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El cultivo de tejidos debe su origen a la investigacin sobre hormonas que controlen el crecimiento
y desarrollo vegetal. Este conocimiento se combin con las tcnicas bsicas de micropropagacin e
identificacin.
Desde estas dos herramientas proviene la Biotecnologa, es la tcnica por la cual la planta u rgano
de planta de puede multiplicar (propagar, reproducir) y controlar su crecimiento individual,
utilizando para ello cualquier parte dela planta (semilla, esqueje, raz, hoja, meristemos Etc.), sobre
un medio artificial de crecimiento que contenga los nutrientes bsicos de un suelo artificial en un
reciente estril.
Como un concepto general se puede definir como un conjunto de tcnicas de laboratorio en el que
se obtienen plantas completas a partir de un explante (Parte separada de la planta) que se cultiva
aspticamente en un medio artificial de composicin qumica definida y se incuba bajo condiciones
controladas.
Totipotencia
Potencialidad inherente de las clulas vegetales de regenerar una planta completa, bajo los
estmulos adecuados - Haberlandt (1900s)
Ventajas:
Permite sanear plantas con virus, mediante el cultivo de meristemos.
Facilita la realizacin de una propagacin clonal masiva de plantas idnticas en un corto tiempo.
Permite la ampliacin de la base gentica de una especie.
Los clones pueden ser propagados en cualquier poca del ao
El costo de mantenimiento de un banco de germoplasma, en condiciones de laboratorio, es menor
en comparacin al mantenimiento en condiciones de campo, evitando el riesgo de prdidas por
factores climticos (presencia de heladas, sequas prolongadas, granizadas o temperaturas elevadas)
o sanitarios.
Las plntulas se mantienen libres de plagas y enfermedades, por ser una tcnica que requiere de
mucha aspcia.
Permite someter a una poblacin de plntulas a pruebas de resistencia a factores de salinidad,
temperaturas bajas (heladas) o altas (en condiciones tropicales). (MEJIA A., R., 1988).
Desventajas:
El material qumico empleado en la preparacin de los medios de cultivos son costosos y poco
disponibles en muestro medio. Requie.re de la implementacin de una infraestructura y equipos
costosos, como la cmara de flujo laminar.
No es posible instalar laboratorios "in vitro" donde no se cuenta con fluido elctrico o se presentan
interrupciones peridicas.
Escasa literatura relacionada al cultivo "in vitro" de especies forestales.
Se requiere de personal de laboratorio especializado: bilogos, qumicos fisilogos,
fitomejoradores, agrnomos y forestales. (VITTORELLI, C., 1988).
Otros compuestos que apoyan tratamientos para eliminacin de patgenos son diversos antibiticos,
los cuales deben ser manipulados cuidadosamente por su toxicidad y/o especificidad. Entre ellos se
puede citar para contaminacin bacteriana: Carbenicilina, Cefotaxima, Geneticina, Kanamicina,
Higromicina y Rifampicina y sus mezclas (soluciones de Guillard y Provasoli). Los niveles de
concentracin empleados son del orden de 5-100 g/ mL. Una especial precaucin debe ser tomada
al usar Kanamicina, pues inhibe la morfognesis en algunas especies (Mihaljevic et al., 2001;
Obando y Jordan, 2001). Entre los antimicticos, Amfotericina B, Captafol, Carbendazi- ma,
Fenbendazole, Imazalil y Nistatina, son los ms frecuentemente usados. En la prctica, tratndose
de rganos de mayor volumen obtenidos en terreno y de los cuales se va a aislar un explante,
desinfecciones previas con Captan y Benomyl durante algunas horas, y el uso posterior de algunos
de los antimicticos indicados ms arriba, son eficientes en la remocin de patgenos.
ACLIMATIZACIN
Las plntulas que se desarrollan bajo condiciones in vitro, lo hacen con altos contenidos de
humedad tanto en el medio como en su microambiente. Las adaptaciones endgenas no consideran
entonces, en fases tempranas, la formacin de cutcula en las hojas ni los mecanismos regulatorios
del control estomtico, vinculados a la retencin de agua e intercambio gaseoso. Por un lado,
aunque el nmero de estomas puede variar en las hojas de las plantas in vitro comparado con
plantas en condiciones de crecimiento externas, ms relevante es el hecho que su forma sea
diferente y estn situados en zonas superficiales de la hoja, en vez de encontrarse ms bien
sumergidos bajo la capa epidrmica, aparte de su incapacidad en el funcionamiento de cierre en
respuesta de estrs hdrico.
MEDIO DE CULTIVO
II.- Vitaminas
Son necesarias para llevar a cabo una serie de reacciones catalticas del metabolismo y son
requeridas en pequeas cantidades.
Las ms empleadas son las siguientes:
Tiamina (Vit. B1): se aade como tiamina-HCl. Es considerada como la nica, imprescindible o
esencial para el crecimiento de las clulas vegetales.
cido nicotnico (Niacina).
Piridoxina (Vit. B6): se aada como piridixina-HCl.
Mio-inositol: no es propiamente una vitamina, es una azcar-alcohol que tiene un efecto estimulante
sobre la morfognesis, participando quiz en la va biosinttica del cido galacturnico.
cido pantotnico: ayuda al crecimiento de ciertos tejidos.
IV.- Aminocidos
Son una fuente adicional e inmediata de nitrgeno, su asimilacin puede ser ms rpida que el
nitrgeno inorgnico aportado el medio, pueden actuar como agentes quelantes. La L-glutamina y
la L-asparagina son transportadores de nitrgeno, L-arginina estimula las races y L-cistena es un
agente reductor.
V.- Carbohidratos
Son utilizados como fuente de energa y osmo-reguladores. La sacarosa es el azcar empleado
universalmente, la siguen en importancia la glucosa, fructosa, maltosa, rafinosa, galactosa, manosa,
lactosa. La concentracin a la que se emplea la sacarosa es de 20 a 45 g.l-1.
VI.- Agua
El agua para preparar medios de cultivo deber ser destilada, bidestilada, tridestilada,
desionizada o desminarizada, el agua potable contiene sales en solucin que pueden modificar la
respuesta de los tejidos en cultivo.
BIBLIOGRAFIA
Biotecnologia y Mejoramiento Vegetal II. Levitus G., Echenique V., Rubinstein C.,
Hopp E., Mroginski L. (Eds.) INTA ediciones (2010).