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T.A.S.S.

2BIO 12/5/2009

Partiel n 2
Techniques dAnalyses Spectrale & Sparative
(3h00)

BON COURAGE ET BONNE FIN DANNE TOUTES ET TOUS

Documents non autoriss - Calculatrice autorise


Justifier les calculs
Sparer calcul littral et numrique

Technique danalyse spectrale

Questions de cours : (8 points)

1) Dans le cadre de la spectroscopie de fluorescence molculaire, dfinir les termes ci-


dessous :
conversion interne ;
fluorescence de rsonance.

2) Indiquer les effets de la rigidit structurale ainsi que ceux de la temprature et du solvant
sur la fluorescence et donc sur le rendement quantique.

3) En spectroscopie IR, indiquer ce que reprsente lempreinte digitale dun spectre, ainsi que
son utilit.

4) En pratique, si lon veut raliser le spectre IR dun compos sous forme de poudre, quelles
sont les deux techniques dchantillonnages que lon peut utiliser ( dtailler).

5) Sur le schma dun spectromtre de masse (se trouvant en annexe 1), rendre avec votre
copie, indiquer clairement, lendroit o se trouve la chambre de volatilisation, celle
dionisation, lacclrateur de particules, lanalyseur, et le collecteur.

6) Aux vues du schma, prciser le type dionisateur ainsi que le type danalyseur.

Exercice 1 : Spectrofluorimtrie (4,25 points)

Vous tudiez la fluorescine laide dun spectrophotomtre et dterminez que sa longueur


donde dabsorption maximale est de 496 nm.

1/ Calculez lnergie correspondante un rayonnement de 496 nm.

2/ La fluorescine a la proprit de fluorescer. O se situe sa longueur donde dmission


maximale par rapport la longueur donde dabsorption maximale ? Justifiez.
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3/ Dans les propositions suivantes, indiquer clairement votre rponse sur votre copie :

3-1/ Une solution qui possde un chromophore est toujours colore. [vrai/faux]

3-2/ Toutes les molcules qui absorbent ont la proprit de fluorescer. [vrai/faux]

3-3/ La fluorimtrie est [plus/moins] sensible que la spectrophotomtrie UV/visible.

3-4/ La longueur donde dmission dun fluorophore est toujours infrieure sa


longueur donde dexcitation. [vrai/faux]

3-5/ La longueur donde dmission maximale dun fluorophore est


[dpendante/indpendante] de la longueur donde dexcitation.

Donnes : h = 6,63.10-34 J.s


c= 3,00.108 m.s-1

Exercice 2 : Spectrophotomtrie IR : (7,75 points)

Lorsquun rayonnement IR de frquence interagit avec une liaison polaire A-B, le ressort
modlisant la liaison dcrit des oscillations forces, la frquence , et absorbe pour ce faire,
lnergie du rayonnement lumineux.
Lorsque = 0 frquence propre dabsorption de la liaison A-B, labsorption est maximale et
se traduit, sur un spectre par une faible transmittance.

1) Comment appelle-t-on les oscillations observes sur le spectre ?

2) On a relev sur les spectres IR du benzaldhyde et de lalcool benzylique des bandes de


forte absorbance correspondant la vibration de valence de la liaison CO. Le tableau ci-aprs
donne les valeurs des nombres donde CO de ces bandes.

Calculer la constante de force de liaison du ressort modlisant la liaison CO dans les deux cas.
Commenter.

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Donnes :
M(C) = 12,0 g.mol-1 ; M(O) = 16,0 g.mol-1 ;
NA = 6,02.1023 mol-1 ;
c = 3,00.108 m.s-1.

3) Nommer la fonction chimique prsente dans les molcules symbolises de la manire


suivante o R reprsente un groupe alkyle.

4) Les spectres IR des molcules prcdentes pour lesquelles R est le groupe CH3, sont
reprsents en annexe 2.
Analyser les bandes principales de valence, et attribuer chacune des molcules son spectre
IR. (On pourra saider de la table reproduite en annexe, donnant les nombres donde des
vibrations de valence des liaisons les plus courantes).

Technique danalyse sparative

Questions de cours : (5 points)

1) Dfinissez la phase stationnaire et la phase mobile.

2) Indiquer ce que reprsente le temps mort et le temps de rtention.

3) Complter le schma (se trouvant en annexe 3), rendre avec votre copie, dun
chromatographe en phase gazeuse.

Exercice 3 : Chromatographie (7,5 points)

Nous tudions la sparation de trois composs par chromatographie haute performance.


Lexprience a lieu 20 C avec une pression en tte de colonne de 49.105 Pa. Le dbit de la
phase mobile est de 1 mL.min-1 et la longueur de la colonne est de 15 cm. Le temps mort est
de 41 s. La sparation chromatographique a donn les rsultats prsents dans le tableau ci-
dessous :

Rsultats de la sparation par HPLC de trois composs.


Composs Symbole tR (min) w (min)
Tolune T 1,83 0,14
Dithylphtalate E 2,62 0,34
Dimthylphtalate M 3,23 0,42

1/ Quel est le principe de la chromatographie ?

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2/ Calculer la vitesse linaire moyenne de la phase mobile.

3/ Calculez pour chaque compos :

3-1/ Le facteur de rtention k.


3-2/ Le nombre de plateaux thoriques (les pics sont supposs gaussiens).

4/ Calculez pour chaque couple :

4-1/ Le facteur de slectivit .


4-2/ La rsolution Rs.

Exercice 4 : CPG (7,5 points)

Nous tudions une essence sans plomb par chromatographie en phase gazeuse. Le
tableau n 1 ci-dessous donne les conditions chromatographiques employes. La figure
n 1 donne les rsultats.

Tableau 1 : Conditions de ltude de lessence sans plomb.

Phase mobile = Hlium


Phlium = 5,2 bar
u hlium = 20 cm/sec
Quantit injecte = 1 L (essence sans
plomb)
Injecteur diviseur Split = 100/1
Phase stationnaire PDH 150 (apolaire)
Longueur = 150 m
d interne = 0,25 mm
paisseur film = 0,25 mm
T = 35C
Dtecteur = FID

Figure 1 : Chromatogramme de lessence sans plomb, obtenu dans ces conditions.

1/ Quelles proprits sont indispensables un chantillon pour tre tudi par


chromatographie en phase gazeuse ?

2/ Quelles sont les proprits dun gaz utilis comme phase mobile ?

3/ Grce aux informations mentionnes, indiquer le type de colonne utilise, parmi les 3
grandes catgories de colonnes existantes en CPG.

4/ Dterminer le temps mort.

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5/ Le tableau n 2 ci-dessous donne les temps de rtention des composs de lessence tudie.
La figure 2 donne les formules dveloppes de deux des composs spars. Aurait-on p
prvoir lordre dlution de ces composs. Justifier votre rponse.

Tableau 2 : Temps de rtention de composs de lessence sans plomb.

Pic 10 11 12 13 14
Produit 2,4- benzne 2- 2,3- 3-
dimethylpentane methylhexane dimethylpentane methylhexane
tR (min) 48,00 55,17 63,90 64,59 68,28

(a) (b)

Figure 2 : Formules du 2,4-dimethylpentane (a) et du 3-mthylhexane (b).

6/ Calculer le facteur de rtention du benzne.

7/ Sachant que le pic du 2,3-dimthylpentane a une largeur la base du pic de 40 secondes,


valuer le nombre de plateaux thoriques de cette colonne pour ce compos.

8/ Calculer la rsolution du couple 2-methylhexane / 2,3-dimethylpentane sachant que la


largeur le base du pic 2-methylhexane est de 41 secondes. Conclure.

9/ Quel est le principe de fonctionnement du dtecteur utilis, ainsi que ses principales
caractristiques ?

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ANNEXE 1

ANNEXE 2

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ANNEXE 3

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