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Los efectos bactericidas del Allium sativum (Ajo) y Ciproflox

(Ciprofloxacino) en colonias de Escherichia coli

Biologa Diego Alanis Lozano

Monografa 507766

Convocatoria 2017

San Pedro Garza Garca, Nuevo Len, 16 de octubre de 2016

Resumen
El ajo es una hierba que se ha usado como hierba medicinal por ms de 5000 aos segn Wu
(2014). Es una planta que se ha demostrado que tiene poder bactericida, se ha descrito en ms de
4400 publicaciones cientficas, incluso el mismo Louis Pasteur la describi junto con sus
propiedades mdicas. Pero lo que se busca aqu es ver qu poder bactericida tiene y ver qu
propsito se le puede designar a dicha propiedad. El objetivo de esta monografa es comparar
contra un antibitico de patente (el ciprofloxacino) y se buscar inhibir crecimiento de
Escherichia Coli dentro de un agar nutritivo.

El ndice indicar el orden y el acomodo (por pginas) de las partes de la monografa.


Dentro de ellas comprenden las siguientes: la introduccin (donde se describir la razn por la
cual se decidi estudiar dicho problema de investigacin, el primer captulo (que contendr de
nuevo el problema de investigacin para darle seguimiento a dicho y el marco terico que
complemente y d mayor entendimiento al problema de investigacin), el segundo captulo (que
contiene el anlisis y la parte experimental del reporte), las conclusiones acerca del reporte de
una manera global y por ltimo bibliografa y los anexos.

Las conclusiones que se encontraron fueron que hubo una diferencia significativa entre el
ajo y el Ciproflox siendo el ajo un mayor inhibidor (a esas concentraciones de cada
antibitico). Esto puede aplicarse de manera prctica para que el ajo sea usado como antibitico
tpico (dado que se ha demostrado su eficacia bactericida) y como auxiliar en la prevencin de
enfermedades gastrointestinales al ingerir ajo.

Nmero de palabras:264

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ndice

Introduccin

Captulo I

Marco Terico pg.5

Captulo II

Pregunta de Investigacin pg.7

Hiptesis pg.7

Experimentos Preliminares pg.8

Experimento Final pg.9

Materiales pg.9

Metodologa pg.10

Datos Brutos pg.13

Anlisis de datos pg. 15

Conclusiones pg.16

Bibliografa pg.17

3
Introduccin

El estudio que se llevar a cabo surgi de un cuestionamiento acerca de la medicina tradicional y

si esta es efectiva. Para contestar a esa pregunta se desarroll dicho experimento que buscar

comparar una planta ampliamente usada en la medicina tradicional el Allium sativum

(generalmente conocido como ajo). Adems de ser una planta utilizada en la medicina tradicional

es una que ha sido ampliamente investigada por muchos cientficos (como el mismo Louis

Pasteur) y se ha descrito dicha planta y sus propiedades en ms de 4400 artculos cientficos

(Johanna Fink-Gremmels et al. 2014). El ajo es tambin una planta que se usa como condimento

e ingrediente en la mayora de la gastronoma alrededor del mundo desde hace ms de 5000 aos

(Amgase 2006; Borlinghaus et al. 2014). El Allium sativum se ha usado tambin como

conservativos natural en carne animal, esto es porque tiene propiedades antioxidantes lo que

incrementa la vida de los productos animales debido a su efecto bactericida contra patgenos

zoonoticos producidos por bacteria como las siguientes (pero no limitado a): Staphylococci,

Salmonella y Escherichia Coli. Dicho lo anterior se pretende encontrar usos prcticos de las

propiedades bactericidas del ajo y compararlo directamente contra el antibitico de patente

Ciproflox (ingrediente activo: ciprofloxacino) y ver la eficacia de ambos.

Dado que el ciprofloxacino es un antibitico de espectro medio, dado que se usa para

contrarrestar enfermedades como el ntrax y varias enfermedades causadas por bacterias.

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Captulo I

Marco Terico

El Allium sativum es una planta medicinal que ha sido utilizada extensamente para remediar

malestares y enfermedades. El ajo comnmente conocido, ha sido tambin foco de estudio

para muchos cientficos a travs de los aos (desde el mismo Louis Pasteur, hasta la modernidad)

(Johanna Fink-Gremmels et al. 2014). Se ha utilizado ampliamente en el mbito culinario debido

a sus propiedades de preservacin en alimentos perecederos, especficamente la carne y sus

derivados (Aguirrezbal et al. 2000; De Moura Olivera et al. 2005; Cao et al. 2013). Al tener, el

ajo, propiedades antioxidantes se retrasa la descomposicin de la carne, esto tambin se debe al

poder bactericida del ajo.

El poder bactericida y sus propiedades antioxidantes se deben a la alicina, un compuesto

que no se encuentra en el ajo fresco. Este se obtiene cuando se masera el dicho; la aliina forma la

alicina cuando esto sucede (este proceso tambin ocurre cuando se mastica dicho alimento)

(Ankri and Mirelman, 1999). La CMI (Concentracin mnima inhibitoria) del ajo segn

Mohsenipour es de 0.625 mg/ml para Escherichia coli.1

El Ciproflox es un antibitico de patente que se utiliza para curar varias enfermedades, entre

ellas el ntrax, infecciones urinarias y enfermedades gastrointestinales, pues en general mata

bacterias que causen infecciones (Medline Plus, 2016). El ingrediente activo es ciprofloxacino,

es parte de las quinolonas (antimicrobianos sintticos), su espectro se centra en bacterias gram

negativas tal como la Escherichia coli (Navarro, F. et al. N.d.).

11 En este caso no se controlar la concentracin del ajo, pero s el peso de este.

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La Escherichia coli, de acuerdo al Centro para Control y Prevencin de Enfermedades

(CDC, 2015, por sus siglas en ingls), es una bacteria gram negativa que infecta el tracto

digestivo de los seres humanos al producir una toxina llamada shiga (es producida slo por

ciertas variantes de la bacteria a los que se les llama STEC por sus siglas en ingls shiga toxin-

producing E. coli) que causa malestar estomacal. Los principales sntomas son calambres en el

abdomen, diarrea y vmito.

La bacteria de la E. coli (especficamente las cepas que son clasificadas como STEC) es

sumamente peligrosa puesto que la gente de cualquier edad se puede enfermar al entrar en

contacto con heces humanas o animales o incluso ingiriendo algn alimento/agua que est

contaminada por las anteriores y no haya sido tratada propiamente. Esta bacteria tambin puede

causar el sndrome urmico hemoltico que tiene como sntomas: orinar con menos frecuencia,

un sentimiento de fatiga extremo, dolor estomacal diarrea y un tono plido se ve presente en

cachetes y prpados de los infectados de acuerdo con el Centro para Control y Prevencin de

Enfermedades (CDC, 2015). La gente que padezca dicha enfermedad debe ser hospitalizada de

inmediato para recibir tratamiento, de lo contrario pudieran sufrir de parlisis renal que puede

traer complicaciones ms graves e incluso producir la muerte. (CDC, 2015).

Cada ao ms de 48 millones de personas, aproximadamente 1 de cada 6 personas en los

Estados Unidos, se enferman por ingerir comida contaminada (Center for Disease Control

and Prevention,2014)

Dado lo anterior, se busca obtener resultados favorables por parte del Ajo en donde este inhiba el

crecimiento bacteriano de las cepas de Escherichia coli.

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Captulo II

Objetivo

El objetivo de este proyecto es ver las aplicaciones prcticas del Ajo y sus propiedades mdicas,

en este caso su poder bactericida y ver de qu forma puede si no puede resolver la problemtica,

que sea un auxiliar en la resolucin de esta.

Pregunta de Investigacin

Habr diferencia significativa entre el dimetro del halo de inhibicin producido por el Allium

Sativum (Ajo) Ciproflox (Ciprofloxacino) al sembrarlos en colonias de Escherichia coli?

Variables

Variables controladas: Temperatura, tiempo de incubacin medido con un cronmetro digital (+1

minuto), material nutritivo (agar Mueller Hinton), tipo de papel para el antibiograma (papel filtro

watman #2)

Variable Dependiente: Medida del halo de inhibicin del antibiograma en mm (+1 mm) medido

con una regla vernier mm (+1 mm)

Variable Independiente: Tipo de antibitico (ciprofloxacino o extracto de Allium sativum)

Hiptesis

Las predicciones para este experimento se plantearn de la siguiente manera. Hay dos hiptesis,

la hiptesis nula y la hiptesis alternativa que establecen lo siguiente:

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Ho: No hay diferencia significativa entre el dimetro del halo de inhibicin producido por el

Allium Sativum (Ajo) Ciproflox (Ciprofloxacino) al sembrarlos en colonias de Escherichia coli.

H1: S hay diferencia significativa entre el dimetro del halo de inhibicin producido por el

Allium Sativum (Ajo) Ciproflox (Ciprofloxacino) al sembrarlos en colonias de Escherichia coli.

En este experimento se pretende descubrir basado en los resultados que se obtengan de la

experimentacin, si habr o no diferencia significativa entre los dos antibiticos y como estos

vayan a inhibir el crecimiento de la Escherichia coli.

Experimentos Preliminares

Para el experimento preliminar se hizo un sembrado de cepas de Escherichia coli en agares

nutritivos Mueller Hinton. A estos agares se les coloc un antibiograma impregnado de extracto

de jengibre. El extracto estaba a diferentes concentraciones tomando una solucin madre como el

100%, dicha solucin madre contena 2 partes de agua y 1 parte de jengibre orgnico (300 ml de

agua destilada para 150 g de jengibre). Las concentraciones se hicieron con el propsito de ver

cul era la concentracin ptima para inhibir crecimiento bacteriano por parte del jengibre, dadas

sus propiedades (similares al ajo) de ser bactericida y antioxidante. Los resultados no fueron los

esperados, puesto que no hubo inhibicin alguna por parte de ninguna de las concentraciones

(vase Anexo 1), ni si quiera la concentracin del 100% siendo esta la ms potente. Se procedi a

buscar diferentes antibiticos para dicho experimento, y se utilizar en este caso el Ajo, pero para

tener un panorama ms claro se comparar con un antibitico de patente (el Ciproflox).

Para buscar la concentracin apropiada que se usara del Ciproflox, se hizo un preliminar

usando diferentes concentraciones de este. Por el otro lado, del ajo se tomara el extracto puro y

se usara como inhibidor. Los preliminares que se hicieron con el Ciproflox fueron los

8
siguientes: ciprofloxacino al 100% (tomando la botella de antibitico como la solucin madre),

es decir 2 mg/ml. Y la otra concentracin se usara una al 50%, es decir 1mg/ml. Los resultados

de dichas concentraciones 100% y 50% (2mg/ml y 1mg/ml respectivamente) fueron diferentes a

los esperado, pues estos inhibieron casi enteramente el crecimiento en el agar entero. Eso no es

lo que se busca para el experimento dado que la diferencia entre ambos en cuanto a la inhibicin

de Escherichia Coli. Por lo tanto, se diluir an ms el antibitico para la metodologa del

experimento.

Experimento Final

Para el experimento final se decidi usar el ajo (por las propiedades bactericida que le atribuyen

la alicina, de ser bactericida), este ser comparado con el Ciproflox (el cual se diluir para

hacer una comparacin similar y ms a la par). En el siguiente apartado se empiezan

describiendo el material utilizado, despus la metodologa que se sigui y por ltimo la

recoleccin de datos y el anlisis de estos.

Material

Guantes de ltex Cloro

Cubre boca Algodn y Gasa Estril

Solucin de Etanol al 70% Embudo de vidrio

30 dientes de Ajo Pipetas graduadas 5 ml (+0.1mm)

Ciprofloxacino 2 g/ml Peridico

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Autoclave Cloro

10 agares Mueller Hinton Mechero con manguera de ltex

Balanza Electrnica (marca Ohaus) Asa Bacteriolgica

Estufa de Incubacin Pinzas metlicas

Papel Filtro Cerillos

Discos para antibiograma (Hechos a Regla Vernier (+1 mm)

base del papel filtro)


Plumn indeleble

Metodologa

Para desinfectar el rea de trabajo

1. Lavar las manos vigorosamente con jabn antibacterial y colocar guantes de ltex

inmediatamente despus de secar las manos, colocarse el cubre boca y asegurarse de que

la bata de laboratorio que se est portando est completamente limpia (aplica para el

alumno y cualquier asesor que se encuentre cerca del rea de trabajo)

2. Rociar solucin de etanol al 70% al rea de trabajo (campana de extraccin), con una

botella con atomizador, y secar el rea de trabajo con papel limpio.

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3. Desinfectar2 completamente el mortero y pistilo que se usar (dejarse remojando un da

previo al experimento).

4. Esterilizar3 usando la autoclave todo el material de cristalera y de metal que se vaya a

utilizar para la experimentacin (esto comprende las pipetas de vidrio, las pinzas, la caja

de Petri conteniendo los discos para antibiograma previamente cortados)

*De aqu en adelante todos los procesos sern realizados dentro de la campana de

extraccin que ha sido desinfectada, por lo que a continuacin se mete todo el material

requerido a la campana.

Crear el antibitico de Allium sativum (extracto de ajo)

1. Tomar 5 dientes de ajo y pesarlos en una balanza digital (en el caso de dicha

experimentacin los ajos usados pesaron 27.7g).

2. Colocar los 5 dientes de ajo (previamente pelados) dentro del mortero.

3. Moler con el pistilo y mortero hasta conseguir que salga lquido amarillo de los dientes

de ajo (el extracto de ajo).

4. Una vez obtenido el extracto mantenerlo dentro del ambiente desinfectado previamente

(la campana de extraccin)

Obtener la concentracin apropiada de Ciproflox4

22 Segn la OMS (Organizacin Mundial de la Salud), desinfectar comprende el uso


de sustancias qumicas para eliminar microorganismos no deseados de alguna
superficie o material, este no necesariamente incluye esporas

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11
Para diluir el antibitico se tomar 0.5 ml de ciprofloxacino y se diluir en 999.5 ml de

agua estril.

1. Tomar una jeringa estril, con esta se extrae 0.5 ml de agua del envase de 1000ml de agua

estril (esta agua se deshecha).


2. Tomar 0.5 ml de ciprofloxacino, con la jeringa estril, del bote de la solucin de dicho

antibitico.
3. Colocar los 0.5 ml de ciprofloxacino en el bote con el agua estril restante, y agitar

vigorosamente.

Sembrado de Escherichia Coli en Agares para la experimentacin

1. Tomar los agares y enumerarlos del 1 al 6, previamente dividirlos en 4 con un marcador

indeleble en la parte posterior de este para delimitar las distintas repeticiones del

antibiograma dentro de un mismo agar (como se muestra en la siguiente imagen).

44 La concentracin Ciproflox del es muy alta, como se menciona en la seccin de


experimentos previos. Por lo que se acudi a la teora, segn la Sociedad Francesa de
Microbiologa (2015) la cantidad recomendada es 5 mg/L. Pero esta cantidad normalmente hay
halos de inhibicin de 30-40mm. Puesto que se est comparando con un antibitico natural, la
cantidad a usarse en el experimento ser de 2 g/ml (el equivalente a 2 mg/L).

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Previamente hay que dividir y marcar los agares por antibitico para no confundirlos en

la posteridad (ntese que la imagen muestra la leyenda A6 lo cual significa que es del

antibitico del Allium sativum y es la 6a caja de dicho grupo).

a. Encender el mechero de bunsen a que tenga una flama controlable y moderada

b. Flamear el asa bacteriolgica para matar cualquier forma de vida que pudiera haber en

esta.

c. Tomar el hisopo estril y sembrar en el agar (del caldo nutritivo en el cual ya crecieron

bacterias de la misma cepa de E. coli al agar) la bacteria a travs del mtodo de estriado (.

d. Colocar los discos de papel (antibiograma) en cada divisin de los agares (24 discos de

antibiograma por antibitico; Allium sativum y Ciprofloxacino)

e. Aplicar 1 gota del antibitico de ajo con un gotero sobre cada disco de papel.

f. Aplicar 1 gota del antibitico Ciprofloxacino con un gotero sobre cada disco de papel.

g. Hacer esto en los 6 agares, 4 veces en cada agar: 1 para cada disco antibiograma.

h. Posterior al sembrado de los 12 agares (6 de cada antibitico), colocar en la estufa de

incubacin y esperar por 24 horas.

Medir el halo de inhibicin de los antibiogramas

1. Despus de las 24 horas, sacar los agares de la estufa de incubacin e identificar por

antibitico (ajo y ciprofloxacino)

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2. Tomar la regla vernier y medir los halos de inhibicin de cada a antibiograma (cada

repeticin, 3 por agar).

3. Registrar los datos en una tabla (datos brutos).

Apuntar cualquier observacin adicional que se tenga

Recoleccin de Datos Brutos

Despus de haber sembrado las bacterias en sus respectivos agares nutritivos, despus de

haber puesto los antibiogramas con su respectivo antibitico, y finalmente despus de

haber dejado incubar por 24 horas en la estufa de incubacin a 37 Celsius

(aproximadamente la temperatura corporal del Homo Sapiens Sapiens). Despus de llevar

a cabo todos los pasos previos se saca las cajas de Petri (con el agar nutritivo) y se

procede a medir los halos de inhibicin con una regla vernier, esta medir el dimetro de

dicho halo. Los datos se presentan en la siguiente tabla.

Tabla 1.- Registro de Datos Brutos- Medicin del halo de inhibicin en cepas de E. Coli

con Ajo y Ciprofloxacino como antibiticos

Medida del halo de inhibicin en mm medido


Nmero de Muestra
con una regla vernier (+1 mm)
Ajo Ciprofloxacino
1 13 9
2 13 9
3 17 8
4 14 6
5 20 7
6 18 8

14
7 19 10
8 18 10
9 14 8
10 21 9
11 12 7
12 15 6
13 14 13
14 15 12
15 20 9
16 18 13
17 13 9
18 18 6
19 17 8
20 19 10
21 18 6
22 18 6
23 19 6
24 16 6
Media 1.663 0.848
Desviacin Estndar 0.271 0.203

Comentario de tabla 1:

Los datos de la tabla presentan gran diferencia entre la columna de ajo y la de

ciprofloxacino. La muestra de ciprofloxacino, con el dimetro del halo de inhibicin ms

baja fue de 6mm (hubo 7 muestras con este valor para dicho antibitico). Mientras que

pare el extracto de ajo hubo una mayor inhibicin, el valor de la muestra ms bajo fue de

12 mm (el doble de la muestra con la medida menor en el ciprofloxacino). Tambin es

importante mencionar que el dimetro del antibiograma en si es de 6mm, por lo que las

muestras que tuvieron 6 mm de halo, inhibieron de manera limitada el crecimiento de la

Escherichia Coli

Anlisis de Datos

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Medias

Ajo
Dimetro del halo de inhibicin medido en mm con regla vernier (+1mm)
Ciprofloxacino

Ingrediente Activo

Grfica

1.- Medias del halo de inhibicin en cepas de E. Coli con Ajo y Ciprofloxacino como

antibiticos

Comentario Grafica 1: las medias del ajo y del ciprofloxacino son 1.663 y 0.848

respectivamente, las barras de error personalizadas (con los valores de la desviacin

estndar) no se solapan.

Dado que las barras de error no se solapan no se procede a hacer prueba t puesto que s

hay diferencia significativa entre los dos antibiticos. La prueba T no es pertinente por lo

anterior, pues no hay una desviacin estndar. Dicho esto, se rechaza la hiptesis nula,

por ende; s hay diferencia significativa entre el dimetro del halo de inhibicin

producido por el Allium Sativum (Ajo) Ciproflox (Ciprofloxacino) al sembrarlos en

colonias de Escherichia coli.

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Conclusiones

El experimento nos dice que no se puede hacer una prueba t. No se solapan las barras de

error en la grfica de medias, lo que significa que no hay una distribucin estndar entre

los valores obtenidos, esto significa que la realizacin de la prueba t no es pertinente. Por

ende, se ha rechazado la hiptesis nula, esto quiere decir que s hay diferencia

significativa entre el ajo y el ciprofloxacino. Lo anterior se pudiera deber a la dilucin del

ciprofloxacino a 2 g/ml, esta concentracin no es la tpica para hacer antibiogramas

segn la sociedad francesa de microbiologa 5, pero se us as porque se consider que 5

g/ml era muy elevada si se estara comparando con el ajo. Esta reduccin en

concentracin (la que es recomendada) podra ser la causa de que se haya tenido halos de

inhibicin ms grandes para ajo que para cirpofloxacino.

Estos resultados, nos dicen que el Ajo puede ser una buena alternativa (a niveles

menores) que el antibitico que se receta cuando se enferma uno y va con el doctor

(especficamente contra endobacterias). El extracto de Allium sativum puede tener un uso

prctico como antibitico tpico en cortadas, raspaduras o incluso para la boca. Ha

demostrado poder inhibir efectivamente la Escherichia coli. Tambin pudiera ser una

buena manera de prevencin la ingesta de dicha planta puesto que hay endobacterias que

llegan a ser patgenas para el cuerpo humano y termina habiendo una infeccin. Es por

esto que este experimento tiene valor, validez y una aplicacin en el mundo real.

55 La cantidad recomendada es 5 g/ml para tener un halo de inhibicin de entre 30-40mm.

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Bibliografa

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