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Ambiente
Microbiologa Ambiental-358010A_224
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
100411_304
PREINFORME
CODIGO: 83235914
GRUPO: 358010_46
INTRODUCIN
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Rta: El vidrio se fabrica mediante la fusin de arena slice con sales de sosa o potasa a una
temperatura de 1.0000c. El producto en ese estado lquido, se vierten diversos moldes de acuerdo
a los objetos que se requieran producir, debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfra,
quedando como un cuerpo slido, generalmente transparente. Como se sabe, este tipo de cristal es
muy vulnerable a los impactos mecnicos, exposiciones a elevadas temperaturas. Etc, lo que no
resulta apropiado para la fabricacin de la cristalera de laboratorio la cual requiere del empleo de
otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio, cuya aleacin le confiere una alta
resistencia mecnica, trmica y qumica. La cristalera fabricada con estos componentes, se
identifica por estar rotulada con el nombre de Pyrex (pairex)
Rta:
PLASTICO
Los materiales de plstico pueden ser de uso mltiple, los utensilios de plstico de laboratorio son
monmeros orgnicos polmero la rizada. Hay gran variedades de plsticos, van a tener distintas
propiedades fsicas y qumicas.
VENTAJAS
Resistencia a la rotura
Tiene un peso bajo
Sus propiedades fsicas y qumicas, varan notablemente segn su composicin
Ms estabilidad frente a los cidos excepto el cido sulfrico, cido ntrico y perclorato
DESVENTAJAS
2. Describa, ilustre y clasifique los siguientes materiales, indicando el uso que se les da en el
laboratorio de microbiologa (Sea breve, se le sugiere elaborar un cuadro).
Horno Pasteur
4. Ilustre un microscopio ptico de campo claro con los nombres de todas las partes
5. Enliste detalladamente todas las medidas que se requiere tomar en cuenta para el manejo
correcto y cuidados del microscopio compuesto.
Para trasporta el microscopio se debe utilizar siempre las dos manos, sujetndolo por el
brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra
Una vez colocado el microscopio en n su sitio, no debe moverse hasta que finalice la
prctica, cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover l y no el microscopio.
Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
Nunca poner los dedos en lentes del ocular ni del objeto. Si se enuncian dichas lentes se
limpiarn con un pao suave de algodn, sin utilizar ningn disolvente.
No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser sustituidos, en cuyo
caso la operacin debe realizarse lo ms rpidamente posible, para evitar la entrada de
polvo.
Asegurarse de que el portaobjeto est bien seco cuando va a ser colocado sobre la platina
Al enfocar sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el extremo
del objeto choque con la preparacin. Para ello acercaremos el objetivo a la preparacin
mirando lateralmente y luego, mirando ya a travs del ocular, enfocamos alejando el
objetivo.
6. Enliste detalladamente todos los pasos que se requiere seguir para enfocar imgenes en
un microscopio compuesto.
Si se utiliza el objeto de inmersin (100x) colocar sobre la preparacin una gota de aceite
de inmersin y baja el tubo del microscopio hasta que la lente del objetivo toque a la gota,
observa y ajusta cuidadosamente despus de su uso, limpiar el objetivo con un tejido
suave( papel seda.
7. Defina los siguientes trminos en microscopa:
Formula: LR= C / NA
C: Constante de proporcionalidad
NA: Abertura numrica
0,61
PR=
n Sen
0,61: Constantes
: Longitud de onda de la luz usada
n : ndice de refraccin del medio
Sen : seno del ngulo
Poder De Amplificacin: Es la capacidad de un microscopio para aumentar la imagen.
Altura de laiamgen
Aumento Lateral: Altura del objeto
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Microscopio Electrnico De Transmisin (MET cortes muy finos. Una parte de los electrones
son absorbidos o rebotan por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del
objeto en cuestin. Las muestras no deben ser mayores de un par de miles de angstroms (1
angstrom es igual a 0.0000000001 metros) se ha de colocar una placa fotogrfica detrs del
objeto para registrar la imagen aumentada. Cabe de destacar que este tipo de microscopios
pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.
DIFERENCIAS Y VENTAGAS:
Para el estudio de las estructuras internas de las clulas es esencial un microscopio MET.
En el MET se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la funcin de las lentes la
realizan electromagnetos, operndose en todo momento a alto vaco.
Cuando slo se pretende estudiar las estructuras externas de una muestra, no son
necesarios cortes ultra finos, pudindose realizar la observacin directa en MET, despus
de aplicar una tincin negativa. Tambin se puede usar el MEB.
Todos los microscopios electrnicos tienen cmaras incorporadas que permiten fotografiar
las muestras denominndose microfotografas electrnicas.
El microscopio ptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es
un microscopio compuesto, el cual est provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora
de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la
amplificacin de la imagen.
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Rta: Resiembra se le llama al proceso donde se pasa una colonia de alguna bacteria que haya
crecido en algn medio a otra caja de Petri que contenga ya sea lo mismo que el medio en el que
creci anteriormente, esto se hace para continuar su reproduccin con nuevos elementos que le
sirven para su crecimiento, ya que como todo organismo para crecer y multiplicarse requiere de
nutrientes y si estn por mucho tiempo se acaba estos elementos por lo que es necesario hacer
este proceso, sobre todo si requiere su conservacin.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES EQUIPOS
Vidriera Membranas Millipore
Portaobjetos Cuenta colonias
RESULTADOS ESPERADOS
INTRODUCCIN
INTRODUCCION DE LA PRACTICA
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MENTEFACTO
MTODOS DE SIEMBRA
Medios de cultivo
Aislamiento de microorganismos
Recuperacin
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES EQUIPOS
Asa redonda
Gradilla
Mechero
Incubadora
mechero
Vinipel
Marcador de vidrio
REACTIVOA A UTILIZAR
PROCEDIMIENTO
HOMOGENIZAR
MATERIALES
Cajas de Petri con agar PDA
Agujas de diseccin, jeringas de insulina o asa recta.
Hongos de cualquier gnero con crecimiento no mayor a 15 das antes de la
prctica ( en caja de Petri)
PROCEDIMIENTO
TABLA DE DATOS
MEDIOS DE CULTIVO
RESULTADOS
Caldo Nutritivo ESPERADOS
INTRODUCCIN
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MENTEFACTO
TECNICAS DE TINCION
Seque fijacin de
Coloracin simple Agua destilada
color
Cubrir la
Enfriar lamina
suspensin
Observar en el
microscopio
,
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MATERIALES Y METODOS
MATERIALES EQUIPOS
Lminas Alcohol cetona
Laminillas Fucsina bsica o safranina
Agua destilada estril Tinta china
Asas bacteriolgicas redonda y asa recta Microscopio ptico
Microscopio
Mechero Colonias aisladas de bacterias
para observacin de bacterias
Azul de metileno Guantes de ltex
Cristal violeta
Lugol
REACTIVOA A UTILIZAR
Alcohol cetona
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PROCEDIMIENTO
Coloracin simple
En una lmina portaobjetos limpia, colocar una gota del agua destilada estril
(trabajo con muestra slida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra
liquida) sobre la misma y con ayuda del asa redonda estril extender la gota de
suspensin a un rea no superior a dos centmetros cuadrados.
Dejar que la preparacin se seque al aire. Fijar con calor, pasando tres veces
seguidas a travs de la llama del mechero
Dejar enfriar la lmina. Lo anterior se conoce como la realizacin de un frotis y se
hace para coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las
coloraciones respectivas.
Colocar la preparacin sobre una rejilla encima del vertedero.
Cubrir la suspensin con algn colorante dado por el profesor, as:
-Cristal violeta: 1 minuto
-Azul de metileno: 5 minutos
-Fucsina: 1 minuto
Terminado el tiempo de coloracin segn el colorante empleado, eliminar el
colorante lavando con agua suavemente.
Dejar secar y colocar la preparacin en la platina del microscopio y observar con el
objetivo de menor aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X,
Coloracin compuesta
Realizar un frotis de la muestra seleccionada
Colocar en la rejilla para coloracin y cubrir el frotis con cristal violeta esperando
que transcurra 1 minuto. Lavar con agua el colorante.
El segundo colorante es el Lugol, el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis
Realizar la decoloracin con la mezcla alcohol-acetona, por 25 segundos.
Lavar Inmediatamente con agua.
Finalmente adicionar el colorante de contraste, fucsina o safranina, por 30
segundos. Lavar con agua.
Escurrir el exceso de agua, dejar secar y montar al microscopio para hacer las
observaciones respectivas.
Resultados esperados
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MENTEFACTO
Colocar en el centro de la
lmina portaobjeto una gota
de azul de lactofenol.
OBSERVACION
MICROSCOPICA
PROCEDIMIENTO
Colocar en el centro de la lmina portaobjeto una gota de azul de lactofenol, luego tomar
con el asa micolgica previamente estril parte del hongo y resuspenderlo en la gota del
colorante.
Colocar luego una laminilla encima de esta preparacin y esperar 3 minutos. Finalizado
este tiempo montar al microscopio y observar en 10X y 40X.
Hifa septada
Hifa Cenoctica
Artroconidios
Conidios
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MENTEFACTO
CRECIMIENTO BACTERIANO
Suspender una colonia del Dividir la base de las Dividir la base de las
microorganismo en el caldo cajas en dos cuadrantes cajas en dos cuadrantes
Dividir la base de las
nutritivo y dejarlo por media con el marcador de vidrio con el marcador de
cajas en dos
hora. y con el asa redonda vidrio y con el asa
cuadrantes con el
redonda
marcador de vidrio y
con el asa redonda
Sembrar por estras en
Luego tomar 0.1 mL del Sembrar por estras en un un cuadrante el
medio y sembrarlo sobre el cuadrante el microorganismo microorganismo Gram-
medio slido del agar Gram-negativo y en el otro negativo y en el otro el
el Gram positiv. Gram positiv.
Sembrar por estras en
un cuadrante el
Llevar las dos cajas de Petri microorganismo
Seguidamente tapar la
e incubarlas a 37oC Realizar este procedimiento Gram-negativo y en el
mitad de la caja con papel
con todos los medios de otro el Gram positiv.
de aluminio y coloca
diferentes pH. sobre la otra parte de la
caja la luz ultravioleta por
5 o 10 minutos
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MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES EQUIPOS
Pipetas estriles de 1 y 2 mL Estufa
Vaso de precipitado de 500 mL Incubadora
CULTIVOS
Cultivo de un microorganismo Gram - Cultivo de un microorganismo Gram -
positivo negativo.
Caldo nutritivo Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri
Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri
con diferentes concentraciones de NaCl. con diferentes pHs.
PROCEDIMIENTO
ACCION DEL PH: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de vidrio y
con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el
otro el Gram positiv.
ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el
marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo
Gram-negativo y en el otro el Gram positiv.
ACCIN DE LA LUZ ULTRAVIOLETA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el
marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo
Gram-negativo y en el otro el Gram positiv.
Seguidamente tapar la mitad de la caja con papel de aluminio y colocar sobre la otra parte de la
caja la luz ultravioleta por 5 y/o 10 minutos, tapar la caja y llevar a incubar.
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INTRODUCCIN
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Se deben contar las cajas cuyo nmero de colonias est comprendido entre 30 y 300 UFC.
MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES EQUIPOS
PROCEDIMIENTO
Lectura: se deben contar las cajas cuyo nmero de colonias est comprendido entre 30 y
300 UFC. Es conveniente ir marcando las colonias para evitar volver a contarlas. Hallar la
media.
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APLICACIONES DE MICROBIOLOGIA
mbito de la ingeniera
controlambiental y la
de calidad enindustria .
abonos orgnicos y suelos por nmero ms probabl
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MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES EQUIPOS
REACTIVOS A UTILIZAR
PROCEDIMIENTO
MATERIALES
Tubos tapa rosca para diluciones con 9 ml de solucin salina al 0.85% o agua peptonada al
0.1%
Rastrillos de vidrio
Pipetas de vidrio de 1 ml
Suelo procedente del algn sitio de derrame de petrleo o que estp impactado por
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Lmpara de luz UV
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PROCEDIMIENTO
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inocular con una asada de cultivo de E. coli,
agitar muy bien.
Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtracin y con la ayuda de la
jeringa realizar el vaco para permitir el paso del agua de un lado al otro.
Con unas pinzas estriles retirar la membrana y colocarla sobre el agar cromocult, la parte
de la cuadrcula debe ir mirando hacia arriba.
Incubar por 24 horas a 37 c y observar el nmero de colonias con las caractersticas
tpicas de E. coli y coliformes totales (consultar la coloracin en este medio, se encuentra
por internet)
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