Diabetes Mellitus, hemoglobina glicosilada y stress oxidativo

Se estudiaron 106 evaluaciones en pacientes diabticos tipo II, con ms de 10 aos de

evolucin, con ndice de masa corporal (IMC) mayor a 25,01, en tratamiento diettico, con hipogilcemienates orales
y/o insulinizados, mayores de 45 y menores de 65 aos, midiendo y comparando su Stress Oxidativo (SO) y su
Hemoglobina Glicosilada (HbA1c).

Se efectu una correlacin entre los valores del SO expresados de 1 a 5 segn la clasificacin de Bradford y por
segmentacin cuantitativa (SC) de reas rojo-pigmentadas, y el porcentaje de Hemoglobina Glicosilada (HbA1c).
Demostrndose una correlacin entre los ndices evaluados, que analizados permitiran medir la evolucin de la
enfermedad diabtica (cuando aumenta el porcentaje de HbA1c aumenta el SO y disminuye la SC).

Dr. Ricardo Colucci (Mdico Gineclogo)

Dra. Mariela Curri (Mdica Endocrinloga)

Buenos Aires

20 de Abril de 2010

INTRODUCCIN

Visto la amplia bibliografa presente en el tema Diabetes mellitas y SO, realizamos un extracto de la misma a manera
de resea.

La Diabetes Mellitus conduce al aumento de especies reactivas al oxgeno (ROS) y a una reduccin de las defensas
antioxidantes, incrementndose el SO responsable de muchas de las complicaciones de esta enfermedad. Los efectos
causados se ven en la diabetes tipo I, pero mucho ms en la diabetes tipo II.
En la hiperglicemia crnica:
- los radicales de oxgeno estn muy aumentados
- las defensas antioxidantes estn disminuidas
- las reacciones oxidativas estn en ms, sobre todo la peroxidacin lipdica y el ataque de los radicales hidroxilo al
cido desoxirribonucleico (ADN) alterando estructuralmente a las protenas.

El SO es el producto del desequilibrio de la relacin, cantidad de ROS frente a la capacidad del organismo de
eliminarlos. En los diabticos hay mayor produccin de ROS y debilitamiento de las defensas antioxidantes
responsables de la eliminacin de los radicales libres.

La hiperglicemia destruye gradualmente las defensas antioxidantes, haciendo posible que otras molculas se vean
comprometidas, incluso estructurales. Tanto la glucosa como sus productos de glicacin son potentes reductores que
generan radicales de oxgeno.

Las defensas antioxidantes se ven alteradas por la disminucin de:

- la concentracin de vitamina C en los glbulos blancos

- la cantidad de superxido dismutasa (SOD), catalasa y glutatin perioxidasa (GP), en glbulos rojos y blancos.
- Vitamina E en el plasma

Los mecanismos moleculares que explican los daos causados por la hiperglicemia crnica son:

- la acumulacin de productos de glicosilacin avanzada (PGA), en ingls advanced glycation end-products (AGE)
- la activacin de la va del sorbitol

La hiperglicemia cumple un rol fundamental en la alteracin del estado de redox de nuestro cuerpo. Aumenta los
niveles de especies reactivas al oxgeno (ROS), por diferentes vas:

- aumentando la formacin de los productos de gilcosilacin avanzada (PGA)

- activando a la protena quinasa C (PQC)
- disminuyendo el NADPH,H+ intracelular
- activando la produccin de ROS en la mitocondria

Los productos de glicosilacin avanzada (PGA) son el resultado de la reaccin de la glucosa y otros monosacridos
con protenas. Producindose molculas modificadas qumica y biolgicamente que llevan a diversos desequilibrios.

La glicosilacin no enzimtica de protenas produce directamente anin superxido (O 2-), en cantidades suficientes
como para desencadenar peroxidacin lipdica.

El glioxal especie derivada de la oxidacin de la glucosa, degradacin de protenas glicosiladas y peroxidacin-

acelera la formacin de PGA. El glioxal est elevado en la hiperglicemia crnica.

Otro modo de aumentar la produccin de ROS por las AGE (PGA), es mediante su unin con receptores especficos
denominados RAGE (receptor for advanced glycation end products). De esta forma se provocan efectos
intracelulares que elevan los niveles de ROS.

La va del sorbitol implica 2 reacciones en las que intervienen las enzimas aldosa reductasa (AR) y la sorbitol
deshidrogenasa (SDH).

Esta constituye una de las vas fundamentales en la degradacin de la glucosa y tiene gran importancia en aquellos
tejidos que no requieren de la insulina para la captacin de glucosa. Resulta de inters que estos tejidos (rin, retina,
cristalino y sistema nervioso) son en los que en mayor proporcin se presentan las complicaciones crnicas de los
diabticos.

Los mecanismos por los cuales esta va puede causar daos en los tejidos de pacientes diabticos son:

- la deplecin del NADPH,H+ intracelular

- el incremento de la concentracin de fructosa
- la acumulacin del sorbitol

La activacin de la va del sorbitol ocasiona un aumento de la produccin de fructosa intracelular, que puede entrar en
la ruta glucoltica ya sea como frutosa-6-fosfato o como fructosa-1-fosfato.

Estas sustancias poseen tambin capacidad reactiva suficiente como para glicosilar protenas y generar por lo tanto
anin superxido, contribuyendo al incremento del stress oxidativo.

La hiperglicemia mantenida lleva a la activacin de las PQC observada en los pacientes diabticos.

MODELO
El test de ACV es un mtodo de medida de radicales libres (RL) por microscopa ptica. Se trata de un anlisis de las
clulas sanguneas in Vitro. Mide la cantidad de sustancia txicas oxigeno-reactivas, identificando el nivel del
proceso oxidativo.

Existen muchas tcnicas de medicin de RL en el organismo, tanto cuali como cuantitativas, por ejemplo: la
Quimioluminiscencia o el MDA (malonil-d-aldehdo) que indica los niveles de peroxidacin lipdica.

Pero por su facilidad de realizacin el mtodo ms tradicional y expandido es el Anlisis Celular in vivo (ACV),
inicialmente conocido como HLB en honor de sus creadores (Heitan La Garde- Banting).

Realizamos un estudio comparativo sobre 106 evaluaciones en pacientes con diabetes mellitas tipo II, con ms de 10
aos de enfermedad, entre 45 y 65 aos de edad, con IMC mayor a 25,01, tratados con dieta, hipoglicemiantes orales
y/o insulinizados, comparando los valores de HbA1c y el grado de SO segn la clasificacin de Bradford. Se
consideran tambin las muestras de sangres bajo la tcnica de segmentacin cuantitativa por doble-filtro, que
previene virar al verde las reas con pigmentos rojos, pudindose medir digitalmente los porcentajes de las mismas.
La HbA1c mide la cantidad de hemoglobina glicosilada de la sangre, sta es una molcula presente en los glbulos
rojos que se fija a la glucosa. Aumenta si la glicemia promedio aumenta, da un perfil de los ltimos 2-3 meses. Su
valor normal es cuando est por debajo de 5%, cifra que vara segn tcnicas de medicin.
Clasificacin de Bradford
Grado I Normal 0 10%

Grado II Leve 10-20%

Grado III Moderado 20-30%

Grado IV Grave 30-40%

Grado V Muy grave Mayor a 40%

Se trabaj con un Microscopio MOTIC binocular, con cmara CMOS incorporada de 2 megapxeles, B1 SERIES,
DMB1-223. Aumento utilizado 40x.
Resultados
HbA1c Casos S.O promedio S.C promedio
Hasta 5% 9 1,84 61,8%
Entre 5,01 y 7,00% 38 2,06 58,2%
7,01 y 8,00 % 16 2,81 52,1%
8,01 y 9,00 % 18 3,02 49,9%
Mayor de 9,01% 25 3,22 45,6%
Conclusiones

Existe una correlacin en mas entre los valores de HbA1c y SO, y en menos entre estos y la SC, que permite evaluar
la evolucin del paciente diabtico tipo II. La medicin de SO y sobre todo la evolucin de su valor, nos da una idea
del desarrollo de la enfermedad diabtica.

Con mayores muestras y el tiempo necesario para su estudio, podramos obtener parmetros altamente fieles para el
control de esta patologa crnica.

1. Brownlee M. Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications.Nature 2001;

414:813 20
2. Diaz Arce D. Hiperglicemia y estrs exidativo en el paciente3 diabetico. Revb Cubana Invest
Biomed 2006; 25 3
3. Olszewer E, Jaldin C. MIcrosocopia optica como metodo de medida de radicais livres: analise
celular in vivo HLB 2. ed. Sao Paulo: Icone, 2001
4. Menon V, Ram M, Dorn J, Amstrong D, Muti P, Freudenheim JL, et al. Oxidative stress and
glucose levels in a population- based sample. Diabet Med 2004; 21 (12): 1346=52.
5. Ford ES, Mokdad AH, Ajani UA, Liu S. Associations between concentrations of alpha and
gamma- tocopherol on concentrations of glucose, glycosylated haemoglobin, insulin and C- peptide
among US adults. Br J Nutr 2005;93(2) : 249-55.
6. Mohanty P Hamouda W , Garg R, Aljada A, Ghanim H, Dandona P. Glucose Challlenge
stimulates reactive oxygen species (ROS) generation by leucocytes. J Clin Endocrinol Metabol
2000;85 (8): 2970-3
7. Bellizi M, Dutta-Roy AK, James WP. High D-glucose does not effect bindingof alpha-tocopherol to
human erytrocytes. Mol Cell Bochem 1997;170 (1-2) : 187-93.
8. Smit AJ, Lutgers HL. The clinical relevance of advanced glycation end-products (AGE) and recent
development in pharmaceuticals to reduce AGE accumulation. Curr Med Chem 2004;11(20):2767-
84.
9. Olszewer E, Concolino A. El ABC de la Medicina Orthomolecular. 2008;
10. Fukase S, Sato S, Mori K, Secchi EF, Kador PF. Polyol pathway and NADPH-dependent
reductases in dog leukocytes. J Diabetes Complications 1996;10(6):304-.
11. Idris I, Gray S, Donnelly R. Protein Dinase C activation: isozyme-specific effect on methabolism
and cardiovascular complications in diabetes. Diabetologia 2001;44(6):659-73.
12. Talior I, Tennenbaum T, Kuroki T, Eldar-Finkelman H. Protein kinase C (delta) dependent
activation of oidative stress in adipocytes of obese and insuline resistant mice: role for NADPH
oxidasej. Am J Physiol Endocrinol Metab Am J Physiol Endocrinolk Metab 2005;288(2):405-11.