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Elle peut tre considre comme une base indispensable pour assimiler des donnes plus
approfondies prsentes en cours ou procder des recherches bibliographiques personnelles
dans le cadre des travaux dirigs.
Cette articulation du cours est complte par un fascicule de figures qui pour le moment nest
pas disponible en version lectronique mais sera communiqu ds le commencement du
module aux tudiants.
II A - LA CROISSANCE :
II-A3-Mesure de la croissance :
II-A3- a-La croissance de lorganisme ou dun organe :
II-A3- b- Mesure des composantes individuelles de la croissance sur l organe
donn
IIIF - LETHYLENE
IIIF a- Dcouverte du rle hormonal :
IIIFb Production par la plante :
IIIFc Voies de biosynthse et rgulation de la synthse :
IIIFd Effets physiologiques :
IIIFe Mcanismes daction de lthylne :
IIIFf Applications biotechnologiques :
IVD-LES PHOTOTROPINES :
VI A PHYSIOLOGIE DE LA GERMINATION :
VI-A1- Introduction Problme de terminologie concernant la germination :
VI-A2- Conditions de formation et viabilit des graines :
VI-A3- Aspects biochimiques de la germination
VI-A4- Aspects Physiologiques de la germination :
VI-A5- Lindustrie des semences en France :
VI-A6- La graine organe cible pour les transformations gntiques :
Ce cours porte sur les mcanismes et les facteurs influenant le dveloppement des vgtaux,
lacquisition de leur taille, de leur forme et de leurs fonctions.
Notre anthropomorphisme conduit souvent considrer ces problmes comme secondaires.
Cela se traduit par leffort de recherche consacr aux organismes animaux qui est 10 20 fois
plus lev que celui consacr aux plantes. Il est vrai que le dbouch dans le cas de la biologie
animale est la sant et la longvit humaine.
Pourtant les plantes, producteurs primaires dans la biosphre, sont la source directement ou
indirectement de nos aliments, matriaux, sources dnergie, substances thrapeutiques et sont
indispensable au fonctionnement des cosystmes.
Toutes ces proprits sont lies lautotrophie des vgtaux par rapport au carbone travers
la photosynthse, lmission doxygne qui en rsulte et lextraordinaire potentiel de
synthse chimique des plantes conduisant des molcules trs diversifies.
Lvolution qui a conduit aux 240 000 espces de plantes fleurs actuellement recenses,
sest accompagn de diffrentes stratgies adaptatives aux plans morphologiques et
biochimiques et aux plans de tolrance ou de lutte contre les stress biotiques et abiotiques.
Ces stratgies trs efficaces indispensables pour un organisme immobile comme la plante sont
de plus en plus dcryptes dans le cadre de ce quon appelle parfois lcologie biochimique
pour ce qui est des interactions avec les facteurs biotiques.
Ces aspects adaptatifs peuvent tre illustrs ici de faon simple 2 niveaux
Toutes ces adaptations font des plantes terrestres un grand succs volutif puisquelles ont
colonis toutes les latitudes sous tous les climats.
Dans ce contexte volutif il faut souligner que la photosynthse est un vnement ancien (3
milliard dannes chez les bactries procaryotes) par rapport linvasion par les plantes du
milieu terrestre 400 millions dannes.
1. les vgtaux que nous allons considrer sont des pluricellulaires donc prsentent un
fonctionnement beaucoup plus complexe que des bactries ou des unicellulaires
(relations transport entre cellules).
2. les vgtaux ont par rapport aux animaux un fonctionnement parfois plus complexes et
surtout au niveau du rle de lenvironnement sur la physiologie. Lintgration des
fluctuations de lenvironnement reprsente ainsi une dimension supplmentaire
particulirement complexe.
3. leffort de recherche sur le fonctionnement des vgtaux est rcent et quantitativement
est beaucoup moins important que celui consacr ltude du fonctionnement des
animaux comme cela a t dit plus haut.
lamlioration gntique
les engrais
les pesticides
Dfinitions
En effet lorsque lon examine un organisme vgtal en fonction du temps on peut observer
des diffrences chaque examen.
En considrant uniquement les variations irrversibles (une plante peut passer dun tat de
fltrissement un tat turgescent il sagit alors dune modification rversible), celles-ci
peuvent tre dordre quantitatif. Elles correspondent alors la croissance. Une tige pourra tre
plus haute, un tronc plus pais, etc On dfinit la croissance dun organisme comme
laugmentation irrversible de ses dimensions (hauteur, diamtre, longueur) ou dune
grandeur lie une de ses dimensions (masse, volume, surface). Grossirement la
croissance est un accroissement de taille il sagit dune variation toujours mesurable.
Les modifications observes peuvent galement tre dordre qualitatif on parle alors de
diffrenciation. Ces modifications se traduisent par lacquisition de proprits nouvelles
morphologiques ou fonctionnelles lchelon cellulaire ou de lorgane qui faut parfois
franchir au vgtal une tape bien particulire de sa vie (ex : la floraison).
On regroupe sous un seul terme 2 types de phnomnes qui se droulent le plus souvent
simultanment.
Un autre terme plus rarement utilis est Morphognse (parfois synonyme de
dveloppement) qui au sens thymologique signifie acquisition de la forme. Le terme a t
souvent retenu dans lexpression photomorphognse.
Les agriculteurs, horticulteurs parlent du temps o les conditions ncessaires pour mener une
plante de graine graine. Cette ide de boucle ferme se retrouve dans la notion de cycle de
dveloppement c'est--dire la succession des diffrentes tapes de la vie dune plante qui dans
le cas le plus simple des espces monocarpiques annuelles se droule au cours dune mme
anne (quelques mois).
CHAPITRE II - LE DEVELOPPEMENT VEGETAL :
CROISSANCE ET DIFFERENCIATION
II A - LA CROISSANCE :
Les deux phnomnes ne se produisent pas dans les mmes territoires de lindividu et
interviennent simultanment ou squentiellement.
Elle comprend :
Nous parlerons ici uniquement de la cytokinse, la mitose tant classiquement bien connue.
La cytokinse suit gnralement la mitose mais dans certains cas peut tre dcale dans le
temps. On peut avoir galement plusieurs divisions du noyau sans formation de nouvelles
parois. On aboutit alors des structures coenocytiques (comme lalbumen des graines),
cependant transitoires car un cloisonnement intervient secondairement.
Le premier vnement de la cytokinse consiste en lagrgation de vsicules provenant du RE
et de lappareil de Golgi autour du reste du fuseau achromatique (le phragmoplaste) pour
constituer la plaque cellulaire qui stend de faon centrifuge ( la diffrence des animaux ou
la division cellulaire rsulte dun pincement de la cellule par un anneau contractile). Les
vsicules fusionnes vont donner les 2 membranes plasmiques des 2 cellules filles et
lextrieur vont se mettre en place les nouvelles parois et la lamelle moyenne.
Des interruptions dans la plaque cellulaire vont permettre la formation de plasmodesmes
lments de communication entre cellules. Les plasmodesmes reprsentent des structures
intressantes qui ont t bien tudies au cours des dernires annes. Le cylindre membranaire
associant 2 cellules est appel desmotubule il est en continuit avec les membranes
plasmiques et laisse passer leau et les substances dissoutes. Des tudes avec des sondes
fluorescentes non permantes travers les membranes ont montr quune limite dexclusion
de 1 Kda caractrisait les plasmodesmes. Cependant, au-del dun transport passif, un
transport actif slectif de certaines protines intervient travers le desmotubule (facteur de
transcription, protines de mouvement des virus..). En rponse certains stress (blessures) un
dpt de callose intervient pour boucher le plasmodesme et viter des fuites du contenu
cellulaire.
Par ailleurs, certaines cellules dont le fonctionnement exige un isolement et une tanchit ne
possdent pas de plasmodesmes (cas des cellules de garde des stomates qui ne communiquent
pas avec les cellules pidermiques voisines).
Enfin si pour lessentiel des plasmodesmes primaires sont mis en place au niveau de la plaque
cellulaire lors de la division cellulaire, des plasmodesmes secondaires peuvent tre forms
dans des situations particulires (greffes entre tissus).
Dune faon gnrale, la circulation de leau, des substances dissoutes et des macromolcules
se ralise chez les plantes dans deux espaces :
Les plasmodesmes sont importants car ils permettent dans un systme pluricellulaire vgtal
la transmission de mtabolites et stimulus hormonaux dune cellule une autre, le
plasmalemme procurant cependant une isolement suffisant pour assurer un devenir
relativement indpendant de chaque cellule.
Le processus de division cellulaire ne modifie pas la structure gnrale des cellules filles qui
demeurent isodiamtriques de petite taille 10-20 de ct avec un fort rapport nuclo-
cytoplasmique et une vacuole de petite taille. Aprs chaque division la taille de la cellule
saccrot pour atteindre celle de la cellule mre avec une synthse nouvelle de matriaux des
parois et du cytoplasme.
Le clivage des chromosomes sopre mais leur rpartition en deux lots quivalents est rendue
impossible par labsence de fuseau : le noyau devient polyplode. Ces agents mitoclassiques
se combinent frquemment avec la tubuline et empchent sa polymrisation.
Lutilisation de substances mitoclassiques a t envisage par les gnticiens pour crer des
races ttraplodes dintrt agricole (Betterave) ou horticole (illets).
Si on traite de jeunes bourgeons par des solutions de colchicine les mitoses en cours sont
bloques et des noyaux ttraplodes se forment. Ces noyaux peuvent se diviser normalement
aprs le traitement et sils sont nombreux dans le mristme, la tige qui est construite par la
prolifration des cellules mristmatiques peut tre entirement ttraplode.
Au niveau des techniques de culture in vitro il sagit dun moyen de passer de ltat
haplode ltat diplode : cest lhaplodiplodisation des plantes haplodes obtenues par
culture danthres ou dovules. Cette technique est utilise en pratique par les semenciers en
vue dobtenir plus rapidement des lignes pures (cf cours de Biotechnologie vgtale).
Evnements cytologiques : Le grandissement des cellules peut tre trs important. Il est par
exemple frquent quune cellule de parenchyme palissadique voit son volume multipli par
200 par rapport la cellule initiale dont elle drive.
Comme laccroissement en longueur est souvent beaucoup plus important que laccroissement
en largeur on parle souvent dlongation cellulaire (laccroissement en longueur peut tre de
100 alors que l accroissement en largeur seulement de 2 5).
La cause de ce grandissement est essentiellement une arrive importante deau dans la cellule
qui se traduit par la formation de plusieurs vacuoles qui fusionnent pour donner une grande
vacuole (80-90 % du volume de la cellule). La paroi de la cellule doit devenir suffisamment
extensible pour permettre cette entre deau qui se fait par osmose.
En dehors de cette entre deau et de cette synthse dlments des parois, il y a galement
une synthse de petites molcules pour maintenir constante la concentration en soluts des
liquides intracellulaires (acides amins, oses, sels minraux), synthse de macromolcules
constitutives du cytoplasme (protines acides ribonucliques) on constate galement une
augmentation du nombre dorganites (mitochondries, chloroplastes, dictyosomes, ribosomes).
Ainsi, mme si le cytoplasme ne constitue, gnralement pour la cellule ayant atteint sa taille
maximale, quune zone troite entre la vacuole et la paroi il y a une synthse active de
constituants cytoplasmiques au cours du grandissement cellulaire.
En opposition aux cellules animales pour lesquelles la migration des cellules aprs leur
formation est un important aspect du dveloppement, les cellules vgtales ne migrent pas et
conservent leur position relative toute leur vie.
La morphognse de la plante est donc pour une importante proportion dpendante dun
contrle spatial et temporel prcis de la division cellulaire et de lexpansion cellulaire.
II A 2 -Relations entre croissance et mtabolisme (besoin nergtiques et en
matriaux de base)
Cette nergie et ces molcules proviennent de la photosynthse pour les organes autotrophes
ou de lutilisation de rserves lors des premires phases du dveloppement (germination) ou
dun dveloppement lobscurit (rserves des tubercules, bulbes)
Les vgtaux possdent une paroi primaire prsente dans toutes les cellules et qui est la seule
concerne dans les phnomnes de croissance et une paroi secondaire qui vient sajouter
lintrieur de la prcdente la fin du grandissement de la cellule.
Toutes ces synthses exigent donc des units de base (oses, ac. amins, bases puriques et
pyrimidiques) qui proviennent de la photosynthse et de la respiration.
La croissance exige donc une fourniture dnergie importante qui est confirme par le fait que
la respiration est particulirement importante dans les tissus en croissance par longation. Par
ailleurs, la charge nergtique (paramtre utilis) pour mesurer ltat nergtique dun tissu ou
dun organe, doit dpasser une certaine valeur (80 %) pour que la croissance se produise.
II-A3-Mesure de la croissance :
Hauteur (tige)
Diamtre (tronc)
Surface (feuille)
Volume (fruit)
Masse frache ou sche
Constituant cytoplasmique comme protine
La division cellulaire peut tre apprci par numration cellulaire, aprs dissociation et
comptage des cellules :
Quantit de DNA : Une autre manire dapprcier la division cellulaire rside dans le dosage
du DNA. La quantit de DNA est en principe proportionnelle au nombre de cellules mais la
relation est en fait souvent perturbe en raison de la polyplodie de certaines cellules vgtales
(en particulier la suite du phnomne dendomitose = division des chromosomes sans
sparation en deux noyaux).
Le grandissement cellulaire :
Il peut tre apprci par des observations microscopiques ou par des mesures de volume
cellulaire : connaissant le volume total dun chantillon (fragment de tissu) et le nombre de
cellules par chantillon on peut obtenir le volume cellulaire moyen.
Les dterminations indpendantes des deux composantes de la croissance sont utilises pour
situer dans lespace et le temps les deux phnomnes mais aussi pour apprcier leffet de
traitements ou de substances chimiques (hormones) retardant de croissance sur ces
phnomnes considrs individuellement.
Chez les animaux lembryon est une version miniaturise de lorganisme adulte puisquil
possde la plupart des organes et tissus sous une forme simplifie qui subiront seulement une
augmentation de taille et une maturation lors du dveloppement post-embryonnaire.
Chez les vgtaux la morphogense se poursuit pendant toutes les phases de la vie de la plante
et lembryon trs rudimentaire ne prsage pas de la taille, forme et organisation de la plante
adulte.
Cet embryon est en fait trs comparable dune espce lautre mme si la taille finale des
individus est trs diffrente.
Le dveloppement post-embryonnaire est donc trs important chez les vgtaux, il assure la
complexification de lorganisme et se rvle flexible en fonction des conditions
denvironnement. Il dpend de petits massifs de cellules indiffrencies qui conservent une
capacit se diviser, les mristmes et qui sont responsables de la formation des cellules
lorigine de ldification de la plante adulte.
Il existe diffrents types de mristmes mais le mieux connu et le plus important est le
mristme apical caulinaire qui produit des tiges, des feuilles, contrle la disposition spatiale
des feuilles et des bourgeons sur la tige (phyllotaxie le temps qui spare lapparition de deux
feuilles successives sur la tige est le plastochrome).
Les autres mristmes qui assurent la croissance en longueur de la plante sont pour la partie
arienne les mristmes axillaire et les mristmes adventifs et pour la partie souterraine les
mristmes racinaires.
Les mristmes axillaires sont issus du mristme caulinaire et sont situs laisselle des
feuilles. Ils sont souvent au repos (dominance apicale) et constituent pour la plante une
rserve de mristmes en cas de blessure, dcapitation, du mristme apical.
Les mristmes adventifs correspondent des noformations rsultant dune phase de
ddiffrenciation puis de rediffrenciation de tissu dj diffrencis (limbe foliaire). Ils
peuvent se mettre en place spontanment sur certains tissus de plantes intactes phnomne
dpiphyllie sur les feuilles de Kalancho mais sont plus frquents en rponse des blessures
ou lors de la culture in vitro de vgtaux o ils reprsentent une voie de rgnration de tissus
dj diffrencis. On a pu induire la formation de mristme axillaire ou le phnomne
dpiphyllie par transformation gntique du tabac avec le gne IPT (synthse de
Cytokinines) ou le gne Kn1 impliqu dans le fonctionnement du mristme.
Les mristmes racinaires assurent seulement une production de nouvelles cellules et une
longation de la racine sans production de nouveaux organes la diffrence des mristmes
caulinaires. Les mristmes racinaires latraux ne sont pas issus du mristme apical racinaire
mais dune diffrenciation de tissus dj en place.
1. longues cellules lorigine des vaisseaux et des fibres du bois ce sont les
initiales fusiformes
2. cellules de type isodiamtrique lorigine des rayons ligneux (parenchyme
ligneux du bois) : initiales radiales.
Les mristmes apicaux caulinaires sont organognes ils engendrent des tiges et des feuilles
puis des fleurs lors de la transition mristme vgtatif mristme floral.
Les mristmes latraux sont seulement histognes ils produisent de nouveaux tissus.
Structure, fonctionnement, caractristiques du mristme apical caulinaire
Le mristme se situe lapex des tiges et comprend diffrents zones qui se distinguent selon
la structure des cellules et surtout leur devenir. Dune manire gnrale, les cellules
mristmatiques sont de petites tailles, cubiques, avec un fort rapport nuclo-cytoplasmique et
peu ou pas de vacuoles.
tunica pour les cellules de la couche extrieures du mristme qui se divisent de faon
perpendiculaire la surface (divisions anticlinales) de faon accrotre la surface du
mristme
corpus pour les cellules des couches intrieures du mristme qui se divisent de faon
parallle la surface (divisions priclinales)
Exemples de gne :
sautoentretenir
voluer dynamiquement mais de faon rgule avec la production de primordia
foliaire
Au total on doit souligner que chez la plante la croissance est continue grce au
fonctionnement des mristmes (croissance indtermine). Elle ne sarrte quavec la
floraison chez les monocarpiques ou chez les espces prennes ligneuses la mort de
lindividu aprs des dizaines ou des centaines dannes.
Elongation : les zones dlongation sont souvent nettement diffrencies des zones de
multiplication. Cest le cas classique de la croissance des racines pour lesquelles la zone
dlongation sous mristmatique est facilement reconnaissable. Chez les tiges llongation se
fait au niveau des entre-nuds (nud : niveau dinsertion des feuilles sur la tige).
En revanche, chez les feuilles et les fruits les zones dauxsis et de mrsis sont beaucoup
plus mal dlimites et leur localisation varie avec les espces.
Les diffrentes mthodes de mesure de la croissance que nous avons examines ont permis
daccumuler de nombreuses informations sur la cintique de la croissance et les vitesses de
croissance.
Quelle que soit la mthode et lorgane tudi les courbes donnant lvolution du critre retenu
(masse, longueur, etc) en fonction du temps ont une grande analogie. Ce sont des courbes
dont lallure gnrale est toujours une sigmode (courbe en S).
La vitesse de croissance dune espce est bien sr dpendante des conditions nutritives,
climatiques mais dans des conditions comparables les diffrentes espces prsentent des
vitesses de croissance plus ou moins rapides
Bambou 60 cm/24h
Mas 13 cm/24h
Ces valeurs sont des valeurs extrmes mais de nombreuses espces ont pendant la priode
active de croissance des vitesses dallongement des tiges de 1 4 cm/24h.
Ces caractristiques de croissance sont lies des potentiels gntiques diffrents, cependant
dune manire gnrale, on a pu montrer une relation entre vitesse de croissance et efficacit
de la photosynthse.
Feuilles caduques
Fraxinus excelsior 33 300
Feuilles persistantes
Pinus abies 20 58
On peut dduire de ce tableau que les herbaces ont gnralement des vitesses relatives de
croissance plus leves que les espces arborescentes et les arbres feuilles caduques un
meilleur rendement que les rsineux. Parmi les herbaces les plantes les plus performantes sur
le plan photosynthtique ont la croissance la plus rapide. Ces comparaisons entre espces C3
et C4 sont valables dans des conditions de culture identiques, il faut cependant penser que la
croissance vgtale est comme dautres phnomnes physiologiques soumise la loi du
facteur limitant (eau, nutrition minrale).
Lorsque lon examine la productivit des espces cultives deux cas sont considrer :
Les vgtaux dont on exploite lappareil vgtatif
Les vgtaux dont on exploite lappareil reproducteur (graines, fruits) en fait les
plus nombreux.
Dans le premier cas sylviculture, plantes annuelles : tabac, potagresil faut donc privilgier
la croissance de lappareil vgtatif et rechercher des espces croissance rapide (Peuplier,
Eucalyptus).
Dans le 2me cas un aspect trs important rside dans la distribution des assimilats selon le
principe de la relation organe source (feuille) organe puit (fruits, graines), cest dire un
transfert des produits de la photosynthse et de leurs drivs des feuilles aux parties rcoltes.
(1) index de rcolte =poids sec grains / poids sec plante entire
(2) taux dassimilation = mg CO2 fixe / dm / heure
Avec une meilleure efficacit photosynthtique Triticum boeticum est moins productif que
Triticum aestivum une varit cultive, car ce dernier prsente une meilleure capacit
orienter les photosynthtats vers les graines.
Les paramtres de slection pourront donc porter sur la distribution des assimilats.
Par ailleurs si dans les cas prcdents une croissance maximale est souhaite dans dautres
cest au contraire une croissance lente qui est recherche.
La croissance des plantes cultives est lie la constitution gntique des espces et au
conditions de milieu que vont conditionner la vitesse de croissance potentielle.
Il faut ici insister sur le fait que pour une constitution gntique donne la nutrition carbone
est rarement limitante mais la nutrition minrale (azote, lments minraux) et lalimentation
en eau sont plus souvent les facteurs limitants.
Des recherches importantes ont ports ces dernires annes sur des associations symbiotiques
entre plantes et microorganismes qui naturellement facilitent la nutrition minrale des plantes,
il sagit des associations :
Harmonieuse
Coordonne
Reproductible
Harmonieuse : une plante est gnralement quilibre dans ses proportions , la taille relative
des diffrents organes est proportionne le rapport surface arienne / surfaces parties
souterraine demeure relativement constant.
Reproductible : pour une espce donne, si les conditions sont identiques les dimensions de
lindividu arriv maturit sont comparables, les priodes de floraison ou de fructification se
retrouvent des poques comparables.
Dans le cas du dveloppement vgtal lenvironnement a un poids particulier, une trs forte
influence sur le dveloppement. Il sagit des contrle externes.
Contrles externes
Les facteurs de lenvironnement peuvent agir selon des effets que nous qualifierons de
trophiques en conditionnant lintensit du mtabolisme cellulaire (T, lumire,etc), parfois
selon des effets mcaniques (exemple vent).
Et enfin selon une 3me catgorie deffets beaucoup plus subtile que nous appellerons effets
signaux, une modification du milieu extrieur correspondant pour la plante un signal qui va
influencer son dveloppement.
Ces effets signaux peuvent faire intervenir les hormones comme intermdiaires ou agir aprs
avoir t enregistr au niveau de la plante par des rcepteurs capable de percevoir ces signaux
et de les transformer en information utilisable par la plante.
Les photorcepteurs comme le phytochrome reprsentent un exemple typique de perception
de lenvironnement lumineux et de contrle de dveloppement.
Les contrles internes :
Ils sont directement lis la constitution gntique des individus, leur gnome qui contient
une information de base (protines enzymes facteur de transcription) et une information
dorganisation susceptibles de percevoir, dintgrer les signaux externes et de coordonner
leurs effets.
La notion dhormone (du grec hormao : exciter le terme fait son apparition en 1905)
sapplique des substances organiques biologiquement actives et fait intervenir 3 ides
essentielles :
Hormones vgtales : composs organiques synthtis par la plante qui de trs faibles
concentrations ont une action sur le mtabolisme et le dveloppement gnralement dans des
tissus diffrents du lieu de production.
Les hormones vgtales comme les hormones animales sont impliques dans les
communications intercellulaires.
Certaines substances qui ont des effets analogues ceux des hormones mais qui ne sont pas
synthtises par les vgtaux sont appeles rgulateurs de croissance. Ce sont gnralement
des substances chimiques de synthse qui sont abondamment utilises en agriculture et
horticulture.
Les hormones vgtales tout en prsentant un certain nombre de points communs avec les
hormones animales (perception, voies de transduction) sen distinguent sous diffrents
aspects.
Ce dernier point met laccent sur la difficult des tudes dhormonologie vgtale. Une
hormone nagit gnralement pas seule sur un phnomne mais en prsence dautres hormone
qui agissent dans le mme sens ou en sens contraire.
La vritable mise en vidence dune hormone vgtale remonte 1926 il sagit des travaux de
WENT sur lauxine. Jusquen 1950 on considra que lauxine reprsentait la seule
phytohormone mais aprs cette date dautres hormones vgtales ont t dcouvertes, dont
limportance sest confirme avec les annes. Chronologiquement il sagit des gibberellines
(1950), des cytokinines (1955), de lthylne (1960), de lacide abcissique (1965) et des
brassinostrodes (1995).
A lheure actuelle on connat donc 6 types dhormones vgtales pour lesquels on peut
distinguer :
- Auxines
- Gibberellines
- Cytokinines
- Brassinostrodes
pour ces hormones on observe des familles de molcules actives
- lthylne
- lacide abcissique
dans ce cas une seule structure active a t identifie.
Dautres molcules rle de mdiateur chimiques chez les vgtaux comme les
polyamines, le jasmonate, le salicylate, les oligosaccharides nont pas encore obtenu le
statut dhormone vgtale vraie.
a Approches biochimiques
Elles sont utilises pour le dosage des hormones, la mesure dactivit des
enzymes des voies de synthse, caractrisation biochimique des rcepteurs
Examen du cas particulier du dosage des hormones. Historiquement 3
mthodes ont t retenues
c Approche gntique
Caractrisation de mutants de sensibilit aux hormone
de mutants de production dhormones
d Approche pharmacologique
Les seules molcules qui prsentent assez de variations dans leur composition et leur structure
pour rpondre ces exigences de spcificit sont les protines il est donc admis que les
rcepteurs hormonaux sont gnralement des protines .
La liaison hormone-rcepteur activerait le rcepteur de faon ce quil puisse assurer la
transduction du signal hormonal.
Cette premire tape est suivie dune srie dvnements molculaires, la chane de
transduction, qui aboutit finalement des modifications dcisionnelles
- Transcription de nouveaux gnes
- Degr douverture de canaux ioniques
- etc
Le rcepteur (son abondance) peut se rvler un facteur limitant dans laction hormonale. On
a parl dtat de comptence dun tissu selon la plus ou moins grande abondance de
rcepteurs.
Enfin tant donn les effets pliotropiques des hormones vgtales (effets diversifis) il a t
envisag une pluralit de rcepteurs affects des effets cibles spcifiques ( ex : cas de
lthylne).
Les stomates jouent le rle fondamental dans la rgulation des changes gazeux et des
changes deau entre la plante et son environnement. Il sagit dun ensemble cellulaire,
lappareil stomatique (cellules de garde pore stomatique souvent entour de cellules
pidermiques diffrentes par leur taille et leur forme des autres cellules pidermiques
voisines- les cellules subsidiaires).
Ces stomates peuvent tre ouverts ou ferms et dans ce dernier cas les changes gazeux et
lvapotranspiration sont alors trs rduits. Le mcanisme de fermeture des stomates repose
sur une fuite dagents osmotiques au niveau des cellules de garde les faisant passer dun tat
turgescent un tat moins turgescent ou semi-plasmolys dterminant ainsi le resserrement du
pore stomatique.
Lors du stress hydrique les stomates se ferment en rponse lABA, un stimulus hormonal,
dont la concentration augmente dans les feuilles (suppos tre libr ou synthtis de novo
au niveau du msophylle foliaire) et plus spcifiquement au niveau des cellules de garde.
LABA entrane une fuite de K+ au niveau des cellules de garde.
Le gros problme de ltude des interactions hormone / rcepteur rside dans le caractre
labile des liaisons chimiques faibles qui stablissent entre les 2 partenaires. Une approche
pour rsoudre ce problme rside dans le marquage par photoaffinit.
On prpare des protoplastes dpiderme de fve en pelant les pidermes de Fve et en les
mettant en contact avec des enzymes de digestion des parois ce qui libre le protoplaste
entour par la membrane plasmique.
Par un procd de centrifugation diffrentielle on peut mme obtenir spcifiquement des
protoplastes de cellules de garde.
Les protoplastes sont ensuite incubs avec de lABA triti H-cis(S)-ABA. La forme active de
lABA sur la fermeture des stomates..
On irradie la suspension de manire provoquer le marquage par photoaffinit dventuels
sites rcepteurs.
Des contrles sont effectus
Linterprtation des diffrents rsultats montre quil existe une fixation spcifique et
aspcifique de lABA physiologiquement actif au niveau des protoplastes de cellules de
garde.
Cette fixation est moins importante au niveau des protoplastes de msophylle foliaire.
La fixation de lhormone radioactive sur son site de fixation obit une cintique de
saturation et peut tre dplace par de lhormone froide non radioactive de faon trs
spcifique (isomre physiologiquement actif seul efficace pour le dplacement).
Des traitements mnags des protoplastes des cellules de garde par une protase, la trypsine
supprime compltement la fixation de lABA en conservant lintgrit du protoplaste. Les
sites de fixation seraient donc des protines. Ces expriences ne dmontrent cependant pas le
caractre fonctionnel du rcepteur, la protine ayant lie lABA pouvant tre un transporteur
ou une enzyme de dgradation.
Le rcepteur de lthylne est un des rcepteurs les mieux caractriss au plan molculaire et
gntique. Sa caractrisation repose sur ltude de mutants de sensibilit lthylne dont le
mutant ETR1 dArabidopsis qui ne prsente plus le phnomne de triple rponse lors
dapplication dthylne.
Le clonage positionnel du gne mut et lanalyse du produit du gne a montr une analogie
marque avec une famille de protines senseurs de lenvironnement chez les bactries : les
systmes deux composantes constitus dun domaine de perception du signal et de
transmission du signal : une histidine Kinase et dun domaine receveur : le rgulateur de
rponse.
La perception du signal entrane gnralement une autophosphorylation dans un domaine
conserv de lhistidine Kinase la phosphate tant ensuite transfr un rsidu aspartate du
receveur.
Ce type de systme double composante se retrouve chez les bactries dans la perception de
la lumire, de loxygne et chez les plantes a t aussi impliqu dans la rponse la lumire et
aux cytokinines.
Dans ces diffrents exemples on retrouve le domaine conserv des histidines Kinases
HNGFG. Dautres caractristiques communes entre le gne ETR1 et des gnes bactriens
suggre une origine volutive partir des bactries.
Le gne ETR 1 a t exprim dans des levures ce qui leur confre laptitude fixer lthylne.
Il sagit donc bien dun rcepteur dthylne car on associe ici les preuves gntiques et
biochimiques.
Un ion cuivre est ncessaire pour la fixation de lthylne sur le rcepteur dArabidopsis et le
cuivre est co-purifi avec la protine rcepteur. Une cystine en position 65 est par ailleurs
indispensable pour linteraction entre le cuivre et la protine. Au total le rcepteur qui est un
dimre interagit avec lthylne ce qui rsulte en un changement conformationnel de site de
liaison propag en suite au domaine transmetteur.
Par analyse du gnome, plusieurs gnes ETR ont t caractriss chez Arabidopsis (au moins
une famille de 5 membres) qui comprennent des domaines communs mais aussi des
spcificits.
Ceci permet de les classer en 2 sous familles ETR1 et ERS1 qui ont en commun le domaine
conserv de lhistidine Kinase, ETR2, EIN4, ERS2 qui ne lont pas.
Ces diffrents gnes pourraient coder des rcepteurs affects des rponses spcifiques ou
des tissus spcifiques.
Il faut noter cependant quil nexiste quune redondance fonctionnelle partielle entre les
diffrents gnes de rcepteurs car les mutants insensibles lthylne au niveau de la triple
rponse nauraient pu sinon tre obtenus.
Went 1926 rcupration par diffusion dune substance active sur la croissance
appele auxine, dauxein = crotre. Mise au point dun test biologique
permettant dapprcier les teneurs en substance active
Nous utilisons le terme auxine au pluriel car au-del de lidentification chimique de lacide
indolactique dautres substances se sont rvles actives sur les tests biologiques initialement
dfinis pour quantifier lAIA. Ces tests ne sont pas en fait absolument spcifiques de lAIA
mais dune famille de compos action biologique commune : les auxines.
Il faut cependant noter que la plupart de ces substances sont impliques dans les voies de
synthse de lAIA, en tant quintermdiaires, et il nest pas clairement tabli si elles ont une
action auxinique par elles mmes ou si leur effet rsulte de leur conversion rapide en AIA lors
du test biologique (effet de prcurseurs).
Dautres substances non indoliques comme lacide phnylactique ont une action auxinique
cependant plus faible, mme concentration, que lAIA.
Auxines de synthse : il sagit de molcules qui miment les effets des auxines naturelles. Ce
sont gnralement des structures de type indolique ou bien :
de type phnoxycarboxylique
de type naphtalne actique
de type benzoque
Les plus connues de ces molcules sont le NAA et le 2-4 dichlorophnoxyactique qui de
fortes concentrations sont utilises comme herbicide (effet hyperauxinique toxique car la
molcule qui nest pas dgrade saccumule).
Des tudes importantes ont t ralises dans une optique relation structure-fonction pour
dgager des points communs entre toutes ces structures actives.
La plupart de ces molcules ont un noyau insatur et un groupement carboxylique. Une
thorie intressante a t propose par Thimann (1969). Elle fait apparatre des analogies
marques dans la rpartition des charges dans lespace (charge positive 5,5 de la charge
ngative porte par le carboxyle).
Initialement caractrise dans les coloptiles de gramines, lAIA et les autres auxines
semblent prsentes chez toutes les plantes vasculaires. Chez les formes vgtales infrieures
(Bryophytes, algues, champignons) la rpartition et laction biologique sont trs limites.
LAIA est galement produit par les bactries Agrobacterium tumefaciens, Pseudomonas
syringae mais par des voies de synthse diffrentes. Le rle de la molcule pour la bactrie
nest pas clair mais elle intervient dans linteraction plante/bactrie.
Chez les plantes les sites de synthse maximum sont souvent les sites daccumulation (apex,
jeunes feuilles) mais il faut aussi noter comme nous le verrons plus loin que lAIA un
transport polaris qui conduit sa migration de lapex vers la base.
Dune manire gnrale les racines sont plus pauvres en auxine que les parties ariennes (les
concentrations dans les tissus vgtaux varient de 10 300 g/kg matriel frais).
La fig. ( ) donne une volution des teneurs en diffrentes auxines dans les diffrents rangs
foliaires de plantes de tabac la suite dune sparation des molcules par chromatographie en
phase gazeuse.
Lauxine comme les autres hormones doit pour jouer son rle de messager chimique ne pas
demeurer une concentration constante dans les tissus mais voir ses teneurs fluctuer. Cest la
vague auxinique qui va dterminer une rponse dans le temps, adapte au contexte de
morphogense et de la diffrenciation.
Le taux dauxine active dans un tissu qui va contrler lintensit des rponses physiologiques,
en parallle avec la sensibilit de ce tissu lauxine peut tre potentiellement rgul par
diffrents facteurs qui relvent du mtabolisme de lauxine ou de son transport.
+ Biosynthse
+ Dgradation
+ Inactivation rversible
+ Transport
+ Compartimentation
Ces mcanismes qui sont particulirement bien connus dans le cas de l AIA peuvent
intervenir pour lensemble des hormones nous les tudierons particulirement dans le cas de
lAIA.
La voie de lindoleactonitrile
La voie de la tryptamine
La voie de lacide indole pyruvique
Le transport :
En effet il sagit dun transport polaris de lapex vers la base. Des expriences simples qui
sont reprsentes sur le schma ( ) ont permis de confirmer ce phnomne. Ce transport est
donc suppose tre unidirectionnel.
Par ailleurs il sagit dun transport actif de cellules cellules stimul par lATP, dpendant de
la T, de la prsence dO2 et sensible aux inhibiteurs mtaboliques (cyanure, azide de
sodium).
La thorie implique en outre que la portion basale du plasmalemme est plus permable
lanion auxine ou possde une plus grande proportion de transporteurs defflux que la partie
apicale.
En fonction de ces diffrents lments on peut concevoir le transport polaris de lAIA.
La mise en place de cet axe est commune aux plantes et aux animaux. La premire tape chez
les plantes consiste en la division du zygote en deux cellules distinctes. Chez Arabidopsis par
exemple la cellule apicale est plus petite que la cellule basale. La cellule apicale se divise
ensuite verticalement et la cellule basale continue se diviser horizontalement pour produire
le suspenseur.
Il a t montr que dans les premiers stades la cellule basale transporte lauxine et que la
cellule apicale rpond lauxine.
Cette complmentarit est lie lintervention dune protine implique dans lefflux de
lauxine lapex de la cellule basale : PIN 7.
PIN 7 est localis par immunoraction dans la cellule basale immdiatement aprs la division
du zygote dans le systme endomembranaire et sur la membrane plasmatique linterface
avec la cellule apicale.
Jusquau stade 32 cellules PIN 7 continue tre localis au sommet du suspenseur
linterface avec lembryon en dveloppement.
Il existe un redondance entre les diffrents gnes PIN et des mutants simples naboutissent
pas 1 phnotype particulier, en revanche des quadruples mutants (pin1, pin3, pin4, pin7)
montrent des dfauts profonds dans ltablissement dune polarit apico-basale.
Inactivation :
LAIA peut tre converti en formes conjugues inactives par associations avec des
mtabolites prsents dans les cellules.
Ces formes conjugues peuvent tre mise en vidence la suite de lapport dAIA radioactif
une plante : 50 % de lAIA est parfois retrouv sous forme conjugue aprs 3 heures. On peut
galement montrer par identification et dosage que lAIA conjugu reprsente 50 90 % de
lAIA total (dans les feuilles de pois de 2 semaines). Ces formes conjugues sont souvent
prsentes des concentrations suprieures aux formes libres et elles sont trs rpandues dans
les graines, o elles semblent participer la libration dAIA libre (par hydrolyse de liaisons
esters alors que les liaisons peptidiques sont stables).
Ainsi chez les semences de mas les formes conjugues diminuent lors de la germination alors
que lAIA libre augmente, on caractrise la prsence dune enzyme qui hydrolyse lAIA
inositol.
Ces formes conjugues peuvent contribuer maintenir une certaine homostasie des teneurs
en AIA. Ainsi chez les mutants tryp 5-1 chez Arabidopsis lanthramilate synthase est
insensible au tryptophane son effecteur allostrique normal. On observe ainsi une forte
augmentation des teneurs en tryptophane mais une stabilit de lAIA libre avec une
augmentation des teneurs en AIA conjugues.
La dgradation de lauxine :
LAIA peut tre dgrad par des oxydase de type proxydase (lAIA oxydase) selon
cependant un mcanisme atypique des proxydases ne consommant pas dH2O2.
Nous avons dis prcdemment quune mme hormone avait des effets multiples sur le
dveloppement des plantes. On parle deffets pliotropiques. Ces rponses multiples
dpendent du tissu tudi, du stade de dveloppement et correspondent ce que nous avons
appel un certain tat de comptence des tissus li la proportion de rcepteurs et leur
nature.
Cette multiplicit daction est particulirement bien illustre dans le cas de lauxine qui
intervient sur :
Division cambium
Elongation action typique sur les coloptiles
Diffrenciation action rhyzogne classique en interaction
avec les cytokinines
Leffet sur le grandissement cellulaire est classique. Il est noter :
1. que gnralement lauxine est sans effet lorsquon lapporte sur des apex de plantes
intactes. La plante disposant alors de ses centres producteurs dauxines aurait une
concentration optimale et un apport exogne est sans influence. En revanche lauxine
est active sur les tiges dont les apex ont t dcapits ou sur des parties isoles
dorganes.
2. que la sensibilit des diffrents organes varie considrablement
tiges 10 M
racines 10 M
Au-del de ces concentrations, lauxine exerce un effet inhibiteur sur la croissance effet
hyperauxinique.
Lauxine intervient dans des phnomnes plus complexes lchelle de la plante entire
faisant intervenir des interactions entre diffrentes hormones et dont nous reparlerons : rle
dans la dominance apicale, labscission ou le retard de snescence.
Nous dtaillerons ici le problme de la croissance des fruits. La formation des fruits
correspond chez le vgtal une priode de croissance souvent rapide par division et
longation cellulaire. Dune manire gnrale les fruits rsultent de la croissance des parois de
lovaire de la fleur ou du rceptacle floral qui se produit ds la pollinisation et se poursuit la
fcondation et pendant la formation des graines (lovaire est une partie de la fleur femelle qui
renferme les ovules o se produira la double fcondation conduisant lembryon et au tissu
de rserve).
Nous avons dit que la croissance du fruit pouvait commencer ds la pollinisation, ceci se
produit par exemple chez lOrchide et chez cette espce on a pu montrer que des extraits de
pollen pouvaient dterminer la croissance des parois de lovaire. Ces extraits contenaient de
lAIA et le pollen est ainsi une source dauxine. Dune manire plus gnrale, il semble donc
trs probable que ce soit lAIA qui, produit par le pollen ou les graines en formation, soit
responsable de la croissance du fruit. Si on limine les graine de certains fruits en formation
(fraise) on arrte la croissance du fruit. Par ailleurs, on a pu galement montrer que lembryon
et lalbumen tissu de rserve de la graine produisaient de lAIA au cours de leur formation.
On peut ainsi observer lobtention de fruits sans pollinisation ni fcondation par simple
application dAIA sur la fleur femelle (Tomates, Figue), on obtient alors des fruits sans
graines : parthnocarpiques.
On peut galement citer les expriences de NITSCH sur la Fraise ou les aknes sont la source
dauxine, leur ablation sur le jeune fruit empche son dveloppement normal. La forme du
fruit peut ainsi tre affecte par llimination spcifique de certains aknes mais laddition
dauxine peut remplacer les aknes manquants. La production naturelle de fruits sans ppins
(agrumes) correspond dautres situations ou certains mutants ont t slectionns.
De nombreux arguments sont en faveur dun rle de lauxine sur le grandissement cellulaire
via une action sur lextensibilit de la paroi.
1. rle du pH
Les tudes des facteurs capables de remanier les parois ont montr que llongation de
coloptiles sous contrle de lauxine tait associe une acidification du milieu dans lequel
tait effectue lexprience. Il a ensuite t observ que la mme longation tait obtenue
par lincubation des coloptiles dans une solution acide. Rayle et coll. ont alors propos
que les chantillons traits lauxine acidifient leur parois et que cette acidification (pH=5,5)
pourrait permettre lactivation denzymes capables de remanier la paroi (Rayle and Cleland,
1992). Cest lhypothse de la croissance acide.
Ces rsultats suggrent fortement que lauxine augmenterait lactivit ATP-ase via une action
sur la transcription, la traduction ou le transport de la protine vers la membrane plasmatique.
Sans rappeler la structure et la composition chimique de la paroi en dtail on peut prciser que
la paroi I est un composite form de plusieurs polymres associs par diffrents types de
liaison
- cellulose
- hmicellulose
- matires pectiques
- protines
Ce sont surtout les interactions entre cellulose et hmicelluloses (2 composants majeurs) par
lintermdiaire de liaisons H qui ont t considrs.
Ces liaisons H stabilisent le composite et leur suppression le fragilise en le rendant plus
mallable, plus extensible.
La paroi contient de nombreuses enzymes hydrolytiques (actives sur les polysaccharides, Fry,
1995) : glycosylhydrolases catalysant soit des hydrolyses au milieu des chanes
(endoglycosylases comme les -,4- endoglucanases) ou leur extrmits (exoglycosylases
comme les xylosidases). Par ailleurs, des transglycosylases spcifiques des xyloglucanes
(xyloglucane transglycosylases hydrolases ou XTH, anciennement XET, voir 3) ont t
identifies. Nanmoins, aucune de ces enzymes napparat plus active pH acide, et aucune
ninduit une longation in vitro quel que soit le pH.
Par contre, la purification dextraits paritaux dhydrocotyle de concombre a permis
didentifier des protines, appeles Ex29 et Ex30 pour expansines, sans activit catalytique
dtectable, capables dinduire une importante longation cellulaire pH acide
(McQueen-Mason et al., 1992). Le clonage des gnes correspondant a conduit
lidentification dune famille multignique subdivise en expansines et expansines
conserves chez les Dicotyldones et les Monocotyldones (Cosgrove, 1999). Rcemment,
grce au squenage complet du gnome dArabidopsis thaliana, une nouvelle classe est
galement distingue : les expansines ou expansin-like proteins (Li et al., 2002).
Lensemble des expansines comporte, dune part une domaine similaire au domaine
catalytique dendoglucanases mais sans acides amins catalytiques, dautre par un domaine
similaire aux CDB (Cellulose Binding Domains) de cellulases microbiennes (Figure).
Les XTH sont exprims dans des tissus en longation et induites par des traitements
inducteurs de llongation (auxine).
Par ailleurs, des fragments courts de xyloglucane (oligosaccharides) induisent une longation
cellulaire mais les longs fragments linhibent. Les rsultats suggrent que le mtabolisme des
xyloglucanes contrle llongation.
33 gnes de XTH ont t identifies chez Arabidopsis associs des profils dexpression
tissus spcifiques mais aussi des spcificits de substrats.
Elles sont incapable dinduire llongation in vitro mais des arguments plaident en faveur de
leur intervention comme linduction par IAA de la glucanase CEL 7 chez la Tomate.
Des protines de liaisons (Auxin binding proteins : ABP) pour lauxine ont t caractriss
initialement par des techniques chimiques du type photoaffinit.
Une difficult dinterprtation a port sur la localisation majoritaire dABP sur le reticulum
endoplasmique, seule une faible proportion dABP tant situ au niveau de la membrane
plasmique (en contradiction avec la localisation thorique des rcepteurs sur la M. P. et sur
leffet biologique dauxines non permantes).
Ces diffrents rsultats ne prjugent pas de lexistence dautres rcepteurs au-del dABP1.
Limpact de lauxine sur le grandissement cellulaire via une acidification de la paroi nest
quune des rponses biologiques lAIA. Cette action biochimique sur une ATPase
saccompagne par ailleurs dun effet positif sur lexpression de gnes dans le cas du
grandissement cellulaire ou dautres phnomnes. En clair, lapport dAIA entrane
laugmentation dexpression dun grand nombre de gnes (le plus souvent dans le sens dune
surexpression). Bien quon connaisse mal la chane de transduction du signal auxine on a
approfondi au cours des dernires annes certains des mcanismes impliqus au niveau du
contrle de la transcription par lAIA.
Au-del, des facteurs de transcription capables de reconnatre les squences AUX-RE ont t
caractriss : les ARF1 (auxine response factor) et 23 gnes ARF1 ont t caractriss chez
A. thaliana (pour des protines de 67 129 Kd).
Cette multiplicit de facteur de transcription qui peut correspondre des voies de transduction
spcifiques se complique encore par lintervention dune autre classe de gnes la famille
AUX/AIA pour laquelle on a dmontr lexistence de 25 gnes. Ces gnes rpondent trs
rapidement lauxine et comportent dans leur squence des lments trs comparables la
squence de gnes ARF1 (dans la partie C terminale).
Cette identit de domaine (domaine III et IV) facilite linteraction des protines AUX/AIA et
ARF1 et cette liaison avec ARF1 module sa capacit dactivation de la transcription. Les
protines AUX/AIA ont des demi-vies trs courtes de 8 10 minutes et leur dgradation
contrle par le systme protasome ubiquitine dpendant est stimule par lAIA.
Une complexit du systme rside dans le fait que selon les situations le complexe
AUX/AIA/ARF1 stimule ou inhibe la transcription (le cas plus frquent est linhibition).
Des mutants manquant de certains facteurs ARF prsentent des anomalies de dveloppement
ainsi que certains mutants des gnes AUX/AIA. Rcemment un travail sur la tomate
impliquant la sous expression selon la stratgie anti-sens dun gne AUX/AIA, le gne DR4, a
montr lapparition de phnotypes caractristiques dune hyperauxinie telle que par exemple
lapparition de fruits parthnocarpiques, AUX/AIA serait dans ce cas un rgulateur ngatif et
dune manire gnrale le systme AUX/AIA pourrait reprsenter un systme de rtrocontrle
par lAIA des phnomnes induits par lAIA (empchant que la machine semballe ).
On a ici une dmonstration de la complexit des facteurs qui interviennent dans la rgulation
de la nature et de lintensit des mcanismes transcriptionnels contrls par lAIA.
Dans le cas des gnes AUX/AIA la teneur en protines correspondantes rsulte la fois de
lintensit de la transcription et de la vitesse de dgradation, toutes deux contrles par lAIA.
Ds le dbut du sicle, des fermiers japonais avaient constat que certains plants de riz taient
atteints de gigantisme. Ces plants cependant ne fructifiaient pas et ne prsentaient donc pas
dintrt pour la production. Il fut tabli que cette anomalie dans la croissance rsultait de
linfection par un Ascomycte parasite appel Gibberella fujikuroi (KUROSAWA, 1926) ou
Fusarium moniliforme quand le champignon est cultiv in vitro = un extrait de son milieu de
culture provoque les mmes symptmes dlongation, et vers 1938 on arriva isoler de ces
milieux de culture un mlange de substances actives appeles gibbrellines.
Ces travaux ne furent pendant longtemps connus quau Japon et ce nest quaprs la deuxime
guerre mondiale que des recherches furent entreprises dans le monde occidental.
Vers 1956, partir dune souche de Gibberella ne produisant quune seule gibbrelline on put
isoler et caractriser chimiquement lacide gibbrellique ou GA3 (travaux de CROSS).
Pendant ce temps, les physiologistes dmontraient les effets spectaculaires des gibbrellines
isoles des filtrats de cultures de champignons sur la croissance de vgtaux ( trs faibles
doses ces substances stimulent en particulier la croissance des espces naines : haricot, pois,
mas) qui sont souvent des mutants de production de GA. Une dose de 0,1 g par plant permet
de doubler la hauteur de pois nains.
Paralllement on dmontrait la prsence des gibbrellines dans les tissus vgtaux (non
infects) (PHINNEY et WEST en 1956 chez le concombre).
Avec la mise en vidence de la rpartition gnrale des gibbrellines il apparaissait donc que
lon tait en prsence dun nouveau groupe dhormones vgtales.
Nous avons parl de ces substances au pluriel car la caractrisation de la premire gibbrelline
GA3 a t suivie de la mise en vidence de nombreuses autres gibbrellines dans les tissus
vgtaux puisquon connat plus dune centaine de gibbrellines (130) lheure actuelle
caractrises chez les vgtaux suprieurs et les champignons (certaines tant prsentes dans
les deux sources). Ces diffrentes structures possdent en commun un squelette carbon le
squelette gibbane qui constitue un systme de cycles pratiquement unique dans la chimie des
substances naturelles. Les substituants carbons ports en 7 et 9a du noyau C tant runis par
une liaison pour donner un 4me cycle.
Substances synthtises par les plantes possdant le squelette gibbane et actives vis--vis de
tests biologiques spcifiques tels que la croissance de mutants nains (Mas) ou la production
damylase par des albumens dorge.
La progression dans le nombre des gibbrellines connues est lie lutilisation des
techniques trs efficaces de chromatographie en phase gazeuse associe la
spectromtrie de masse (ce qui permet la fois sparation et analyse de la structure
des molcules).
Les gibbrellines sont affectes dun nombre qui correspond la chronologie de leur
dcouverte (exception GA3, la premire mise en vidence).
Un mme vgtal ne contient au maximum que 8 10 formes diffrentes (nous
verrons lexemple du mas).
Ces diffrentes formes ont des activits diffrentes vis--vis des tests biologiques ou
mme peuvent tre inactives.
GA3, GA4, GA7, GA14 ont le plus grand spectre dactivit.
Cette diversit de structures actives pose un problme au niveau de la finalit. Sagit-il
de substances hormonales voisines mais plus particulirement affectes une fonction
particulire ? ou dintermdiaires dans la synthse dune seule forme active.
Lexemple du mas permet de conclure en retenant la 2me hypothse. Chez le mas 8
gibbrellines ont t identifies GA53, GA44, GA20, GA29, GA19, GA17, GA1,
GA8. Chez cette espce o de trs nombreux mutants sont disponibles diffrents
mutants nains ont t tudis en particulier d1 et d5 (d pour dwarf) dont nous verrons
les caractristiques aprs la description de la voie de biosynthse des gibbrellines.
Pour conclure propos de cette diversit il faut noter que lon retrouve cette pluralit de
structures pour les hormones strodes chez les vertbrs qui prsentent par ailleurs des
analogies de structure avec les gibbrellines.
Sur un plan pratique des mlanges commerciaux de GA4 et GA7 sont produits partir de
cultures de Gibbrella fugikuroi.
Alors que les gibbrellines ont une structure assez complexe on a une bonne ide de leurs
voies de synthse. Travaux initiaux de WEST (1965-1970) aux USA.
Appartiennent ce groupe une autre hormone vgtale lacide abcissique et des constituants
vgtaux importants comme les strols vgtaux, les carotnodes, le caoutchouc polymre de
milliers dunits isoprnes.
Sur un premier schma o est reprsent une voie de biosynthse simplifie des gibbrellines
vous pouvez voir : lorigine mtabolique de diffrents terpnes, le niveau dintervention de
certaines substances (rgulateurs de croissance) comme lAMO16-18 ou le CCC qui sont des
antigibbrellines car elles bloquent la synthse des gibbrellines (ce sont des retardants de
croissance).
Sur un deuxime schma plus complet on peut voir que la voie de biosynthse des
gibbrellines se droule 3 niveaux localisation subcellulaire distincte : chloroplaste,
rticulum endoplasmique, cytoplasme.
Toutes les enzymes de la voie de synthse ont t caractrises ainsi que la plupart des gnes
correspondants. Certaine de ces enzymes sont multifonctionnelles (elles catalysent plusieurs
ractions squentielles sur la chane) et certaines sont codes par de petites familles
multigniques dont les membres sont rguls indpendamment par des facteurs endognes ou
exognes (stade de dveloppement, lumire, hormones). Voir figure.
La copalyl phosphate synthase est trs fortement exprime dans les tissus en croissance. La
kaurne synthase est la premire tape spcifique de la synthse des gibbrellines il sagit
vraisemblablement dune enzyme rgulatrice.
Des cytochromes monooxygnases transforment le kaurene en GA 12 aldhyde.
Des GA 20 oxydases transforment GA12 en GA 20.
Finalement 2 classes dhydroxylases sont importantes :
Les gibbrellines sont prsentes chez toutes les plantes suprieures, elles sont synthtises
galement par certains champignons.
Comme nous lavons dit on ne retrouve que quelques gibbrellines chez une espce donne, et
les gibbrellines dtectes varient selon le stade de dveloppement.
On pense que les sites de synthse sont les organes contenant les concentrations les plus
leves en gibbrellines, apex des tiges et des racines, jeunes feuilles, mais aussi embryon et
tissu de rserve des graines en dveloppement, fruits
Les concentrations habituelles sont de 0,1 100 ng / g de tissu frais mais de 1 10 g au
niveau des graines.
Au niveau cellulaire comme les auxines, les gibbrellines ont la fois une action sur la
division, llongation et la diffrenciation. Parmi les effets observables on peut citer :
- Laction sur la croissance des tiges (au niveau des racines et feuilles on observe de trs
faibles rponses) Cette action est particulirement spectaculaire sur des :
1) Mutants nains qui dans la majorit des cas ont perdu la facult de synthtiser des
gibbrellines, par blocage gntique. Les retardants de croissance peuvent dterminer
galement un nanisme chez des espces comme Chrysanthemum et leur effet est lev
par apport de gibbrellines exognes.
2) Espces en rosette bisanuelles choux, laitue dont les entre-nuds sont trs courts
pendant la 1re anne de vgtation et les feuilles sont accoles les unes aux autres.
Dans la nature, chez ces espces les tiges sallongent la deuxime anne. Un
traitement par les gibbrellines (0,1 mg / semaine) peut conduire rapidement des
croissances spectaculaires (3 m de haut). Cependant, les gibbrellines ont un effet sur
la croissance de nombreuses plantes normales et intactes comme la Tomate (qui ne
possderaient donc pas des concentrations optimales pour leur croissance). Le plus
souvent on assiste un accroissement des entre-nuds existant par des phnomnes
dlongation essentiellement).
Effet commun avec les auxines, mais les gibbrellines agissent sur des espces pour lesquelles
lauxine na pas daction (Rosaces, Pcher, Pommier, Raisins). La parthnocarpie peut tre
obtenue avec des gibbrellines.
Leve de dormance
Initiation de la floraison
Pour des espces ayant des exigences photopriodiques ou de vernalisation pour fleurir, la
transformation dun mristme vgtatif en mristme floral peut tre obtenue dans de
nombreux cas par application de gibbrellines. Sans que lon sache si ces hormones sont
directement impliques dans le processus physiologique normal.
Exposition du problme
Lembryon des graines de crales est entour dun tissu de rserve : lalbumen qui est lui-
mme entour dune fine couche de cellules riches en protines (grains daleurone) appele
couche daleurone.
Quand la germination dbute, sous linfluence de lhumidit par exemple, les cellules de la
couche daleurone librent des enzymes qui hydrolysent lamidon, les protines et le RNA de
lalbumen, les produits solubles forms tant ensuite utiliss pour le dveloppement de
lembryon.
En 1958, YOMO au Japon et PALEG en Australie trouvrent que des graines dOrge prives
de leur embryon et places lhumidit ne produisaient pas damylase. Si les grains et les
embryons taient placs en suspension dans une mme fiole, les grains prsentaient alors une
activit amylasique comme des semences normales. YOMO montra de plus que des extraits
purifis dembryon appliqus sur les graines dterminaient lapparition de lactivit amylase.
Ceci suggre, bien que lembryon fournit normalement la couche daleurone une substance
qui lui permet de librer l amylase. Il sagit dune hormone la gibbrelline qui a t isole
des grains dOrge sous la forme GA3 et qui peut remplacer laction de lembryon.
Les tapes suivantes ont permis de montrer que laugmentation de lactivit amylase
provenait dune synthse de novo de lenzyme (expriences de marquage en densit DO ou
avec des acides amins 0 suivi dune centrifugation lquilibre) et que cette synthse
provenait elle-mme de la production de nouveaux ARN messagers spcifiques (exprience
de Northern, inhibiteurs de la transcription).
De nombreuses tudes ont ensuite port sur la chane de transduction du message gibbrelline.
Lion Ca
Le pH cytosolique
La calmoduline
Le GMP cyclique
Enfin il faut souligner que l amylase est une glycoprotine scrte lextrieur des cellules
daleurone (pour quelle puisse migrer ensuite vers lalbumen). Des inhibiteurs de
glycosylation bloquent donc cette scrtion.
IIID g Modification des taux de Gibberellines chez les plantes par gnie
gntique :
Une amlioration de la productivit des crales a repos sur lobtention de varits semi-
naines chez lesquelles lutilisation de lazote des amendements tait plutt utilis pour la mise
en place du grain que de la tige.
De ce point de vue on peut rappeler que deux gnes dits de la rvolution verte le gne de
bl Rht et le gne de riz Sd1 sont impliqus dans la signalisation associ GA et sa
biosynthse respectivement.
Par gnie gntique plusieurs approches peuvent tre envisages pour rduire les taux de GA
1. rduire la biosynthse
2. augmenter le catabolisme
La troisime catgorie dhormones que nous abordons aujourdhui les cytokinines prsentent
comme les prcdentes AIA, gibberellines des effets biologiques multiples mais leffet
initialement mis en vidence porte sur la division cellulaire, plus particulirement sur la
cytokinse do le nom de cytokinines.
* endosperme liquide de la noix de coco qui se solidifie par la suite et qui est trs riche en
acides nuclques.
1954 Le groupe de SKOOG montre que la croissance in vitro des tissus de moelle de tabac
ne peut se faire avec la seule prsence dauxine (faible croissance pas de division, seulement
grandissement cellulaire). La recherche de substances actives conduit mettre en vidence
laction positive
Du lait de noix de coco
Dextrait de levure
De DNA autoclav
1955 Miller obtient partir de sperme de Hareng autoclav (trs riche en ac. nuclques)
une substance capable dinduire la division cellulaire des tissus de moelle de tabac de trs
faibles concentrations 1 g/litre.
Des activits cytokinines ont t initialement caractrises dans divers extraits vgtaux : lait
de noix de coco, extraits de divers fruits mais sans identification des structures actives.
En 1964, 9 ans aprs la dcouverte des cytokinines LETHAM identifie dans les endospermes
laiteux de mas (Zea Mays) la 4-hydroxy-3mthyl-2butnyl amino purine ou Zatine.
Depuis cette molcule a t caractrise dans de nombreuses plantes ; elle est responsable de
lactivit biologique du lait de noix de coco.
Cette origine a t dmontre par des incorporations de mvalonate marque dans les
cytokinines. Une enzyme ralisant le couplage 5AMP + pyrophosphate disopentenyle est
lisopentenyltransfrase IPT (cytokinine synthase) cette enzyme naccepte pas ladnine ou
ladnosine comme substrats elle a t caractrise initialement ainsi que son gne chez les
microorganismes et cest La caractrisation rcente du gne chez les vgtaux qui conclut
dfinitivement le dbat polmique relatif la production des cytokinines non pas par la plante
mais par la flore piphyte qui la colonise.
Les cytokinines existent et sont actives la fois ltat libre ltat de nuclosides et de
nuclotides. Curieusement on trouve des structures de type cytokinine dans les ARN de
transfert (tRNA). Les t RNA aprs avoir fix un ac. amin vont le transfrer et permettre son
incorporation dans une chane polypeptidique en voie de formation au niveau des ribosomes.
Chaque t RNA possde 2 rgions de sa molcule particulirement typiques
Les ARN de transfert qui ont une structure secondaire en feuille de trfle en raison de liaisons
hydrognes entre bases complmentaires comportent de nombreux nuclotides rares ou
inhabituels : natures des bases mthyles, addition, substitution
type de liaisons entre base et sucre
et parmi ces nuclotides rares on trouve des structures de type cytokinine comme les adnines
substitues.
Par ailleurs cest la forme isomrique cis-zatine qui est prsente dans les t RNA alors que la
forme trans-zatine est la forme prdominante et la plus active dans les tissus, il existe
cependant une cis-trans isomrase dans les tissus vgtaux.
Au final on pense que les cytokinines ont une double origine : synthse via lIPT et via la
dgradation des t RNA.
Il est classiquement admis que les cytokinines sont produites de faon prfrentielle dans les
racines, bien que les embryons, les jeunes fruits, les bourgeons aient aussi une autonomie de
production.
Elles sont prsentes dans les racines en grande quantit et sont synthtises partir de
prcurseurs radioactifs.
On retrouve des cytokinines dans les exsudats racinaires de certaines plantes (Mas)
Les feuilles sont dpendantes des racines pour la production de cytokinine
Les cytokinines seraient transportes dans le xylme. Appliques de faon exogne au niveau
des feuilles elles migrent peu.
Division cellulaire :
Un des effets des cytokinines est de permettre la cytokinse c'est--dire la formation dune
paroi transversale assurant la sparation de deux cellules filles. Cest en raison de cette action
spcifique sur cette phase de la division cellulaire que le nom de cytokinine a t donn ces
hormones.
Il faut galement remarquer que dans les conditions des essais biologiques les cytokinines
seules sont sans action sur la division cellulaire mais quelles ne peuvent agir quen prsence
dauxine.
Si lon considre lintervention des cytokinines dans les conditions naturelles on peut faire
rfrence aux tissus tumoraux pour lesquels on a montr une nette activation de la synthse
des cytokinines et on peut penser que dans les zones mristmatiques des tissus normaux ces
systmes de synthse sont particulirement actifs.
Diffrenciation
Les cytokinines permettent la diffrenciation de bourgeons sur des tissus en culture leur action
est contrebalance par celle des auxines qui favorisent la production de racines, la
diffrenciation du tissu dpendant en fait de lquilibre auxine .
cytokinines
Leve de dormance : les semences de diverses graines Tabac, Laitue, voient leur
germination stimule par les cytokinines. Cet effet peut avoir des rpercussions
cologiques. Aux USA les graines dune plante parasite des cultures Striga asiatica ne
germent quau contact des scrtions racinaires de la plante-hte Mas. Au-del de
cette observation il est possible que les cytokinines aient un rle plus gnral dans la
germination des semences dans les conditions naturelles.
Effet sur la mobilisation des mtabolites
MOTHES (1961) a dcouvert que des applications localises de cytokinines des
feuilles entranait une mobilisation de mtabolites apports de faon exogne des
zones de dpt vers la zone traite ou une rtention de mtabolites au niveau du
traitement (sels minraux acides amins).
Cet effet actuellement inexpliqu peut tre en partie lorigine des deux autres
manifestations de laction des cytokinines que nous dvelopperons plus tard
Les cytokinines produites par les bactries : diffrentes bactries pathognes ou colonisatrices
des plantes produisent des cytokinines ce qui entrane au niveau des vgtaux des
phnomnes tumoraux par multiplications cellulaires anarchiques.
La transformation des plantes par ces souches modifies a conduit des phnotypes
tumoraux spcifiques qui on conduit associer le locus affect lallure de la tumeur.
tms pour tumour shooty
tmr pour tumour rooty
Les mesures de teneurs en hormones de ces tissus tumoraux ont montr une rduction des
quantits en auxine chez tms, une rduction des quantits en cytokinines chez tmr.
Les locus ont t ensuite associs des gnes codant des enzymes de synthses de ces
hormones mais ces expriences ont surtout montr limpact des balances hormonales sur la
diffrenciation.
La corrlation observe confirme les rsultats dcrits lorigine pas Skoog et Miller pour les
tissus de tabac en culture.
Un des systmes les plus conservs pour la transduction des signaux extracellulaires est la
voie des protines G liant le GTP. Ce sont les protines G qui en changeant de conformation
lors de lchange GDP-GTP se lient des protines effecteurs et les activent (enzymes,
canaux ioniques).
De nombreuses vidences dmontrent lexistence de ce systme chez les plantes.
Il est vraisemblable que le systme des G protines existe donc chez les plantes. Ces
observations suggrent que des rcepteurs membranaires 7 domaines transmembranaires
(qui sont coupls aux protines G) existent donc galement chez les plantes. Ces rcepteurs
sont trs nombreux 1 % du gnome chez les animaux et sont capables de reconnatre des
messages aux structures aussi varies que les photons, les ions, des effecteurs chimiques
En 1998 le groupe de Hooley Bristol en exploitant les homologies de squence aux niveaux
des EST de Arabidopsis, riz, pin a pu trouver des squences prsentant des homologies avec
les 7 TM receptors.
A partir de ces informations on est arriv au clonage dun gne chez Arabidopsis : GCR1 qui
est exprim un faible niveau dans diffrents organes de la plante. La transformation de
plantes avec des constructions antisens (promoteur 35 S) conduit des transformants
phnotype modifi analogue celui de plantes manquant de cytokinines ou celui dun
mutant CVR1 insensible aux cytokinines.
Une approche par Activation TDNA Tagging a consist transformer un grand nombre de
plantes (50 000 cals dA. thaliana) par une construction comprenant un ttramre du domaine
enhancer du promoteur 35S. Linsertion au hasard de cette squence dans un promoteur
quelconque va amplifier la transcription du gne correspondant et permettre galement de
localiser le promoteur interrompu (par hybridation).
Le crible de slection a port sur la recherche de plantes prsentant un phnotype comparable
celui rsultant dun apport de cytokinines (prolifration de tiges, verdissement acclr,
inhibition de la formation de racines).
Le gne CKI1 a t caractris, il code pour un systme deux composantes et sa
surexpression donne un phnotype correspondant lapport de cytokinines exognes (pas
encore de liaison entre la protine et les cytokinines dmontre).
Enfin un screening de mutants par rapport la perte de sensibilit aux cytokinines en cultures
de tissu a conduit isoler le mutant Cre1-1 cytokinine .
Le mutant ne rpond pas lapport exogne de kintine, zatine, IPA.
Le gne correspond une histidine kinase et la mutation correspond au changement dune
Glycine 467 par Asparagine 467.
Cependant le mutant ne prsente pas danomalie au niveau du systme arien sur la plante
entire mais seulement des altrations du systme vasculaire des racines suggrant le
fonctionnement majoritaire de CRE 1 dans les racines, do lide de rcepteurs tissus
spcifiques.
Dans ces conditions la surproduction de cytokinines modre ou limite dans le temps se traduit par
des effet positifs, antisnescence en particulier.
La deuxime approche consiste inhiber par une stratgie antisens ou RNAi le gne de cytokinines
oxydase. Cette approche potentiellement intressante a t encore peu utilise.
IIIF - LETHYLENE
IIIF a- Dcouverte du rle hormonal :
La dmarche qui a conduit la dcouverte du rle hormonal de lthylne est tout fait
diffrente de celle que nous avons voque pour les autres hormones.
En effet, laction de lthylne exogne est connue depuis longtemps sur les vgtaux et ce
nest qu la suite de la dmonstration de la prsence naturelle de lthylne chez les plantes
que lon a conclu son action hormonale.
Ds 1886 une jeune Botaniste russe NELJUBOW observait leffet du gaz dclairage sur la
morphologie de plantules de pois : raccourcissement et paississement des tiges, perte du
gotropisme ngatif : ensemble de rponses regroupes sous le terme de triple rponse.
Parmi les diffrents effets de lthylne ce sont cependant les observations relatives la
maturation des fruits qui ont t dcisives dans la dcouverte de son rle hormonal.
Aux USA, ABELES a estim que la production dthylne par les plantes tait de 2.10
tonnes par an. Cette production peut tre compare celle provenant des vhicules et des
industries 15.10 tonnes par an. Ces concentrations pourraient tre toxiques pour les plantes
mais lthylne est soit transform par oxydation par lozone par raction avec les oxydes
dazote la lumire ou utilise par les microorganismes du sol.
Il est noter :
Depuis longtemps il avait t dmontr que la mthionine (ac. amin) tait un prcurseur de
lthylne. En effet, si on apporte de la mthionine marque des tranches de pommes ou de
bananes on observe une incorporation de la radioactivit dans lthylne.
Lthylne driverait des carbones 3 et 4.
LACC synthase a t purifie et clone. Cest un exemple dune famille multignique dont
chaque membre est diffremment exprim en rponse des facteurs du dveloppement, de
lenvironnement ou des facteurs hormonaux. Avec des sondes spcifiques une expression
diffrentielle des diffrents gnes a t value par exemple :
Une forme augmente lors de la maturation
Une autre forme augmente en rponse des blessures
Une dernire forme augmente en rponse lauxine
LACC oxydase qui transforme lACC en thylne est une dioxygnase qui demande du fer et
de lascorbate et fonctionne en prsence dO2. Elle correspond galement une famille
multignique et subit galement une augmentation de son activit lors du stress.
Lpinastie constate au niveau des feuilles lors de la croissance sur sols inonds est due au
transport vers les parties ariennes dACC non transform au niveau des racines en raison de
labsence dO2.
Enfin lACC peut tre transform en une forme conjugue de manire irrversible : le
malonyl ACC. Il a t propos de faon humoristique que la quantit de malonyl ACC
retrouve chez une plante soit un indicateur des situations de stress vcues par la plante.
Lthylne peut tre considr comme une hormone mixte avec des effets positifs : initiation
de la floraison, et des effets ngatifs sur le dveloppement : inhibition de la croissance,
abscission, snescence.
Elle exerce une influence sur toutes les phases du dveloppement de la germination la
snescence souvent en interaction avec dautres hormones.
Maturation des fruits :
Sans entrer dans le dtail de ces modifications il faut signaler quelles sont prcdes chez de
nombreux fruits par un accroissement trs net de lintensit respiratoires que lon appelle crise
climactrique, la priode antrieure ou phase pr climactrique tant une priode dactivit
mtabolique ralentie (voir figure).
Selon les fruits on constate que la production dthylne est parallle la monte de la crise
climactrique ou la prcde en revenant sa valeur initiale lors de la monte (Banane).
On considre donc que lthylne est lhormone de maturation naturelle des fruits. Le contrle
de la production thylne a des applications commerciales dans le contrle de la maturation
des fruits.
La maturation des fruits peut tre considre comme une tape prcoce de la snescence qui
est dfinie par rapport des critres de consommation. Lthylne de faon plus gnrale,
induit la snescence chez dautres organes comme les fleurs ou les feuilles.
Lthylne est sans doute lhormone vgtale dont les mcanismes molculaires daction
(perception, transduction du signal) sont les mieux connus.
Ces rsultats sont lis une exploitation extensive de mutants dArabidopsis thaliana
insensibles lthylne au niveau de la rponse physiologique classique de la triple rponse.
Domaine senseur
Domaine histidine kinase (transmetteur)
Domaine receveur (rgulateur de rponse).
La protine rcepteur existe sous forme de dimres les 2 sous units tant lie par 1 pont
disulfure.
Dautres mutants de sensibilit ont t caractriss tels que CTR1, EIN2, EIN3, ETR2, EIN4,
ERS.
Certains des gnes correspondants (ETR2, EIN4) correspondent peut tre une redondance
des rcepteurs, dautres codent pour des intermdiaires de la chane de transduction.
CTR1 code pour une protine rpresseur, car la mutation entrane une triple rponse
constitutive.
La liaison du rcepteur ayant fix lthylne avec CTR1 dsactive ce dernier. Lordre
dintervention de ces diffrentes protines le long de la cascade perception transduction a
commenc tre identifi : ETR1 CTR1 EIN2 EIN3 ERF1 Rponses
Lintervention de ces gnes sur une mme voie de transduction a t ordonne par des tests
gntiques dpistasie qui permettent par croisement de 2 mutants suivie dune
autofcondation de dterminer par analyse du phnotype le gne qui agit avant lautre sur la
chane (le gne qui agit en 1er donne le phnotype).
Par ces diffrentes stratgies on a pu obtenir des plantes maturation diffre (tomate,
melon).
La maturation peut tre dclenche par apport dthylne (comme cest le cas industriellement
pour la banane rcolte verte).
Des inhibiteurs de croissance ont depuis longtemps t caractriss chez les plantes il sagit
souvent de composs phnoliques scrts ou excrts souvent actifs aprs leur oxydation.
Ces composs sont impliqus dans les phnomnes dalllopathie c'est--dire linhibition de
croissance dune plante par une autre plante proximit.
Au-del de ces phnomnes une substance effet inhibiteur de la croissance qui a une
rpartition gnrale et une fonction hormonale est lacide abcissique.
La dcouverte de lacide abcissique est intressante car elle a t ralise simultanment par
des chercheurs travaillant dans des laboratoires diffrents sur des problmes physiologiques
distincts.
Dans les annes 1960, WAREING et ses collaborateurs au Pays de Galles recherchaient la
cause de larrt de la croissance des arbres en automne et le facteur qui provoque la formation
des bourgeons dormants. Ils obtinrent partir des feuilles dAcer pseudoplatanus un extrait
acide qui tait un puissant inhibiteur de la croissance et qui appliqu aux apex des tiges
feuilles tait capable dinduire la formation de bourgeons dormants. Ils appelrent la
substance active encore inconnue : la dormine.
Deux voies de biosynthse ont t successivement proposes pour lABA, la premire dite
voie en C correspondrait la condensation de 3 molcules disopentenyl pyrophosphate
selon un mcanisme analogue celui de la synthse des gibberellines.
La 2me voie dite en C a t caractrise plus rcemment elle correspond une coupure de
carotnodes en C du type zeaxanthine selon la squence :
Zaxanthine Violaxanthine Xanthoxine ABA aldhyde ABA
(C) (C) (C) (C) (C)
Divers mutants ont permis de caractriser cette voie de synthse travers des tudes qui sont
de bons exemples de combinatoire dapproches gntiques, molculaires et biochimiques.
Des mutants de tabac dficients en ABA (mutants ABA) sont altrs au niveau de la
zaxanthine poxydase (cette enzyme possde en fait 2 activits conversion de la zaxanthine
en antheraxanthine puis en violaxanthine).
La zaxanthine qui est non dtectable chez la plante sauvage est bien reprsente chez le
mutant alors que la violaxanthine prsente chez la plante sauvage nest pas caractrisable.
Dautres mutants chez la tomate comme flacca (phnotype fltrissement permanent) sont
affects dans des tapes terminales comme la conversion de ABA aldhyde en ABA.
Diffrents mutants dits vivipares chez le mas (les graines germent sur le pied mre par dfaut
dABA) sont bloqus diffrents niveaux de la chane de synthse du -carotne (Vp1, Vp2,
Vp5, Vp9, Vp7) Vp7 par exemple est bloqu au niveau de la conversion lycopne en
carotne.
Au total il est maintenant admis que la voie en C nest pas oprationnelle chez les plantes
mais chez certains champignons, la totalit de lABA venant de la voie en C chez les
organismes chlorophylliens o la synthse de lABA a dailleurs lieu dans les chloroplastes
riches en carotnodes (la zaxanthine epoxydase correspond un cDNA prsentant une
squence dadressage vers le chloroplaste).
Le catabolisme de lABA procde via une hydroxylation pour donner le 8 hydroxy ABA
ensuite converti en acide phasque, lABA 8 hydroxylase est une monooxygnase
phytochrome P. Cette dgradation intervient, par exemple lors du retour un tat hydrique
normal aprs une priode de scheresse pour rduire le taux dABA.
Au cours de la priode hivernale on assiste chez certaines espces une interconversion entre
formes libres et formes conjugues.
Action sur la fermeture des stomates : il sagit dun phnomne trs important au plan
physiologique puisquil permet de contrler les pertes deau de la plante et de maintenir
lhomohydrie.
Cest un exemple de rponse rapide une hormone de lordre de quelques minutes (lors de
lapport dABA exogne).
Harris et coll (1990) en utilisant un radio immuno essai (extrmement sensible) pour lABA
ont t capables de quantifier lABA dans une seule cellule de garde. A la suite dun stress
hydrique on observe un accroissement du taux dABA par un facteur 20.
La production dABA se ferait en 1er au niveau des racines stresses qui peroivent le stress et
lABA serait transport vers les apex.
Le mcanisme daction de lABA sur la fermeture des stomates a t tudi via des mesures
lectrophysiologiques au niveau de canaux ioniques. On a montr que lABA active un canal
calcique du plasmalemme ce qui entrane un accroissement en calcium cytoplasmique qui
secondairement induit louverture dun canal potassique sortant, de canaux anioniques et la
fermeture canal K entrant. Le rsultat global est une fuite de K et la fermeture des stomates.
Le mcanisme fin est plus complexe faisant intervenir des phnomnes de phosphorylation /
dphosphorylation. Certains mutants insensibles lABA et prsentant une tendance au
fltrissement ont permis lisolement dun gne mut qui est une phosphatase.
De plus diffrentes tudes pharmacologiques laide dinhibiteurs de Kinases ou de
phosphatases ont montr limportance dtapes de phosphorylation et de dphosphorylation
dans la rgulation de lactivit des canaux ioniques impliqus dans la fermeture des stomates.
A linverse des autres cellules vgtales, les cellules de garde ne comportent pas de
plasmalemmes et sont donc isoles de leurs voisines. Il sagit dun systme clos adapt aux
techniques lectrophysiologiques et aux micro-injections.
Une approche originale ayant confirm lintervention de lABA dans la fermeture des
stomates repose sur lexpression ectopique, obtenue par transgnse, danticorps contre
lacide abcissique, ARTSAENKO et al, 1995. Un anticorps monoclonal prsentant une forte
spcificit et affinit pour lABA a t caractris et le cDNA correspondant clon puis
introduit dans une construction avec un promoteur fort pour la transformation du tabac. Le
gne tranger est exprim dans le tabac et son expression conduit un phnotype fltri
analogue aux mutants phnotype fltri de tomate (flacca).
Diffrents travaux dj dcrits ont montr que le rcepteur lABA tait sur la face extrieure
de la membrane plasmique (voir partie du cours concernant les rcepteur dhormones) mais la
structure molculaire de rcepteur nest pas connue.
LABA est dune manire gnrale un antagoniste des gibbrellines dans des phnomnes
comme la dormance ou la production d-amylase par les cellules daleurone.
Abcission :
Bien que lhormone ait t initialement caractrise en relation avec labcission. Ce sont des
doses supraphysiologiques qui sont actives et on pense que ces doses entraneraient la
surproduction dthylne vritable hormone responsable de labcission. En conclusion le nom
de dormine aurait t beaucoup plus adapt pour ce que nous appelons aujourdhui lacide
abcissique.
Le rle des Br a t clairement dmontr par ltude de mutants soit dficients, soit
insensibles aux brassinostrodes qui prsentent diffrentes anomalies de dveloppement. Des
phnotypes comparables peuvent tre obtenus par des inhibiteurs de biosynthse des Br
comme le brassinazole (Brz).
Ces molcules ont t initialement isoles en 1970 du pollen de Brassica majus sous le terme
de brassines, une molcule particulire appele brassinolide tant caractrise en 1979. Ces
molcules appliques sur divers systmes exprimentaux des concentrations nanomolaires
prsentent un effet marqu sur llongation cellulaire ou sur la prolifration cellulaire. Ceci
indpendamment des effets induits par dautres hormones comme lauxine, les cytokinines ou
les gibbrellines.
Une quarantaine de structure actives ont t actuellement caractrises les Brs tant prsents
chez les algues, fougres, gymnospermes, angiospermes mais pas chez les microorganismes.
Le brassinolide est le plus actif biologiquement et le plus rpandu.
Les preuves gntiques, dmontrant que les Brs taient essentiels pour le dveloppement
normal des plantes, ont t trs rcemment apportes par ltude de mutants ainsi que des
informations sur les mcanismes daction des brassinostrodes.
Le brassinolide (Br type) est un strode prsentant un squelette cholestane qui possde un
cycle B-7oxalolactonique et 2- hydroxyles adjacents sur le cycle A(C et C) et sur la
chane latrale C et C.
Des analyses de structure fonction des Brs ont montr que les structures actives devaient
prsenter un certain nombre de caractristiques qui sont retrouves dans le Br type le
Brassinolide.
Les diffrents Brs se distinguent par le nombre et la nature des substituants sur les cycles A et
B et sur la chane latrale.
La voie de synthse du Brassinolide partir du campestrol, un strol vgtal de rpartition
trs gnrale a t tablie au cours des dernires annes. Elle comprend une srie de
rductions, doxydation et dpimrisation (voir figure).
Diffrents mutants ont t caractriss sur les nombreuses tapes de la chane de synthse.
Le mutant nain det est un mutant dficient en BR qui est complment par lapport de Br
exogne. La mutation concerne une strode rductase assurant la conversion du campestrol
en campestanol. Lauxine et les gibbrellines ne complmentent pas la mutation au plan
fonctionnel.
Le fait que le gne det est ncessaire la biosynthse des Brs et que la perte de fonction
entrane des modifications profondes du dveloppement : nanisme mais aussi dautres
manifestations sur la dominante apicale, la snescence dmontre sans ambigut le rle
hormonal des Brs.
Un autre mutant nain appel CPD a t tudi, le gne a t clon et squenc. Les analogies
de squence observes montrent que ce gne code pour une tape dhydroxylation dans la
chane de synthse des Brs. Les apports de teasterone, thyphastrol, castastrone
complmentent la mutation. Lapport de casthastrone est sans effet.
Les brassinostrodes ont des effets pliotropiques sur les systmes vgtaux. Nous avons dj
parl de leur action sur la division et llongation cellulaire. Ils interviennent galement dans
la diffrenciation des tissus vasculaires qui est supprime par apport duniconazole inhibiteur
de la synthse des strodes mais rtablie par apport de Brassinolide.
Ils acclrent la snescence dans des systmes simplifis (feuilles, cotyldons isols) par des
effets antagonistes des cytokinines.
Les effets sur llongation cellulaire prsentent des cintiques diffrentes de ceux induits par
lAIA dont les premires manifestations sobservent aprs 15 et le maximum aprs 30 45.
Les premiers effets des Brs se manifestent, en effet, aprs 45 et peuvent se prolonger et
augmenter pendant plusieurs heures.
Une premire remarque concerne le lieu de perception des hormones strodes qui est
diffrent dans le rgne animal et le rgne vgtal. La plupart des rponses aux strodes chez
les animaux impliquent la perception du message par des rcepteurs nuclaires alors que la
perception se fait par un rcepteur plasmalemmique chez les vgtaux.
Des tudes sur des mutants de sensibilit au Br chez Arabidopsis qui sont des mutants nains
ont conduit lidentification dun rcepteur et dlments de la chane de transduction.
Le rcepteur a t appel BRI1 pour Br insensitive cest un leucine rich repeats LRR
receptor like kinase : LRR-RLK.
La situation est cependant plus complexe avec lintervention potentielle de deux autres
composants BAK1 qui pourrait former un htrodimre avec BRI1 et une srine
carboxypeptidase BRS1 qui raliserait le processing dune partie extracellulaire de la protine
BRI1 (voir figure).
BZR1 et BES1 sont des protines nuclaires rgulateurs positifs en aval de BIN2.
Cette voie de transduction prsente de nombreuses analogies avec des voies impliques pour
dautres signaux chez les animaux et les vgtaux (par exemple lauxine ou lthylne).
Une situation comparable a t trouve chez la Drosophile avec le rcepteur Toll, la fois
important pour le patterning dorsoventral et pour lacquisition de limmunit inne aux
bactries et aux champignons. Dans ce cas les 2 phnomnes sont temporellement spars
lors du dveloppement ce qui nest pas le cas chez la tomate pour BRI1.
Il a t montr par des expriences dapport de Brs des systmes vgtaux et de suivi de la
synthse protique, et de la transcription et par des analyses de criblage diffrentiel (transcrits
produits uniquement ou stimuls en prsence de Br) que les Brs favorisent la transcription de
certains gnes.
Chez le soja un gne a t caractris appel BRU1 (brassinosteroid upregulated) dont les
transcrits augmentent 2h aprs lapport de Br mais non lors de lapport dauxine de
cytokinine, de gibbrelline ou dacide dabcissique.
La squence de ce gne BRU1 prsente des analogies fortes avec celle du gne connu codant
pour la xyloglucane endotransglycosylase (XET).
IV A - INTRODUCTION :
Les vgtaux qui ont volu dans un environnement dont la lumire est un facteur
prpondrant ont mis en place au cours de lvolution des systmes de perception de lumires
de diffrentes longueurs donde qui sont capables davoir un effet sur diffrentes phases du
dveloppement.
Le phytochrome est le plus anciennement connu de ces photorcepteurs. Il faut noter que cette
capacit des vgtaux lire et exploiter des signaux lumineux de leur environnement pour
rguler leur dveloppement double une autre caractristique retrouve trs tt chez les
organismes photosynthtiques la capacit utiliser lnergie lumineuse pour crer de lnergie
chimique via le processus de photosynthse.
- Cette action de la lumire nest pas limite au fonctionnement des vgtaux. Chez les
animaux, la vision ainsi que le dveloppement sexuel, certaines migrations sont contrles
par la lumire. Cependant la lumire contrle une gamme deffets beaucoup plus large
chez les vgtaux que chez les animaux.
- On regroupe sous le terme de photomorphognse le contrle du dveloppement des
plantes par la lumire indpendamment de la photosynthse. La distinction fondamentale
est dordre nergtique ; dans la photomorphognse de trs faibles
nergies sont mises en jeu
concerne la nature des photorcepteurs impliqus chlorophylle et
pigments accessoires dans le cas de la photosynthse, autres
photorcepteurs dans le cas de la photomorphognse.
La lumire varie par sa quantit, sa qualit (longueur donde) et son rythme de distribution
(photopriode) et on peut distinguer dans la photomorphognse plusieurs aspects et aboutir
des dfinitions plus restrictives.
Stimulus lumineux
Ces tapes sont trs comparables celles intervenant lors de la liaison dune hormone son
rcepteur.
Les premire tudes de photobiologie chez les vgtaux ont port sur un photorcepteur le
phytochrome, puis on sest aperu quil existait plusieurs phytochromes, que dautres
catgories de photorcepteurs intervenaient et que ces diffrents photorcepteurs agissaient de
faon concerte et en interactions ce qui complexifie fortement la situation.
Pour des raisons pdagogiques on abordera tout dabord les tapes initiales de la dcouverte
du phytochrome considr lorigine comme unique photorcepteur.
Avant de terminer cette introduction prsentons une exprience simple qui illustrera tout
dabord lintervention de la lumire indpendamment de la photosynthse.
Trois plantules tioles de moutarde de mme constitution gntique sont places, clairement
except, dans des conditions identiques de culture.
Ces diffrences ne sont pas dues la photosynthse en effet les plantules qui ont pouss la
lumire blanche sont identiques celles qui ont pouss la lumire rouge lointain, or ces
dernires radiations ne permettent pas la photosynthse. Le phnomne observ est donc bien
un phnomne pur de photomorphognse li la prsence des radiations rouge lointain.
IVB LE PHYTOCHROME :
Au-del dobservations initiales isoles sur limpact de la lumire deux types de rsultats ont
permis de progresser :
- Dune part, le fait que de nombreuses photorponses chez les plantes et les graines ont
pratiquement le mme spectre daction (nergie ncessaire pour obtenir une rponse
donne en fonction des longueurs donde).
- Dautre part, la dcouverte du caractre rversible des photorponses.
Ainsi, BORTHWICK, en 1952, tudiant la germination des laitues sous laction de bandes
passantes de longueurs dondes de 10 20 nm obtint les spectres daction reprsents sur la
figure.
On remarque un effet inducteur maximum au voisinage de 660 nm (lumire rouge = rouge
clair = red). Si sur ces semences qui ont acquis la potentialit de germer on fait agir des
longueurs donde dans lextrme rouge on constate une inhibition de la germination avec un
effet maximum 730 nm (lumire rouge lointain = rouge sombre = far-red).
Sur ces figures sont galement reprsents les effets des lumires rouge et rouge lointain sur
linduction ou linhibition de linitiation florale de Xanthium saccharatum plante de jour
court. On peut constater la similitude des spectres daction. Dans les deux cas les nergies
mises en jeu restent trs faibles.
Le caractre rversible de laction de la lumire sest avr tre commun aux diffrentes
photorponses prouvant ainsi lidentit de lacte photochimique initial dans le contrle de
rponses varies.
Rc
P660 P730
Rs
Depuis ces premiers rsultats de trs nombreuses observations ont montr la gnralit de la
prsence de phytochrome chez les plantes vasculaires et ont galement permis dobserver la
diversit de rponses physiologiques contrles par la lumire (rouge) :
Le pigment nest jamais apparent, en raison de sa trs faible concentration, mme dans les
germinations tioles, o il nest pourtant pas masqu par les chlorophylles.
La purification partir de quantits importantes de matriel vgtal (plusieurs Kg) selon des
techniques de la biochimie des protines (300mg de phytochrome partir de 20 Kg de jeunes
plantules tioles de seigle).
Ultrieurement des techniques de purification par immunoaffinit, plus rapides ont t mises
au point.
Quand P660 est converti en P730 on assisterait une limination dun proton du cycle 1 qui
deviendrait alors charg ngativement mais pourrait tre stabilis par interaction avec la
protine.
Le clonage et la caractrisation de lADNc correspondant au phytochrome ont permis de bien
progresser dans la caractrisation structurale de la protine. Chez lavoine il sagit dune
protine de 1128 ac. amins et dune masse molculaire de 125 Kda. La rgion N terminale de
fixation du chromophore est trs conserve et fait intervenir la cystine en position 322 dans
une interaction directe avec le phytochrome. La rgion C terminale est moins conserve elle
est responsable de la dimrisation du phytochrome et est implique dans la transduction du
message lumire. On trouve dans cette rgion C terminale un domaine prsentant des
similarits avec les histidines Kinases et un domaine PAS (per, arnt, sim) impliqu dans
les interactions protine- protine dont la mutation entrane la perte de lactivit biologique.
IVB5 - Photorversibilit :
Nous avons dj vu que le phytochrome pouvait tre converti dune forme dans lautre par
action de lumire Rc ou Rs. La raction ne ncessite pas de cofacteurs et la transformation
peut tre ralise pour des clairement trs brefs de faible nergie.
Il a pu tre montr quaprs irradiation par la lumire rouge P660 disparaissait en un temps
infrieur 10 s et P730 apparaissait en 0,15 s (ce temps est considrablement plus long que
celui ncessaire lexcitation dune mole de chlorophylle (infrieur 10 seconde)).
Ces rsultats suggrent quune raction obscure lente fait donc suite la phase photochimique
de la phototransformation.
La lumire rouge lointain dtermine la raction inverse mais avec de nouveaux intermdiaires.
Il existe donc deux types de ractions : photochimiques pouvant se produire trs basses
tempratures, et sombres se ralisant des tempratures plus leves. Il faut environ trois ou
quatre fois plus de quanta pour raliser la raction P730 P660 que la raction inverse.
Cette diffrence dexigence quantique explique en partie que la lumire blanche puisse avoir
les mmes effets que la lumire rouge clair (elle est par ailleurs plus riche en longueur donde
660nm).
Il faut signaler une analogie tout fait remarquable entre ces transformations et celles
intervenant dans le mcanisme de la vision. Dans ce cas le chromophore, le cis- rtinal,
(aldhyde de la vitamine A) est aussi associ une protine lopsine pour former la
rhodopsine. Quand le systme est excit par la lumire il y a conversion du rtinal dune
forme cis en une forme trans puis transformation de la protine avec une srie
dintermdiaires maximum dabsorption caractristiques.
Lorsque lon irradie un vgtal par de la lumire dont les proportions relatives en longueurs
donde 660 nm et 730 nm sont diffrentes il stablit ce que lon dfinit comme un quilibre
photostationnaire qui correspond au rapport P 730 / P total qui dpend des proportions de
lumires rouge et rouge lointain et de la dure dclairement. La valeur de lquilibre
photostationnaire peut varier entre 0,8 et 0,02.
Dans les tissus tioles ou dans les graines lobscurit on ne trouve gnralement que du
phytochrome P660. La forme P730 napparat quaprs exposition la lumire rouge clair.
Si lon suit lvolution de la teneur en P730 aprs avoir replac le vgtal lobscurit elle
diminue progressivement et paralllement la proportion de P660 augmente. Cette
reconversion dpend de la temprature (rapide 27 C, nulle 3) elle est sensible la
prsence dinhibiteurs, on pense quil sagirait dune transformation enzymatique.
Localisation cellulaire :
Le phytochrome est prsent dans tous les organes de la plante et particulirement dans les
organes jeunes. Sa localisation cellulaire tudie par diffrentes techniques (fractionnement
cellulaire, immunocytochimie) a conduit proposer une localisation multiple : membranes,
cytoplasme, noyaux, mitochondries. Une observation intressante plusieurs fois rapporte
concerne la conversion dun Pr soluble dans le cytoplasme en un Pfr li aux membranes. Chez
le coloptile davoine un traitement par la lumire rouge conduit un accroissement
considrable de la quantit de phytochrome sdimentable (insoluble) de 5 60 %.
Deux thories sont en prsence pour rendre compte de laction du phytochrome en rponse
la lumire.
Le clonage des gnes de phytochrome chez diffrentes espces : pois, avoine et surtout
Arabidopsis a conduit la mise en vidence de 5 gnes codant pour 5 apoprotines
diffrentes : PhyA PhyE avec le mme chromophore.
Les homologies de squence entre les gnes de ces diffrents phytochromes sont relativement
faibles 50 90 %.
Certains mutants affects dans la voie de synthse des ttrapyrroles linaires (chromophore)
manquent de lensemble de phytochrome : mutants hy1, dautres que nous examinerons plus
tard manquent de certains phytochromes spcifiques.
Ces diffrences ont permis dobtenir des anticorps spcifiques de chaque forme (en particulier
anticorps monoclonaux) et de les quantifier dans diffrentes conditions.
PHYA PHYB
(valeur exprime en ng/individu)
La dgradation de PhyA sous la forme Pfr est mdie par un systme de protolyse ubiquitine
dpendant. Il sagit dun moyen de prvenir la persistance des effets de la lumire lorsque
la plante est replace en conditions dobscurit. Ce mcanisme est commun la signalisation
hormonale ou intervient la notion de vague hormonale augmentation transitoire du taux
dhormones.
Les tudes ont surtout port sur A. thaliana et mis en jeu 2 types de cribles
Il nexiste pas de mutants pour PhyC mais la surexpression du gne indique une implication
dans le phnomne dexpansion des feuilles.
Au-del dune sensibilit commune aux longueurs donde spcifiques du phytochrome ces
diffrentes formes se distinguent par leur rponse diffrentes quantits dnergie.
Nb de photons
On parle de VLF trs faible fluence 1
LF faible fluence 1 1000
HIR radiation forte intensit > 1000
VLF PhyA
LF PhyB
HIR PhyA
Cette 3me rponse tant amplifie par la formation de Pfr B. On peut donc conclure que les
diffrentes rponses rgules par le phytochrome sont souvent dues laction combine de
diffrents phytochromes intervenant de faon redondante en synergie ou de faon antagoniste
ce qui rend ltablissement dun schma de synthse global extrmement difficile.
PhyA prsente une proprit unique parmi les diffrents phytochromes, celle dtre activ,
la fois, par les radiations VLF et HIR. Les rponses la lumire VLF impliquent par exemple
lexpression de diffrents gnes, la germination des graines.
Les premiers rsultats ont abouti un panorama assez confus, le phytochrome tant associ
diffrents compartiments cellulaires dont une localisation membranaire. Une perce intervient
en 1996 quand des chercheurs japonais ayant fusionn la rgion C terminale de gne de
Phytochrome B avec le gne GUS ont montr que la protine de fusion tait associe avec le
noyau.
Des expriences complmentaires ont dmontr la translocation induite par la lumire rouge
de Phy B du cytoplasme vers le noyau (Low fluence response) (translocation complte en
peu prs 4h).
Le mme type dexprience avec le gne de protine GFP associ au gne de Phytochrome A
a permis de montrer limport nuclaire de PhyA sous laction de VLF et HIR, les deux
phytochromes majeurs prsentent ainsi des localisations subcellulaires et des dynamiques de
translocation qui dpendent fortement de la qualit et de la quantit de lumire. Il semble en
revanche que les Phyto C E sont constitutivement nuclaires.
Le phytochrome de mousse : Ceratodon purpureus est cod par un gne codant pour une
protine de 145 Kd alors que le Phyto classique est une protine de 120 Kda. On aurait fusion
entre le phytochrome et un domaine de 300 aa avec des homologies substantielles avec des
protines kinases. Le phytochrome de ceratodon a une activit kinase et sautophosphoryle.
Hypothse envisage chez les plantes suprieures au cours de lvolution on aurait assist la
sparation des 2 systmes. Chaque forme de phytochrome aurait sa propre kinase associe.
Plus rcemment on a pu montrer que des prparations purifies de phytochrome A
recombinant chez Saccharomyces cerevisiae possdent une activit de phosphorylation
dpendante de la lumire, cette activit Kinase a t trouv intrinsque du phytochrome et
propose comme tant parti du mcanisme daction. Il sagit dune activit srine/thronine
Kinase.
La voie de transduction du phytochrome sous laction de la lumire surtout connue pour PhyA
comprend donc initialement la translocation de PhyA vers le noyau et lactivation de sa
composante kinase.
Lutilisation de microarrays a permis de montrer que la lumire via PHYa contrlait un trs
grand nombre de gnes.
Les effets interviennent chronologiquement sur des gnes codant des facteurs de transcription
et plus tardivement de gnes correspondant des enzymes. On est donc dans un cas classique
de cascade transcriptionelle avec des cibles primaires et des cibles secondaires indiques sur
la Figure.
Le Phytochrome nuclaire qui possde une activit Kinase (srine thronine Kinase) est
capable de sautophosphoryler et de phosphoryler diffrentes protines substrats par exemple
les phytochromes interacting factor comme PIF3 mais aussi dautres protines comme
CRY1 et CRY2 dont nous parlerons plus tard, ainsi que des AUX/IAA protines. Cependant
la signification physiologique de ces interactions nest pas encore trs claire.
PIF 3 est un rgulateur transcriptionnel et le fait que le phytochrome puisse interagir avec
PIF3 est un indice dune activation relativement directe de la transcription. Il a t montr que
PHYB pouvait spcifiquement et photorversiblement se lier PIF3 dj associ ses sites de
liaison au niveau de lADN (la G box CACGTG sensible la lumire). Les gnes portant ces
Gbox codent des facteurs de transcription de type MYB (CCA 1, LH4) qui secondairement
activeraient des cibles secondaires.
- PhyA sous sa forme Pfr est rapidement dgrad par un mcanisme ubiquitine dpendant.
- Lactivation de PhyA entrane galement une diminution de la dgradation des facteurs de
transcription en aval dans la chane de transduction comme HY5.
La dgradation de HY5 lobscurit implique une protine COP1 (un rgulateur ngatif de la
photomorphognse) COP1 interagit lobscurit avec HY5 et loriente vers la dgradation
via un processus mdi par le protasome. COP1 fonctionne vraisemblablement en tant
quubiquitine ligase. Dautres gnes (9) tels que COP9/DET/FUS fonctionnent comme des
rpresseurs de la photomorphognse.
Des tudes ralises avec une protine de fusion COP1-GUS indiquent une rduction de
labondance de COP1 la lumire dans le noyau mais les mcanismes ne sont pas encore
clairs. La lumire aurait donc un effet sur les photorponses via la dgradation de molcules
effet rpresseurs et lactivation de molcules effets promoteurs.
Les rponses la lumire bleue sont nombreuses chez les plantes on peut citer par
exemple le phnomnes suivants :
- Phototropisme
- Inhibition de llongation de lhypocotyle
- Ouverture des stomates
- Production danthocyanes
- Expression de gnes spcifiquement rguls par la lumire bleue.
- Certaines de ces rponses sont par ailleurs galement induites par les phytochromes
activs. Linhibition de llongation des hypocotyles fait en effet intervenir 3
photorcepteurs :
Phytochrome
Cryptochrome
photorcepteur sensible aux UVA
Des mutants long hypocotyle sous lumire blanche ont t caractriss. Parmi ces mutants
on peut citer le mutant HY4 insensible la lumire bleue caractris chez une collection de
mutants taggs avec du TDNA chez Arabidopsis. Le gne mut identifi, a t appel CRY1
et code une protine de 681 acides amins. Il sagit dune chromoprotine de 75 Kd. Les 500
premiers acides amins, extrmit N-terminale, montrent une forte homologie avec les
photolyases de lADN de type 1 microbiennes, une classe de flavoprotines qui catalysent la
rparation lumire dpendante de dimres de pyrimidine de lADN endommag par la lumire
dUV.
Cependant CRY1 se distingue par une extension de 200 acides amins au-del de la rgion
dhomologie. Le chromophore est une ptrine (mthnylttrahydrofolate) avec pour la
chromoprotine une absorption maximale 450 nm. Le gne CRY1 est exprim dans tous les
tissus et la protine, qui ne prsente pas de domaines hydrophobes, na pas vraisemblablement
de localisation membranaire mais une localisation nuclaire dmontr grce une
transformation gntique avec un gne codant pour une protine de fusion avec GFP.
IVD-LES PHOTOTROPINES :
Comme nous lavons dit un certain nombre de rponses physiologiques chez les plantes sont
contrles par la lumire bleue indpendamment de lintervention du cryptochrome.
Ainsi
les hypocotyles se courbent vers la lumire pour maximiser la photosynthse dans les
cotyldons (phototropisme)
les chloroplastes
- se dplacent vers la lumire pour la capture maximale de lnergie
- sloignent de trop fortes intensits lumineuses pour viter les photodommages.
les stomates
Dans ces diffrents contextes la lumire bleue est la plus efficace et les phototropines sont les
rcepteurs la lumire bleue contrlant ces mouvements.
Ce gne code pour une protine de 996 ac. amins comprenant deux domaines LOV
(caractristiques des protines rgules par la lumire, loxygne ou le voltage).
La protine se lie de faon non covalente 2 flavines mononuclotide et comporte sur son
extrmit C terminale une activit srine / thronine kinase.
Deux phototropines ont t caractrises phot1 et phot2. Des doubles mutants sont affects
dans lensemble des 3 fonctions contrles par la lumire bleue voques plus haut alors que
le simple mutant pour Phot 1 ne lest pas pour certaines rponses. Ce qui implique une
redondance de fonctions.
Phot 1 est localis dans la membrane plasmique. Un lment de la chane de transduction est
cod par le gne nph 4 qui correspond un facteur de transcription de la famille ARF. On
assiste donc ce niveau un cross-talk entre la lumire et lauxine qui est galement
implique dans le phototropisme.
Les protines concernes sont potentiellement des ATPases, canaux calciques, transporteurs
dauxine.
CHAPITRE V - LE DEVELOPPEMENT VEGETATIF A
LECHELLE DE LA PLANTE ENTIERE
Les vgtaux la diffrence des animaux ont peu dorganes spcialiss (tiges, racines, feuilles
pour lappareil vgtatif) et chacun de ces organes est particulirement adapt une fonction.
La feuille est le sige de la photosynthse, les racines sont le sige de labsorption minrale.
Il existe donc une complmentarit entre ces organes. Par ailleurs, les organes dune plante
sils sont peu nombreux sont prsents pour chacun deux en un trs grand nombre
dexemplaires.
Entre organes de types varis et entre organes de mme type stablissent des relations
rciproques effets rgulateurs (corrlations) qui vont intervenir dans le dterminisme de la
taille de lindividu : aspect quantitatif, et le dterminisme de la forme de lindividu : aspect
qualitatif.
Exemple : une partie arienne dune plantule de tomate maintenue dans une solution
nutritive quilibre ne se dveloppe que lorsque des racines adventives sont apparues.
Ces dernires ont un effet mme si elles apparaissent en dehors de la solution nutritive
et nont alors aucun rle de conduction dlments nutritifs.
Les corrlations entre systmes radiculaire et arien proviennent donc dchanges portant sur
des aliments minraux ou organiques et sur des lments catalytiques (vitamines, cofacteurs,
hormones).
Applications pratiques - La greffe : opration qui consiste runir 2 vgtaux par la mise en
contact de leurs tissus dans des conditions permettant leur soudure au cours de la cicatrisation,
cest donc une symbiose entre 2 plantes dont lune, le greffon, fournit lappareil arien,
lautre, le porte-greffe lappareil souterrain. Lobjectif est de propager un appareil arien
intressant en profitant des qualits de vitesse de croissance, de robustesse, de rsistance des
maladies du porte-greffe (vigne franaise greffe sur des pieds amricains rsistant au
phylloxra.
Sur une jeune tige de Pois en croissance seul le mristme terminal est en activit, il engendre
les feuilles et les entre-nuds. A laisselle des feuilles lvolution des mristmes axillaires
est imperceptible.
Cest donc lextrmit en voie de croissance active qui maintient au repos les bourgeons
situs au-dessous, on dit quil y a dominance apicale, ou encore inhibition corrlative.
Il sagit dun problme complexe qui malgr de nombreuses recherches nest pas encore
lheure actuelle compltement lucid.
Deux types de thorie se sont initialement opposes :
La thorie dite nutritive selon laquelle le bourgeon apical crot prfrentiellement car il
dtourne son profit les aliments venant des racines et des feuilles. Il serait privilgi car le
premier form et cela lui confrerait un avantage initial dans la comptition pour les
composs nutritifs.
Chez Vicia Faba, lAIA peut remplacer lapex dcapit. Ce phnomne a t retrouv chez de
nombreuses espces. Il est suggr que lauxine pourrait tre linhibiteur qui saccumulerait
dans les bourgeons axillaires et crerait une situation hyperauxinique.
En fait les expriences rcentes de dosage dAIA montrent quon ne trouve que peu dAIA
dans les bourgeons axillaires, do explication abandonne. Les 2 thories se sont maintenant
rejointes et on pense que les 2 types dinfluence trophiques et hormonales interviennent
conjointement.
Causes trophiques :
1. la dominance apicale sexprime dautant mieux que le milieu nutritif est pauvre, elle
est leve sur sols riches en particulier en azote cas du lin linum usitatissimum
2. ltude de la rpartition dun mtabolite marqu confirme le pouvoir attractif de lapex
(voir figure).
3. lauxine peut sur un apex dcapit reproduire en partie ce pouvoir attractif.
Ceci donne lieu une hypothse sur laction indirecte de lauxine via un dtournement des
mtabolites dont le mcanisme est inexpliqu (effet comp. au cytok.).
Causes hormonales :
Par ailleurs, dautres types darguments sont en faveur dinterventions hormonales. Les
apports exognes dhormones ou de composs perturbant le transport des hormones modifient
les rponses observes.
Conclusions :
1. lAIA constitue un signal transmissible vers les parties infrieures de la plante et nagit
pas uniquement au niveau de lapex par dtournement des mtabolites.
2. les cytokinines sont impliques dans la croissance des bourgeons axillaires. La
condition de bourgeon inhib semble lie a une dficience en cytokinines et
initialement la leve de dominance apicale est lie une reprise des mitoses sous
laction des cytokinines.
Il est intressant de noter la relation entre cet effet des cytokinines et les phnomnes
de fasciation provoqus chez les plantes par corynebacterium fascians. Le symptme
de la maladie est une perte de dominance apicale qui se traduit par une prolifration de
tiges pour donner ce que lon appelle des balais de sorcire (chez le Saule par
exemple). Le symptme peut tre reproduit par application de kintine, ce qui suggre
lintervention des cytokinines dans ce phnomne. Ceci a dailleurs t confirm par
lidentification dans les extraits de la bactrie disopentnyladnine.
Lapex grce sa haute teneur en auxine mais aussi en cytokinines et gibberellines, car on a
montr que lapport de ces substances de croissance sur la tige sectionne en prsence dAIA
augmentait le maintien de la dominance apicale assurerait lattraction de composs nutritifs et
de composs hormonaux et en diffusant vers le bas lAIA empcherait les bourgeons latraux
de recevoir ou de synthtiser les substances hormonales sans lesquelles ils ne sauraient
voluer.
Le phnomne est donc complexe impliquant plusieurs hormones et au-del des interactions
entre bourgeons, des interactions potentielles entre bourgeons et feuilles ou racines. On
conoit donc quune multitude dquilibres puissent exister ce qui rend compte des divers
degrs de dominance apicale selon les espces et de lvolution de lintensit de la dominance
apicale avec le dveloppement chez une mme espce.
Applications pratiques :
Pincement : lopration consiste supprimer lextrmit dune jeune pousse herbace en voie
dallongement, elle stoppe son expansion et provoque la naissance de nouvelles ramifications
moins vigoureuses situes plus bas.
Taille : mme principe mais sur vgtation au repos : taille formative, taille fruitire.
Les gnes bote MAD (Mads box genes) sont des gnes de type homotique contrlant de
nombreux aspects du dveloppement. Chez la pomme de terre, le gne POT M1 (pour potato
Mads box 1 gene) est exprim activement dans les tissus croissance rapide, par exemple,
dans les zones tunica et corpus des mristmes caulinaires.
Au-del de la dominance apicale qui peut avoir un rle important sur la forme des vgtaux
dautres phnomnes peuvent chez certaines plantes jouer galement un rle.
Le gravimorphisme
Les dormances ingales
Les mouvements.
Il existe une priodicit saisonnire trs marque de la croissance chez les plantes prennes
des zones tempres. Habituellement les arbres cessent leur croissance ds la fin de lt ou
au dbut de lautomne (ils entrent en tat de vie ralentie) ils la reprennent au printemps avec
des tempratures plus favorables et des jours plus longs (reprise de la vie active).
Lexemple de vie ralentie fourni par les bourgeons des arbres pendant lhiver va nous
permettre de dfinir cet tat comme un tat physiologique normal et rversible qui se
caractrise par une rduction des activits mtaboliques et des changes avec lextrieur, cet
tat ne sapplique pas uniquement aux bourgeons mais est galement caractristiques des
organes de dissmination et de conservation des espces : graines, tubercules, bulbes.
Pour les bourgeons et les graines qui sont les organes en vie ralentie les plus importants on
peut noter des caractres communs :
Pour les bourgeons les rserves sont localises distance dans les rayons ligneux du bois.
Par opposition la vie ralentie, la vie active est la priode de retour aux activits mtaboliques
normales et une croissance active.
La dormance :
Le deuxime type de vie ralentie est plus complexe il sagit de ltat de dormance. Un organe
dormant plac dans des conditions favorables de croissance nvolue pas. Les causes de la vie
ralentie ne sont plus rechercher dans les conditions de lenvironnement mais dans lorgane
lui-mme. La dormance est dfinie comme une inaptitude interne au retour la vie active (un
bourgeon dormant ne pourra clore mme si ses voisins sont supprims et sil est plac dans
une serre convenablement climatise). (une graine dormante ne germera pas mme si les
conditions de temprature, humidit sont tout fait favorables). La dormance comme nous le
verrons est cependant rversible.
Dans le cadre de cette tude de la priodicit de la croissance nous allons dvelopper ici le
problme de la dormance des bourgeons. Nous examinerons le problme de la dormance des
graines lors de ltude de la physiologie de la germination.
La dormance des bourgeons est essentiellement une caractristique des espces ligneuses des
rgions tempres.
De nombreuses espces herbaces par exemple croissent chaque fois que la temprature le
permet et sont donc dpourvues de dormance. Ainsi des espces vivaces des prairies croissent
pendant lhiver ne cessant leur croissance que si la temprature est infrieure 5 C. Parmi les
plantes ligneuses certaines comme la Bruyre Calluna vulgaris sont dans le mme cas et leur
allongement reprend en hiver ds quil ne fait pas trop froid. Parmi les arbres lEucalyptus est
un exemple despce nentrant pas en dormance.
Alors que cest lapproche de lhiver qui induit le plus souvent la dormance dans les zones
tempres, dans les rgions chaudes les fortes scheresses peuvent galement induire lentre
en dormance.
Exemples : Des graniums laisss au froid meurent car ils nont pas de bourgeons dormants.
En revanche, un arbuste ou un arbre un Marronnier par exemple se prpare la mauvaise
saison en dveloppant des bourgeons dormants protgs de diffrentes manires du monde
extrieur.
Adaptations :
Anticipation :
Pour que ces adaptations morphologiques contre la mauvaise saison soient efficaces il faut
quelles soient mises en place avant larrive du froid, la plante a donc du dvelopper des
systmes permettant de prvoir et danticiper sur lapproche de la priode dfavorable.
Dure :
Chez de nombreuses espces lentre en dormance est autonome . Le Lilas dbourre fin
mars et son allongement cesse obligatoirement en mai juin quelles que soient les conditions
de culture (temprature, longueur du jour). De nombreux arbres en particulier les arbres gs
ont galement une priode de croissance relativement brve 1 2 mois pendant laquelle se fait
lallongement et le grandissement des feuilles. Larrt de croissance dont on ne connat pas le
dterminisme (puisement des mtabolites, quilibres hormonaux) est ensuite suivi par un tat
de dormance caractristique. Gnralement une entre en dormance par anne.
Un cas plus complexe est celui du Chne dont les bourgeons closent en avril, voluent durant
2 3 semaines puis passent par une priode de repos (formation dcailles sur le bourgeon
apical). Un deuxime veil lieu en juin qui donne naissance de nouvelles pousses (pousses
de la St Jean). Puis, aprs cette priode de croissance on assiste une nouvelle entre en vie
ralentie suivie dun nouveau dpart en aot (pousses daot). Ainsi le bourgeon terminal se
recouvre dcailles 2 3 fois au cours de la priode de vgtation des moments o les
conditions externes sont trs diffrentes. De plus, maintenus en chambre climatise dans des
conditions constantes de jeunes chnes prsentent de la mme manire des vagues successives
de croissance. En revanche, les racines croissent dans les mmes conditions de manire
continue.
Ces arrts de croissance des bourgeons attribus initialement des phnomnes de dormance
sont en fait dus des phnomnes dinhibition corrlative exercs par les jeunes limbes dont
lablation supprime le phnomne, les limbes devenant plus grands, leur pouvoir inhibiteur
diminue. En septembre en revanche on assiste une entre en dormance typique des
bourgeons.
Causes externes :
A ces entres en dormance autonomes on peut opposer celles qui sont troitement lies une
variation dun facteur du milieu.
La dure des jours : des expriences trs prcises portant sur diverses espces ont dmontr en
chambre climatise ou au champ que lallongement des nuits induit larrt de croissance et la
formation dun bourgeon terminal cailleux qui devient dormant (Robinia pseudoacacia
Populus sp. Larix decidua Salix repens, ce dernier maintenu au tide en jours longs pousse
indfiniment).
Donc dans les zones tempres o lapproche de lhiver est annonc par une diminution de la
longueur des jours, la prparation ltat de dormance rsulte de la perception dun
changement de photopriode. La dormance peut selon les espces tre induites (Populus),
acclre (Acer) ou non contrle (Malus) par la photopriode.
Autres facteurs dont lefficacit a t dmontres :
La scheresse
Le refroidissement des nuits
Le principal facteur du milieu efficace dans la nature est le froid. Les tempratures les plus
efficaces se situent entre 3 et 7 C et la priode de froid requise varie selon les espces de 250
1500 heures (dormance plus ou moins forte). Il est surprenant de noter que le facteur contre
lequel les plantes cherchent lutter en se mettant en tat de dormance soit celui-l mme qui
permet la leve de la dormance. Lhiver nest donc pas un simple inhibiteur de croissance, il a
un rle positif. Il est ncessaire au dveloppement des vgtaux. Vous verrez quil est
galement indispensable pour prparer certaines floraisons (vernalisation).
La plante a donc mis au point des systmes qui lui permettent de mesurer lintensit et la
quantit du froid ncessaire la leve de dormance.
On doit remarquer que chez la plupart des espces la dormance est leve par le froid bien
avant que la croissance reprenne dans les conditions naturelles, en raison mme des
tempratures trop basses qui maintiennent la plante en tat de repos impos (mais ces espces
places en conditions favorables en salles conditionnes verraient leur croissance reprendre
immdiatement).
Jours longs : chez certaines espces comme le Bouleau, le Htre, le transfert en jours
longs limine la dormance des bourgeons alors que linfluence de la temprature est nulle. Les
bourgeons peroivent ici eux-mmes le stimulus lumineux.
Les preuves exprimentales de lintervention des hormones dans la dormance peuvent tre
groupes en 3 catgories :
En ce qui concerne le premier type de preuve nous avons vu que la dormance pouvait tre
provoque par les jours courts chez de nombreuses espces ligneuses, ce sont les feuilles qui
peroivent le stimulus lumineux.
Il y aurait soit une production dune substance au niveau des feuilles qui serait transmises vers
les bourgeons soit larrt de production dune substance (voir : Expriences sur Cornus
florida).
2me type de preuve : de nombreux rsultats ont montr une augmentation des taux
dinhibiteurs de croissance (ABA) avec lentre en dormance et corrlativement une
diminution des gibberellines.
La dormance est un tat pour lequel les activits mtaboliques sont ralenties dune manire
gnrale, des expriences classiques de TUAN et BONNER en 1964 ont montr plus
prcisment que la dormance correspondait un tat de rpression gnralise du gnome.
Ces auteurs ont extrait la chromatine de bourgeons dormants et de bourgeons en activit et fait
agir cette chromatine in vitro sur un ensemble de nuclotides et de cofacteurs ncessaires la
synthse dARN en prsence dARN polymrase on obtient les rsultats suivants :
Synthse ARN
Bourgeons non dormants +
Bourgeons dormants 0
Planter des conifres qui entrent en dormance tardivement dans une rgion geles prcoces
est une erreur irrmdiable.
Dans les rgions tropicales ou quatoriales o les facteurs T et lumire varient peu on
considre que quelques plantes ont une croissance continue mais la plupart des plantes ont des
phases de vie ralentie. En effet, on constate pour de nombreuses plantes des croissance
rythmique (anglo saxon type flush) analogue celle du chne. Il sagit de causes internes
mal lucides.
En outre, pour certains arbres on a sur un mme individu des bourgeons dormants et non
dormants.
Cas des espces des zones tempres transfres dans des zones chaudes : le Htre plant
Java continue perdre ses feuilles priodiquement une fois par an une poque quelconque
de lanne. Plusieurs htres poussant dans une mme localit ne perdent pas forcment leurs
feuilles en mme temps en labsence du mcanisme rgulateur que constitue le cycle des
saisons.
Les priodicits biologiques rsultent donc au moins dans certains cas de la conjonction de
fluctuations endognes et de variations cycliques du milieu.
En conclusion la priodicit de croissance des vgtaux prennes qui se caractrise par des
priodes de vie ralentie associes la dormance est directement lie des facteurs
saisonniers : longueur des jours, froid hivernal.
Ces facteurs au-del de leurs effets trophiques, agissent en tant que signaux perus par la
plante et transforms en information utilisable par le biais de modifications du taux
dhormones.
Le lien entre facteurs climatiques et teneurs en hormones nest pas encore clair.
En fait, les phnomnes sont souvent encore plus complexes impliquant des facteurs
gntiques relatifs lintensit des dormances (dure), linfluence des facteurs du milieu,
lexistence de corrlations entre organes et de rythmes internes.
CHAPITRE VI : LES PRINCIPALES ETAPES DU CYCLE DE
DEVELOPPEMENT
VI A PHYSIOLOGIE DE LA GERMINATION :
La germination que nous allons approfondir dans ce chapitre est associe un des moyens mis
en jeu par les vgtaux pour assurer leur propagation : la multiplication sexue qui comprend
squentiellement la formation de fleurs, de gamtes, la fcondation, la formation de graines et
la germination.
Cette deuxime voie de propagation des vgtaux se rencontre chez diffrentes formes
vgtales dont les plus volues (monocotyldones par exemple) et est beaucoup plus
dveloppe que chez les animaux o elle intervient seulement chez des espces infrieures
(vers, spongiaires).
Chez les vgtaux la multiplication vgtative est soit naturelle soit se fait par lintervention
humaine. Cette multiplication vgtative a une grande importance en horticulture et
agriculture.
- Fragmentation :
Chez les vgtaux qui ont une ramification abondante de leurs axes ariens ou
souterrains au niveau du sol, on peut constater une diffrenciation de ces axes
(enracinement des parties ariennes par exemple) suivie dune sparation
ultrieure.
La multiplication vgtative artificielle est pratique par lhomme en mettant en jeu diverses
techniques pour rpondre aux motivations suivantes :
Des rgulateurs de croissance sont utiliss pour faciliter la rhizognse dans le cas du
bouturage, ce sont des composs auxiniques aux noms vocateurs : exubrone, rootone.
Pour le chercheur il sagit dune transition vie ralentie vers vie active facile tudier sur le
plan mtabolique et biochimique.
Le terme graine a une signification botanique bien prcise. Il sagit de lorgane rsultant de la
double fcondation de lovule, contenant lembryon, un tissu de rserve et des tguments.
La propagation des espces nest cependant pas assure par des graines uniquement, on parle
plus gnralement de semences : il sagit de lorgane ou de la partie de lorgane que lon
sme : graine le plus souvent mais aussi fruit (le caryopse est un fruit), groupe de graines ou
de fruits (betterave). Par extension, le terme de semences concerne les tubercules (de pomme
de terre) ou les bulbes.
Germination : Processus physiologique qui permet lembryon contenu dans la graine de
donner une jeune plantule.
- Conception courante : la germination recouvre la squence des vnements
allant de la graine au repos jusqu lobtention dune plantule autotrophe
(viable).
- Conception des physiologistes : la germination commence avec
limbibition de la graine et finit avec la perce des tguments par la radicule
ou par lhypocotyle sil sort le premier, les tapes ultrieures tant des
tapes de croissance.
La double fcondation caractristique des Angiospermes (voir par ailleurs rappel sur
lanatomie et la cytologie des tissus concerns) conduit la formation de la graine. Luf
principal donnant lembryon avec des bauches de gemmule et de radicule, luf accessoire
(initialement triplode et syncitial mais redevenant rapidement diplode) aboutissant la
formation de lalbumen ou tissu de rserve. Les tguments de lovule donnent pour leur part
les tguments de la graine alors que la paroi de lovaire donne la chair du fruit.
On distingue gnralement :
La maturation des semences se produit gnralement sur la plante mre associe une
dshydratation trs pousse (les graines ne renferment que 10 % deau) ce qui entrane leur
entre en vie ralentie.
Les graines sont maintenues dans les fruits au niveau de la plante mre ou rapidement
disperses par dhiscence des siliques par exemple. Un niveau important de lamlioration des
plantes cultives a port sur le blocage de cette dispersion spontane afin de prserver la
rcolte sur pied.
Les graines sont trs variables dans leurs dimensions, une des plus volumineuses est celle
dune varit de Palmier (Lodoicea maldivica) qui se forme pendant environ 7 ans et pse
environ 10 kg.
Dautres graines sont de vritables poussires (Orchides) ou sont de trs petite taille sans
relation avec la taille finale de lindividu (Carotte, tabac).
En rsum, une graine est toujours fondamentalement constitue dun embryon lment
essentiel, dun tissu de rserve rle nourricier et denveloppes (tguments ou autre :
pricarpe).
Le problme des rserves sera dvelopp ultrieurement mais on peut dire que lon connat
trs mal la faon dont les lments nutritifs sont transports des organes assimilateurs :
feuilles vers les organes de rserves, comme les graines, ceci rejoint le problme dont je vous
ai dj parl de la distribution des assimilats.
Il est vident quil est intressant de mieux connatre ces phnomnes pour mieux les orienter.
Ce qui est assez remarquable cest que linformation gntique pour certaines protines ne va
pas sexprimer que dans les tissus de la graine ou vont saccumuler un nombre trs limit de
protines dont la synthse est trs active pendant un temps trs court (exemple globuline) .
La viabilit des semences varie selon les espces. Elle dpasse souvent 15 ans et peut
atteindre une centaine dannes (graines viables retrouves dans les herbiers).
Exemples de viabilit :
A loppos certaines graines ont une viabilit limite comme le Peuplier ou Acer saccharinum
et meurent en quelques semaines la T ambiante (les basses T, latmosphre sche
prolongent la survie).
La proxydation et loxydation des acides gras insaturs des lipides provoquent des radicaux
libres hautement ractifs, des hydroperoxydes, et des produits secondaires qui acclrent le
vieillissement via des dgts causs aux membranes, aux enzymes et la chromatine.
Ces rserves ont une grande importance car elles assurent lalimentation du jeune embryon en
cours de germination ce qui lui permet datteindre lautotrophie. Mme dans de petites graines
comme celles de Laitue (Lactuca sativa) pesant seulement quelques mg les rserves peuvent
autoriser la croissance de lembryon pendant plusieurs jours. Chez des graines comme la fve
pesant jusqu 1 g les rserves sont suffisantes pour plusieurs semaines.
Ces rserves concentres un niveau jamais atteint dans les autres parties de la plante sont
galement importantes pour la nutrition de lhomme et des animaux. Les crales sont une des
bases de lalimentation humaine. Dautres graines : Tournesol, Colza, Soja, Sorgho, Fverole,
Pois, Haricot ont un rle conomique important. On peut rappeler limpact provoqu il y a
une vingtaine dannes par larrt des exportations de Soja par les USA (alimentation des
animaux). Parmi les graines celles contenant une forte proportion de protines sont
particulirement recherches et actuellement on cherche rduire notre dpendance par
rapport limportation de semences protagineuses par le dveloppement en France despces
comme le pois protagineux, la fverole dont les graines sont riches en protines.
Les protines :
On dfinit 4 groupes de protines base sur des diffrences de solubilit ce qui reprsente une
dfinition oprationnelle.
- Albumine : hydrosolubles
- Globulines : solubles dans des solutions salines
- Glutlines : solubles dans des acides ou bases faibles
- Prolamines : solubles dans alcool
Ces protines sont stockes dans ce quon appelle des corps protiques, (appellation ancienne
grains daleurones) gnralement rpartis dans tout lorgane de rserves, ou concentrs la
priphrie de la graine chez les crales par exemple (couche de cellules aleurone).
Ce sont des organelles cellulaires bords par une membrane qui proviendraient de la
transformation de vacuoles avec dshydratation.
Ces corps protiques ont un diamtre de 0,1 25 . Ils ont une structure variable avec ou sans
inclusions (globode et cristallode)
La composition moyenne des corps protines est la suivante :
Protines : 70-80 %
Phytine : 10 %
Enzymes : Protase, Phosphatases, glycosidases, ribonuclases.
La principale forme de rserve de phosphate dans les grains de crales et les graines
olagineuses est constitue par lacide phytique (myo-inositol hexa phosphate). Le phosphate
de lacide phytique peut constituer jusqu 90 % du phosphate total de la graine, dans le cas
du mas notamment. Lacide phytique forme de plus un sel complexe de K, Mg, Ca, Zn, et Fe
appel phytine et qui reprsente une rserve importante de minraux dans la graine. Pour
permettre lutilisation du phosphate et des cations minraux contenus dans la phytine, celle-ci
doit tre hydrolyse par des phosphatases spcifiques appeles phytases. Lactivit phytase est
gnralement trs faible dans les graines en cours de maturation ou dans les graines sches.
Cette activit augmente considrablement en dbut de germination.
La prsence dans les grains secs de mas dune phytase endogne (comme cela est le
cas pour le bl dont le son possde une activit phytase leve), serait particulirement
intressante. De nombreux travaux ont envisag le transfert par gnie gntique des gnes de
phytase fongique ou vgtale associs des promoteurs graines spcifiques et plus
particulirement spcifiques de compartiments de la graine qui ne contiennent pas de phytine
(cas de lalbumen chez le mas). Une phytase latente serait alors mise au contact de la
phytine au cours des phases de mastication et de prdigestion (par dcompartimentation) et
devrait permettre damliorer la qualit nutritive des grains et de diminuer les pollutions lies
lexcrtion de la phytine non digre par les animaux.
Les glucides :
Lamidon constitue la forme principale des rserves glucidiques, notamment chez les
Gramines dont il forme presque tout lalbumen. Il reprsente le compos glucidique le plus
important de notre rgime alimentaire.
Les hmicelluloses constituent les albumens corns ou indurs type datte (polymres
de pentoses et hexoses).
Les sucres solubles sont en petites quantits dans la graine au repos (saccharose chez
lAmande ou le Ricin).
Les lipides :
Si la notion de rserve des graines est souvent associe aux glucides en raison de leur
rle dans lalimentation humaine, ce sont les lipides qui constituent la forme de rserve la plus
rpandue, dans 9/10 des plantes. La plus grande partie de ces rserves est constitu dester, de
glycrol et dacides olique et palmitique, prsents en gouttelettes de diffrentes tailles
appeles olosomes.
Phnomnes biochimiques de la germination :
Le premier phnomne rside dans une inhibition de la graine c'est--dire une phase
dhydratation du protoplasme qui amne la teneur en eau environ 50 60 % du
poids frais.
A) Les enzymes dhydrolyse des rserves qui vont donner les mtabolites ncessaires
la synthse des constituants des nouvelles cellules ou utiliss comme substrats
respiratoires.
Nous avons dj parl de ces phnomnes propos de laction des gibberellines sur
la germination de lOrge. Il est noter que chaque catgorie de graines possde des
enzymes en relation avec son contenu en rserve (voir tableau).
Rserves lipidiques :
Les triglycrides sont dabord hydrolyss par des lipases qui donnent du
glycrol et des acides gras. Les acides gras sont ensuite oxyds en actyl CoA
puis transforms en glucides par le cycle glyoxylique ou intgrs dans le cycle
de KREBS.
Rserves protiques
B) Les enzymes du cycle respiratoire qui vont fournir de lATP partir de substrats
librs par les enzymes dhydrolyse. Lintensit respiratoire saccrot trs fortement
au cours des premiers stades de la germination et saccompagne parfois dun
dgagement de chaleur.
Dans ce second cas il faut considrer que des ARN prexistants sont dans les
graines pour permettre la reprise rapide de la synthse protique (on a utilis le
terme dinformosomes pour les caractriser)
Les interactions hormonales entre embryons et tissus de rserves que nous avons
examines dans laction des gibberellines sur la germination du grain dorge sont
certainement trs rpandues. Par exemple chez le Pois lablation de lembryon
empche la synthse de protases au niveau des cotyldons.
Conditions de la germination :
Conditions externes :
Eau : ncessaire lhydratation de la graine et la reprise des activits
mtaboliques (trop deau empche cependant la germination : asphyxie).
O2 : ncessaire la respiration.
Temprature : convenable pour les activits mtaboliques.
Lumire : 3 catgories : germination induite par la lumire 70 %
germination inhibe par la lumire
germination indiffrente
Ces dernires exigences sont plus thoriques que relles car elles se manifestent pour des
semences frachement rcoltes et des t leves alors que la germination dans les rgions
tempres se produit dans un contexte de tempratures fraches.
Conditions internes :
Lorsque des graines arrives maturit sont places dans des conditions optimales de
temprature, dhumidit et doxygnation pour leur croissance et quelles ne germent pas,
plusieurs types de causes sont envisager : la dormance de lembryon ou les inhibitions de
germination.
On peut dailleurs souligner que les caractristiques de germination des espces cultives
rsultent dune slection trs pousse qui a contribue liminer un grand nombre de
mcanismes de contrles naturels et qui conduit une germination rapide et uniforme
ncessaire dans le cas des plantes cultives.
Certaines graines ne germent quaprs de trs fortes pluies et lon pense que cest un
lessivage dinhibiteurs de germination qui autorise le phnomne au-del dune simple
rhydratation.
Dans les diffrents cas voqus on peut dmontrer effectivement le rle des tguments
en ralisant leur ablation qui permet la germination.
b. La dormance de lembryon :
Par dfinition on dit que la dormance est dorigine embryonnaire quand la graine tant
dbarrasse de ses tguments et place dans des conditions convenables ne germe pas.
Lembryon peut tre dormant au moment de la rcolte de la semence on parle alors de
dormance I.
Dans dautre cas lembryon des semences frachement rcoltes est parfaitement
capable de germer mais il perd cette aptitude sous linfluence de diffrents facteurs
externes (T, privation dO2), on parle de dormance II.
En particulier dans les leves de dormance par le froid il semble que lon soit en prsence
dun quilibre entre ABA et gibberelline analogue celui dcrit pour la dormance des
bourgeons. Lacide abcissique semble tre linhibiteur fondamental, il est prsent dans de
nombreuses graines et il prsente un puissant effet inhibiteur sur la germination quand il est
apport de faon exogne. Par ailleurs, il existe des corrlations entre degr de dormance
despces voisines dans un mme genre et la teneur en acide abcissique.
Le froid pourrait intervenir en diminuant le taux dABA des graines. De plus, des stimulateurs
comme lacide gibberellique semblent impliqus dans la germination. Ce point est confirm
par linaptitude de nombreux embryons dormants de crales synthtiser des gibberellines,
les potentialits de synthse reprenant avec la leve de dormance. Dautre part, lacide
gibberellique exogne favorise la germination des graines dormantes chez le Noisetier, et le
froid a un effet favorable chez ce mme vgtal dans la production dacide gibberellique.
On retrouve donc le mme type de mcanisme que celui dj mentionn pour la dormance des
bourgeons un quilibre entre inhibiteurs et stimulateurs qui serait sous la dpendance des
conditions de lenvironnement.
1. maturation
2. germination
Des homologues de VP 1 ont t clons chez diffrentes espces avec un haut degr
dhomologie.
LABA est un signal de la mise en place des rserves protiques des graines : hlianthine,
crucifrine et de polypeptides de protection contre la dssication (dehydrines).
LABA intervient donc plusieurs niveaux : il joue un rle stimulateur dans les tapes de
formation et de dshydratation de la graine et inhibe de faon gnrale, la germination
prcoce qui est ensuite empche par la dssication. Son taux peut ensuite dcrotre pendant la
priode de conservation. Ainsi lABA nest pas son maximum dans les graines dormantes
o il a au pralable fix la dormance.
Des quilibres multiples entre teneurs en hormones, variations de sensibilit aux hormones,
taux de facteurs rgulateurs peuvent expliquer les diffrents comportements observs au
niveau de la dormance.
Lexpression de gnes a t souvent cible vers la graine dans des expriences de gnie
gntique dans le cadre de deux objectifs majeurs.
Ex : phytase mais aussi glucanase pour amliorer la mobilisation des glucanes chez lorge,
lipase pour favoriser directement la production de diester (biocarburant) sans hydrolyse
chimique des triglycrides.
La fleur est lorgane le plus complexe de la plante avec des parties striles spales (rle de
protection), ptales (rle dattraction) et des parties fertiles tamines (pollen), pistil
(ensemble de carpelles contenant ovaires/ovules).
Prs de 70 % des angiospermes sont des hermaphrodites vrais portant les 2 sexes et
sur un mme individu (espces monoques). Environ 5 % ne portent quun seul sexe
(espces dioques : chanvre, peuplier, kiwi, asperge, mercuriale).
La formation des fleurs correspond une tape typique de diffrenciation associe la mise
en place de protines et de mtabolites spcifiques. Les plus apparents de ces mtabolites sont
les pigments floraux (flavanoides, carotnodes) qui donnent leur couleur aux fleurs. Toutes
les cellules contiennent les gnes correspondants mais ceux-ci ne vont sexprimer souvent
massivement que lors de la formation des fleurs.
3. la production florale est une activit conomique importante dun chiffre daffaires de
lordre dun peu moins dun milliard dEuros en France, avec une forte focalisation
sur un nombre limite despces : roses 40 %, illets 20 % et une localisation
gographique sur le VAR et les Alpes Maritimes.
La production seffectue en serres pour lessentiel et il sagit dun secteur fortement
dficitaire au plan de la balance commerciale avec une forte pntration des produits
Hollandais. La connaissance et le contrle de la floraison sont importants pour ces
activits ainsi quau niveau de larboriculture fruitire.
Les Botanistes ont t de tout temps intrigus par le fait que certaines espces (Muguet de
mai, Chrysanthme, pour donner des exemples concrets) fleurissent une priode bien prcise
de lanne souvent de faon trs reproductible. On connat maintenant certaines conditions
requises pour la floraison, se sont des conditions internes : maturit de floraison, et des
conditions externes : action de la lumire photopriodisme, de la temprature
vernalisation.
A) Conditions internes :
1. Maturit de floraison :
Pour quune plante puisse fleurir il faut quelle ait atteint un certain dveloppement vgtatif.
On appelle ce stade maturit de floraison. Lacquisition de cette maturit de floraison est de
dure trs variable selon les espces. Avant ce stade la plante est dans un tat dit juvnile et ne
pourra fleurir quels que soient les traitements.
A titre dexemple cette maturit de floraison est atteinte des stades de dveloppement
diffrents :
Seigle : 7 feuilles
Tomates : 13 entre-nuds
Chez les arbres ce temps est beaucoup plus long : Poiriers 5 -7 ans, Chne plusieurs dizaines
dannes.
B) Conditions externes :
Quand nous parlons ici dexigences thermiques, il ne sagit pas des exigences minimales
ncessaires aux activits mtaboliques et la croissance mais des effets indirects de la T
selon la terminologie dj utilise des effets signaux .
Dfinition :
Cest une transformation interne opre par le froid qui confre certaines plantes laptitude
fleurir (aucune modification morphologique).
Il faut tout de suite diffrencier ce phnomne de la leve de dormance par le froid ou le
traitement thermique agit sur un phnomne de croissance.
Il faut aussi insister sur lexpression aptitude fleurir car la vernalisation confre
seulement une potentialit fleurir qui sexprimera plus tard si dautres conditions sont
remplies. A lobservation macroscopique ou microscopique rien ne distingue un bourgeon
vernalis dun bourgeon non vernalis.
VI-B2- La Vernalisation :
1. Lexemple du Bl :
Le terme de vernalisation qui dsignait lorigine le traitement qui confre laptitude fleurir
(froid naturel de lhiver ou froid artificiel ou encore dautres agents) recouvre maintenant
galement la transformation subie par le vgtal devenu apte fleurir et les phnomnes
physiologiques qui sy rapportent.
Les besoins de vernalisation sont trs variables selon les espces mais il faut tout de suite dire
quil sagit l dune exigence relativement peu rpandue chez les plantes.
On peut classer les plantes en 3 groupes.
Les premires nont pas besoin de vernalisation elles sont appeles indiffrentes. Ce sont les
plantes annuelles qui semes au printemps fleurissent dans le courant de la mme anne sans
avoir eu besoin de froid (crales de printemps, tabac).
Dautres espces sont dites prfrentes, la vernalisation nest pas indispensable mais elle hte
la floraison, cest le cas de la varit de seigle dhiver ( Petkus ). Vernalise, la floraison se
produit aprs production de sept feuilles, non vernalis il faut attendre lapparition de 25
feuilles pour que la plante puisse fleurir. Les plantes annuelles dites dhiver se comportent de
la mme faon, le Bl dhiver dont nous avons dj parl voit sa floraison acclre par le
traitement vernalisant mais si la belle saison tait suffisamment longue il arriverait fleurir
sans vernalisation.
Les plantes vernalisation obligatoire, cest le cas de la plupart des plantes bisannuelles,
celles que nous avons dj cites mais aussi dautres espces telles que Betterave et Choux,
Carotte et Cleri, de plantes vivaces ex : Geum urbanum, Olivier.
Exemples concernant les plantes vivaces dont simplement certains bourgeons sont vernaliss :
Un exemple particulirement net de relation entre laire de rpartition dune espce, et des
exigences thermiques et en particulier un besoin de vernalisation est donn par lolivier :
Les espces cultives ont t slectionnes pour liminer ces barrires la floraison.
Les espces spontanes dont les aires de rpartition la surface du globe sont les plus larges
sont celles qui sont indiffrentes.
Nous avons vu dans le cas du Bl que la vernalisation pouvait tre ralise sur la graine.
Cependant, certaines plantes ne sont sensibles aux traitements vernalisants qu certains
stades de leur dveloppement. Cest le cas de la Jusquiame noire plante bisannuelle qui nest
vernalisable qu ltat de rosette.
Laction du froid ne peut donc tre effective que sur des plantes ayant atteint un tat
particulier appel maturit de vernalisation tout fait distinct de la maturit de floraison.
Conditions de la vernalisation :
Ceci correspond laction des conditions naturelles - alternance priodes froides et priodes
plus douces.
La vernalisation nest pas un phnomne de tout ou rien : sur les plantes prfrentes comme le
seigle on peut obtenir lpiaison sur des plantes de 7 16 feuilles selon la dure de la priode
de froid.
Ce sont des cellules des mristmes qui sont capables de percevoir le traitement par le froid.
Ltat vernalis peut tre qualifi dautocatalytique c'est--dire que tous les bourgeons
drivant de lapex vernalis sont vernaliss chez les plantes annuelles. La transformation
opre par le froid semble transmissible au cours des divisions cellulaires.
Dvernalisation :
Ltat vernalis peut tre conserv pendant trs longtemps : graine inhibe vernalise puis
maintenue au sec conserve un tat vernalis pendant plus dun an.
Jusquiame : cette plante prsente pour fleurir une double exigence : froid puis photopriode.
On peut aprs le traitement vernalisant diffrer la floraison pendant 200 jours en conservant
ltat de comptence. Cependant un trop long dlai, des traitements par la chaleur > 30 C,
lanarobiose suppriment ltat vernalis.
FLC est un rgulateur transcriptionnel bote MAD qui fonctionne comme un rpresseur de
floraison en inactivant un ensemble de gnes requis pour la transition dun mristme
vgtatif en mristme floral.
Chez les espces qui nont pas dexigences en vernalisation des gnes comme FCA
interviennent dans la rpression de FLC.
Un des problmes qui se pose est de comprendre comment aprs le traitement par le froid se
maintient la rpression de FLC et on a suggr dans ce contexte un mcanisme pigntique.
On a pu rcemment montrer (Bastow et collaborateurs Nature 427, 164 (2004) des
changements dans le degr de mthylation des histones (dimthylation des lysines 9 et 27 sur
lhistone H3) ce qui correspond une chromatine silencieuse chez la drosophile et
lhomme. Le phnomne de dimthylation de H3 sur la lysine 27 disparat chez le mutant
VRN2. Ce gne ou son produit au voisinage du gne FLC serait donc impliqu dans la
mthylation.
La mmoire pigntique de lhiver est ainsi mdie par un tat des histones qui induit
une chromatine silencieuse, ce type de mcanisme semble conserv chez les animaux et les
plantes.
Modle de synthse
Rpression de gnes
importants pour la
transition vers la
floraison
Mthodes utilises :
Le photopriodisme dsigne les ractions de certaines plantes (et de certains animaux) une
alternance dfinie de lumire et dobscurit au cours dun cycle de 24h. Chez les vgtaux la
mise fleur constitue la raction essentielle, mais dautres ractions comme lentre en
dormance, labcission sont sous contrle photopriodique.
Chez les animaux, la maturation des gonades chez les oiseaux (induction par jours longs)
linitiation de la diapause chez les insectes, la migration des oiseaux (induction par jours
courts) sont des phnomnes contrls par la photopriode.
A lEquateur, Borno, la dure du jour et de la nuit est identique toute lanne. Au fur et
mesure que lon monte en latitude dans lhmisphre Nord ou que lon descend dans
lhmisphre Sud on assiste des variations de plus en plus importantes des dures du jour
selon les saisons. Les plantes qui ont volu dans des conditions o lenvironnement lumineux
subissait des fluctuations lies aux changements de saison se sont adaptes ces conditions
pour mieux contrler leur dveloppement.
Il faut noter :
Que pour une mme latitude la dure relative des jours et des nuits est un paramtre de
lenvironnement qui se reproduit de faon absolument reproductible danne en anne
la mme date, cest donc 1 repre des saisons parfait.
Les exigences photopriodiques de nombreuses plantes sont extrmement strictes ce
qui explique le calendrier de floraison prcis observ : chrysanthme - fin octobre,
muguet fin avril.
Les travaux de Garner et Allard en 1920 sur la varit de tabac Maryland Mammoth
montrent qu lautomne, alors que les autres varits ont fleuri, celle-ci continue sa croissance
vgtative jusqu ce que le froid larrte. Si la plante est leve en serre elle forme ses fleurs
au dbut de lhiver en jour court. Si on sme les graines tardivement au dbut de lautomne la
floraison se fait comme prcdemment mais sur des plantes plus petites. La longue priode
vgtative observe dans la nature ne correspond donc pas une maturit de floraison
particulirement difficile atteindre.
Garner et Allard attriburent la mise fleur linfluence des jours courts ce quil vrifirent
par dautres expriences. Si en t, on met les plantes lobscurit avant la tombe de la nuit
de faon les soumettre une journe suffisamment courte : elles fleurissent.
Inversement la floraison peut tre empche en hiver grce un clairement dappoint donn
aux plantes la fin de la journe. La floraison de la varit de tabac Maryland
Mammoth dpend donc de la faon absolue dun facteur saisonnier la dure relative du jour et
de la nuit.
Des plants de Soja biloxi sems 15 jours dintervalle de Mai Juillet fleurissaient tous la
mme priode en septembre, malgr des diffrences de dveloppement vgtatif importantes ce
qui montre quil ne sagit pas dune maturit de floraison difficile atteindre.
Depuis ces recherches sur le photopriodisme se sont multiplies et ont abouti classer les
plantes selon leurs exigences photopriodiques.
a) Espces aphotiques : ces sont les espces peu nombreuses qui peuvent former
leurs bauches florales lobscurit cest le cas de la Jacinthe. On remarque que
toutes ont des rserves abondantes leur permettant une longue survie sans
photosynthse.
d) Plantes de jours longs : ces plantes ne peuvent fleurir que pour une
hmropriode suprieure une hmpriode critique galement caractristique
de chaque espce. On distingue galement des espces absolues ou prfrentes.
Remarque :
1. le terme de jour court ou de jour long ne signifie pas que la priode
dclairement est courte ou longue en valeur absolue ou mme par rapport
la priode dobscurit mais simplement que la floraison ninterviendra que
pour une dure dclairement plus courte ou plus longue que l hmpriode
critique.
Par exemple le Xanthium plante de jour court ne fleurit que pour une
photopriode infrieure l hmpriode critique 15 h. Il fleurira donc pour
une dure dclairement de 14 h 30 plus importante que la dure dobscurit
9h30 et galement plus importante que la dure dclairement compatible
avec la floraison de certaines plantes de jours longs Epinard HC de 11 13 h
selon les varits.
2. dune faon gnrale, les plantes originaires des zones tempres qui
fleurissent partir du milieu du printemps jusqu la fin de lt sont des
plantes de jours longs prfrentes ou absolues. Celles qui fleurissent plus tt
sont des plantes pralablement vernalises soit des plantes ayant initi leurs
bauches florales lanne prcdente et dont la dormance a t leve par le
froid. Les plantes qui fleurissent tard la fin de lt ou au dbut de
lautomne sont des plantes de jours courts.
Prcisons tout dabord que les vgtaux utilisent des signaux de lenvironnement diversifis
pour rguler la transition vers ltat reproducteur via la floraison. Ces mcanismes visent
vraisemblablement synchroniser la floraison de individus pour faciliter la pollinisation
croise et les brassages gntiques et les facteurs de lenvironnement efficaces sont ceux qui
prsentent une variabilit saisonnire importante : T, lumire, mais aussi secondairement
disponibilit en eau.
Ces facteurs peuvent se substituer les uns aux autres dans des cas particuliers. Pharbilis nil peut
tre induit fleurir dans des conditions de photopriode dfavorable par un changement de
temprature ou de conditions nutritives.
Dans le cas plus spcifique du photopriodisme les mcanismes supposs convertir le stimulus
lumineux initial en rponse physiologique appartiennent 3 catgories :
Sinapis alba est un systme modle intressant. Cette plante de jour long lorsquelle est ge
denviron 2 mois peut tre induite fleurir par une exposition un seul jour long.
La perception est effective au niveau des feuilles adultes. Linitiation de la transition
mristme vgtatif / mristme floral commence 2 jours aprs le traitement inducteur.
Lanalyse des exsudats au niveau des ptioles aprs exposition un seul jour long dmontre :
9 15 9 15
vgtatif floraison
660 660
floraison vgtatif
660+730 660+730
vgtatif floraison
La floraison fait partie des photorponses mixtes car la floraison peut tre induite ou inhibe
par la forme active du phytochrome selon quil sagit dune plante de jours courts ou de jours
longs et selon le moment ou la lumire est apporte (interruption nuit).
Dautres photorcepteurs que le phytochrome peuvent tre galement impliqus soit
indpendamment soit en combinaison avec le phytochrome.
Les plantes sont capables dapprcier de faon extrmement prcise la dure des priodes
lumineuses et obscures. Des diffrences dune vingtaine de minutes dans la dure du jour
pourront empcher la plante de fleurir.
Le Xanthium qui est une plante de jour court avec une HC de 15h40 ne fleurit pas pour une
hmropriode de 16h.
La plante est donc capable dapprcier avec une extrme justesse la dure du paramtre qui
constitue linformation photopriodique. Une thorie rendant compte de cette aptitude la
mesure du temps repose sur le concept des rythmes endognes (la chronobiologie).
Cette thorie suppose que la mesure du temps est relie au degr de concidence
(superposition) entre conditions lumineuses externes et oscillations internes de sensibilit la
lumire.
De nombreux phnomnes biologiques chez les plantes sont soumis des
fluctuations rythmiques. Les exemples les plus frquents concernent des
rythmes prsentant une priode de lordre de 24 heures Rythmes circadiens :
par exemple les mouvements de repliements nocturne des feuilles de Haricot :
Phaseolus multiflorus.
Dans le contexte de ltude de ces rythmes circadiens Bnning suggra lexistence dune
alternance chez les vgtaux de phase photophile et de phase scotophile.
Dans la phase photophile la lumire a un effet positif dans la phase scotophile la lumire un
effet ngatif ou pas deffets.
Il proposa galement que la rponse des plantes la lumire dans le cadre du photopriodisme
tait relie au moment dapplication de la lumire par rapport ces phases dun rythme
endogne.
Preuve exprimentale : Expriences de Hamner chez Soja biloxi (plante de jour court). Cette
plante fleurit normalement lorquelle est place dans une alternance de 12h jour/ 12h nuit.
Elle fleurit galement mais moins bien pour une alternance de 8h jour 64h nuit pour des
cycles anormaux de 72 h (7 cycles).
Lauteur interrompt la priode de nuit de 64 h par des priodes de lumire de 4h situes
diffrents moments (il faut ici se rappeler quun clair pendant la nyctipriode dune plante de
jour court peut empcher la floraison).
Il constata que la suppression de la floraison nintervient que si la lumire est apporte
certaines priodes. La lumire apporte pendant la priode ou la plante tait normalement
lobscurit inhibe la floraison phase scotophile.
La lumire apporte au contraire pendant la priode normalement diurne (phase photophile)
amliore la floraison.
Les rsultats dmontrent effectivement lexistence dun rythme de sensibilit la lumire
dans le cas de la floraison, avec lexistence successive de phases photophiles et scotophiles.
Lors des priodes o lclairement est sans action on pourrait penser une insensibilit
gnrale de la plante la lumire, en fait il nen est rien car il suffit de changer le critre de
rponse physiologique , en mesurant par exemple llongation de la tige pour sapercevoir que
la lumire via le phytochrome est parfaitement efficace : il y a donc perception du stimulus
lumineux et naissance dun signal lequel nest pas lu pour la rponse florale certaines heures
du cycle photopriodique.
Dans la rythmicit et la succession des phases photophiles et scotophiles le rythme est rajust
gnralement par le signal aube . Si lon prend le cas de figure dune alternance de 12h /
12h (photophile / scotophile) il est alors simple dexpliquer le comportement dune plante de
jour court qui aurait une hmropriode critique de 12 heures. Au-del de cette valeur la
lumire rentrant dans la phase scotophile la plante ne fleurit plus. La situation est cependant
plus complexe si lon considre que les plantes ont des hmropriodes critiques variables et
quil existe galement des plantes de jour long !
Le 3me aspect est celui de la conversion de laction de la lumire en information utilisable
pour la floraison. Nous aborderons ces problmes avec les aspects molculaires de la
floraison.
Les espces les plus largement distribues la surface du globe sont les espces indiffrentes.
On peut cependant observer comme nous lavons vu pour Arabidopsis thaliana lexistence de
diffrentes varits pour une mme espce avec diffrentes exigences de photopriode.
Espces cultives :
Les varits primitives despces comme le soja, le sorgho, dorigine tropicale sont des
plantes de jours courts. Quand ces plantes sont transfres directement des latitudes plus
leves le besoin en jours courts est obtenu trop tard dans la saison pour que ces varits
soient productrices.
Ladaptation de ces cultures a exig la slection de varits moins sensibles la longueur du
jour. Du mas issu directement du Brsil atteint dans nos rgions 3 4 m de haut et ne fleurit
qu la fin septembre lorsque les jours ont moins de 12 heures. Ceci peut avoir un intrt dans
le cas de production de fibre (sorgho papetier) si lon peut se procurer facilement des graines
chaque anne.
Pour dautres rcoltes comme la betterave sucre, pour laquelle la floraison rduit le taux de
sucre la slection a t dans lautre sens c'est--dire vers une slection despces trs
strictement dpendantes de la longueur du jour. Souvent ces slections ont t accomplies
avant que lexplication du processus soit connue (contrle de la floraison par la lumire).
Quand les plantes fleurs ont atteint un certain dveloppement des signaux de
lenvironnement peuvent dclencher la transition vers le dveloppement floral.
Le mristme apical arrte de produire des primordia foliaires et se met produire des
primordia dorganes floraux : ptales, spales, tamines, carpelle.
Les nombreuses tudes de gntique sur le dveloppement de la fleur ont conduit conclure
que ce processus de dveloppement est dtermin par un rseau trs complexe et conserv de
gnes oprant en cascade et qui sexpriment dans diffrents territoires spcifiques. La
diffrenciation est, en effet un problme dexpression spatio-temporelle particulire de gnes
spcifiques.
Toutes les cellules dun vgtal contiennent les mmes gnes seuls certains dentre eux vont
sexprimer lors de la formation de certains organes. Les tudes sur des mutations qui
affectaient la dure de temps ncessaire pour fleurir ou perturbaient la nature et la structure
normale de la fleur ont permis didentifier diffrents gnes que lon peut classer dans les 4
catgories suivantes.
Il est signaler cependant que des mutants qui restent indfiniment ltat vgtatif nont pas
t observs, ceci suggre quil existe certainement une redondance entre les gnes qui
induisent la floraison et que linactivation de lun dentre eux est partiellement compense par
dautres.
Par ailleurs, dans les tudes sur Arabidopsis diffrentes voies de promotion de linduction
florale relativement indpendantes selon les varits ont t mises en vidence : une induction
autonome soit une induction par lacide gibberellique ou par les facteurs de lenvironnement
(vernalisation, photopriode).
Chez Arabidopsis la floraison est stimule par les jours longs et chez certains cotypes par les
tempratures froides (vernalisation).
De nombreux mutants floraison tardive sous conditions inductives ont permis didentifier de
nombreux loci impliqus dans la floraison.
Mutant de type FCA : retard de floraison dans nimporte quelle condition de jour FCA a t
clon il code une protine qui contient deux domaines de liaison lARN et un domaine
ww typique des interactions entre protines suggrant quil sagit dun facteur rgulateur post
transcriptionnel (2 tryptophanes spars par un motif consensus conserv).
Par ailleurs, le mutant Co prsente un retard dans la floraison en jour long et une rponse
rduite la vernalisation.
La protine correspondante Co contient 2 doigts de Zinc suggrant sa capacit de liaison
lADN et son implication dans la rgulation de lexpression gnique. Son ARN est plus
abondant en jour long. Des mutations sur les rgions doigt de Zinc abolissent la fonction.
Le mristme apical caulinaire donne des feuilles, des entre nuds, et des bourgeons
axillaires. Il peut aprs sa transformation en mristme floral donner des organes floraux.
Le mristme floral prsente une activit dtermine de divisions cellulaires et
dorganognse rsultant dans la production de 4 cercles dorganes floraux (spales, ptales,
tamines et carpelles). Chez Arabidopsis spales et ptales sont des organes protecteurs puis
quand la fleur arrive maturation ces organes jouent un rle dattraction des insectes
pollinisateurs.
En retenant comme plante modle Arabidopsis thaliana des tudes de gntique classique et
de gntique molculaire ont permis de caractriser divers gnes associs la transition
mristme vgtatif mristme floral.
Exemple gne Leafy = LFY. Des mutations de LFY causent un blocage de la transition
mristme vgtatif / mristme floral. Les fleurs sont remplaces par des pousses feuilles.
Hypothse : la protine code par LFY serait un facteur de transcription car elle contient une
rgion riche en proline et des rgions acides et basiques caractristiques des facteurs de
transcription.
Une fonction de Leafy serait dagir comme dclic gntique du dveloppement de la fleur en
rgulant positivement lexpression en aval de gnes homotiques. LFY est le 1er gne tre
activ durant la transition. Lexpression du gne est dtectable avant apparition des primordia
et sarrte quand les 4 types dorganes sont en place.
Ces gnes interviennent en aval des gnes didentit de mristme floral et en amont des
gnes de construction des organes floraux.
Le modle ABC propos par Meyerowitz, implique des gnes dont lexpression se produit
dans 3 domaines A. B. C.
Ce modle rsulte des rsultats de lanalyse des pertes de fonction de certains gnes.
1. Ces gnes correspondent des gnes appels homotiques. Des mutations qui
transforment des parties de lorganisme en structures normalement associes
dautres positions / localisations sont appeles homotiques.
Des mutants homotiques ont t initialement trouvs chez la drosophile
remplacement des antennes par des pattes remplacement des yeux par des ailes.
Ces gnes homotiques ont des caractristiques communes de gnes bote MAD
(MAD box genes) codant des facteurs de transcription comprenant un domaine amino
terminal de fixation de lADN de 58 ac. amins trs conserv.
Chez ces protines le domaine MAD fonctionne la fois dans linteraction avec
lADN et avec des protines (protein-protein interaction) et est hautement conserv au
niveau des contrles dveloppementaux chez diffrents organismes.
2. Ces gnes sont trs conservs entre les espces (A. thaliana et Anthirinium majus par
exemple), ils discriminent les types dorganes floraux mais ne donnent pas
dinformations ou dinstructions sur le dtail de la construction des organes floraux
qui implique des gnes ralisateurs en aval.
Ces gnes ont t caractriss initialement partir de mutations naturelles ou provoques puis
par des expriences de gne tagging (TDNA) conduisant au mme phnotype.
Apetala 2 ptale/spale
Apetala 3 ptale-tamine
Agamous Etamines-carpelles
Lexpression tissu spcifique des gnes homotiques est contrle essentiellement par des
intractions ngatives. Par exemple lexpression du gne agamous (classe C) est rprime
dans les cercles extrieurs par le gne de classe A apetala 1. Lactivation initiale des gnes
homotiques est ralise au moins en partie comme cela a t dit par les produits de gnes
exprims plus prcocement comme les gnes didentit du mristme floral de type LEAFY.
Des gnes autres que les gnes didentit dorganes doivent contrler le nombre dorganes
dans chaque rang puisque les mutations de ces gnes naltrent pas le nombre dorganes mais
seulement leur identit.
Un exemple rcent :
Le contrle de la floraison, un rseau complexe dinteractions entre facteurs inducteurs et
rpresseurs : cas particulier de la rgulation du dveloppement des fleurs par GA (Yu et al
PNAS 2004 101 20 7827).
Chez Arabidopsis le mutant Ga1-3 dficient en gibberelline dveloppe des fleurs dont la
croissance est nettement retarde au niveau des diffrents organes floraux qui conservent
cependant leur identit.
Les progrs dans la connaissance des mcanismes daction des gibberellines conduisent
penser que ces hormones contrlent le dveloppement en supprimant un groupe de protines
nuclaires fonction de rpresseurs : les protines DELLA qui contiennent en commun un
domaine N-terminal DELLA qui serait impliqu dans linactivation de ces protines par le
signal GA. Il existe 5 protines DELLA dans le gnome dArabidopsis (GAI, RGA, RGL1,
RGL2, et RGL3). GA entranerait la disparition de ces protines represseurs en induisant leur
dgradation par lintermdiaire de mcanismes ubiquitine / protasome dpendants.
Comme ces protines ne renferment pas de domaines typiques de liaison lADN il est
suppos que ces rgulateurs transcriptionnels formeraient des complexes actifs avec dautres
facteurs de transcription pour contrler lexpression des gnes.
Il a t montr que la suppression de RGA et de RGL2 (mutations sur les gnes de ces
protines DELLA) restaure un dveloppent floral normal chez le mutant ga1-3 indiquant leur
rle de rpresseur dans le dveloppement des fleurs.
LEAFY un gne en amont nest pas affect. En revanche les gnes homotiques APETALA 3
et AGAMOUS sont induits par GA et rprims par RGA.
Ces rsultats montrent que la croissance des organes floraux ncessite lexpression continue
de certains gnes homotiques.
Il faut enfin mentionner que les protines DELLA intervenant dans le contrle dune large
gamme de processus du dveloppement, leur implication dans la floraison doit faire intervenir
des rgulateurs fleur-spcifique.
Schma rcapitulatif :
Gnes intermdiaires
Gnes ralisateurs
Les gnes encadrs dun rectangle sont des gnes homotiques bote MAD
Plus de 80 gnes ont t impliqus dans le contrle de la floraison chez Arabidopsis.
Ces gnes codent frquemment des rgulateurs transcriptionnels et sont en
interactions positives ou ngatives dans un rseau extrmement complexe. Les gnes
domaines MAD ont un rle prpondrant.
En particulier, chez les annuelles la snescence nest pas due des conditions externes
dfavorables (elle peut tre acclr par ces facteurs), mais des rgulations internes, il sagit
dun vnement programm. La snescence peut donc se dvelopper en absence de toute
condition extrieure dfavorable mais le froid, la scheresse, lombrage, llimination de
certains organes de la plante peuvent linduire et lacclrer.
On a souvent rapproch la snescence de lapoptose ou mort cellulaire programme
chez les animaux (PCD).
Enfin on peut voquer le terme doncose pour dsigner la mort accidentelle de cellules de
plante qui ne sont plus capables de rparer les dommages causs par le stress.
Espces prennes : Les herbaces peuvent voir leur systme arien mourir chaque anne en
conditions dfavorables mais leur systme racinaire reste en vie et permet le dpart de la
vgtation au printemps.
Chez les arborescentes feuilles caduques
seules les feuilles, les fleurs et les fruits entrent en snescence. Le tronc, les branches, les
bourgeons et les racines restent en vie.
Chez les arborescentes feuilles
persistantes, les feuilles les plus ges deviennent snescentes aprs une priode variables de
1 7 ans alors que les feuilles jeunes continuent crotre et larbre est toujours couvert de
feuilles.
Il existe bien sr des diffrences lies aux caractristiques gntiques, certaines espces ayant
des longvits exceptionnelles, ex : Pinus aristata 4000 ans (Juniperus ostreatus) mais des
maladies, des stress divers, des conditions dfavorables de nutrition, la difficult accrue des
changes au sein de lindividu avec laugmentation de ses dimensions peuvent favoriser la
snescence.
La snescence a t essentiellement tudie chez les feuilles, les fleurs et les fruits (nous
avons parl des fruits propos du contrle de la maturation par lthylne, dbut dune phase
de snescence, nous considrons seulement ici le cas des feuilles).
a) Modifications visibles :
Changement de coloration des feuilles couleur automnale due la
disparition de la chlorophylle qui ne masque plus les carotnodes
de couleur jaune-orange et/ou la synthse de pigments
anthocyaniques rouges/roses.
b) Modifications ultrastructurales :
c) Modifications biochimiques :
La vacuole jouerait un rle particulirement important dans la snescence avec son rle
lysosomal. Elle renferme en effet des hydrolases normalement spares du cytoplasme et la
dtrioration de la membrane vacuolaire (le tonoplaste) permettrait la libration de protases,
nuclases, phosphatases qui hydrolyseraient les constituants cytoplasmiques.
Des tudes avec des techniques comme la RPE (rsonance de spin paramagntique) montrent
une augmentation de ces radicaux avec la snescence alors que les enzymes de dtoxification
des radicaux :peroxydase, catalase, superoxyde dismutase voient leur activit diminuer.
Causes nutritives :
Cette hypothse propose que la snescence des feuilles serait induite par une carence
en ressources nutritives en raison du prlvement de mtabolites pour la formation des fleurs,
des graines et des fruits : organes non photosynthtiques.
Ceci est en accord avec la snescence des espces monocarpiques qui dbute avec la
floraison. Cependant cette hypothse intressante ne peut-tre gnralise. En effet, ces
observations ne sont pas retrouves chez dautres espces comme les crales. Par ailleurs, sur
certaines espces dioques (Epinard) llimination des fleurs mles a le mme effet que
llimination des fleurs femelles dont les besoins nutritifs sont beaucoup plus importants.
Par ailleurs, lapport massif dengrais, de substances nutritives ne retarde pas la snescence
chez les plantes ayant fleuri, il semble donc que la floraison soit lorigine dun signal
systmique marquant le dbut de la snescence.
Causes hormonales :
Leffet antisnescence des cytokinines est classique il peut tre en partie expliqu au plan
mcanistique par une stimulation de la synthse protique et un effet de rtention des
mtabolites en prsence des cytokinines (effet MOTHES).
On observe une rduction des teneurs en cytokinines ou de lexcrtion de cytokinines au
niveau des exsudats racinaires (Tournesol) lors de linstallation de la snescence.
Lapport de cytokinines exognes (mais aussi dautres hormones comme GA3 ce qui suggre
un contrle multihormonal) retarde la snescence.
Par ailleurs diverses expriences de transgnse visant surexprimer le gne de
lisopentenyltransfrase (IPT) dans diffrentes conditions en particulier en association avec
des promoteurs de gne SAGE montrent un retard spectaculaire de la snescence.
Lthylne a par ailleurs un effet inducteur de la snescence particulirement net chez les
fleurs.
Il sagit dun processus trs adapt de rcupration utile des nutriments forms par la
plante au cours de son dveloppement vgtatif.
Les tudes ont surtout port sur les protines et sur la protine foliaire la plus abondante : la
Rubisco.
Nous avons dj parl du problme de la conservation des fruits. En ce qui concerne les
fleurs et les feuilles diffrentes stratgies ont t explores.
Tout dabord il faut noter que peu de mutants affects dans la snescence ont t
caractriss. On peut signaler le mutant Arabidopsis Ore 9 qui correspond la perte de
fonction dune protine F Box composante des systmes de protolyse ubiquitine
dpendant. Ce qui confirme limplication de ce systme dans la snescence.
Pour les feuilles une proccupation des slectionneurs est de privilgier chez certaines
cultures le phnotype stay green qui permet un maintien prolong de lactivit
photosynthtique.
Des expriences exploratoires de transgnse ont t envisages
Par surexpression du gne IPT
Par surexpression de gne de superoxyde dismutase ou de catalase.
Par ailleurs un traitement aprs rcolte (laitue par exemple) par acide ascorbique, EDTA ou
GA3, a t envisag pour viter jaunissement et fltrissement.
Pour les fleurs (la fleur coupe na pas achev sa croissance en gnral lors de la vente), des
solutions nutritives visant 2 objectifs sont commercialises (type SEVAFLOR) afin
damliorer la conservation
VI-C6 Labcission :
La phase finale de la snescence en ce qui concerne les organes comme les feuilles, les fleurs
et les fruits consiste en leur sparation de la plante mre lors du phnomne dabcission.
A ce niveau se produit avant labcission une priode de divisions cellulaires intenses qui
aboutit la mise en place de la zone d abcission. Cette zone comprend des cellules
petites parois minces et se met en place des priodes diffrentes avant labcission
selon les espces.
Il se produit ensuite une augmentation des activits enzymatiques : pectinases, cellulases
au niveau de cette zone dabcission entranant la lyse de parois des cellules. Les cellules
se glifient et la feuille nest plus retenue que par les faisceaux conducteurs qui seront
rompus mcaniquement par le vent. Enfin une couche de cicatrisation subrise se met
en place (lige) qui protge la section au niveau de la tige des pertes deau et de
linvasion des pathognes.
VI-C6- b- Mcanismes :
Nous avons dj prcis propos de lABA que cette hormone ne reprsentait pas le vritable
facteur de labcission. Il sagit comme dans de nombreux cas dun contrle plurihormonal.
LAIA produit par la feuille retarde l abcission tant que la feuille est jeune (des rsultats
contradictoires ont t initialement obtenus en relation avec lapplication dAIA exogne lie
la production secondaire dthylne). Au cours de la snescence lauxine diminue
progressivement (lablation du limbe producteur dauxine acclre labcission. Les
cytokinines et gibberellines retardent galement labcission.
A partir dun certain moment il y aurait dans les tissus snescents production dthylne qui
stimule la production denzymes dhydrolyse (cellulases pectinase) actives dans labcission.
Lors de la snescence des feuilles, dans le cas des espces prennes, les constituants de petits
poids molculaire rsultant de lhydrolyse des rserves (protines par exemple) migrent soit
vers les bourgeons dormant soit vers les rayons ligneux du bois (files de cellules
parenchymateuses) o ils seront rutiliss ds le dpart de la vgtation au printemps. Le
contenu en substances minrales et en matire organique des feuilles aprs abcission ou de
lorganisme entier pour les espces monocarpiques sera repris dans les phnomnes
dhumification (formation de lhumus) et aprs passage par les cycles des lments de la
biosphre pourra tre rutilis par la vgtation.