UNIVERSIDAD DE SONORA

PRACTICA # 2

Mtodos y tcnicas empleadas en el laboratorio de biologa molecular

MATERIA:
Laboratorio de Gentica

NOMBRE:
Flores Portillo Yasmin Guadalupe

13 de febrero del 2017

 OBJETIVO
conocer los mtodos y tcnicas que se utilizan en un laboratorio de biologa
molecular

INTRODUCCIN

La Biologa Molecular es la disciplina cientfica que tiene como objetivo el estudio

de los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista
molecular.
La biologa molecular concierne principalmente al entendimiento de las
interacciones de los diferentes sistemas de la clula, lo que incluye muchsimas
relaciones, entre ellas las del ADN con el ARN, la sntesis de protenas, el
metabolismo, y el cmo todas esas interacciones son reguladas para conseguir un
correcto funcionamiento de la clula.
Varias tcnicas usadas en el campo de la biologa molcula sern mencionadas
en este trabajo.

DISCUSIN
El estudio de la biologa molecular est basado en su dogma central, que se trata
de mecanismos de trasmisin y expresin de la herencia gentica, este dogma
dice, el ADN se transcribe como ARN mensajero y este se traduce como
protenas, el cual realiza las acciones en la clula, y a su vez el ADN puede
replicarse y trasmitrselo a la descendencia.
Para poder llevar a cabo este dogma se lleva una serie de pasos para poder
obtener cada una de las partes, tanto el ADN, ARN y protenas, los mtodos
utilizados son parecidos en ciertas cosas.
1. Extraccin de ADN (lisis celular): esto se lleva a cabo para poder romper la
membrana de la clula para poder conseguir el ncleo de esta, en el cual se
encuentra el material gentico.
2. Digestin de ADN: se lleva a cabo por medio de una enzima de restriccin,
que esta funciona rompiendo una cierta seccin de ADN
3. Electroforesis, esta es una tcnica para separar las molculas segn su
movilidad en un campo elctrico
 4. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), ayuda a amplificar el ADN

Existen mtodos los cuales se encargan de la obtencin de secciones de ADN,

ARN, o localizacin de protenas, como son:
Southern Blot: ayuda a detectar la presencia de una secuencia de ADN
concreta.
1. Aislamiento de DNA
2. Cortar con enzimas de restriccin
3. Separar fragmentos por electroforesis
4. Desnaturalizar el DNA
5. Transferir a membrana de nitrocelulosa o nylon
6. Hibridar con sonda especfica
7. Revelar con placa de Rayos X o pantalla de fosforimager

Wester Blot: es una tcnica para detectar protenas especificas

1. Electroforesis de la muestra con las protenas
2. Transferir las protenas desde el gel a membrana de nitrocelulosa
3. Coloracion de las protenas para confirmar transferencia
4. Bloqueo de los sitios de unin inespecficos remanentes en la membrana
de nitrocelulosa
5. Incubacin con el anticuerpo especifico primario
6. Lavados del anticuerpo no unido
7. Deteccin del anticuerpo unido utilizando anticuerpos conjugados a
perroxidasa de rabano picante (HRP)
8. Revelado con sustrato quimioluminiscente y deteccion con placas
radiogrficas

Nourthern Blot: es una tcnica de detencin de molculas de ARN de una

secuencia dada.
1. Aislamiento de RNA
2. Desnaturalizar el RNA
3. Separar por electroforesis desnaturalizante
4. Transferir a membrana de nitrocelulosa o nylon
5. Hibridar con sonda especfica
6. Revelar con placa de Rayos X o pantalla de fosforimager

CONCLUSIN
La biologa molecular usa mtodos y tcnicas muy especficas, que han ayudado en
muchas reas de la ciencia, la gentica es una de las ciencias a las cuales se visto mayor
avance gracias a la biologa molecular ya que trabaja con material gentico.
Las tcnicas que se implementan en la biologa molecular son muy parecidas pero en
cada una se tiene un paso que hace que se diferencien de las dems un ejemplo seria en
la parte de la electroforesis, para el ADN se utiliza gel de agarosa y en las Protenas gel
de poliacrilamida.

CUESTIONARIO

1) Fundamento de SOUTHERN y NOURTHERN

R: El mtodo tipo Southern o Southern blot fue desarrollado por E. M. Southern
para la deteccin de genes especficos en el ADN celular. El ADN es digerido con
una enzima de restriccin y los fragmentos son separados por tamaos mediante
una electroforesis en un gel. Se realiza tincin con bromuro de etidio para
comprobar la calidad de la electroforesis y del ADN. A continuacin los fragmentos
de ADN de doble cadena son parcialmente hidrolizados con un cido dbil y
desnaturalizados con NaOH para permitir la transferencia. Posteriormente, el ADN
es transferido a un filtro de nitrocelulosa, con lo que en el filtro queda representada
una rplica de la disposicin de los fragmentos de ADN presentes en el gel. A
continuacin el filtro se incuba durante un tiempo con la sonda marcada
(radiactivamente o con un fluorocromo); durante la incubacin la sonda se va
hibridando a las molculas de ADN de cadena sencilla de secuencia
complementaria (o muy parecida). La sonda unida al fragmento de ADN
complementario se puede visualizar en el filtro de una forma sencilla mediante una
exposicin a una pelcula de rayos X para el caso de sondas radiactivas o con una
pelcula sensible a la luz, para el caso de sondas con fluorocromo.
El mtodo tipo Northern Blot o Nourthern fue desarrollada por Alwine y
colaboradores, en 1977, y es anloga al Southern Blot. Permite determinar la
cantidad y tamao de ARNs especficos presentes en preparaciones de ARN total,
mensajero, o ribosmico. El mtodo se basa en la hibridacin de secuencias
complementarias de cidos nucleicos de cadena simple. Permite estudiar la
expresin de secuencias especficas de ADN, y posteriormente correlacionarla con
las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de la planta. De este modo, se
emplea frecuentemente en estudios de expresin gnica, en los cuales se pueden
detectar los genes transcriptos en los diferentes tejidos (expresin espacial) y/o en
las diferentes etapas del desarrollo (expresin temporal). Tambin es empleada
para monitorear la expresin gnica del ADN exgeno en plantas transgnicas. En
esta tcnica se asla el ARN total, luego se separan los diferentes tipos de ARN
por medio de una electroforesis en gel, el ARN separado es transferido desde el
gel, hacia un soporte slido (membrana), y luego hibridado con una sonda
especfica de ADN o ARN, marcada mediante radiactividad o por mtodos no
radiactivos. Se produce un hbrido ADN: ARN, dado que son molculas
complementarias y all donde est el RNAm complementario a la secuencia del
gen forneo, se detectar la seal en el papel fotogrfico sensible a la radiacin.
En las muestras derivadas de la planta control no debe presentarse la seal de
hibridacin.

2) Qu es un vector de clonacin?
R: Los vectores de clonacin son molculas transportadoras que transfieren y
replican fragmentos de ADN que llevan insertados mediante tcnicas de ADN
recombinante. Para que sirva de vector, una molcula debe ser capaz de
replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta. Tambin tiene que tener
secuencias de reconocimiento que permitan la insercin del fragmento de ADN
a clonar.
3) Qu es una transformacin gentica?
R: la transformacin es la alteracin gentica de una clula resultante de la
absorcin directa, incorporacin y expresin de material gentico exgeno (ADN
exgeno).

BIBLIOGRAFA
G.M, i. (28 de octubre de 2015). desde mendel hata las moleculas. Obtenido de
https://genmolecular.com/tecnicas-de-biologia-molecular/
Veracruz, U. d. (s.f.). Centro de Estudios y Servicios en Salud. Obtenido de
https://www.uv.mx/veracruz/cess/servicios/biologia-molecular/