D 946

DESARROLLO DE LA TCNICA DE CROMATOGRAFA DE GASES (GC-FID)
PARA LA DETERMINACIN DE CONTAMINANTES EMERGENTES TIPO

PRODUCTOS FARMACUTICOS
SARA LINETH DUQUE ZAMBRANO
LEIDY JOHANA ARANGO RAMIREZ
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PEREIRA
2015
1
Trabajo de grado presentado como requisito para optar al ttulo de

Tecnlogo Qumico
Director:
Juan Pablo Arrubla Vlez
Qumico, M. Sc
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PEREIRA
2015
2
NOTA DE ACEPTACIN DEL TRABAJO DE GRADO

Presentado por:
Los suscritos director y jurado del presente trabajo de grado, una vez
revisada la versin escrita y presenciado la sustentacin oral, decidimos
otorgar:
La nota de: ____________________________________________
Con la connotacin: ____________________________________________
Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:
Director:
Juan Pablo Arrubla Vlez _______________________________________
Jurado:
Firma _______________________________________
Jurado:
Firma _______________________________________
3
AGRADECIMIENTOS
Queremos agradecer a todas aquellas personas que con su ayuda han colaborado
en la realizacin de este proyecto, en especial a nuestras familias, por su apoyo
incondicional, por ser quienes nos motivan a seguir adelante con nuestros sueos.
Especial agradecimiento a nuestro director Juan Pablo Arrubla, por la orientacin,

seguimiento y la supervisin de este proyecto, pero sobre todo por la motivacin y
el apoyo recibido durante todo este proceso.
A nuestros profesores y a Lina Giraldo Vasquez por la dedicacin, tiempo y por

brindarnos sus conocimientos.
Adems agradecemos a la Vicerrectora de Investigaciones, innovacin y

extensin por la financiacin y agradecemos a todos aquellos quienes hicieron
posible el desarrollo, cumplimiento y culminacin de este trabajo.
4
TABLA DE CONTENIDO
CONTENIDO TABLAS .................................................................................................................... 7

CONTENIDO DE ECUACIONES ................................................................................................... 7
CONTENIDO DE GRAFICOS ........................................................................................................ 8
CONTENIDO DE IMAGENES ........................................................................................................ 8
CONTENIDO DE FIGURAS ........................................................................................................... 8
1. INTRODUCCIN ...................................................................................................................... 9
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN .............................................. 11
3. OBJETIVOS ............................................................................................................................ 13
3.1. OBJETIVO GENERAL ................................................................................................... 13
3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................................ 13
4. MARCO TERICO ................................................................................................................. 14
4.1. CONTAMINANTES EMERGENTES ........................................................................... 14
4.2. FRMACOS .................................................................................................................... 15
4.2.1. Diclofenaco .............................................................................................................. 16
4.2.2. Cafena ..................................................................................................................... 18
4.2.3. Ibuprofeno ................................................................................................................ 18
4.2.4. Carbamazepina ....................................................................................................... 18
4.2.5. Comportamiento Ambiental De Los Frmacos .................................................. 19
4.3. FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFA ........................................................... 22
4.4. CROMATOGRAFA DE GASES .................................................................................. 23
4.4.1. Cromatografa de gases de alta velocidad ......................................................... 24
4.4.2. Sistemas de cromatografa de gases miniaturizados ....................................... 24
4.4.3. Sistema de gas portador ....................................................................................... 25
4.4.4. Puerto De Inyeccin ............................................................................................... 26
4.4.5. Columna Cromatogrfica ...................................................................................... 27
4.4.6. Fase Estacionaria Lquida ..................................................................................... 28
4.4.7. Detectores................................................................................................................ 29
4.5. EXTRACCIN EN FASE SOLIDA (SPE) ................................................................... 37
4.6. EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO (LLE)................................................................... 40
4.7. MICROEXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPME) .................................................. 40
5
4.8. EXTRACCIN POR SORCIN BARRA MAGNTICA AGITADORA (SBSE) ... 41
4.9. ESTANDARIZACIN ..................................................................................................... 42
4.9.1. Curva De Calibracin ............................................................................................. 42
4.9.2. Registro De Datos O Sistema De Datos ............................................................. 43
4.9.3. Parmetro De Calidad ........................................................................................... 43
4.9.4. Exactitud .................................................................................................................. 43
4.9.5. Precisin .................................................................................................................. 44
4.9.6. Lmite De Deteccin Y Selectividad..................................................................... 44
4.9.7. Lmite De Deteccin Y Lmite De Cuantificacin ............................................... 45
4.9.8. Linealidad Y Rango ................................................................................................ 47
4.9.9. Sensibilidad ............................................................................................................. 48
4.9.10. Porcentaje De Recuperacin (% REC) ........................................................... 48
4.9.11. Repetitividad ........................................................................................................ 49
4.9.12. Reproducibilidad ................................................................................................. 49
4.10. NORMATIVIDAD GENERAL .................................................................................... 50
5. METODOLOGIA ..................................................................................................................... 52
5.1. COMPRA DE ESTNDARES Y REACTIVOS ......................................................... 52
5.1.1. Seleccin Y Compra De Estndares Disponibles ............................................. 52
5.1.2. Seleccin y Compra de Reactivos Y Estndares .............................................. 52
5.1.3. Compra y Prstamo de Equipos y Materiales .................................................... 52
5.2. DESARROLLO DE LAS CURVAS DE CALIBRACIN ............................................ 53
5.3. DESARROLLO DE LA TCNICA DE EXTRACCIN EN FASE SOLIDA ............ 55
5.4. ANLISIS DE MUESTRAS REALES .......................................................................... 57
5.4.1. Contaminacin Con Las Muestras Reales ........................................................ 57
5.5. CARACTERISTICAS DEL CROMATGRAFO DE GASES ................................... 58
5.5.1. Gas De Portador ..................................................................................................... 58
5.5.2. Mtodo Cromatogrfico ......................................................................................... 60
5.5.3. Columna cromatografa ......................................................................................... 60
5.5.4. Calibracin ............................................................................................................... 60
5.5.5. Control de calidad ................................................................................................... 61
6. RESULTADOS Y DISCUSIN ............................................................................................. 62
7. TRATAMIENTO ESTADSTICO .......................................................................................... 72
6
8. CONCLUSIONES ................................................................................................................... 73
9. RECOMENDACIONES.......................................................................................................... 74
10. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................... 75
11. ANEXO ................................................................................................................................. 81
CONTENIDO TABLAS
Tabla 1. Clasificacin de la toxicidad en el ambiente acutico. ............................. 16

Tabla 2. Frmacos y caractersticas ...................................................................... 17
Tabla 3. Tiempo de retencin analitos .................................................................. 62
Tabla 4. Datos de analitos a 5 ppm ....................................................................... 63
Tabla 5. Datos de analitos a 10 ppm ..................................................................... 63
Tabla 8. Datos de analitos a 46,6 ppm .................................................................. 65
Tabla 9. Datos de analitos a 53,3 ppm .................................................................. 66
Tabla 10. Curva de calibracin del ibuprofeno ...................................................... 66
Tabla 11. Curva de calibracin de la cafena ........................................................ 67
Tabla 12. Curva de calibracin del Carbamazepina .............................................. 68
Tabla 13. Curva de calibracin del diclofenaco ..................................................... 68
Tabla 14. Cromatograma muestra real .................................................................. 69
Tabla 15. Rangos para curva de calibracin ......................................................... 70
Tabla 16. Concentracin y % de recuperacin de analitos ................................... 70
Tabla 17. Desviaciones estndar .......................................................................... 72
Tabla 18. Resultados estadisticos ......................................................................... 72
CONTENIDO DE ECUACIONES
Ecuacin 1. Coeficiente de distribucin ................................................................. 23

Ecuacin 2. Cantidad de muestra presente en material desconocido ................... 43
Ecuacin 3. Limite de deteccin ............................................................................ 45
Ecuacin 4.Porcentaje de recuperacin ................................................................ 49
7
CONTENIDO DE GRAFICOS
Grafico 1. Resultados de los porcentajes de recuperacin de la contaminacin... 71
CONTENIDO DE IMAGENES
Imagen 1. Estndares analticos y soluciones madre ........................................... 55

Imagen 2. Matraz con contaminacin de muestra real .......................................... 55
Imagen 3. Filtracin al vaco.................................................................................. 56
Imagen 4. Acondicionamiento del Cartucho para la SPE ..................................... 56
Imagen 5. Colector SPE de 12 puestos ................................................................ 57
Imagen 6. Filtracin de la muestra antes de inyeccin .......................................... 58
Imagen 7. Equipo de cromatografa ...................................................................... 60
Imagen 8. Curva de calibracin del diclofenaco .................................................... 68
CONTENIDO DE FIGURAS
Figura 3. Esquema de la secuencia de procesos conocida como LADME ........... 19

Figura 1. Representacin esquemtica de un cromatgrafo de gases ................. 27
Figura 2. Diagrama de proceso SPE ..................................................................... 38
Figura 5. Mtodo cromatogrfico de gases ........................................................... 54
Figura 6. Mtodo SPE para extraccin de los frmacos y clean up ...................... 59
Figura 7. Cromatograma del Blanco ...................................................................... 62
Figura 8. Cromatograma de analitos a 5 ppm ....................................................... 63
Figura 9. Cromatograma de analitos a 10 ppm ..................................................... 63
Figura 10. Cromatograma de analitos a 20 ppm ................................................... 64
Figura 11. Cromatograma de analitos a 30 ppm ................................................... 64
Figura 12. Cromatograma de analitos a 46,6 ppm ................................................ 65
Figura 13. Cromatograma de analitos a 53,3 ppm ................................................ 65
Figura 14. Curva de calibracin del ibuprofeno ..................................................... 66
Figura 15. Curva de calibracin de la cafena ....................................................... 67
Figura 16. Curva de calibracin del Carbamazepina ............................................. 67
Figura 17. Cromatogramamuestra real ................................................................. 69
8
1. INTRODUCCIN
Algunos productos farmacuticos y de higiene personal estn siendo considerados

como contaminantes emergentes debido a su liberacin continua en el medio
ambiente acutico, su persistencia y el aumento de evidencias de los efectos
ecotoxicolgicos (Cunningham et al., 2006). Una de las caractersticas de este
grupo de contaminantes es que no necesitan ser persistentes en el medio
ambiente para causar efectos negativos, ya que si bien existen sistemas que los
remueven o bien se transforman fcilmente en subcompuestos, su continuo
consumo y, por ende, su consiguiente excrecin, deriva en su continua
introduccin y constante presencia en el medio ambiente (Barcel, 2003).
Las actividades antrpicas en ecosistemas naturales se generan a travs de los

vertimientos de aguas en el medio ambiente gracias a las actividades de cuidado
de salud, de lo que resulta interesante abordar el tema de los contaminantes
emergentes respecto a frmacos dado que el uso y venta de estos no es medido
ni necesariamente adquirido a travs de recetas mdicas incrementando la
liberacin y acumulacin en el ambiente. Adems en muchos casos, las
consecuencias de su presencia en el medio ambiente no estn an claras, pero en
otros el riesgo parece evidente, y alarmante. As, por ejemplo, el diclofenaco,
aparte de afectar a los riones en los mamferos, se ha asociado (como
consecuencia de su uso en veterinaria) con la desaparicin de los buitres blancos
en la India y Pakistn (Dalterio, 2014).
La contaminacin del medio ambiente por residuos de farmacuticos es un

fenmeno que se viene dando desde hace ms de tres dcadas. El primer estudio
sobre la contaminacin por productos farmacuticos tuvo lugar en una planta de
tratamiento de residuos de la ciudad Kansas en 1976 en donde se encontr cido
clofbrico, nicotina, cafena e ibuprofeno. Los resultados fueron publicados y luego
ignorados por 16 aos. En 1992 investigadores alemanes que trabajaban en la
bsqueda de herbicidas en agua encontraron cido clofbico, hipolipemiantes y
analgsicos en aguas subterrneas y residuales en Alemania. Ese mismo ao,
estudios en Dinamarca y Suecia hallaron estos compuestos en ros, lagos y en el
Mar del Norte. A partir de los resultados de este trabajo europeo, algunos
investigadores norteamericanos comenzaron a prestar atencin al tema de los
medicamentos en el ambiente dando lugar a varios estudios para medir los
residuos farmacolgicos en el agua, lo que fue posible gracias a la aparicin de
nuevos equipos y tcnicas analticas ms eficaces (Muoz, 2012).
9
Por sus caractersticas intrnsecas, los productos farmacuticos son sustancias
altamente solubles en agua, que se liberan al medio ambiente va excrecin, ya
sea metabolizados o no metabolizados, por vertido de los productos no utilizados
o caducados, o bien procedentes, como residuos, de los procesos de produccin,
por lo que pueden estar presentes en todas las etapas de un ciclo de vida del
agua puntual y referido a su uso. Si bien no se trata de compuestos persistentes,
stos si son constantemente utilizados y vertidos, y los sistemas de tratamiento
convencionales de agua potable y de aguas servidas muchas veces no son
capaces de eliminarlos (Henrquez, 2012).
Un factor muy importante del estudio es que los contaminantes emergentes no

estn incluidos en la legislacin del pas, y al no existir una regulacin legal que
determine las concentraciones mximas admisibles no se est cumpliendo el
inters de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) en donde sus lineamientos
tienen relacin con la proteccin de la salud pblica de la poblacin, adoptando
medidas que tienen que ver con mejorar la calidad del agua para consumo
humano.
Segn lo establecen las Guas para la Calidad del Agua Potable, el agua para
consumo no debe ocasionar ningn riesgo significativo para la salud cuando se
consume durante toda la vida, teniendo en consideracin las diferentes
vulnerabilidades que pueden presentar las personas en las distintas etapas de su
vida. La finalidad de dichas guas es bsicamente apoyar el desarrollo y la
ejecucin de estrategias de gestin de riesgos que permitan asegurar la inocuidad
del abastecimiento de agua, mediante el desarrollo de normas nacionales o
regionales basadas en informacin cientfica que proporcionan las Guas, y que
consideran un anlisis de riesgos y beneficios. Considerando que los frmacos
son considerados contaminantes emergentes su incorporacin especfica en las
Guas de la OMS an no se ha registrado, encontrndonos incluso con que ni
siquiera son mencionados en stas (Henrquez, 2012). De modo que queda
totalmente justificada la necesidad de implementar nuevos procedimientos que
permitan la eliminacin de estos contaminantes de las aguas para consumo.
Teniendo en cuenta lo anterior, en este trabajo de grado se pretende obtener las

curvas de calibracin para la deteccin de productos farmacuticos como cafena,
carbamazepina, diclofenaco e ibuprofeno usando como tcnica la cromatografa
de gas capilar-FID. Este sera apenas el primer paso a dar ya que la problemtica
ambiental aumenta y aqu en Colombia existe un gran vaco en cuanto al tema de
los contaminantes emergentes y esperamos como estudiantes de tecnologa
qumica implementar esta tcnica para el desarrollo de futuras investigaciones.
10
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN
La deteccin generalizada de los productos farmacuticos en muestras

ambientales como resultado de mejora de las capacidades de anlisis y estudios
centrados en el terreno ha llevado a la preocupacin por los riesgos potenciales
asociados con la liberacin de productos farmacuticos en el medio ambiente.
Esta preocupacin ha sido impulsada por los programas de muestreo de aguas
superficiales en EE.UU., Europa y en otros lugares que han demostrado la
presencia de diferentes clases de productos farmacuticos. La alta polaridad y
baja volatilidad de la mayora de los productos farmacuticos significa que son
susceptibles de ser transportados hacia y por el cuerpo del agua (Cunningham et
al, 2006).
A nivel mundial se han empezado a estudiar contaminantes emergentes dando la

importancia al impacto ambiental que estos generan en la composicin de cuerpos
hdricos en los que se hallan sustancias como lo son productos farmacuticos y de
cuidado personal (PFCP) y en Colombia, en una investigacin realizada en el
Hospital Universidad del Norte en Barranquilla se encontraron, en los efluentes
que se descargan al sistema de alcantarillado de la ciudad y este a su vez al ro,
sustancias de origen farmacutico, que evidencian que los sistemas de
tratamiento de aguas residuales deben ser repensados. Las sustancias de mayor
uso en un hospital de esta categora son los analgsicos, antinflamatorios como el
diclofenaco, ibuprofeno y otros medicamentos como la aspirina, antispticos como
el triclosn, hormonas como el estriol y el estrona, estimulantes como la cafena, y
otras drogas de uso lcito en centros hospitalarios como la morfina (Gil, et al 2012).
Cabe anotar que aunque la normatividad colombiana regula las sustancias de
inters sanitario en agua cruda y residual esta est contemplada en el decreto
3039 de 2010, pero en dicha reglamentacin no se hace mencin a los
compuestos derivados de los PFCP, por lo que se hace necesario cualificar y
cuantificar este tipo de contaminantes, con el fin de generar herramientas que
permitan tomar decisiones acertadas segn la problemtica ambiental encontrada.
Sin embargo hasta el momento no se han desarrollado investigaciones a nivel

local en el tema que permitan cualificar y cuantificar los PFCP, pues se desconoce
su concentracin en el agua y sus efectos sobre la salud humana y el ambiente,
por tal razn la necesidad de adaptar mtodos analticos modernos, sensibles y
confiables como la cromatografa de gas capilar FID permitiendo que encaje y se
destaque el perfil del tecnlogo qumico que consiste en el desarrollo de tcnicas
analticas, proporcionando herramientas de validacin que permitan soportar el
desarrollo del estudio de productos farmacuticos en matrices acuosas por medio
de esta tcnica cromatogrfica.
11
El desarrollo de este trabajo va a servir para el avance de nuevas y futuras
investigaciones ya que aqu se da el primer paso de la investigacin obteniendo
las curvas de calibracin, pero con el apoyo de semilleros podrn otros
estudiantes continuar con los estudios hasta quizs llegar a tcnicas de
depuracin y descontaminacin de aguas dndonos como triunfo a las estudiantes
encargadas del proyecto no solo la formacin de talento como profesionales sino
tambin el orgullo por el aporte realizado.
El desarrollo de la tcnica es un procedimiento estadstico que consiste en

verificar y documentar, que exista un alto grado de seguridad en la obtencin de
resultados que deberan ser precisos y exactos dentro de las especificaciones y
los atributos de calidad previamente establecidos (Aguirre, 2001). Miller en
Estadstica para Qumica Analtica en 1993 propuso para la estandarizacin el
clculo de la seal ruido que se define como el lmite de deteccin. As el
desarrollo de la tcnica de cromatografa de gas capilar-FID para el anlisis de
contaminantes emergentes tipo productos farmacuticos cumple con el objetivo
que esta plantea y tal curva de calibracin permite tener una informacin certera
como herramienta para los grupos de Investigacin locales, entidades pblicas de
control (Secretaria de Salud de Risaralda, La CARDER), las empresas
prestadoras del servicio de agua potable (Aguas y aguas de Pereira) y el pblico
en general, en la formulacin de respuestas a las problemticas emergentes de
contaminacin de los humedales y fuentes hdricas (Arrubla, 2012).
12
3. OBJETIVOS
3.1. OBJETIVO GENERAL
Desarrollar la tcnica de Cromatografa de gas capilar-FID por medio de sus

curvas de calibracin para la identificacin y cuantificacin de contaminantes
emergentes tipo productos farmacuticos.
3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
Obtener en forma experimental los valores de los parmetros como lo son:

precisin, linealidad, lmite de deteccin y cuantificacin, sensibilidad y
correlacin lineal que sirvan como criterio para que una vez montado el
mtodo analtico pueda empezar a reportar datos con adecuado y
comprobable grado de confianza.
Documentar la tcnica de extraccin en fase slida para el consiguiente

anlisis de la Cafena, Carbamazepina, Diclofenaco e Ibuprofeno en el
Cromatografo de gases - FID.
Documentar la cromatografa de gases para el anlisis de productos

farmacuticos en matrices acuosas.
13
4. MARCO TERICO
4.1. CONTAMINANTES EMERGENTES
Los contaminantes emergentes, cuyo estudio se encuentra entre las lneas

prioritarias de investigacin de los principales organismos dedicados a la
proteccin de la salud pblica y medioambiental, tales como la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS), la Agencia para la Proteccin del Medio Ambiente
(EPA), o la Comisin Europea, se definen como contaminantes previamente
desconocidos o no reconocidos como tales cuya presencia en el medio ambiente
no es necesariamente nueva pero si la preocupacin por las posibles
consecuencias de la misma (Barcelo, 2014).
La deteccin de estos contaminantes en el medio ha sido posible slo

recientemente gracias al desarrollo de nuevas y ms sensibles tecnologas
analticas. Entre los contaminantes emergentes presentes en el agua cabe
destacar frmacos, compuestos perfluorados, hormonas, drogas de abuso, y
productos de cuidado y de higiene personal (Barcelo, 2014).
La caracterstica de estos grupos de contaminantes es que no necesitan persistir

en el ambiente para causar efectos negativos, puesto que sus altas tasas de
transformacin/remocin se pueden compensar por su introduccin continua en el
ambiente. Para la mayora de estos contaminantes emergentes, la incidencia, la
contribucin de riesgo y los datos ecotoxicolgicos, no estn disponibles. As que
es difcil predecir qu efectos de salud pueden tener en seres humanos y
organismos acuticos (Becerril, 2012).
El alto potencial en la proliferacin continua de frmacos y productos de uso

personal, medicamentos veterinarios, y de otros productos qumicos
antropognicos, plantea desafos substanciales y quiz insuperables para su
regulacin y control, desde el punto de vista de su evolucin y del diseo de
sistemas viables para su aplicacin. Por otra parte, la investigacin y el desarrollo
de drogas y compuestos bioactivos evoluciona rpidamente y, en muchos casos,
los mecanismos de accin son nuevos para los sistemas biolgicos, por lo que las
consecuencias en el ambiente son inciertas (Becerril, 2012).
Por estos motivos la informacin disponible sobre los impactos potenciales de

muchas de esas sustancias es limitada, aunque hay evidencias de que algunas de
ellas causan efectos adversos en la salud humana y el ambiente. Actualmente
existe un inters creciente por las repercusiones que tendrn los compuestos
orgnicos de origen antropognico en el ambiente. El agua es una fuente
importante de estos compuestos para los seres vivos. La regulacin de estos
14
contaminantes es escasa, debido al desconocimiento de sus efectos, adems de
que no se tiene un inventario de todas las especies qumicas presentes en una
muestra ambiental, por limitaciones analticas (Becerril, 2009).
Actualmente las plantas de tratamiento de aguas residuales (PTARs) y las plantas

de potabilizacin de agua para abastecimiento humano, estn recibiendo gran
cantidad de trazas de diferentes compuestos contaminantes, para lo que las
tecnologas convencionales no han sido especficamente diseadas y por lo que
dichas sustancias permanecen en el agua, an despus de ser tratada o
potabilizada. Varios estudios han presentado pruebas de que algunos
medicamentos no se remueven eficientemente en las plantas de tratamiento de
aguas residuales (Dordio et al., 2010), lo que sumado a la baja cobertura en
sistemas de tratamiento de aguas residuales para el caso de Colombia (IDEAM,
2004), enmarca una realidad amplia por descubrir y tratar (Grupo de investigacin
en agua y saneamiento, 2014).
4.2. FRMACOS
Entre los frmacos ms prescritos en medicina humana destacan los

analgsicos/antiinflamatorios como el ibuprofeno y el Diclofenaco, los
antiepilpticos como la Carbamazepina, Antibiticos como la amoxicilina y el
Sulfametoxazol. A estos cabe aadir los, cada vez ms, utilizados en veterinaria,
en actividades como la acuicultura, la ganadera, y la avicultura. Segn las
propiedades fisico-quimicas de los frmacos y sus metabolitos y productos de
degradacin, y las caractersticas de los suelos, estas sustancias pueden llegar a
alcanzar las aguas subterrneas y contaminar los acuferos o bien quedar
retenidas en el suelo y acumularse pudiendo afectar al ecosistema y a los
humanos a travs de la cadena trfica (Barcelo, 2003).
Como resultado de las investigaciones llevadas a cabo hasta ahora, algunos

frmacos estn siendo considerados por la US EPA como posibles candidatos a
ser incluidos en la lista de los contaminantes orgnicos prioritarios en el agua
potable, como es el caso del Diclofenaco (antirreumtico), la Carbamazepina
(antiepilptico), y el cloranfenicol (antibitico). En la UE, por el momento, no se
han fijado lmites mximos en el agua potable, y por tanto, no es necesario el
seguimiento de tales compuestos, sin embargo, lo ms probable es que en un
futuro prximo sean regulados (Dalterio, 2014).
Jones et al. (2002) propusieron una clasificacin de la toxicidad de medicamentos

en funcin del grupo farmacutico al que pertenecen, con base en la CE 50 (tabla 1)
15
para diferentes organismos de prueba, encontrndose que los analgsicos como
el Diclofenaco, resultan txicos para los crustceos y dainos para los peces. Por
otro lado de acuerdo a la clasificacin del peligro ambiental y valoracin de riesgo
de ingredientes farmacutico en Suecia (2002), el diclofenaco est clasificado
como peligroso para el ambiente, y se considera adems potencialmente
bioacomulable (Valdez, 2009).
Toda vez que sus acciones son muy similares, estos frmacos generalmente se
suelen clasificar con base en su estructura qumica. Las drogas clsicas, como la
aspirina, el diclofenaco y el ibuprofeno son inhibidores no selectivos de la
ciclooxigenasa.
Los antiinflamatorios no esteroideos (AINE) son un grupo heterogneo de

frmacos con propiedades antipirticas, analgsicas y antiinflamatorias.
Tabla 1. Clasificacin de la toxicidad en el ambiente acutico.
Substancia Extremada Muy toxico Toxico Daino No toxico

mente CE50 0.1-1 CE501- 10 CE50 10- CE50
toxico CE50 mg/L mg/L 100 mg/L 100 mg/L
0,1 mg/L
Analgsico D D,E
Antiinflamatorios A B
Antidepresivo D
Antiepilptico C D,E
Cardiovasculatorio D
Citostatico A D,E
Donde A: Microorganismos; B: Algas; C:Cnidaria; D:Crustceos; E:Peces
Tomado de: (Valds, 2009).
4.2.1. Diclofenaco
El Diclofenaco es un antiinflamatorio no esteroideo (AINE) derivado del cido

benzenoacetico, que posee propiedades analgsicas, antipirticas y
antiinflamatorias. Su venta no requiere receta mdica y es uno de los
medicamentos ms utilizados por la poblacin (Gomez et al., 2009).
16
Tabla 2. Frmacos y caractersticas
Nombre Nombre Marca Nmero Pureza Estructura

cientfico de Cas Qumica
%
Cl
Diclofenaco cido 2-{2- Sigma 15307- 98,5 NH

Cl OH
[(2,6- Aldrich 86-5
diclorofenil)ami O
no]fenil}actico
Ibuprofeno cido (RS)-2- Sigma 15687- 98 CH3

OH
(4- Aldrich 27-1 CH3
isobutilfenil)pro O
H3C
pinico
O CH3
N
1,3,7-trimetil- Sigma 99 H3C N
1H-purina- Aldrich
Cafena 58-08-21 O N N
2,6(3H,7H)-
diona CH3
1,3,7-
trimetilxantina
5H-dibenzo- Sigma 298-46-4 99

[b,f]- Aldrich
Carbamaze
pina azepina- N
5- NH2
carboxa O
mida
17
4.2.2. Cafena
La cafena, tambin denominada tena, guaranina o matena, es un constituyente

natural presente en ms de 60 especies de plantas. Se encuentra en la dieta diaria
contenida en bebidas como el caf o el t, el chocolate y algunos refrescos. Se
podra considerar la sustancia estimulante de mayor consumo y la ms
socialmente aceptada a nivel mundial.
Segn sus propiedades fsico-qumicas la cafena es un polvo inodoro, incoloro y

amargo. Friedrich Ferdinand Runge la aisl del caf en 1819 y del t en 1827,
pero su estructura qumica no se describi hasta 1875 por E. Fischer (Calle,
2011).
4.2.3. Ibuprofeno
El ibuprofeno es un antinflamatorio no esteroideo (AINE) perteneciente al

subgrupo de los derivados del cido propinico (naproxeno, ketoprofeno), que
posee una eficaz actividad antiinflamatoria, antipirtica y analgsica. Es
probablemente la molcula ms estudiada clnicamente entre todos los AINEs
(Bejarano, 2006).
4.2.4. Carbamazepina
La Carbamazepina es un compuesto sinttico tricclico derivado del ncleo de la

dibenzazepina, emparentada con los frmacos antidepresivos triciclicos. Tiene
accin anticonvulsiva, antineuralgica, antidiurtica y antipsicotica. Se desconoce
su mecanismo de accin con exactitud, pero se supone que es capaz de
estabilizar la membrana celular neuronal, si bien no ha sido demostrado. Es
metabolizada principalmente en el hgado (Theodore, 2006).
La Carbamazepina se desarroll a finales de la dcada de 1950 en los

laboratorios suizos de J.R. Geigy AG, en Basilea Walter Schindler descubri su
sntesis en 1961, W. Theobald y H.A. Kunz comunicaron sus propiedades en
1963, y su eficacia en pacientes con epilepsia y sndromes dolorosos paroxsticos
se demostr en Europa a comienzos de la dcada de 1960 (Lpez, 2006).
18
4.2.5. Comportamiento Ambiental De Los Frmacos
Para poder comprender cmo los frmacos llegan finalmente al medio ambiente,
cuando son excretados por el ser humano, es necesario primeramente tratar de
conocer los mecanismos que regulan su comportamiento dentro del organismo.
Los frmacos ingresan al organismo generalmente va oral, y el o los principios

activos que contiene el frmaco, es o son expuesto(s) para su absorcin en el
intestino delgado, a travs de las vellosidades que ste posee, despus que los
jugos gstricos del estmago han realizado su trabajo de liberarlos. Cuando el
medicamento ya se encuentra en el torrente sanguneo, ste se distribuye,
metaboliza y elimina. A esta secuencia de procesos se le conoce como LADME
(Henrquez, 2012).
Figura 1. Esquema de la secuencia de procesos conocida como LADME
Tomado de: (Henrquez, 2012).
La liberacin del medicamento al torrente sanguneo, si su administracin fue oral,

se lleva a cabo despus de la ingesta de ste y la accin de los jugos gstricos
que permiten su absorcin en el intestino. As se puede sealar que la cantidad de
frmaco inalterado que llega al torrente sanguneo es el que se encuentra
biodisponible (Henrquez, 2012).
Una vez que se ha producido la absorcin en el intestino, el frmaco es

transportado hacia el hgado dnde generalmente es sometido a uno o ms
procesos metablicos. La cantidad de frmaco que es metabolizado durante el
paso de la sangre por el hgado se conoce como efecto del primer paso.
19
La velocidad a la que un frmaco es absorbido y su biodisponibilidad, depende
directamente de las caractersticas fisicoqumicas del frmaco, de los procesos
fisiolgicos y de las alteraciones patolgicas que pueda presentar la persona que
toma dicho frmaco (Henrquez, 2012).
La modificacin que sufre un frmaco en el organismo humano se conoce como

biotransformacin (transformaciones enzimticas), e implica una serie de
reacciones que en general generan metabolitos inactivos, ms polares e
hidrosolubles que facilitan su eliminacin. Sin embargo, en algunos casos estos
procesos de biotransformacin generan metabolitos con una mayor actividad
biolgica lo que implica con propiedades txicas, as como tambin menos txicas.
Estas reacciones enzimticas incluyen oxidacin (el compuesto cede electrones
aumentando su estado de oxidacin), reduccin (el compuesto gana electrones
disminuyendo su estado de oxidacin), hidrlisis (el compuesto reacciona con
agua), conjugacin (se unen covalentemente al compuesto: cido glucornico,
sulfatos, glutatin, aminocidos o acetatos) (Henrquez, 2012).
Estudios realizados respecto de la presencia de analgsicos en aguas residuales,

y en cuerpos de agua superficiales y subterrneas, han permitido concluir a los
investigadores que la fotlisis es la mayor causa de la disminucin de diclofenaco
en aguas superficiales. (Daughton et al., 1999)
En el medio ambiente las biotransformaciones que sufre un frmaco se conoce

como biodegradacin. Los frmacos estn constituidos por molculas orgnicas lo
que implica que los mecanismos de degradacin a los que se ven expuestos en el
medio ambiente son similares a los de cualquier compuesto orgnico, pero con la
gran diferencia que las reacciones se llevan a cabo aun cuando las
concentraciones de estos compuestos estn muy diluidas (Henrquez, 2012).
En general se tiene que en el medio ambiente las reacciones de descomposicin

son desarrolladas por los agentes inertes del medio ambiente, es decir: el agua,
el oxgeno o la luz; llevndose a cabo en perodos de tiempo de meses o aos.
(Hernndez et al., 1995). En este contexto puede sealarse que los tipos de
degradacin ms importantes que los frmacos sufren en el medio ambiente son:
hidrlisis, oxidacin y fotlisis (Henrquez, 2012).
4.3. HISTORIA DE LA CROMATOGRAFA
1850 Runge, Schoenbein, y Goeppelsroeder: Estudiaron el anlisis por capilaridad

en papel.
20
1892 Reed: Separacin en columna en tubos de kaoln usados para la separacin
de FeCI3 y el CuSO4.
1906 el botnico ruso Mikhail Tswett (1872-1919) formaliz el uso de la

cromatografa en estudios cientficos, aplicndola a la separacin de los pigmentos
naturales que se encuentran en las plantas (conocidos como carotenoides y
clorofilas). Adems le dio ese nombre a la tcnica. Tswett empac una columna de
vidrio vertical (de unos cuantos centmetros de dimetro) con material adsorbente.
Luego, por la columna vertical virti una solucin que contena la mezcla de
pigmentos provenientes de las hojas molidas de una planta. Pasados unos
minutos, el material empacado en la columna haba adquirido una coloracin
diferente por segmentos. Es decir, haba logrado la separacin de los pigmentos
naturales de la planta. En cada segmento de color definido haba un pigmento
diferente. Dando este el paso ms importante para la cromatografa.
1930 Karrer, Kuhn, y Strain: Us adsorventes como hidrxido de calcio activado,

aluminio y magnesio
1938 Reichstein: Introdujo la cromatografa lquida o fluida, as extendi las

aplicaciones de la cromatografa a sustancias sin color.
1938 Izmailov y Schraiber: Describieron el uso de la capa fina de alumina

extendida sobre un vidrio.
1939 Brown: Fue el primero que us la cromatografa circular en papel.
1941 Martin y Synge: Introdujo la cromatografa por particin en columna.
1944 Consden, Gordon, y Martin: Fueron los primeros que describieron la

cromatografa de particin en papel.
1947 Boyd, Tompkins, Spedding, Rieman, y otros: Cromatografa de intercambio

inico aplicada a varios problemas analticos.
1948 M. Lederer y Linstead: Cromatografa en papel aplicada a compuestos

inorgnicos.
1951 Kirchner: Introdujo la cromatografa de capa fina como es practicada ahora.
1952 James y Martin: Desarrollaron de la cromatografa de gas.
1964 J. C. Moore: Desarroll la cromatografa de permeacin en gel (Garcia,

2002).
21
4.4. FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFA
La cromatografa tiene como principio la diferencia de distribucin de los

componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles. Una de ellas, la fase
mvil, que puede ser un lquido o un gas, fluye a travs de una fase estacionaria,
que puede ser un lquido o un slido. Durante el proceso de separacin
cromatogrfica la fase mvil fluye de manera continua sobre la fase estacionaria.
De esta manera los componentes de la mezcla, y sus respectivas diferencias de
afinidad con la fase mvil y la fase estacionaria, crean un equilibrio dinmico,
permitiendo que los componentes que sean ms afines a la fase estacionaria, se
muevan lentamente bajo el influjo de la fase mvil. Anlogamente, aquellos
componentes que son retenidos con poca fuerza por la fase estacionaria, se
mueven con mayor rapidez al paso de la fase mvil. Como consecuencia de las
diversas velocidades de desplazamiento, los componentes de la mezcla se
separan en bandas o zonas discretas, que pueden analizarse cualitativa y
cuantitativamente (Castro, 2010).
Existen diferentes tipos de separaciones cromatogrficas, con diferentes tipos de

fases estacionarias y mviles. Habr consideraciones particulares para las
distintas variaciones de la cromatografa, pero de manera general, el proceso
consta de 4 etapas fundamentales:
1. Preparacin de la placa o columna: Esto hace referencia a la disposicin

espacial que adoptar la fase estacionaria.
2. Siembra, inyeccin o desorcin: Es el primer contacto entre la mezcla a separar

con la fase estacionaria, para su posterior desarrollo.
3. Desarrollo o separacin: Corresponde al paso de la fase mvil a travs de la

fase estacionaria permitiendo la separacin de la muestra.
4. Deteccin: Implica la localizacin de las zonas en que se encuentran los

compuestos ya separados (Castro, 2010).
Como ya se dijo, las tcnicas cromatogrficas se fundamentan en las diferencias

de distribucin de una muestra entre dos fases inmiscibles. Con respecto a esta
distribucin, hay un aspecto que debe tenerse muy en cuenta en una separacin,
y es el llamado coeficiente de distribucin. Si se efecta un experimento de
extraccin de un determinado analito entre dos fases inmiscibles, a diferentes
concentraciones, los resultados de cada extraccin se vern descritos por la
siguiente expresin (Castro, 2010).
22
KD=
Ecuacin 1. Coeficiente de distribucin
Esta expresin se conoce como factor de reparto, coeficiente de particin, o

coeficiente de distribucin. En ella, C1 corresponde a la concentracin de la
molcula de inters (expresada en Molaridad) en la fase orgnica, y C2
corresponde a la concentracin de esta en la otra fase, que en muchos casos es
acuosa. As, esta expresin es una relacin de concentraciones, la cual es
constante a determinadas condiciones de temperatura y presin, y se puede
emplear para determinar concentraciones en alguna de las fases, y an si se
conoce el volumen de las fases, se puede llegar hasta conocer la cantidad de
analito presente en cada fase (Castro, 2010).
4.5. CROMATOGRAFA DE GASES
Para evaluar la importancia de la cromatografa de gases (GC) es necesario

distinguir entre los dos papeles que desempea la tcnica. Primero, la
cromatografa de gases es una herramienta para efectuar separaciones. En este
sentido, los mtodos de la GC son inmejorables cuando se aplican a muestras
orgnicas complejas, a organometlicos y a sistemas bioqumicos conformados
por especies voltiles o por especies que pueden someterse a un proceso para
producir sustancias voltiles. El segundo papel que desempea la GC es en la
terminacin de un anlisis. En este caso se emplean los tiempos o volmenes de
retencin para la identificacin cualitativa y las alturas de los picos o sus reas dan
informacin cuantitativa. Desde el punto de vista cualitativo, la GC es una tcnica
mucho ms limitada que la mayora de los mtodos espectroscpicos. Por eso,
una tendencia importante en este campo ha sido en la direccin de combinar las
notables cualidades para la separacin que tiene la GC con las mejores
propiedades de identificacin que poseen instrumentos como los espectrmetros
de masas, de infrarrojo y de resonancia magntica nuclear (Skoog, 2008).
A pesar de que la cromatografa de gases es ya una tcnica madura, se han

perfeccionado en los aos recientes la teora, los instrumentos, las columnas y las
aplicaciones prcticas. Enseguida se estudian algunos de los adelantos en la
cromatografa de gases de alta velocidad y los sistemas miniaturizados.
23
4.5.1. Cromatografa de gases de alta velocidad
Los investigadores especializados en cromatografa de gases se enfocan a

menudo en conseguir una resolucin ms alta para separar ms y ms mezclas
complejas. En la mayora de las separaciones, las condiciones se hacen variar
para aislar el par de componentes ms difcil de separar, denominado par critico.
En estas condiciones, muchos de los componentes de inters se separan en
exceso. La idea bsica de la cromatografa de gases de alta velocidad es que,
para muchas de las separaciones de inters, la alta velocidad se puede lograr
aunque sea a expensas de la selectividad y la resolucin (Skoog, 2008).
4.5.2. Sistemas de cromatografa de gases miniaturizados
Durante muchos aos ha habido el deseo de reducir las dimensiones de los

sistemas de cromatografa de gases y alcanzar la escala de un microcircuito. Los
sistemas de cromatografa de gases en miniatura son tiles en la exploracin del
espacio, en los instrumentos porttiles para uso en el campo y para la supervisin
del ambiente. Las primeras investigaciones dieron a conocer columnas para
cromatografa de gases producidas con acido sobre un microcircuito. Sin embargo,
el rendimiento cromatogrfico relativamente deficiente de dichos dispositivos
origino que se eliminara la columna del chip en los sistemas comerciales que se
produjeron. En aos recientes las columnas microfabricadas se disearon con
sustratos de silicio, varios metales y polmeros. En el sustrato se marcan canales
angostos, relativamente profundos, con la ayuda de acido. Dichos canales tienen
bajo volumen muerto para reducir el ensanchamiento de banda y un rea
superficial alta con el fin de aumentar el volumen de la fase estacionaria (Skoog,
2008).
Dentro de la cromatografa de gases se presentan fundamentalmente

interacciones gas-slido y gas-lquido y recibe su nombre particular por el uso de
un gas como medio de arrastre (fase mvil). Aunque ambas comparten un
fundamento general, difieren en la naturaleza de la fase estacionaria, pues en la
primera es un material slido, mientras que en la segunda se trata de un lquido.
Ambas operan de tal manera que los componentes de una muestra vaporizada
son separados como consecuencia del reparto entre una fase mvil gaseosa y una
fase estacionaria contenida en una columna. La muestra es vaporizada e
inmediatamente sembrada en la columna, mediante un dispositivo de inyeccin.
Una vez sembrada en la columna, es eluda a causa del flujo de un gas inerte, que
desempea el rol de fase mvil.
24
A diferencia de la mayora de las tcnicas de separacin cromatogrfica, la fase
mvil en la cromatografa de gases no interacta con los componentes de la
muestra, toda vez que su nica funcin es transportar los componentes de la
misma a travs de la columna. La cromatografa gas-slido se fundamenta en una
fase estacionaria slida en la cual los analitos son retenidos gracias al fenmeno
de la adsorcin, y su aplicacin es limitada a separar compuestos de bajo peso
molecular. Los materiales finamente divididos como carbn activado, almina
activa o silica-gel microporosos con una gran rea superficial activa (superficie de
contacto) son fuertes adsorbentes, motivo por el cual son muy empleados como
fases estacionarias en la cromatografa gas-slido. Esto se debe al fenmeno de
adsorcin preferente, que ocurre cuando las molculas de dos o ms sustancias
estn presentes en un material adsorbente y las molculas de una de esas
sustancias pueden ser retenidas ms fcilmente que las de las otras. Estos
materiales tambin suelen ser empleados como soportes de la fase estacionaria
lquida, en la cromatografa gas-lquido (Castro, 2010).
4.5.3. Sistema de gas portador
En la cromatografa de gases la fase mvil se llama gas portador y debe ser

qumicamente inerte. El helio es el gas para fase mvil ms comn, pero tambin
se usan argn, nitrgeno e hidrogeno. Estos gases se surten en recipientes a
presin. Se requieren reguladores de presin, manmetros y medidores de flujo
para controlar la corriente del gas. Adems, el sistema del gas portador contiene a
menudo un tamiz molecular para eliminar el agua y otras impurezas. Los flujos se
controlan mediante un regulador de presin de dos etapas colocado en el cilindro
de gas y algn tipo de regulador de presin o de flujo instalado en el cromatgrafo.
(Skoog, 2008). Pero estos deben de reunir ciertos requisitos para cumplir la
funcin de arrastre eficazmente, las cuales se describen a continuacin.
Debe de poseer un comportamiento inerte frente a la fase estacionaria y
los componentes de la muestra.
Debe ser trmicamente estable.
Su seleccin depende de:
Disponibilidad del Gas.

Pureza del gas (Castro, 2010).
Consideraciones particulares del anlisis y del detector empleado:
El N2 y el O2 son los ms empleados debido a la fcil adquisicin y bajo
25
costo.
El contenido de O2 en el gas de arrastre no debe superar las 20 ppm, toda
vez que existe el riesgo de que al estar en contacto con la mezcla durante
un tiempo a elevadas temperaturas, se pueda producir una degradacin o
algn tipo de alteracin de la muestra (Rodrguez, 2011).
4.5.4. Puerto De Inyeccin
La introduccin de la muestra se logra por medio de una microjeringa graduada en

microlitros provista de una aguja hipodrmica que atraviesa un tapn de caucho
(sptum) del recipiente tipo vial que contiene la muestra. De all se extrae para
luego ser depositada en el puerto de inyeccin. La muestra puede ser introducida
all mediante el empleo de vlvulas y en forma automatizada para minimizar
errores en la cantidad inyectada. Es un recinto calentado elctricamente y
recubierto de un material refractario que lo mantiene a elevadas temperaturas, lo
que permite la vaporizacin de la muestra. Adems se puede ubicar en su interior
un tubo capilar de vidrio, para la retencin de los slidos que pueda poseer la
muestra y as proteger la columna de posibles contaminantes de este tipo. A la
salida de la cmara de inyeccin, la muestra en fase de vapor, se encuentra con el
gas portador, que la conduce a la columna (Castro, 2010).
4.5.4.1. Sistemas de Inyeccin de muestras en cromatografa de gases
Dependiendo de la cantidad de muestra disponible, del tipo de columna que se

emplee y en ltimas de la concentracin de los analitos, existen dos sistemas
usados para inyectarla muestra en la columna de separacin:
a) Inyeccin en Split: Al momento de trabajar con columnas capilares, es

necesario reducir el volumen de muestra para no sobrecargar el sistema.
Generalmente se inyecta 1L de muestra por medio de un inyector-divisor
(inyeccin en split) pero realmente solo ingresan 0.01L a la columna. Este
mtodo impide la sobre carga de la columna pero desperdicia una cantidad
considerable de muestra.
b) Inyeccin en splitless: Cuando la cantidad de muestra disponible es muy

limitada y las concentraciones de los analitos estn en niveles considerablemente
bajos, si se empleara inyeccin en Split se introducira muy poca muestra en la
columna.
26
Para estos casos se requiere un sistema de inyeccin sin divisin (inyeccin
splitless). A travs de este mecanismo, la muestra completa incluyendo el
disolvente se introducen en la columna a travs de un vaporizador instantneo
caliente. Se evita un exceso de solvente en la columna, abriendo hacia la
atmsfera el puerto de inyeccin, poco tiempo despus de inyectada la muestra,
cuando una buena parte del disolvente y la totalidad de la muestra han ingresado
a la columna (Rodrguez, 2011).
Figura 2. Representacin esquemtica de un cromatgrafo de gases
Tomado de: (Castro, 2010).
4.5.5. Columna Cromatogrfica
Es al interior de esta donde se efecta la separacin, por lo que se le conoce

como el corazn del cromatgrafo. Debido a la amplsima variedad de anlisis
que se pueden realizar por cromatografa de gases, existen diferentes tipos de
columnas que pueden variar en muchos aspectos como longitud, material de la
columna, dimetro interno, etc. Sin embargo, la diferencia fundamental entre un
tipo de columna y otra radica en la constitucin de la fase estacionaria, as:
Empacadas
Capilares
27
La columna se encuentra ubicada en el interior de un recinto termostatizado u
horno. Esto se debe a que la temperatura influye de manera importante en la
retencin de los componentes por la columna, y por ende en la separacin de
stos. Por tal motivo, la temperatura debe ser uniforme a lo largo de la columna y
fcilmente controlable. Se consigue uniformidad en la temperatura a lo largo de la
columna haciendo circular aire caliente por todo el recinto que la contiene. Esto se
hace por medio de un ventilador. En la mayora de los equipos la temperatura se
puede regular de un modo continuo a un valor deseado. De igual forma en algunos
equipos se acopla un programador lineal de temperatura para calentar la columna
con una o varias rampas de calentamiento.
4.5.6. Fase Estacionaria Lquida
La fase lquida debe poseer caractersticas fisicoqumicas similares a la muestra a

analizar. As, para el anlisis de hidrocarburos saturados se emplea un
hidrocarburo saturado como fase lquida. Es conveniente relacionar esta
semejanza con base a polaridades. Adems de ser semejante a la muestra, la
fase lquida debe cumplir ciertos requisitos que permitan un buen desempeo de
la misma, y por ende ofrecer una separacin efectiva de los componentes de la
muestra. Dentro de estas caractersticas las ms importantes son:
Viscosidad: No debe ser muy alta a la temperatura de trabajo, para

proporcionar un rpido establecimiento de los equilibrios de reparto entre
las fases.
Tensin Superficial: Debe mojar bien el soporte, asegurando que la
adherencia soporte-lquido sea suficiente para evitar que la fase mvil
arrastre la fase estacionaria, provocando mala distribucin en la columna.
Tensin de Vapor: Debe ser mnima, con el objeto de prevenir que una
evaporacin de la fase estacionaria haga que la misma pase a la fase
mvil. Lo cual presentara perturbaciones en la separacin y en el anlisis
posterior.
Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil: Esta condicin es
la que define en s a la cromatografa de gases. Las constantes de reparto
de los componentes a separar deben ser suficientemente diferentes para
que la fase estacionaria oponga distintas resistencias al paso de los
componentes a travs de la columna, proporcionando as una buena
separacin de los componentes de la misma.
Reversibilidad de reparto: El reparto de cada componente entre las fases
debe ser reversible para favorecer que los procesos consecutivos de
absorcin y desorcin, que se llevan a cabo a lo largo de la columna, sean
28
rpidos y completos al momento de alcanzar el equilibrio. Esta condicin
excluye por defecto, cualquier reaccin qumica entre los componentes de
la muestra y la fase estacionaria.
4.5.7. Detectores
Los detectores son dispositivos que determinan la presencia o no de un analito de

inters y miden la cantidad del mismo en la corriente del gas portador, convirtiendo
una seal no medible directamente en una seal elaborable de una propiedad
fsica. Esta seal es elaborada por una comparacin entre el gas acarreador puro
(blanco) y el mismo gas llevando cada uno de los componentes previamente
separados en la columna, esto es traducido en una seal elctrica que es
amplificada y registrada al momento de salir de la columna (Olguin, 2004).
Los detectores usados en cromatografa de gases son transductores de

concentracin, es decir, instrumentos con la capacidad de medir, en este caso, la
variacin de la concentracin de las sustancias eludas en el seno del gas
portador, convirtindola en una seal elctrica proporcional, fcilmente medible y
registrable en funcin del tiempo. En general, los detectores empleados en
cromatografa de gases, deben reunir ciertos requisitos propios de las exigencias y
de la naturaleza de la tcnica cromatogrfica como tal; esto implica que debe ser
un transductor de concentracin en fase de vapor, poseer una adecuada
sensibilidad as como un bajo nivel de ruido, estabilidad y reproducibilidad, que le
confieran por ende una alta fiabilidad y manejo sencillo (Castro, 2010).
Caractersticas del detector ideal para cromatografa de gases
1. Sensibilidad adecuada.
2. Buena estabilidad y reproductibilidad.
3. Respuesta lineal para los solutos que se extienda a varios rdenes de
magnitud.
4. Intervalo de temperaturas desde la temperatura ambiente hasta al menos 400C
5. Tiempo de respuesta corto independiente de la tasa de flujo.
6. Alta confiabilidad y manejo sencillo. El detector debera estar a prueba de la
impericia de operadores inexpertos, si es posible.
7. Respuesta semejante para todos los solutos o, por el contrario, una respuesta
selectiva y altamente predecible para uno o ms tipos de solutos.
8. No debe destruir la muestra.
Por desgracia, no hay un detector que rena todas estas caractersticas (Skoog,
2008).
29
Algunos de los detectores ms usados se describen a continuacin.
4.5.7.1. Detector de ionizacin de llama (FID):
Este es el detector ms extensamente utilizado, y por lo general, uno de los ms

aplicables en cromatografa de gases. El detector FID responde al nmero de
tomos de carbono que entra en el detector por unidad de tiempo, por ello, es ms
un detector sensible a la masa, que un sistema sensible a la concentracin.
Grupos funcionales, tales como carbonilo, alcohol, halgeno y amina originan en la
llama pocos iones o prcticamente ninguno. Adems el detector es insensible a
los gases no combustibles como H2O, CO2, SO2 y NOx. El detector FID posee una
elevada sensibilidad de (10-13 g/s), un gran intervalo de respuesta lineal (107), un
bajo ruido adems de ser resistente y fcil de utilizar. Estas propiedades hacen del
detector FID uno de los detectores generales ms utilizado para el anlisis de la
mayora de compuestos orgnicos (Zenteno, 2011).
El detector de ionizacin de llama se ha utilizado para la determinacin de

contaminantes emergentes tipo productos de cuidado personal, compuestos
orgnicos en general, plaguicidas, antidepresivos y alcoholes.
4.5.7.2. Detector de captura de electrones (ECD)
El detector de captura de electrones ha llegado a ser uno de los ms ampliamente

utilizados para el anlisis de muestras ambientales porque es sensible a
compuestos orgnicos que contienen halgenos, como los plaguicidas y los
bifenilos policlorados (Skoog, 2001).
Los detectores de captacin de electrones son muy sensibles y tienen la ventaja

de no alterar la muestra de manera significativa, a diferencia del detector de
ionizacin por flama, que consume la muestra. Por otra parte, la respuesta lineal
del detector se limita a alrededor de dos rdenes de magnitud. (Skoog, 2008).
El detector de captura de electrones ha servido para determinar bifenilos

policlorados, compuestos organoclorados, hidrocarburos aromticos policclicos y
pesticidas organoclorados.
30
4.5.7.3. Detectores termoinicos de llama (FTD)
El detector termoinico es sensible a los compuestos orgnicos que contienen

fosforo y nitrgeno. Su respuesta a un tomo de fosforo es aproximadamente 10
veces mayor que a un tomo de nitrgeno y de 10 4 a 106 veces superior que a un
tomo de carbono. En comparacin con el detector de ionizacin por llama, el
detector termoinico es unas 500 veces ms sensible a los compuestos que
contienen fosforo y unas 50 veces ms sensible a las especies nitrogenadas. Un
detector termoinico tiene una configuracin similar al detector de llama. El
efluente de la columna se mezcla con hidrogeno, pasa a travs de la punta de la
llama y se quema. Entonces, el gas caliente fluye alrededor de una bola de silicato
de rubidio calentada mediante electricidad que se mantiene a unos 180 V respecto
al colector. La bola caliente forma un plasma que alcanza una temperatura de
600C a 800C. Se desconoce lo que ocurre exactamente en el plasma para que
se produzca una cantidad inusual y enorme de iones a partir de las molculas que
contienen fosforo o nitrgeno, pero el resultado es una gran corriente inica, la
cual se utiliza para la determinacin de compuestos que contienen estos dos
elementos (Parrales et al, 2012).
El detector termoinico ha permitido determinar plaguicidas que contienen fosforo

gracias a su alta sensibilidad.
4.5.7.4. Detectores de conductividad electroltica
Los compuestos que contienen halgenos, azufre o nitrgeno se mezclan en el

detector Hall de conductividad electroltica con un gas de reaccin en un reactor
tubular pequeo, casi siempre de nquel. El tubo de la reaccin se mantiene a
850C1000C. Luego se disuelven los productos en un lquido, lo cual origina una
solucin conductora. A continuacin se mide el cambio en la conductividad como
resultado de las especies inicas en la celda de conductancia. En el modo de
halgenos, el hidrogeno se usa como gas para la reaccin. Los compuestos que
contienen halgenos se convierten en HX y se disuelven en alcohol n-proplico
como solvente de conductividad. De este modo, los compuestos que contienen
azufre se transforman en H2S y los compuestos que contienen nitrgeno en NH3,
lo cual no da respuestas significativas porque ambos se ionizan de manera
deficiente en el solvente. El lmite de deteccin es ~0.5 pg Cl/s, y el intervalo lineal
es 10 6 (Skoog, 2008).
31
En el modo de azufre, el gas para la reaccin es aire, el cual transforma los
compuestos que contienen azufre en SO2. El solvente de conductividad es alcohol
metlico con una pequea cantidad de agua. El SO2 se convierte en sulfito y en
iones sulfato en presencia de agua. Los compuestos que contienen nitrgeno se
transforman en N2 y xidos de nitrgeno y manifiestan poca o ninguna respuesta.
Los compuestos que contienen halgeno se transforman en HX y se tienen que
eliminar mediante un depurador despus de reaccionar y antes de la deteccin. En
la modalidad de azufre, se puede detectar alrededor de 2 pg S/s con un intervalo
lineal de tres rdenes de magnitud. En el modo de nitrgeno se utiliza hidrogeno
como gas de reaccin, como en el modo de halgeno. No obstante, en este caso
se usa agua que contiene una pequea cantidad de un solvente orgnico como
solvente de conductividad. En este solvente el NH3 producido se transforma en
NH4 +. El HX y el H2S producidos a partir de compuestos que contienen halgenos
y azufre se eliminan con un depurador despus de la reaccin. El lmite de
deteccin es de ~4 pg N/s con un intervalo lineal de tres rdenes de magnitud
(Skoog, 2008).
Tambin hay detectores de conductividad electroltica en seco. La diferencia con

los detectores ordinarios es que no requieren un solvente, sino que detectan los
iones del producto en la fase gaseosa. Los detectores en seco son sensibles a los
compuestos que contienen cloro y bromo. Se utilizan en serie con un detector de
ionizacin por flama (Skoog, 2008). El detector de conductividad electroltica ha
permitido identificar los factores de respuesta de compuestos organoclorados,
organofosforados y la deteccin de goitrina y su derivado heptafluorobutirilo.
4.5.7.5. Detector de fotoionizacin
En el detector de fotoionizacin, las molculas que salen de la columna de

cromatografa de gases son fotoionizadas mediante radiacin ultravioleta
proveniente de una lmpara de hidrogeno de 10.2 eV o de una lmpara de argn
de 11.7 eV. Esta fuente ioniza las especies con un potencial de ionizacin por
debajo de la energa de la lmpara. Los compuestos con un potencial de
ionizacin superior no absorben la energa y, por tanto, no son detectados. Luego,
los iones y los electrones producidos por fotoionizacin se colectan en un par de
electrodos polarizados. El detector es ms sensible a los hidrocarburos aromticos
y los compuestos organosulfurados u organofosforados que se fotoionizan con
facilidad. El intervalo lineal es hasta de siete rdenes de magnitud (Skoog, 2008).
32
4.5.7.6. Detectores de emisin atmica (AED)
En el detector de emisin atmica, el efluente procedente de la columna de

cromatografa de gases se introduce en un plasma inducido por microondas (MIP),
un plasma acoplado por induccin (ICP) o un plasma de corriente continua (DCP).
El plasma inducido por microondas es el que se usa ms ampliamente y ya se
encuentra en el comercio. Se utiliza junto con diodos en serie o con un
espectrmetro de emisin atmica con un dispositivo de acoplamiento de carga. El
plasma tiene suficiente energa para atomizar todos los elementos de una muestra
y excitarlos para obtener as sus espectros de emisin atmica caractersticos. Por
tanto, el detector de emisin atmica es un detector selectivo de elemento (Skoog,
2008). Este detector ha permitido la determinacin de compuestos voltiles
formados en un sistema modelo de glucosa-selenometionina y determinacin de
mercurio atmosfrico.
4.5.7.7. Detector fotomtrico de flama (FPD)
El detector fotomtrico de llama se ha utilizado de manera extensa para el anlisis

de contaminantes del aire y del agua, de plaguicidas y de los productos de la
hidrogenacin del carbn. Se trata de un detector selectivo que es sensible sobre
todo a los compuestos que contienen azufre y fosforo. En este detector el
eluyente se hace pasar a travs de una flama de hidrogeno-aire a baja
temperatura, la cual convierte parte del fosforo en una especie HPO que emite
bandas de radiacin centradas alrededor de 510 y 526 nm. El azufre de la muestra
se convierte al mismo tiempo en S2, el cual emite una banda centrada en 394 nm.
Sin embargo, el detector de quimioluminiscencia del azufre, proporciona lmites de
deteccin ms bajos y un intervalo de trabajo lineal ms amplio que el detector
fotomtrico de flama. Para aislar estas bandas se emplean filtros adecuados y su
intensidad se registra por medios fotomtricos (Skoog, 2008).
Con la fotometra de flama se han detectado otros elementos, entre los que estn
los halgenos, nitrgeno y diversos metales, como estao, cromo, selenio y
germanio (Skoog, 2008). Este detector ha permitido la determinacin de
pesticidas organofosforados y de compuestos orgnicos de estao en el agua de
mar.
33
4.5.7.8. Detectores de espectrometra de masas
Uno de los detectores ms potentes para cromatografa de gases es el

espectrmetro de masas. La combinacin de cromatografa de gases con
espectrometra de masas se conoce por las siglas GCMS.
La tasa de flujo procedente de las columnas capilares es casi siempre tan baja
que la salida de la columna se puede alimentar de manera directa a la cmara de
ionizacin del espectrmetro de masas. Antes del surgimiento de las columnas
capilares en la GC, cuando se usaban las columnas empacadas, era necesario
reducir al mnimo el gran volumen del gas portador que sala de la GC. Con este
propsito se utilizaban diversas vlvulas, membranas y separadores de efusin;
pero, en muchos casos, dichos dispositivos tambin eliminaban una cantidad
importante del analito, por lo cual eran muy ineficientes. En la actualidad las
columnas capilares se emplean de modo invariable en los equipos de GC-MS y los
mencionados separadores ya no se utilizan (Skoog, 2008).
La degradacin trmica de los componentes puede ser una dificultad en la GC-

MS. No solo la portezuela de inyeccin de la GC y la columna de GC causan
degradacin, sino tambin las superficies metlicas de la fuente de iones del
espectrmetro de masas podran ocasionar problemas. La reduccin de la
temperatura reduce al mnimo la degradacin. Sin embargo, con frecuencia el
espectrmetro de masas se usa para identificar productos de descomposicin, los
cuales pueden ocasionar modificaciones cromatogrficas que resuelven el
problema de la degradacin. Las fuentes de iones ms comunes que se usan en
GC-MS son la ionizacin por impacto de electrones y la ionizacin qumica
(Skoog, 2008).
En GC-MS, el espectrmetro de masas barre la masa en forma repetida durante el

experimento romatogrfico. Si este dura 10 minutos, por ejemplo, y se toma un
barrido cada segundo, entonces se registran 600 espectros de masas. La
informacin se analiza mediante el sistema de datos de varias maneras. Primero,
se puede sumar la abundancia de iones en cada espectro y graficarla en funcin
del tiempo para obtener un Cromatograma de iones totales. Esta grafica es
parecida a un cromatograma ordinario. As mismo, se puede desplegar el
espectrmetro de masas en un momento en particular durante el Cromatograma
para identificar las especies que salen en dicho momento. Por ltimo, se puede
elegir un solo valor de masa-carga (m/z) y supervisarlo a lo largo de todo el
experimento cromatogrfico (Skoog, 2008).
34
A esta tcnica se le conoce como supervisin de un ion selecto. Los espectros de
masas de iones seleccionados que se obtienen durante un experimento
cromatogrfico se conocen como cromatogramas de masas (Skoog, 2008).
A travs de la espectrometra de masas como detector se han logrado determinar

trazas de explosivos adems de caracterizar fsiles qumicos en el petrleo.
4.5.7.9. Cromatografa de gases acoplada con deteccin

espectroscpica
A menudo, la cromatografa de gases se combina con otras tcnicas selectivas

como la espectroscopia y la electroqumica para generar herramientas potentes
con las que se pueden separar e identificar los componentes de muestras
complejas. Las combinaciones de GC con espectrometra de masas (GC-MS), con
espectroscopia en infrarrojo y transformada de Fourier (GC-FTIR), con
espectroscopia magntica nuclear y mtodos electroanalticos se llaman a veces
mtodos acoplados. En los primeros sistemas, los gases efluentes de una
columna cromatogrfica se recogan como fracciones separadas en una trampa
fra y se usaba un detector no destructivo y no selectivo para indicar su aparicin.
La composicin de cada fraccin se investigaba mediante espectrometra de
resonancia magntica nuclear, de infrarrojo o a travs de mediciones
electroanalticas. Una limitacin importante en esta metodologa era que las
cantidades de soluto que contenan las fracciones eran muy pequeas
(normalmente micromoles) (Skoog, 2008).
La mayor parte de los metodos acoplados modernos supervisa en forma continua

el efluente proveniente de la columna cromatogrfica mediante mtodos
espectroscpicos. La combinacion de dos tecnicas que se basan en principios
distintos puede alcanzar una enorme selectividad. Los actuales instrumentos
computarizados para cromatografa de gases ya tienen incorporadas bases de
datos muy grandes para comparar espectros e identificar compuestos (Skoog,
2008).
4.5.7.10. Otros tipos de detectores
Otros tipos de detectores para cromatografa de gases son tiles para aplicaciones
especficas. El detector de quimioluminiscencia del azufre se basa en la reaccin
entre ciertos compuestos azufrados y el ozono. La intensidad de la luminiscencia
resultante es proporcional a la concentracin de azufre. sta demostrado que este
35
detector es especialmente til en la deteccin de contaminantes como los
mercaptanos. En el detector de quimioluminiscencia del azufre el eluyente se
mezcla con hidrogeno y aire, y se produce la combustin igual que en el detector
de ionizacin por flama. Los gases as obtenidos se mezclan luego con ozono y se
mide la intensidad de la emisin resultante. El intervalo lineal es de alrededor de
cinco rdenes de magnitud y el lmite de deteccin para el azufre es de casi 0.5
pg/s. El detector de quimioluminiscencia del azufre tambin ha sido adaptado a la
cromatografa de fluidos supercrticos (Skoog, 2008).
El detector de quimioluminiscencia especfico para nitrgeno es muy similar al

detector del azufre. El producto de combustin del oxido nitroso reacciona con el
ozono para producir quimioluminiscencia. La respuesta del detector es lineal con
respecto al nitrgeno en casi cuatro rdenes de magnitud. El lmite de deteccin
para el nitrgeno es de casi 5 pg/s. El detector se puede usar para compuestos
orgnicos nitrogenados y compuestos inorgnicos, como el amoniaco, hidracina,
HCN y xidos de nitrgeno (Skoog, 2008).
Durante el desarrollo de la cromatografa de gases se han investigado y utilizado

decenas de detectores. Sin embargo los utilizados con mayor frecuencia son los
nombrados anteriormente.
La cromatografa de gases ha sido un gran avance para la qumica analtica y la

ciencia en general, sin embargo, la tecnologa y las tcnicas estn avanzando, y
as como la tcnica de GC-FID ha sido ampliamente utilizada por su alta
sensibilidad en identificacin de compuestos orgnicos y ms especficamente la
determinacin de compuestos farmacuticos como lo muestra este trabajo y
contaminantes emergentes en general, se estn utilizando tambin otras tcnicas,
as por ejemplo se evalu la remosin de 15 PPCP del agua por Fotlisis UV
directa (Carlson, et al 2015), tambin a travs microfiltracin en membranas de
carbono dispuestos en nanotubos se logr determinar productos farmacuticos y
de higiene personal (Wang, et al,2015).
Apartndonos un poco de la cromatografa de gases se encontr tambin como la

Tcnica cromatografa liquida acoplada a espectrometra de masas (LC-MS) que
permiti la determinacin de trazas de compuestos farmacuticos en plantas de
tratamiento de agua (Letzel et al. 2015); los anteriores proyectos todos basados en
anlisis de aguas para encontrar dichos contaminantes emergentes, sin embargo,
hay un mtodo de dilucin isotpica sensible y preciso que fue desarrollado para
la determinacin simultnea de 17 productos farmacuticos y de cuidado personal
(PPCP) incluyendo 14 farmacuticos y 3 productos para el cuidado personal. El
mtodo propuesto es a travs de hidrlisis enzimtica, seguido por espectrometra
36
de masas secuencial de limpieza usando la cromatografa de gel de slice y
cromatografa de permeacin en gel, y el anlisis por cromatografa lquida de
ultra-alto rendimiento con tndem y en este caso en vez de agua se analizaron
rganos y tejidos (Tanoue et al, 2014).
4.6. EXTRACCIN EN FASE SOLIDA (SPE)
A mediados de los aos 70 se introduce un mtodo alternativo de extraccin,

llamado extraccin en fase slida (SPE o solid phase extraction) el cual consiste
en un dispositivo en forma de reservorio de una jeringa, en el cual se introduce un
material adsorbente (fase estacionaria) que cumple la funcin de atrapar o retener
una sustancia que est contenida en un solvente determinado (fase mvil). Es as
que la SPE comprende la interaccin de tres componentes descritos: el material
adsorbente, el analito y el solvente (Zwir, 2006).
La extraccin en fase slida (SPE) es una tcnica conveniente para evitar el uso
de grandes cantidades de disolventes orgnicos en los pasos de pre-
concentracin y extraccin. Se utiliza principalmente para el enriquecimiento de
muestras de agua con ventajas sobre la extraccin lquido-lquido (LLE), tales
como:
a) Reduccin en las cantidades de disolventes utilizados.
b) Extracciones sin inconvenientes por la formacin de emulsiones.
c) Eficacia de extraccin.
d) Facilidad de automatizacin (Becerril, 2012).
El principio de la SPE es similar a la de extraccin lquido-lquido (LLE), el cual

consiste en un reparto de solutos entre dos fases. Sin embargo, en vez de dos
fases lquidas inmiscibles, como en LLE, la SPE implica la particin entre un
lquido (o matriz de la muestra solvente con los analitos) y una fase slida o fase
estacionaria (material adsorbente). La introduccin de un amplio espectro de
materiales absorbentes en los procedimientos de anlisis dio un nuevo impulso
para el desarrollo de la metodologa SPE desde la dcada de 1960 hasta finales
de los 80 (Zwir, 2006).
37
Figura 3. Diagrama de proceso SPE
Tomado de: (Zwir, 2006).
Como se indica en la figura 2, el primer paso consiste en un acondicionamiento del

material adsorbente con una sustancia apropiada que solvente los grupos
funcionales de dicho material. Luego, la solucin que contiene el frmaco en este
caso. La columna contiene ahora los analitos e impurezas, los cuales se lavan con
un solvente apropiado que eluye las impurezas, y preserva en analito en la
columna.
La SPE en fase normal hace referencia a un sistema en el cual el material

adsorbente es ms polar que la fase mvil o la solucin de la muestra. La SPE en
fase reversa se refiere a un sistema en el cual el material adsorbente es menos
polar que la fase mvil o la solucin de la muestra (Zief). La extraccin en fase
slida se compone de tres modalidades de uso, consistentes en la limpieza o
clean up, concentracin del analito y remocin de la matriz. En el clean up se
busca que el material adsorbente o fase estacionaria retenga el analito, mientras
que el solvente o fase mvil arrastra las impurezas (Vega, 2006).
La concentracin del analito se da cuando ste est retenido en el material

adsorbente y es eluido por un volumen de solvente inferior al que inicialmente lo
contena previo atrapamiento, lo que resultar en un extracto enriquecido con el
analito. En la remocin de la matriz, la fase estacionaria cumple un papel inverso
al del clean up, donde las impurezas son retenidas mientras que el solvente
arrastra el analito a travs de la fase estacionaria. El correcto desarrollo de la SPE
depende fundamentalmente de un profundo conocimiento de las caractersticas
qumicas del analito tales como su ndice de polaridad, peso molecular, estructura
qumica, grupo funcional y otras como la solubilidad en solventes comunes en la
tcnica (Vega, 2006).
Aunque en este trabajo se est utilizando GC acoplado a FID los anlisis

modernos se estn enfocando en otras metodologas de aislamiento y
preconcentracin, usado en diferentes investigaciones: la extraccin lquido-lquido
38
(LLE), la extraccin en fase slida (SPE) y la microextraccin en fase slida en la
modalidad de espacio de cabeza (HS-SPME). Estos tratamientos de muestra se
complementan con anlisis por cromatografa de gases acoplada a espectrometra
de masas (GC-MS) y cromatografa de lquidos acoplada a espectrometra de
masas (LC-MS). Estas investigaciones han arrojado como resultado que en la
LLE y SPE se consiguen mejores resultados en cuanto a sensibilidad y nmero de
compuestos medibles. La SPE es un proceso que consume menos tiempo y es
ms respetuoso con el medioambiente que la LLE, ya que utiliza una menor
cantidad de disolvente. Dependiendo de la naturaleza qumica de las distintas
familias de compuestos seleccionadas la tcnica de extraccin es diferente
(Molina, 2014).
La SPE se utiliza normalmente para la extraccin de analitos polares o

semipolares. Muchos factores influyen en la eficiencia del proceso de SPE, pero
los dos ms importantes son la capacidad del absorbente y la retencin de los
analitos en l. Existe en el mercado una amplia gama de adsorbentes como las
slices enlazadas qumicamente con cadenas alqulicas (C-18, C-8) o grupos
polares (-CN, -NH2), polmeros porosos (estireno-divinilbenceno), Florisil (silicato
de magnesio activado) y carbn grafitizado. Grupos funcionales inicos como el
cido carboxlico o los grupos amino tambin pueden enlazarse a slice o
polmeros para crear adsorbentes de intercambio inico.
La SPE en comparacin con al LLE es ms selectiva, reproducible, con un gasto

bajo de disolventes orgnicos y fcilmente automatizable, pero debido a que hay
que filtrar la muestra previamente a su paso por el cartucho, no se consigue
extraer los compuestos absorbidos en la materia slida de las muestras acuosas
que la contengan (Molina, 2014).
Por medio de esta tcnica se realiz un estudio en Espaa donde el objetivo fue
evaluar el comportamiento de una variedad de contaminantes orgnicos, de los
cuales fueron identificados 14 contaminantes emergentes en un humedal de flujo
superficial a gran escala alimentado con un efluente secundario. Los compuestos
encontrados fueron frmacos como (cido clofbrico , carbamazepina , cafena ,
ketoprofeno , diclofenaco , ibuprofeno y naproxeno), fragancias (metil
dihidrojasmonato , galaxolide y tonalide ), herbicidas ( mecoprop , MCPA y
terbutilazina ) y medicamentos veterinarios ( flunixina ) clofbrico. (Matamorros,
2008)
39
4.7. EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO (LLE)
Este tratamiento de muestra est basado en la solubilidad relativa de un analito en

dos fases inmiscibles y est gobernada por el coeficiente de distribucin o reparto
que es la relacin entre las concentraciones de analito en cada una de las fases
en condiciones de equilibrio. El procedimiento experimental consiste en mezclar
en un embudo de decantacin, un volumen determinado de muestra con uno o
varios volmenes de disolvente o mezcla de disolventes orgnicos de polaridad
similar a la de los analitos e inmiscible con la muestra. Normalmente para
aumentar la cantidad de analito extrado en la fase deseada, se suele repetir la
extraccin varias veces. Para aumentar la selectividad de la tcnica se pueden
adicionar sales inorgnicas que facilitarn el paso del analito a la fase orgnica.
Otro parmetro a controlar es el pH de la muestra, de forma que es acidificada
para que los analitos cidos pasen a la fase orgnica ms fcilmente, y se
alcaliniza para que los analitos bsicos sean extrados. Entre los inconvenientes
que presenta esta tcnica de extraccin se encuentran la elevada cantidad de
disolvente, los bajos valores de la constante de reparto, las interferencias de
matriz o la formacin de emulsiones difciles de romper. Pero presenta la ventaja
que las muestras acuosas no tienen que ser filtradas previamente, por lo que los
compuestos que se encuentran adsorbidos en las partculas slidas tambin son
extrados. La LLE se suele aplicar a la separacin de analitos no polares o
semipolares en muestras acuosas empleando disolventes como n-hexano,
ciclohexano, diclorometano o acetato de etilo (Molina, 2014).
A partir de esta tcnica se desarroll una metodologa analtica basada en la

extraccin lquido-lquido (LLE) y cromatografa de gases-espectrometra de
masas de alta resolucin (GC-HRMS) con un analizador de sector magntico de
doble enfoque, para el anlisis de 14 sustancias prioritarias, entre las que se
encuentran plaguicidas como el alacloro o la simazina y compuestos teres de
difenilo polibromados (PBDEs). El mtodo se valid utilizando muestras de
efluentes de agua residual fortificadas a dos niveles de concentracin (0.1 y 1
gL1), obtenindose recuperaciones comprendidas entre 80 y 120% para todos
los analitos estudiados, excepto para los triclorobencenos (~50) (Robles, 2014).
4.8. MICROEXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPME)
La SPME utiliza una fibra de slice fundida recubierta de un material adsorbente,

en general un recubrimiento polimrico, que se utiliza para la extraccin de
compuestos orgnicos y/o inorgnicos voltiles derivados del mercurio, arsnico,
40
etc. La fibra se encuentra en el interior de un tubo hueco, de tal forma que sta
puede retraerse y extraerse de su interior, quedando as expuesta a la muestra.
Su uso implica dos etapas bien diferenciadas: primero la etapa de extraccin
(retencin de los analitos en la fase estacionaria mediante procesos de absorcin
o adsorcin), que puede llevarse a cabo sumergiendo directamente la fibra en el
interior de la muestra, o bien, mantenindola en el espacio en cabeza que est en
equilibrio con la disolucin; y, segundo, la etapa de desorcin, que se puede hacer
trmicamente (en el inyector de un cromatgrafo de gases), o bien, utilizando
disolventes orgnicos (de forma manual, o acoplado con un cromatgrafo de
lquidos) (Robles, 2014).
Uno de los proyectos utilizados con esta tcnica para frmacos se desarroll y
optimiz por medio del mtodo Microextraccin en Fase Slida seguido de
Cromatografa de Gases-Espectrometra de Masas (MEFS-CG-EM) para la
determinacin de ibuprofeno, naproxeno, clorofeno, triclosn y bisfenol
catalogados dentro de los contaminantes emergentes o productos farmacuticos
de cuidado personal en aguas residuales (Pea, 2015).
4.9. EXTRACCIN POR SORCIN EN BARRA MAGNTICA AGITADORA

(SBSE)
Es una tcnica de extraccin que est basada en los mismos principios que la
SPME pero viene a mejorarla en algunos aspectos. Su aparicin data del ao
1999 cuando se public la informacin acerca de la teora y prctica de este nuevo
proceso de extraccin. Consiste en poner en contacto la muestra acuosa
directamente o por espacio de cabeza con una barra magntica que est
recubierta por una pelcula de polmero de PDMS. Seguidamente esta barra se
aclara con agua, se seca y se introduce en un tubo de vidrio el cual se coloca en la
unidad de desorcin trmica (desarrollada comercialmente para su acoplamiento
con el sistema de inyeccin del cromatgrafo) para la introduccin de los analitos
normalmente en un GC por desorcin trmica. Esta desorcin tambin se puede
producir por accin de un disolvente (Robles, 2014).
Con esta tcnica se desarroll, optimiz y valid de un mtodo de residuos

mltiples para la determinacin simultnea de 102 contaminantes, incluyendo
fragancias, filtros UV, repelentes, disruptores endocrinos, biocidas, hidrocarburos
aromticos policclicos (PAHs), bifenilos policlorados (PCB), y varios tipos de
pesticidas en matrices acuosas. Las muestras de agua fueron procesados
mediante la extraccin de barras magnticas (SBSE) despus de la optimizacin
41
de varios parmetros: tiempo de agitacin, la fuerza inica, la presencia de
modificadores orgnicos, pH, y el volumen del agente de derivacin. El protocolo
optimizado mostr porcentajes aceptables de recuperacin (50-100%) y los lmites
de deteccin por debajo de 1 ng L-1 para la mayora de los compuestos (Pintado,
et al, 2014).
4.10. ESTANDARIZACIN
El proceso de estandarizacin de una metodologa analtica que consiste en

verificar y documentar, que sta conduzca en un alto grado de seguridad, a la
obtencin de resultados precisos y exactos dentro de los atributos y
especificaciones de calidad preestablecidos (Aguirre, 2001). La estandarizacin de
un mtodo analtico es un proceso riguroso que dependiendo de la tcnica a la
que pertenezca el mtodo, la matriz, el analito, la cantidad de parmetros de la
estandarizacin, y de la logstica empleada para su desarrollo, puede requerir de
un tiempo ms o menos considerable (Coy, 1999).
Los requisitos analticos para un uso determinado establecen los parmetros o

criterios de calidad del mtodo a utilizar para resolver el problema. Estos criterios
de calidad, pueden ser de tipo estadstico. En estos figuran los parmetros
fundamentales de exactitud (relacionados con la trazabilidad) y precisin
(relacionados con la incertidumbre) y los secundarios de selectividad, sensibilidad,
limites de deteccin y cuantificacin (Rius, 2000).
La validacin de mtodos proporciona una idea de las capacidades y limitaciones

que posee un mtodo analtico cuando se utiliza para el anlisis rutinario, una vez
se ha completado el proceso de validacin, es muy importante documentar el
procedimiento de tal forma que el mtodo analtico pueda reproducirse sin ninguna
ambigedad (Rius, 2000).
4.10.1. Curva De Calibracin
Se inyectan cantidades exactas de la muestra pura. Luego se representan los

valores de las reas del pico en funcin del peso conocido inyectado. Se obtiene
as una curva de calibracin; que debe ser lineal y pasar por el origen. Luego se
inyecta una cantidad exacta del material conocido. Se mide el rea del pico y a
42
partir de la curva de calibracin se calcula la cantidad de muestra presente en el
material desconocido.
Ecuacin 2. Cantidad de muestra presente en material desconocido
4.10.2. Registro De Datos O Sistema De Datos
Es el dispositivo en el cual rpidamente se interpreta la seal del GC por

medio de un hardware. Generalmente hay dos tipos de sistemas utilizados, el
integrador-computadores y el microprocesador basado en integradores, este
ltimo tiene la capacidad de convertir la seal de anlogo a digital produciendo el
cromatograma como seal anloga y el digital para reportar anlisis cuantitativos
(Shirey et al., 1999).
4.10.3. Parmetro De Calidad
Los parmetros de calidad son los criterios cuantitativos que se utilizan para
decidir si un mtodo es adecuado o no para resolver un determinado problema
analtico. Son por lo tanto los criterios que se utilizan en la validacin de los
mtodos analticos (para demostrar su validez en la resolucin de un problema de
este tipo). Los parmetros de calidad son la materializacin, expresin numrica
de caractersticas o indicadores de calidad de los mtodos tales como la
precisin, exactitud, sensibilidad, selectividad, linealidad, rango, lmite de
deteccin y lmite de cuantificacin (Sierra et al., 2010).
4.10.4. Exactitud
Se define exactitud como la cercana de la medida de una variable a su valor

verdadero (Coy, 1999). Cuando un mtodo posee un alto valor de exactitud, la
medida de la muestra proporciona un valor que idealmente es idntico al valor
verdadero (previamente) (Morante et al, 2007). Generalmente la exactitud de un
43
mtodo se calcula mediante estudios de porcentajes de recuperacin, pero
tambin se puede determinar por anlisis de un material estndar o de referencia,
as como por comparacin con un mtodo previamente validado.
4.10.5. Precisin
Se define precisin como el grado de concordancia entre los resultados de

pruebas individuales cuando el procedimiento es aplicado repetidas veces para
una muestra homognea. Generalmente, la precisin de un mtodo se expresa
en trminos de desviacin estndar (SD) o desviacin estndar relativa en
porcentaje (coeficiente de variacin, RSD) (Morante et al, 2007). La precisin de
un mtodo puede estimarse de varias formas:
Repetitividad Instrumental: Grado de concordancia entre los resultados

obtenidos cuando una misma muestra es analizada repetidamente por el
mismo analista, en el mismo equipo y bajo las mismas condiciones en un
corto periodo de tiempo.
Repetitividad del Mtodo: Grado de concordancia entre los resultados
obtenidos cuando el mtodo es aplicado repetidamente por el mismo
analista, en el mismo equipo y en un corto periodo de tiempo.
Precisin Intermedia: Grado de concordancia entre los resultados que se
obtienen cuando se realizan pequeas variaciones en el laboratorio como
distintos das, diferentes analistas o equipos.
Reproducibilidad: Grado de concordancia entre resultados obtenidos
cuando el mtodo es aplicado en distintos laboratorios.
Los estudios de precisin de un mtodo analtico deben realizarse con un nmero

suficiente de alcuotas que permita un clculo estadstico correcto de la desviacin
estndar y del coeficiente de variacin.
4.10.6. Lmite De Deteccin Y Selectividad
El lmite de deteccin de un analito por un mtodo instrumental se puede definir

como aquella concentracin que proporciona una seal significativa del blanco o
seal de fondo. El trmino debe aclararse en trminos estadsticos.
44
Esto sucede cuando la distancia entre ybl y M es aproximadamente 3 veces la
desviacin estndar del blanco, de forma que la mnima seal analtica
distinguible, ym seria:
Ecuacin 3. Lmite de deteccin
Los trminos lmites de deteccin y sensibilidad no son exactamente sinnimos.

La sensibilidad de una tcnica se define correctamente como la pendiente de
calibracin, y si este es lineal, puede medirse en cualquier punto de l. Sin
embargo, el lmite de deteccin de un mtodo se calcula con ayuda de la zona del
calibrado prximo en el origen, y para ello se utiliza, tanto la pendiente, como la
ordenada en el origen.
El intervalo til de un mtodo analtico se considera como el margen de

concentraciones, comprendido entre la concentracin ms pequea a la que
pueden realizarse medidas cuantitativas (lmite de cuantificacin).
El intervalo til de los mtodos analticos deber ser, al menos, de dos rdenes de
magnitud.
Los mtodos instrumntales son ms sensibles que los mtodos qumicos. Esto
implica que son capaces de detectar y determinar cantidades de analito mucho
ms pequeos que los mtodos clsicos, lo cual los hace particularmente tiles
para el anlisis de trazas, de gran importancia, por ejemplo, en muestras
biolgicas y medio ambientales (Hernandez, 2002).
4.10.7. Lmite De Deteccin Y Lmite De Cuantificacin
El lmite de deteccin (LOD) se puede definir como la concentracin ms baja del

analito presente en una muestra que puede ser detectable, pero no
necesariamente cuantificable, en las condiciones experimentales de trabajo. El
lmite de cuantificacin (LOQ) se puede definir como la concentracin ms baja
del analito presente en una muestra que puede ser determinada con una
precisin y exactitud aceptable en las condiciones experimentales de trabajo.
Ambos se expresan normalmente en trminos de concentracin de analito en la
muestra, y en un mtodo instrumental se pueden determinar de varias formas. En
algunos casos se determinan como la relacin seal/ruido (S/R) obtenida entre
resultados de muestras con concentraciones conocidas de analito y resultados
45
obtenidos en muestras blanco y se establece que el LOD es la concentracin que
proporciona una relacin S/R de 2 o 3 y que el LOQ es la concentracin que
proporciona una relacin S/R de 10. En otros casos se estiman a travs de la
desviacin estndar multiplicada por un factor de 10 proporciona una estimacin
de la seal mnima cuantificable, siendo este ltimo el modo ms usado para
obtener este parmetro estadstico (Filho et al., 2010).
Hay muy diversos mtodos de anlisis y equipos instrumentales, dependiendo de

cada uno se elegir el mtodo para hallar tanto el lmite de deteccin como el de
cuantificacin, en los siguientes prrafos se mencionaran algunos mtodos para
hallarlos.
4.10.7.1. Mtodo Basado en la Relacin Seal/Ruido.
Este es uno de los ms conocidos y empleados, requiere que el procedimiento de

anlisis sea instrumental y que proporcione una seal blanco, un ruido de fondo o
una lnea de base, es decir una seal residual a concentracin de cero analito
(cromatografa de gases o liquida, espectrofotometra UV-visible). Este
procedimiento presenta la desventaja de que en numerosas ocasiones al llevar a
cabo la comprobacin experimental del LC calculado, se observa que es posible
obtener resultados igualmente precisos y exactos aun cuando se desciende ms
en la concentracin limite (Aguirre, 2001).
4.10.7.2. Mtodo Basado en la Desviacin Estndar de la Respuesta del

Blancoy la Pendiente de la Recta de Calibrado.
De acuerdo con la IUPAC, puede calcularse el LD y LC de un mtodo analtico a

partir del conocimiento de la desviacin estndar atribuible a la respuesta de una
muestra y la pendiente de la recta de calibrado del analito. La expresin a aplicar
para este clculo vara en funcin de si el mtodo instrumental empleado corrige la
seal frente a un blanco (mtodos espectrofotomtricos) o no (mtodos
cromatogrficos) (Lpez, 2008).
46
4.10.7.3. Mtodo Basado en la Extrapolacin de la Recta de Calibrado a
concentracin Cero.
Se trata de un procedimiento aplicable tambin a mtodos analticos

instrumentales que proporcionan resultados numricos y dirigido a evitar el
clculo, en ocasiones costoso en tiempo, de la seal media del blanco y su
desviacin estndar. Utilizando como en el anterior la pendiente de la recta de
calibrado, pero en este caso sustituye el valor real de un blanco, por la
extrapolacin de dicha recta
4.10.8. Linealidad Y Rango
La linealidad de un mtodo analtico es su habilidad para proporcionar resultados

que sean, directamente o mediante transformacin matemtica, proporcionales a
la concentracin de analito presente en la muestra dentro de un rango
determinado. El rango de un mtodo analtico puede definirse como el intervalo de
concentraciones, incluyendo la ms baja y la ms alta en el cual se pueden
realizar determinaciones del analito con adecuada precisin, exactitud y linealidad
(Sierra et al., 2010).
La linealidad de un mtodo analtico se determina mediante el tratamiento

matemtico de los resultados obtenidos en el anlisis de disoluciones patrn con
diferentes concentraciones conocidas de analito incluidas en el rango. El rango de
un mtodo debe ser comprobado realizando un estudio conveniente de precisin,
exactitud y linealidad en los extremos del mismo.
El rango se define como el intervalo entre la concentracin superior e inferior de

analito para el cual se ha demostrado la correcta precisin, exactitud y linealidad
del mtodo descrito (Lpez, 2008).
Para evaluar la linealidad existen unos criterios mnimos aplicables a cualquier

procedimiento.
Dentro del rango establecido se recomienda estudiar al menos 4 niveles de
concentracin. Estadsticamente lo correcto sera analizar las muestras de forma
aleatoria, no obstante, se establece como criterio practico analizarlas en sentido
creciente de concentracin para minimizar posibles efectos memoria en el equipo.
Para realizar los anlisis se recomienda hacer pesadas independientes, ya que
as se elimina el posible error sistemtico que se podra arrastrar partiendo de una
sola pesada y realizando diluciones. No obstante, para evaluar la linealidad en las
47
impurezas se suelen utilizar sucesivas diluciones ya que normalmente se trabaja
en niveles de concentracin muy bajos y esto dificultara las pesadas (Lpez,
2008).
4.10.9. Sensibilidad
Es la capacidad de un mtodo para distinguir pequeas diferencias en la

concentracin del analito. Los factores que determinan la sensibilidad son la
pendiente de la recta de calibrado y la precisin, de manera que si dos mtodos
tienen igual precisin ser ms sensible que tenga una recta con mayor pendiente,
y si dos mtodos tienen igual pendiente ser ms sensible el que presente mayor
precisin. La sensibilidad de un mtodo puede expresarme como:
Sensibilidad de la calibracin (m): Es la pendiente de la recta de calibrado.

Sensibilidad Analtica (): Se expresa como la pendiente de la recta de
calibrado dividida entre la desviacin estndar de las medidas (precisin).
La sensibilidad de calibracin tiene la ventaja de que es independiente de la

concentracin. Por su parte, la sensibilidad analtica tiene la ventaja de ser
insensible a los factores de amplificacin.
En contraste con el lmite de deteccin, la sensibilidad de un mtodo est definida

como la habilidad para distinguir entre diferentes concentraciones. Para mtodos
donde la respuesta con respecto a la concentracin es una funcin lineal, la
sensibilidad es constante con respecto a la concentracin y es igual a la pendiente
de la curva de calibracin. Contrariamente a las funciones lineales, la sensibilidad
de mtodos cuando su respuesta es no-lineal cambia con la concentracin del
analito (Lpez, 2008).
4.10.10. Porcentaje De Recuperacin (% REC)
Proporcin de la cantidad de analito, presente en la porcin de la muestra

adicionado a sta, que es cuantificada por el mtodo de ensayo (Castro, 2010).
Normalmente se utiliza para evaluar la recuperacin en porcentaje (% de

recuperacin) del analito presente o agregado a una muestra de control de
calidad, evala la eficiencia de extraccin, proceso de preparacin o interferencias
que pueden existir al aplicar el mtodo de ensayo.
48
El porcentaje de recuperacin (% R) se calcula de la siguiente manera:
Ecuacin 4.Porcentaje de recuperacin
Dnde:
CF = Concentracin del analito medida en la muestra fortificada
CU = Concentracin de analito medida en la muestra sin fortificar
CA = Concentracin de analito adicionada.
4.10.11. Repetitividad
Es la precisin expresada como la concordancia obtenida entre las

determinaciones independientes realizadas en el mismo laboratorio, bajo las
mismas condiciones de operacin en un intervalo corto de tiempo (mismo da), por
un mismo analista, en la misma muestra homognea y en el mismo equipo. Es
funcin de la variabilidad que tiene el equipo de medida o calibre. Se expresa
como el coeficiente de variacin %CV (Rubio, M., Vallejo, A. 2014)
4.10.12. Reproducibilidad
Es un concepto de precisin relacionado con medias hechas bajo iguales

condiciones pero con variacin de al menos un factor. Expresa la precisin entre
laboratorios como resultado de estudios interlaboratorios diseados para
estandarizar la metodologa.
Variacin de la media de las mediciones realizadas por diferentes personas

usando el mismo equipo de medicin para medir las mismas caractersticas de las
mismas piezas. Es funcin de la variabilidad del operador (Rodrguez, 2011).
49
4.11. NORMATIVIDAD GENERAL
Las directrices sobre la regulacin de estos productos an no existe en nuestro

pas, sin embargo a nivel internacional el tema ha sido regulado desde hace ya
varios aos. Por ejemplo la Administracin de Drogas y Alimentos de los EE.UU.
(FDA) ha regulado productos farmacuticos en el medio ambiente desde 1977
bajo los auspicios de la Ley Nacional de Poltica Ambiental de 1969. En Canad,
est en desarrollo un requisito para la evaluacin ambiental de los productos
farmacuticos (USEPA, 2002). Para Colombia se espera en el nuevo marco
normativo para manejo de vertimientos, la introduccin de este tipo de
contaminantes como compuestos que requieren control en la descarga de las
aguas residuales (grupo de investigacin en agua y saneamiento UTP, 2014)
afortunadamente ya se estn adelantando estudios como estandarizaciones y
desarrollos de tcnicas que pueden contribuir a estas normatividades en donde
indiquen lmites mximos de concentraciones y obligue a las plantas de
tratamiento a seguir con los estndares.
Actualmente debido a que la contaminacin por frmacos se da principalmente por

vertimientos el decreto que se acopla es el 3039 de 2010 que indica que al estado
le corresponde garantizar la calidad del agua para consumo humano. As mismo,
regular entre otros aspectos, la clasificacin de las aguas, sealar las que deben
ser objeto de proteccin y control especial, fijar su destinacin y posibilidades de
aprovechamiento, estableciendo la calidad de las mismas y ejerciendo control
sobre los vertimientos que se introduzcan en las aguas superficiales o
subterrneas, interiores o marinas, a fin de que estas no se conviertan en focos de
contaminacin que pongan en riesgo los ciclos biolgicos, el normal desarrollo de
las especies y la capacidad oxigenante y reguladora de los cuerpos de agua.
Siendo este decreto tan claro y con toda la problemtica mencionada es evidente
que la calidad del agua se afecta y no se est ejerciendo el control ni tratamiento
con el fin de remediar la contaminacin por frmacos como contaminantes
emergentes. Las aguas o residuos lquidos provenientes del uso domstico,
comercial e industrial se introducen en las aguas superficiales, subterrneas,
interiores y marinas y estas alteran los ecosistemas, el ciclo del agua y el sano
desarrollo de especies vivas que consumen y son dependientes de este recurso
natural.
As mismo otra normatividad que aplica es la resolucin 2115 de 2007 por medio
de la cual se sealan caractersticas, instrumentos bsicos y frecuencias del
sistema de control y vigilancia para la calidad del agua para consumo humano.
50
El ciclo del agua repercute y no hay tratamientos eficientes para los contaminantes
emergentes en las plantas de tratamiento lo que conllevan a que el recurso hdrico
que se dirige a nuestros hogares en forma de agua potable llega con trazas de
estos componentes y terminamos siendo nosotros mismos quienes los
consumimos.
51
5. METODOLOGIA
La metodologa utilizada en el desarrollo de la tcnica de cromatografa de gases

(GC-FID) para la determinacin de contaminantes emergentes tipo productos
farmacuticos se llev a cabo a travs de los siguientes pasos.
5.1. COMPRA DE ESTNDARES Y REACTIVOS
En la realizacin de las prcticas de laboratorio fue necesario comprar, adquirir o

disponer de analitos, reactivos, materiales e instrumentos que permitieran el pleno
desarrollo de las curvas de calibracin y el anlisis de productos farmacuticos
siendo necesaria la:
5.1.1. Seleccin Y Compra De Estndares Disponibles
Ibuprofeno
Diclofenaco
Carbamazepina
Cafena
5.1.2. Seleccin y Compra de Reactivos Y Estndares
Agua destilada de la Escuela de Qumica UTP

cido clorhdrico concentrado
Hexano grado HPLC
Acetato de etilo grado HPLC
Acetonitrilo grado HPLC
Metanol grado HPLC
Ibuprofeno Estndar analtico
Cafena Estndar analtico
Carbamazepina Estndar analtico
Diclofenaco Estndar analtico
5.1.3. Compra y Prstamo de Equipos y Materiales
Estufa
52
Bomba al vaco
Colector de SPE al vaco de doce puestos
Equip para filtracin al vaco
Cabina para gases
Pinzas para soporte universal
Soporte universal
Aro analtico
Papel filtro cualitativo
Papel indicador de pH
Par de guantes
Probeta de 200 mL
Probeta de 1000 mL
Beacker de 500 mL
Beacker de 100 mL
Beacker de 200 mL
Pipetas aforadas de 2 mL
Micropipeta
Microjeringa
Jeringa
Filtro de jeringa (filtro Banda azul de 0,45 m)
Vidrio de reloj
Varilla agitadora
Embudo de vidrio pequeo
Cartucho de ENVICARB para la SPE.
5.2. DESARROLLO DE LAS CURVAS DE CALIBRACIN
Las curvas de calibracin correspondientes de los 4 productos

farmacuticos (Diclofenaco, Ibuprofeno, Carbamazepina y Cafena) fueron
desarrolladas en un rango de concentracin entre 5 ppm y 53,3 ppm,
compartiendo el mismo vial para las mismas concentraciones, el procedimiento
realizado es el indicado en el diagrama de flujo de la figura 5 utilizando el equipo
de cromatografa de gases FID del laboratorio de la Escuela de Qumica de
la Universidad Tecnolgica de Pereira.
53
Figura 4. Mtodo cromatogrfico de gases
La siguiente imagen muestra los frmacos (Diclofenaco, Carbamazepina

ibuprofeno y cafena) respectivamente organizados en la imagen, adquiridos de la
marca Sigma Aldrich y enseguida de estos en igual orden las soluciones madres
preparadas a la concentracin de 1000 ppm para las diluciones necesarias de las
curvas de calibracin.
54
Imagen 1. Estndares analticos y soluciones madre
5.3. DESARROLLO DE LA TCNICA DE EXTRACCIN EN FASE

SOLIDA
Esta tcnica fue necesario implementarla ya que es necesario realizarle un

tratamiento previo a la muestra para poder llevarla al cromatgrafo de gases y una
vez hechas las curvas de calibracin se procedi a la contaminacin de 1 L de
agua destilada con los analitos (Ibuprofeno, Diclofenaco, Carbamazepina y
Cafena) a una concentracin de 40 ppm de muestras comerciales y as proceder
a la tcnica SPE de los productos farmacuticos utilizando
cartuchos Supelclean Envi-Carb/LC-NH2 SPE tuvo 500mg de 6 mL de
marca SIGMA.
Imagen 2. Matraz con contaminacin de

muestra real
55
Imagen 3. Filtracin al vaco
Del litro contaminado se tomaron 200 mL, esta cantidad se filtr al vaco (imagen
3) para eliminar partculas en suspensin y se acidifico la muestra de agua con
HCL concentrado a pH 2 y paralelo a este procedimiento se iban acondicionando
los cartuchos SPE (imagen 4) percolando primero con 3 mL de MeOH, luego 3 mL
de H2O y finalmente con 3mL de H2O acidificado a pH 3 con HCL a una velocidad
de flujo de 10 mL/min.
Imagen 4. Acondicionamiento del Cartucho para la SPE
56
A travs de un colector de SPE se filtraron al vaco los 200 mL de muestra en
cartuchos de SPE nombrados anteriormente donde su objetivo consisti en pasar
la muestra a travs de la fase estacionaria, enriquecida previamente, para luego
proceder a percolar los analitos all retenidos eluyndolos con 5 mL de (5% Acido
formico) en MeOH, luego se desorbi el extracto evaporando hasta sequedad
bajo una corriente suave de nitrgeno, adicionalmente se reconstituyo en 1,5
mL de metanol para su preparacin a la siguiente tcnica Cromatografa de gases.
Imagen 5. Colector SPE de 12 puestos
5.4. ANLISIS DE MUESTRAS REALES
5.4.1. Contaminacin Con Las Muestras Reales
Para el anlisis de trazas de compuestos orgnicos, esta etapa principalmente

comprende la extraccin, que sirve para aislar los compuestos de inters de
la matriz, y finalmente la concentracin de los compuestos objetivo para mejorar
(enriquecer) y, al mismo tiempo, reducir los efectos de la matriz, es decir limpiar la
muestra (Becerril, 2012).
La contaminacin con muestras reales fueron medicamentos comprados en

drogueras, macerados y pesados para su siguiente dilucin como se describi en
el paso anterior de SPE.
57
Despus de reconstituidas las muestras se procedi a filtrar cada una de ellas
(imagen 6) con el fin de evitar contaminantes que puedan haberse adquirido
durante el procedimiento y que pudiesen afectar el equipo.
Imagen 6. Filtracin de la muestra antes de inyeccin
El procedimiento paso a paso de cmo realizar el tratamiento se describe en el

diagrama de flujo ilustrado en la (figura 6).
5.5. CARACTERISTICAS DEL CROMATGRAFO DE GASES
Las Muestras se inyectaron en un equipo de cromatografa de gas capilar - FID

autoinyector, automuestreador marca Shimadzu GC 2014, y se utilizaron rampas
para las corridas de los 4 analitos y as posteriormente realizar el anlisis
estadstico.
5.5.1. Gas De Portador
Se utiliz helio como gas portador (99,9995% de pureza) en una constante la

velocidad lineal promedio de 40 cm s-1.
58
Figura 5. Mtodo SPE para extraccin de los frmacos y clean up
59
Imagen 7. Equipo de cromatografa
5.5.2. Mtodo Cromatogrfico
Se utiliz el equipo de cromatografa de gas a una velocidad lineal promedio

constante de 40 cm.s-1. El horno mantuvo una temperatura de 50C durante 2 min
luego aumenta la temperatura de a 15C/min hasta llegar a 120C. Luego se sigue
la misma metodologa de calentamiento de: 4C/min hasta 160C, 7C/min hasta
220C,5C/min hasta 290C y10C/min hasta 300C manteniendo esta
temperatura por 5 minutos ms.
Un volumen de 1 L de muestra se inyecto en el modo splitless a una temperatura

del inyector de 260 C con una purga del inyector de tiempo de activacin de 1
minuto (Matamorros, 2005-2006).
5.5.3. Columna cromatografa
Las caractersticas de la columna capilar son 30 m x 0.25 mm id x 0.25 m DB-5.
5.5.4. Calibracin
Para estimar la concentracin de los analitos en la muestra de manera confiable

se prepararon unas curvas de calibracin segn sus concentraciones que van
desde 5 ppm a 53,3 ppm
60
5.5.5. Control de calidad
Se garantiz la realizacin las curvas de calibracin con estndares certificados

por Sigma Aldrich, que garantiza la concentracin, pureza y alta calidad de estos
reactivos y el buen almacenamiento de estos.
61
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
Inicialmente se analiz cada uno de los analitos de inters con la tcnica

cromatografca identificando tiempos de retencin para luego realizar el anlisis
cromatogrfico de la mezcla de los 4 estndares de frmacos marca SIGMA
(Carbamazepina, Ibuprofeno, Diclofenaco y Cafena) todos a una concentracin
de 40ppm, que despus de inyectado en el cromatgrafo arroj ciertos resultados.
Los cromatogramas muestran buenos resultados contando con la ventaja de que

no hubo solapamiento entre ellos pudiendo as realizar el anlisis con la curva de
calibracin y esto fue gracias a que los 4 frmacos contaban con tiempo de
retencin aunque cercanos diferentes.
Los tiempos de retencin de los frmacos arrojados se describen a continuacin

en la tabla 3 con el fin de identificar claramente en que tiempo de retencin
apareci cada analito.
Tabla 3. Tiempo de retencin analitos
Analitos Tiempo de
retencin
Ibuprofeno 18.863
Cafena 24.582
Carbamazepina 25.833
Diclofenaco 28.799
Las curvas de calibracion se hicieron combinando los 4 farmacos, pero en un vial

diferente para cada concentracion. Dando como resultado los cromatogramas de
las figuras 7,8,9,10,11,12 y 13.
Figura 6. Cromatograma del Blanco
62
Figura 7. Cromatograma de analitos a 5 ppm
Tabla 4. Datos de analitos a 5 ppm
63
64
Figura 11. Cromatograma de analitos a 46,6 ppm
Tabla 8. Datos de analitos a 46,6 ppm
Figura 12. Cromatograma de analitos a 53,3 ppm
65
Tabla 9. Datos de analitos a 53,3 ppm
Las curvas de calibracin de todos los compuestos fueron arrojadas por el equipo,
todos los analitos a excepcin del ibuprofeno detectaron las concentraciones
desde 5 ppm, y el equipo al formar las curvas arroja datos como lo indican las
tablas 4,5,6,7,8 y 9 que fueron utilizados para el anlisis estadstico generando as
mayor coherencia y exactitud de estos.
Figura 13. Curva de calibracin del ibuprofeno
Tabla 10. Curva de calibracin del ibuprofeno
66
Figura 14. Curva de calibracin de la cafena
Tabla 11. Curva de calibracin de la cafena
Figura 15. Curva de calibracin del Carbamazepina
67
Tabla 12. Curva de calibracin del Carbamazepina
Imagen 8. Curva de calibracin del diclofenaco
Tabla 13. Curva de calibracin del diclofenaco
Despus de tener las curvas de calibracin listas se procedi a contaminar 1 L de

agua destilada con productos farmacuticos comerciales a una concentracin de
40 ppm, de esta se tomaron solo 200 mL para su tratamiento de SPE y despus
68
de todo el procedimiento indicado en la metodologa se corri la muestra en el
cromatgrafo de gases en el cual se analiz con dichas curvas de calibracin
arrojando las concentraciones recuperadas.
Figura 16. Cromatogramamuestra real
Tabla 14. Cromatogramamuestra real
Se realiz el anlisis de 200 mL de una muestra real contaminada en el laboratorio

de la escuela de qumica Universidad Tecnolgica de Pereira en un equipo de
cromatografa de gas capilar - FID autoinyector, automuestreador marca
Shimadzu GC 2014.
Las curvas de calibracin realizadas con cada uno de los frmacos usados son
estndares analticos de la empresa Sigma Aldrich la cual certificasu pureza y alta
calidad.
El resultado arrojado previamente se realiz por medio de una curva de

calibracin para cada frmaco con concentraciones en el rango de 5 ppm a 53.3
ppm que se exponen a continuacin.
69
Tabla 15. Rangos para curva de calibracin
Patrones de Concentracin
cadaanalito (ppm)
1 5
2 10
3 20
4 30
5 46.6
6 53.3
La tabla 16 indica segn la concentracin de los analitos el porcentaje de

recuperacin, mostrando que aunque si se recupera una parte de la muestra
inicial no es la esperada teniendo solo la Carbamazepina un porcentaje de
recuperacin representativo. Un factor qumico por los que se acudi a dicho
procedimiento es su similitud en polaridades, sin embargo hubo factores del medio
que afectaron por ejemplo el hecho de ser productos comerciales con una
mayoritaria cantidad de excipientes .
Tabla 16. Concentracin y % de recuperacin de analitos
Analitos Concentracin (ppm) % Recuperacin

Ibuprofeno 10.10276 25.15
Cafena 3.24379 8.109
Carbamazepina 32.00495 80.01
Diclofenaco 2.91641 7.291
Se puede observar que a pesar de que se parti de una cantidad igual de

concentracin de 40 ppm para los 4 analitos la concentracin final entregada por
el equipo vario considerablemente desde 2.91641ppm para el Diclofenaco
32.00495 ppm para la Carbamazepina lo cual nos indica como la tcnica de
extraccin en fase solida es ms confiable para unos frmacos que para otros y
que es conveniente hacer ensayos diferentes para cada frmaco con el fin de
afinar tcnicas apropiadas para cada uno de ellos.
La siguiente grafica est dada por la tabla 16 con el fin de mostrar grficamente
los resultados de porcentajes de recuperacin calculados.
70
Porcentaje de Recuperacin
90,00
80,00
70,00
60,00
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
1 2 3 4
% Recuperacin
Grafico 1. Resultados de los porcentajes de recuperacin de la

contaminacin
La necesidad de afinar mejor la tecnica SPE que no es el objetivo principal de este

trabajo de grado se sigue presentando para futuros proyectos de investigacin ya
que la tcnica solo dio un resultado representativo para la Carbamazepina segn
el porcentaje de recuperacin, las bases que entregan en este documento como lo
son las curvas de calibracin debidamente estandarizadas son un gran avance
debido a que aqu en Colombia no se haba tenido en cuenta esta problemtica y
aunque en otros pases ya han adoptado la tcnica se trat de tener marcos de
referencia para que los resultados fueran ptimos para los analitos. El llamado que
aqu se hace es que se tenga en cuenta la problemtica ambiental a la que nos
estamos enfrentando y que este estudio no se quede como un simple documento
sino que siga avanzando hasta que se pueda incluso implementar una norma en
donde se controlen estos y muchos ms contaminantes emergentes en los
tratamientos y vertimientos de agua.
71
7. TRATAMIENTO ESTADSTICO
Los parmetros estadsticos necesarios en la estandarizacin del mtodo para

cada curva de calibracin son los siguientes: R2 coeficiente de correlacin,relacin
lineal, exactitud, lmite de deteccin y lmite de cuantificacin.
Las curvas de calibracin se modelaron segn el mtodo de mnimos cuadrados

simple. Se evalu la pendiente y el intercepto mediante la regresin, los lmites de
deteccin y cuantificacin fueron calculados utilizando una extrapolacin de la
recta de calibrado a concentracin cero donde primero se obtuvo la pendiente, y
se realiz una lectura por triplicado del blanco, de la cual se obtuvo la desviacin
estndar. Todos los datos fueron arrojados por el software del equipo de GC
capilar - FID marca Shimadzu GC 2014 de la Escuela de Qumica UTP.
A partir de la relacin seal/ruido se calcularon los valores de lmite de deteccin y

lmite de cuantificacin, el LC se calcul para la concentracin que proporcion
una seal 10 veces superior a la seal producida por el ruido de fondo (blanco),
mientras que el LD es igual a la concentracin de analito que proporcion en una
seal 3 veces superior a este.
Los datos registrados para estas medidas se observan en la Tabla 17.
Tabla 17. Desviaciones estndar
Analitos Desviacin estndar

Ibuprofeno 3.683703 E-4
Cafena 5.224802 E-5
Carbamazepina 9.361327 E-6
Diclofenaco 2.458907 E-5
Tabla 18. Resultados estadsticos
Analitos Sensibilidad R2 Desvia- Limite de Limite de

(rea/ppm) cin del cuantificacin deteccin
blanco (ppm) (ppm)
(ppm)
Ibuprofeno 60132,9 0,9726 0,1008 1,008 5,5965
Cafena 55322,8 0,9509 0,1188 1,188 1,8064
Carbamazepina 87603,3 0,9987 0,0214 0,214 0,78024
Diclofenaco 61666,2 0,9951 0,0315 0,315 1,0103
72
8. CONCLUSIONES
Se logr el desarrollo de la tcnica cromatogrfica (GC-FID) para la

determinacin de contaminantes emergentes tipo frmacos como cafena,
Carbamazepina, diclofenaco e ibuprofeno con unas muy buenas curvas de
calibracin
Las metodologas analticas utilizadas en este trabajo de grado son

sencillas, rpidas y fiables para la determinacin de contaminantes
emergentes.
En cuanto a las lecturas que brind el cromatgrafo de gases con las

muestras corridas se not muy buena seal y deteccin de los analitos,
tanto a la hora de identificarlos como de cuantificarlo
Se documento la tcnica de extraccin en fase solida (SPE) para la

determinacin y cuantificacin, pero presentando un porcentaje de
recuperacin representativo solo para la Carbamazepina de 80.01%
Se debe disminuir el tiempo de corrida solo si es estrictamente necesario ya

que dicha disminucin afecta la seal, sensibilidad y los factores
estadsticos disminuyendo confiabilidad de los resultados.
El cromatgrafo de gases con detector FID, arrojo unas curvas de

calibracin con un R2 promedio de 0,979325 siendo este un valor muy
cercano a 1, lo que indica que la correlacin lineal da un alto criterio de
confianza.
73
9. RECOMENDACIONES
Aunque la SPE solo se pretenda documentar era necesario hacer el

procedimiento para llevar la muestra al cromatgrafo por lo tanto se debe
de mejorar para prximas investigaciones el acondicionamiento de la fase
estacionaria y adsorcin del solvente de la tcnica de extraccin en fase
slida, con el fin de que arroje mejores porcentajes de recuperacin para
diferentes frmacos y no solo para la Carbamazepina y as poder contribuir
a la disminucin de la amenaza ambiental y silenciosa que son los
contaminantes emergentes.
Aumentar la atencin de investigadores al impacto real de productos

farmacuticos sobre el medio ambiente, intercambiando experiencias y
difundiendo resultados de las investigaciones.
La recopilacin bibliogrfica realizada muestra la necesidad de mejorar el

conocimiento sobre los contaminantes emergentes.
74
10. BIBLIOGRAFIA
Aguirre, L. Validacin de mtodos analticos, ed. A.E.F. industria. 2001, Espaa
Arrubla, J. 2012. Evaluacin del grado de contaminacin por productos

farmacuticos y de cuidado personal, en el ro otn, Dedepartamento
de Risaralda, mediante cromatografa de gases - espectrometra de masas.
Colombia
Barcelo D.; Lopez M. Contaminacin y calidad qumica del agua: el problema de

los contaminantes emergentes. Fundacin nueva cultura del agua panel cientfico-
tcnico de seguimiento de la poltica de aguas convenio Universidad de Sevilla-
Ministerio de medio ambiente
Barcelo D.; Postigo C. 2014. Los contaminantes emergentes: Descripcin y

tratamientos. iAgua Magazine 4. Instituto Cataln de Investigacin del Agua. 29 de
octubre de 2014.
Becerril, J. 2012. Optimizacin de metodologas analticas para la determinacin

de contaminantes emergentes en aguas de abastecimiento y residuales.
Universidad De Santiago De Compostela. Facultad De Qumica, Departamento De
Qumica Analtica, Nutricin Y Bromatologa, Santiago De Compostel.a, 2012.
Tesis Doctoral
Becerril, J. 2009. Revista digital universitaria. 10 de agosto 2009 volumen 10

nmero 6 ISSN: 1067-6079
Bejarano, P. 2006. Ibuprofeno y analgesia. Especialista en dolor y cuidados

paliativos, Madrid. Emb. Espaa. Volumen 5 enero/febrero 2006
Calle, A. 2011. Determinacin analtica de la cafena en diferentes productos

comerciales. Departamento de Qumica Industrial. Universidad Politcnica de
Catalunya (UPC). Barcelona, 12 de junio de 2011.
Carlson, J.; Stefan, M.; Parnis, M.; Metcalfe,. C. 2015. Direct UV photolysis of
selected pharmaceuticals, personal care products and endocrine disruptors in
aqueous solution. Water Research. Volume 84. November 2015, pages 350-361
Castro, F. 2010. Tcnicas cromatogrficas apuntes de clase.anlisis

instrumental ii. Universidad Tecnolgica De Pereira.
75
Coy, G. 1999. Protocolo. Estandarizacin de mtodos analticos, ed. i.d.e.a.m.p.f
ambiental, Bogot
Cunningham, V. L; Buzby, M.; Hutchinson, T.; Mastroco, F.; Parke, N.; Roden, N.
2006. Effects of Human Pharmaceuticals on aquatic Life: Next Steps. Environ
Technol. 40, 3456- 3462
Dalterio, A. 2014. Agencia Iberoamericana para la difusin de la ciencia y la

tecnologa. http://www.dicyt.com/noticias/bacterias-autoctonas-se-dan-festines-
contra-la-contaminacion-ambiental [citado 21 de julio de 2014].
Daughton, C. 1999. Pharmaceuticals and Personal CareProducts in

theEnvironment: Agents of SubtleChange. EnvironmentalHealthPerspectives.
107(6):907-938
Filho, A.,Santos, F., Pereira, P. 2010. Development, validation and application of a

method bases on di-spme and GC-MS for determination of pesticides of
differentchemicalgroups in surface and ground wter samples.
Microchemicaljournal 96. pg. 139-145.
Garca R. 2002. Cromatografa. Instituto De Biotecnologa, Unam Cromatografa

Mexico
Gil, M., et al. 2012. Contaminantes emergentes en aguas, efectos y posibles

tratamientos. Instituto tecnolgico Metropolitano
Grupo de Investigacin en Agua y Saneamiento GIAS. Taller Especializado

Contaminantes Emergentes: Impacto Ambiental y Alternativas de Manejo.
Facultad de Ciencias Ambientales. Universidad Tecnolgica de Pereira. Pereira
Colombia. http://www.aguaysaneamientoutp.info/es/eventos/taller-especializado-
contaminantes-emergentes.html Tomado 25 octubre de 2015
Heberer, T. 2002. Tracking persistent pharmaceutical residues from municipal

sewagetodrinkingwater.En: Journal of Hydrology. Vol. 266, No. 3-4. p. 175-189.
Henrquez, D. 2012. Presencia de contaminantes emergentes en aguas y su

impacto en el ecosistema. Estudio de caso: productos farmacuticos en la cuenca
del Rio Biobo, Region Del Biobo, Chile .Universidad de Santiago de Chile
Hernandez, L.; Gonzalez, C. 2002. Introduccin al anlisis instrumental. Primera

edicin. ISBN: 84-344-8043-3
76
Letzel, T.; et al. 2015 . LCMS Screening Techniques For Wastewater Analysis
And Analytical Data Handling Strategies: Sartans And Their Transformation
Products As An Example. Chemosphere. Volume 137. October 2015, pages 198-
206
Lopez, F.; Alamo C. 2006. Historia de la psicofarmacologa. La revolucin de la

psicofarmacologa: sobre el descubrimiento y desarrollo de los psicofrmacos.
Tomo 2. Buenos Aires. Madrid..ISBN: 84-7903-458-0
Lopez, J., 2008. Estandarizacin de la tcnica de cromatografa de gases

acoplada a espectrometra de masas para la identificacin y cuantificacin de
metilsteres de cidos. Universidad Tecnolgica de Pereira.
Matamoros, V., Garca, J., Bayona, J. 2005. Behavior of selectedpharmaceuticals

in subsurface flow constructed wetlands: a pilot-scale study. environ. sci. technol.
39, 54495454.
Matamoros, V., Bayona, J., 2006. Elimination of pharmaceuticals and personal

care products in subsurface flow constructed wetlands. environ. Sci technol. 40,
58115816.
Miller, J. 1993. Estadstica para Qumica Analitica. Estados Unidos. ISBN 0-201-
60140-0
Molina, J. 2014. Desarrollo de metodologas analticas mediante cromatografa/

espectrometra de masas para el control de contaminantes organicos prioritarios y
emergentes en aguas y residuales y superficiales. Universidad de Jan. ISBN978-
84-8439-881-3
Morante, S.; Sierra, I.; Del Hierro, I. 2007. Desarrollo de mtodos analticos para la
separacin quiral y su aplicacin al estudio de procesos de sntesis asimtrica.
Editorial Dykinson, Madrid, Espaa, pag 24-28
Muoz, A. 2012. Los medicamentos, una amenaza invisible para el medio

ambiente. Contaminacion. Medio ambiente. Nuestra tierra. http://nuestra-
tierra.laverdad.es/medio-ambiente/contaminacion/2545-los-medicamentosuna-
amenaza-invisible-para-el-medio-ambiente [citado 20 de julio de 2014]
Olguin, P.; Rodriguez, M. 2004. Cromatografia de gases. Mtodos en

biotecnologa .Instituto De Biotecnologa. Universidad Autnoma De Mexico.
77
Pal, A., Gin, K.Y. &Reinhard, M. 2010. Impact of
emergingorganiccontaminantsonfreshwaterresources: review of
recentoccurrences, sources, fate and effects. Sci. Total Environ., 408 (24), 6062-
6069.
Parrales, A.; et al. 2012. Cromatografa del gas natural. Escuela Superior
Politecnica del Litoral. Facultad de Ingeniera en Ciencias de la Tierra. Ecuador.
Pea, A.; Castillo, A. 2015. Identificacin y cuantificacin de contaminantes

emergentes en aguas residuales por microextraccin en fase slida-cromatografa
de gases-espectrometra de masas (MEFS-CG-EM). TIP. Volume 18. Junio 2015.
Pages 29-42.
Petrovi, M., Gonzlez, S. y Barcel, D. 2003. Analysis and removal of

emergingcontaminants in water and drinkingwater. Trends Anal. Chem.
22(10):685-696.
Pintado, M.; Gonzalez, E.; Lara, P. 2014. Atmospheric pressure gas

chromatographytime-of-flight-mass spectrometry (APGCToF-MS) for the
determination of regulated and emerging contaminants in aqueous samples after
stir bar sorptive extraction (SBSE). Analytica Chimica Acta. Volume 851. 3
december 2014. Pages 1-13.
Rius, X.; Et al. 2001. Validacin de mtodos analticos. Universidad Rovira I Virgili.
Espaa.
Robles, J. 2014. Desarrollo De Metodologas Analticas Mediante

Cromatografa/Espectrometra De Masas Para El Control De Contaminantes
Orgnicos Prioritarios Y Emergentes En Aguas Residuales Y Superficiales.
Universidad de Jan. Facultad de ciencias experimentales departamento de
Qumica, Fsica y Analtica. 29 de mayo de 2014. ISBN: 978-84-8439-881-3
RIUS, X.; et al., La validacin de mtodos analiticos. Revista Tcnicas de

laboratorio, 2000. 252: p. 382-385.
Rodrguez, F.; Mesquita, P.; Oliveira, L.; Menezes, F.; Pereira, A.; Andrade, J.
2011. Development of a headpacesolid-phasemicroextraction/gas
chromatography-massspectrometrymethodfordetermination of
ofganophosphoruspesticideresidue in cowmilk.microchemicaljournal. 98. pag 56-61
Rubio, M., Vallejo, A. 2014. Evaluacin del grado de contaminacin por

plaguicidas organofosforados en cultivos de cebolla (Alliumfistulosum) en suelo y
78
agua de escorrenta en el corregimiento de la florida de la ciudad de pereira-
colombia. Universidad Tecnolgica de Pereira
Sierra. A., Prez. Q., Gmez. R., Morante. Z. 2010. Anlisis instrumental. ISBN
978-84-9475-377-6. pg 5-9
Shirey, R.; Mindrup, R. 1999.spme Adsortion vs absortion.selection
Skoog, D. et al., 2001. Principios de Anlisis Instrumental. 5 edicin. Madrid: M.G.

Hill. 2001, Espaa
Skoog, D. et al., 2008. Principios de analisis Instrumental. ISBN 13:978-607-481-
390-6
Tanoue, R.; Nomiyama, K; Nakamura, H.; Hayashi, T.; Kim, J.; Isobe, T.;
Shinohara, R.; Tanabe, S. 2014. Simultaneous determination of polar
pharmaceuticals and personal care products in biological organs and tissues.
Journal of chromatography A. Volume 1355. 15 august 2014, pages 193,205
Theodore, W; Leonar S. 1991. Farmacos efectivos en el tratamiento de la

epilepsia.en: Theodorewr, Alan, S., Palmer T. Las bases farmacolgicas de la
terapeutica, 8.aed. Mexicodf.: Panamericana. p. 443-5
Valdez, A. 2009.Evaluacion de la toxicidad producida por diclofenaco sobre

Daphnia magna. Instituto Politcnico Nacional. Secretaria De Investigacion Y
Postgrado.Escuela Nacional De Ciencias Biologicas. pag.6-7
Vega, M.; Sosa, F.; Santana, R. 2006. Sample extraction method combining
micellar extraction-spme and hplc for the determination of organochlorine
pesticides in agricultural soils.journal of agricultural and food chemestry. 54. pg.
7747-7752.
Wang, Y.; Zhu, J.; Huang, H. The Key Laboratory of Water and Sediment
Sciences, Ministry of Education, School of Environment, Beijing Normal University,
No. 19, Xinjiekouwai Street, Beijing 100875, China.
Zenteno, M. 2011. Validacin De La Metodologa Analtica De Determinacin De

Etanol Por Cromatografa Gaseosa Con Detector Fid Acoplada A Headspace En
El Servicio Mdico Legal De Temuco. Universidad Austral de Chile. Facultad de
Ciencias Escuela de Qumica y Farmacia. Chile
Zief, M.; Kisser, R. Solid phase extraction for sample.j.t.baker manual.pg.7-15.
79
Zwir-ferenc, A.; Biziuk, M. 2006. Solid phaseextractiontechniquetrents,
opportunities and applications.polishjournal of environmentalstudies. vol 5. no.5.
Tomado 20 de octubre de 2015 15:30 pm http://eur-lex.europa.eu/legal-

content/ES/TXT/HTML/?uri=URISERV:l28180&from=ES
80
11. ANEXO
Como anexo a este trabajo de grado se implement una gua de laboratorio que
fue entregada al laboratorio de aguas de la Facultad de Ciencias Ambientales de
la Universidad Tecnolgica de Pereira con el fin de que pudieran implementar su
propia tcnica, ya que contaban con un proyecto de investigacin acerca de
humedales construidos depuradores de contaminantes emergentes y para analizar
la cantidad de contaminantes absorbidos por las plantas era necesario realizar
ciertos anlisis que podan lograr a partir de la presente gua.
CONTENIDO
1. Alcance 2
2. Fichas de seguridad de los reactivos 2
3. Conceptos / Abreviaturas 3
4. Principio 4
5. Reactivos y materiales 8
6. Equipos 8
7. Muestras y muestreo 9
8. Calibracin 9
9. Control de calidad 10
10. Procedimiento 10
11. Clculos 14
12. Bibliografa 14
81
1. Alcance
Los mtodos Extraccin en Fase Solida y Cromatografa de gases son usados en

esta gua para la separacin, determinacin y cuantificacin de contaminantes
emergentes tipo farmacuticos en matrices acuosas.
2. Fichas de seguridad de reactivos
ACTIVIDAD Riesgo Medida de Numero CAS

Seguridad
Manipulacin del Corrosivo, toxico Manipular en Cas: 7647-01-
cido Clorhtico cabinas de gases, 0
concentrado (HCL) usar guantes,
gafas y careta
Metanol grado HPLC Riesgos de fuego Manipular en un CAS: 67-56-1
(CH 3OH) y explosin, lugar bien
toxico ventilado y usar
guantes, gafas y
bata.
Hexano grado HPLC Riesgos de fuego Manipular en un CAS: 110-54-3
(C 6H14) y explosin, toxico lugar bien
para los ventilado y usar
organismos guantes, gafas y
acuticos bata.
Acetonitrilogrado Riesgo de fuego, Manipular en un CAS: 75-05-8
HPLC nocivo e irritante lugar bien
(C2H3N) ventilado y usar
guantes, gafas y
bata.
Acetato de Etilo Riesgos de fuego, Manipular en un CAS: 141-78-6
grado HPLC explosin, toxicoy lugar bien
(CH3COOCH2CH3) peligroso para el ventilado y usar
medio ambiente guantes, gafas y
bata.
82
3. Conceptos / Abreviaturas
Frmaco: Un frmaco, de acuerdo con la farmacologa, es cualquier sustancia

que produce efectos medibles o sensibles en los organismos vivos y que se
absorbe, puede transformarse, almacenarse o eliminarse. Esta definicin se acota
a aquellas sustancias de inters clnico, es decir aquellas usadas para la
prevencin, diagnstico, tratamiento, mitigacin y cura de enfermedades , y se
prefiere el nombre de txico para aquellas sustancias no destinadas al uso clnico
pero que pueden ser absorbidas accidental o intencionalmente; y droga para
aquellas sustancias de uso social que se ocupan para modificar estados del
nimo[1].
SPE (Extraccin en fase solida): Consiste en un dispositivo en forma de

reservorio de una jeringa, en el cual se introduce un material adsorbente (fase
estacionaria) que cumple la funcin de atrapar o retener una sustancia que est
contenida en un solvente determinado (fase mvil).
GC (Cromatografa de gases): En cromatografa de gases la muestra se

volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se
produce por el flujo de una fase mvil que es un gas inerte, y a diferencia de la
mayora de los tipos de cromatografa, la fase mvil no interacciona con las
molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la
columna [2].
Fase estacionaria: Consiste en partculas, generalmente slidas, pequeas y con

una superficie microporosa, de forma que presenta un amplio desarrollo
superficial. Puede estar empaquetada en forma de columna o extendida en forma
de capa. En ocasiones es necesario un tratamiento qumico de la fase estacionaria
para conseguir unas partculas de tamao y poro adecuados.
Fase mvil: Puede ser un lquido o un gas, y su funcin es transportar a los

componentes de la mezcla a travs del sistema cromatogrfico [3].
4. Principio
4.1. EXTRACCIN EN FASE SOLIDA (SPE)
La SPE en fase normal hace referencia a un sistema en el cual el material

adsorbente es ms polar que la fase mvil o la solucin de la muestra. La SPE en
fase reversa se refiere a un sistema en el cual el material adsorbente es menos
polar que la fase mvil o la solucin de la muestra [4]. La extraccin en fase slida
se compone de tres modalidades de uso, consistentes en la limpieza o cleanup,
83
concentracin del analito y remocin de la matriz. En el cleanupse busca que el
material adsorbente o fase estacionaria retenga el analito, mientras que el
solvente o fase mvil arrastra las impurezas [5]. La concentracin del analito se da
cuando ste est retenido en el material adsorbente y es eluido por un volumen de
solvente inferior al que inicialmente lo contena previo atrapamiento, lo que
resultar en un extracto enriquecido con el analito. En la remocin de la matriz, la
fase estacionaria cumple un papel inverso al del cleanup, donde las impurezas son
retenidas mientras que el solvente arrastra el analito a travs de la fase
estacionaria. El correcto desarrollo de la SPE depende fundamentalmente de un
profundo conocimiento de las caractersticas qumicas del analito tales como su
ndice de polaridad, peso molecular, estructura qumica, grupo funcional y otras
como la solubilidad en solventes comunes en la tcnica [5].
Fig. 1. Diagrama de proceso de extraccin en fase solida, SPE.
Como se indica en la anterior figura, el primer paso consiste en un

acondicionamiento del material adsorbente con una sustancia apropiada que
solvente los grupos funcionales de dicho material. Luego, la solucin que contiene
el frmaco en este caso. La columna contiene ahora los analitos e impurezas, los
cuales se lavan con un solvente apropiado que eluye las impurezas, y preserva en
analito en la columna.
4.2. Cromatografa de gases
Dentro de la cromatografa de gases se presentan fundamentalmente

interacciones gas-slido y gas-lquido y este recibe su nombre particular por el uso
de un gas como medio de arrastre (fase mvil). Aunque ambas comparten un
fundamento general, difieren en la naturaleza de la fase estacionaria, pues en la
primera es un material slido, mientras que en la segunda se trata de un lquido.
Ambas operan de tal manera que los componentes de una muestra vaporizada
84
son separados como consecuencia del reparto entre una fase mvil gaseosa y una
fase estacionaria contenida en una columna. La muestra es vaporizada e
inmediatamente sembrada en la columna, mediante un dispositivo de inyeccin.
Una vez sembrada en la columna, es eluda a causa del flujo de un gas inerte, que
desempea el rol de fase mvil.
A diferencia de la mayora de las tcnicas de separacin cromatogrfica, la fase

mvil en la cromatografa de gases no interacta con los componentes de la
muestra, toda vez que su nica funcin es transportar los componentes de la
misma a travs de la columna. La cromatografa gas-slido se fundamenta en una
fase estacionaria slida en la cual los analitos son retenidos gracias al fenmeno
de la adsorcin, y su aplicacin es limitada a separar compuestos de bajo peso
molecular. Los materiales finamente divididos como carbn activado, almina
activa o silica-gel microporosos con una gran rea superficial activa (superficie de
contacto) son fuertes adsorbentes, motivo por el cual son muy empleados como
fases estacionarias en la cromatografa gas-slido. Esto se debe al fenmeno de
adsorcin preferente, que ocurre cuando las molculas de dos o ms sustancias
estn presentes en un material adsorbente y las molculas de una de esas
sustancias pueden ser retenidas ms fcilmente que las de las otras. Estos
materiales tambin suelen ser empleados como soportes de la fase estacionaria
lquida, en la cromatografa gas-lquido [6].
Fig. 2. Representacin esquemtica de un cromatgrafo de gases.
4.3. Contaminantes emergentes
Los contaminantes emergentes corresponden en la mayora de los casos a

contaminantes no regulados, que pueden ser candidatos a regulacin futura,
85
dependiendo de investigaciones sobre sus efectos potenciales en la salud y los
datos de monitoreo con respecto a su incidencia. Ejemplos de los compuestos que
han emergido recientemente como particularmente relevantes, son los
surfactantes, productos farmacuticos, productos para el cuidado personal,
aditivos de las gasolinas, retardantes de fuego, antispticos, aditivos industriales,
esteroides y hormonas y subproductos de la desinfeccin del agua. La
caracterstica de estos grupos de contaminantes es que no necesitan persistir en
el ambiente para causar efectos negativos, puesto que sus altas tasas de
transformacin/remocin se pueden compensar por su introduccin continua en el
ambiente. Para la mayora de estos contaminantes emergentes, la incidencia, la
contribucin de riesgo y los datos ecotoxicolgicos, no estn disponibles. As que
es difcil predecir qu efectos de salud pueden tener en seres humanos y
organismos acuticos (Barcel, 2003).
El alto potencial en la proliferacin continua de frmacos y productos de uso

personal, medicamentos veterinarios, y de otros productos qumicos
antropognicos, plantea desafos substanciales y quiz insuperables para su
regulacin y control, desde el punto de vista de su evolucin y del diseo de
sistemas viables para su aplicacin. Por otra parte, la investigacin y el desarrollo
de drogas y compuestos bioactivos evoluciona rpidamente y, en muchos casos,
los mecanismos de accin son nuevos para los sistemas biolgicos, por lo que las
consecuencias en el ambiente son inciertas.
Por estos motivos la informacin disponible sobre los impactos potenciales de

muchas de esas sustancias es limitada, aunque hay evidencias de que algunas de
ellas causan efectos adversos en la salud humana y el ambiente.
Actualmente existe un inters creciente por las repercusiones que tendrn los
compuestos orgnicos de origen atropognico en el ambiente. El agua es una
fuente importante de estos compuestos para los seres vivos. La regulacin de
estos contaminantes es escasa, debido al desconocimiento de sus efectos,
adems de que no se tiene un inventario de todas las especies qumicas
presentes en una muestra ambiental, por limitaciones analticas [7].
Entre los frmacosms prescritos en medicina humana destacan los

analgesicos/antiinflamatorios como el ibuprofeno y el diclofenaco, los
antiepilpticos como la carbamacepina, antibioticos como la amoxicilina y el
sulfametoxazol, y los -bloqueantes como el metoprolol. A estos cabe aadir los,
cada vez ms, utilizados en veterinaria, en actividades como la acuicultura, la
ganadera, y la avicultura. Segn las propiedades fisico-quimicas de los frmacos
86
y sus metabolitos y productos de degradacin, y las caractersticas de los suelos,
estas sustancias pueden llegar a alcanzar las aguas subterrneas y contaminar
los acuferos o bien quedar retenidas en el suelo y acumularse pudiendo afectar al
ecosistema y a los humanos a travs de la cadena trfica. En consecuencia, para
una evaluacin realista del medio acutico es necesario un estudio integrado
agua subterrnea-suelo/sedimento-agua superficial suelo.
Como resultado de las investigaciones llevadas a cabo hasta ahora, algunos

frmacos estn siendo considerados por la US EPA como posibles candidatos a
ser incluidos en la lista de los contaminantes orgnicos prioritarios en el agua
potable, como es el caso del diclofenaco (antirreumtico), la carbamacepina
(antiepileptico), y el cloranfenicol (antibiotico). En la UE, por el momento, no se
han fijado lmites mximos en el agua potable, y por tanto, no es necesario el
seguimiento de tales compuestos, sin embargo, lo ms probable es que en un
futuro prximo sean regulados [8].
5. Reactivos y materiales
Agua destilada Probeta de 1000 mL
cido clorhdrico concentrado Beacker de 500 mL
Hexano grado HPLC Beacker de 100 mL
Acetato de etilo grado HPLC Beackerde 200 mL
Acetonitrilo grado HPLC Pipetas aforadas de 2 mL
Metanol grado HPLC Pipetas aforadas de 5 mL
Papel filtro cualitativo Pipetas aforadas de 10 mL
Papel indicador de pH Vidrio de reloj
Par de guantes Varilla agitadora
Frascos mbar de 1 L para el Embudo de vidrio pequeo

muestreo
Cartucho de ENVICARB para la SPE
Probeta de 200 mL
6. Equipos
Estufa Bomba al vaco
87
Colector de SPE al vacio de doce Cabina para gases
puestos
Pinzas para soporte universal
Equip para filtracin al vaco
Soporte universal
7. Muestras y muestreo
7.1. Contaminacin de humedales construidos
Se Contaminaron 13 humedales construidos cada uno de 8 litros de los cuales se

encontraban 4 plantas diferentes y de cada una se tena 3 individuos de la misma
especie y un blanco sin planta, la contaminacin se realiz con 4 frmacos
(ibuprofeno, cafena, Carbamazepina y Diclofenaco) con una concentracin de 40
ppm.
7.2. Toma de muestreo
Se introdujo una varilla agitadora para homogenizar el humedal construido, se

extrajo con un beacker de 1000 mL, se midi el volumen con una probeta de
1000 mL, luego se trasvaso con ayuda de un embudo de vidrio en un frasco mbar
para luego ser almacenado en la nevera.
7.3. Preparacin de la muestra
Los frascos se transportaron rpidamente al laboratorio para ser refrigeradas y

analizadas en un plazo inferior a 7 das despus de su recoleccin. Los extractos
deben ser refrigerados a 4C para su posterior anlisis por cromatografa de gases
en un plazo no superior a 40 das despus de la extraccin, para garantizar que no
haya ningn tipo de cambio de los analitos contaminados en los humedales
construidos.
8. Calibracin
Para estimar la concentracin de los analitos en la muestra de manera confiable

se prepararon unas curvas de calibracin segn sus concentraciones que van
desde 5 ppm a 53,3 ppm
Estas curvas se realizaron para calcular la concentracin en la cual se recuper

los contaminantes en la muestra y comprobar el mtodo empleado para su
extraccin.
88
8.1. Blanco
El blanco o control se prepar en un humedal de 8 litros de agua potable, se

contamino con 40 ppm de los contaminantes tipo frmacos con el fin de observar
el porcentaje de remocin de las plantas sembradas en estos humedales.
Este fue tratado con el mismo mtodo, en las mismas condiciones y con las
mismas curvas de calibracin.
9. Control de calidad
Se garantiz el buen almacenamiento de las muestras despus de su muestreo.
Se realizaron las curvas de calibracin con estndares certificados por Sigma

Aldrich, que garantiza la concentracin y pureza de estos reactivos.
10. Procedimiento
10.1. Tratamiento de la muestra
Se tom una muestra de 200 mL del frasco mbar, se filtr al vaco para eliminar
partculas en suspensin y se acidifico la muestra de agua con HCL concentrado a
pH 2.
10.2. Mtodo de estacin en fase solida
La muestra acidificada se percola a travs de una polimrica extraccin en fase

slida con el cartucho ENVICARB.
Se acondiciono el cartucho con 10 mL hexano/acetato de etilo (1:1), a una

velocidad de 10 mL/min.
89
Fig. 3. Diagrama de flujo. Mtodo SPE para extraccin de contaminantes
emergentes tipo farmacuticos y clean up.
10.3. Mtodo cromatografa de gases
Se utiliz el equipo de cromatografa de gases de marca Shimadzu GC 2014 con

helio como gas portador (99,9995% de pureza) a una velocidad lineal promedio
constante de 40 cm.s-1. El horno mantuvo una temperatura de 50C durante 2 min
luego aumenta la temperatura de a 15C/min hasta llegar a 120C. Luego se sigue
la misma metodologa de calentamiento de: 4C/min hasta 160C, 7C/min hasta
220C,5C/min hasta 290C y10C/min hasta 300C manteniendo esta
temperatura por 5 minutos ms.
90
Un volumen de 1 L de muestra se inyecto en el modo splitless a una temperatura
del inyector de 260 C con una purga del inyector de tiempo de activacin de 1
minuto
Fig. 4. Diagrama de flujo. Cromatografa de gases
91
11. Clculos
Porcentaje de recuperacin
% Recuperacin = x 100 =
[ ] Final: concentracin final hallada despus de la extraccin

[ ] Inicial: concentracin inicial cuando se contaminaron los
humedales construidos.
Porcentaje de remocin
% Remocin = x 100 =
[ ] Final: concentracin final hallada despus de la extraccin

[ ] Inicial: concentracin inicial cuando se contaminaron los
humedales construidos.
12. Bibliografa
[1]. http://farmacologia.bligoo.com.mx/definicion-de-farmaco#.U7LmjZR5OSo
[2].http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-qumicos/cromatografa-de-
gases
[3]. http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/parametros
[4]. ZIEF, M.; KISSER, R.Solid phase extraction for sample.J.T. Baker
Manual.Pg.7-15.
[5]. VEGA, M. D.; SOSA, F. Z.; SANTANA, R. J. 2006. Sample extraction method
combining micellar extraction-SPME and HPLC for the determination of
organochlorine pesticides in agricultural soils.Journal of Agricultural and Food
Chemestry.54.Pg. 7747-7752.
[6]. CASTRO E, F.2010. Tcnicas cromatografas Apuntes de clase.Anlisis

Instrumental II. Universidad Tecnolgica de Pereira.
92
[7]. Revista Digital Universitaria. 10 de agosto 2009 Volumen 10 Nmero 6
ISSN: 1067-6079
[8].Fundacin Nueva Cultura del Agua. PANEL CIENTFICO-TCNICO DE

SEGUIMIENTO DE LA POLTICA DE AGUAS. Convenio Universidad de Sevilla-
Ministerio de Medio Ambiente. Contaminacin y calidad qumica del agua: el
problema de los contaminantes emergentes. L Dami Barcel* y Mara Jos Lpez
de Alda Instituto de Investigaciones Qumicas y Ambientales-CSIC (Barcelona)
93

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DESARROLLO DE LA TCNICA DE CROMATOGRAFA DE GASES (GC-FID)

PARA LA DETERMINACIN DE CONTAMINANTES EMERGENTES TIPO

SARA LINETH DUQUE ZAMBRANO

LEIDY JOHANA ARANGO RAMIREZ

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

SARA LINETH DUQUE ZAMBRANO

LEIDY JOHANA ARANGO RAMIREZ

Trabajo de grado presentado como requisito para optar al ttulo de

Juan Pablo Arrubla Vlez

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

DESARROLLO DE LA TCNICA DE CROMATOGRAFA DE GASES (GC-FID)

SARA LINETH DUQUE ZAMBRANO

LEIDY JOHANA ARANGO RAMIREZ

La nota de: ____________________________________________

Con la connotacin: ____________________________________________

Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:

Juan Pablo Arrubla Vlez _______________________________________

Especial agradecimiento a nuestro director Juan Pablo Arrubla, por la orientacin,

A nuestros profesores y a Lina Giraldo Vasquez por la dedicacin, tiempo y por

Adems agradecemos a la Vicerrectora de Investigaciones, innovacin y

CONTENIDO TABLAS .................................................................................................................... 7

Tabla 1. Clasificacin de la toxicidad en el ambiente acutico. ............................. 16

Ecuacin 1. Coeficiente de distribucin ................................................................. 23

Grafico 1. Resultados de los porcentajes de recuperacin de la contaminacin... 71

Imagen 1. Estndares analticos y soluciones madre ........................................... 55

Figura 3. Esquema de la secuencia de procesos conocida como LADME ........... 19

Algunos productos farmacuticos y de higiene personal estn siendo considerados

Las actividades antrpicas en ecosistemas naturales se generan a travs de los

La contaminacin del medio ambiente por residuos de farmacuticos es un

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Sin embargo hasta el momento no se han desarrollado investigaciones a nivel

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3.1. OBJETIVO GENERAL

Desarrollar la tcnica de Cromatografa de gas capilar-FID por medio de sus

3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Obtener en forma experimental los valores de los parmetros como lo son:

Documentar la tcnica de extraccin en fase slida para el consiguiente

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4.1. CONTAMINANTES EMERGENTES

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Tabla 1. Clasificacin de la toxicidad en el ambiente acutico.

Substancia Extremada Muy toxico Toxico Daino No toxico

Tomado de: (Valds, 2009).

El Diclofenaco es un antiinflamatorio no esteroideo (AINE) derivado del cido

Nombre Nombre Marca Nmero Pureza Estructura

Diclofenaco cido 2-{2- Sigma 15307- 98,5 NH

Ibuprofeno cido (RS)-2- Sigma 15687- 98 CH3

5H-dibenzo- Sigma 298-46-4 99

La cafena, tambin denominada tena, guaranina o matena, es un constituyente

Segn sus propiedades fsico-qumicas la cafena es un polvo inodoro, incoloro y

El ibuprofeno es un antinflamatorio no esteroideo (AINE) perteneciente al