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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

Escuela de ciencias bsicas, tecnologa e ingeniera


Microbiologa

INFORME

PRCTICA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL

Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Escuela de Ciencias Bsicas, Tecnologa e Ingeniera -


ECBTI. Microbiologa Ambiental. CEAD Acacias Meta- Colombia. Tutor de laboratorio:
Anglica Guzmn Lenis (angelica.guzman@unad.edu.co)

Sesin de laboratorio 16 y 23 de abril 2016


Grupo
Correo electrnico Correo electrnico tuto
Estudiante Cdigo de
estudiante campus
campus
Heidy Johanna
1092347239 39 jorge.rodriguezp@unad.edu
Martinez C Heidyjoack@hotmail.com
Blanca Carmenza
112182603 86
Castillo blancaccastillo@gmail.com
Angie Paola Veca
Angelsan1025@hotmail.co 1121873837 86
Albernia
m
Eliana Marcela
elian24g@hotmail.com 1121848032 87 jorge.rodriguezp@unad.edu
Quevedo
Sharon Esteban
sharon.esteban17@gmail.com 11122131904 42
Correa

1. Introduccin

La prctica de laboratorio se realiz los das 16 y 23 de abril del presente ao en los laboratorios
En la zona Amazonia Orinoquia Acacias Meta

El objetivo fundamental de la prctica de laboratorio es dar a conocer y comprender los


procedimientos y tcnicas propias para el anlisis microbiolgico del pan con moho y aguas
estancadas, teniendo como elementos fundamentales en adquirir conocimiento y la comprensin
de las tcnicas de recuento microbiano, los mtodos de siembra microbiana y su importancia. En
el laboratorio se revisaron las temticas: Mtodos de siembra, Tcnicas de Tincin y algunas
tcnicas aplicadas en microbiologa Ambiental.

Se destaca laboratorio la importancia de la realizacin de anlisis microbiolgicos de las muestras,


es necesario comprender el metabolismo microbiano y la caracterizacin de los mismos, ya que de
esto depende su identificacin y conocimiento de la actividad es necesario conocer sus
caractersticas morfolgicas, fisiolgicas, metablicas.
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2. Objetivos

Objetivo general

Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de


muestras en laboratorio de agua de charco y evaluacin microbiolgica en
alimentos. Realizando procedimientos de siembra, coloracin, tincin e identificacin
macroscpica y microscpica de estos.

Objetivos especficos

a. identificar las caractersticas macro morfolgicas de colonias fngicas de distintos tipos de


hongos como su: color, olor, borde, elevacin, aspecto y forma.

b. Atender las explicaciones y sugerencias de la tutora antes de realizar las prcticas


para as tener un buen desempeo en cada una de estas.

c. Identificar los mtodos de tincin e identificar la morfologa microscpica por medio de la


observacin
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3. Procedimiento realizado: diagramas de flujo prcticas 3, 4 y 5

Practica No 03
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Practica No 04
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Practica No 05
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PRACTICA 1: Descripcin de la bioseguridad en el laboratorio.

En el laboratorio de Microbiologa todas las reas deben estar debidamente


marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin Se
deben utilizar siempre elementos de barrera apropiados segn las
necesidades: blusa blanca limpia y en buen estado, guantes, tapabocas,
gorro y gafas protectoras.

En la zona de trabajo del laboratorio no se debe comer, beber, fumar,


guardar alimentos ni aplicar cosmticos. No se deben llevar a la boca
lpices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en el laboratorio. Para evitar esto se usa el
tapabocas. Se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Una vez concluida la prctica, se
debe organizar el laboratorio, desinfectando la superficie de trabajo con alcohol y dejando tanto el
material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. Se deben lavar las manos despus
de haber manipulado material infeccioso, as como al abandonar el laboratorio.

PRACTICA 2: Descripcin de los materiales de laboratorio de microbiologa, boceto y una


breve descripcin de cada uno.
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Material Descripcin Ilustracin

es una fina placa de cristal


Laminas y laminillas sobre el cual se disponen
objetos para su examen
microscpico

Es un instrumento de
Asa Redonda laboratorio, tipo pinza que
consta de una base que
puede estar hecha de
platino, acero, aluminio, y un
filamento que se puede de
nicromo tungsteno o platino
que termina en un arito de
5mm o en punta
Son dos placas de madera,
estn acomodadas formando
Gradilla como un edificio, la superior
tiene agujeros donde se
introducen los tubos de
ensayo y la inferior no tiene
agujeros

Instrumento de vidrio o
metal, destinado a
Mechero proporcionar combustin Los
ms usados son los de
alcohol y los de gas,
principalmente, el de
Bunsen.
Est compuesto por un tubo
transparente que termina en
Pipeta de Vidrio una de sus puntas de forma
cnica, y tiene una
graduacin (una serie de
marcas grabadas) con la que
se indican distintos
volmenes.
Bsicamente est
constituido por un dispositivo
de iluminacin, un vidrio
Microscopio plano o prisma de reflexin,
el ocular y el objetivo. El
aumento de la imagen
observada viene dado por el
producto de los aumentos
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del objetivo por los del ocular

Tubo de ensayo con tapn


Tubo de tapa rosca de rosca | vidrio tubo de
ensayo con tapn de
rosca vidrio resistente al
calor tubo de ensayo
Un gotero es un tubo hueco
terminado en su parte
Gotero inferior en forma cnica y
cerrada por la parte superior
por una perilla o dedal de
goma.
es un recipiente redondo, de
cristal o plstico, con una
cubierta de la misma forma
que la placa, pero algo ms
Cajas De Preti grande de dimetro, para
que se pueda colocar
encima y cerrar el recipiente,
aunque no de forma
hermtica

Es un instrumento de vidrio o
Rastrillo plstico, para distribucin
uniforme de muestras
bacteriolgicas sobre solidos .
medios de cultivo.
Es un instrumento de
Asas rectas laboratorio, est hecho de
platino, que termina en una
aguja recta.

5. PRACTICA 3 y 4: Datos y observaciones, fotografas y bocetos de lo observado.


Importancia y usos de los procedimientos realizados. Conceptos a desarrollar: Inoculacin,
aislamiento de microorganismos, tcnicas de siembra, contaminacin de cultivos
microbianos, recuento de microorganismos, diluciones, tcnicas de tincin, bacterias
grampositivas y gramnegativas, causa de la diferencia de tincin Gram, morfologa de las
bacterias, estructuras observadas de los hongos.

Procedimiento Mtodo siembra PRACTICA


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1. Desinfectar el rea de trabajo, prender el


mechero y preparar el material para el desarrollo
de la actividad, el material debe estar
previamente esterilizado.
2. Para ello se toma el asa de argolla se esteriliza
llevndola al rojo en la llama azul del mechero se
enfra en uno de los bordes de la caja y se toma
el inculo. Este se coloca en un rea perifrica de
la caja de Petri haciendo movimientos circulares
para homogenizar el inoculo, se procede luego a
realizar en forma ovalada y vertical con el asa la
mitad de la caja de Petri
3. Una vez terminada la siembra, marcamos las
cajas y se envolvieron en papel vinipel, se incuba
a 37 por 24 horas.
4. En el cultivo de la dilucin se observan
varias colonias de diferentes tamaos las cuales
se contabilizan en la cuenta-colonias para tener
un aproximado, obteniendo un total de 1916
colonias con lo cual usando la frmula:

podemos determinar:

Procedimiento Mtodo siembra PRACTICA


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1. Se mide en una pipeta de vidrio 90 ml de


agua pentonada y se le agrega 10 ml de
agua residual.

2. Una vez se realizada la mezcla con agua


residual con la pectonada, se saca 1ml de
la probeta y se agrega al tubo de ensayo
nmero 10-1, 1 ml, se le agregar al tubo de
ensayo 10-2, y as sucesivamente hasta
llegar al 10-6

3. Una vez se realiz el procedimiento se


agrega 1 ml a la caja Petri del tubo de en
sayo 10-2, 10-4 y 10-6, y en cada uno de
esos se esparci con el rastrillo haciendo
el movimiento en sicza.

4. Despus de tomar la muestra se envuelve


en papel kraft y se incuba a temperatura
37 c por 24 horas

PRACTICA 4 TECNICAS DE TINSION A

Parte A tincin de Gram para bacterias

Ilustracin Procedimiento

1. Pasamos la lmina de muestra sobre el mechero,


fijamos la muestra se le agrega

2. Se agrega 2 gotas de azul de violeta y se espera


aproximadamente 1 minuto, despus del minuto
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se enjuaga y se agregan gotas de lugol


nuevamente esperamos un minuto y se procede a
enjuagar.

3. Se coloca una gota de fucsina de Gram se dej


por un minuto, se lav y esperamos a que secara
la muestra.

4. Una vez la muestra estuvo seca le agregamos


una gota de acetite de inmersin y se coloc en el
microscopio, en el objetivo 100x

5. Se observ bacilos grampositivos (lactobacilos)

Lactobacilo
Grampositivas

Parte B tincin de Azul de lactofenol para hongos

Ilustracin Procedimiento

1. sobre una lmina se aplic una gota de


azul de lactofenol.

2. Se cogi el hongo del Petri con el asa


recta y se esparci.

3. Se coloc la lmina portaobjetos en el


microscopio.

4. Al observar la muestra en el microscopio


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se evidencian hifas cenocticas,


conidiforos y conidios.

Cenocticas

conidiforos

PRACTICA 5: Indicadores de contaminacin, norma agua potable en Colombia, cmo se


informan los resultados.

NORMATIVA VIGENTE - DECRETO 1575 DE 2007


RESOLUCION 2115 DE 2007
CAPITULO III

Caractersticas microbiolgicas

Artculo 10. Tcnicas para realizar anlisis microbiolgicos. Las tcnicas aceptadas para realizar
los anlisis microbiolgicos del agua para consumo humano son las siguientes:

Para Escherichia Coli y Coliformes totales: filtracin por membrana, Sustrato Definido, enzima
sustrato y presencia-ausencia.
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Se podrn adoptar otras tcnicas y metodologas debidamente validadas por el Instituto Nacional
de Salud, INS, o este realizar una revalidacin con base en documentos soporte de organismos
internacionales que presenten los solicitantes;

Para Giardia y Cryptosporidium: las tcnicas y metodologas de anlisis para estos


microorganismos deben ser validadas por el Instituto Nacional de Salud, INS, o revalidadas por
este con base en documentos soporte de organismos internacionales que presenten los
solicitantes.

Artculo 11. Caractersticas microbiolgicas. Las caractersticas microbiolgicas del agua para
consumo humano deben enmarcarse dentro de los siguientes valores mximos aceptables desde
el punto de vista microbiolgico, los cuales son establecidos teniendo en cuenta los lmites de
confianza del 95% y para tcnicas con habilidad de deteccin desde 1 Unidad Formadora de
Colonia (UFC) 1 microorganismo en 100 cm3 de muestra:

Caractersticas microbiolgicas
Tcnicas utilizadas Coniformes totales Escherichia coli

Filtracin por membrana 0 UFC/100 cm3 0 UFC/100 cm3

Enzima sustrato <de 1 microorganismo en <de 1 microorganismo en


100 cm3 100 cm3
Sustrato definido O microorganismo en 100 O microorganismo en 100
cm3 cm3
Presencia - Ausencia Ausencia en 100 cm3 Ausencia en 100 cm3

Pargrafo 1. Como prueba complementaria se recomienda realizar la determinacin de


microorganismos mesolticos, cuyo valor mximo aceptable ser de 100 UFC en 100 cm3.

Pargrafo 2. Ninguna muestra de agua para consumo humano debe contener E. coli en 100 cm3
de agua, independientemente del mtodo de anlisis utilizado.

Pargrafo 3. El valor aceptable para Giardia es de cero (0) Quistes y para Cryptosporidium debe
ser cero (0) Oquistes por volumen fijado segn la metodologa aplicada.

CAPITULO IV

Instrumento bsicos para garantizar la calidad del agua para consumo humano

Artculo 12. ndice de Riesgo de la Calidad del Agua para Consumo Humano, IRCA. Es el
grado de riesgo de ocurrencia de enfermedades relacionadas con el no cumplimiento de las
caractersticas fsicas, qumicas y microbiolgicas del agua para consumo humano.

Artculo 13. ndice de Riesgo Municipal por Abastecimiento de Agua para Consumo
Humano, Irabam. Es la ponderacin de los factores de:
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1. tratamiento y continuidad del servicio de los sistemas de acueducto, y

2. distribucin del agua en el rea de jurisdiccin del municipio correspondiente, que pueden
afectar indirectamente la calidad del agua para consumo humano y, por ende, la salud
humana.

Este ndice tiene por objeto asociar el riesgo a la salud humana causado por los sistemas de
abastecimiento y establecer los respectivos niveles de riesgo.

Artculo 14. Elaboracin de los ndices. La elaboracin, aplicacin, implementacin y evaluacin


del ndice de Riesgo de la Calidad del Agua para Consumo Humano, IRCA, y del ndice de Riesgo
Municipal por Abastecimiento de Agua para Consumo Humano, Irabam, ser expedida por los
Ministerios de la Proteccin Social y de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial en un plazo no
mayor a un (1) mes contado a partir de la fecha de publicacin del presente decreto.

CAPITULO V
Procesos bsicos del control y la vigilancia para garantizar la calidad del agua para
consumo humano

Artculo 17. Procesos. Los procesos bsicos del control y vigilancia para garantizar la calidad del
agua para consumo humano incluyen la recoleccin de muestras de control y de vigilancia, el
anlisis e interpretacin, el suministro y difusin de la informacin y su utilizacin en la orientacin
en salud pblica o en actuaciones administrativas, segn el caso.

Artculo 19. Reportes de control. Las personas prestadoras debern consignar los resultados de
los anlisis de las muestras exigidas en el presente decreto, en el libro de registro de control de la
calidad de agua para consumo humano, el cual debe ser foliado y no se permitirn enmendaduras,
slo aclaraciones al margen. En el caso de que se utilice un registro sistematizado de control de la
calidad de agua, se debe garantizar las medidas de seguridad para evitar la alteracin de los datos
registrados. El libro o registro sistematizado de control de la calidad de agua para consumo
humano debe mantenerse actualizado.

Artculo 20. Anlisis de muestras de vigilancia. Las autoridades sanitarias competentes, a


travs de los laboratorios departamentales y distritales de salud pblica, debern realizar los
anlisis fsicos, qumicos y microbiolgicos de vigilancia para garantizar la calidad del agua para
consumo humano, teniendo en cuenta las acciones de vigilancia establecidas en la Ley 715 de
2001 o la norma que la modifique, sustituya o adicione.

Pargrafo 1. La autoridad sanitaria departamental o distrital podr prestar directamente el servicio


de anlisis de laboratorio para realizar la vigilancia de la calidad del agua para consumo humano, o
contratarlo con otro laboratorio de salud pblica departamental o distrital.

Pargrafo 2. El Instituto Nacional de Salud, INS, podr realizar anlisis fsicos y qumicos por
complementariedad, previa suscripcin de los convenios con las direcciones territoriales de salud
solicitantes.
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CONCLUSIONES

1. A travs de esta prctica de laboratorio pudimos experimentar, practicar y apropiar los


contenidos de hongos y bacterias que se queran observar a fondo, especificados por el
mdulo y gua de Microbiologa entre ellos la importancia de normas de bioseguridad para
la salud y el xito del laboratorio, el correcto uso de equipos como los materiales, el
microscopio y sustancias utilizadas.

2. A partir de esta primera experiencia con el microscopio, adems de reconocer sus partes y
ganar algunas destrezas en su uso, nos permiti obtener una mayor observacin de la
morfologa, estructura, color, textura y forma de bacterias grampositivas, gramnegativos y
hongos con levaduras.

3. Pasado una semana de haber sembrado correctamente nuestra muestra de hongos en la


caja Petri, observamos a las colonias que se formaron en las placas caracterizndolas en
sus diferentes aspectos, esto nos ayuda a observar coloraciones, consistencias que tienen
los hongos relacionados con sus muestras biolgicas y ambientales.

4. Con la ayuda de asas de siembra logramos obtener pequeas muestras de hongos y


posteriormente adicionarle una gota de azul de lacto fenol a cada muestra que pudimos
observar correctamente.
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BIBLIOGRAFIA

MDULO, M. O., Mtodos, I., & Tamayo, L. F. ESCUELA DE BIOANLISIS 1. DATOS


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q=caracteristicas+pipeta+de+vidrio&btnG=&hl=es&as_sdt=0%2C5

Geneser, F. (1994). Histologa (pp. 613-638). Buenos Aires: Medica panamericana.


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Madrid Valdebenito, V. (2013). Apunte de Apoyo para Trabajos Prcticos de Microbiologa.


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Torres, P., Cruz, C. H., & Patio, P. (2009). ndices de calidad de agua en fuentes superficiales
utilizadas en la produccin de agua para consumo humano. Una revisin crtica. Revista
Ingenieras Universidad de Medelln, 8(15), 79-94.
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https://tramitesccu.cra.gov.co/normatividad/admon1202/files/RESOLUCION_MAVDT_2115_DE_20
07.pdf

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