sensibilizantes.
Revista de Inmunoalergia Asociacin Colombiana de Alergia, Asma e Inmunologa, vol 8
(N 1).
Jomori T., N. S. (1992). Function of the lipopolysaccharide-binding protein of Periplaneta
americana as an opsonin. US National Library of Medicine National Institutes of Health,
283-6.
Jomori, T., & Natori, S. (1992). Function of the lipopolysaccharide-binding protein of Periplaneta
americana as an opsonin. FEBS letters, 296(3), 283-286.
Kaaya, G. P. (1993). Pathogenicity of Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae and Serratia
marcescens to the banana weevil Cosmopolites sordidus. Biocontrol Science and
Technology,, 3(2), 177-187.
Kaaya, G. P. (1995). Biocontrol potential of the entomogenous fungi Beauveria bassiana and
Metarhizium anisopliae for tsetse flies (Glossina spp.) at developmental sites. Journal of
invertebrate pathology, 66(3), 237-241.
Katsumata, A. W., Jules, S., & Coby, S. (2013). Cmo las cucarachas han desarrollado aversin a
los cebos con glucosa. Science, 972-975.
Lecuona, R. E. (1996). Microorganismos patgenos empleados en el control microbiano de
insectos plaga. Universidad Nacional Agraria, (UNA), 338.
Lee, S. Y. (2002). Early events in crustacean innate immunity. Fish & shellfish immunolog,
12(5), 421-437.
Lezama Gutierrez, R. G. (1995). Effectiveness of the entomophatogenic fungus Metarhizium
anisopliae in the biological control of ticks in bovine livestock, in field conditions.
Publicacion Especial.
Manahan, S. E. (2007). Iintroduccin a la qumica ambiental. (U. a. Mxico, Ed.) Mxico:
Revert.
Martnez de Carrillo, M., lvarez , C., & Ramos, J. (1996). Metarhizium anisopliae: Control
alternativo para el perforador del fruto del Tomate. Fonaiap; Revista de difusin de
tecnologa agrcola y pesquera., 54.
Matabanchoy Solarte, J. A., & Bust, A. (2012). Eficacia de Metarhizium anisopliae para controlar
Aeneolamia varia (Hemiptera: Cercopidae), en caa de azcar. Revista Colombiana de
Entomologa, vol.38 no.2.
Mc Gavin, G. C. (2000). Insectos: araas y otros artropodos terrestres: Manuales de
identificacion. In G. McGavin, Insectos: araas y otros artropodos terrestres: Manuales
de identificacion. (p. 256). Barcelona: Omega.
MC, V., & JF, P. (year: 1997). Location of chitinolytic enzymes in protoplasts and whole cells of
the entomopathogenic fungus Metarhizium-anisopliae. Mycological research , pages:
1393 - 1396.
McGavin, G. C. (2002). Insectos,araas y otros artropodos terrestres. USA.
Montesinos, R. (2008). Relacin entre variables de crecimiento y virulencia en aislados de
Beauveria. Tesis de Maestra en biotecnologa., Universidad Autnoma Metropolitana,
unidad Iztapalapa.
Obando B, J. A., & Bustillo , A. E. (2013). Seleccin de cepas de Metarhizium anisopliae para el
control de Aeneolamia varia. Revista Colombiana de Entomologa, 26-33.
 89

Ogg, B., Ogg, C., Ferraro, D., & Jeff, D. (2006). Manual Para el Control de Cucarachas.
Lincoln: University of Nebraska.
Ongley, E. (1997). Lucha Contra la Contaminacin Agrcola de los Recursos Hdricos.
Burlington, Canad: Food & Agriculture Org. Retrieved from http://www.fao.org:
http://www.fao.org/docrep/w2598s/w2598s00.htm#Contents
Padilla Melo, G. N., Bernal Uribe, M. G., Vlez Arango, P. E., & Montoya Restrepo, &. E.
(2000). Caracterizacin patognica y morfolgica de aislamientos de metarhizium
anisopliae obtenidos de diferentes ordenes insectiles. Cenicaf, 28-40. Retrieved ENERO
2016, from http://www.cenicafe.org:
http://www.cenicafe.org/es/publications/arc051(01)028-040.pdf
Padilla-Melo, G. N., Bernal-Uribe, M. G., Vlez-Arango, P. E., & Montoya-Restrepo, E. C.
(2000). http://www.cenicafe.org. Retrieved Enero 2016, from http://www.cenicafe.org:
http://www.cenicafe.org/es/publications/arc051(01)028-040.pdf
Pedraza, E. M. (2011). Fsiles vivientes: cucarachas. Biodiversitas, 97, 6-9. Retrieved 2015, from
Biodiversitas: http://www.biodiversidad.gob.mx/Biodiversitas/Articulos/biodiv97art2.pdf
Pedraza, M. (2011). Biodiversitas. Retrieved 2015, from Biodiversitas:
http://www.biodiversidad.gob.mx/Biodiversitas/Articulos/biodiv97art2.pdf
Pinto, A. D. (1997). Purification and characterization of an extracellular chitinase from the
entomopathogen Metarhizium anisopliae. Canadian Journal of Microbiology, 43(4), 322-
327.
Ponce, G. C. (2005). Cucarachas: Biologa e importancia en salud pblica. Respyn, revista de
salud publica y nutricion., 6(3).
Prim, L. E. (1998). Manual General de Ciencias Ambientales. Retrieved enero 5, 2016, from
tecnun: http://www4.tecnun.es/asignaturas/Ecologia/Hipertexto/00General/Principal.html
Ramrez Prez, J. (1989). La cucaracha como vector de agentes patgenos. Pan American
Journal of Public Health, 107(1), 41-53.
Rheins, L. A. (1985). Ontogeny of the invertebrate humoral immune response: studies on various
developmental stages of the American cockroach (Periplaneta americana). Dev. Comp.
immunol., 9, 395.
Rombach, M. C. (1987). Metarhizium album, a fungal pathogen of leaf-and planthoppers of rice.
Transactions of the British Mycological Society, 451-459.
Senz, A., & Rodrguez, C. (1999). Uso bilogico del Metarhizium anisopliae. Direccin de
Investigacin y Extensin de la Caa de Azcar., 138.
Salehzadeh, A. T. (2007). Bacterial, fungal and parasitic contamination of cockroaches in public
hospitals of Hamadan, Iran. Journal of vector borne diseases, 44(2), 105.
Samson, R. H. (1988). Atlas of entomopathogenic fungi. New York: Springer Science & Business
Media.
Sandino, D. G. (2003). Manejo integrado de la Salivita de la caa de azcar. Universidad
Nacional Agraria. Managua (Nicaragua).: Fundacin para el Desarrollo Tecnolgico,
Agropecuario y Forestal de Nicaragua.
Schaeferffenberg, B. (1964). iological conditions for the development of mycoses caused by
Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae. Journal of Insect Pathology , 66.
So Young Lee, K. S. (2002). Early events in crustacean innate immunity. In C. S. I. Hirono, Fish
& shellfish immunology (pp. 421-437). Inglaterra: Editorial Board.
Sorokin. (1984). Informacion tecnica sobre agentes de control biologico Metarhizium anisopliae.
mexico : centro panamericano de ecologia humana y salud.
 90

Stephenson, G. &. (1993). Pesticides and the Environment. Department of Environmental

Biology, University of Guelph. Ontario, (Canada).
Sugumaran, M. (2002). Comparative biochemistry of eumelanogenesis and the protective roles of
phenoloxidase and melanin in insects. Pigment Cell Research, 15(1), 2-9.
Taiariol, D. R. (2009). Resistencia en cucaracha blattella germanica. Santa Fe, argentina: El Cid
Edito.
Tanada, Y. &. (1993). Insect pathology. San Diego, California (USA).: Academic Press.
Tene, M. B. (2002). Efecto del Metarhizium anisopliae(Deuteromycotina:Hyphomycetes) en el
contro biologico de Boophilus microplus Canestrini (Acari:Ixodidae)en ganado bovino
estabulado. Tecomn, Colima: Universidad de Colima.
Valadaresinglis, M., & Peberdy, J. (1997). Location of chitinolytic enzymes in protoplasts and
whole cells of the entomopathogenic fungus metarhizium-anisopliae. Mycological
research, 1393 - 1396.
Veen, K. H. (1968). Recherches sur la maladie, due Metarrhizium anisopliae chez le criquet
plerin (Vol. 68). Netherlands: Wageningen : Veenman.
Vicentini, S. &. (1996). Infection of the grasshopper, Rhammatocerus schistocercoides Rehn by
the entomopathogenic fungus, Metarhizium flavoviride Gams & Rozsypal. Anais da
Sociedade Entomologica do Brasil., 25(2), 309-314.
Vilcinskas, A. M. (1997). Effects of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae and its
secondary metabolites on morphology and cytoskeleton of plasmatocytes isolated from
the greater wax moth, Galleria mellonella. Journal of Insect Physiology, 43(12), 1149-
1159.
 91

ANEXOS

1. Imgenes de los especmenes muertos con el tratamiento T4, concentraciones de cido

brico 4 gr.

2. Imgenes de los especmenes mueros por el tratamiento T2, concentracin de las conidias
del hongo 109 conidias/ml.
 92

3. Especmenes que nacieron en cautiverio y las ootecas recolectadas.