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MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
Guamangallo Raúl
Portilla Arnulfo
Porras Diego
Pusdá Guillermo
2010
Contenido
1. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................................4
2. OBJETIVOS: ..........................................................................................................................................4
3. MARCO TEÓRICO:...............................................................................................................................4
4. MARCO METODOLÓGICO.................................................................................................................6
4.7.2. Método……....................................................................................................................................9
4.7.2.1.Microorganismo. ..........................................................................................................................9
4.7.2.2.Inoculo…….. ...............................................................................................................................10
4.7.2.5..Fermentación. ...........................................................................................................................10
5. RESULTADOS ....................................................................................................................................11
6. DISCUSIONES ....................................................................................................................................11
7. CONCLUSIONES ................................................................................................................................11
8. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................................12
9. ANEXOS….. .........................................................................................................................................13
La Gibberella fujikuroi es un hongo aislado por primera vez en cultivos de arroz en la India como
un microorganismo patógeno pero que no ha sido estududiado con claridad sus beneficios que
puede presentar.
2. OBJETIVOS:
3. MARCO TEÓRICO:
En la actualidad este hongo ha sido aislado en diversas plantas como arroz, maíz, caña etc.
como Fusarium moniliforme, siendo reconocido como patógeno cuando se encuentra un contaje
alto en el maíz, el causante de enfermar al arroz por su exagerado crecimiento y posterior muerte
por no soportar su propio peso y además asociado al declinamiento de espárragos donde
produce, amarillamiento y retardo en su crecimiento.
Entre los diversos compuestos producidos por este tipo de hongo se encuentran alrededor de 25
giberelinas, que son un tipo de hormonas que regulan el crecimiento de las plantas y que entre
estas se encuentra la giberelina GA3 que es denominado ácido giberélico.
Algunos hongos del genero Fusarium son capaces de sintetizar ácido giberélico como producto
de su metabolismo secundario siendo el F. moniliforme el que ha dado resultados positivos en la
obtención de este tipo de fitohormona.
El AG, ácido giberélico es una simple giberelina, que promueve crecimiento y elongación celular.
Afecta la descomposición vegetal y ayuda a su crecimiento si está en bajas proporciones, aunque
eventualmente la planta desarrolle tolerancia al compuesto.
El ácido giberélico es una muy potente hormona cuya presencia natural en plantas controla su
desarrollo. Sabiéndose de su poder regulatorio, las aplicaciones de muy bajas concentraciones
pueden resultar en profundos efectos, mientras que muy altas pueden dar el efecto opuesto. Se lo
usa generalmente en concentraciones de 0,01 a 10 mg/L .
Por otra parte también pueden ser de interés ciertos sub-productos de origen industrial, agrícola,
forestales y procesamiento de alimentos que sirven como soportes y pueden contribuir con
nutrientes para el microorganismo.
4. MARCO METODOLÓGICO
4.1. Muestreo
Se tomó muestras de cultivos de arroz, ubicados en el cantón Quinindé, provincia de
Esmeraldas.
La técnica de muestreo está basada en los métodos utilizados en el INIAP de la siguiente manera.
Finca I Finca II
Puntos de
muestreo Numero de muestras
Suelo 4 4
Espiga 2 2
Total de muestras 6 6
4.2. Aislamiento
4.2.1. Aislamiento en suelo.
Se procedió a homogenizar cada muestra de los diferentes cultivos de arroz.
Procedimiento.
0.1 ml 0.1 ml
10-3 10-5
10 g. muestra + 90 ml
de agua de peptona
0.1 ml 0.1 ml
Se sembró por duplicado de cada muestra, tres granos de arroz por caja y se incubo
durante 5 días a 25°C.
4.3. Purificación:
Identificación de las upm de Gibberella fujikuroi (fusarium moniliforme)
Upm pura de F. moniliforme (Gibberella fujikuroi) Colonia de Gibberella luego de un repique de la mejor colonia
4.6. Conservación:
La conservación de las cepas se precedió a realizarse en aceite mineral.
Procedimiento
Agragar aceite
Inoculacion de cepa mineral
Refrigeracion a 4 °C
Colonia de Fusarium
Moniliforme
Agar saboureab
4.7.1. Materiales.
Microorganismo( inóculo esporulado)
Soporte (salvado de trigo y masilla de malta)
A1
Solución Salina
A2
CMC (con CaCO3)
Acetato de etilo
Acido acético
Cloroformo
Etanol ácido (pH2.5)
Metanol
Acido Clorhídrico
Estándar de ácido giberélico
Frascos erlenmeyer de 250ml
Sistema de agitación y control de temperatura
4.7.2. Método.
4.7.2.1. Microorganismo.
La cepa de Gibberella fujikuroi tiene que ser seleccionada y apta para el experimento, esta
tiene que haber sido conservada o mantenida viable en resiembras periódicas en agar PDA
incubadas a 28°C y luego conservadas a 4°C.
4.7.2.2. Inoculo.
Se prepara a partir de esporas, estas presentan mayor uniformidad en cuanto a tamaño,
forma y estado fisiológico, resultando así más sencilla la estandarización del inóculo.
Tomar 2ml del cultivo suspendido y adicionar 3ml de CMC suplementando con CaCO3 al 1%,
colocar a 28°C durante 96 horas con agitación constante.
Esterilizar los matraces a 121°C por 30 min al igual que las soluciones minerales y el aceite de
linaza esterilizar con calor seco a 170°C y el resto de componentes esterilizar por filtrado.
4.7.2.5. Fermentación.
El medio de cultivo se inocula con 3ml de cultivo esporulado de G. fujikuroi en caldo
Czapex Dox.
Homogenizar y agitar durante una hora a 25°C para posteriormente filtrar en gasa y papel Watman
numero 41.
Evaporar el agua en un rotavapor y luego el residuo recuperar con metanol y conservar a 4°C.
El revelado se realiza con vapores de ácido clorhídrico por 30 minutos, posteriormente se calienta
a 110°C por 10 minutos y observar con luz UV.
5. RESULTADOS
Colonias aisladas:
6. DISCUSIONES
Para el aislamiento y selección de la cepa sería más conveniente realizar un muestreo en
distintos suelos tropicales para verificar en cuál de estas zonas es más susceptible el
crecimiento y adaptación de la mejor cepa de Gibberella fujikuroi, así como también en
otros cultivos.
Es conveniente buscar un medio de cultivo más selectivo para obtener mejores resultados
en el aislamiento, debido a la presencia de muchas especies de hongos que se
presentaron en la primera siembra.
El cuidado en el aislamiento tiene que ser riguroso, ya que puede existir contaminación por
otras especies de hongos del ambiente.
Sería importante plantear y realizar el estudio de la obtención del acido giberélico por
distintos métodos con la finalidad de ejecutarlos y obtener mejores resultados a nivel de
laboratorio.
7. CONCLUSIONES
Las cepas aisladas son de Gibberella fujikuroi, ya que presentan las características
morfológicas perteneciente s a esta especie.
Los mejores resultados del aislamiento están en suelos de cultivo de arroz en suelo seco y
semillas.
El mejor método para preservar la cepa es mediante la siembra en pico de flauta y cubierto
con aceite mineral estéril.
Rivera Trujillo Jaime Javier. Evaluación del ácido giberélico para mejorar la calidad del
botón de rosas. Facultad de Ciencias Agronómicas. 2004.
http://redalyc.uaemex.mx/pdf/499/49911204.pdf
http://www.inia.es/gcontrec/pub/11.WOLCAN_LORI_1048156253125.pdf
http://www.biotecnologica.com/paginas/TratamieEl_curso0i72742300d1115244052005.php
9. ANEXOS
9.1. Tabla A1
COMPONENTES DE LOS SOPORTES SÓLIDOS USADOS EN LA
FERMENTACIÓN
Fotografías de F. moniliforme.