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REPUBLIQUE ALGERIENNE

DEMOCRATIQUE ET
POPULAIRE
MINISTERE DE LENSEIGNEMENT SUPERIEUR
ET DE LA RECHERCHE
SCIENTIFIQUE
Universit Tbessa
Dpartement de Biologie
3me Anne de Toxicologie

Suivi par :
Ralis par:
Mme : Hamel
Harrath Khaoula

Anne universitaire 2015- 2016


Remerciement.p
age 1

Introduction
page 2

But de
rapport.page 2

Liste
dabrviation..page
2

PARTIE 1 : GENERALITE
Dfinition de
laboratoire..page 3
prlvement sanguin...
.page4
Les matriels.
page7
PARTIE 2 : LES PARAMETRE DANALYSE
Les le paramtre biochimique.....
.page11
1)glycemie......
page11
2)cholestrol
tot.page13
-Cholestrol LDH......
...page16
-Cholestrol LDL......
page17
3)trygliciride..page
18
4)calcmie..
page21
5)phosohate alcaline...
page23
6)transaminase TGO TGP.....
page25
7)bilirubine......
.page27
1) bilirubine total...
.page28
2) bilirubine
direct....page30
8)chimie des urines......
page32
9) cratinine....
..page36
Les paramtre
srologie..page37
1)ASLO.
..page37
2) CRP.
page38
3)Ag HBs.
page39
4)HCV.
page40
5)HIV..
....page41
Les Paramtre de
hmathologie.page41
1)vitesse sdimentaire....
.page41
2)FNS.......
..page43
3)les groupes sanguins...
page45
4)hmatocrite...
page47
5) TP.
.page49
Les paramtres dIonogramme...
.page49
1)magnsium...
page49
2)phosphore..
page50
3)sodium et potassium.
..page52
Conclusion
Rfrence bibliographique

Tout d'abord je remercie Allah pour tous les bienfaits qu'Il m'a
accords et pour le courage qu'il m'a attribu afin de complter ce
stage.
Je remercie aussi mes Parents pour leur soutient morale et matriel
pendant toute ma vie et surtout durant mes tudes.
Je tiens tout particulirement remercier Mme HAMEL et Pr
ROUABHI RACHID pour leur accueil chaleureux ainsi que notre chef
de dpartement Mme BOUSIKINE qui ma affecte en tant que
stagiaire au sein du laboratoire danalyse ;
Je remercie galement la surveillante mdicale sabahe pour leur
soutient ;
Dune faon plus gnrale je remercie lensemble des collaborateurs
du service pour les nombreux conseils qu'ils ont pu me donner
durant la priode que j'ai passe en leur compagnie ainsi que pour
la confiance dont ils mont faite ;
Je souhaite en outre remercier mes professeurs l'universit pour
toutes les connaissances acquises pendant nos annes de formation
.
Afin de clturer mes trois annes d'tudes en biologie systme
LMD ,je fait un stage dans laboratoire de hopital de boughrara
fouaf de ounza et maitenant j'ai prpar un rapport de stage de fin
d'tude en analyse mdicale ce stage stage d'une dure d'un 15
jours et qui permete le savoir differntes analyses medicales sur le
sang .lurine etc, nous connaissons differentes informations
medicales tel que : prelevement de sang, ce dernier est le
prencipale liquide dans lorganisme.

Savoir le domaine de la biologie mdicale.


Connaitre les tapes de prlvement du sang.
Savoir les techniques utilises danalyse mdicale.
Connaitre les conditions de travail :
Ractif.
matriel
Savoir les lois de conservation contre les microbes, tel que :
Les ligands
Connaitre les valeurs normales des substances corporelles.

HK : Hmatocrite.
HDL : hight density lipoproteine.
Gly: glycmie.
Crt: cratinine.
CDE : chimie dure.
HCV: hpatite C.
BW: Bordet Wassermann.
Vs : vitesse de sdimentation.
Cal: Calcmie.
ECBU: Examen cytobacterologie dure.
RH : Rhsus.
GR : groupage.
TOT :total
PARTIE01 :GENERALITE
Laboratoire
Dfinition
Un laboratoire d'analyse mdicale (ou laboratoire de biologie
mdicale) est une structure o des professionnels de la sant
prlvent et analysent diffrents fluides de l'organisme. Il peut s'agir
de prlvement de sang, de peaux, d'urines, de selles ou
de muqueuses. Un laboratoire de biologie mdicale peut tre
hospitalier ou priv. Il regroupe de nombreux professionnels de la
sant tels que des infirmiers, des techniciens de laboratoire, des
biologistes et plus rarement des mdecins.
Dans laboratoire
Dans laboratoire de Boughrara Fouad, on trouve les paramtres

suivants :
Biochimie :
Biochimie substrat
Glycmie
Ure sanguine
cratinine
cholestrol TOT
triglycrides
Cholestrol HDL
Cholestrol LDL
Acide urique
Biochimie electrolytes :
Calcmie
Biochimie enzymatiques :
Phosphate alcaline
Chimie des urines
Bilirubine TOT
Bilirubine direct

Page 1
Srologie :
ASLO
CRP
Ag HBs
AC anti HCV
AC anti HIV
Hmatologie :
TP
Les globules blancs
Hmatocrite
VS : Vitesse de sdimentation
GR : Groupage sanguin
FNS : Formule Numration Sanguine

Prlvement sanguin
Dfinition
Un prlvement sanguin par voie veineuse consiste ponctionner
une veine avec une aiguille approprie afin de recueillir un
chantillon de sang veineux dans un tube prlvement en vue de
raliser des examens biologiques.

Matriels

Page 2
Seringue jetable Garrot
Gants non striles

Alcool Cotton Tubes

Figure 01 : matriels de prlvement

Conditions et prparations

Une analyse du sang est obligatoirement prescrite par un


mdecin.
Il existe certains types dexamens qui ncessitent que le
patient soit jeun (la glycmie par exemple). Ceci signifie que
le patient ne doit ni manger ni boire 12 heures avant la prise
de sang.
Cependant, certains types dexamens du sang peuvent tre
prcds dun petit djeuner lger.
Le tabac et lalcool doivent tre vits avant une prise de
sang.

Page 3
Le jour de lexamen

Il est ncessaire de voir le bon du patient pour connaitre les


paramtres.
Le patient est obligatoirement en position assise.
Choisir la veine ponctionner : La ponction se
ralise le plus souvent au niveau de la
veine du pli du coude.
Un garrot est plac un peu plus haut : avec le garrot,
la veine est comprime un dizaine de
centimtres au dessus du site de ponction choisis.
Dsinfection de la peau par une portion de cotton
sature par lalcool.
Demander au patient de serrer le poing.

Une aiguille est introduite au niveau de la veine pour recueillir


le sang. La quantit de sang recueillie est fonction du nombre
danalyses effectuer.
Enlever le garrot puis retirer laiguille.
Une portion de cotton est place au niveau du point de
ponction aprs la prise de sang afin darrter lcoulement de
sang.
Aprs la prise de sang, le tube charg est numrot selon le
numro de patient qui est crit sur le bon pour tre ensuite
analys.
Le tube qui est charg au sang peut diffrencis selon les
paramtres croiss sur le bon :
Exemples :
Glycmie on verse le sang dans un tube sec ou
hparine.
FNS on verse le sang dans un tube de couleur
lavande.
Vs on verse le sang dans un tube de couleur
bleu.

Inverser dlicatement les tubes pour mlanger le sang aux


produits contenus.

Matriels de laboratoire
Petite matriel
Micropipette Utiliser pour mesurer les microquantits des
diffrents liquides chimiques et les diffrentes prparations
aqueuses.

Page 4
Figure 02 : dfrents types de
micropipettes

Figure 03 : les tubes


micropipettes

Les Tubes

Tubes spcifique pour le prlvement sanguin.

Figure 04 : dfrent types de Les


tubes Page 5
Tube sec Tube contient lEDTA Tube
contient le citrate sodium

Les diffrentes tubes:

Tubes hparines: pour les analyses biochimiques (glycmie,


cratinine bilirubine) sauf CLP
Tubes citrats : pour les analyses Hmatologies
Tubes EDTA : pour les analyses Hmatologies( FNS VS )
tubes secs pour toute la biologie et toute la biochimie
lexception de la glycmie

Tubes capillaire
C'est l'effet utilis par les stylo-plumes (la cartouche se place
l'entre du tube, celui-ci se poursuit jusque sous la plume).

Figure 05 : les tubes capillaires

Page 6
Figure a : Cadran
gradu excentrique Figure b : la pate

Figure c : plaquettes pour la


srologie Figure d : supports

Figure f :les
Figure e : test de VIH ampoules

Page 7
Figure g: Plaque de
groupage

Figure h : boite de bandelettes


de chimie des urines.

Figure 06 : a) Cadran gradu excentrique .b) la pate. c) support. d)


plaquettes pour la srologie. e) test de VIH. f) les ampoules. g)
Plaque de groupage. h) boite de bandelette de chimie des urines.

Grand matriels

Hmogramme
Cest un appareille qui fait la dnombrement des diffrent composant ,limprimante
pour imprim le rsultat.

Figure 7 : Hmogramme avec imprimante

La Centrifugeuse

La centrifugation est un procd de sparation des composs d'un


mlange en fonction de leur diffrence de densit en les soumettant
une force centrifuge.

Page 8
Figure 8 : centrifugeuse

Le spctrophotomtre

Une spectrophotomtrie permet de mesurer l'absorbance d'une


solution homogne une longueur d'onde donne ou sur une rgion
spectrale donne.

Figure 9 : Spectrophotomtres

Etuve

une tuve de laboratoire est un appareil de chauffage fonctionnant


le plus souvent la pression atmosphrique et permettant
deffectuer divers traitements thermiques temprature rgule.
Les laboratoires danalyses en sont souvent pourvus.

Figure 10: Etuves

Agitateur

Page 9
Un lment utilise pour but d'assurer l'homognisation des
chantillons. Il existe diffrentes types dagitateurs en fonction
du milieu de la configuration de lunit et de leffet dsir.

Figure 11 : agitateurs

Figure 13 : bain marr


Figure 12: centrifugeuse de tubes capillaires
(microcentrfigeuse)

Bain Marie
Utilise pour maintien le milieu de manipulation plus favorable pour les ractions
chimique, enzymatique.

Rfrigrateur

Utilis pour conserv les ractifs.

Page 10
Figure14 :
rfrigrateur

Figure A : Appareil de TP
Figure B :apparail de ionigramme

Figure C : tubes de westergreen

PARTIE 02 :PARAMETRE DANALYSE

A) Les paramtres biochimie

1-glycmie

Dfinition

Page 11
La glycmie est la concentration de glucose dans le sang, ou plus
exactement dans le plasma sanguin. Au cours de la journe, sa
valeur varie en fonction des apports et des besoins nergtiques de
l'individu. La glycmie est ajuste par l'action d'hormones secrtes
par des cellules du pancras. Ce systme de rgulation permet de
maintenir le mme taux alors mme que les cellules des organes
ont des besoins diffrents en fonction de leur activit.

La glycmie, appele aussi "taux de sucre" ou "taux de glucose"


dans le sang, peut varier aussi chez la personne diabtique pour
plusieurs raisons : alimentation, traitement, situations.... Parvenir
l'quilibre glycmique est essentiel pour bien vivre son diabte au
quotidien.

Principe

Cest un dosage colorimtrique dont l intensit de colotration est


proportionnelle a l absorbants et a la valeur de la glycmie trouv.
Le dosage de la glycmie donne suivant la cascade de raction ci
dessous ; un complexe colore quantifiable par spectrophotomtre.6

glucose oxydase

Glucose+O2 acide glyconique +H2O2

peroxydase

H2O2+phnol+4AAP Quinonimine +4H2O

Matriels et Ractifs qui utilis

1-Les matriels

Tube sec ou hparine


Micropipette de 10 l
Micropipette de 1000 l
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

2-ractifs
Ractif prpar : ensemble de deux ractifs sont :
R1 : Tampon phosphate pH= 7,4
Phnol
R2 : glucose oxydase
Peroxydase

Page 12
Amino-4-antipyrine
Blanc : on appelle aussi le blanc ractif
Etalon de glucose.6

Analyse de glycmie

La mesure de la glycmie permet de savoir s'il y a une bonne


rgulation du taux de sucredans le sang. Cet examen est prescrit
lorsque l'on souponne une hyperglycmie, qui est
symptomatique entre autre du Diabte. Mais il est aussi prescrit
pour dtecter une hypoglycmie, c'est--dire un taux de sucre
insuffisant dans le sang. La mesure de la glycmie est un examen
frquemment prescrit au cours de la Grossesse pour dtecter si la
patiente ne souffrirait pas d'un diabte gestationnel.6

Mode opratoire

Longueur donde : 505 nm (492-550)

Temprature : 37 C (20-25C)

Cuve : 1 cm dpaisseur

Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.

Aprs le prlvement sanguin, on verse le sang dans un tube sec ou


hparine et on le centrifuge.

On prpare

1-Nous prenons 3 tubes

-En mettons dans le premier tube 1000l de ractif du glucose


par utilisation une pipette (1000l).

-En mettons dans le deuxime tube

1000l de ractif du glucose.

10l de ractif du glucose standard.

-En mettons dans le troisime tube :

1000l de ractif du glucose.

10l de ractif du glucose standard.

10l de srum du personne 1.

-En mettons dans le quatrime tube

1000l de ractif du glucose.

10 l de ractif du glucose standard.

Page 13
Aprs a mit les tubes dans ltuve la dure de 10 minute dont la
temprature est estime 37C, aprs la fin du 10 minutes nous
drailler les tubes partir dtuve pour la lecture du rsultat dans le
spectrophotomtre.

Taux de glycmie

Le taux de glycmie est le dosage du taux de sucre dans le sang.


Dans le corps, la rgulation de la glycmie est assure grce un
quilibre permanent entre diffrentes substances principalement
hormonales.
Les 3 tats de la glycmie. Quand mon taux est-il lev ?

Hypoglycmie Infrieur 0.60g/l

A jeun : entre 0.70g/l et


Glycmie 1.10g/l
normale 1h30 aprs un repas :
infrieur 1.40g/l

Hyperglycmie
Suprieur 1.10g/l
jeun

Parvenir l'quilibre glycmique suppose de comprendre


les mcanismes et les circonstances qui font varier la glycmie
3-Cholestrol

Cholestrol TOT

Dfinition

Le cholestrol est une substance lipidique qui est produite


naturellement par lorganisme., constituant indispensable de nos
membranes cellulaires et prcurseur de certaines molcules
essentielles au bon fonctionnement de notre mtabolisme comme
les hormones stroidiennes (cortisol, oestrognes, progestrone),
la vitamine D ou les acides biliaires. On le retrouve
essentiellement au niveau du foie, du cerveau et de la moelle
pinire. Mais un excs de cholestrol dans le sang est l'un des

Page 14
facteurs de risque du dveloppement dune maladie cardiaque
coronarienne.

Principe

Le cholesterol est mesur aprs hydrolyse enzymatique puis


oxydation. Lindicateur quinoneimine est form partir du peroxyde
dhydrogne et du amino 4 antipyrine en prsence de phenol et de
peroxydase.

Dtermination enzymatique selon les ractions suivantes :

Cholestrol estrase

Esters de cholestrol + H2O >Cholestrol+Acides gras

Cholestrol oxydase

Cholesterol + O2->Cholestne- 4-one - 3 + H2O2

Cholestrol + O2->Cholestne- 4-one - 3 + H2O2

Proxydase

H2O2+ Phnol + Amino- 4 antipyrine > Quinoneimine rose

La quantit de quinoneimine forme est proportionnelle la


concentration de cholestrol.4

Matriels et ractifs
1- matriels
Tube sec ou hparin
Micropipette de 10 l
Micropipette de 1000 l
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

2- Ractifs
Ractif 1 : Pipes pH 6.9 90
mmol/l
Solution tampon Phenol 26
mmol/l
Ractif 2 : Cholesterol oxydase 300
U/l
Peroxydase 1250
U/l
Cholesterol esterase 300
U/l

Page 15
Amino-4-antipyrine 0.4
mmol/l
Ractif 3 :
Standard 200
mg/dl
2 g/l
5.1 7
mmol/l

Mesurer le cholestrol

La mesure du cholestrol permet dvaluer les risques de


dvelopper des maladies cardiovasculaires.

Prparation et stabilit
Dissoudre le contenu dun flacon de R2 avec un flacon de tampon
R1.
Echantillons
Srum ou plasma
Mode opratoire
il faut sassurer avant emploi que les ractifs et les chantillons sont
la temprature ambiante pendant 10 20 minutes.
longueur donde : 500nm
Temprature dincubation : 37c
Zro de lappareil : blanc ractif
domaine de linarit : jusqu 5g/l

stabilit de la coloration : 30mn 20c-25c ou 10mn 37c

la mthode est linaire jusqu 5g/l. si la concentration en


cholestrol est suprieure cette valeur, il faut recommencer le
dosage sur un chantillon dos au avec une solution de Na cl
9g/l, en noubliant pas de tenir compte de cette dilution avant de
rendre le rsultat qui sera multipli par 2.
Blanc
ractif Etalon Echantillon
Echantillon ---- --- 10l
Etalon ---- 10l ---
Solution de travail 1ml 1ml 1ml

Mlanger et lire les densits optiques des spcimens aprs


incubation de 5 minute 37c.

La calcule

Cholestrol = D.O. Echantillon/ D.O. Standard x n

Mg/dl: n = 200
g/l : n=2

Page 16
mmol/l : n = 5,17
Taux de cholestrol
Taux normal

Le taux normal de HDL-cholestrol (le bon cholestrol) est


de :

Homme : 0,4 0,65 g/L ou 1,0 1,65 mmol/L ;


Femme : 0,5 0,8 g/L ou 1,3 2,0 mmol/L.
Taux bas
-Jene
-Insuffisance hpatique
-Hyperthyroidie
-Malnutrition
-Maladie mtabolique congnitale

Taux lev
-Repas riche en graisse animale
-Age> 45 ans
-Grossesse
-Hypercholestrolmie congnitale
- cholostase hpatique
-Diabte sucr, Hypothyroidie
-Goutte, Pancratite Syndrome nphrotique
Cholestrol HDL
Dfinition

Le cholestrol-HDL est une lipoprotine (substance forme de lipides


et protines) dite de haute densit. Dans la mesure o il intervient
dans l'limination du cholestrol, il est aussi appel "bon
cholestrol", car son augmentation est considre comme un
facteur protecteur de risque cardiovasculaire.

Principe

Les chylomicrons et les lipoproteines de trs faible densit (VLDL) et


de faible densit (LDL) contenus dans lhantillon sont prcipits par
addition dacide phosphotungstique en prsence dions
magnsium.Le surnagent obtenu aprs centrifugation contient les
lipoproteines de haute densit (HDL) dont le cholestrol est dos par
le ractif cholestrol enzymatique.4

Matriels et ractif

1) matriels

Page 17
Tube sec ou hparin
Micropipette de 10 l
Micropipette de 1000 l
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

2) ractifs

Ractif : Acide phosphotungstique


13,9mmol/l

prcipitant MgCl2 6H2O


490mmol/l

PH 6,2

STABILITE
Conservation 2-8C La date limite dutilisation est indique sur
chaque
Conditionnement.
Si le ractif est trouble ou color, il doit tre rejet.4
ECHANTILLONS
Srum ou plasma

Mode opratoire

H faut s'assurer avant emploi que les ractifs et les chantillons sont la temprature
ambiante pendant 10 20 minutes.

Longueur d'onde : 500 nm


Temprature d'incubation : 37C
Zro de l'appareil : blanc ractif
Domaine de linarit :Jusqu' 2,75g/l
Stabilit de la coloration : 30 minutes 20C-25C ou 10 minutes 37C La
mthode est linaire jusqu' 2,75g/l. Si la concentration en cholestrol-HDL est
suprieure cette valeur, il faut recommencer le dosage sur l'chantillon dilu au 1/2
avec une solution de NaCI 9g/l; en n'oubliant pas de tenir compte de cette dilution
avant de rendre le rsultat qui sera multipli par 2.
La calcule
[HDL-Cholestrol] = DO dosage / DO etalon x n
n = 5,17 mmol/l
n = 2 g/l.4
Multiplier le rsultat obtenu par 1. 1 pour tenir compte de la dilution
effectue lors de la prcipitation : on obtient la concentration du
cholestrol li aux HDL.

Page 18
N.B : Une fois le flacon du ractif HDL est entam il ya possibilit de
formation des cristaux brillants au fond du flacon qui nont pas
dinfluence sur la qualit du produit.4
Taux de cholestrol HDL
Taux normal

La dtermination du taux de cholestrol-HDL permet de calculer la


fraction de cholestrol-LDL "mauvais cholestrol". Ce dernier est
impliqu dans la survenue de risque athrogne et donc
de maladies cardiovasculaires.5

Age Homme Femme

mmol/l g/l mmol/l g/l

0-19 ans 0.80-1.22 0.31-0.47 1.06-1.80 0.41-0.70

20-49 ans 0.96-1.68 0.37-0.65 1.29-2.12 0.50-0.82

50-59 ans 1.09-1.68 0.42-0.65 1.50-2.40 0.58-0.92

>60 ans 1.03-1.76 0.40-0.68 1.55-2.45 0.60-0.94

Taux anormal
Globalement, plus le taux de cholestrol-HDL est lev, moins le risque de
complications cardiovasculaires est important, chez l'homme comme chez
la femme. Le risque coronarien en fonction des taux du cholestrol-HDL
est montr dans le tableau ci-dessous.5

Risque Homme Femme

mmol/l g/l mmol/l g/l


0.5 1.55 0.60 1.81 0.70
1.0 1.16 0.45 1.42 0.55
1.5 0.90 0.35 1.16 0.45

Page 19
2.0 0.64 0.25 0.90 0.35
>2 <0.64 <0.25 <0.90 <0.35

Cholestrol LDL
Dfinition
Le cholestrol-LDL est une lipoprotine, cest--dire, une
substance forme de lipides et protines dite de basse densit.
Cette fraction correspond lessentiel du cholestrol total
transport dans le sang. Lorsquil nest pas utilis ou quil se
retrouve en excs, le cholestrol-LDL se dpose dans les parois des
vaisseaux pour former des plaques dathrome, constituant ainsi un
facteur de risque cardiovasculaire.

Ractifs et Principe

Le ractif prcipitant est prpar en mlangeant 4 volumes d'acide phosphotungstique


avec un volume de chlorure de magnsium.Ech 500l + Ractif prcipitant 50l
II ne faut pas traiter l'talon, bien mlanger et attendre 10 minutes puis centrifuger
pendant 15 minutes 5000 tr/mn. Sparer le surnageant limpide du prcipit dans les
2 heures qui suivent la centrifugation.9
Mode opratoire
Dissoudre le ractif 2 dans le ractif 1 pour obtenir la solution de travail. Cette
solution est stable 2 semaines 20-25 C et 1 mois +4C.
BR Et surnageant Ech
Surnageant echant -- -- 50 l
Etalon -- 50 l ---
Solut de travail 1ml 1ml 1ml
Mlanger et lire les densits optiques (DO) des spcimens aprs 5 minutes
d'incubation 37C.
Calcul : Choles+rol-HDL (g/1) DO chantillon x n/ DO talon
n = Concentration de l'talon cholestrol-HDL en g/1.
Il faut multiplier le rsultat obtenu par 1,1 pour tenir compte de la dilution effectue
lors de la phase de prcipitation.
Le taux de Cholestrol-LDL peut tre calcul par la formule de Friedenwald :
Cholestrol -LDL== Cholestrol total- (Triglycrides/5 + Cholestrol-HDL)
Cette formule n'est appliquable que lorsque la concentration de Triglycride dans le
sang ne dpasse pas 3g/l.9
Taux de cholestrol LDL
Taux normal
Elles varient lgrement avec l'ge et le sexe.
Srum - plasma : Homme 0,4 0,5 g/1 Femme 0,5 0,6 g/1 Enfant 0,3 0,4 g/1
Taux anormal

lev(20 % ou plus)

infrieur 2,0 mmol/l

Page 20
Faible (10 % ou moins)

infrieur 5,0 mmol/l.9


4-Triglycride

Les triglycrides (TG), tout comme le cholestrol, appartiennent la


classe des graisses dans le sang ( lipides du plasma ). Dans la
mesure o les graisses ne se dissolvent pas facilement dans les
fluides aqueux, elles ont tendance sunir aux protines prsentes
dans le sang. Cela a pour rsultat la formation de ce quon appelle
les lipo-protines , qui ne transportent pas seulement les
triglycrides dans notre courant sanguin, mais aussi les autres
graisses, y compris les cholestrols. Les triglycrides sont des
graisses neutres et une source importante dnergie pour le corps.
Ils sont faits de molcules de glycrol et dacides gras.22

Principe

Les triglycrides sont dtermins selon les ractions suivantes :

Lipoprotine lipase

Triglycrides > Glycrol + Acides


gras

Glycrokinase, Mg++

Gylcrol + ATP > Glycrol -3-P + ADP

Glycrol-3- Phosphate oxydase

Glycrol-3-Phosphate + O2 > H2O2+


Dihydroxyactone-P

Proxydase

H2O2+ Amino-4-Antipyrine + chloro-4-phnol > Quinone rose


+H2O.4

Page 21
Matriels et ractifs

1) Matriels

Tube sec ou hparin


Micropipette de 10 l
Micropipette de 1000 l
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

2) Ractifs

Ractif 1 : Tampon pipes pH 7,2 50


mmol/l

Solution tampon Chloro-4-phnol 2


mmol/l

Ractif 2 : Lipoproteine lipase


150000 U/l

Enzymes Glycrokinase
800 U/l

Glycrol 3-P-Oxydase
4000 U/l

Proxydase
440 U/l

Amino-4-antipyrine
0,7 mmo/l

ATP
0,3 mmol/l

Ractif 3 : Standard glycrol


200 mg/dl

Standard (en trioline)


2 g/l

Page 22
2,28 mmol/l

Preparation et stabilite

Dissoudre le Iyophilisat R2 avec un flacon de tampon R1.

Stabilit du ractif de travail : 1 semaine 20-25 C

4 semaines 2-8 C.

Echantillons

Srum, plasma recueilli sur hparine.

Mode opratoire

Longueur donde :.............................505 nm (490-550).


Temprature :....................................37 C.
Cuve :................................................1 cm dpaisseur.

Aprs le prlvement en mettons les tubes dans centrifugeuse


pendant 5 minutes, puis prenons ces tubes et suivons les tapes
driv

Par utilisation une pipette (1000l).

-En mettons dans le premier tube (blanc) :

1000l de ractif de travail.

-En mettons dans le deuxime tube (standard) :

1000l de ractif de travail.


10l de ractif standard.

-En mettons dans le troisime tube (chantillon) :

1000l de ractif de travail.


10l de srum.

La calcule
Triglycrides = D.O. Echantillon / D.O. Standard x n
Mg/dl: n = 200
g/l : n = 2
mmol/l : n = 2,28

Page 23
Taux sanguin des triglycrides

Taux normal

-Chez l'homme, le taux normal de triglycrides est compris entre


0.5 et 2 mmol/L soit entre 0.45 et 1.75 g/L.

- Chez la femme, il varie entre 0.40 et 1.60 mmol/L soit entre


0.35 et 1.40 g/L. Attention, les rsultats varient en fonction de la
technique utilise par chaque laboratoire et dpendent
galement de nombreux facteurs comme par exemple le sexe,
l'ge...

Taux lev
taux de triglycrides la limite suprieure : sil se situe entre
150 et 200 mg/dL (1,7 2,2 mmol/L).

taux de triglycrides lev : sil se situe entre 200 et 500


mg/dL (2,2 5,6 mmol/L).

taux de triglycrides trs lev : sil est suprieur 500 mg/dl


(5,6mmol/L ou plus).

5-Calcmie

Dfinition

Le terme calcmie permet de faire rfrence au dosage de calcium


prsent dans le sang. Le calcium a des fonctions indispensables
pour l'organisme, notamment pour la coagulation sanguine ou la
sant des muscles.On peut observer une baisse de la calcmie, ou
hypocalcmie, en cas de carence en vitamine D, ce qui entrane des
crises de ttanie ou des crampes. En cas de dosage lev, il s'agit
d'hypercalcmie qui se caractrise par une perte d'apptit, de la
fatigue ou des nauses.21

Principe
Le calcium forme avec le complexant crsolphtaline en milieu
alcalin un compos color en violet dont lintensit est
proportionnelle la concentration en calcium.
Matriels et Ractifs
1) les matriels

Tube sec ou hparin


Micropipette de 20 l
Micropipette de 1000 l

Page 24
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

2) les ractifs

Ractif 1 : Tampon Alcalin


500 mmol/l

Solution tampon 2-Amino-2-methyl


1-Propanol

Ractif 2 : Complexant crsolphtaline


0.62 mmol/l

Solution

chromogne Hydroxy 8 quinoline


69 mmol/l

Rsctif 3 : Standard calcium


10mg/dl

Standard
100 mg/l

2.5 mmol/l

Prparation et stabilit
Mlanger 1 volume de ractif R1 avec 1 volume de ractif R2.
Stabilit : 4 heures 20 - 25C
20 heures 2-8C
ECHANTILLONS
Srum, plasma recueilli sur hparine.
Urine dilue au 1/3 avec de leau distille, acidifie pH : 3,4 avec
HCI dilu.
Mode opratoire
Longueur donde 570 nm (550-590)
Temprature 20 - 25C

Cuve 1 cm dpaisseur

Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.

Page 25
Aprs le prlvement en mettons les tubes dans centrifugeuse
pendant 5 minutes, puis prenons ces tubes et suivons les tapes
driv:

Par utilisation une pipette (1000l).

-En mettons dans le premier tube (blanc) :

1000l de mlange de ractif.

-En mettons dans le deuxime tube (standard) :

1000l de mlange ractif.


20l de ractif standard.

-En mettons dans le troisime tube (chantillon) :

1000l de mlange ractif.


10l de srum

N.B
Mlanger et Incuber 5 minutes temprature ambiante, Lire les
densits optiques.
La coloration est stable 1 heure.
La calcule
( D.O. Echantillon / D.O. Standard) x n / n = Valeur du
standard
mg/l n = 100
mg/dl n = 10
mmol/l n = 2,5
Taux de calcmie
Taux normal
Quelque soit l'ge et le sexe, la valeur normale de la calcmie totale
est comprise entre 2,2 et 2,5 mmol/L.
Le taux de calcium ionis est, lui, compris entre 1,10 et1,20 mmol/L.
Taux bas

Page 26
Lorsque le taux de calcium est infrieur 2,20 mmol/L, on parle
d'hypocalcmie. Les crises dettanie (tremblements et contractions
des muscles) sont les premires consquences. Un faible taux de
calcium dans le sang peut avoir plusieurs causes : un dfaut
d'absorption de l'intestin, une carence en vitamine D,
un rachitisme ou une hypoparathyrodie, une grossesse par
exemple.

Taux lev
Lorsque le taux de calcium est suprieur 2,75 mmol/L, on parle
d'hypercalcmie. Cette dernire a gnralement deux causes
principales. La premire, l'hyperparathyrodie primaire, est souvent
asymptomatique, mais peut se compliquer de lithiase urinaire,
d'ostoporose ou encore d'ulcre.
6-Phosphatase alcaline
Dfinition

Les phosphatases alcalines sont des enzymes, cest--dire des


substances capables de favoriser une raction chimique dans notre
organisme.

Elles sont prsentes dans lintgralit de notre corps, et plus


particulirement dans des organes comme le foie, lintestin, les
reins mais galement les os et les globules blancs. Elles participent
la minralisation des os, ainsi qu' la fabrication du tissu osseux et
du cartilage.

Principe

Dtermination cintique de lactivit phosphatase.

alcaline (PAL) selon la mthode recommandee par la socit


allemande de chimie clinique (DGKG)
PAL
nitro-4 phnylphosphate H2O -------> nitro 4 phnol+ phosphate. 1

Matriels et ractifs

1) Les matriels
Tube sec ou hparin
Micropipette
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

2) Les ractifs
Ractif 1: Ractif tampon
Tampon diethanolamine (pH 9.8) 1 mol/l

Page 27
Chlorure de magnsium 0.5 mmol/l
Ractif 2: substrat
Nitro 4 phnylphosphate 10 mmol/l
STABILITE

Stabilit du ractif de travail:

- 15 - 25 C ................5 jours.

- 2 - 8 C...................15 jours.

Echantillon

Srum ou sur plasma recueilli sur hparinate

Mode opratoire

il faut sassurer avant emploi que les ractifs et les chantillons sont
la temprature ambiante pendant 10 20 minutes.
Longueur donde : 405nm (400nm-420nm)
Temprature dincubation : 25c-30c-37c
Zro de lappareil : Eau distille
Echantillon 20l
Solution de travail 1ml

Mlanger et lire les densits optiques aprs incubation de 1 minute

30c ou 37c. Refaire la lecture au bout de chaque minute pendant


3 minutes. Calculer la moyenne des diminutions des DO par minute
delta DO/mn.
En cas dactivits enzymatique trs leve, la variation des densits
optiques delta DO/mn est nulle (DO2 =Do3) ; il faut faire alors des
dilutions car il y as un puisement rapide du substrat. Ce calcul est
fait par lappareil selon le principe prcdant. Il ne peut tre fait
manuellement que pour 1 ou 2 chantillons en urgence.1

NOTES

Dans un tube hmolyse introduire :

Solution de travail : 1 ml

Equilibrer 25, 30 ou 37C

Echantillon : 20 l

Mlanger et introduire dans une cuve thermostte, attendre 1


minute puis mesurer laugmentation moyenne de la D.O par minute
pendant 1 3 minutes.1

La calcule

Page 28
405 nm ...............PAL (U/L) = D.O/min x 2750

410 nm ...............PAL (U/L) = D.O/min x 2910

Les taux de phosphatase alcaline

Taux normal

Les taux de phosphatases alcalines sont donns en Units


Internationales (UI) par litre de sang, et sont normalement
comprises entre :

Age Quantit

Enfant 90 - 450 UI /l

Adulte 40 - 100 UI /l

> 60 ans : 50 - 130 UI /l

(valeurs plus basses si le dosage est ralis 30C)

N.B

100 200 UI /l chez lenfant en raison des phnomnes de


croissance ;
100 200 UI /l chez la femme enceinte.
Taux bas
Insuffisance hpato-cellulaire svre Hypophosphatasmie
hrditaire (rare)
Taux lev
Chez l'enfant et jusqu' l'adolescence ( fraction
osseuse) Grossesse(2ime et 3ime trimestre) Cholestases,
hpatomes, mtastases hpatiques (surtout dans cancers colo-
rectaux), cirrhoses, lithiases et tumeurs biliaires, cancer du pancras
Maladie de Paget, tumeurs et mtastases osseuses, ostomalacie et
rachitisme (carence en vitamine D), ostodystrophie rnale,
hyperparathyrodie Cancer du sein, de l'ovaire, de l'utrus, des
testicules, de la prostate.

Page 29
7-Transaminase TGO , TGP

ASAT(TGO) Aspartate Amino Transfrase

ALAT(TGP) Alanine Amino Transfrase

Dfinition

Les transaminases sont des enzymes localises l'intrieur des


cellules. Il en existe deux types : l'aspartame
aminotransfrase (ASAT ou TGO) et l'alanine
aminotransfrase (ALAT ou TGP). Les taux des transaminases dans
le sang augmentent lorsqu'il existe une lsion cellulaire,
principalement au niveau du foie, du cur, des reins ou des
muscles. Leur dosage est donc utile dans le diagnostic de maladies
comme l'hpatite virale, l'atteinte du foie par abus d'alcool ou
l'infarctus du myocarde.

Principe

Dtermination colorimtrique de lactivit TGO ou TGP selon les


ractions suivantes
TGO: Aspartate + ctoglutarate TGO oxaloacetate+ glutamate
TGP: Alanine + ctoglutarate TGP pyruvate + glutamate
Le pyruvate ou loxaloactate forms sont doss sous forme de leurs
drivs 2,4 dinitrophnylhydrazones.
Matriels et ractifs
1)Matriels
Tube sec ou hparin
Micropipette
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

a) Ractifs
Ractif 1
Substrat TGO Tampon phosphate pH 7,5 85
mmol/l
aspartate
200 mmol/l
ctoglutarate 2
mmol/l
Ractif 2 :
Substrat TGP tampon phosphate pH 7,5 95
mmol/l

Page 30
alanine.
200 mmol/l
ctoglutarate. 2
mmol/I
Ractif 3 :
Ractif de coloration 2,4 dinitrophnylhydrazine 1
mmol/l
Ractif 4 : talon pyruvate

STABILITE

Les ractifs sont stables plusieurs annes 2-8C.

Le ractif 3 est conserver labri de la lumire

Ractif auxiliaire : Soude 0,4 N

Echantillon

srum ou le plasma

Mode opratoire
il faut sassurer avant emploi que les ractifs et les chantillons sont
la temprature ambiante pendant 10 20 minutes.
longueur donde : 340nm
Temprature dincubation : 25c-30c-37c
Zro de lappareil : Eau distille
Echantillon 100l
Solution de travail 1ml

Mlanger et lire les densits optiques aprs incubation de 1 minute

30c ou 37c. Refaire la lecture au bout de chaque minute pendant


3 minutes. Calculer la moyenne des diminutions des DO par minute
delta DO/mn.
En cas dactivits enzymatique trs leve, la variation des densits
optiques delta DO/mn est nulle (DO2 =Do3) ; il faut faire alors des
dilutions car il y as un puisement rapide du substrat. Ce calcul est
fait par lappareil selon le principe prcdant. Il ne peut tre fait
manuellement que pour 1 ou 2 chantillons en urgence.
Dosage des transaminases dans le sang

Les transaminases sont des enzymes ayant une activit


mtabolique importante l'intrieur des cellules. Leur augmentation
reflte une lsion cellulaire, en particulier au niveau hpatique,
cardiaque, rnal ou musculaire.

Taux de transaminase TGO, TGP

Page 31
Taux normal

ALAT (TGP)

Homme : 8 35 UI/l (units internationales/litre)


Femme : de 6 25 UI/l.

ASAT (TGO)

Homme : de 8 30 UI/l.
Femme : de 6 25 UI/l.

8- Bilirubine

8-1-Bilirubine totale

Dfinition

La bilirubine est un pigment jaune bruntre produit naturellement


lors de la destruction des globules rouges devenus trop vieux (un
globule rouge vit normalement 120 jours) au niveau de la rate. La
bilirubine est ensuite vhicule jusqu'au foie o elle donne sa
couleur la bile. Cette dernire est expulse dans le systme
digestif o elle colore les selles. Sur l'analyse, on distingue la
bilirubine libre (bilirubine non conjugue), produite par la rate, et la
bilirubine conjugue, produite dans le foie. La bilirubine totale est
obtenue en additionnant les deux valeurs.20

8-1-Bilirubine totale

Dfinition

La bilirubine est le produit de dgradation de la biliverdine qui est


produite partir de lhmoglobine la suite de la destruction des
globules rouges. Cette bilirubine libre est liposoluble et toxique pour
les neurones. Elle passe dans le foie qui la conjugue pour devenir
bilirubine conjugue hydrosoluble non toxique limine par la bile.20

Principe
Lacide sulfanilique ragit avec le nitrite de sodium pour donner de
lacide sulfanilique diazot. En prsence de dimthyl sulfoxyde
(DMSO), la bilirubine totale se couple avec lacide sulfanilique
diazot pour donner lazobilirubine.
Matriels et Ractifs
a) Les matriels
-Tube sec ou hparin

Page 32
-Micropipette
-Centrifugeuse
-Spectrophotomtre

b) Les ractifs
Ractif 1 : Acide sulfanilique 30
mmol/I
Acide Chlorhydrique 150
mmol/l
Dimthylsulfoxyde 7
mmol/l
Ractif 3 : Nitrite de sodium 20
mmol/l
Ractif 4 : Etalon Voir prparation de ltalon

Echantillon

Srum ou plasma recueilli sur EDTA hparine, citrate ou fluorure et


conserv labri de la lumire.

Dosage sanguin de bilirubine

Un dosage sanguin de bilirubine peut tre prescrit si le mdecin


constate un jaunissement de la peau ou souponne un
dysfonctionnement du foie ou de la vsicule biliaire.2

Mode opratoire

Prparation de lEtalon (R4)


Reconstituer le Iyophilisat R4 avec exactement 3ml

deau distille. Attendre 15 minutes. Complter la dissolution du


Iyophilisat par retournements successifs du flacon. Les
concentrations exacts sont indiqus sur chaque flacon La stabilit
lobscurit aprs reconstitution est de :

- 2 Jours 20-25C

- 4 Jours 2-8C

- 6 semaines -20C

Il est indispensable dtablir un facteur de calibration dans les


conditions du laboratoire ds la reconstitution de ltalon R4.

F =(Conc. Bilirubine Total) talon/ Abs (talon) - Abs (Blanc talon)

Lecture

Longueur donde : 555 mn (546 Hg)

Page 33
Temprature : 37C

Cuve : 1 cm dpaisseur

Zro de lappareil : Blanc talon ou Blanc chantillon.2

Taux de bilirubine total

Taux normal

La valeur normale du taux de bilirubine total est la naissance,


compris entre 8 - 25 mg /, la 1re semaine, entre 25 - 120 mg /L,
la 2me semaine, entre 10 - 110 mg /L, 3me semaine, entre 6 -
30 mg /L et 4me semaine, entre 3 - 15 mg /L. A partir de 1 mois
et l'ge adulte, il est compris entre 3 -10 mg /L.

Taux lev

Chez les adultes, le taux de bilirubine peut


augment(hyperbilirubinmie). Elle peut tre cause par
une hmolyse (augmentation de la destruction des globules rouges),
le syndrome de Gilbert, maladie gntique associ la hausse du
taux de bilirubine, une hpatite ou une constriction biliaire. Au-
dessus de 30mg/L, la peau et les yeux jaunissent du fait d'une trop
forte concentration de bilirubine. C'est ce que l'on dfinit par
l'ictre. Chez le nouveau-n, le taux de bilirubine peut galement
augmenter mais de manire ponctuelle en raison de l'immaturit de
son foie. Cet ictre no-natal disparat en 5 jours. A l'inverse, le taux
de bilirubine peut diminuer dans certains cas exceptionnels comme
lors des deux premiers trimestres d'une grossesse.

Taux basse

Normalement non, sauf circonstances exceptionnelles comme la


prise de certains mdicaments ou si vous tes enceinte. En effet, si
vous tes au premier ou au second trimestre de votre grossesse, il
est normal que votre taux de bilirubine total soit bas.

8-2-Bilirubine Direct

Dfinition

Principe

Lacide sulfanilique ragit avec le nitrite de sodium pour donner de


lacide sulfanilique diazot. En labsence de dimethyl sulfoxyde
seule la bilirubine directe se couple avec lacide sulfanique diazot
pour donner lazobiliru-bine.2

Matriels et Ractifs

Page 34
a) Matriels
Tube sec ou hparin
Micropipette
Centrifugeuse
Spectrophotomtre
b) Ractifs
Ractif 2 : Acide sulfanilique 30
mmol/I

Acide Chlorhydrique 150


mmol/l

Ractif 3 : Nitrite de sodium 20


mmol/l

Ractif 4 : Etalon Voir prparation de ltalon

ECHANTILLON
Srum ou plasma recueilli sur EDTA hparine, citrate ou
florure et conserv labri de la lumire.
LHmolyse est gnante.2
Mode opratoire
Lecture

Longueur donde 555 nm (546 Hg)

Temprature 37C.

Cuve 1 cm dpaisseur.

Zro de lappareil Blanc talon ou Blanc


chantillon.

Prparation de lEtalon (R4)

Reconstituer le Iyophilisat R4 avec exactement 3ml deau


distille.
Attendre 15 minutes.
Complter la dissolution du Iyophilisat par retournements
successifs du flacon.
La stabilit lobscurit aprs reconstitution est de:

- 2 Jours 20-25 C

- 4 Jours 2-8C

- 6 semaines -20C

Page 35
Il est indispensable dtablir un facteur de calibration dans les
conditions du laboratoire ds la reconstitution de ltalon R4.

F = (Conc. Bilirubine Direct) talon/ Abs (talon) - Abs (Blanc


talon).2

Solution de travail (B.D)

Mlanger 20 vol R2 avec 1 vol. R3

Stabilit lobscurit

6H 20 - 25C / 2 Jours 2-8C

Etalon Echantillon

Blanc Dosage Blanc Dosage


Etalon R4 50l 50l
Echantillo 50l 50l
n
Ractif R2 1000l 1000l

Solution
deTravail 1000l 1000l
(B.D)

NOTE

Mlanger et incuber exactement 5 minutes 37C lire I absorbance


(A) de ltalon et lchantillon contre leurs blancs.2

La calcule

[Bilirubine Directe]= (Asb(A)chantillon/ Asb(A) talon) x


[Conc.talon]

[Bilirubine Directe] = Abs (A) chantillon x F


Taux de bilirubine directe
Taux normal

Chez un adolescent ou un adulte, les valeurs normales de bilirubine


directe (conjugue) sont comprises entre 0 et 0,3 milligrammes par
dcilitre (mg/dL). Les valeurs normales en bilirubine totale (directe
et indirecte) sont comprises entre 0,3 et 1,9 mg/dL.

Chez le nouveau-n, le taux de bilirubine est plus lev du fait du


stress de la naissance. Chez un nouveau-n, le taux normal de

Page 36
bilirubine est infrieur 5 mg/dL ; nanmoins, approximativement
60 % des nouveaux ns sont atteints d'une forme de jaunisse et leur
niveaux de bilirubine excdent 5 mg/dL

Taux anormal

Augmentation de la bilirubine conjugue

Toutes les causes de rtention biliaire . Parmi celles-ci,


les lithiases biliaires , les pancratites , et le cancer de
la tte du pancras .
L'hpatite qu'elle soit virale ou d'une autre origine.
Des maladies rares comme la maladie de Dubin Johnson.

9-Chimie des urines

Dfinition
De nombreuses substances peuvent tre analyses et dtectes
dans les urines. Les analyses d'urines permettent d'aider au
diagnostic de certaines pathologies, mais aussi de mieux dfinir leur
traitement. Mais elles permettent aussi de savoir si une femme est
enceinte par exemple.

La chimie des urines est un examen systmatique qui permet


dorienter le diagnostic en mettant en vidence dans lurine
dventuels lments anormaux.19

-dfinition dure

L'ure constitue environ 90 % de l'azote urinaire chez l'adulte. Sa


production se droule essentiellement dans le foie et une faible
partie est produite par les reins.

-dfinition du bandelettes

La bandelette urinaire est une mthode d'analyse biologique


instantane des urines qui sont mises en contact avec des ractifs
spcifiques.

Page 37
Lanalyse de chimie des urines par bandelettes

Lanalyse de lurine par bandelettes est une des analyses les plus
frquentes au cabinet mdical. Elle permet notamment la mise en
vidence de troubles mtaboliques, hpatiques et rnaux, ainsi que
dinfections urognitales.19

Matriel

Bandelette urinaire ractive.


Rglette d'chelles colorimtriques d'analyse comparative des
bandelettes.
Rcipient de recueil des urines sec et propre (verre pied).
Une compresse.
Gants usage unique.

Mode opratoire
On met la bande dans le tube contenant lure, aprs on compare
les couleurs du bande avec les couleurs qui trouvent sur la boite des
bandes.

Surveillances et valuations

Surveillance des rsultats :

pH : en complment dautres paramtres.


Leucocytes : symptme d'infection urinaire.
Nitrite : infection bactrienne des reins ou des voies
urinaires.
Densit : symptme d'infection urinaire.
Glucose : dpistage et contrle du diabte sucr ou d'une
hyperglycmie.
Ctone : anomalies du mtabolisme, danger de cto-acidose.
Tmoins d'une hyperglycmie.
Acide ascorbique : avertissement de rsultats errons (sous-
estims) lors de la dtermination du glucose et du sang.
Protine : symptme dune maladie des reins et des voies
urinaires. Evaluation du fonction rnale : insuffisance rnale.
Sang : traumatisme urinaire, menstruations, infections graves
des reins et des voies urinaires, urolithiase, soupon de
tumeur des reins ou de la vessie.
Bilirubine : lsions du parenchyme hpatique, ictre
obstructif (appel aussi extra-hpatique pour les
problmes dcoulement des scrtions biliaires).
Urobilinogne : lsions aigues ou chroniques du parenchyme
hpatique, ictre hmolytique, tat pathologique du canal
intestinal.

Page 38
De nombreuses substances peuvent tre analyses et dtectes
dans les urines. Les analyses d'urines permettent d'aider au
diagnostic de certaines pathologies, mais aussi de mieux dfinir leur
traitement. Mais elles permettent aussi de savoir si une femme est
enceinte par exemple.

Page 39
Page 40
10) Cratinine

Page 41
Dfinition
La cratnine est un produit de dchet azot issu du catabolisme de
lac ratine dans le muscle et excrt par les reins,Les
concentrations plasmatiques normales de cratinine varient
considrablement dunindividu a l autre,en fonctionde la masse
musculaire, La mesure de la cratinine donne des informations sur
la fonction rnale et sur la masse musculaire du patient.18
Principe
le dosage est bas sur la raction de la cratinine avec le picrate de
sodium. cratinine
ragit avec le picrate alcalin forme un complexe rouge. l'intervalle
de temps choisi pour les mesures vite les interfrences provenant
d'autres constituants du srum. l'intensit de la couleur obtenue est
proportionnelle la concentration de cratinine dans l'chantillon.18
Matriels utiliss
Tube sec ou hparin
Micropipette de 100 l
Micropipette de 500 l
Centrifugeuse
Spectrophotomtre

Ractifs utiliss
Ractif 1 : ractif picrique
Ractif 2 : ractif alcalin
Blanc
Etalon de cratinine

Mthode de travail :
Prparation du blanc et dtalon :
- le blanc : 500 l d R1 + 500 l du R2
- ltalon : 500 l d R1 + 500 l du R2 + 100 l de
ltalon
Dans un tube (tube de patient), on verse 500 l de R 1 et
500 de R2 et on ajoute 100 l de srum
Rincer lappareil par leau distill.
Mettre lappareil zro par le blanc.
Lecture par le spectrophotomtre :
- La concentration de ltalon
- Puis la concentration de cratinine dans lchantillon.
Taux de criatinine

Taux normal

Cratinine plasmatique : 53 - 97 mol / L ou 5 - 12 mg / L

Cratinine urinaire : 1050 mol / 24h

Intrt du dosage

Page 42
Dpister l'insuffisance rnale

Augmentation de la cratininmie (cratinine dans le sang).

B) paramtre de srologie

1)Anti-streptolysines O (ASLO )

Dfinition

La streptolysine O est une substance produite par les bactries de


type streptocoque (du groupe A) lorsquelles infectent lorganisme.
La prsence de streptolysine dclenche une raction immunitaire et
la production danticorps antistreptolysine, qui visent neutraliser la
substance.
Ces anticorps portent le nom dantistreptolysines O (ASLO).

Principe

Les streptocoques hmolytiques des groupes A, C, G secrtent une


enzyme: la streptolysine O prsentant une activit hmolytique
sous sa forme rduite. Cette streptolysine O provoque la formation
dans lorganisme danticorps ASO rvls par une raction de
neutralisation de lactivit hmolytique de cette enzyme vis--vis de
globules rouges de lapin.

Materiels et ractifs

a) Materiels

-Plaquette de srologie
-Micropipette de 50 l

b)Ractifs

Ractif dASLO

Echantillon

Srum

Page 43
Pourquoi faire une analyse de lantistreptolysine O?

Cette analyse permet de dceler dans le sang des anticorps


antistreptolysine O, qui tmoignent de la prsence dune infection
streptocoques (par exemple une angine ou pharyngite, un
rhumatisme articulaire aigu).

Lanalyse nest pas prescrite en routine pour dpister les


pharyngites streptocoques (on utilise pour cela un test rapide sur
un frottis de gorge). Elle est rserve aux autres cas de suspicion
dinfections streptococciques, comme le rhumatisme articulaire aigu
ou la glomrulonphrite aigu (infection des reins).

Dosage sanguin des antistreptolysines


Le dosage des antistreptolysines O est utile pour diagnostiquer une
infection streptocoque et suivre l'volution des complications de
cette affection. Ce dosage s'effectue plus particulirement en lien
avec un rhumatisme articulaire aigu ou une glomrulonphrite aigu
(qui affecte le fonctionnement du rein). 16
Mode opratoire
Sur la plaquette, on pose 50 l de srum ( laide dune
micropipette) et on ajoute une goutte de ractif
On mlange pendant 02 minutes
Sil ny a pas dagglutinations, a veut dire que le rsultat est
ngatif
Sil y a des agglutinations, a veut dire que le rsultat est positif
donc :
on prend une autre plaquette, et on pose 50 l dans les trois
situations
(1), (2),(3)
on pose dans la(1) 50 l de srum de patient.

par une micropipette on prend 50 l de (1) dans (2) et de (2)


dans (3) et de (3) vers la
poubelle.
Mlanger pendant 02 minute
Aprs on observe lagglutination :
- Si dans le (1)
- Si dans le (2)
- Si dans le (3)

Page 44
Taux d'antistreptolysines O
Taux normal
En temps normal, le taux dantistreptolysine O doit tre infrieur
200 U/ml chez l'enfant et 400 U/ml chez l'adulte.
Taux anormal
Un titre > 400U/ml indique une infection rcente
La valeur de ces anticorps redevient normale au plus tard 6 mois
aprs linfection.

3) Protine C ractive (CRP)


Dfinition
La CRP est souvent prescrite chez les patients prsentant des
maladies inflammatoires, telles que certaines formes d'arthrites,
maladies auto-immunes ou maladies inflammatoires du tube
digestif, pour valuer lactivit de l'inflammation et pour surveiller
lefficacit du traitement. La CRP est galement utilise lors de la
surveillance des patients aprs une intervention chirurgicale ou
d'autres actes invasifs, afin de dtecter la survenue d'une
ventuelle complication infectieuse post-opratoire. Le dosage de
CRP nest pas suffisamment spcifique pour orienter vers une
maladie particulire. En revanche, la CRP est considre comme un
bon marqueur de l'infection et de l'inflammation: son augmentation
est un signe dalerte pour les mdecins qui adaptent alors la
surveillance et le traitement de leurs patients.15
Principe
Le CRP LATEX est un test rapide au latex pour la recherche de la
Protine C Ractive (CRP). Les particules de latex, sensibilises avec
des anticorps spcifiques de la CRP humaine, sont agglutines en
prsence de srum de patient contenant la CRP.
Matriels et ractifs
1) Matriels
-tube sec ou hparine
-micropipette
-Centrifugeuse
2) Ractifs
Ractifs de CRP
Echantillon
Srums frais ou conservs -20C depuis au moins un mois,
prsentant une coagulation complte. Eliminer les srums fortement
lipmiques.
Mode opratoire
Ramener les ractifs et les srums tester temprature ambiante
(1 8-25C).
-Test qualitatif
Dposer successivement sur la carte :
-1 goutte du contrle positif
-1 goutte du contrle ngatif
-1 goutte (50 I) de srum tester.

Page 45
- Placer ct de chaque dpt 1 goutte de Latex anti CRP bien
homognis.
- Mlanger les 2 gouttes laide dun agitateur et les taler.
- Imprimer la carte un mouvement de rotation et observer
lapparition ventuelle dune agglutination en 3 minutes.
Test semi quantitatif
Prparer une srie de dilutions du srum tester en solution de
NaCI 8,5 g/l. Rpter le test pour chaque dilution de la mme
manire que pour le test qualitatif et rechercher la dernire dilution
donnant encore une agglutination. La concentration du srum test
en CRP est estime en multipliant le titre obtenu par le seuil de
sensibilit du test 6mg/l.
Lecture
Raction ngative : La suspension reste homogne
Raction positive : agglutination nette en 2 minutes. La sensibilit
du test CRP LATEX tant de 6 mg/l. Les srums donnant une
raction positive ont une concentration suprieure 6mg/l de CRP.
Taux de CRP
Taux normal
Le taux normal de CRP doit tre infrieur 6mg/L. Il peut tre
augment sensiblement chez les personnes fumeuses, chez les
obses et chez ceux qui consomment de lalcool de faon rgulire.
Taux anormal
Un taux de CRP suprieur 6 mg/L environ.
2) Antigne HBs
Dfinition

Ag HBs ou antigne australia. antigne trouv principalement dans


le sang des malades atteints d'hpatite b (inflammation du foie). on
le trouve sur l'enveloppe duvirus de l'hpatite b, dont il indique la
prsence, ce qui permet d'liminer les donneurs de sangqui en sont
porteurs et qui peuvent donc transmettre la maladie. il provoque
tardivement l'apparition de l'anticorps spcifique anti hbs, dont la
prsence annonce la gurison de la maladie.

Les ractifs :

R1 : microplate

R2 : concentrationwachingsolution (x20)

R3 : ngative control

R4 : positive control (humain)

R6 : conjugate diluant

R 7: conjugate

R 8: substrate buffer

R 9: chromogen pink coloured

Page 46
R10: stopping solution

Mode daction

Il s agit de dtecter dans le srum du patient l antigne Hbs


du virus de l hpatite B. C est test immun-enzymatique : l antigne
dans la phase mobile est dtecte et fix par l anticor ps fix sur le
support en produisant une bande colore visible sur la zone du test
note << T >>. Si l antigne est absent dans le srum ; une bande
contrle note << C >> permet de vrifier que la raction sest
droule normalement.

5. Hpatite C

dfinition

Le virus dhpatite C est responsable daffections aigues que


passant souvent inaperues car asymptomatique, et dhpatite
chronique assez frquentes et parfois graves
il se transmet essentiellement par vois sanguine mais galement
par vois sexuelle et prnatale, les dosage des anticorps anti
hpatique C (anticorps anti-VHC) permet de prouver un infection par
le virus de hpatite C.

Les ractifs :

R1 : microplate

R2 : concentrationwachingsolution (x20)

R3 : ngative control

R4 : positive control (humain)

R6 : conjugate diluant

R 7: conjugate

R 8: substrate buffer

R 9: chromogen pink coloured

R10: stopping solution

Rsultats :

Recherche danticorps anti-VHC ngative :

Signifie quil ny a pas dinfection par VHC ou infection troupe


rcente pour tre dpister au niveau srologie (apparition des
anticorps en moyenne 12 15 semaines aprs la contamination, par
fois plus).

Recherche danticorps anti-VHC positive :

Page 47

Ncessite une conformation par un 2me Test.
ne permet pat de distingue les porteur chronique du virus des
patients immunises et guris de leur hpatite C
une recherche srologique positive chez des sujets a
risque poly transfuses toxicomanes, personnel de sant)
devrait arment effectuer galement une srologie anti
virus de hpatite B et anti HIV car les co-infections sont
relativement frquente.

6.VIH (virus de limmunodficience Humaine)


Condition de prlvement :
Prlvement du sang veineux(en gnrale au pli du coude).
Il nest pas indispensable dtre jeun.
Intrer de dosage :
Le SIDA (syndrome dimmuno dpretion Acquise) est consiquence
de linfection au VIH ,le diagnostique de cette infection se fait par la
dtection des anticorps dans le sang anticorps que apparaissent
entre 2et12 semaine aprs la contamination .
Un sujet sropositive peut avoir aucun symptomede la malade
pendant plusiure anne mais il est cepandant contagieux
transmition par les rapporte sexuel ,les produis sanguine
contamine : une transmission transplacentaire est galement
possible de la mre de lanfant).
Le dipassage dune sro positive peut etre effectu gratuitement
dans un centre de dipistage anonyme.
Rsultats
Il y 2 tcnique de dpasage
Si le recherche par les 2 tcnique est ngative ,le sujet est
srongative aule VIH ;dass le cas ou un risque de
contamination est possible ,la recherche peut de nouveau etre
effectue tous les mois pendant les 3 mois qui
suivantlventuelle contamination pour concdirer les resultat
comme dfinitifement ngatif
Si lun des test ou les 2 est positif ,une nouveau prlvement
est demonde pour effectuer une teste de confermation
Si le test de conformation est positif ,la sropositivit du sujet
de VIH peut etre afferme
Le 2metest une nouveau prlavament un mois plus tard,peut etre
domand afin de tracher entre un relle sroconvertion ,ou raction
ngatif sujete srongative
1. Vitesse de sdimentation
Dfinition

Cest le temps ncessaire aux lments cellulaires sanguins


(globules blancs, globules rouges et plaquettes) pour sdimenter
c'est--dire tomb librement au bas d'une colonne de sang
incapable de coaguler (grce l'anticoagulant utilis pour le
prlvement).

Page 48
Principe

La vitesse de sdimentation correspond la vitesse ncessaire aux


cellules sanguines pour sdimenter et se dposer au fond d'un tube
essai. Ce test dintrt gnral est utilis dans le diagnostic de
plusieurs affections et la surveillance de maladies inflammatoires.13

Matriels et Ractifs

1) Matriels

Tube contient le citrate de sodium


Pipette
propipette

Support des pipettes permet de maintenir les pipettes verticales

Mode opratoire

Aprs le prlvement sanguin, on verse le sang dans un


tube (couleur : bleu) qi contient le citrate de sodium qui
empche aussi la coagulation du sang
Le sang aspir dans une pipette laide dune pro
pipette jusqu la graduation 0 ml
La pipette est ensuite fixe au support bien
verticalement. La base du support doit tre horizontale
La pipette est laisse pendant une heure. Au cours de
temps de sdimentation, il est important dviter les
chocs et les vibrations
Aprs une heure, noter en mm la hauteur du plasma
surnageant partir de la graduation zro
La mesure de la Vs seffectue aprs une heure et deux
heures.

Aprs une heure Aprs 2


heures
Taux de VS

Taux normal
Selon Miller[rf. ncessaire], pour les hommes, la VS normale correspond
son ge divis par deux.

Page 49
Pour les femmes, la VS normale correspond la somme de son ge
plus dix, le tout divis par deux.

Selon Sox3 :

Avant 50 ans

VS infrieur 15 pour les hommes

VS infrieur 20 pour les femmes

Aprs 50 ans

VS infrieur 20 pour les hommes

VS infrieur 30 pour les femmes.13

Taux anormal

Pathologique (= VS augmente ou acclre) si > 30 mm aprs 1h


Augmentation de la VS
- tous les tats inflammatoires
- la plupart des anmies ds que Hte < 30% (penser en premier
celles avec test de Coombs +)
- grossesse (jusqu 50 mm)
- prsence dune Ig monoclonale
- obsit
Dimunition de VS

-polyglobulies
- la drpanocytose
- les microcytoses
- le traitement par anti-inflammatoires haute dose.

2) FNS : Formule Numration Sanguine

Dfinition

La formule de numration sanguine (FNS) ou hmogramme permet


de mesurer le nombre d'lments de chacune des trois catgories
de cellules sanguines que sont les globules rouges (hmaties), les
globules blancs (leucocytes) et les plaquettes.

Page 50
La numration globulaire consiste compter le nombre de globules
de chaque catgorie, et la

formule leucocytaire rpartir les globules blancs en diffrentes


classes en fonction de leurs caractristiques.14
Principe
Formule Numration Sanguine permet de compter le nombre des
lments figurs du sang et plusieurs autres lments sont ainsi
doss comme par exemple, le VGM, CCMH et TCMH...

1- Matriels utiliss :
Tube contient lEDT
l'agitation de tube d'chantillon sanguine non
centrifug.
Analyseur dhmatologie (compagn par une
imprimante)
Mode opratoire
Aprs le prlvement sanguin, on verse le sang dans un tube
(couleur : lavande) qui contient lEDTA. Ce dernier empche la
coagulation du sang.

Page 51
4) les groupes sanguins

Dfinition
La dtermination du groupe sanguin consiste rechercher la
prsence ou l'absence des antignes A et B prsents sur les
globules rouges et les anticorps correspondants aux antignes
absents dans le srum. La dtermination du groupe dans le systme
Rhsus permet de distinguer les sujets dits Rhsus D positif des
sujets Rhsus ngatif. Les systmes ABO et Rhsus sont les
plus importants dterminer dans le cadre de transfusions
sanguines afin de respecter les rgles de compatibilit. En effet,
l'injection de produit sanguin d'un donneur non compatible avec le
groupe sanguin du receveur peut entraner des accidents
transfusionnels dramatiques. C'est pourquoi la dtermination du
groupe sanguin est si importante et ncessite au moins 2
dterminations avant la dlivrance d'une carte.

Principes

Utilise la raction antigne-anticorps (Ag-AC). Cette raction


antigne anticorps est visualise par une agglutination des cellules.

Les matrielles
-Support contient les 4 groupes (A, B, O, AB).
-plaque sanguin.
Les ractifs
Test Anti A
Test Anti B
Test Anti O

Page 52
Test Anti D

Le systme "RH

" est form d'un groupe d'antignes ports aussi la surface des
globules rouges. On dit : de quelqu'un qu'il est:

"RH+" s'il possde l'antigne " RH" sur ses globules rouges

Normalement, il n'y pas d'anticorps anti-Rh dans le sang sauf dans


le cas d'une mre "enfant "RH+ " ou dans le cas d'un individu "RH-"
qui a reu une transfusion de sang "viter de donner du sang
porteur de l'antigne Rh un individu qui ne l'a pas car l'organisme
de ce dernier ragira en fabriquant des anticorps anti-Rh. Ces
anticorps ne causent pas de dommages immdiatement, mais lors
d'un deuxime contact avec l'antigne Rh, ils provoqueront une
agglutination des globules rouges pouvant ainsi causer des
dommages importants.

Mode opratoire
- En dpose sur la plaque 4 gouttes de sang

- Ajouter sur chaque goutte de sang


Goutte de test Anti -A
Goutte de test Anti -B
Goutte de test Anti AB

Goutte de test Anti O


- Mlanger soigneusement chaque goutte de sang avec la
goutte de ractif de faon former une tche denviron 2cm
de diamtre

Page 53
- laisser reposer 30 secondes et lire les agglutinations en
agitant la plaque .
- Dtermination la groupe en fonction de labsence ou la prsence
- dagglutination et vrifier que celui-ci est identique la carte de groupe du
- patient et ltiquetage de la poche transfuser.
Rsultat

- Les rsultats sont rsums dans le tableau ci-dessous

- On aura alors :

- Un sang du groupe A qui prsentera un agrgat avec les anti


A et rien avec les anti B. o Un sang du groupe B qui
prsentera un agrgat avec les anti B et rien avec les anti A.

- Un sang du groupe AB qui prsentera un agrgat avec les anti


A et un agrgat avec les anti B.

- Un sang du groupe O qui ne prsentera aucun agrgat avec


les anti A de mme qu'avec les anti B.

N.B

Des accidents graves et parfois mortels peuvent subvenir lors ou


aprs une transfusion sanguine et cela dans le cas d'une
incompatibilit entre donneur et receveur.Cette incompatibilit se
manifeste chez le patient receveur par une agglutination
intravasculaire de ces globules rouges, et la formation d'amas qui

Page 54
bloque la circulation sanguine pouvant provoquer des embolies.Il est
trs important de connaitre les lois de transfusion et les groupes
sanguins pour viter toute erreur d'incompatibilit :

5) L'hmatocrite
Dfinition
L'hmatocrite dsigne le pourcentage relatif du volume des globules rouges par
rapport au volume total du sang. Ce chiffre permet entre autres le calcul du volume
globulaire moyen (VGM) et la concentration corpusculaire moyenne en hmoglobine
(CCMH).
Matriels
Tube contient LEDTA
Tubs capillaires
Cadran gradu excentrique
Microcentrifugeuse
Mode opratoire
Prlvement de sang veineux sur EDTA.
Placer lextrmit du tube capillaire cercle dans le tube du prlvement sanguin,
Le sang est plac dans un tube capillaire.

Page 55
Boucher, avec la Cire molle en pte modeler.

Centrifuger 10 minutes vitesse maximum dans micro Centrifugeuse .

Lire le rsultat la hauteur de la ligne de dmarcation entre les globules rouges et la


couche de leucocytes. Sassurer que lon utilise la bonne srie de graduation.

Interprtation des rsultats


Hmatocrite et anmie
L'anmie est dfinie (en l'absence d'hmoconcentration ou
d'hmodilution) par la diminution de la concentration de
l'hmoglobine en-dessous des valeurs physiologiques. Par contre,
l'hmatocrite, par l'intermdiaire du volume globulaire moyen (VGM)
et de la concentration corpusculaire moyenne en hmoglobine
(CCMH), permet une classification de premire importance pour
l'investigation d'une anmie.
Hmatocrite et polyglobulie:

Page 56
C'est l'augmentation de la masse globulaire totale qui dfinit la
polyglobulie. Ni la numration des hmaties, ni le taux
d'hmoglobine, ni l'hmatocrite ne peuvent, isolment, conduire
avec certitude au diagnostic de polyglobulie. L'hmatocrite est
nanmoins un excellent lment de dpistage et de surveillance
d'une polyglobulie.
6) Taux de prothrombine TP
Dfinition
Le taux de prothrombine (TP, PR ou Prothrombin Ratio en anglais)
est un examen de biologie mdicale utilis pour valuer
la coagulation sanguine.
Principe
Cest le temps de coagulation dun plasma citrate pauvre en plaquettes, recalcifi
37C en prsence dune quantit dtermine de thrombine, quantit choisie de faon
entraner la coagulation en 20 secondes dun plasma tmoin.
Le temps de thrombine explore la fibrinoformation.

Matriels et ractifs
-micropipette
- une tube
-centrifugeuse
-spectrophotomtre de TP
2) Ractifs
Solution de TP
Technique
- mettre 100L de plasma dans les barrettes places en zone dincubation et contenant
des billes
- incuber 2 mn
- dclencher la coagulation en ajoutant 100L de solution de thrombine calcique
Rsultats
Un temps de thrombine est gnralement infrieur 22 s. Tout cart suprieur ou gal
5s entre le temps de thrombine du plasma tester et le temps de trombine du plasma
tmoin est considr comme significatif.11

D) Les paramtres dIonogramme


1) MAGNESIUM
Dfinition
Le magnsium est un cation divalent. Il fait partie de la famille des
mtaux alcalino-
terreux. Le magnsium et le potassium sont les deux cations
principaux du milieu intracellulaire. C'est aussi l'un des plus
puissants activateurs enzymatiques, il joue un rle essentiel dons
l'excitabilit neuro-musculaire, dans les rgulations mtaboliques,
dans la croissance et dans les processus d'ossification.
Principe
L'ion magnsium forme un complexe de couleur violette avec la
calmagite en milieu alcalin et en prsence d'thylne glycol ttra
actate (EGTA) qui supprime l'interfrence du calcium. La

Page 57
concentration en magnsium de l'chantillon est proportionnelle
l'intensit du complexe color
Echantillons
La magnsmie est ralise chez un sujet jeun depuis 8 heures
environ. Le dosage du Magnsium se fait sur le srum, le plasma
hparine, dans les urines de 24 heures et dans le globule rouge.
Il est conseill d'viter de traiter les chantillons hmolyses,
contamins ou ayant subi plus d'une dconglation.
L'hparinate de lithium est le seul anticoagulant utilisable. Il
faut sparer le plus rapidement possible le srum ou le plasma du
culot globulaire (dans les 2 heures qui suivent te prlvement).
Les urines de 24 heures sont dilues au 1/10 avec de l'eau
distilleavant le dosage.
Il faut signaler toutes prises mdicamenteuses contenant du
magnsium.
Ractifs
Ce sont des coffrets commercialiss dont il faut suivre le protocole
fix par le fabricant. Ils contiennent en gnral les ractifs suivants:
Ractif 1
Amino-mthyl propanol 1 mmol/1
EGTA 0,21 mmol/1
Ractif 2
Calmagite 0,30 mmol/1
Etalon : n = 20 mg/1= 0,824 mmol/1
Mode opratoire
II faut s'assurer avant emploi que les ractifs et les chantillons sont
la temprature ambiante pendant 10 20 minutes.
Longueur d'onde : 535 nm
Zro de l'appareil : blanc ractif
Domaine de linarit : jusqu' 50 mg/1
Stabilit de la coloration : 30 minutes Srum - plasma :
16 22mg/l

(blanc ractif, talon,chant) = 10l + 1ml Ractif du travail


Mlanger et lire les densits optiques (DO) des spcimens aprs 5
minutes d'incubation la temprature ambiante.
Calcul : Magnsium (mg/1) = DO
chantillon x n/ DO talon

2) Phosphore

Dfinition

Le phosphore est un minral essentiel de nombreuses ractions


cellulaires, en particulier aux mcanismes nergtiques des cellules
musculaires. Le phosphore joue aussi un rle dans la minralisation
du tissu osseux, tout comme le calcium.

Page 58
Environ 85% du phosphore sont incorpors dans les os. Le
phosphore sanguin, qui se trouve sous forme de phosphate
monosodique ou disodique, notamment, ne reprsente que 1 % du
phosphore total.

Principe

En milieu alcalin, le complexe phospho-molybdate est rduit en


complexe phosphomolybdique de couleur bleu et dont lintensit
est proportionnelle la concentration en phosphore.

Matriels et ractifs

1) matriels
- une tube
-micropipette
-centrifugeuse
-spectrophotomtre
2) Ractifs
R1 Ractif rducteur :
Chlorydrate dhydroxylamine 0.14 mmol/l
Polyvinilpyrrolidone 10 g/l
Acide sulfurique 89.63 mmol/l
R2 Sel de molybdate dammonium 6.07 mmol/l
R3 Etalon 50 mg/l
1.61 mmol/l
R4 Solution de soude 2N
Prparation et stabilit
Mlanger 1 volume de ractif R1 avec 1 volume de R2
Stabilit : 4 heures 20-25C
1semaine + 4C
Echantillons
- Srum ou plasma recueilli sur hparine.
- Urine dilue au 1/5 dans leau distille.
Mode opratoire
Longueur donde : 680 nm
Temprature : T laboratoire
Cuve : 1 cm
Ajuster le zro du spectrophotomtre sur le blanc ractif.

Blanc Ractif Etalon Echantillon

Page 59
Eau distille 50l -- --
R3 Etalon -- 50l --
Srum ou urine -- -- 50l
1/5
Mlange 2ml 2ml 2ml
Ractionnel

Bien mlanger, laisser 2 minutes la temprature du Laboratoire


(prsence dun trouble pour lchantillon).
R4 0.5ml 0.5ml 0.5ml
Mlanger (le trouble disparait). Laisser 15 minutes temprature du
laboratoire, lire 680 nm. La coloration est stable 1 heure
temprature du laboratoire.
CALCUL
DO Echantillon/ DO Etalon x n
mg/l n = 50
mmol/l n = 1.61

Valeurs usuelles

Srum Enfants 1,10 - 2,10 mmol/l

43 - 65 mg/l

Adultes 0.90 - 1,45 mmol/l

28 - 45 mg/l

Urine 12 - 42 mmol/24 h
0.272- 1.3 g/24 h
Sodium et potassium
- Dtermination du Sodium et du Potassium par
photomtrie de flamme-
Dfinition
Le Sodium est le principal cation extracellulaire, la fois cause et
effet de ta qualit de l'hydratation. C'est un lment capital de
l'homostasie. Le Potassium est le principal cation intracellulaire, il
joue un rle fondamental dans la contraction du muscle stri et du
myocarde.
Principe
Lorsque l'lectron d'un atome est excit c'est dire amen un
niveau d'nergie suprieur et qu'il retourne son tat initial, il
restitue l'nergie absorbe sous forme d'une radiation
lectromagntique caractristique. Cette excitation peut tre
obtenue par chauffage dans une flamme, il y a alors mission d'une
srie de raies que l'on peut slectionner au moyen de filtres
interfrentiels.
Pour une temprature de flamme constante, l'intensit des raies
mises est proportionnelle la concentration de l'lment dans
l'chantillon. La mesure est effectue au moyen d'un photomtre

Page 60
d'mission de flamme par comparaison une solution talon traite
dans les mmes conditions.
Echantillons
La natrmie et la kalimie sont ralises chez un sujet jeun depuis
8 heures environ. Le dosage de Na+ et du K+ se fait sur le srum, le
plasma et l'urine de 24 heures qui peuvent tre congels moins
20C pendant 3 mois.
Srum: sur un tube parfaitement sec pour viter l'hmolyse,
Plasma: avec comme anticoagulant de l'hparinate de lithium.
Les srums troubles contamins et hmolyses seront carts; de
mme il faut viter de traiter les chantillons ayant subi plus d'une
dconglation.
Il faut signaler la prise de certains mdicaments tels que les
corticodes, les diurtiques et Les antibiotiques qui sont susceptibles
d'affecter les rsultats de ce dosage.
Important :
Les prlvements sanguins doivent tre considrs comme
potentiellement infectieux. Il faudra les manipuler avec les
prcautions d'usage et considrer le matriel directement en
contact avec les chantillons et les ractifs comme des produits
contamins.
Matriel
Centrifugeuse
Balance de prcision
Photomtre mission de flamme
Micropipettes rglables (10-50 (il; 40-200 ^1; 200-1000 u.1)
Embouts pour micropipettes
Portoir pour tube hmolyse
Tubes hmolyse
Ractifs
Solutions talons : Sodium 140 mmol/1
Potassium 5 mmol/1
Ces solutions talons sont commercialises mais on peut les
prparer de la manire suivante :
Chlorure de sodium pur 4,095 g
Chlorure de potassium pur 0,1863 g
Eau bidstille qsp 500 ml Conserver cette solution +4C dans
un flacon en polythylne (viter d'utiliser des flacons en verre car il
libre du sodium).
Le mlange des deux produits dans une mme solution se justifie
par le fait que les deux cations se retrouvent simultanment dans
l'chantillon analyser.
Mode opratoire
II faut s'assurer avant emploi que les ractifs et les chantillons sont
la temprature ambiante pendant 10 20 minutes.
1 Mise en marche du photomtre flamme :
II faut se rfrer au manuel d'utilisation de chaque type d'appareil.

Page 61
Tourner la valve du fuel; le bouton fuel permet de rgler le dbit
du gaz et donc l'intensit de la flamme. La pression au niveau du
dtendeur du gaz doit tre infrieure 0,35 Kg/cm2.
Mettre l'appareil sous tension; le compresseur se met
automatiquement en marche.
Allumer la flamme.
Choisir la position du paramtre doser (Na+: 589 nm, K+: 767
nm, L+: 671 nm).
Faire le rglage du zro ou moyen de l'eau distille.
Laisser chauffer l'appareil au moins 15 minutes.
Effectuer pendant ce temps la prparation des dilutions des
solutions talons et des chantillons.
2 Prparation des dilutions
Dosage du sodium : Diluer la solution talon/ plasma, srum ou
urines au 1/200.
Dosage du potassium : Diluer la solution talon, plasma ou srum
au 1/50. Les urines sont dilues au 1/500. Les dilutions sont faites
avec la mme eau distille utilise pour le rglage du zro de
l'appareil.
3 Calibration :
Elle est effectue au moyen de la solution talon ou de l'talon
interne (Li).
4 Dosage :
Aprs avoir pass tous les chantillons et les srums de contrle,
penser rincer l'appareil, puis arrter son fonctionnement.
Valeurs normales
II ne s'agit pas d'intervalle de rfrence mais de valeurs frquentes.
Srum - plasma :
Sodium : 135 145 mmol/1 (ou mEq/1)
Potassium : 3,5 5,5 mmol/1 (ou mEq/1)
Urines de 24 h :
Sodium : 1 20 250 mmol/24h (ou mEq/24h)
Potassium : 50 200 mmot/24 h (ou mEq/24h)
Rapport: Concentration du sodium urinaire/ Concentration du
potassium urinaire >

Page 62
Ce stage a t une premire exprience professionnelle trs enrichissante sur
tous les plans : aussi dun point de vue de lapprofondissement de mes connaissances
en biologie mdicale. Jai donc eu le loisir dapprendre les tapes parcourues pour la
ralisation dun examen mdicale.

Je tient prciser que jai beaucoup apprci ce stage dans ce laboratoire


puisque mes tuteurs taient gentils, srieux, aimables, comprhensifs et tolrants.

Page 63
Rfrence bibliographique
Les fiches tchnique
1-Haussamen T.U. et al. Clin. Chim. Acta. 35, 271-273
(1977).
2-Hijmans Van den Bergh A.A., Muller P., Biochem, 77, 90 (1916).
Walters M.l., Gerarde R.W., Microchem.15, 231 (1970).
3-REiTMANS; FRANKELS.
Am. d. Clin. Path. 28,56 (1957).
4-Trinder P ., Ann. Clin. Biochem. 6, 24 (1969)
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mdicales
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