CROMATOGRAFIA: SEPARACION DE PIGMENTOS FOTOSINTETICOS

GUA DE TRABAJO EXPERIMENTAL

ELECTIVO QUIMICA NM3
PROFESORA: FLAVIA CALDERN GODOY

OBJETIVO: Conocer un mtodo cromatogrfico para posteriormente identificar mediante el

color los pigmentos fotosintticos presentes en una hoja.

INFORMATIVO 1

Es evidente que la mayor parte de los rboles tienen hojas de color verde, pero no
menos evidente es que durante el otoo las hojas cambian su caracterstico color
verde por otros como el amarillo, el naranja, el rojo o el marrn. Sabemos que el
color verde de una hoja se debe a la presencia en los cloroplastos de un pigmento,
la clorofila, pero a qu se deben los otros colores que se manifiestan durante el
otoo?

En realidad, en un hoja, adems de la clorofila, existen otros pigmentos que se

hallan enmascarados por el intenso color verde manifestado por la clorofila;
clorofila-a verde intenso, clorofila-b verde, carotenos amarillo claro y
xantofilas, amarillo anaranjado.

La que vamos a utilizar es la cromatografa de reparto sobre papel de filtro; en

esta tcnica el extracto de pigmentos es arrastrado por un disolvente orgnico que
avanza por el papel al ser absorbido por capilaridad, de modo que cada pigmento
se separa de los dems segn su mayor o menor solubilidad en el disolvente y la
diferente atraccin por el sustrato. Este avance o movimiento del pigmento es un
valor fijo y caracterstico de cada uno y se expresa por la constante Rf, que es la
relacin entre la distancia alcanzada por el pigmento y la distancia alcanzada por
el disolvente.

RF=(distancia recorrida por el compuesto)/(distancia recorrida por el disolvente)

MATERIALES

Hojas (espinaca, Papel de filtro Mechero

acelga, geranio o
hiedra) Tijeras Trpode de hierro

Alcohol etlico de 96 Gradilla con tubos de Rejilla

ensayo
Varilla de vidrio Regla milimetrada
Recipiente para bao
Placa de Petri mara Soporte universal

Cuerda

1
PROCEDIMIENTO
Preparacin previa. Las hojas que se vayan a utilizar deben ser lavadas o mejor
an, hervidas en agua durante un minuto.

I. EXTRACCIN DE PIGMENTOS

1. Se corta la hoja en trozos pequeos, despreciando los

nervios y se introducen en un tubo de ensayo, al que se
aade una cantidad de alcohol, alrededor de 10 cc,
suficiente para cubrir los trozos de hoja.

2. Poner el tubo al bao mara, ayudndote de las

pinzas de tubo de ensayo, durante el tiempo
suficiente para que el alcohol comience a hervir.
ATENCIN: SER CUIDADOSOS CON ESTA FASE PARA
EVITAR QUE EL ALCOHOL SALGA PROYECTADO
HACIA EL EXTERIOR DEL TUBO.

3. Se retira el tubo y con ayuda de la varilla de vidrio

se maceran los trozos de hoja hasta conseguir que la solucin tome un intenso
color verde y a la que se llama solucin de pigmentos fotosintticos.

II. SEPARACIN DE PIGMENTOS POR CROMATOGRAFA

4. Poner, en una de las dos partes de una placa de Petri, suficiente cantidad de
solucin de pigmentos fotosintticos, para que sta alcance una altura de 2 a 4
mm en la placa petri.

5. Tomar una hoja de papel de filtro de sostenerla en un trozo de cuerda con ayuda
del soporte universal.

6. Introducir el papel de filtro doblado, procurando que no toque las paredes de la

placa. Dejarlo as durante unos 20 a 25 minutos.

7. Al cabo de este tiempo, observar como han aparecido en el papel de filtro

varias bandas de distintos colores, que se corresponden con los pigmentos
presentes en las hojas: beta-carotenos, clorofilas a y b, y xantofilas.

REGISTRO DE RESULTADOS Y PREGUNTAS:

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1. Indicar que pigmento corresponde a cada banda de color

2. Cul es el fundamento de la cromatografa? Para qu se utiliza?
3. Calcula cul es el Rf de cada pigmento.
 4. Qu funcin realizan los pigmentos fotosintticos?

ENTREGAR EL CORRESPONDIENTE INFORME DE LABORATORIO DE

ACUERDO A LAS INDICACIONES DADAS EN EL SEMESTRE PASADO. PUEDE
ESCRIBIR SU INFORME EN COMPUTADOR.