Fotometra de reflectancia: Qumica seca

1. Introduccin
2. Espectrofotometra de reflectancia
2.1. Concepto y tipos de reflexin
2.2. Fundamentos matemticos
2.3. Instrumentacin bsica
3. Utilidades
4. Instrumentos de medida

1. Introduccin
La qumica seca es un sistema de anlisis en que los reactivos se encuentran en estado seco o
deshidratado en una matriz porosa.
Los reactivos de qumica seca son reactivos unidad preparados de antemano para una
determinacin nica y no requieren preparacin previa al anlisis.
Hay dos tipos de sistemas de reactivos, que son:
Las tiras reactivas
Las pelculas multicapa o slides
Los sistemas de lectura que se pueden emplear son:
La inspeccin visual.
La espectrofotometra de reflectancia.

Hoy en da la qumica seca se emplea para determinaciones de orina y tambin se puede utilizar
para bioqumica sangunea.

Ventajas

Los reactivos se pueden almacenar mucho ms tiempo porque tienen un perodo mayor de
caducidad. Y los reactivos vienen preparados.

Desventajas

Son muchos ms caros

Se depende de la casa comercial para todo
No se suelen emplear tanto

2. Espectrofotometra de reflectancia

2.1 Concepto y tipos de reflexin

La reflexin es un fenmeno ptico que se produce cuando un haz de luz que se propaga en un
medio homogneo e isotrpico incide sobre la superficie de separacin con otro medio de propiedades
fsicas diferentes, de manera que, una porcin del haz se trasmite al segundo medio en forma de haz
reflectado y la otra porcin vuelve al mismo medio en forma de haz reflejado.
Segn las leyes que rigen la reflexin el haz incidente y haz reflejado forman el mismo ngulo con
la superficie de separacin.
Existen dos tipos de reflexin:
La reflexin especular, en la que el ngulo del haz incidente es igual al ngulo del haz reflejado.
La reflexin difusa, que se produce en superficies rugosas o no tan pulidas en la cual el ngulo del
haz incidente va a ser diferente al del haz reflejado. Forma como una semiesfera.

En una misma superficie pueden combinarse estos dos tipos de reflexin y para la
espectrofotometra de reflectancia la que nos importa es la reflexin difusa.

2.2. Fundamentos matemticos

 ncia mide la intensidad de la radiacin reflejada y difusa en relacin a la
La fotometra de reflectancia
intensidad del haz incidente. Para poder relacionar la concentracin de un determinado parmetro de una
muestra con la luz reflejada de manera difusa necesitamos la relacin de una serie de ecuaciones
matemticas.
Se define la reflectancia (R) como el cociente de la intensidad de la luz reflejada difusa y la
intensidad de la luz del haz incidente.

Ir Ir
R= %R = 100
Io Io

La R al igual que la T no guarda una relacin directa y lineal con la concentracin. La densidad de
reflectancia o densidad de reflexin es igual al log K.

DR= -log R

Pero esta densidad de reflectancia no guarda una relacin directa y lineal, por tanto para hacerla
directa y casi lineal hay que relacionarla con una serie de ecuaciones matemticas que son la Kubelka-
Kubelka
Llunk y Williams-Claper.

2.3 Instrumentacin bsica

A los instrumentos que se emplean en esta tcnica se les denomina espectrofotmetros, fotmetros
de reflectancia o reflectmetros.
Sus componentes son:
Fuente de luz.- Las ms empleadas son o bien
lmparas de haluros de tungsteno o lmparas de arco de
xenn y los LED (diodos emisores de luz, son lseres de
diodos, son emisiones discretas monocromticas).
Sistemas pticos.- Compuestos por lentes, espejos,
filtros o monocromadores o por una esfera integradora o
esfera de Ulbricht. Dependiendo de cada aparato en
concreto se usarn unos u otros de estos componentes.
 Detectores.- Varan en funcin del aparato tipo y colocacin, pueden ser fototubos o diodos en
serie.
Sistemas para contener la muestra.-
muestra La muestra se deposita sobre los reactivos de fase slida
disponibles en varios formatos.

La composicin bsica es: una parte que forma el soporte, una parte reflectante
reflect y una parte
reactiva y adems las hay que tienen otras capas para otras funciones.
1. La capa soporte.- Va a actuar como soporte para colocar sobre ella las restantes capas. A
veces sta est cubierta de una sustancia reflectante y va a actuar como capa reflectante.
2. La capa reflectante.-- Tiene como funcin reflejar la luz que llega a ella. La caracterstica
ms importante que debe tener es que no debe absorber a la longitud de onda del anlisis.
3. La capa reactiva.- Contiene en forma deshidratada los reactivos
reactivos necesarios para que se
produzca la reaccin. Los reactivos se hidratarn al depositar sobre ellos la muestra. A
veces
eces esta capa no es nica porque
porque hay reactivos incompatibles, sustancias interferentes.

Tiras reactivas.- Estn constituidas bsicamente

bsicamente por una lmina rgida que sirve de soporte
a una matriz formada generalmente por fibras de celulosa. Esta matriz es la que est
impregnada por los reactivos. Hay dos tipos de tiras que se aade a una capa difusora que
permite la distribucin homognea de de la muestra sobre esa matriz. Otras tiras que
presentan una capa separadora de plasma que generalmente es de fibra de vidrio. Se usan
para determinaciones de sangre total (retiene clulas).
Reactivos multicapas o slides.-
slides Este sistema slo se utiliza para bioqumica sangunea y
no para orina. El ms utilizado es de la casa Kodak. Tiene la apariencia de una diapositiva y
estn constituidas bsicamente por 4 capas de naturaleza gelatinosa enmarcadas por un
soporte de polister.
ster. La capa difusora es dnde se coloca la muestra y a ella se le
incorporan sustancias capaces de reflejar la luz de forma que acta como capa reflectante.
Esta misma capa puede actuar reteniendo clulas u otras partculas que eliminarn posibles
interferencias.
erencias. La capa reactiva que es en la que estn los reactivos en fase slida que
puede ser uno o varios segn las necesidades incluso puede tener capas accesorias para
eliminar posibles interferencias. La capa soporte que es de plstico transparente y es sobre
la que se depositan las dems capas. Tambin las hay para determinar electrolitos
empleando otras tcnicas.

3. Utilidades

Se utilizan para anlisis de orinas bien por inspeccin visual o por fotometra de reflectancia.
Para bioqumica sangunea
gunea existen aparatos que nos permiten la determinacin de mltiples
parmetros (glucosa, colesterol, TGC)
Hay aparatos que nos dan un anlisis rpido de un solo parmetro, por ejemplo los que determinan
la glucosa.