Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Reaksi kusta adalah episode klinis akut terjadi dalam perjalanan kronis penyakit
kusta . Mereka diklasifikasikan sebagai tipe I ( TIR ) atau tipe II ( TIIR , eritema no-
dosum leprosum = ENL ) reactions1 . TIR terjadi pada pasien borderline dari
spektrum Immunopatologi dari penyakit tersebut . Mereka ditafsirkan sebagai
pergeseran status imunologi terhadap tuberkuloid ( meningkat ) atau menuju
lepromatous ( menurun ) 1 . Respon kekebalan tubuh meningkat ditandai dengan
kerusakan tinggi basiler , penampakan granuloma tuberkuloid belum matang dan
meningkatkan infiltrasi limfosit pada infiltrat lepromatous borderline, dan adanya
edema dan kongesti vaskular . Semua perubahan ini terlihat pada pemeriksaan
histopatologi . ENL bukannya menyajikan karakteristik neutrophilic infiltrasi namun
infiltrat sel mononuklear , edema dan disintegrasi seluler juga dipamerkan . Hal ini
juga dapat mempengaruhi semua tingkat dermis dan hypodermis1 tersebut . Reaksi
kusta adalah masalah yang menantang menjadi penyebab mereka meningkatkan
morbiditas penyakit akibat kerusakan saraf bahkan setelah kesimpulan dari MDT .
Paresthesia , hypoesthesia dan paresia menjadi semakin lebih intens jika
pengobatan tidak segera dilembagakan . Peningkatan respon imun telah terdeteksi
pada pasien kusta bersamaan dengan episode reaksional dengan tingkat
peningkatan - TNF - , IL1 - dan IFN - dan lainnya cytoki - nes di TIR dan ENL3 -
5 . Kehadiran - limfosit juga terdeteksi dalam infiltrat pasien TIR dengan lepromin
diinduksi tertunda jenis hipersensitivitasnya . Morais et al.7 , menunjukkan
upregulation IL - 12 dan IFN - transkrip di kedua TIR dan TIIR . kemoterapi ,
kehamilan , infeksi penyerta , emosional dan stres fisik telah diidentifikasi sebagai
predisposisi kondisi untuk reaksi tersebut . Meskipun semua bukti sementara
imunologi pemulihan selama episode reaksional dilaporkan pada pasien kusta ,
mekanisme penting yang memulai baik TIR atau TIIR belum ditentukan. Respon
imun terintegrasi dengan sistem lain dari organisme yang tergantung , seperti
sistem saraf dan sel-sel mast . Sel mast merupakan komponen konstan seluler
dermis , dari proprias lamina mukosa , dari serosa dan jaringan ikat pada
umumnya . Sel mast dapat menghasilkan keragaman besar mediator kimia dan
termasuk dalam immunoinflammatory response , antigen pra - sentation,
anaphylaxis , angiogenesis , dan fibrogenesis . Dekat sel mast pada serat saraf
perifer di jaringan bersama dengan pemendekan jarak antara sel-sel mast dan
serabut saraf selama proses inflamasi , menunjukan interaksi fungsional antara
kedua komponen-komponen . Selain itu, sel-sel mast dapat keduanya menghasilkan
neuropeptida dan dirangsang oleh mereka , mengindikasikan bahwa neuropeptida
bisa menengahi mast interaksi sel saraf . Himpunan bagian dari sel mast
didistribusikan ke seluruh jaringan ikat . Cara terbaik untuk mengidentifikasi subset
sel mast adalah analisis isi protease dalam granul sitoplasma mereka . Pada
dasarnya, ada sel mast yang memiliki kedua tryptase dan protease chymase ( TCMC
) dalam butiran mereka , dan sel mast yang memiliki tryptase tetapi tidak chymase
( TMC ) 16 . TCMC sesuai dengan sel-sel mast jaringan ikat yang hadir dalam
kompartemen dermal kulit . The TMC adalah ekuivalen ke sel-sel mast mukosa dan
dapat ditemukan di peritoneal dan mukosa lamina propria . Dalam kusta peran sel
mast belum jelas sejauh ini . Rojas - Espinosa dan Maldonado telah berkorelasi
dengan peningkatan jumlah sel mast pada kulit tikus percobaan yang terinfeksi
dengan Mycobacterium lepraemurium dengan jaringan lemak menurun diamati
pada tikus . Jayalakshimi dan Lian19 dan Kontochristopoulos et al.20 , ditemukan
lebih tinggi dari sel mast dalam lepromatous dibandingkan lesi tuberkuloid . Cree et
al.21 , bagaimanapun, telah menemukan jumlah yang lebih tinggi dari sel-sel mast
di tuberkuloid dibandingkan lesi kulit lepro - matous . Ini penulis kemudian tidak
menggunakan teknik imunohistokimia . Hal ini diterima secara luas bahwa interaksi
dari sistem kekebalan tubuh dengan sistem saraf dilakukan dengan cara mediator
yang disebut neuropeptides22 . Molekul-molekul ini diproduksi dan dirilis oleh
sistem saraf dan bertindak atas beragam struktur target seperti kapal , epitel ,
anexi , sel-sel jaringan ikat dan limfosit . Oleh karena itu , neuropeptida
menambahkan tingkat tinggi kompleksitas respon immunoinflammatory .
Neuropeptida memiliki kapasitas untuk bertindak baik sebagai modulator dan
sebagai efektor proses biologis , memperluas jaringan interaktif antara sistem saraf
dan kekebalan tubuh . Laporan tentang pengaruh neuropeptida dalam proses
immunoinflammatory , seperti potensiasi dari aksi histamine, penghambatan
proliferasi sel T , peningkatan kemotaksis untuk T cells25 , induksi degranulasi sel
mast melalui histamin, aktivasi TNF - transcription gen , dan peningkatan
proliferasi limfosit dan IFN - production , adalah contoh dari partisipasi
neuropeptida dalam respon immunoinflammatory . Selain dampaknya pada
pigmentasi kulit, MSH neuropeptida ( melanocyte stimulating hormone ) , memiliki
efek supressive pada fungsi makrofag . Ini menghambat reaksi hipersensitivitas dan
di toleransi dalam model eksperimental murine . Hal ini juga mengatur proliferasi
keratinosit dan produksi fibroblast kolagenase. MSH bekerja sebagai faktor
pertumbuhan saraf meningkatkan regenerasi, dan bertindak pada neuromuscular
junction maturation . Namun, perannya dalam penyakit lepra belum dievaluasi
sejauh ini. Hipotesis awal kami adalah bahwa kelebihan produksi dan pelepasan
neuropeptida bisa memberikan dasar bagi respon imun meningkat ditemukan
selama reaksi lepra . Ketidakseimbangan berspekulasi Hal ini dapat disebabkan oleh
pengaruh dari saraf perifer kusta neuropati . Sel mast bisa terlibat dalam inisiasi
reaksi kusta juga, karena interaksi mereka dengan serabut saraf melalui stimulasi
neuro - peptida dan / atau sekresi dalam proses inflamasi dan pelepasan mediator
mengandung butiran yang sangat mungkin mempengaruhi hasil dari episode
reaksional . Tujuan dari penelitian ini kemudian , adalah untuk membandingkan
jumlah dan distribusi sel mast dalam biopsi diambil dalam reaksional dan pasca -
reaksional periode lesi kusta . Selain itu, ekspresi neuropeptida selama dan setelah
reaksi dianalisis . Studi tentang keterlibatan dua komponen ini heterogen dalam
reaksi kusta dapat membantu untuk menjelaskan peristiwa awal yang mengarah ke
TIR dan ENL reaksi .
METODE
Enam pasien kusta dipilih untuk penelitian ini . Data klinis mereka menunjukkan
pada Tabel 1 . Pasien-pasien ini memiliki diagnosis kusta dikonfirmasi dalam
pelayanan rawat jalan kusta dari Oswaldo Cruz Institute . Penderita kusta biasanya
diikuti dalam layanan ini selama pengobatan mereka dan sepanjang periode pasca
-discharge mereka . Tiga pasien memiliki TIR dan tiga lainnya telah TIIR . Dalam
studi ini , reaksi dianalisis sebagai satu kelompok karena jumlah setiap jenis reaksi
rendah . Prosedur pemilihan pasien telah disetujui oleh Komite Etik Penelitian pada
Manusia dari Oswaldo Cruz Institute dan pasien setuju untuk berpartisipasi dalam
penelitian dengan menandatangani istilah persetujuan tercerahkan . Pasien yang
dipilih diserahkan ke biopsi kulit pertama selama episode reaksional dan yang
kedua selama remisi . Para pasien dianggap berada dalam reaksi setelah lesi
reaksional mengalami penurunan dalam jumlah maupun tingkat infiltrasi dan semua
gejala reaksional umum sudah mereda . Pengobatan spesifik untuk setiap jenis
reaksi ( prednison 1mg/kg berat badan / hari untuk TIR dan talidomide 200 mg / hari
untuk TIIR ) diberikan untuk setiap pasien . Setengah dari enam milimeter biopsi
kulit diperoleh pada kedua tahap evolusi diberikan dalam larutan paraformaldehyde
4 % yang mengandung 14 % asam picric selama dua jam pada suhu 4oC , dibilas
empat kali dalam 0,1 M dapar fosfat dengan 10 % sukrosa menambahkan, disimpan
dalam nitrogen cair , dan dipotong pada cryostat Microm ( Heidelberg , Jerman ) .
Bagian yang dicairkan ke slide kaca pra - dilapisi ( super FrostPlus , Menzel - Glser ,
Braunschweig , Jerman ) . Setengah lainnya diproses untuk embedding parafin rutin
untuk tujuan diagnostik . Kedua biopsi ( reaksional dan pasca - reaksional ) dari
setiap pasien yang diproses secara paralel untuk immunostaining neuropeptida dan
penanda sel mast . Tunggal (untuk neu - ropeptides ) dan double - pewarnaan
( untuk sel mast ) dengan metode immunofluorescence indi - rect yang digunakan .
Antibodi utama untuk neuropeptida yang dipilih untuk penelitian ini adalah kelinci
anti - kalsitonin - gen terkait peptida ( anti - CGRP , 1:600 Peninsula Laboratories ,
Inc.Belmont , CA , USA ) , polipeptida intestinal vasoaktif anti - ( anti - VIP , 1 : 200 ,
Semenanjung Laboratories , Inc , Belmont , CA , USA ) , P anti - substansi ( anti - SP ,
1:400 , Chemicon International Inc , Temecula CA , USA ) , anti - - melanosit
stimulating hormo - ne ( anti - - MSH , 1:400 , Chemicon International Inc ,
Temecula CA , USA) , dan anti - - melanosit merangsang hor - mone ( anti - -
MSH , 1:400 , Chemicon International Inc , Temecula CA , USA ) masing-masing
diencerkan dalam 0,01 M dapar fosfat yang mengandung 0,3 % Triton X - 100 .
Bagian diinkubasi semalam pada suhu 4oC dalam ruang lembab diikuti dengan
inkubasi selama 30 menit pada 370 C dengan lissamine rhodamine ( RLKT ) - keledai
conjugated anti - rabbit IgG antiserum ( Jackson ImmunoResearch Laboratories ,
West Grove , PA , USA ) , diencerkan 1 : 160 dalam buffer yang sama dengan
antibodi primer. Antibodi utama untuk double- pewarnaan enzim sel mast adalah
tikus anti - chymase ( 1:2,000 , Chemi - con International Inc Temecula , CA , USA )
dan ayam anti - tryptase ( 1:200 , Promega Corporation, Madison , WI , USA ) .
Bagian diinkubasi dengan antibodi primer semalam di 40C dalam suasana lembab ,
diikuti dengan inkubasi isothyocyanate fluorescein ( FITC ) - terkonjugasi keledai anti
- tikus ( 1:160 , Jackson ImmunoResearch Laboratories , West Grove , PA , USA )
bersama-sama dengan RLKT - conjugated keledai anti - ayam ( 1:160 , Jackson
Immuno Research Laboratories , West Grove , PA , USA ) . Kedua nya diencerkan
dalam 0,01 M dapar fosfat yang mengandung 0,3 % Triton X - 100 .
Bagian kontrol diinkubasi dengan serum yang normal sesuai gantinya. Pengamatan
dilakukan dengan menggunakan lampu eksitasi yang berbeda dengan
photomicroscope ( Nikon , Tokyo , Jepang ) . Ekspresi imunohistokimia neuropeptida
dan penanda sel mast dibandingkan pada kedua jenis biopsi . Imunofluoresensi
tidak langsung dengan kelinci anti - manusia PGP 9,5 antibodi digunakan untuk
noda serabut saraf kulit biopsi dari kedua kelompok . Jumlah estimasi PGP serat 9,5
- positif adalah dasar untuk perbandingan dengan immunoreactivity diperoleh
dengan antibodi anti - neuropeptida yang tercantum di atas . Sel mast yang
bernoda dihitung dalam infiltrat inflamasi dan dalam dermis intervensi . Ini adalah
POSSI - ble karena daerah diduduki oleh inflamasi infil - trate bisa dibedakan secara
jelas dari dermis non - terkena di bagian immunostained . Pada yang pertama,
sebuah daerah yang dipisahkan tajam warna yang berbeda dan homogen matriks
diamati , dalam terakhir, bundel kolagen bercampur dengan serat elastis dapat
diidentifikasi . Frame digunakan untuk mengambil microphotographs dipekerjakan
sebagai bidang standar untuk menghitung sel mast . Sel-sel mast dalam dua belas
frame ( enam ditempatkan pada luas penampang ditempati oleh infiltrat inflamasi
dan enam ditempatkan di wilayah intervensi dermis ) per bagian dihitung . Frame
ditempatkan pada bagian tersebut sehingga area menyusup inflamasi dan dermis
intervensi dari atas , tengah dan dermis dihitung secara terpisah . Dua bagian non -
berdekatan untuk setiap biopsi diambil untuk penghitungan . Lensa objektif yang
digunakan adalah tujuan 20X cocok dengan mata 10X .
Sebuah perkiraan jumlah sel mast per mm2 adalah ob - dipertahankan menghitung
sel mast sepanjang 0,5 mm standar - sisi dalam bingkai dua kali ke alun-alun .
Jumlah total sel mast dihitung ( TMC + TCMC ) dalam infiltrat inflamasi , dalam
dermis intervensi dari atas, tengah dan wilayah dalam dan di seluruh dermis
ditentukan . Rasio TMC / TCMC itu menghalangi - ditambang di infiltrat inflamasi dan
pada dermis terpengaruh ( atas, menengah , jauh dan seluruh dermis ) .
Perbandingan berpasangan dari jumlah sel mast dan rasio TMC / TCMC di kedua
biopsi reaksional dan pasca - reaksi diuji dengan analisis Wilcoxons non - parametrik
berpasangan tercantum dalam Tabel 2 . Perbandingan antara TMC / TCMC rasio dan
jumlah total sel mast dalam menyusup dan di dermis intervensi masing-masing
kelompok menggunakan uji Mann Whitney U ditunjukkan pada Tabel 3 ( kelompok
reaksional ) dan 4 ( kelompok pasca - reaksional ) . Statistika 6.0 software ( Statsoft
Inc , USA) digunakan untuk analisis statistik .
HASIL Semua enam biopsi diambil selama episode reaksional ( TIR dan TIIR )
menunjukkan inflamasi infiltrasi kompatibel dengan gambaran klinis . ( Gambar 1a
dan 2a ) . Meskipun lesi pengampunan reaksi yang tanpa infiltrasi pada
pemeriksaan klinis, infiltrat inflamasi tetap dalam ekstensi dermal mereka pada
pengamatan histopathologi - kal ( Gambar 1b dan 2b ) . The area pada bagian yang
ditempati oleh infiltrat inflamasi pada
biopsi pasca - reaksional masih cukup besar untuk memungkinkan kuantifikasi sel
mast dalam infil - trate biopsi ini ( Gambar 1b dan 2b ) . Jumlah cells/mm2 tiang di
seluruh der - mis biopsi reaksional dan pasca - reaksional tidak berbeda nyata
( Gambar 3a , 3b dan Tabel 2 ,
baris 18 ) , kecuali dalam infiltrat inflamasi atas, yang mengungkapkan sejumlah
signifikan lebih tinggi pada lesi reaksional ( Tabel 2 , baris 10 ) . The TMC / TCMC
rasio dalam infiltrat inflamasi ( Gambar 4a , 4b, Tabel 2 , baris 1 , 2 , 7 , 9 ) , tetapi
tidak dalam dermis intervensi ( Tabel 2 , jalur 4 , 5 , 6 , 8 ) secara signifikan lebih
tinggi di
Gbr 3 . TCMC (warna kuning - hijau ) dan TMC ( warna oranye ) dalam episode
pembalikan reaksi ( a) dan dalam remisi biopsi reaksional ( b ) . Double- label
dengan immunofluorescence tidak langsung . The TMC / TCMC rasio lebih tinggi di
seluruh dermis dari biopsi reaksional . Skala bar : 50 pM .
PEMBAHASAN
Dalam studi ini , ekspresi neuropeptida dan adanya - im - munoreactive tryptase sel
mast tryptase/chymase- dan lesi reaksional dan biopsi pasca - reaksional
ditunjukkan . kami
Penemuan ini mendukung hipotesis bahwa sel mast mungkin terlibat dalam
peristiwa awal yang mengarah ke respon immunoinflammatory meningkat selama
reaksi kusta yang dilaporkan dalam literatur . Korelasi ini menunjukkan mekanisme
awal mungkin dari reaksi internasional episode , yang masih harus diklarifikasi lebih
lanjut .
Sel mast memiliki peran biologis penting dalam proses inflamasi dan stimulasi
respon imun . Oleh karena itu , perkiraan kehadiran mereka di infiltrat dengan
menggunakan metode yang tepat pada pewarnaan imunohistokimia juga menjadi
tujuan kami , sesuai dengan tujuan penelitian ini .
Pada awalnya, kami berharap bahwa jumlah sel mast akan jauh lebih tinggi dalam
lesi reaksional karena infiltrasi inflamasi yang dengan sendirinya , meningkatkan
jumlah sel-sel ini . bagaimanapun juga , jumlah sel mast dalam infiltrat pasca -
reaksional tidak menunjukkan penurunan yang signifikan tapi masih tinggi , kecuali
dalam infiltrat dari dermis atas . Ini jumlah peningkatan sel mast setelah reaksi
mereda dapat dijelaskan melalui partisipasi sel mast dalam perbaikan kulit yang
inflamasi , yang terjadi dalam masa penyembuhan ini , dan / atau oleh rendahnya
populasi sel mast dalam jaringan ini .
Secara signifikan lebih tinggi rasio TMC / TCMC dalam reaksi infiltrat dibandingkan
dengan satu di peradangan pasca - reaksional merupakan bukti modifikasi kualitatif
dalam populasi sel mast . Peningkatan relatif TMC adalah perubahan dalam bagian
dari subset sel mast di dermis , yang dalam dermis normal terutama diduduki oleh
TCMC , dengan sejumlah kecil TMC12 . Bagian kecil ini memainkan peran penting
dalam stimulasi respon sel T yang diketahui terjadi selama apapun reaksi . Jadi ,
dengan cara spekulatif , kita bisa diimplikasikan peningkatan jumlah ini sebagai
partisipasi subset TMC dalam menanggapi immunoinflammatory peningkatan
diamati dalam episode reaksional .
Jumlah yang lebih tinggi dari jumlah sel mast , dan semakin tinggi rasio TMC / TCMC
dalam inflamasi dalam filtrat dibandingkan dengan dermis intervensi , terlihat di
kedua biopsi reaksional dan pasca - reaksional , sangat mungkin konsekuensi dari
reaksi inflamasi . Jadi , mungkin terjadi peradangan sekunder, karena tidak ada
perbedaan yang signifikan mengenai dua parameter yang ditemukan antara dermis
intervensi dari biopsi reaksi internasional dan pasca - reaksional dan juga antar
daerah yang berbeda dari dermis intervensi dipelajari dalam masing-masing
kelompok . Selain itu, jumlah total sel mast yang lebih tinggi , dan / atau
peningkatan subset mereka , yang diharapkan pada dermis intervensi dari biopsi
reaksional jika mereka mendahului peradangan reaksional . Bersama-sama ini
adalah bukti bahwa variasi pada populasi sel mast terjadi pada proses inflamasi .
Percobaan kami dikontrol pada kuantifikasi variasi regional kulit di sel mast ,
digunakan metode tepat untuk identifikasi sel mast dan subset mereka dengan anti
- tryptase dan anti - chymase dan memperhitungkan kepadatan sel mast ( jumlah
cells/mm2 mast ) dan rasio TMC / TCMC mereka . Data dalam literatur tentang
peran sel mast pada kusta tidak memberikan poin dari pandangan tentang subjek
ini . Kami pikir kesulitan yang dicapainya adalah karena metode beragam pada
identifikasi dan protokol kuantifikasi digunakan . Kami baru-baru ini telah
menemukan laporan Mahaisavariya et al.34 di mana penulis menunjukkan jumlah
sel mast di biopsi diambil pada diagnosis ( yang pertama ) dan selama episode
reaksional ( kedua ) . Protokol yang digunakan untuk pewarnaan dan kuantifikasi sel
mast , jadwal untuk mengambil biopsi , jumlah pasien yang berbeda dari yang
digunakan dalam penelitian kami . Perubahan kualitatif sel mast ( perubahan bagian
) dalam reaksi adalah tujuan utama dari penyelidikan ini, jadi itu sebabnya
konfrontasi hasil kami sulit diungkapkan .
Kami menyimpulkan bahwa peningkatan relatif TMC ditemukan dalam penelitian ini
terkait dengan reaksional episode kusta . Peran nyata dari subset sel mast kulit
dalam mekanisme reaksi kusta utama harus dijelaskan. Perbandingan lain yang
terlihat yang menunjukkan tidak ada perbedaan statistik signifikan ( jumlah total sel
mast dalam kelompok reaksional dan pasca - reaksional ) membutuhkan jumlah
yang lebih tinggi dari pasien untuk mencapai kesimpulan yang pasti . perbedaan
dalam numerik beberapa struktur neuropeptida - immuno- reaktif yang terkait
dengan reaksional episodes tidak dapat dideteksi dengan metode imunohistokimia
saat dikerjakan.