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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS


QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO

REACCIONES DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

INTRODUCCIN cuantitativos para la determinacin de aminocidos.


Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se
Las reacciones de identificacin y cuantificacin para encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que vara
aminocidos y protenas tienen como fundamento las de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado
caractersticas qumicas que les confieren sus grupos R, prpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la
reaccionaran o no con determinados reactivos coloracin producida por la ninhidrina es independiente
dependiendo de la naturaleza de sus grupos R contienen de la coloracin original del aminocido
grupos arilo, grupos indol, presencia de grupos
sulfhdrico, etc. Esta prueba es positiva tanto para protenas como para
aminocidos. En aquellos casos donde no da positiva la
OBJETIVOS prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que
no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.
Identificacin de aminocidos por medio de
reacciones coloridas. Reaccion de Hopkins-Cole. Es especfica del grupo
Identificar algunos grupos R presentes en indol caracterstico del Triptfano. El anillo del indol se
aminocidos. hace reaccionar con cido Glioxlico en presencia de
cido Sulfrico concentrado para formar un compuesto
RESULTADOS violeta que se forma en la interfase entre la solucin de
protena y el cido sulfrico. La estructura exacta del
compuesto violeta no se conoce, pero parece estar
Grupos Ninhidrina Hopkins- relacionado con el producto de condensacin del
-SH Cole aldehdo del cido Glioxlico con los nitrgenos de dos
anillos indlicos, como se muestra en la reaccin, ya que
Gelatina tambin se pueden formar complejos con otros
Peptona aldehdos.
Albumina
Tirosina La reaccin de Hopkins Cole es positiva slo para las
Triptfano protenas que contienen Triptfano. Se supone que el
Fenilalanin cido concentrado hidroliza las protenas en la interfase
a liberando el Triptfano para dar el producto violeta. Sin
Cistena embargo, el Triptfano puro en solucin no da positiva la
Agua reaccin, a menos que se agreguen agentes oxidantes,
por lo que es de suponer que el Triptfano de las
protenas no se libera como tal, por lo cual la reaccin
presentada es slo parcialmente correcta.
Reaccin Reaccin Reaccin
Millon Xantoproteic de Biuret Reaacion de Millon. Es especfica para el grupo
a fenlico por lo tanto, la dan positiva todas las sustancias
Gelatina que poseen esta funcin, como la Tirosina y todas las
Peptona protenas que contengan Tirosina. El primer paso de la
Albmina reaccin de Millon consiste en la nitracin del anillo
Aspartame fenlico de la Tirosina, por el cido Ntrico del reactivo.
Tirosina La Tirosina nitrada forma complejos con los iones
Mercurioso Hg (I) y Mercrico Hg (II) del reactivo
Triptfano
produciendo un precipitado rojo o una solucin roja,
Fenilalanin
ambos resultados positivos.
a
Agua Algunas protenas pueden formar el precipitado rojo
desde el inicio, mientras que otras primero forman un
precipitado blanco, que se debe calentar para dar el
FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES color rojo indicativo de la presencia de Tirosina.
Cualquier sustancia con un grupo fenlico dar positiva
Reaccin del plomo para la cistena. Cuando los la reaccin de Millon y puede interferir con la deteccin
aminocidos y las protenas que contienen grupos de Tirosina.
tilicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el
azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este Reaccion Xantoprotica. Algunos aminocidos como
sulfuro puede detectarse por la formacin de un Fenilalanina, Tirosina y Triptfano, tienen anillo
precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de aromticos derivados de benceno y por ello tiene las
acetato de plomo. Los grupos tioles tambin reaccionan propiedades qumicas del benceno y sus derivados. Una
con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de estas propiedades es la reaccin de nitracin del
de amonaco para dar un complejo de color rojo. anillo bencnico con cido Ntrico concentrado. Los
anillos Benceno de Tirosina y Triptfano estn activados
Reaccin de la ninhidrina. La ninhidrina es un y reaccionan fcilmente, mientras que el benceno de la
poderoso agente y reactivo comn para visualizar las Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y
bandas de separacin de aminocidos por cromatografa reacciona con ms dificultad.
o electroforesis, tambin es utilizada con fines

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QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO

REACCIONES DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

Reaccion de Biuret. La reaccin debe su nombre al 1979). Se debe tener en cuenta que la coloracin
Biuret, una molcula formada a partir de dos de urea azulada o violeta de las reacciones es proporcional
(H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da a la concentracin del aminocido.
positiva esta reaccin la presencia de protenas en una
mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Reaccin Hopkins-Cole: Es especfica para
Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin identificar grupos indol, al ser el triptfano el nico
acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa aminocido con este grupo, se trata una prueba
en la formacin de un compuesto de color violeta, debido especfica para este, y nos indic la presencia de
a la formacin de un complejo de coordinacin entre los este en peptona y albumina.
iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos Reaccin de Milln: Es especfica para la
presentando un mximo de absorcin a 540 nm. deteccin de grupos fenlicos en un compuesto,
debido a que la tirosina tiene este grupo dio positiva
La producen los pptidos y las protenas, pero no los a esta reaccin en la cual reacciona frente a las
aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace sales de Mercurio a pH cido, formando en un
peptdico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los principio nitrotirosina y ms adelante una sal
aminocidos. mercrica de color rojo. La gelatina, albumina y
peptona, al dar positivo a la prueba nos indicaron la
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali presencia de grupos fenlicos en dichas protenas.
concentrado, se forma una sustancia compleja
denominada Biuret. Debido a dicha reaccin fue que Reaccin Xantoproteica: reaccin para la
observamos que al agregar el reactivo de sulfato de identificacin de grupos arilo en los aminocidos,
cobre ms solucin de protena precipit una coloracin dio positivo para tirosina, triptfano y nos indic la
violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad presencia de estos aminocidos en peptona,
azul cielo reaccin positiva. Precipitando a una albumina y gelatina, este comportamiento se debe
coloracin amarilla la reaccin nos torna negativa al no a la presencia de anillos bencnicos en la
haber presencia de protenas. estructura de las anteriores protenas y
aminocidos. Los anillos aromticos presentes
ANLISIS Y DISCUSIN reaccionaron con cido ntrico concentrado
formando nitroderivados de color amarillo.
Reaccin del plomo para la cistena: Es una
prueba para identificacin de aminocidos con Reaccin de Biuret: para identificacin de
grupos sulfhdrico, especfica para cistena, al dar tripeptidos en adelante, solo dio positivo para
positivo tanto en peptona como en albumina, nos gelatina, peptona y albumina. El NaOH se
indic la presencia de este aminocido en dichas constituye en el medio que permite la formacin de
protenas. En el caso de la cistena, los grupos tiol complejos de coordinacin Cu2+ y los pares de
de dos molculas de cistena se han oxidado para electrones no compartidos del nitrgeno que forma
formar un grupo disulfuro de modo que se parte de los enlaces peptdicos. Por tanto, el
establece un enlace covalente transversal entre reactivo de Biuret cambi a color violeta en
ellas. (Rivera et al, 2001) La reaccin se lleva a presencia delas anteriores protenas.
cabo en un medio alcalino, es decir en presencia de
NaOH, el cual permite la separacin del azufre de
la estructura del aminocido. Al aadir una sal CONCLUSIONES
soluble en agua, como lo fue el acetato de plomo, el
azufre se combina con el plomo para producir un Estas pruebas nos ayudan a la deteccin de forma
precipitado de color negro que corresponde a especfica de determinados aminocidos dentro de una
sulfuro de plomo. protena, y as conocer de forma emprica su estructura.

Reaccin ninhidrina: al ser una prueba que BIBLIOGRAFA


identifica grupos amino libres en un compuesto, dio
positivo para todos los aminocidos y protenas,
Fundamentos de bioqumica estructural; Jos Mara
pero no para el agua, debido a que estas presentan
Teijn; Editorial Tebar pag (65-68).
un grupo amino libre, el cual reacciona con la
ninhidrina, el cual es un agente oxidante fuerte que
efecta la descarboxilacin oxidativa de los Fundamentos De Bioquimica, Donald Voet, Judith
aminocidos, y forman dixido de carbono, G. Voet, Charlotte W. Pratt; Ed. Mdica
amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de Panamericana, pag 216.
carbono menos que el compuesto original. El
amonaco y la hidrindantina as formadas http://biokimik2011.blogspot.mx/2011/09/objetivos-
reaccionan con una segunda molcula de ninhidrina aplicar-pruebas-cualitativas.html
que da lugar a la formacin de un pigmento color
azul o violeta, del que solamente el tomo de
nitrgeno pertenece al aminocido (Lehninger,