REPLICAO

Os nucleotdeos vo formar tanto RNA quanto DNA pra formar os

cidos nucleicos, tambm participam do metabolismo energtico
formando ato ou amp cclico e molculas sinalizadoras e tambm NAD
e FAD, componentes enzimticos.

A composio do nucleotdeo vai ser composto por uma pentose um

grupamento fosfato e uma base nitrogenada ( que pode ser
purina(adenina e guanina) ou pirimidina(timina, citosina e uracila)
com diferena de ter 1 anel heterocclico ou 2 aneis)

Retirando o grupamento fosfato ns teramos um nucleosdeo

A pentose diferencia-se em ribose ou desoxirribose com a presena

ou ausncia da hidroxila no carbono 2, a pentose da ribose vai estar
presente pra formao do RNA e da desoxirribose pro DNA

Quando a gente tem a juno do nucleosideo e nucleotdeo com os

grupamentos fosfato a gente tem ADP ATP AMP

Configurao
Descrita na dcada de 50, baseado em estudos de cristilografia um
polmero linear de nucleotdeos e possibilita a replicao e a
hereditariedade, o fato dela de replicar que gera herana.

A ligao entre os nucleotdeos na mesma fita uma ligao

fosfodiester com um grupamento fosfato no carbono 3, que uma
ligao extremamente forte diferente das fitas complementares. E a
ligao entre fitas complementares de pontes de hidrognio uma
ligao muito mais fraca. Por um motivo lgico, voc quer que ela se
abra mas no quer que ela parta e arrebente

A ligao entre as fitas complementares de pontes de hidrognio

acontecem entre as bases nitrogenadas, se eu tiver um nucleotdeo
onde tenho a base o fosfato e a pentose, se eu colocasse uma fita ao
lado, o que ficaria voltado pra base seria o grupamento fosfato e faria
uma ligao forte, o que aconteceu pra solucionar esse problema?
Um nucleotdeo colocada de cabea pra baixo, se eles se
complementam assim quer dizer que as fitas so antiparalelas, de um
lado a extremidade 53 e do outra 35.

A ligao vai acontecer sempre entre c e g com 3 pontes e a e t com

2 pontes. Sendo assim regies em ligaes c e g teriam maior
dificuldade de quebra dessas ligaes do que at.
A replicao vai ser semi conservativa usando uma fita como molde
para ressintetizar a fita na clula filha, imagine aqui na fase S do ciclo
celular, vai quebrar as pontes de hidrognio e uma fita vai servir de
molde. Ao final teria duas clulas filhas idnticas no processo de
mitose.

A enzima responsvel por essa replicao, a principal, a que faz a

sntese que adiciona nucleotdeos a fita molde a dna polimerase
que tem como caracterstica a polimerizao em direo 53

A gente tem ao longo do genoma varias origens de replicao, nosso

genoma grande e para cada origem de replicao ns temos duas
forquilhas de direes opostas, origens de replicao bidirecionais.
Assim que comea a se replicar voc tem o encontro de origens de
replicao diferentes se associando na molcula recm sintetizada.
Essas origens so sequencias especificas de dna que so
reconhecidas pelo complexo responsvel pela abertura da origem de
replicao, eles reconhecem e se ligam a esse ponto e comea arir o
DNA quebrando as pontes de hidrognio formando uma bolha onde se
inicia ento a origem de replicao. A origem de replicao ento tem
duas direes e medida que eles vo se encontrando ao final eles vo
formar a molcula totalmente replicada

Basta voc saber que voc tem um complexo de protenas que

reconhecem sequencias do genoma e que ali ele comea abrir a
molcula de DNA
A gente tem ento para cada origem de replicao duas forquilas de

replicao.

A gente comea vendo que ns temos uma fita molde 53 e a outra

fita molde que seria 35. Tem um complexo enzimtico importante
para a replicao , existe a DNA polimerase 3 que a Dna polimerase
principal reponsvel pela sntese da molcula de DNA.

A DNA polimerase3 ela tem duas limitaes:

S INICIA A REPLICAO A PARTIR DE UMA DUPLA FITA.

S SINTETIZA EM UMA NICA DIREO, A DIREO 53 DA

MOLCULA QUE ELA TA SINTETIZANDO E NO DA MOLCULA QUE ELA
T CRIANDO.

Ento pra solucionar esse problema a gente tem uma outra enzima
que a Primase que vai produzir iniciadores ou Primer que vai
produzir regies complementares de DNA feitas de RNA.

A DNA polimerase adiciona os nucleotdeos e caminha sobre eles,

deixando j a dupla fita com as pontes de hidrognio, uma fita a
molde e a outra a recm criada, isso o que a gente chama de fita
contnua. Onde ela reconhece um nico primer reconhece a regio
dupla fita e comea a sntese complementar, essa fita contnua est
acontecendo no sentido 53.
Na fita que teria direo 35 ela precisa fazer uma certa ginstica
a Primase precisa primeiro construir vrios iniciadores ao longo da
molcula, tornando a fita descontnua. A DNA polimerase3 reconhece
um dupla fita e volta sintetizando e assim por diante, assim ela
sintetiza a dupla fita em segmentos chamados de fragmentos de
okazaki.

No procarioto teria apenas uma origem de replicao por ser

circular e no eucarioto teria vrias, devido ao genoma ser muito

grande.

Qual o motivo da DNA polimerase andar 53?

Porque ela reconhece a hidroxila livre pra ir formando o nucleotdeo,

do contrrio, se ela anda no sentido 35 a funo dela de
exonuclease. Ou seja se a funo dela no sentido 53 de sntese no
sentido 35 a desfaz essa fita. Por exemplo se derrepente ela erra, ela
pode voltar e retirar o nucleotdeo e voltar a sintetuizar, um
mecanismo de reparo extremamente importante por que seno
seramos igual a bactrias adicionaramos mutaes ao genoma com
muita facilidade. A taxa de erro da DNA polimerase de dez elevado
a -9 e mesmo com essa taxa ainda temos cncer que uma doena
essencialmente gentica como a segunda causa de morte, isso
acontece porque ns temos muitas celular proliferando ento essa
taxa no 0 e acontece tambm durante muitos anos. Porque que o
cncer acomete mais idosos? Porque voc vai acumulando mutaes
ao longo da vida at que uma clula perca a sua capacidade de
controle de proliferao . Se voc comparar com o DNA de uma
bactria o DNA do memfero infinitamente maior do que o de
procarioto mas a capacidade da DNA polimerase tem de colocar
nucleotdeos(a velocidade) menor na bactria ela pode adicionar
500 nucleotdeos por segundo e no mamfero 50 nucleotdeos por
segundo, ento voc tem um DNA muito menor e uma molcula
colocando muitos nucleotdeos por segundo por isso eles fazem DNA
em 30 minutos, e eu tenho um DNA muito maior e uma replicao
muito mais lenta em mamferos e a a gente ta falando de 10 horas
de replicao, mas isso demonstra o cuidado em cada mecanismo, a
clula eucaritica muito mais criteriosa evitando mutaes. Uma
coisa cometer erros mas uma mutao uma vez adicionada voc
nunca mais enxerga a mutao, e ela se perpetua e toda clula
filha daquele DNA recebe essa mutao ento extremamente
importante que ela no ocorra e a clula faz de tudo para que no
ocorra. Mas se acontecer, se ocorrer, no volta mais. J na bactria a
sobrevivncia dela depende da mutao isso evolutivo, enquanto a
mutao nos bloqueira porque ela deletria nossa evoluo fez
com que fossemos cuidadosos com a nossa replicao, para a
bactria no, quanto mais mutao melhor, ela vai criando mais
resistncia, ela vai criando cepas resistentes, ento a mutao para
ela extremamente importante. Ento isso refora a ideia de vrias
origens de replicao, se voc tem um DNA grande com uma
velocidade menor eu preciso ter mais origens de replicao .

Lembrando que a Polimerase uma enzima e o que afeta uma

enzima? Ela erra menos ou erra mais a depender do seu nvel
ideal de pH e temperatura. Isso in vitro voc faz um
experimento com a DNA polimerase replicando um fragmento
de DNA, se voc errar a temperatura acabou ou se voc
deixar muito tempo ou alm da eficincia dela voc vai ter
muitos erros na replicao. Por exemplo se ela for eficiente para
200 pares de base e voc deixar com que ela faa 400 pares
Por exemplo, se a ligao AT e no momento em que ela viu o
A ao invs de colocar o T ela coloca o C, se um tem 3 pontes de
hidrogncio e o outro tem 2 isso vai ficar tronxo no DNA,
aquilo reconhecido, pode ser que a DNA polimerase no veja
mas isso pode ser reconhecido por outras enzimas de reparo.
 Mas ai se na hora de reparar ela no lugar de tirara o C e colocar
o T ela tira o A e coloca o G. Ai acabou , isso uma mutao e
jamais voc enxerga isso porque o pareamento ta normal e ai
toda vez que esse DNA replicar ele repasse ela mutao porque
aquilo no mais visto. Isso um exemplo clssico da mutao
pontual
A taxa de mutao em RNA maior do que em DNA?
sim mas no faz a menor diferena, por que expresso. Se
ela erra e gera uma protena mutada aquilo vai ser degradado,
o problema no esse. O problema a matriz ta errada se voc
tem um erro no seu livro toda vez que voc xerocar voc
carrega o erro, se voc tem o seu livro normal e na hora da
xerox falta um pedao voc volta l no seu livro e refaz a xerox
A mutao em vrus no tem a ver com a molcula ser RNA e
DNA tem relao com evoluo viral, famlia, tipo... tem vrus
que replica muito e tem uma alta taxa de mutao que no de
RNA. Se voc comparar HIV, HTLV(entendi isso, no tenho
certeza) e Dengue, a dengue tem uma taxa de mutao bem
inferior ao que voc v em HIV...
Existem dois conceitos o primeiro voc curar um cncer e ele
aparecer em outro lugar se voc tiver dois cnceres primrios.
Por exemplo eu tive um cncer de mama, curei, fiz a cirurgia, a
mastectomia alguns anos depois aparece um cncer no meu
fgado(...) Se for igual metstase(os maiores focos so pulmo
e fgado) , a outra condio, a metstase significa que a
clula conseguiu invadir um linfonodo por exemplo ou a
corrente sangunea e conseguiu se implantar em outro tecido.
Se forem dois cnceres primrios quer dizer que voc j tem
um erro intrnseco no seu genoma, por exemplo cncer
hereditrio que o caso da Angelia Jolie por exemplo ela
nasceu com uma mutao em (...) que um prton oncognico,
supressor tumoral que ela atua na reparao ele um proton
importante de controle celular e a sim, por ela j possuir um
alelo mutado a chance dela possuir um cncer muito maior do
que em uma pessoa que tenha os dois alelos normais, porque
s falta perder o outro alelo, quando se v dois focos de cncer
primrio existe uma chance muito grande de ser cncer
hereditrio.
Eventos epigenticos so responsveis por vrios
desenvolvimentos de cncer mas geralmente eles no causam
mutao, eles causam silenciamento, ele faz um troca de
nucleotdeo que voc no acha, o DNA t integro mas se voc
procurar a protena ela no est sendo produzida.
PRIMASE: Distribui os Primer que vo servir de apoio pra DNA
polimerase3

DNA POLIMERASE3: Ela tanto vai fazer a fita contnua quanto a fita
descontnua

DNA POLIMERASE1: Retira o Primer e coloca DNA no lugar

DNA LIGASE: Liga os fragmentos permitindo que a molcula fique

totalmente ntegra.

HELICASE: Vai a frente da forquilha de replicao abrindo e

quebrando as pontes de hidrognio

GIRASE ou TOPOISOMERASE: Vai a frente da forquilha diminuindo a

tenso na molcula de DNA, destorcendo a molcula pra evitar
que ela quebre

DNA POLIMERASE2: de reparo

PROTENAS DE LIGAO AO DNA FITA SIMPLES: Se liga a uma

regio de DNA fita simples pra impedir que esse DNA faa alguma
ligao inespecfica, mantendo o DNA livre( mantem o estado de
fita simples do DNA)

TELMEROS

A exceo do DNA est nos telmeros, a regio telomeria ou seja

as extremidades da nossa molcula no consegue ser replicada
pela DNA polimerase e a que faz a replicao ento uma enzima
chamada TELOMERASE. A telomerase ela uma trancriptase
reversa( gera DNA de RNA), ou seja, ela tem um molde de RNA
dentro dela que complementar a regio telomrica , uma regio
de muita repetio de nucleotdeo, ela reconhece essa regio e ela
alonga a molcula de DNA molde ai vem a PRIMASE a DNA
polimerase3 vem e sintetiza esse restinho. O que faltar sempre
que faltar aqui no final que o pedao de Primer ele no ta
deixando nenhum fragmento de fora porque essa regio foi a
regio que a DNA polimerase alongou ento esse pedao que ficou
sem a replicao vai se fechar em forma de grampo, formando um
grampo no final, trazendo inclusive estabilidade e o DNA dessa
forma fica ntegro. Ento a telomerase uma enzima
extremamente importante e ativa em todas as clulas
germinativas pois voc precisa produzir clulas germinativas com
DNA ntegro, clulas somticas a gente perde a atividade da
telomerase significa que se ela no tem atividade a gente no
replica o telmero ento a cada diviso de clulas somtica eu
tenho encurtamento de telmeros que est relacionado com
envelhecimento celular, vai chegar um momento em que essa
clula vai ter um limite de replicao e se ela replicar novamente
ela vai comear a perder informao gentica (senescncia
celular)e encaminhada pra apoptose. As clulas cancergenas
por exemplo a telomerase considerada o prprio oncogene em
80% dos cnceres eles acionam a telomerase ativam a telomerase
e dessa forma eles conseguem burlar o mecanismo de apoptose
porque ele passa a ter uma diviso celular ifinita porque est
sempre replicando telmero ento ela perde o limite de replicao.
Se a gente conseguir dominar a telomerase a gente bloqueia o
envelhecimento celular, acontece que hoje a gente sabe como ela
funciona e age mas ainda no se tem controle sobre ela,
principalmente porque se voc passa a ter atividade da telomerase
em clulas somticas ela tem uma linha muito tnue com a
neoplasia
Outra coisa importante so as histonas, as histonas precisam ser
retiradas do DNA quando a gente ta sofrendo replicao do
genoma mas depois elas retornam e voltam a enovelar o DNA
ento quando a gente ta abrindo a forquilha de replicao a gente
no abre a molcula toda a gente abre em vrias regies a partir
das origens de replicao.

O mecanismo mais bem descrito de replicao de procariotos

ento a DNA polimerase 1, 2 e 3 so enzimas de procariotos ea
gente possui enzimas complementares( as perguntas na prova vo
ser relacionadas ao mecanismo em procariotos) o mesmo acontece
nas demais enzimas.
Quando a DNA polimerase era o DNA fica tronxo e vai precisar de
um repara daquela regio a existem reparos especficos quando j
est com a molcula pronta so conhecidos como reparo por
exciso de base e reparo de quebra de dupla fita, se quebra a
dupla fita h o reparo por um complexo de protrnas especficas
em reparo de DNA( no vai cobrar quais mas sim saber que
existem) a gente tem mecanismos de reparo o tempo todo mas a
gente pode fazer reparos que escondam por toda a vida um
mutao (mutaes pontuais).

Um reparo importante so os reparos por exciso de nucleotdeos

que so muito importantes principalmente pra quem mora em
pases tropicais em que os raios ultravioletas inserem dmeros de
pirimidinas no nosso genoma, esse dmero reconhecido por
protenas que fazem o reparo da exciso de nucleotdeos, eles
reconhecem retiram um fragmento de nucleotdeos a poro OH
fica aberta reconhecida pela DNA polimerase2 que vai sintetizar
um novo fragmento sem aquele dmero de pirimidina.

Ento qual a relao de cncer de pele e exposio solar?

a insero de dmeros de pirimidinas no genoma
Porque indivduos negros tem mais proteo do que indivduos
de pele muito branca?
A melanina perinuclear ela se localiza em volta do ncleo e
acaba impedindo que essa entrada de raios ultravioleta seja to
intensa no genoma, diminuindo a insero de dmeros de
pirimidina
 TEM UMA DOENA GENTICA CHAMADA XERODERMA
PIGMENTOSO:
Acontece em indivduos que tem uma mutao em protenas
XP, as protenas XP so todas envolvidas em reparo de exciso
de nucleotdeos, se voc tem uma mutao na protena com
perda de funo isso quer dizer que voc no consegue fazer o
reparo de forma efetiva ento os dmeros de pirimidina
permanecem no genoma so inseridos no DNA e por isso geram
mutaes frequentes. Esses indivduos so conhecidos como
meninos da lua porque eles no devem sair se expondo ao Sol e
eles tem um pele muito manchada porque eles so acometidos
por vrios cnceres vasocelular melanoma e no melanoma
com frequncia. Tem uma cidade no Brasil, Goinia ou Gois
(Siane confusa) prxima a DF em que a incidncia dessa
mutao muito alta, a as pessoas perdem pedaos do corpo,
como orelha, nariz... O rosto fica todo desfigurado por ser o
lugar mais exposto. Expectativa de vida bem diminuda

Vrias teraputicas e reas da medicina usam esse conhecimento

para a clnica. Os inibidores de topoisomerasa so altamente
utilizados em terapia para cncer , seu consigo bloquear (em caso de
mamferos) topoisomerase1 e2 e ele impede que a topoisomerase
exera sua funo como a clula cancergena sempre proliferativa
ela ta sempre fazendo replicao se a topoisomerasa no funciona ela
vai quebrar esse fragmento em varias partes do genoma j que eu
tenho vrias forquilhas de replicao, todas essas forquilhas sem a
topoisomerase funcionando o DNA vai quebrar em vrios pedaos e
possvel que a replicao no ocorra inclusive pode induzir a clula
apoptose diminuindo a proliferao do tumor. Tem gente que usa
teraputica para cncer que atua na replicao de DNA e que no
consegue surtir efeito no paciente e ai o oncologista que ta montando
a teraputica ele precisa ter o mnimo de conhecimo pra entender o
que usar pra atuar em topoisomerase ou mudar o tratamento e talvez
atuar agora em citoesqueleto, em tubulina...o mecanismo fisiolgico
de replicao celular de diviso celular tem que ser dominado por
vocs para que o raciocino teraputico (...)

Os antirretrovirais vo funcionar nesses mecanismos (...)

A principal causa da resistncia retroviral de pacientes portadores de
HIV o uso errado e medicamento... E a segunda causa prescrio
mdica errada...

HIV tem ligao com receptor CD4 por isso ele infecta linfcitos CD4
positivos, consegue entrar na clula, um retrovrus ento sua
molcula de genoma RNA mas ela tambm tem uma enzima
transcriptase reversa ento ela reverte a sequencia de RNA viral em
uma sequncia de DNA complementar esse DNA entra no ncleo se
insere no genoma e usa a maquinaria da clula para produzir novos
vrus, cada X (olhar na imagem) desse eu posso tentar bloquear a
ligao do vrus ao receptor CD4 positivo, eu posso bloquear a
transcriptase reversa ento ele entra na clula mas no consegue
gerar o DNA, eu posso bloquear a intregrase que a protena que
vem junto do vrus que integra o genoma ao DNA que principal
causa de cncer em HIV porque essa insero aleatria. Ainda tem
as proteases, os inibidores de protease vo acabar no formando o
capsdeo pra gerar novas cpias virais.

O AZT foi a principal droga desenvolvida pro HIV na dcada de 80

hoje pouca ao tem sobre AZT , a maioria das infeces virais elas
tem resistncia a AZT, ele tinha como alvo a transcriptase reversa
impedindo a formao de DNA a partir do RNA viral. Ele tem uma alta
toxicidade gerando muito efeitos colaterais as drogas mais modernas
tem menos efeitos colaterais nos pacientes.