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WHO/GPV/98.

07
ORIGINAL: ANGLAIS
DISTRIBUTION : GENERALE

Thermostabilit des vaccins

A. Galazka, J. Milstien, M. Zaffran

PROGRAMME MONDIAL DES


VACCINS ET VACCINATIONS
Organisation mondiale de la Sant
Genve
1998
Le Programme mondial des Vaccins et Vaccinations
tient remercier les donateurs dont lappui financier objet
non dsign a permis la production du prsent document.

Numro de rfrence pour les commandes : WHO/GPV/98.07


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Organisation mondiale de la Sant
Programme mondial des Vaccins et Vaccinations
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Organisation mondiale de la Sant 1998

Ce document nest pas une publication officielle de lOrganisation mondiale de la Sant (OMS) et tous les
droits y affrents sont rservs par lOrganisation. Sil peut tre comment, rsum ou cit sans aucune
restriction, il ne saurait cependant tre reproduit ni traduit, partiellement ou en totalit, pour la vente ou
des fins commerciales.

Les opinions exprimes dans les documents par des auteurs cits nommment nengagent que lesdits
auteurs.

2 Thermostabilit des vaccins


Table des matires

Introduction .................................................................................................................... 1

Ire Partie : Questions concernant la conservation des vaccins ............................ 2


1. Importance de la chane du froid ..................................................................... 2
2. Pastilles de contrle des vaccins ; avenir de la chane du froid ................... 3
3. Mthodes pour dterminer leffet de la chaleur ou du froid
sur lactivit dun vaccin ................................................................................... 4

IIe Partie : Analyse de la stabilit des vaccins vaccins couramment


utiliss dans les programmes de vaccination ...................................................... 6
4. Anatoxines diphtrique et ttanique ............................................................... 6
5. Vaccin contre lhpatite B ............................................................................... 10
6. Vaccin antirougeoleux ..................................................................................... 13
7. Vaccin antamaril............................................................................................... 16
8. Vaccin anticoquelucheux ................................................................................ 18
9. Vaccin BCG...................................................................................................... 25
10. Vaccin antipoliomylitique ............................................................................. 31

IIIe Partie : Analyse de la stabilit des vaccins autres vaccins viraux ......... 41
11. Vaccin antipoliomylitique inactiv............................................................... 41
12. Vaccin antiourlien ............................................................................................ 42
13. Vaccin antiruboleux ....................................................................................... 42
14. Vaccin contre lhpatite A .............................................................................. 42
15. Vaccin contre lencphalite japonaise............................................................ 43
16. Vaccin antirabique ........................................................................................... 43
IVe Partie : Analyse de la stabilit des vaccins autres vaccins
bactriens ................................................................................................................. 44
17. Vaccin antimningococcique polyosidique ................................................... 44
18. Vaccin anti-Haemophilus influenzae type B................................................ 45
19. Vaccins antityphodiques ................................................................................ 45
20. Vaccin anticholrique ...................................................................................... 45

Ve Partie : Conclusions ............................................................................................. 47

VIe Partie : Rfrences................................................................................................ 49

Annexe : Tableaux rsumant la stabilit des vaccins ........................................... 61

WHO/GPV/98.07 3
Introduction

Les services de vaccination des pays en dveloppement permettent dviter que,


chaque anne, environ 490 000 enfants ne soient atteints de paralysie poliomylitique
et que plus de trois millions ne dcdent par la rougeole, le ttanos nonatal ou la
coqueluche (51). Ces rsultats sont imputables en partie la formation du personnel
aux techniques adquates de stockage et de transport des vaccins et en partie aux
amliorations de la chane du froid.

Cependant, dans de nombreuses rgions, la conservation et le transport des vaccins


ne sont toujours pas satisfaisants. On sinterroge souvent sur le sort rserver aux
stocks de vaccins qui ont t exposs, pendant des dures variables, des tempratures
leves. Il nexiste pas de mthodes simples et bon march que lon puisse utiliser sur
le terrain pour dterminer si un vaccin conserv la temprature ambiante a gard
au moins lactivit minimale requise, bien que les pastilles de contrle des vaccins
(PCV), dsormais fournies avec les vaccins antipoliomylitiques oraux (VPO),
puissent indiquer le niveau dexposition la chaleur de chaque flacon. Cette activit
ne peut tre prcise quau moyen dpreuves de laboratoire coteuses dont les
rsultats ne sont souvent obtenus quaprs plusieurs mois. Seul un nombre de doses
important (de 2 000 pour les vaccins antipoliomylitiques et antirougeoleux 200 000
pour le vaccin DTC [diphtrie-ttanos-coqueluche]) justifie lenvoi des vaccins pour
un nouveau contrle (45).

La connaissance de la stabilit du vaccin, notamment le taux de perte dactivit une


temprature donne, peut aider dterminer les conditions de stockage. Le prsent
document actualise les informations donnes dans le pass sur ce sujet (54), en
sintressant tout particulirement la stabilit des vaccins conservs ou transports
tempratures ambiantes ou exposs au gel.

La deuxime partie du document comporte une analyse de la stabilit de chaque


vaccin avec, dans une premire section, ceux qui sont le plus couramment utiliss
par les programmes nationaux de vaccination, en allant des plus stables, comme les
anatoxines, vers les moins stables, comme le vaccin antipoliomylitique oral. Les
sections suivantes passent en revue les autres vaccins viraux et bactriens qui ne
sont pas encore largement employs ou qui prviennent des maladies dont limportance
en sant publique est plutt rgionale que mondiale.

4 Thermostabilit des vaccins


Ire Partie :
Questions concernant la
conservation des vaccins

1. Importance de la chane du froid

Une attention scrupuleuse la conservation et la manipulation est ncessaire pour


garantir lactivit optimale des vaccins. Une alimentation lectrique suffisante et la
rfrigration manquent souvent dans les pays en dveloppement o, par consquent,
le stockage, la manipulation et la stabilit la chaleur des vaccins sont des sujets de
grande proccupation (28). De nouveaux produits ont t mis au point pour la scurit
du transport et de la conservation tandis que lon a augment la fiabilit de
lapprovisionnement par lintroduction de techniques de gestion amliore. Une
formation pousse permet de veiller ce que toute personne implique dans la chane
du froid en connaisse tous les aspects. Toutefois, les valuations ralises en Inde
(47, 139), en Malaisie (62), au Npal (46), en Rpublique-Unie de Tanzanie (131) et
en Tunisie (43) ont montr quil y avait toujours des points faibles dans lexcution
de la chane du froid et quil fallait y consacrer plus dattention, notamment dans les
tablissements priphriques.

Dans les pays temprs, on accorde peu dattention limportance de maintenir la


chane du froid. Bien que la rfrigration soit souvent considre comme acquise,
des erreurs dans la manipulation des vaccins peuvent se produire beaucoup plus
frquemment quon ne le croit en gnral (21) et lon a signal des baisses importantes
de lactivit vaccinale suite des conditions de dlivrance et de stockage qui ntaient
pas satisfaisantes (84, 89).

Les dfaillances les plus courantes au niveau de la chane du froid signales dans les
pays dvelopps sont les suivantes : tempratures leves au cours du stockage ou
du transport (21, 27, 90, 107, 138) ; exposition des vaccins adsorbs des
tempratures de conglation (64, 76, 107) ; rfrigrateurs sans thermomtre ;
irrgularit de la prise et de lenregistrement des tempratures (17, 21, 39, 63, 68,
90, 138, 142) ; stockage de mdicaments, de boissons, daliments et dchantillons
pathologiques avec les vaccins (21, 90) et conservation des vaccins inutiliss aprs
des sances de vaccination temprature ambiante (39).

On a dcouvert une forte prvalence derreurs vitables dans la zone mtropolitaine


de Los Angeles (Etats-Unis dAmrique), o lon accordait peu dattention la
surveillance des pratiques de conservation des vaccins (21). Des tudes en Hongrie
(93), en Pologne (94) et au Royaume-Uni de Grande Bretagne et dIrlande du Nord
(23) ont montr des faiblesses importantes de la chane du froid au cours du transport
des vaccins entre les fabricants ou les points de distribution centrale et les

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tablissements de soins. En Hongrie, les contrles de la chane du froid ont rvl
quau moins 6 % des DTC et 30 % des BCG taient exposs une chaleur excessive
lorsquils taient transports par les services postaux au cours de lt ; en hiver,
38 % des expditions taient exposs au gel (93). En Pologne, la conservation des
vaccins tait en gnral satisfaisante dans les dpts centraux et les centres sanitaires
dpidmiologie, mais ctait moins le cas dans les services de consultations externes
et les centres de sant. Les conditions de transport des vaccins ntaient absolument
pas satisfaisantes aucun niveau (94).

2. Pastilles de contrle des vaccins ; avenir de la chane du froid

Les pastilles de contrle des vaccins, qui mesurent lexposition la chaleur, sont des
tiquettes, sensibles au temps coul et la temprature, que lon fixe sur les flacons
de vaccin au moment de la fabrication. Au moyen dune modification progressive de
leur couleur, ils avertissent les agents de sant et les responsables du stockage quand
un vaccin a t expos une chaleur excessive et ne doit plus tre utilis. Elles sont
conues pour ragir en fonction de la courbe de stabilit thermique du vaccin avec
une marge de scurit (160). Elles rpondent soit aux normes de lOMS concernant
la thermostabilit, soit aux donnes fournies par le fabricant lorsque celles-ci sont
plus strictes.

Linformation donne par une PCV est simple. Si le carr intrieur est dune couleur
plus claire que lanneau de rfrence externe, on peut alors employer le vaccin. Si ce
carr est de la mme couleur ou plus fonc que lanneau extrieur, le vaccin ne peut
plus tre utilis (Fig. 1).

Figure 1 : Pastille de contrle des vaccins avec


les quatre stades de lexposition

Carr intrieur plus clair que lanneau extrieur.


Si la date dexpiration nest pas dpasse,
UTILISER le vaccin

Le temps passe, le carr intrieur est toujours

plus clair que lanneau extrieur.


Si la date dexpiration nest pas dpasse,
UTILISER le vaccin

Point limite : le carr intrieur est de la mme


couleur que lanneau extrieur.
NE PAS utiliser le vaccin


Au-del du point limite : le carr intrieur est plus fonc
que lanneau extrieur.
NE PAS utiliser le vaccin

6 Thermostabilit des vaccins


Les PCV sont apparues pour la premire fois sur les flacons de VPO fournis
lUNICEF et lOMS durant le premier trimestre de 1996. Elles font partie des
spcifications des appels doffre lancs par ces deux organisations. Les pays qui se
fournissent directement en vaccins commencent galement exiger les PCV sur les
VPO.

Lorsque ladministration et les infrastructures du Programme largi de Vaccination


(PEV) ont t tablies, il tait impossible de vrifier si les vaccins conservaient une
activit suffisante pendant la distribution. Par consquent, au cours des 20 dernires
annes, on a bti et entretenu les systmes de chane du froid sur la base dun seul
ensemble de rgles gouvernant la manipulation des vaccins dans le monde entier,
sans tenir compte spcifiquement des conditions locales ou des types de vaccin. Cette
approche avait le mrite de la simplicit : elle facilitait la comprhension, la mise en
uvre et ladministration de la chane du froid et elle prsentait un objectif concret
raliser et ne prtant pas controverses.

Toutefois, elle a suscit lapparition graduelle dune vision dogmatique de la chane


du froid et a empch les agents de sant de profiter au mieux de la thermostabilit
relle des diffrents vaccins.

Les programmes de vaccination ont dsormais volu et ils se sont diversifis : la


stratgie oprationnelle atteint des rgions difficiles daccs, des campagnes spciales
couvrent de grandes populations cibles et lon consent un effort majeur pour atteindre
chaque enfant non protg. Les vaccins sont devenus plus stables et une thermostabilit
amliore, voire intgrale, fait partie des perspectives clairement tablies. Dans ces
conditions, la conception dogmatique de la chane du froid entrane un gaspillage des
ressources et impose aux oprations sur le terrain des restrictions inutiles.

On peut considrer la PCV comme le catalyseur dun changement trs ncessaire


des stratgies de distribution des vaccins par la chane du froid. Au bout du compte,
elle devrait permettre aux programmes de vaccination dexploiter le plus possible la
stabilit de chaque vaccin, de minimiser les cots de distribution et daccrotre la
flexibilit de la manipulation des vaccins sur le terrain, contribuant ainsi rendre les
oprations plus efficaces.

3. Mthodes pour dterminer leffet de la chaleur ou du froid sur


lactivit dun vaccin

Certains auteurs sont davis de dterminer la priode de validit dun vaccin en


estimant la baisse dactivit subie lors des longues priodes de stockage des
tempratures varies. Lpreuve de dgradation acclre (EDA) est plus pratique.
Elle consiste soumettre des chantillons une gamme de tempratures leves qui
provoquent une dnaturation importante et facilement dtectable dans un laps de
temps relativement court. On mesure le taux de cette dgradation puis on lextrapole
pour les tempratures plus basses auxquelles les vaccins sont conservs, conformment
lquation dArrhenius (144). La prcision avec laquelle lEDA permet de prvoir
les taux de dgradation varie considrablement en fonction des gammes de
tempratures utilises, du nombre dchantillons tests et du schma de lpreuve.
Lutilisation des rsultats des EDA peut tre encore complique par les diffrentes
mthodes et techniques utilises pour valuer lactivit des vaccins.

WHO/GPV/98.07 7
La dtermination du titre viral des vaccins vivants attnus antipoliomylitiques,
antirougeoleux et antiruboleux fait appel une technique simple. Par contre, les
tests biologiques des vaccins bactriens et des anatoxines implique des preuves
difficiles qui ncessitent un grand nombre danimaux, lactivit du vaccin tant
exprime en units fixes arbitrairement ou en doses relles assurant une protection
de 50 %. Les rsultats de ces preuves sont souvent sujets de larges variations
biologiques et il est difficile dobtenir des donnes prcises sur la dtrioration dun
vaccin moins quelle ne se soit produite nettement (120).

Les vaccins et les anatoxines sont faits de protines, dacides nucliques, de lipides et
dhydrates de carbone qui subissent des modifications lorsquils sont exposs la
chaleur. La temprature de conservation conditionne le taux de dgradation dun
vaccin : plus elle est leve, plus la dgradation est rapide et forte, mais les taux
peuvent varier considrablement. Cependant, le taux de dgradation (b) nest pas
lunique facteur dterminant lactivit rsiduelle (Yt ) dun vaccin : le temps (T) pendant
lequel le vaccin est conserv une temprature donne et son activit initiale (Y0)
interviennent galement.

La relation entre ces trois facteurs sexprime au moyen de la formule suivante :

Yt = Y0 - bT

Lutilit de cette formule est limite par le fait que nombre de ceux qui sont engags
dans un programme de vaccination ne connaissent pas forcment lactivit initiale
dun vaccin. Toutefois, il peut tre prcieux pour un agent de sant de connatre les
caractristiques relatives au taux de dgradation diverses tempratures et le temps
dexposition dun vaccin une temprature donne pour savoir quoi faire de ce vaccin.

Le prsent document examine les informations actuelles concernant la stabilit des


vaccins de faon pouvoir les utiliser avec le maximum defficacit.

8 Thermostabilit des vaccins


IIe Partie :
Analyse de la stabilit des vaccins
vaccins couramment utiliss
dans les programmes de
vaccination
4. Anatoxines diphtrique et ttanique

4.1 Exposition des tempratures leves

Les anatoxines diphtrique et ttanique adsorbes sous forme monovalente ou en


tant que composantes des vaccins associs sont les plus stables des vaccins couramment
utiliss dans les programmes nationaux de vaccination. Etant des protines, elles
obissent en gnral aux principes de thermostabilit gouvernant cette classe de
produits. Elles sont stables des tempratures leves, mme pendant de longues
priodes de stockage, mais elles peuvent changer daspect et perdre de leur activit
si elles sont congeles, non pas cause des proprits des anatoxines elles-mmes
mais cause de ladjuvant base daluminium dont la structure particulire en gel est
dtruite par la conglation.

Lactivit de la composante ttanique des vaccins adsorbs DTC ou DTC-polio na


pas montr de changement significatif des tempratures de +4 C +8 C pendant
3 7 ans (80, 83, 130, 146). La dure de conservation aux tempratures
recommandes gnralement par les fabricants (+2 C +8 C) dpend de la nature
du vaccin : la priode de validit est normalement plus longue pour les anatoxines
monovalentes ou le vaccin associ diphtrie/ttanos (gnralement 3 ans) que pour
les vaccins DTC ou DTC-polio (18 24 mois). Pour les vaccins associs, les
composantes coqueluche ou poliomylite constituent les facteurs limitants.

La composante anatoxine des vaccins DTC ou DTC-polio montre une diminution


ngligeable de lactivit quand elle est conserve pendant un an et demi
18 C (130), pendant 6 12 mois 24 C (136) et pendant 2 6 mois 37 C
(83, 136, 146). Dautres tudes ont nanmoins montr une plus grande labilit la
chaleur. Un stockage 37 C jusqu 22 semaines a fait baisser de 50 % lactivit
initiale des composantes diphtrique et ttanique des vaccins DTC-polio provenant
dun fabricant (146). Pour dautres vaccins DTC, la composante anatoxine ttanique,
stocke pendant 45 jours 22 C et 35 C, a prsent une dtrioration encore plus
marque, la baisse quotidienne stablissant environ 0,5 % et 1 % respectivement
(Fig. 2) (85).

WHO/GPV/98.07 9
Figure 2 : Activit de la composante ttanique dun DTC stock pendant
45 jours diffrentes tempratures.

160
Activit par dose en units internationales

140
+40C

120
+220C
100
+350C
80

60

40

WHO 98557/F
20 +450C

0 15 30 45

Jours de stockage

Source : Kumar V et al. (85)

Les composantes anatoxines diphtrique et ttanique de certains vaccins DTC peuvent


rsister plusieurs semaines une exposition des tempratures suprieures 37 C.
On na observ aucune baisse significative de lactivit de lune ou lautre composante
avec le vaccin DTC dun fabricant, stock 45 C pendant 2 4 semaines. Cependant,
le stockage cette temprature pendant 8 semaines a abouti une baisse de lactivit
de lordre de 40 % (83) Le processus de dtrioration a t plus rapide pour un
certain nombre dautres vaccins DTC ; 45 C, la perte dactivit de la composante
ttanique a t de 5 % par jour pendant la premire quinzaine et de 1 % par jour au
cours du mois de stockage suivant (85).

A des tempratures suprieures 45 C, la dgradation de lactivit de lanatoxine


est acclre et elle ne suit plus lquation dArrhenius cause de la dnaturation des
protines. Aprs une exposition 53 C pendant quatre et huit jours, lanatoxine
ttanique adsorbe monovalente soumise lEDA a perdu respectivement 17 % et
47 % de son activit initiale (Tableau 1) (30). Les anatoxines ttanique et diphtrique
exposes 60 C sont dtruites en trois cinq heures (30, 135).

10 Thermostabilit des vaccins


Tableau 1 : Activit de lanatoxine ttanique adsorbe
en fonction du temps de stockage et de la temprature

Temprature (C) Dure dexposition (heures) Activit restante

53 96 83

192 53

55 32 97

72 52

144 44

288 35

65 3 20

Source : Cohen H, van Ramshorst JD, Tasman A (30).

Les anatoxines diphtrique et ttanique adsorbes testes en Pologne (2) ont montr
une baisse de lactivit de 50 % (demi-vie) aprs 4 8 jours 53 - 55 C, aprs 80
90 jours 45 C, aprs 10 13 mois 35 - 37 C et aprs 5 7 ans 20 - 25 C. Les
auteurs en ont conclu que les anatoxines laisses par erreur temprature ambiante
pendant deux semaines au maximum pouvaient tre utilises chez lhomme en toute
scurit sans quil soit besoin de contrler leur activit.

4.2 Exposition la conglation

La rduction de lactivit de lanatoxine ttanique varie lgrement avec la composition


du vaccin. Pour deux vaccins DTC sur cinq conservs 12 heures - 30 C, cette
composante a montr une baisse dactivit denviron 30 % tandis quil ny a pas eu
une telle diminution pour les vaccins conservs entre - 5 C et - 10 C. Toutefois, on
a not une diminution de lactivit de la composante anatoxine ttanique dans les
vaccins DT adsorbs aprs conglation aux tempratures de - 5 C et - 30 C (42).
Cette diffrence est sans aucun doute attribuable llment coqueluche des vaccins
DTC lorsque lactivit est teste au moyen dessais sur lanimal. Lintrt de cette
observation pour lefficacit protectrice nest pas connu.

Lanatoxine ttanique monovalente congele, utilise chez de jeunes recrues, en


particulier de lanatoxine congele quatre reprises, a suscit une rponse moyenne
plus faible et une proportion moindre de titres levs par rapport au produit non
congel, bien que la signification de cette diffrence ne soit pas claircie. Nanmoins,
toutes les personnes vaccines au moyen danatoxines congeles dveloppent des
niveaux protecteurs danticorps antittaniques. La conglation ne semble pas affecter
limmunognicit de lanatoxine non adsorbe (qui reste toutefois moins immunogne
que le produit adsorb) (Tableau 2) (106).

WHO/GPV/98.07 11
Tableau 2 : Rponse immunitaire chez des recrues vaccines
au moyen dune anatoxine ttanique adsorbe congele et non congele.

Anatoxine Traitement 10 jours aprs 10 jours aprs 10 jours aprs


la premire dose la deuxime dose la troisime dose

% > 0,01 Moyenne % >0.01 Moyenne % >0.01 Moyenne


UI/ml en UI/ml UI/ml en UI/ml UI/ml en UI/ml

non congele 50 0.07 89 4.0 90 13.5


Adsorbe congele 1x 47 0.07 84 3.0 73 9.7
sur AlPO4 congele 4x 46 0.05 77 2.4 69 9.2

non congele 50 0.04 27 0.6 21 3.2


Non- congele 1x 50 0.05 36 0.7 34 3.3
adsorbe congele 4x 54 0.06 30 0.7 21 3.2

Source : Menon PS et al. (106)

4.3 Modifications physiques de ladjuvant daluminium hautes et basses


tempratures

Les observations examines plus haut se rapportent lactivit des anatoxines telle
quelle rsulte de lexprimentation animale. Une exposition prolonge une
temprature leve peut nanmoins aboutir un certain nombre de modifications
des caractristiques physiques de la composante aluminium qui ne sont pas mises en
vidence par les preuves dactivit sur lanimal. Stock comme composante unique
ou comme adjuvant des vaccins D, DT et DTC (3, 163, 164), lhydroxyde
daluminium, utilis comme adjuvant, a montr des symptmes de vieillissementse
traduisant par des changements morphologiques et structurels. On a observ une
baisse constante de sa capacit absorber le rouge Congo au cours dun stockage
une temprature de +4 C +10 C pendant 5,5 ans. Les tudes recourant au
microscope lectronique et la radiographie ont montr que les modifications
morphologiques et structurelles progressent plus rapidement 10 C qu 4 C
(163, 164).

Le point de conglation pour les vaccins DTC adsorbs se situe entre - 5 C


et - 10 C (42). Le temps ncessaire pour congeler le DTC, le DT ou lanatoxine
ttanique dpend du nombre de doses dans le flacon (plus le volume est grand, plus
cela demande du temps) et de la temprature : 110 130 minutes - 10 C, 25
45 minutes - 20 C et 9 11 minutes - 70 C. A cause du phnomne de surfusion,
la temprature dans les flacons de DTC, de DT ou danatoxine ttanique tombe bien
en dessous de zro (- 1,6 - 2,6 C lorsque la temprature extrieure se situe
entre - 4,2 C et - 4,6 C) avant datteindre le seuil dinstabilit. Au moment de la
solidification, la temprature du vaccin remonte la valeur scientifique du point de
conglation qui se situe aux alentours de - 0,5 C (50, 103).

Les vaccins adsorbs, sous forme monovalente ou en association, changent daspect


aprs que la conglation a induit des modifications de structure et de morphologie de
ladsorbant. Les modifications de pH et la conservation des tempratures leves
ninfluent pas sur la structure du gel dalumine, mais la conglation provoque de
profondes modifications morphologiques visibles au microscope lectronique (3).

12 Thermostabilit des vaccins


La formation de particules agrges, floconneuses ou granuleuses acclre la vitesse
de sdimentation (3, 6, 42, 106, 130), et elles ne forment pas une suspension homogne
mme en agitant vigoureusement le flacon. La taille de ces particules semble augmenter
avec la rptition du cycle conglation/dconglation (106).

Les modifications physiques induites par la conglation sont la base de lpreuve


dagitation du vaccin (shake test), utile pour dtecter les vaccins adsorbs qui ont
t congels (42). Cette preuve est facile excuter : aprs avoir agit
vigoureusement le rcipient du vaccin, on cherche dventuelles modifications
physiques dans le contenu puis on contrle lampleur de la sdimentation aprs
30 minutes. la prsence de particules granuleuses ou floconneuses lorsque le vaccin
est secou ou la formation dun dpt sdimentaire surmont dune colonne de liquide
clair dans les 30 minutes indique que le vaccin a t congel. La ralisation de cette
preuve ncessite nanmoins une certaine exprience. De surcrot, tous les vaccins
ne subissent pas des modifications physiques aprs conglation.

Les vaccins DTC, DT, lanatoxine ttanique et le vaccin contre lhpatite B,


susceptibles davoir t congels, seront examins pour voir sils prsentent des
modifications physiques. Si cest le cas, il faudra les jeter. Ladministration dun vaccin
non homogne peut entraner de fortes variations dans la quantit dantignes inoculs
ainsi quune rponse immunitaire diminue ou une augmentation de lincidence des
ractions locales.

4.4 Rsum

Les anatoxines diphtrique et ttanique comptent parmi les vaccins les plus stables
couramment administrs. Ils se conservent pendant des annes des tempratures
entre 2 et 8 C, pendant plusieurs mois temprature ambiante, et pendant plusieurs
semaines 37 C. A 45 C, leur dgradation sacclre et leur activit peut diminuer
en lespace de quelques semaines. A 53 C, elles perdent leur activit en quelques
jours et 60 C en quelques heures seulement. La conglation peut rduire lactivit
des anatoxines adsorbes mais elle ne semble pas affecter cependant limmunognicit
des produits non adsorbs. Le point de conglation des anatoxines adsorbes se situe
entre - 5 C et - 10 C ; il ne faut jamais les congeler.

5. Vaccin contre lhpatite B

5.1 Exposition la chaleur et aux basses tempratures

Le vaccin contre lhpatite B (HB) est une suspension liquide se composant dun
antigne de surface du virus de lhpatite B (HBsAg) purifi et adsorb sur un sel
daluminium. Deux types de vaccin sont disponibles sur le march : lun est driv du
plasma, lautre est base dADN recombinant. Comme pour les autres vaccins
adsorbs sur des sels daluminium, la conglation peut provoquer des baisses
importantes dactivit. Ce risque est susceptible de saccrotre au bout de la chane
du froid, lorsque le vaccin est transport dans des botes isothermes et peut se trouver
en contact avec des blocs glace. Le vaccin anti-HB doit tre protg de la
conglation et il ne faut pas lutiliser si lon pense quil a t congel. Son point de
conglation se situe - 0,5 C environ.

WHO/GPV/98.07 13
A des tempratures comprises entre 2 et 8 C, le vaccin anti-HB semble stable pendant
de nombreuses annes et lon na pas tabli la limite suprieure de sa dure de
conservation.

Un vaccin anti-HB base dADN recombinant et driv de la levure (Engerix-B)


semble tre stable aux tempratures leves. Le fabricant estime que sa stabilit est
de 30 jours entre 20 et 25 C, dune semaine 37 C et de 3 jours 45 C, avec des
demi-vies correspondantes calcules 9 mois, 31 jours et 13 jours.

On na pas observ de diffrence dans les rponses immunitaires entre des personnes
en bonne sant ayant reu un vaccin recombinant chauff 37 C pendant une semaine
et des sujets similaires auxquels on a administr un vaccin tmoin conserv
4 C : la rpartition des anticorps et la moyenne gomtrique de leur titre taient
identiques pour les deux groupes. Dans lensemble, lincidence, la gravit et les types
de symptmes ont t semblables dans les deux cas et lon na pas signal de ractions
indsirables graves (78).

Une autre tude a port sur le vaccin recombinant administr des volontaires sains.
En utilisant des vaccins conservs 4 C aux fins de comparaison, il est apparu que
le chauffage du vaccin 45 C pendant une semaine ou 37 C pendant un mois
naltrait pas sa ractognicit ni sa capacit produire des titres danticorps un
niveau considr comme protecteur (145).

Cinq fabricants ont fourni des donnes sur la thermostabilit de leurs vaccins anti-
HB lorsquils sont conservs diffrentes tempratures. Les preuves ont port sur
des lots produits en routine : quatre produits drivs du plasma et un vaccin
recombinant (Tableau 3).

Les rsultats montrent que les vaccins anti-HB conservs entre 2 et 8 C sont tout
fait stables pour des priodes allant jusqu quatre ans. A des tempratures ambiantes
comprises entre 20 et 26 C, les vaccins de trois des fabricants ont t stables pendant
au moins un an, tandis que celui dun autre a perdu 50 % de son activit initiale en
quatre mois. A des tempratures comprises entre 36 et 40 C, le vaccin du cinquime
fabricant a montr un niveau plus faible de thermostabilit que les autres. Laspect
physique, le pH, le contenu en merthiolate, en aluminium et en protines, la strilit
et la toxicit anormale sont rests les mmes pour les vaccins produits par un des
fabricants et conservs pendant 24 mois des tempratures allant de 2 36 C.

14 Thermostabilit des vaccins


Tableau 3 : Stabilit de cinq vaccins anti-HB daprs les essais
dimmunognicit sur lanimal

Vaccins tests Paramtres utiliss pour Temprature de conservation (C)


tester les vaccins

2-8 20 - 26 36 - 40 45

A (plasma) Conservation maximale 24 mois 12 mois 3 mois -


sans perte significative
dactivit

C (plasma) Activit restante (%) aprs 100% aprs 70% aprs 70% aprs -
un laps de temps donn 24 mois 24 mois 24 mois

D (plasma) Conservation maximale 44 mois - - -


avec un intervalle de
confiance pour lactivit
relative > 1

E (recombinant) Conservation maximale 53 mois 12 mois 7 mois 1 mois


avec un intervalle de
confiance pour lactivit
relative > 1

Demi-vie * - 9 mois 1 mois 3 jours

F (plasma) Demi-vie >3 ans 4 mois 7 jours -

* Demi-vie : temps au bout duquel on observe une baisse de 50 % de lactivit initiale


Source : donnes fournies par les fabricants

5.2 Vaccins anti-HB utiliss en dehors de la chane du froid

Une tude a t ralise en Chine pour valuer si les vaccins conservs en dehors de
la chane du froid pour des priodes allant jusqu trois mois pouvaient rester efficaces
et tre toujours administrs des enfants la naissance (7). Les vaccins, stocks
temprature ambiante, ont t administrs par les sages-femmes 358 enfants leur
naissance. Pour le groupe tmoin, le mme vaccin, conserv au rfrigrateur, a t
administr par des mdecins de village 232 nourrissons entre 24 et 72 heures aprs
la naissance. Les deuximes et troisimes doses ont t donnes avec les autres vaccins
dans le cadre des services de sant priphriques, disponibles des intervalles
denviron deux mois. Les taux de sroconversion pour lanti-HBsAg avec les vaccins
stocks rfrigrs ou non ont t de 81,6 % et 81,9 % respectivement.

Bien que le vaccin anti-HB soit extrmement stable la chaleur, nous ne disposons
pas encore de donnes suffisantes pour recommander une utilisation intgralement
en dehors de la chane du froid. Les rapports prometteurs de Chine ne donnent pas
dinformations sur la gamme des tempratures ambiantes auxquelles les vaccins ont
t exposs et utiliss par les sages-femmes. Il existe nanmoins la latitude dlaborer
une instruction permettant de sortir les vaccins de la chane du froid en cas durgence
ou pour les activits priphriques de courte dure, dans la mesure o une pastille de
contrle est fixe sur chaque flacon.

WHO/GPV/98.07 15
5.3 Rsum

Ces informations laissent penser que le vaccin anti-HB se trouve dans la gamme
suprieure de la thermostabilit, avec les anatoxines diphtrique et ttanique, parmi
les vaccins couramment utiliss dans les programmes de vaccination. Il est stable
jusqu 4 ans entre 2 et 8 C, plusieurs mois entre 20 et 25 C, plusieurs semaines
37 C et plusieurs jours 45 C. Comme pour les autres vaccins adsorbs sur des
sels daluminium, sa conglation peut entraner une baisse dactivit importante. Son
point de conglation se situe - 0,5 C environ. Il convient donc de toujours le
protger du gel, notamment en bout de la chane du froid, lorsquil est transport
dans des botes isothermes en contact avec des accumulateurs de froid.

6. Vaccin antirougeoleux

6.1 Stabilit du vaccin lyophilis

Ces dernires annes, on a fait des progrs sensibles pour amliorer la thermostabilit
de ce vaccin. La mise au point dun stabilisant efficace (59, 102, 119) et la formulation
de normes OMS relatives la thermostabilit du vaccin antirougeoleux lyophilis
(152, 153) ont eu un retentissement considrable sur la qualit des vaccins
antirougeoleux disponibles sur le march.

Ces deux normes font appel deux critres de stabilit :


(1) Les vaccins lyophiliss doivent conserver au moins 1 000 particules virales
vivantes par dose destine lhomme la fin dune dure dincubation de
7 jours 37 C ;
(2) Si, au cours de lincubation, le titre viral a diminu, cette baisse ne doit pas
dpasser 1 log10 (152).

Laugmentation de la thermostabilit dans les conditions normales de travail revt


une importance particulire dans les pays en dveloppement (65).

Le vaccin antirougeoleux sous sa forme sche est extrmement stable aux


tempratures en dessous de zro (102). Il reste actif sil est conserv au froid et des
conglations successives ne lendommage pas.

La dgradation thermique des vaccins antirougeoleux de seconde gnration est lente


(Fig. 3) (4, 100). A une temprature comprise entre 2 et 8 C, ces vaccins amliors
conservent une activit minimale pendant plus de deux ans (19, 102, 119).

La stabilit des vaccins antirougeoleux actuels est grande aux tempratures leves.
A temprature ambiante (20 25 C), les produits modernes ont un taux de
dgradation lente denviron 0,17 et 0,33 DICC 50 aprs deux et quatre semaines
respectivement de stockage (119). Le titre infectant minimal requis persiste encore
aprs deux quatre mois de conservation temprature ambiante (73, 102).
Des vaccins antirougeoleux conservs 25 C pendant 7 jours ont induit la
sroconversion chez 122 (92 %) des 132 enfants vaccins (66).

16 Thermostabilit des vaccins


On a montr que des vaccins antirougeoleux gardaient le titre infectant requis aprs
14 jours de stockage 37 C (102, 119). Les vaccins de deuxime gnration ont
perdu respectivement 0,39 et 0,47 log10 DICC50 aprs 7 et 14 jours de conservation
37 C, tout en gardant des concentrations virales rsiduelles suprieures
1 000 DICC50 par dose (73). Sur lensemble des 30 jours dexposition 37 C, le
taux de dgradation a t de 0,025 log10 DICC50 par jour. La demi-vie tait denviron
sept jours.

La thermostabilit renforce des vaccins antirougeoleux de seconde gnration sest


confirme sur le terrain. Des tudes au Cameroun ont montr que ceux-ci, stocks
37 C pour une dure allant jusqu 14 jours, pouvaient induire la sroconversion
chez les enfants srongatifs (65).

A 41 C, le processus de dgradation est rapide et se traduit par une baisse du titre


de 50 % en deux jours et de 0,4 0,7 log10 en une semaine (48, 119). On a estim la
demi-vie des vaccins antirougeoleux 31 jours 20 - 25 C, 16,6 jours 37 C et
3,3 jours 41 C (5).

Entre 54 et 56 C, le vaccin antirougeoleux est inactiv rapidement, perdant plus de


0,65 log10 et 1,3 log10 pour un et trois jours dexposition respectivement. Le temps
ncessaire pour que le titre descende 1 000 DICC50 a t denviron 12 heures
(102).

6.2 Stabilit du vaccin reconstitu

Les vaccins antirougeoleux, mme ceux dots dune thermostabilit renforce sous
forme sche, perdent rapidement leur activit une fois reconstitus et conservs
des tempratures leves.

Lactivit des vaccins antirougeoleux reconstitus 4 C est reste suprieure


1 000 DICC50 pendant au moins 24 heures, bien quils aient subi une dgradation de
0,014 log10 DICC50 par heure (48). Lorsquun vaccin reconstitu est conserv
26 C, la baisse du titre peut atteindre 0,02 0,027 log10 par heure. Le temps
ncessaire pour que le titre descende 1 000 DICC50 se situe entre 16 et 24 heures
(48, 102, 73).

A 37 C, le vaccin se dgrade plus rapidement : la baisse du titre atteint environ


0,1 log10 par heure, ce qui donne une rduction du titre 1 000 DICC 50 pouvant
prendre moins de sept heures (48, 102, 119).

La reconstitution du vaccin avec un diluant chaud peut tre nocive : un vaccin


reconstitu avec un diluant prchauff 41 C puis incub au bain-marie cette
temprature a perdu la moiti de son activit de dpart en une demi-heure et
0,5 0,7 log10 en une heure (119). A 37 C, la baisse du titre a t de 0,4 0,5 et de
0,8 1,0 log10 en 3 et 6 heures respectivement (48, 119).

Les vaccins antirougeoleux reconstitus doivent tre utiliss au cours de la sance


de vaccination. Le vaccin antirougeoleux est produit sous forme lyophilise (procd
de conglation - dessiccation) et doit tre reconstitu extemporanment avec le diluant
fourni par le fabricant. Cela rend possible des erreurs lors de la manipulation (156).

WHO/GPV/98.07 17
Il existe un risque srieux lorsque le vaccin reconstitu est conserv plus de six
heures, quelle que soit la temprature et plus de 8 C quelle que soit la dure de
conservation. Ceci est d la possibilit de contamination du produit pouvant
entraner des effets secondaires graves pour les sujets vaccins. Lors de son utilisation,
le vaccin antirougeoleux doit tre protg des tempratures leves et de la lumire
(celle-ci pouvant inactiver le virus). Les vaccins reconstitus doivent tre jets la
fin de chaque sance de vaccination et ne doivent JAMAIS tre gards pour une
sance ultrieure (156).

Figure 3 : Essais de stabilit acclres trois tempratures pour un vaccin


de premire gnration (a) et de seconde gnration (b)

5
a) b)
* *
4
Log10 units infectantes/flacon

2 o o
32 C 31 C

WHO 98563/
o o
37 C *non exposs
*non exposs 37 C
o o
45 C 45 C
1
0 0 10 15 20 0 5 10 15 20 25 30 35 40
Dure dexposition en jours

* Valeur pour les vaccins non exposs


Sources : Allison LMC et al., Mann GF et al. (4, 100)

6.3 Rsum

Le vaccin antirougeoleux sous forme lyophilise est trs stable. Il lest aux
tempratures infrieures zro degr et des conglations successives ne labment
pas. Entre 2 et 8 C, il maintient une activit minimale pendant plus de deux ans. A
temprature ambiante (de 20 25 C), le titre infectieux minimal requis se maintient
pendant au moins un mois et pendant au moins une semaine 37 C. A 41 C, il se
dgrade rapidement, le titre baissant de 50 % en deux jours.

Aprs reconstitution, le vaccin antirougeoleux perd rapidement son activit lorsquil


est conserv des tempratures leves. A 26 C, le titre baisse au niveau minimal
en 16 heures environ et 37 C en sept heures approximativement. Il faut conserver
au froid les vaccins reconstitus pendant la vaccination, les jeter la fin de chaque
sance et ne jamais les garder en vue dune sance ultrieure.

18 Thermostabilit des vaccins


7. Vaccin antamaril

7.1 Stabilit du vaccin lyophilis

La stabilit mdiocre des premiers vaccins antiamarils a t proccupante. Pour la


plupart, ils perdaient de leur activit durant une priode de stockage de 6 mois
- 20 C ou 5 C et, soumis des tempratures leves, ils se dgradaient trs
rapidement (125, 133). Plusieurs fabricants ont prpar des vaccins stabilit
renforce. Des milieux comme le lactose, le sorbitol, lhistidine et lalanine ont amlior
considrablement la thermostabilit du vaccin 17D lyophilis (12, 13, 133). On utilise
avec succs les vaccins stabiliss sur le terrain (55, 126). La Figure 4 montre les
diffrences de stabilit entre les anciennes et les nouvelles formulations.

Figure 4 : Diminution du pouvoir infectant de vaccins viraux antiamarils


lyophiliss, stabiliss et non stabiliss, conservs 46 C pendant quatre jours

0
100
Units internationales dactivit par dose

80
0.2 60

Pouvoir infectant rsiduel (%)


0.4 40

0.6
20
0.8

1.0 10
8
1.2 stabilis
stabilis
non stabilis
non-stabilis 6

1.4 4
0 20 40 60 80 WHO 98568/f

Dure dexposition 46 C (en heures)

Source : Burfoot C, Yound PA et Finter NB (25)

Le vaccin antiamaril se conserve sans problme - 20 C ou + 4 C pendant deux


ans ou plus (25). On estime la demi-vie du pouvoir infectant entre 3 et 10 mois
temprature ambiante, entre 10 et 20 jours 37 C et environ deux jours 46 C
(25, 52). Le temps requis pour rduire le titre initial du vaccin 1 000 units infectantes
se situe entre 2,6 et 6,1 jours 46 C, entre 5,7 et 15,7 jours 37 C et entre 12,4 et
26 jours 31 C (72). On observe des rductions semblables du titre lorsquon garde
un vaccin stabilis continuellement 37 C ou lorsquon le soumet alternativement
des tempratures de 37 C et 4 C (52).

En 1987, les fabricants ont fait parvenir lOMS une tude portant sur 11 vaccins
antiamarils. Celle-ci montrait une stabilit trs variable (148). Le nombre de jours
requis pour rduire le titre initial 1 000 units infectantes, lorsque les vaccins taient
conservs 37 C allait de 1 5 jours pour 4 vaccins, de 13 21 jours pour 2 vaccins
et de 38 146 jours pour 5 vaccins (voir Fig. 5).

WHO/GPV/98.07 19
Dans la Figure 5, les vaccins apparaissant au-dessus de la ligne horizontale, qui indique
la limite fixe pour la perte 1 log10 de virus, sont ceux qui ont subi une baisse trop
importante du titre. De mme, les vaccins qui apparaissent la gauche de la ligne
indiquant les 14 jours dincubation, ont fait preuve dune trop grande perte dactivit.
Les vaccins qui apparaissent dans le quart infrieur droit rpondent la fois aux
critres A et B correspondant la norme de stabilit demande par lOMS. Cette
norme stipule que le vaccin doit conserver 1 000 DL50 pour la souris, on son quivalent
en units formatrices de plage par dose humaine (A) et que la baisse moyenne du
titre doit tre infrieure 1 log 10 aprs incubation pendant deux semaines 37 C
(B) (155). Tous les vaccins antiamarils produits par des fabricants approuvs par
lOMS rpondent cette norme.

Figure 5 : Classement des vaccins antiamarils 17D en fonction de la norme


de thermostabilit envisage

30.0 A1
LeLevaccin nesatisfait
vaccin ne satisfait Le vaccin satisfait
Le vaccin satisfaitau
au critre
critre A A
Baisse du titre viral (log10 DL50 /dose) aprs 14 jours dincubation 37 C

20.0 aucun
aucun critre
critre maismais
paspas
auaucritre
critre BB

R1

R1
10.0
8.0
C2
6.0
A1

4.0
P2 Limites delexperimentation
Limites de lexprimentation
Critre B

H2
2.0

H2
P2
C2 K3 L1
1.0
L1 A3 K3A 01
0.8 LSHTM
LSHTM
l.I. Pasteur
Pasteur B2 01
B2 G3
0.6
G3
A3
0.4
YF-1-274 M2

LeLevaccin satisfait
vaccin satisfait auau critre
critre B B Le vaccinMEETS
VACCINE satisfait
0.2 mais pas
mais pasauaucritre A A
critre BOTH
aux CRITERIA
deux critres
M2
WHO 98556/F

2 4 6 8 10 14 20 40 60 80 100 150 200

3 3.7
NombreNombre de ncessaires
de jours jours ncessaires
pourpour abaisser
abaisser le le titreinitial
titre 103 DL
initial 10 DL50
50
(10 3,7 units
(10 unitsinfectantes)
infectantes)
par dose
par dose humaine
humaine aprs
aprs incubation 37
incubation 37C
C

Critre
Critre A A

London
London School
SchoolofofHygiene
Hygieneand
andTropical Medicine
Tropical Medicine
Institut Pasteur
Insitut Pasteur

Source : Organisation mondiale de la Sant (148)

20 Thermostabilit des vaccins


7.2 Stabilit du vaccin reconstitu

Lorsquon le garde entre 0 et 8 C, le vaccin reconstitu conserve sa dose vaccinale


minimale (1 000 units infectantes) pendant au moins 10 jours (72). Il se dgrade
rapidement cependant lorsquil est expos des tempratures leves. A 37 C, 31 C
et 27 C, il a perdu 50 % de son pouvoir infectant aprs 1,5, 3,1 et 4,9 heures
dexposition (25, 72). Lutilisation dun diluant 37 C entrane une inactivation
rapide du virus et la perte totale dactivit en une heure (134). Lexposition dun
vaccin reconstitu pendant une heure 46 C a provoqu une baisse de 0,5 log10 et
la diminution du pouvoir infectant a dpass 1 log10 aprs deux heures (25). Compare
plusieurs diluants, comme un solut salin, une solution tampon, la glatine et la
peptone, leau distille a t la plus efficace pour garder au vaccin un titre viral
satisfaisant pendant trois heures aprs reconstitution 37 C (134).

Dans une tude au Cameroun, les taux de sroconversion dun groupe denfants
vaccins avec un vaccin antiamaril conserv aprs reconstitution des tempratures
comprises entre 25 et 30 C pendant une, deux et trois heures ont t respectivement
de 100 %, 82 % et 67 % (37).

7.3 Rsum

On peut conserver en toute scurit les vaccins antiamarils lyophiliss - 20 C et


+ 4 C pendant deux ans. On estime la demi-vie du pouvoir infectant du vaccin
temprature ambiante (20 25 C) une valeur comprise entre 3 et 10 mois. La
baisse du titre initial du vaccin au niveau minimal acceptable se produit en deux
trois semaines 31 C, en une deux semaines 37 C et en trois six jours 41 C.
Comme pour le vaccin antirougeoleux, le vaccin antiamaril se dgrade rapidement
aprs reconstitution lorsquil est expos des tempratures leves. A 27 C, il perd
50 % de son pouvoir infectant aprs une exposition de cinq heures. Lutilisation dun
diluant 37 C entrane une inactivation rapide du virus et une perte totale dactivit
en une heure. Il faut donc rapidement administrer le vaccin antiamaril aprs
reconstitution (dans lheure qui suit). Si le vaccin reconstitu est gard
continuellement dans un bain glac, on peut lutiliser pendant toute la dure
dune sance de vaccination, mais on devra le jeter la fin de celle-ci.

8. Vaccin anticoquelucheux

Labsence dune preuve simple, conomique et reproductible pour dterminer


lactivit limite les tudes de stabilit pour le vaccin anticoquelucheux. Lpreuve
dactivit recommande par lOMS (149) est techniquement difficile et exige du
personnel trs qualifi ainsi quun grand nombre de souris appartenant une certaine
souche. Les rsultats sont soumis de grandes variations biologiques et il est difficile
dobtenir des donnes prcises sur la dtrioration de lactivit du vaccin expos
des tempratures leves, sauf en cas de modifications sensibles.

Nanmoins, plusieurs tudes ont fourni des informations prcieuses sur les divers
facteurs qui influencent la stabilit du vaccin anticoquelucheux. Les paramtres les
plus souvent tudis sont les suivants:

WHO/GPV/98.07 21
la temprature (6, 34, 44, 82, 83, 85, 124, 146) ;
le type de vaccin : vaccin monovalent ou composante coqueluche du DTC
(6, 34, 69, 79) ;
la mthode dinactivation (60, 77, 79) ;
la souche de B. pertussis (26) ;
la nature de ladjuvant ou de lagent conservateur (113, 146).

8.1 Influence de la temprature sur lactivit et la toxicit du vaccin

Lactivit de la composante coqueluche du vaccin DTC dpend de la temprature de


stockage ; la conglation comme la chaleur peuvent la faire diminuer. La Figure 6
(44) et le Tableau 4 montrent les effets de diverses tempratures ambiantes sur la
composante coqueluche du DTC.

Figure 6 : Baisse de lactivit de la composante coqueluche dans le


vaccin DTC en fonction de la dure de conservation et de la temprature

22oC
100 30oC
37oC
46oC

80
Baisse de lactivit (%)

22oC
o
60 30 C

37oC
40

46oC

20
WHO 98555/F

0
0 20 40 60 80 100 120 140
Dure de lexposition (jours)

Source : Organisation mondiale de la Sant (44)

Conserve au rfrigrateur entre 4 et 6 C, la composante coqueluche des vaccins


DTC ou DTC-polio semble garder une activit satisfaisante pendant une priode de
deux ans (80, 83, 146). Toutefois, mme dans des conditions de stockage optimales,
on observe une diminution constante de lactivit sur de longues dures. Lactivit
initiale moyenne des vaccins DTC, estime 8,5 UI par dose humaine unitaire, est
tombe moins de 4 UI par dose au bout de 46 mois (80). De mme, celle de la
composante coqueluche dans les vaccins DTC-polio a chut de 5,2 - 8,6 UI/ml
1,2 - 1,6 UI/ml aprs trois ans de stockage 4 C (83).

22 Thermostabilit des vaccins


La baisse dactivit annuelle moyenne de la composante coqueluche des vaccins DTC
est value 0,35 UI par dose humaine. Lactivit atteint un minimum de 4 UI par
dose aprs six ans de conservation 4 C (33, 34, 77). Entre 22 et 25 C, elle demeure
suprieure 80 % de la valeur initiale pendant 2 8 semaines, puis elle diminue
ensuite progressivement selon un taux de dgradation estim entre 0,3 et 0,4 % par
jour.

A 37 C, le processus de dgradation saccentue et semble se drouler en deux phases :


au dbut, le dclin de lactivit est plus rapide avec un taux de dgradation estim
entre 1 et 6 % qui ralentit par la suite (44, 60, 83, 146).

Tableau 4 : Stabilit de la composante coqueluche des vaccins


DTC en fonction de la temprature

Temprature Rfrences Estimation de la baisse Dure de stockage et dure


de stockage dactivit par jour (%) utilise pour le calcul du
(C) taux de dgradation

34 0.06 6 ans
4-8 85 0 45 jours
6 0 12 - 18 mois
61 0.01 90 jours, 15 - 90 jours
83 0.05 - 0.06 3 ans

85 0.31 45 jours, 0 - 45 jours


22 - 25 44 0.41 140 jours, 40 - 140 jours
6 0 30 jours suivis de 18 mois
60 0.26 4 C
90 jours, 15 - 90 jours

44 1.80 90 jours, dclin rapide


30 0.80 0 - 15 jours
dclin lent, 30 - 90 jours

146 3 - 6* 56 jours, 0 - 7 jours


35 - 37 124 1.2 90 jours, 0 - 15 jours
44 5.2 60 jours, 0 -20 jours
60 2.4 90 jours, 0 -15 jours
83 5.5 56 jours, 0 - 7 jours

82,83 6.7 56 jours, 0 - 7 jours


46 44 10.8 20 jours, 0 - 4 jours

* Deux vaccins DTC-polio avec diffrents agents conservateurs

Conserv 45 - 46 C, le vaccin voit son activit diminuer fortement les premiers


jours dexposition, la baisse atteignant environ 10 % par jour. Une baisse de 50 %
peut se produire au bout dune exposition de 4 7 jours seulement et un stockage
50 - 56 C amne une destruction rapide et complte de lactivit de la composante
coqueluche (15, 69). On a signal une rsistance plus leve de cette composante
aux tempratures leves sans que le fait ait pu tre expliqu (15, 85, 124, 136).

WHO/GPV/98.07 23
On ne dispose pas de donnes sur la stabilit du vaccin anticoquelucheux acellulaire
qui, dans le DTC renferme des protines adsorbes sur un sel daluminium. On sattend
donc ce que sa stabilit ait un profil comparable celle des autres vaccins protiques,
cest--dire une thermostabilit relativement bonne, une rsistance faible la
conglation et une dure de conservation comprise entre deux et trois ans 2 - 8 C
(81).

La conglation peut altrer lactivit des vaccins anticoquelucheux. Lactivit de la


composante coqueluche des vaccins DTC, subissant une conglation - 20 C pendant
15 jours, perd plus de 50 % de sa valeur initiale. Laltration est plus grande par la
conglation que par le stockage des tempratures leves (Fig. 7) (6). Lorsque des
vaccins DTC adsorbs provenant de 5 fabricants diffrents ont t conservs pendant
12 heures entre - 5 C et - 10 C et entre - 20 C et - 30 C, trois dentre eux ont vu
lactivit de leur composante coqueluche subir une baisse sensible aux deux plages
de tempratures (42).

Figure 7 : Immunognicit* du vaccin anticoquelucheux monovalent et de


la composante coqueluche du DTC conservs dans des conditions varies

Vaccin
Vaccin Composante
Composante
anticoquelucheux
anticoqueluche coqueluche du
monovalent vaccin DTC

1.4
Activit relative

1.0

0.5
WHO 98558/F

0
+ 4 C + 20 C + 37 C + 56 C -20 C
12 18 mois 30 jours 30 jours 15 jours 15 jours
+ 4 C pendant 12 18 mois
Conditions de conservation

* Exprime sous forme dactivit relative par rapport une prparation de rfrence nationale
Lactivit relative de 0,5 est gale 4 UI par dose unitaire
Source : Andrescu V et al. (6)

Rien nindique que la toxicit du vaccin anticoquelucheux augmente avec la dure de


stockage, comme ltablissent les preuves de prise de poids de la souris et de
sensibilisation lhistamine (6, 26, 61). En fait, on observe une diminution de la
toxicit dans des vaccins conservs 25 C et 35 C pendant une dure de 4 semaines
3 mois (26, 61).

24 Thermostabilit des vaccins


8.2 Vaccins anticoquelucheux monovalents compars la composante
coqueluche des vaccins associs

Une tude a montr que les vaccins anticoquelucheux monovalents taient instables
4 C : au cours dun stockage de 18 mois, certains chantillons ont perdu 58
87 % de leur activit initiale (69).

Les suspensions en gros de B. pertussis semblent se dgrader plus rapidement 4 C


pendant la premire anne de conservation que la composante coqueluche des vaccins
DTC adsorbs sur le phosphate daluminium (Fig. 8), probablement parce quil leur
manque leffet protecteur exerc par les protines des anatoxines et les ions aluminium
prsents dans les vaccins trivalents. (Les effets des ions aluminium seront abords
la section 8.5.)

Figure 8 : Activit des suspensions en vrac de B. pertussis et de la


composante coqueluche du vaccin DTC conserves de 1 8 ans 4 C

Composante coqueluche
Composante
des vaccins DTC (21
(21 lots)
lots)
Suspension
Suspension en vrac
vrac du
du vaccin
vaccin
anticoquelucheux (53
anticoquelucheux (53 lots)
lots)
100
Diminution de lactivit (%)

80

60

40
WHO 98559/F

20
1 2 3 4 5 6 7 8
Dure de conservation (en annes)

Sources : Csiszer Z, Zsidai J, Joo I (33, 34)

8.3 Mthodes dinactivation de B. pertussis

Les premires tudes portant sur la stabilit des vaccins anticoquelucheux prpars
partir de cultures pousses et tues par diverses mthodes montrent quaucun agent
inactivant (merthiolate, phnol, formol ou la chaleur) ne prend dfinitivement le pas
sur les autres dans ce domaine. Mais, en cas de stockage prolong, les vaccins tus
par le phnol ou le formol prennent une teinte sombre et sont difficiles remettre en
suspension tandis que les vaccins inactivs par le merthiolate ou la chaleur changent
peu daspect.

WHO/GPV/98.07 25
Les observations anciennes faites par Kendrick (79) ont t confirmes par Gupta et
al. qui ont tudi la stabilit de la composante coqueluche des vaccins DTC prpare
au moyen de diverses mthodes dinactivation (chaleur, formaldhyde, glutaraldhyde,
thiomersal ou traitement par lactone) (Fig. 9) (60). Les preuves de stabilit
pratiques aprs la conservation des vaccins pendant 90 jours 4 - 8 C, 25 C et
35 C nont fait apparatre aucune diffrence de stabilit attribuable lagent
dinactivation utilis.

Figure 9 : Activit de la composante coqueluche des vaccins DTC stocks


35 C aprs inactivation par la chaleur (HIP), le formaldhyde (FIP),
le glutaraldhyde (GIP) et le thiomersal (TIP)

Lot o 11
Lot NN Lot o 22
Lot NN

24

22

20

18
HIP
HIP FIP
FIP GIP
GIP TIP
TIP
16
Activit en UI/ml

14

12

10

WHO 98560
2

0
0 15 30 45 60 75 90 0 15 30 45 60 75 90 0 15 30 45 60 75 90 0 15 30 45 60 75 90

Dures de stockage en jour

Source : Gupta RK et al. (60)

Les travaux de Gupta et al. montrent les problmes rencontrs dans les tudes portant
sur les vaccins anticoquelucheux : faible reproductibilit des valuations de lactivit
de ces vaccins et diffrences dans les vitesses de dgradation des vaccins prpars
selon le mme procd. Lactivit initiale des vaccins prpars au moyen de diverses
mthodes dinactivation varie considrablement, celle des vaccins inactivs au
thiomersal tant la plus forte et celles des vaccins traits lactone tant infrieure
la norme admise.

8.4 Souches de B. pertussis

Dans les recherches (26), les vaccins prpars partir de six souches diffrentes ont
rvl une stabilit variable, mais les chiffres ntaient pas assez significatifs pour
que lon puisse faire une nette distinction entre les souches stables et instables.
Toutefois, dans une souche qui a donn un vaccin dot dune plus grande stabilit,
laction du facteur favorisant la leucocytose et du facteur de sensibilisation lhistamine
(mesures de la toxine coquelucheuse) sest exerce plus longtemps que dans des vaccins
prpars avec dautres souches.

26 Thermostabilit des vaccins


8.5 Influence du conservateur et de ladjuvant

Une baisse sensible de lactivit de la composante coqueluche du vaccin DTC-polio


risque de se produire si lon utilise le chlorure de benzthonium (CB) comme
conservateur (38, 122). Ce dernier a t introduit pour remplacer le merthiolate
quand il est apparu quil inactivait la composante poliovirus du vaccin. Le CB est un
ammonium quaternaire qui agit probablement en se fixant sur les sites chargs
ngativement la surface de B. pertussis.

Ensuite, Olson et al. ont montr que le vaccin anticoquelucheux conserv par le CB
et stock 37 C pendant 16 semaines navait pas dactivit protectrice mesurable
chez la souris (Tableau 5) (113). Cependant, on pourrait diminuer leffet dommageable
du CB en traitant le vaccin avec des sels daluminium, de calcium ou de magnsium
ou avec la choline ou la D-lysine avant dajouter cet agent conservateur. On a laiss
entendre que ces substances taient capables dempcher labsorption du CB sur les
cellules du bacille de la coqueluche, ce qui stabiliserait par consquent les antignes
protecteurs ainsi que le dtermine lpreuve de protection sur la souris.

Van Ramshorst et van Wezel (146) ont tudi la stabilit de toutes les composantes
des vaccins DTC-polio ttravalents, conservs par le CB, le phnoxy-2 thanol et le
formaldhyde. Les taux de perte dactivit de la composante coqueluche des vaccins
conservs par le CB et le phnoxy-2 thanol nont pas diffr fondamentalement de
ceux observs pour les vaccins conservs par le merthiolate. Il est possible que le
phosphate daluminium prsent dans le vaccin ttravalent attnue les effets dltres
du chlorure de benzthonium.

Tableau 5 : Activit des vaccins anticoquelucheux contenant divers


conservateurs et stocks 37 C

Activit en UI/ml
Conservateur Dure du stockage 37 C

0 5 10 16 42
semaine semaines semaines semaines semaines

Merthiolate 4.6 2.1 2.1 - PA

Chlorure de 4.7 2.8 0.8 PA PA


benzthonium (CB)

CB + chlorure de calcium 3.6 3.6 3.0 3.6 3.3

CB + phosphate 4.3 8.5 3.8 - 3.4


daluminium

CB + sulfate de 7.1 2.8 2.8 1.9 0.9


magnsium

Choline - 4.4 2.3 - 2.2

PA = Protection absente
Source : Olson BH, Eldering G, Graham B (113).

WHO/GPV/98.07 27
8.6 Rsum

Dans sa prsentation habituelle, le DTC renfermant du thiomersal et un adjuvant


daluminium est sensible la conglation mais relativement stable 4 C pendant au
moins deux ans. Il rsiste une conservation de plusieurs mois des tempratures
comprises entre 22 et 25 C, de plusieurs semaines 37 C et moins dune semaine
45 C. Comme pour la plupart des vaccins comportant des protines, les tempratures
suprieures 56 C les abment immdiatement.

9. Vaccin BCG

Plusieurs facteurs compliquent la standardisation de ce vaccin et les tudes relatives


sa stabilit, notamment :
(1) le nombre des diffrentes souches drives utilises pour la production des
vaccins.
(2) les diffrences dans les mthodes de fabrication et de contrle appliques par
les fabricants de vaccins. La technique et la dure de culture du BCG ainsi que
la nature de lagent stabilisant sont des facteurs importants.
(3) les diffrences dans la teneur bactrienne et le nombre de particules
cultivables.
(4) labsence dune technique de laboratoire approuve pour mesurer le pouvoir
protecteur des vaccins contre linfection tuberculeuse chez lhomme.

Pour le contrle de la qualit lot par lot, lexamen de la viabilit du vaccin, qui se fait
en dterminant le nombre de particules cultivables par dnombrement des colonies
sur milieu solide, constitue lpreuve la plus importante. Ce test de viabilit revt
galement une importance capitale pour lvaluation de la stabilit du BCG stock
dans des conditions variables.

Le BCG a t le premier vaccin pour lequel des normes OMS de thermostabilit ont
t fixes (150). Chaque lot de BCG doit faire lobjet dune EDA. Le nombre de
particules cultivables dans le vaccin incub 37 C pendant 28 jours ne devra pas
tre infrieur de plus de 20 % celui provenant dun vaccin conserv 4 C (154).

9.1 Effet de la temprature sur la viabilit du BCG

Conserv au rfrigrateur des tempratures infrieures 8 C, ce vaccin est


relativement stable et la plupart des fabricants donnent une dure de validit dun an
si cette condition est remplie. La viabilit a dcru de 20 % pour une dure de stockage
de deux ans 4 C (53), laissant entendre une perte annuelle denviron 10 % en
dessous de 8 C (53, 165). Cependant, certains vaccins peuvent perdre jusqu
20 - 25 % de leur viabilit initiale en six mois de stockage seulement (137).

Conservs 13 - 15 C pendant deux mois, les BCG nont subi quune lgre perte
de viabilit, mais celle-ci a atteint environ 20 % au bout de neuf mois (24). A 18 C,
la viabilit diminue denviron 10 % par mois (165).

28 Thermostabilit des vaccins


A temprature ambiante (22 - 25 C), certains vaccins BCG peuvent perdre de 25
40 % de leur viabilit initiale en deux mois de stockage (74) et dun cinquime un
tiers en trois mois (24). A 30 C ou 37 C, la dgradation se dclenche plus
rapidement et la vitesse de diminution des particules cultivables est plus importante
pendant la phase initiale quau cours des phases ultrieures de lexposition
(Tableau 6) (24, 129). On ignore si ce taux de dgradation prcoce serait aussi fort si
lon rptait lexposition des tempratures leves. La baisse quotidienne de viabilit
pour les vaccins conservs 37 C pendant quelques semaines sest situe entre
1 et 2 % (11, 20, 24, 74, 165).

Tableau 6 : Baisse dactivit de quatre vaccins BCG


gards 30 C et 37 C pendant 36 semaines

Taux de perte dactivit par jour (en pourcentage de la valeur initiale)

30C 37C
Dure de stockage en semaines

Vaccins 0-9 10 - 36 0-4 6 - 36

Japonais 0.5 0.1 0.8 0.2

Glaxo 0.9 0.2 2.1 0.1

Dakar 1.0 0.2 2.3 0.1

Danois 0.8 0.2 1.9 0.2

Source : Bunch Christensen K (24)

La dgradation du vaccin BCG est trs rapide des tempratures dpassant 37 C.


Lexposition 54 C entrane une baisse de la viabilit initiale de 25 73 % en un
jour et de 74 85 % en trois jours (74). Elle peut diminuer de moiti aprs une
exposition de 30 minutes 70 C et de 80 % aprs 5 minutes dbullition (56).

Lexposition du BCG des tempratures leves aboutit une baisse du nombre des
particules cultivables, proportionnelle la temprature et la dure de lexposition.
Il est cependant difficile de dterminer une limite de dgradation thermique acceptable
faute de connatre la dose vaccinale optimale. Administrs des enfants dge scolaire,
les vaccins dont la viabilit a diminu de 40 60 % la suite dune exposition de
2 4 semaines des tempratures leves sont demeurs capables de susciter une
raction la tuberculine et des lsions vaccinales qui ne se distinguaient pas de celles
produites par des vaccins tmoins conservs au rfrigrateur (20, 165). Une
conservation prolonge des tempratures leves a diminu lallergie postvaccinale
et la taille des lsions vaccinales (20). Linterprtation de ces rsultats nest pas facile,
car lhypersensibilit retarde la tuberculine et les nodules au point dinoculation,
qui sont les marques caractristiques des rponses cellulaires spcifiques, nont pas
de rapport direct avec la protection.

WHO/GPV/98.07 29
On se demande souvent si la conservation du vaccin BCG en dessous de 0 C est
conseille. De plus, il a t indiqu que la rptition de cycles de conglation et de
dconglation pourrait nuire. Toutefois, les donnes exprimentales montrent que la
viabilit nest pas affecte par un stockage des tempratures de - 20 ou de - 30 C,
ni par une rptition des cycles de conglation - dconglation rpts jusqu
10 fois (24, 56).

9.2 Stabilit des vaccins produits partir de diffrentes souches drives


du BCG

Toutes les souches de BCG disponibles drivent de celle produite par Calmette, il y
a plus de 65 ans. Avec cette longue priode de survie de la souche dorigine par
transferts sur milieux de culture, on observe des diffrences fondamentales entre les
souches filles.

Les souches sont en gnral classes comme fortes, comme la souche franaise 1172
(Pasteur) et la souche danoise 1331 (Copenhague), ou faibles, comme la souche
japonaise 172, la souche brsilienne Moreau ou la souche britannique 1077 (Glaxo).
Cette distinction repose principalement sur les caractristiques de croissance, la
virulence rsiduelle chez lanimal et la ractognicit chez lenfant. Les diffrences
pourraient tre lies la teneur en antignes lipidiques de surface et aux protines
scrtes par ces souches (1).

Il existe des diffrences de thermostabilit en fonction des diverses souches


secondaires utilises pour la prparation du vaccin (Tableau 7, Figure 10) (24).
A toutes les tempratures dessai, les taux de dgradation ont t les plus faibles
pour le vaccin japonais et les plus forts pour les vaccins Dakar et Glaxo, le vaccin
danois occupant une place intermdiaire. Les diffrences entre les vaccins sestompent
avec la prolongation du stockage.

30 Thermostabilit des vaccins


Figure 10 : Activit de quatre vaccins BCG stock pendant 36 semaines diffrentes tempratures

Vaccin : Japan BCG Laboratory, Tokyo Vaccin : Laboratoires Glaxo, Greenford

WHO/GPV/98.07
o
100 13 15C
1315 C 100
90 o 90 o
22 25C
2225 C 13 15C
1315 C
80
80
70 70
60 o 60 o
30C
30 C 22 25C
2225 C
50 50
40
o 40
30 37C
37 C
30
o
20 30C
30 C
20
10 o
10 37C
37 C

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36

Vaccin: : Institut
VaccinInstitut Pasteur,
Pasteur, DakarDakar Vaccin: : Statens
Vaccin Statens Seruminstitut,
Seruminstitut, Copenhague
Copenhagen

100 100

Particules cultivables (%)


90 o
90
13 15C o
1315 C 13 15C
1315 C
80 80
70 70 o
o 22 25C
2225 C
60
22 25C
2225 C 60
50 50
o
40 40 30C
30 C
30 30
o
20
30C
30 C 20 o
o 37C
37 C
10 37C
37 C 10
WHO 98561

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36

vaccins ont perdu plus de 50 % de leur activit initiale en un trois jours.


Dure du stockage (en semaines)

Source : Bunch Christensen K (24).

prpars partir de diverses souches secondaires (74, 75). Le vaccin japonais, prpar

gard plus de 50 % de sa viabilit pendant plus de neuf jours, tandis que les autres
japonais, contre 28 35 jours pour les autres vaccins. A 54 C, le vaccin japonais a
Une tude rcente a confirm les diffrences de thermostabilit entre les vaccins

partir de la souche 172, est apparu dot dune plus grande thermostabilit que le

31
vaccin polonais (souche Moreau), (Tableau 7) (74). A 37 C, il a fallu 56 jours pour
vaccin franais (souche 1172), le vaccin danois (souche 1331, Copenhague) et le

obtenir une diminution de 50 % de la viabilit (particules cultivables/mg) du vaccin


Tableau 7 : Particules de BCG cultivables dans les vaccins japonais,
danois, franais et polonais diverses tempratures

Temprature Nombre Nombre de particules cultivables/mg


de jours
Vaccine
Japonais Danois Franais Polonais

4C Tmoin 47.86 4.68 7.76 6.17

28 45.71 3.72 6.31 4.57


20C 63 44.67 3.02 5.89 3.72
84 39.81 2.24 4.90 2.75
112 38.02 2.09 3.47 2.19

14 46.77 3.80 5.50 4.68


37C 28 37.15 2.34 4.90 2.69
35 - - - 1.62
42 - 1.32 1.51 0.55
56 26.92 - 1.55 -
84 17.78 2.29 0.41 -

1 47.86 3.47 2.75 1.66


54C 3 46.77 1.26 1.07 0.91
6 39.81 0.98 0.63 0.25
7 - 0.20 0.22 -
9 32.36 - - -

Source: Janaszek W (74).

Dautres tudes ont galement montr des diffrences de stabilit entre les vaccins
BCG (57, 129 voir galement Tableau 8).

32 Thermostabilit des vaccins


Tableau 8 : Activit et thermostabilit de 10 vaccins BCG

Vaccin Nombre initial Viabilit au bout de 28 jours Perte quotidienne


de particules de conservation 37 C de viabilit (%)
cultivables (Dure de
(x 106/ml) Part. cultivables % par rapport au stockage
(x 106/ml) nombre initial analyse, jours)

Japonais 27.0 16.6 61 (0 - 28)

Glaxo 20.1 10.9 54 (0 - 21)

URSS 7.1 3.6 51 1.7 (0 - 28)

Connaught 6.9 0.2 3 6.7 (0 - 14)

Dakar 6.5 1.8 28 3.2 (0 - 21)

Bilthoven 4.2 1.3 31 4.9 (0 - 14)

Copenhague 2.9 1.9 66 2.5 (0 - 28)

Mrieux 2.8 0.3 11 3.3 (0 - 28)

Institut Pasteur 2.7 1.3 48 1.9 (0 - 28)

Prague 1.1 0.2 18 5.2 (0 - 21)

Source: Lugosi L (92).

9.3 Conditionnement des vaccins BCG

Ces vaccins ncessitent des prcautions spciales afin dassurer une stabilit suffisante.
A cet gard, la lyophilisation, un stabilisant efficace et la fermeture adquate des
rcipients sont les mesures les plus importantes.

On a observ une meilleure stabilit 4 C et 37 C et une viabilit initiale plus


grande (cest--dire de meilleurs taux de survie aprs lyophilisation) aprs changement
de la composition du stabilisant et amlioration de la mthode de dessiccation (53).

Actuellement, lutilisation dampoules scelles sous vide est la pratique la plus


courante. Toutefois, cette technique est difficile en comparaison du scellement en
prsence de gaz inerte. On na pas observ de diffrence significative entre les vaccins
BCG scells sous vide ou en prsence dazote ou de dioxyde de carbone, 4 C
comme 37 C (53, 86). On a signal que le nombre des particules viables diminuait
plus rapidement pour les vaccins scells sous azote que pour ceux scells sous vide
(20). Un vaccin BCG scell en prsence dargon semblait avoir une moins bonne
stabilit 37 C que le vaccin scell sous vide (56).

Les vaccins BCG contenus dans des flacons ferms par un bouchon en caoutchouc
ont une stabilit moindre que ceux conservs dans des ampoules (92, 129). Ce genre
de flacon prsente galement linconvnient de tenter les utilisateurs de conserver le
vaccin reconstitu (141).

WHO/GPV/98.07 33
9.4 Effet de la lumire sur la stabilit du vaccin BCG

Les vaccins BCG lyophiliss, indpendamment de la souche secondaire qui les


compose, sont sensibles aux rayons ultraviolets et la lumire fluorescente. Ils doivent
donc tre conditionns en ampoules faites avec un matriau transmettant faiblement
la lumire (comme le verre jaune) et protgs de la lumire au moment de leur
utilisation (87).

9.5 Stabilit du vaccin reconstitu

Le vaccin BCG reconstitu est trs instable et devrait tre utilis au cours dune
seule sance de vaccination de cinq six heures, aprs quoi ce qui reste doit tre
jet. Deux raisons justifient ces prcautions :
(1) le risque de contamination, car le vaccin BCG, contrairement tous les autres,
ne renferme pas dagent bactriostatique ;
(2) la perte dactivit (41).

9.6 Rsum

La plupart des vaccins BCG lyophiliss sont stables des tempratures comprises
entre 0 et 8 C.

Leur stabilit varie temprature ambiante ; aprs conservation pendant plusieurs


mois, on peut sattendre une perte de viabilit denviron 30 %. La baisse quotidienne
de la viabilit des vaccins gards quelques semaines 37 C se situe entre 1 et 2 %.
Les vaccins reconstitus sont trs instables. Une fois reconstitus, tous les vaccins
BCG doivent tre jets la fin de la sance de vaccination, quel que soit le nombre
de doses restant dans le flacon ou lampoule.

10. Vaccin antipoliomylitique

Des progrs remarquables ont t accomplis ces dernires annes dans lradication
mondiale de la poliomylite. En 1996, plus de 400 millions denfants ont t vaccins
au cours de journes nationales de vaccination et 500 millions taient cibls en 1997.
Le vaccin antipoliomylitique oral (VPO) a t le vaccin de choix pour cette
campagne.

Ce vaccin est le moins stable de tous ceux utiliss couramment dans les programmes
nationaux de vaccination. Il fait appel un virus vivant attnu qui, comme la plupart
des virus, est instable moins dtre gard de trs basses tempratures (congel).
Les recommandations actuelles prescrivent, pour le maintien de lactivit, de garder
et denvoyer le vaccin basse temprature. On amliore sa thermostabilit en utilisant
des agents stabilisants, comme de fortes concentrations de chlorure de magnsium
ou certains sucres. On les emploie systmatiquement pour stabiliser tous les VPO.

34 Thermostabilit des vaccins


10.1 Stabilit gnrale du vaccin antipoliomylitique aux tempratures
leves

On a en gnral surveill la stabilit des vaccins antipoliomylitiques trivalents en


mesurant la teneur totale en virus vivants des trois srotypes (22, 46, 132). Cette
pratique pourrait passer ct des modifications des types 2 et 3 rsultant de
lexposition des tempratures leves (10). On a observ une faible baisse du titre
viral aprs un stockage de longue dure - 20 C (52, 132). La plupart des fabricants
indiquent que leurs VPO sont actifs sils sont conservs une temprature maximale
de - 20 C jusqu la date dexpiration figurant sur le conditionnement (en gnral
deux ans). Lorsque la distribution nest pas imminente, il est conseill de garder le
vaccin - 20 C ou en dessous, cette mesure permettant de stopper la dgradation
de son activit.

La perte dactivit au rfrigrateur peut varier. Peetermans et Colinet ont montr


que lactivit de leur vaccin stabilis par le MgCl2 navait baiss que de 0,3 log 10
aprs exposition 4 C pendant 18 mois (117). Dautres rsultats laissent penser
cependant que la stabilit est plus faible dans cette gamme de tempratures et les
observations ont montr des diminutions de 0,15 0,31 log10 pour une priode plus
courte (30 jours) dexposition 5 C (157).

La vitesse de dgradation est proportionnelle la temprature dexposition. Les VPO


pourraient perdre 4 13 % de leur activit par jour 25 C, 11 21 % par jour
31 C et 26 34 % par jour 37 C (157). Les demi-vies de divers VPO tests en
Inde ont t de 4,3 jours 22 C et 1,7 jours 36 C (132). La baisse quotidienne
moyenne du titre t de 0,03 - 0,04 log10 DICC50 avec les vaccins gards 26 C
et de 0,10 - 0,12 log 10 37 C (48). Avec ces vitesses de dgradation, un vaccin
dune teneur virale totale de 6,15 log10 DICC 50 perd la moiti de son activit en
deux trois jours dexposition 37 C ou en 7 10 jours dexposition 22 - 26 C.
Cela correspond bien aux observations antrieures de Melnick et Wallis (105) ainsi
que de Perkins et Magrath (121) qui considraient que les vaccins antipoliomylitiques
conservaient une activit minimale pendant trois jours 37 C et pendant
14 21 jours 25 - 28 C.

A des tempratures suprieures 37 C, les vaccins antipoliomylitiques se dgradent


rapidement. A 41 C, ils perdent chaque jour environ la moiti de leur activit (48),
tandis qu 50 C, un vaccin perd 0,1 log10 DICC50 en une heure (22), ce qui donne
une demi-vie de trois heures.

10.2 Le VPO aux tempratures de conglation

10.2.1 Point de conglation du VPO


La prsence de stabilisants dans les prparations vaccinales abaisse leur point de
conglation. Une tude a t mene sur des VPO trivalents produits par cinq fabricants
afin de dterminer leur point de conglation et leffet sur leur activit dun nombre
de cycles de conglation - dconglation pouvant atteindre 180 (49).

Lorsque ces vaccins sont gards - 25 C, ils rentrent rapidement en surfusion


entre - 8 C et - 16 C et restent donc ltat liquide. Leur temprature remonte
ensuite rapidement environ - 7,5 C pendant la phase de passage ltat solide. La
temprature laquelle le vaccin remonte est considre comme le point de conglation
(Fig. 11) et elle varie entre - 6,6 et - 8,1 C (49).
WHO/GPV/98.07 35
Figure 11 : Tempratures des vaccins trivalents exposs
-25 C pendant 15 minutes

15

Temperature C Temprature C 10

55
C

0
0
Tempratures

Point depoint
Freezing
-5 Point de conglation
conglation
5

-10
10

Supercooling
Surfusion
Surfusion

WHO 98569
-15
15
3 6 9 12 15
Temps en minutes

Source : Organisation mondiale de la Sant (49)

10.2.2 Activit du vaccin aprs des cycles rpts de conglation -


dconglation
Certaines tudes ont montr quil ny avait pas de baisse significative du titre viral
pour les VPO ayant subi jusqu 10 cycles de conglation - dconglation (18, 40,
46, 52, 132). Mais lon ne dispose pas de dtails sur la rapidit des conglations et des
dconglations, ni sur la longueur des intervalles pendant lesquels les vaccins ont t
maintenus ltat dcongels. Si les titres totaux des vaccins trivalents ont t mesurs,
il ny a pas en revanche de donnes sur la sensibilit spcifique de chaque type de
poliovirus expos aux cycles de conglation - dconglation. Tous ces facteurs sont
de nature influencer la survie des particules virales au cours de ces cycles (10)

Les vaccins soumis 10, 90 et 180 cycles de conglation - dconglation (de - 25 C


2,5 C) ont donn des valeurs du titre viral qui ne diffraient pas sensiblement de
celles des chantillons tmoins, maintenus - 25 C. Il ny a pas eu de tendance la
baisse lie laugmentation du nombre de cycles (49). Toutefois, la temprature
maximale na pas dpass 2,1 C. Sur le terrain, une rupture de la chane du froid
peut entraner un rchauffement bien plus grand des vaccins. Par consquent, ces
rsultats ne sont valables que pour les situations dans lesquelles la temprature du
vaccin dgel reste dans la gamme de celles que lon trouve dans un rfrigrateur en
bon tat de fonctionnement.

Les compartiments glace des rfrigrateurs, quon utilise parfois pour garder les
VPO, fonctionnent environ - 5 C. On est donc au-del du point de fusion du
vaccin qui est susceptible par consquent de ne pas rester ltat solide.

36 Thermostabilit des vaccins


10.3 Tempratures recommandes pour le stockage

Comme il existe une relation troite entre la temprature de stockage et la survie du


poliovirus, les fabricants recommandent pour les VPO des dates dexpiration en
fonction de la temprature laquelle ils sont conservs. Nombre dentre eux donnent
deux chiffres : 1) jusqu deux ans en cas de conservation dans un conglateur ou
une temprature infrieure - 20 C ; 2) jusqu six mois en cas de conservation
dans un rfrigrateur entre 0 et 8 C. Un fabricant dclare que son vaccin stabilis
au chlorure de magnsium conserve une immunognicit suffisante pendant 12 mois
avec un stockage au rfrigrateur entre 2 et 8 C, pendant trois semaines 25 C et
pendant trois jours 37 C.

Il est ncessaire de surveiller constamment les chanes du froid. Lors dune tude en
Inde, il sest avr que la frquence de la perte dactivit des VPO, comparativement
leve au dbut, a diminu avec le temps (35). Lorsque la distribution et
ladministration des VPO ne sont pas imminentes, on recommande le stockage une
temprature infrieure - 15 C pendant huit mois au plus au niveau central et trois
mois au plus au niveau rgional, des conglateurs fiables y tant en gnral disponibles.

Sur le terrain, o le risque de rupture srieuse de la chane du froid est lev et les
conglateurs moins courants, lOMS recommande pour la gestion de ne pas garder
les VPO dans les rfrigrateurs ( 0 - 8 C) plus dun moins dans les centres de sant,
ni de les transporter ces tempratures pendant plus dune semaine (45, 91).
Le compartiment glace des rfrigrateurs des centres de sant doit tre rserv aux
blocs glace.

10.4 Normes de lOMS en matire de thermostabilit

Chaque lot final de VPO doit subir lpreuve de dgradation acclre pour confirmer
quil a une stabilit satisfaisante. Des chantillons reprsentatifs des rcipients du
produit terminal doivent tre mis incuber 37 C pendant 48 heures. La
concentration virale totale des flacons exposs et non exposs est dtermine en
mme temps que celle dune prparation trivalente tmoin. Le test est concluant
pour les vaccins si la baisse due lexposition ne dpasse pas un facteur de
100,5 units infectantes par dose humaine. Il revient aux organismes nationaux de
contrle de spcifier les titres viraux minimaux par dose humaine (158).

10.5 Facteurs affectant la stabilit du VPO aux tempratures leves

La stabilit du VPO dpend de plusieurs facteurs, notamment des diffrences


ventuelles de sensibilit des types viraux, de la prsence et de la nature dun
stabilisant, du pH de la prparation et du rcipient dans lequel le vaccin est conserv.

10.5.1 Diffrences des types viraux pour la thermosensibilit


Les caractristiques de croissance varient en fonction des divers types de poliovirus
employs pour le triple vaccin. Le type 2 a la croissance la plus prolifique au cours de
la rplication intestinale, suivi des types 3 et 1 lorsquils sont administrs
simultanment. Pour compenser ces diffrences, on a mis au point pour les vaccins
trivalents des formulations quilibres qui renferment habituellement les types
1, 2 et 3 dans les proportions de 10 :1 :3 (158). Dautres tudes ont montr que des
modifications du rapport entre les composants pourraient renforcer limmunognicit
du VPO, notamment pour le type 3 (114, 115).

WHO/GPV/98.07 37
Les essais sur 50 lots commerciaux de VPO conservs entre 2 et 6 C ont indiqu
que le type 2 tait le plus stable et le type 1 le moins stable. On a observ les mmes
diffrences de stabilit pour des vaccins conservs 25 C (Fig. 12) (101).

Figure 12 : Stabilit du vaccin antipoliomylitique oral trivalent


stabilis avec un tampon pepton et stock 2 - 6 C et 25 C

A. Stockage 2 - 6 C

0.0
Typ
Typ II
II

Typ
Typ III

-0.5 Limite infrieure dacceptabilit


limite infrieure dacceptabilit
Typ
Typ I1
Baisse du titre en log DICC50/ml

-1.0
0 6 12 13
Dure
Dure du
de stockage
stockage en
en mois
mois

o
B.
B. Stockage
Stockage at25
25CC

Limite infrieure dacceptabilit


limite infrieure dacceptabilit

-1.0
WHO 98565/F

-2.0
0 6 2 3 4
Dure du stockage en semaines

Source : Magrath DI (96).

Ces observations nont pas t confirmes par dautres auteurs qui ont test diffrents
VPO. Daprs Peetermans et al. (118), le type 1 sest rvl plus stable que les
types 2 et 3. Le type 1 a accus une baisse de 0,06 log10 DICC50 seulement au bout
de 12 mois de conservation du VPO 4 C, alors que la baisse a t de 0,20 et
0,27 log10 DICC50 pour les types 2 et 3 respectivement. Les diffrences entre les
types viraux ne sont pas constantes et rien ne milite nettement en faveur dune plus
grande rsistance dun type en particulier lorsque les vaccins sont stocks une
temprature comprise entre 20 et 25 C ou 37 C (Tableau 9). Mirchamsy et al.
nont pu trouver aucune diffrence entre les types de poliovirus conserves pendant
9 mois + 4 C et - 20 C.

38 Thermostabilit des vaccins


Tableau 9 : Comparaison de la stabilit de diffrents types
de poliovirus 20 - 25 C et 37 C

Baisse du titre en log 10 DICC50 /jour la temprature de:

Vaccin 20-25C 37C Rfrences

Type 1 Type 2 Type 3 Type 1 Type 2 Type 3

Stabilis
par MgCl2 0.026 0.024 0.021 0.182 0.193 0.160 104
par le 0.043 0.064 0.040 0.220 0.302 0.214
saccharose

B - - - 0.149 0.159 0.144


C - - - 0.151 0.129 0.136 101
D - - - 0.207 0.171 0.150
E - - - 0.224 0.161 0.211

10.5.2 Nature du stabilisant


Les stabilisant les plus couramment utiliss avec les poliovirus attnus ont t le
chlorure de magnsium et le saccharose ; on a galement eu recours des tampons,
au lait ou la glatine.

Wallis et Melnick (147) ont signal que les poliovirus taient stabiliss par laddition
de cations au milieu de suspension. En particulier, laddition dune mole de chlorure
de magnsium (MgCl2) des souches de poliovirus attnus permet de garder les
vaccins 4 C pendant 3 mois ou 25 C pendant 25 jours sans quil y ait de baisse
significative du titre. Melnick et al. (104) ont constat que les vaccins, stabiliss par
le MgCl2, puis soumis une exposition 30 C pendant 21 jours, suscitaient une
rponse immunitaire gale celle de vaccins ordinaires maintenus ltat congel et
dcongels juste avant administration.

Dautres tudes ont montr que le saccharose 35 - 50 % tait galement efficace


pour stabiliser les poliovirus attnus. Perkins et Magrath (121), ainsi que Magrath
(95) ont conclu quaussi bien 1 mole de MgCl2 que le saccharose 50 % taient des
stabilisants efficaces. Pour obtenir une stabilit virale maximale, il est ncessaire
dviter laugmentation du pH qui se produit avec la libration de CO2 par le rcipient.

Actuellement, la plupart des VPO disponibles sur le march sont stabiliss avec du
chlorure de magnsium, bien que certains fabricants en produisent en utilisant du
saccharose. Les tudes rcentes semblent indiquer que le chlorure de magnsium est
plus efficace que le saccharose pour accrotre la thermostabilit des VPO. Pour une
exposition de 8 jours 37 C ou de 29 jours 25 C, la baisse dactivit des trois
types de vaccin monovalent a t plus rapide pour les produits stabiliss par du
saccharose ou un tampon que pour ceux stabiliss par le chlorure de magnsium
(Fig. 13).

WHO/GPV/98.07 39
Figure 13 : Perte dactivit du VPO monovalent stabilis
par le chlorure de magnsium, une solution tampon ou du saccharose
et conserv 37 C et 25 C

Temprature 37 c
Temprature 37C

TYPE 1 TYPE 2 TYPE 3


6

b = 0.193

5 b = 0.182
b
=
0.
22
0 b = 0.160

b
=
0.
19
8
b = 0.205 b = 0.212
b = 0.214
4

b = 0.302

3
Log ufp/ml
UFP/ml

0 2 8 0 2 8 0 2 8
Jours
Jours
Log

Temprature 25 c
Temprature 25C

TYPE 1 TYPE 2 TYPE 3


6

b = 0.026 b = 0.024 b = 0.021

5
b = 0.035
b = 0.042 b = 0.039

b = 0.040
b = 0.043

4 b = 0.064

Chlorure dedemagnsium
Chlorure magnsium
Tampon
Tampon
Saccharose
Saccharose
WHO 98566

3
0 4 29 0 4 29 0 4 29
Jours

Remarque : les valeurs b reprsentent la baisse du titre par jour


Source : Mann GF et al. (100)

Le vaccin stabilis par le chlorure de magnsium est plus stable que celui produit par
le mme fabricant et stabilis par le saccharose, aux tempratures infrieurs 37 C
(Tableau 10) (117). On a galement observ ailleurs la meilleure stabilisation par le
chlorure de magnsium (109).

40 Thermostabilit des vaccins


On en a conclu que lutilisation systmatique du chlorure de magnsium contribuerait
accrotre la stabilit des VPO et dpendre au minimum de la chane du froid (71).

Tableau 10 : Baisses moyennes du titre viral total


et demi-vies des vaccins antipoliomylitiques oraux stabiliss
par du saccharose ou du chlorure de magnsium
et conservs diverses tempratures

Temprature Unit de Saccharose Chlorure de magnsium


de stockage temps
(C)
Baisse du titre* Demi-vie Baisse du titre* Demi-vie

4 mois 0.11 6 mois 0.02 20 mois


20-25 jour 0.03 12 jours 0.01 23.1 jours
37 jour 0.15 1.9 jours 0.16 1.8 jours
45 jour - - 0.61 0.6 jours

* Par unit de temps donne, en log10 DICC50 .


Source: Peetermans JH, Colinet G (117).

Dans une tude concerte de lOMS portant sur 46 chantillons, 12 stabiliss par le
saccharose et les autres par le MgCl2, 83 % des premiers et 91 % des seconds ont
perdu moins de 0,5 log10 DICC50 aprs incubation 37 C pendant 48 heures. La
perte moyenne a t de 0,34 log10 DICC50 quel que soit le stabilisant (157). Il est
vident que le saccharose tamponn peut tre un agent stabilisant efficace dans la
mesure o le pH est soigneusement contrl.

Il est galement possible de stabiliser les vaccins contre linactivation par la chaleur
en ajoutant des acides gras ou des composs voisins. Lincubation dun poliovirus
Sabin de type 1 en prsence dacide myristique 45 C pendant 30 minutes a provoqu
une rduction du pouvoir infectant de 19 %, contre 99 % pour lincubation sans
ladjonction de cet acide gras (36). On a galement observ une stabilisation thermique
avec les poliovirus incubs en prsence des acides hexanoque, octanoque et
palmitique. La prsence de ces agents stabilisants pendant le chauffage pourrait
prvenir les changements de conformation au niveau de la capside qui enlvent au
virus son pouvoir infectant.

Leau lourde (D2O) a galement un effet stabilisant sur les poliovirus. Avec ses fortes
liaisons hydrogne, elle peut protger les protines de la dnaturation et renforcer la
thermostabilit des souches virales. Le pouvoir infectant de trois souches de VPO
traites par D2O et MgCl2 et exposes 37 C pendant 7 jours est rest dans les
limites des normes, c.--d. quelles nont pas perdu plus de 0,5 log10 DICC50 (166).
Malgr laugmentation considrable de la thermostabilit du VPO lorsquon remplace
leau par de leau lourde, les recherches nont pas t poursuivies dans cette voie,
principalement pour les raisons suivantes :
les VPO disponibles sont suffisamment thermostables pour obtenir
lradication de la poliomylite ;
lhomologation et lintroduction dun nouveau VPO, en mme temps que
lradication de la polio progresse, prsenteraient des inconvnients ;
on utilise dsormais les PCV pour surveiller lexposition la chaleur de
chaque flacon de VPO.

WHO/GPV/98.07 41
10.5.3 Valeurs du pH des suspensions virales
Melnick et Wallis ont montr limportance des valeurs du pH dans le maintien de la
stabilit des VPO (105). Le pH a augment pour tous les vaccins tests, avec une
augmentation bien plus marque pour les flacons fermeture non hermtique que
pour ceux scells. Dans les flacons fermeture hermtique, les vaccins ayant un pH
initial de 6,0 - 6,4 nont manifest aucune baisse sensible de leur pouvoir infectant au
bout de 20 jours des tempratures de 25 28 C avec, la fin de lobservation, une
baisse du titre limite 0,1 - 0,2 log10 DICC50. Les chantillons dans des flacons non
hermtiques ont perdu rapidement leur pouvoir infectant, ce qui est clairement d
laugmentation du pH.

Mauler et Grushkau, qui ont tudi les vaccins antipoliomylitiques monovalents


ayant un pH compris entre 5,5 et 8,0, ont fait des observations similaires. Au bout de
3 jours 37 C, on a constat les plus fortes diminutions pour les valeurs extrmes
du pH, 5,5 et 8,0 (Fig. 14) (101). Les vaccins antipoliomylitiques ont montr une
stabilit remarquable pour les pH compris entre 6,5 et 7,2.

Figure 14. Effet du pH sur la stabilit des poliovirus


attnus 37 C pendant trois jours

0
Baisse du titre en log10 DICC50/ml

Ty

1
p II
Typ
II

2
I
Typ
I

WHO 98567/F

5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0


Valeurs du pH

Source : Mauler R, Gruschkau H (101).

Le maintien du pH dans cette gamme de valeurs est possible en vitant que les vaccins
qui renferment du bicarbonate ne librent du dioxyde de carbone, ce que lon ralise
en rduisant au minimum la quantit dair prsente au-dessus de la solution vaccinale
et en conditionnant les vaccins dans des rcipients hermtiquement ferms.

42 Thermostabilit des vaccins


10.6 Rsum

Les VPO, tels quils sont fournis par les fabricants sont stables pendant une priode
prolonge - 20 C, pendant plus de six mois entre 2 et 8 C et pendant plus de
48 heures 37 C. Les PCV permettent de mieux respecter les limites de
thermostabilit de ces vaccins.

WHO/GPV/98.07 43
IIIe Partie :
Analyse de la stabilit des vaccins
autres vaccins viraux

11. Vaccin antipoliomylitique inactiv

La chaleur, la lyophilisation et laddition de merthiolate (thiomersal) dtruisent la


capacit du poliovirus a produire des anticorps neutralisants. Comme nous lavons
dit plus haut, la composante polio du vaccin quadruple DTC-polio nest pas stable
quand on utilise le merthiolate comme conservateur. Beale et Ungar (13) ont mis en
vidence une chute rapide de lactivit de lantigne polio dans un vaccin ttravalent
conserv par le merthiolate, lEDTA sodique et 4 C. Un autre lot de vaccins
ttravalents sans thiomersal, mais contenant la moiti de la quantit dEDTA sodique,
sest rvl stable pendant une dure dun an. Ces observations se sont confirmes
rcemment avec le vaccin antipoliomylitique inactiv hautement actif (eIPV), associ
au DTC. Le stockage de leIPV + 4 C en prsence de merthiolate rduit lactivit
antignique du poliovirus de type 1 des niveaux indcelables en quatre six mois.
Les antignes de types 2 et 3 sont moins affects par une exposition au merthiolate
pendant huit mois 4 C (126). Il convient dtudier davantage lincompatibilit du
vaccin eIPV et DTC conserv par le merthiolate.

Il semble quil existe des diffrences dans la thermostabilit des divers types de
poliovirus inactivs, le type 1 tant le plus vulnrable. En labsence de tout
conservateur, la composante type 1 du vaccin antipoliomylitique inactiv trivalent
se dgrade lentement aprs deux ans de stockage 4 C, tandis que les deux autres
types demeurent efficaces pendant 20 ans. La teneur en antigne D pour le type 1 a
baiss sensiblement au bout de 20 jours 24 C et elle est devenue indcelable aprs
exposition 32 C durant la mme priode. On na observ aucun changement
significatif de la valeur en antigne D pour le type 2 avec lune ou lautre de ces
tempratures, alors que le type 3 est rest stable pendant 20 jours 24 C et a dclin
sensiblement 32 C (110).

Les trois types de VPI ont montr quils gardaient une activit satisfaisante si on les
incorporait des vaccins associs et les stockait 4 C pendant une dure dun plus
de 4 ans. Cest le cas du vaccin DT-polio adsorb sur de lhydrate daluminium,
conserv par du chlorure de benzthonium (110) et du vaccin DTC-polio adsorb
sur du phosphate daluminium sans conservateur ou avec du phnoxythanol ou du
formaldhyde (146). Un stockage prolong sest traduit par une baisse du pouvoir
antignique, notamment pour la composante de type 1 (110).

A 37 C, la teneur en antigne D de la composante poliomylite du vaccin quadruple


diminue au cours du stockage, mais lactivit est conserve en grande partie aprs
8 semaines. Le type 3 semble tre la composante la plus stable (146).

44 Thermostabilit des vaccins


12. Vaccin antiourlien

Les deux composantes du vaccin antiourlien-antirougeoleux bivalent ont une stabilit


identique 4 C, 23 C, 37 C et 45 C. A 37 C, le taux de dgradation est denviron
0,01 log10 par jour pour chacune delles. Les demi-vies sont galement semblables :
4,7 et 5,4 jours pour les composantes rougeole et oreillons 45 C, 12 et 13 jours
37 C, 71 et 65 jours 23 C (31).

La composante ourlienne dans les vaccins oreillons-rubole et rougeole-oreillons-


rubole (ROR) montre des taux de dgradation comparables ceux du vaccin
antiourlien monovalent lors dexpositions des tempratures allant de 20 56 C
(102). La composante ourlienne dans les ROR indiens montre une bonne stabilit
37 C pendant 21 jours ; lors dune exposition de 30 jours 37 C, elle a perdu
0,9 log10, soit environ 0,03 log10 par jour, avec des demi-vies denviron 10 jours (73).

13. Vaccin antiruboleux

Le vaccin antiruboleux monovalent lyophilis et la composante rubole des vaccins


bivalents (rougeole-rubole ou oreillons-rubole) ou du ROR prsentent de faibles
taux de dgradation. A 37 C, la baisse moyenne du titre va de 0,046
0,109 log 10 DICC 50 par semaine (102). La composante rubole du ROR indien
prsente galement une bonne stabilit, la baisse moyenne du titre stablissant
environ 0,1 log10 DICC 50 et la demi-vie plus de deux semaines (73). Elle semble
plus stable que les autres composantes des vaccins viraux associs.

Les normes de stabilit requises par lOMS pour les vaccins antiourliens et
antiruboleux sont semblables celles pour le vaccin antirougeoleux. Au moins trois
rcipients de vaccins monovalents ou de ROR sont mis incubs 37 C pendant
sept jours, la suite de quoi on dose pour chaque vaccin monovalent ou chaque
composante individuelle les UFP ou la DICC50 aprs neutralisation slective des
autres composantes, le cas chant. La moyenne gomtrique du titre viral infectieux
doit galer ou dpasser le nombre minimal requis dunits infectieuses par dose
humaine (3 log10 ) et elle ne doit pas avoir diminu de plus de 1 log 10 dunits
infectieuses au cours de lincubation (153).

14. Vaccin contre lhpatite A

Lisolement et ladaptation du virus de lhpatite A la culture cellulaire ont ouvert


la voie llaboration de vaccins. Les rcoltes de virus, multiplis par culture cellulaire,
sont clarifies, purifies puis concentres et inactives ensuite au formaldhyde. On
utilise comme adjuvants lhydroxyde ou le phosphate daluminium.

Les EDA effectues sur des lots de vaccins lors de leur mise sur le march et aprs
stockage pendant 15 mois dans un rfrigrateur nont pas rvl de perte
dimmunognicit pour une exposition jusqu trois semaines 37 C (116). Le vaccin
contre lhpatite A, gard une semaine 37 C, a engendr chez les personnes
srongatives une rponse immunitaire sans diffrence significative avec celle induite
par des vaccins stocks dans des conditions correctes (163).

WHO/GPV/98.07 45
15. Vaccin contre lencphalite japonaise

15.1 Vaccin lyophilis

On utilise actuellement deux types de vaccins contre lencphalite japonaise inactivs


par le formol. Lun, driv du cerveau de souris, semploie en Inde, au Japon, en
Rpublique de Core, en Thalande et dans dautres pays, lautre, qui provient de la
culture primaire sur cellules rnales de hamster, en Chine.

Un vaccin lyophilis produit en Inde est stable, ne subissant une perte dactivit que
de 4,7 % en 52 semaines 4 C et de 8,7 % en 28 semaines 22 C. La dgradation
est plus rapide des tempratures plus leves, lactivit diminuant de 14 et 24 % en
18 semaines 37 et 40 C respectivement (58).

15.2 Vaccin reconstitu

Aprs reconstitution, le vaccin reste stable 22 C. On constate une baisse de 1 % aprs deux
semaines et une dtrioration assez rapide en quatre semaines 37 et 40 C (58).

16. Vaccin antirabique

La solution au problme de linnocuit des vaccins antirabiques consiste dvelopper


des vaccins prpars partir de virus rabiques obtenus sur des cultures tissulaires
exemptes de tissu nerveux (123). Depuis 1976, lutilisation de vaccins produits en
culture de cellules diplodes humaines (HDCV) sest gnralise pour la vaccination
des humains avant et aprs exposition. Le HDCV suscite une bien meilleure rponse
immunitaire que dautres comme le DEV (prpar partir de virus multiplis dans
des ufs embryons de canard) ou ceux prpars partir de cerveaux de souriceaux
la mamelle (vaccin Fuenzalida) ou de cervelles de moutons adultes ou de lapins
(vaccin Semple).

Sous forme lyophilise, le HDCV est un vaccin trs stable ; il garde son activit
pendant au moins 24 mois des tempratures comprises entre 2 et 8 C et pendant
un mois 37 C (112). Un autre vaccin HDCV est rest stable pendant au moins
18 mois - 20 C et + 4 C et il a rsist des expositions 37 C et 60 C pendant
trois mois (97). Un vaccin HDCV expdi, transport et stock des tempratures
allant de 26 36 C pendant une priode de 11 semaines a suscit la mme rponse
immunitaire chez des volontaires pakistanais appartenant au corps mdical que les
vaccins transports et conservs entre 2 et 13 C (111).

Les vaccins provenant de culture sur cellules diplodes humaines sont difficiles et
coteux produire. Des efforts intensifs ont t consacrs dans le monde entier
produire des vaccins faible cot qui puissent suivre ou amliorer les niveaux de
scurits obtenus pour le HDCV (123). Ces nouveaux vaccins sont produits partir
: de cellules dembryons de poulet (PCEV), dvelopp par le Chiron Institute en
Allemagne (ex-Behringwerke), stable pendant trois mois 37 C (14) ; de culture
primaire sur cellules rnales de hamsters de Syrie (PHK), dvelopp par lInstitut de
la Poliomylite Moscou (Fdration de Russie) et utilis en Chine ; de la ligne
cellulaire Vero (PVRV), dvelopp par lInstitut Pasteur-Mrieux-Connaught
(France) ; dembryon de canard et purifi (PDEV), dvelopp par le Swiss Serum
and Vaccine Institute en Suisse. Tous ont probablement une meilleure stabilit que
les anciens vaccins, prpars sur tissu nerveux.

46 Thermostabilit des vaccins


IVe Partie :
Analyse de la stabilit des vaccins
autres vaccins bactriens

17. Vaccin antimningococcique polyosidique

La dpolymrisation temprature ambiante rend instable les polysaccharides


purifis, notamment ceux du groupe A. Les antignes polyosidiques se dpolymrisent
facilement et leur masse molculaire relative diminue temprature ambiante. Ltude
du degr de polymrisation est par consquent utile pour valuer tant limmunognicit
que la thermostabilit du vaccin.

On recommandait le stockage - 20 C pour les premiers vaccins polyosidiques du


groupe A. A cette temprature, le taux de dpolymrisation est ngligeable.
Limmunognicit du vaccin antimningococcique est lie la taille des molcules
des antignes protecteurs, les polysaccharides des groupes A et C, la rponse
immunitaire saccroissant avec le poids molculaire. La dcouverte que le
remplacement du chlorure de sodium par le lactose pour la lyophilisation stabilise les
vaccins polyosidiques contre la dpolymrisation thermique, a reprsent une tape
majeure dans lobtention de vaccins plus stables (143, 151). Ces vaccins sont fournis
sous forme lyophilise. Laddition dun stabilisant et la ralisation dun faible taux
dhumidit interne ont grandement amlior leur stabilit thermique.

Les vaccins antimningococciques stabiliss ltat lyophilis peuvent tre conservs


jusqu deux ans en rfrigrateur (8, 9). Le vaccin polyosidique du groupe A na pas
t affect par sa conservation temprature ambiante (20 - 25 C) pendant 12 jours
ou 35 C pendant 3 jours (9). Le vaccin des groupes A + C dun fabricant, conserv
22 C pendant 18 mois a prsent une trs faible dpolymrisation : 45 C, la
composante du groupe A a atteint un seuil critique de dpolymrisation aprs
4 semaines, tandis que la composante du groupe C est reste stable pendant 8
10 semaines (9).

On a signal quun vaccin reconstitu avec un diluant contenant du phnol la


concentration de 0,25 % restait stable pendant deux mois si on le maintenait -
20 C, 4 semaines 4 C, 2 semaines 25 C et 4 jours 37 C (8). En dpit de sa
stabilit relative, le vaccin reconstitu sera conserv au rfrigrateur et jet si
on ne lutilise pas le jour mme o il a t reconstitu (151).

WHO/GPV/98.07 47
18. Vaccin anti-Haemophilus influenzae type B

La stabilit des vaccins polyosidiques conjugus, y compris celui contre lHaemophilus


influenzae type B (Hib), pourrait dpendre de divers facteurs affectant la force de la
liaison entre le polysaccharide et le support protique. Bien quon dispose de peu
dinformations sur ces vaccins, les rsultats prliminaires indiquent que le vaccin
anti-Hib lyophilis (vaccin conjugu lanatoxine ttanique renfermant un
polysaccharide capsulaire, le PRP-T [polyribosyl-ribitol-phosphate] ) est stable
pendant 36 mois au rfrigrateur, et au moins 24 mois 25 C. Les vaccins anti-Hib
reconstitus monovalents ou associs dautres vaccins (DTC, DTC-HB ou
DTC-VPI) doivent tre dtruits aprs la sance de vaccination ou dans les six heures.
Le vaccin anti-Hib liquide monovalent et le DTC-anti-Hib liquide sont stables au
rfrigrateur pendant 24 mois. Dans les prsentations multidoses, ils peuvent tre
utiliss lors de sances ultrieures, mme sils ont t ouverts, conformment la
dclaration de lOMS sur lutilisation des flacons ouverts de vaccins lors de sances
ultrieures de vaccination (161)

19. Vaccins antityphodiques

Dans le pass, les vaccins parentraux antityphodiques cellules entires tues ont
t utiliss couramment mais ils entranaient frquemment des douleurs et des
tumfactions locales, de la fivre, des cphales et un tat de malaise gnral.

On a utilis ces dernires annes trois vaccins contre la typhode : le vaccin parentral
conjugu au support protique du polysaccharide Vi, des souches attnues de
Salmonella typhi utilises comme vaccin oral vivant et des vaccins oraux inactivs
cellules entires (88).

Le vaccin au polysaccharide Vi est trs stable et la chane du froid nest pas ncessaire,
mme en pays tropical. Cest le net avantage quil prsente.

Les vaccins oraux vivants renferment la Ty21, un mutant de S. typhi, et doivent tre
conservs 4 C. La dure de vie des vaccins lyophiliss dpend de lhumidit
rsiduelle et du maintien de la chane du froid. Prs de la moiti des erreurs dobservance
constates chez des voyageurs amricains taient imputables de mauvaises conditions
de stockage (32). On a associ les checs vaccinaux chez les voyageurs suisses des
vaccins qui nont pas t gards ltat rfrigr (67). Une conservation prolonge
temprature ambiante a entran progressivement la diminution du nombre des
particules viables bien que tous les lots tests aprs stockage pendant 7 jours
20 - 25 C aient rpondu aux normes dactivit. Trois lots de vaccin conservs pendant
12 heures 37 C ont galement gard leur activit (32).

20. Vaccin anticholrique

Bien que, daprs les recommandations de lOMS, lutilisation des vaccins


anticholriques ne se justifie plus dans aucun cas ni aucun ge, on les trouve toujours
dans le commerce dans de nombreux pays.

48 Thermostabilit des vaccins


Rcemment, des vaccins oraux cellules entires tues associs la sous-unit B
(vaccin WC/BS) ont t dvelopps pour tenter de stimuler la rponse immunitaire
locale de la muqueuse intestinale dune manire semblable celle induite par
lexposition naturelle (127). Les conditions de stockage requises pour les vaccins
oraux tus sont semblables celles prvalant pour les anciens vaccins parentraux
(le vaccin est stable pendant trois ans au rfrigrateur entre 2 et 8 C).

Le vaccin CVD103 HgR oral vivant est un autre vaccin rcemment mis au point.
Comme la souche vaccinale est vivante, il convient de prserver la viabilit des
bactries lors du stockage et la ncessit dune chane du froid efficace est probable.

WHO/GPV/98.07 49
Ve Partie :
Conclusions

La stabilit des vaccins varie beaucoup. On peut les classer en fonction de leur
rsistance au stockage des tempratures leves, les anatoxines diphtrique et
ttanique ainsi que le vaccin contre lhpatite B tant les plus thermostables, le vaccin
antirougeoleux lyophilis, le vaccin antiamaril et le BCG occupant une position
intermdiaire et le vaccin antipoliomylitique oral tant le plus fragile. Les vaccins
reconstitus contre la rougeole, la fivre jaune et la tuberculose (BCG) sont instables ;
il convient de les utiliser le plus rapidement possible aprs leur reconstitution, de les
conserver dans un bain glac au cours de la sance de vaccination et de les jeter la
fin.

Les donnes prsentes montrent que certains vaccins peuvent rsister de longues
priodes dexposition sans baisse significative de lactivit. La forte rsistance de
lanatoxine ttanique et du vaccin contre lhpatite B la chaleur pourrait justifier
des tudes sur lutilisation de ces vaccins en labsence de rfrigration. Ils pourraient
conserver une activit suffisante lors dexposition de courte dure la chaleur
lorsquon les emploie dans des programmes priphriques pour vacciner contre le
ttanos les femmes en ge de procrer ou contre lhpatite les enfants dans des rgions
o la chane du froid est impossible maintenir.

Actuellement, on dispose de trois rapports concernant lutilisation de lanatoxine


ttanique et du vaccin contre lhpatite B en dehors de la chane du froid, sans
rfrigration. Une tude a t ralise en Indonsie avec un dispositif injection
prrempli et usage unique Unijet. Ce dispositif a t conserv temprature
ambiante au domicile des sages-femmes pour des priodes allant jusqu un mois.
Ltude a rvl que les sages-femmes employaient convenablement et sans risque ce
dispositif pour administrer le vaccin contre lhpatite B aux nourrissons et lanatoxine
ttanique leurs mres. Aussi bien les personnes traites que les sages-femmes ont
exprim leur forte prfrence pour ce dispositif usage unique par rapport aux
seringues habituelles (140).

Au cours dune tude en Bolivie, lacceptabilit dUnijet, prrempli avec lanatoxine


ttanique et gard par les sages-femmes leur domicile sans rfrigration, a t
galement trs bonne. Ce dispositif ne requiert aucun montage, limine les tapes de
remplissage de la seringue et de rglage de la dose et ne requiert ni glace ni rcipient
pour la conservation au froid. Avec sa capacit amliorer linnocuit, simplifier la
logistique et diminuer le taux de gaspillage, il reprsente une stratgie
potentiellement rentable pour la vaccination dans les rgions priphriques (108).
En Chine, le taux de sroconversion chez les nourrissons vaccins contre lhpatite B

50 Thermostabilit des vaccins


par les sages-femmes et avec des vaccins stocks sans rfrigration na pas montr
de diffrence significative avec celui observ chez des enfants vaccins par les
mdecins des villages et laide de vaccins conservs rfrigrs (7).

Cependant, toute exposition des tempratures leves entrane une certaine


dgradation du vaccin, mme si lactivit restante demeure suprieure au niveau
considr comme ncessaire pour une action immunisante minimale. En outre, chaque
exposition la temprature ambiante a un effet cumulatif sur lactivit du vaccin.
Au niveau des postes de sant priphriques, les vaccins ne pourront pas rsister aux
tempratures mentionnes dans le prsent document si leur activit a dj t
compromise par des dfaillances antrieures de la chane du froid. Les donnes
prsentes peuvent tre utiles aux personnes qui sont impliques dans les activits de
vaccination aux niveaux central et provincial et doivent prendre des dcisions propos
des vaccins exposs des tempratures leves.

Tous les vaccins devraient tre systmatiquement stocks aux tempratures


recommandes par les fabricants et les programmes nationaux. La chane du froid
demeure un lment extrmement vulnrable de ces programmes dans les pays en
dveloppement climat tropical. Les pays dvelopps climat tempr peuvent
galement connatre ce genre de problmes. Dans tous les pays, seule lexistence de
systmes de rfrigration, la surveillance des tempratures et la tenue de fiches de
contrle permettront dassurer que chaque flacon de vaccin est conserv dans des
conditions appropries et quil est employ avant la date limite dutilisation figurant
sur ltiquette.

Les tableaux en Annexe prsentent un rsum des informations concernant la stabilit


des vaccins stocks des tempratures varies.

WHO/GPV/98.07 51
VIe Partie :
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WHO/GPV/98.07 63
Annexe :
Tableaux rsumant la stabilit
des vaccins

64 Thermostabilit des vaccins


Tableau A : Stabilit des vaccins couramment utiliss dans
les programmes nationaux de vaccination

Vaccins1 Tempratures de stockage (C)

0-8 22-25 35-37 Plus de 37


Anatoxines Stable pendant Stable pendant Stable pendant A 45 C : stable
diphtrique et 3 7 ans des mois des semaines 2 semaines
ttanique dans A 53 C : perte de
les vaccins lactivit aprs
monovalents ou quelques jours
en lments de A 65 C : perte de
vaccins associs2 lactivit aprs
quelques heures
Vaccin contre Stable pendant Stable pendant Stable pendant A 45 C : stable
lhpatite B2 2 4 ans des mois des semaines pendant des
jours
Vaccin Stable pendant Garde une activit Garde une activit A 41 C : 50 % de
antirougeoleux3 2 ans satisfaisante satisfaisante perte dactivit
(jusqu 50 %) pendant au moins aprs 2 - 3 jours
pendant au moins une semaine dexposition ;
un mois mais pourrait A 54 C : 80 % de
perdre 20 et 50 % perte dactivit
dactivit en 1 - 4 aprs un jour
et 2 - 6 jours dexposition
dexposition
respectivement
Vaccin antiamaril3 Vaccins 50 % de perte 50 % de perte
stabiliss : aprs 3 10 mois aprs 10 20
stables pendant dexposition jours dexposition
2 3 ans
Vaccin Stable pendant Stabilit varie : Stabilit varie : A 45 C : environ
anticoquelucheux2 18 24 mois 2 semaines pour perte dactivit de 10 % de perte
malgr une certains vaccins 50 % pour certains dactivit par jour;
diminution lente vaccins stocks A 50 C : perte
et continue de pendant 1 rapide de
lactivit semaine lactivit
BCG3 Stable pendant Stabilit varie : Stabilit varie : Instable.
1 an 20 30 % de 20 % de baisse A 70 C : 50 % de
baisse de la de viabilit en 3 baisse en 30 mn
viabilit en 3 14 jours dexposition
mois dexposition dexposition
Vaccin Stable pendant Certains vaccins Instable. Trs instable. A
antipolio- 6 12 mois conservent leur Utilisation des 41 C : 50 % de
mylitique oral3 titre aprs 1 2 PCV. Le titre nest perte en un jour.
semaines plus satisfaisant A 50 C : le titre
dexposition en 1 3 jours satisfaisant
disparat en 1
3 heures
dexposition
1. Ces donnes concernent les vaccins antirougeoleux, antiamaril et le BCG lyophiliss ; les autres
vaccins se prsentent sous forme liquide. Les vaccins reconstitus perdent rapidement leur activit et
il faut les jeter la fin de chaque sance de vaccination. Le BCG reconstitu ne renferme aucun agent
bactriostatique et il existe un risque de contamination. Le vaccin antiamaril reconstitu doit tre
administr rapidement aprs reconstitution (dans lheure qui suit). Si lon peut le garder
continuellement dans un bain glac, on peut lutiliser tout au long dune sance de vaccination, mais
il faut le jeter ensuite.
2. Vaccins adsorbs sur sels daluminium. Il ne faut jamais les congeler.
3. Stockage optimal long terme - 25 C ou des tempratures infrieures. Il convient de garder
part le diluant et de ne jamais congeler celui-ci.

WHO/GPV/98.07 65
Tableau B : Stabilit des autres vaccins viraux et bactriens

Vaccins1 Tempratures de stockage (C)

0-8 22-25 35-37 Plus de 37

Vaccin Stable pendant Diminution de la Disparition de la Pas de donnes


antipolio- 1 4 ans teneur en teneur en prcises
mylitique inactiv antigne D1 du antigne D du disponibles
type 1 en 20 jours type 1 dans
certains vaccins

Vaccin anti- Stable pendant Vaccin du Demi-vie 2 : Pas de donnes


mningococcique 2 ans groupe A : stable 4 semaines disponibles
polyosidique pendant 12 jours ;
groupe A + C :
stable pendant
des mois

Vaccin antirabique Stable pendant Conservation de Stable pendant Pas de donnes


obtenu par culture 3,5 ans limmunognicit 4 semaines disponibles
sur cellules aprs expdition,
diplodes transport et
humaines stockage de
11 semaines

Vaccin contre Stable pendant Stable pendant Stable pendant A 40 C : baisse


lencphalite un an ; baisse 20 semaines ; 6 semaines : dactivit
japonaise dactivit baisse dactivit baisse dactivit denviron 10 %
denviron 5 % denviron 9 % denviron 14 % aprs
en 52 semaines pendant cette pour 18 semaines 2 semaines de
de stockage dure de stockage de stockage stockage et de
27 % aprs 6
semaines

Vaccin Rfrigration Le stockage Diminution rapide Pas de donnes


antityphodique ncessaire. La prolong entrane du nombre des disponibles
oral vivant Ty21 dure de vie une diminution particules viables.
dpend de la progressive du Garde une activit
teneur en nombre des minimale aprs
humidit particules viables 12 heures
rsiduelle dexposition

1. La teneur en antigne D est tablie in vitro par la mthode ELISA. Les normes pour le VPI sont
exprimes en units dantigne D ; les VPI activit renforce renferment 40, 8 et 32 units
dantignes D des types 1, 2 et 3 respectivement.
2. Demi-vie : temps au bout duquel on constate une baisse de 50 % de lactivit initiale.

66 Thermostabilit des vaccins

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