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Prambule

Cette version du cours de Biologie du dveloppement des plantes constitue un cadrage


gnral, qui reprend des lments acquis en licence, les complte et les dveloppe.

Elle peut tre considre comme une base indispensable pour assimiler des donnes plus
approfondies prsentes en cours ou procder des recherches bibliographiques personnelles
dans le cadre des travaux dirigs.

Cette articulation du cours est complte par un fascicule de figures qui pour le moment nest
pas disponible en version lectronique mais sera communiqu ds le commencement du
module aux tudiants.

Bonne lecture, Bon travail !

BIOLOGIE DU DEVELOPPEMENT DES


PLANTES
CHAPITRE I : INTRODUCTION GENERALE

CHAPITRE II - LE DEVELOPPEMENT VEGETAL : CROISSANCE ET


DIFFERENCIATION

II A - LA CROISSANCE :

II-A1- Les deux composantes de la croissance :


II-A1-a- La division cellulaire :
II-A1-b- Grandissement cellulaire :

II A 2 -Relations entre croissance et mtabolisme (besoin nergtiques et en


matriaux de base)
II A 2-a- Besoins en molcules de base :
II A 2-b Besoins nergtiques :

II-A3-Mesure de la croissance :
II-A3- a-La croissance de lorganisme ou dun organe :
II-A3- b- Mesure des composantes individuelles de la croissance sur l organe
donn

II-A4- Localisation de la croissance dans lespace et dans le temps


II-A4-a- Dans lespace : les Mristmes
II-A4-b- Dans lespace : les zones dlongation
II-A4-c- Localisation de la croissance dans le temps :

II-A5- Cintique de la croissance Vitesse de croissance :

II-A6- Vitesse de croissance


II-A6 a- Relation avec lefficacit photosynthtique :
II-A6 b- Vitesse de croissance et choix des espces cultives :
II-A6 c- Croissance vgtale et associations symbiotiques :

CHAPITRE III : LES HORMONES VEGETALES


III-A -LES FACTEURS QUI CONTROLENT LE DEVELOPPEMENT ET LEURS
INTERACTIONS :

III-B-GENERALITES SUR LHORMONOLOGIE VEGETALE :


III-B- a - Notion dhormone et comparaison hormones vgtales hormones
animales :
III-B b- Les diffrents types dhormones vgtales :
III-Bc- Mthodes dtudes des hormones vgtales et de leurs mcanismes
daction :
III-B d- Notion de rcepteur hormonal :
III-B- e- Un exemple dapproche biochimique pour la caractrisation de rcepteur
hormonal : le marquage par photoaffinit
III-B- f- Un exemple dapproche gntique pour la caractrisation de rcepteur
hormonal : le cas des rcepteurs de lthylne
IIIC- LACIDE INDOLACETIQUE ET LES AUXINES
IIIC a- Nature chimique des auxines :
IIIC- b- Rpartition et volution dans la plante
IIIC- c- Facteurs intervenants dans la rgulation du taux dauxine Biosynthse
Dgradation Transport Inactivation :
IIIC- d- Diversit des effets biologiques. Exemple particulier de la croissance
des fruits :
IIIC- e- Mcanismes daction dans le phnomne de grandissement cellulaire :
IIIC- f- Les rcepteurs dauxine :
IIIC- g- Lauxine et le contrle de lexpression des gnes :

IIID- LES GIBBERELLINES :


IIID a Historique Dcouverte :
IIID b-Nature Chimique et Diversit des Gibbrellines Naturelles :
IIID c Biosynthse et Mtabolisme des Gibberellines :
IIID- d- Les Gibberellines dans la plante Rpartition- Transport :
IIID eEffets Physiologiques :
IIID f- Mcanismes Molculaires daction des Gibbrellines :
IIIDg Modification des taux de Gibberellines chez les plantes par gnie
gntique :

IIIE - LES CYTOKININES


IIIE a- Historique et dcouverte :
IIIE b- Nature chimique :
IIIE c- Biosynthse Mtabolisme
IIIE d- Cytokinines dans la plante :
IIIE e- La perception et la transduction du signal cytokinine :
IIIE f- Ingnierie de la production des cytokinines :

IIIF - LETHYLENE
IIIF a- Dcouverte du rle hormonal :
IIIFb Production par la plante :
IIIFc Voies de biosynthse et rgulation de la synthse :
IIIFd Effets physiologiques :
IIIFe Mcanismes daction de lthylne :
IIIFf Applications biotechnologiques :

IIIG LACIDE ABCISSIQUE


IIIG a Historique Dcouverte :
IIIG b Nature chimique Biosynthse :
IIIG c Effets physiologiques et mcanismes daction :

IIIH - LES BRASSINOSTEROIDES


IIIH a- Dcouverte , Historique :
IIIH b- Structure et Biosynthse des Brassinostrodes :
IIIH c- Effets physiologiques des brassinostrodes :
IIIH d- La perception et la transduction des brassinostrodes :

CHAPITRE IV - LES PHOTORECEPTEURS CHEZ LES VEGETAUX


IVA - INTRODUCTION :
IVB LE PHYTOCHROME :
IVB1 Dcouverte du phytochrome :
IVB2 Gnralisation des rsultats : Universalit du Phytochrome Diversit des
effets :
IVB3 Mthodes dtude du phytochrome :
IVB4 Structure du phytochrome :
IVB5 - Photorversibilit
IVB6 Proprits du phytochrome in vivo :
IVB7 La multiplicit des phytochromes :
IVB8 -Mcanismes daction et chane de transduction du signal lumire :

IVC- LES CRYPTOCHROMES :

IVD-LES PHOTOTROPINES :

CHAPITRE V - LE DEVELOPPEMENT VEGETATIF A LECHELLE


DE LA PLANTE ENTIERE

VA- LES CORRELATIONS DE CROISSANCE


VA1 Interactions systme radiculaire systme arien :
VA2 Les corrlations entre bourgeons la dominance apicale :
VA2- aMise en vidence :
VA2- b- Mcanisme de la dominance apicale :
VA2- c - Autres phnomnes influenant la forme, larchitecture des vgtaux :

VB- LA DORMANCE DES BOURGEONS UN EXEMPLE DE PERIODICITE


SAISONNIERE :
VB- a- Notion de vie ralentie et de vie active
VB b- Les deux types de vie ralentie :
VB c- La dormance des bourgeons :
VB c-1- Signification biologique de la dormance en relation avec
ladaptation aux conditions de vie dfavorables :
VB c-2- Lentre en dormance :
VB c-3- La leve de dormance :
VB c-4- Contrle hormonal de la dormance :
VB c-5- Variabilit de la profondeur des dormances :

CHAPITRE VI : LES PRINCIPALES ETAPES DU CYCLE DE


DEVELOPPEMENT

VI A PHYSIOLOGIE DE LA GERMINATION :
VI-A1- Introduction Problme de terminologie concernant la germination :
VI-A2- Conditions de formation et viabilit des graines :
VI-A3- Aspects biochimiques de la germination
VI-A4- Aspects Physiologiques de la germination :
VI-A5- Lindustrie des semences en France :
VI-A6- La graine organe cible pour les transformations gntiques :

VI-B- PHYSIOLOGIE DE LA FLORAISON


VI-B1- Conditions de la floraison :
VI-B2- La Vernalisation :
VI-B2- a- Mise en vidence :
VI-B2- b- Classification des espces :
VI-B2- c- Caractristiques du phnomne de vernalisation :
VI-B2- d- Mcanisme hypothtique de la vernalisation :

VI-B3- Le photopriodisme : Exigences photopriodiques :


VI-B3- a- Mise en vidence de linfluence de la photopriode sur linitiation
florale :
VI-B3- b- Classement des espces suivant leurs exigences photopriodiques :
VI-B3- c- Etudes physiologiques des mcanismes induisant la floraison en
rponse la photopriode
VI-B3- d- Intervention du phytochrome et dautres photorcepteurs dans
le contrle de la floraison problme de la mesure du temps
VI-B3- e- Photopriodisme et rpartitions des espces :
VI-B3- f- Aspects molculaires de la diffrenciation florale :

VI-C- PHYSIOLOGIE DE LA SENESCENCE


VI-C1- Modalits de la snescence selon les types de vgtaux :
VI-C2- Modifications lies la snescence :
VI-C3- Les causes de la snescence
VI-C4- La snescence foliaire une tape de remobilisation des lments
nutritifs pour le remplissage des graines.
VI-C5- Approches Biotechnologiques visant diffrer la snescence :
VI-C6 Labcission :
VI-C6- a- Description du phnomne :
VI-C6- b- Mcanismes :
CHAPITRE I : INTRODUCTION GENERALE

Ce cours porte sur les mcanismes et les facteurs influenant le dveloppement des vgtaux,
lacquisition de leur taille, de leur forme et de leurs fonctions.
Notre anthropomorphisme conduit souvent considrer ces problmes comme secondaires.
Cela se traduit par leffort de recherche consacr aux organismes animaux qui est 10 20 fois
plus lev que celui consacr aux plantes. Il est vrai que le dbouch dans le cas de la biologie
animale est la sant et la longvit humaine.
Pourtant les plantes, producteurs primaires dans la biosphre, sont la source directement ou
indirectement de nos aliments, matriaux, sources dnergie, substances thrapeutiques et sont
indispensable au fonctionnement des cosystmes.
Toutes ces proprits sont lies lautotrophie des vgtaux par rapport au carbone travers
la photosynthse, lmission doxygne qui en rsulte et lextraordinaire potentiel de
synthse chimique des plantes conduisant des molcules trs diversifies.
Lvolution qui a conduit aux 240 000 espces de plantes fleurs actuellement recenses,
sest accompagn de diffrentes stratgies adaptatives aux plans morphologiques et
biochimiques et aux plans de tolrance ou de lutte contre les stress biotiques et abiotiques.
Ces stratgies trs efficaces indispensables pour un organisme immobile comme la plante sont
de plus en plus dcryptes dans le cadre de ce quon appelle parfois lcologie biochimique
pour ce qui est des interactions avec les facteurs biotiques.
Ces aspects adaptatifs peuvent tre illustrs ici de faon simple 2 niveaux

1. le rle de polymres dans lacquisition du port dress des vgtaux (lignines) et de


lhomohydrie (cutine).
Les lignines polymres phnoliques dposes dans les parois qui sont apparues chez
les plantes vasculaires il y a 350 millions dannes ont confr aux cellules vgtales
une rigidit compatible avec le dveloppement de vgtaux de grande taille et
secondairement un systme vasculaire (passage des bryophytes aux ptridophytes).
La cutine revtement de surface des feuilles de nature lipidique empchant
lvaporation de leau a contribu au maintien contrl de ltat hydrique des tissus,
les changes ne se produisant plus de faon extrmement rgule quau niveau des
stomates.
2. la production par les plantes de substances attractives ou rpulsives vis--vis des
insectes selon des stratgies sophistiques faisant mme intervenir des
communications chimiques entre plantes.

Toutes ces adaptations font des plantes terrestres un grand succs volutif puisquelles ont
colonis toutes les latitudes sous tous les climats.

Dans ce contexte volutif il faut souligner que la photosynthse est un vnement ancien (3
milliard dannes chez les bactries procaryotes) par rapport linvasion par les plantes du
milieu terrestre 400 millions dannes.

Dune faon gnrale, la plante dispose dune panoplie de diffrentes variantes de


programmes dexpression gntique. Elle se dveloppe dans un environnement fluctuant et
agressif. Face chaque type de contraintes la plante est capable de slectionner dans cet
ensemble des programmes gntiques de rechange dont la ralisation permet une meilleure
adaptation aux nouvelles conditions.
Cette aptitude utiliser des signaux environnementaux pour piloter lexpression du gnome
est une spcialit du monde vgtal connue sous le nom plasticit phnotypique.
La biologie du dveloppement chez les plantes en diffrentes tapes :

mergence de la discipline 1870 Julius Sachs


1870-1970 Approche corrlative relevant de la physiologie traditionnelle
1970-2000 Approche mcanistique impliquant de faon croissante la biochimie, la
biologie et la gntique molculaire
2000- Approches intgres exploitant les donnes de la gnomique (microarray, high
throughput biology)

Les conclusions de ce dernier type dtudes dmontrent lexistence de rseaux dinteractions


extrmement complexes entre les gnes et leurs produits dexpression pour le contrle du
dveloppement.

Les dmarches mcanistiques et intgres font appel aux techniques suivantes :

= clonage et identification de gnes


= expression spatio-temporelle des gnes
= expression htrologues des gnes et production de protines
recombinantes pour ltude des relations structure/fonction
= obtention de mutants, de plantes transgniques
= phnotypage par techniques biochimiques et physiologiques
= tude des ractions croises entre gnes (cross-talk) et de lexpression
globale du gnome.

En Biologie du dveloppement des plantes malgr des projets rapides de nombreux


mcanismes restent mal compris ou seulement en partie expliqus, le dterminisme de la
floraison par exemple.
Comment expliquer ces insuffisances, ces retards qui vous apparatrons parfois dcevants.

1. les vgtaux que nous allons considrer sont des pluricellulaires donc prsentent un
fonctionnement beaucoup plus complexe que des bactries ou des unicellulaires
(relations transport entre cellules).
2. les vgtaux ont par rapport aux animaux un fonctionnement parfois plus complexes et
surtout au niveau du rle de lenvironnement sur la physiologie. Lintgration des
fluctuations de lenvironnement reprsente ainsi une dimension supplmentaire
particulirement complexe.
3. leffort de recherche sur le fonctionnement des vgtaux est rcent et quantitativement
est beaucoup moins important que celui consacr ltude du fonctionnement des
animaux comme cela a t dit plus haut.

Les retombes pratiques des tudes de Biologie du dveloppement.

Lamlioration des rendements et de la productivit agricole est classiquement due pour


lessentiel 3 facteurs :

lamlioration gntique
les engrais
les pesticides

Dans un contexte de dveloppement durable et dagriculture raisonne ou la rduction des


intrants devient maintenant une obligation, la progression des connaissances en Biologie
du dveloppement autorise des avances dans des domaines associs lamlioration
gntique ou des domaines associs la production :

identification des gnes utiliss pour la slection gntique ou la


transgnse
matrise de la culture in vitro
rgulateurs de croissance utiliss en agriculture inspirs des effets des
hormones naturelles
meilleure exploitation des facteurs du milieu dans le cadre des cultures
en serres ou enceintes climatiques.
Retombes pratiques dune meilleure connaissance du dterminisme et
contrle des tapes du dveloppement germination, floraison,
snescence.

Dfinitions

Le terme de dveloppement tel que nous lutiliserons reprsentera lensemble des


modifications dordre quantitatif et qualitatif qui se droulent au cours de la vie de la plante.

En effet lorsque lon examine un organisme vgtal en fonction du temps on peut observer
des diffrences chaque examen.

En considrant uniquement les variations irrversibles (une plante peut passer dun tat de
fltrissement un tat turgescent il sagit alors dune modification rversible), celles-ci
peuvent tre dordre quantitatif. Elles correspondent alors la croissance. Une tige pourra tre
plus haute, un tronc plus pais, etc On dfinit la croissance dun organisme comme
laugmentation irrversible de ses dimensions (hauteur, diamtre, longueur) ou dune
grandeur lie une de ses dimensions (masse, volume, surface). Grossirement la
croissance est un accroissement de taille il sagit dune variation toujours mesurable.
Les modifications observes peuvent galement tre dordre qualitatif on parle alors de
diffrenciation. Ces modifications se traduisent par lacquisition de proprits nouvelles
morphologiques ou fonctionnelles lchelon cellulaire ou de lorgane qui faut parfois
franchir au vgtal une tape bien particulire de sa vie (ex : la floraison).

La diffrenciation peut tre considr comme un accroissement en complexit, pas toujours


mesurable mais dcelable.

Le fait de rassembler croissance et diffrenciation sous le terme de dveloppement comprend


plusieurs avantages.

Cela correspond au sens commun de dveloppement, se dvelopper


(saccrotre mais se transformer)
On retrouve cette ide dans lexpression cycle de dveloppement

On regroupe sous un seul terme 2 types de phnomnes qui se droulent le plus souvent
simultanment.
Un autre terme plus rarement utilis est Morphognse (parfois synonyme de
dveloppement) qui au sens thymologique signifie acquisition de la forme. Le terme a t
souvent retenu dans lexpression photomorphognse.

Ce cours considrera les problmes de dveloppement chez les spermatophytes ou plantes


graines et plus particulirement chez les angiospermes qui reprsentent la grande majorit des
plantes cultives.
La vie dune angiosperme qui dbute avec la germination dune graine par exemple peut se
drouler selon des modalits qui sont parfois trs diffrentes dans le temps (quelques mois
nombreuses annes) ou dans lespace (la taille et la forme peuvent tre diffrentes), mais dans
tous les cas la plante vise atteindre ltat reproducteur, c'est--dire assurer la perptuation
de lespce, par la production des fleurs, puis de fruits et de graines.

Les agriculteurs, horticulteurs parlent du temps o les conditions ncessaires pour mener une
plante de graine graine. Cette ide de boucle ferme se retrouve dans la notion de cycle de
dveloppement c'est--dire la succession des diffrentes tapes de la vie dune plante qui dans
le cas le plus simple des espces monocarpiques annuelles se droule au cours dune mme
anne (quelques mois).
CHAPITRE II - LE DEVELOPPEMENT VEGETAL :
CROISSANCE ET DIFFERENCIATION

Le dveloppement dune plante c'est--dire lacquisition de sa taille de sa forme et de son


architecture finale rsulte dune srie dvnements lmentaires qui schmatiquement
correspondent comme nous lavons dit :

A la croissance de lindividu : une augmentation irrversible de la taille et de sa


masse.
A sa diffrenciation : une augmentation de complexit et une diversification des types
cellulaires.

II A - LA CROISSANCE :

II-A1- Les deux composantes de la croissance :

La croissance des vgtaux suprieurs provient au niveau cellulaire la fois

Dune augmentation du nombre de cellules (croissance par mrsis de


mristein : partager)
Dun agrandissement de cellules prexistantes (croissance par auxsis de
anxein : crotre)

Les deux phnomnes ne se produisent pas dans les mmes territoires de lindividu et
interviennent simultanment ou squentiellement.

II-A1-a- La division cellulaire :

Elle comprend :

La caryokinse ou mitose (formation de 2 noyaux)


La cytokinse qui correspond la sparation de 2 cellules filles suite la
formation dune paroi.

Nous parlerons ici uniquement de la cytokinse, la mitose tant classiquement bien connue.

La cytokinse suit gnralement la mitose mais dans certains cas peut tre dcale dans le
temps. On peut avoir galement plusieurs divisions du noyau sans formation de nouvelles
parois. On aboutit alors des structures coenocytiques (comme lalbumen des graines),
cependant transitoires car un cloisonnement intervient secondairement.
Le premier vnement de la cytokinse consiste en lagrgation de vsicules provenant du RE
et de lappareil de Golgi autour du reste du fuseau achromatique (le phragmoplaste) pour
constituer la plaque cellulaire qui stend de faon centrifuge ( la diffrence des animaux ou
la division cellulaire rsulte dun pincement de la cellule par un anneau contractile). Les
vsicules fusionnes vont donner les 2 membranes plasmiques des 2 cellules filles et
lextrieur vont se mettre en place les nouvelles parois et la lamelle moyenne.
Des interruptions dans la plaque cellulaire vont permettre la formation de plasmodesmes
lments de communication entre cellules. Les plasmodesmes reprsentent des structures
intressantes qui ont t bien tudies au cours des dernires annes. Le cylindre membranaire
associant 2 cellules est appel desmotubule il est en continuit avec les membranes
plasmiques et laisse passer leau et les substances dissoutes. Des tudes avec des sondes
fluorescentes non permantes travers les membranes ont montr quune limite dexclusion
de 1 Kda caractrisait les plasmodesmes. Cependant, au-del dun transport passif, un
transport actif slectif de certaines protines intervient travers le desmotubule (facteur de
transcription, protines de mouvement des virus..). En rponse certains stress (blessures) un
dpt de callose intervient pour boucher le plasmodesme et viter des fuites du contenu
cellulaire.
Par ailleurs, certaines cellules dont le fonctionnement exige un isolement et une tanchit ne
possdent pas de plasmodesmes (cas des cellules de garde des stomates qui ne communiquent
pas avec les cellules pidermiques voisines).
Enfin si pour lessentiel des plasmodesmes primaires sont mis en place au niveau de la plaque
cellulaire lors de la division cellulaire, des plasmodesmes secondaires peuvent tre forms
dans des situations particulires (greffes entre tissus).
Dune faon gnrale, la circulation de leau, des substances dissoutes et des macromolcules
se ralise chez les plantes dans deux espaces :

Le symplaste qui correspond lensemble des cytoplasmes en communication


via les plasmodesmes
Lapoplaste qui correspond au rseau de parois en contact les unes avec les
autres

Les plasmodesmes sont importants car ils permettent dans un systme pluricellulaire vgtal
la transmission de mtabolites et stimulus hormonaux dune cellule une autre, le
plasmalemme procurant cependant une isolement suffisant pour assurer un devenir
relativement indpendant de chaque cellule.

Le processus de division cellulaire ne modifie pas la structure gnrale des cellules filles qui
demeurent isodiamtriques de petite taille 10-20 de ct avec un fort rapport nuclo-
cytoplasmique et une vacuole de petite taille. Aprs chaque division la taille de la cellule
saccrot pour atteindre celle de la cellule mre avec une synthse nouvelle de matriaux des
parois et du cytoplasme.

Si la cytokinse prsente de nombreuses particularits chez lorganisme vgtal on observe de


grandes analogies dans les mcanismes de la mitose au niveau des diffrents rgnes. Des
tudes approfondies sur le cycle cellulaire chez les vgtaux ont montr lexistence des
dterminants communs dans le contrle du cycle cellulaire (en particulier de protines
Kinases).
Lutilisation de systmes de cultures cellulaires en suspension, o les divisions sont
synchronises (apport dhormones, temprature, blocage du cycle par un inhibiteur suivi de
son limination) est largement exploite pour tudier les vnements molculaires associs
la cytokinse.

De nombreux composs dterminent un drglement de la mitose chez les vgtaux.

Agents mitodpresseurs bloquent la prophase


Agents mitoclassiques : inhibent le fonctionnement du fuseau achromatique et
entranent le doublement du stock chromosomique, sans sparation des 2
noyaux, ex : colchicine, alcalode de colchicum autumnale, vinblastine
alcalode de catharanthus, cest le cas galement dun herbicide : la trifluraline.

Le clivage des chromosomes sopre mais leur rpartition en deux lots quivalents est rendue
impossible par labsence de fuseau : le noyau devient polyplode. Ces agents mitoclassiques
se combinent frquemment avec la tubuline et empchent sa polymrisation.
Lutilisation de substances mitoclassiques a t envisage par les gnticiens pour crer des
races ttraplodes dintrt agricole (Betterave) ou horticole (illets).

Si on traite de jeunes bourgeons par des solutions de colchicine les mitoses en cours sont
bloques et des noyaux ttraplodes se forment. Ces noyaux peuvent se diviser normalement
aprs le traitement et sils sont nombreux dans le mristme, la tige qui est construite par la
prolifration des cellules mristmatiques peut tre entirement ttraplode.

Au niveau des techniques de culture in vitro il sagit dun moyen de passer de ltat
haplode ltat diplode : cest lhaplodiplodisation des plantes haplodes obtenues par
culture danthres ou dovules. Cette technique est utilise en pratique par les semenciers en
vue dobtenir plus rapidement des lignes pures (cf cours de Biotechnologie vgtale).

II-A1-b- Grandissement cellulaire :

Evnements cytologiques : Le grandissement des cellules peut tre trs important. Il est par
exemple frquent quune cellule de parenchyme palissadique voit son volume multipli par
200 par rapport la cellule initiale dont elle drive.

Comme laccroissement en longueur est souvent beaucoup plus important que laccroissement
en largeur on parle souvent dlongation cellulaire (laccroissement en longueur peut tre de
100 alors que l accroissement en largeur seulement de 2 5).

La cause de ce grandissement est essentiellement une arrive importante deau dans la cellule
qui se traduit par la formation de plusieurs vacuoles qui fusionnent pour donner une grande
vacuole (80-90 % du volume de la cellule). La paroi de la cellule doit devenir suffisamment
extensible pour permettre cette entre deau qui se fait par osmose.

Evnements biochimiques : Lors de laccroissement de volume la paroi cellulaire ne devient


pas plus mince on nassiste pas un simple tirement, la paroi conserve son paisseur. Ces
phnomnes impliquent un remaniement de structure de la paroi et une synthse active des
polysaccharides qui la constituent.

En dehors de cette entre deau et de cette synthse dlments des parois, il y a galement
une synthse de petites molcules pour maintenir constante la concentration en soluts des
liquides intracellulaires (acides amins, oses, sels minraux), synthse de macromolcules
constitutives du cytoplasme (protines acides ribonucliques) on constate galement une
augmentation du nombre dorganites (mitochondries, chloroplastes, dictyosomes, ribosomes).

Ainsi, mme si le cytoplasme ne constitue, gnralement pour la cellule ayant atteint sa taille
maximale, quune zone troite entre la vacuole et la paroi il y a une synthse active de
constituants cytoplasmiques au cours du grandissement cellulaire.

En conclusion il faut souligner que :

En opposition aux cellules animales pour lesquelles la migration des cellules aprs leur
formation est un important aspect du dveloppement, les cellules vgtales ne migrent pas et
conservent leur position relative toute leur vie.
La morphognse de la plante est donc pour une importante proportion dpendante dun
contrle spatial et temporel prcis de la division cellulaire et de lexpansion cellulaire.
II A 2 -Relations entre croissance et mtabolisme (besoin nergtiques et en
matriaux de base)

Toute croissance saccompagne de synthses nouvelles qui exigent de lnergie et des


molcules lmentaires, la croissance ne pourra donc se drouler quassocie un
mtabolisme actif.

Cette nergie et ces molcules proviennent de la photosynthse pour les organes autotrophes
ou de lutilisation de rserves lors des premires phases du dveloppement (germination) ou
dun dveloppement lobscurit (rserves des tubercules, bulbes)

II A 2-a- Besoins en molcules de base :

Quil sagisse de division ou dlongation cellulaire on retrouve sur un plan biochimique la


synthse de polysaccharides constitutifs des parois vgtales.

Les vgtaux possdent une paroi primaire prsente dans toutes les cellules et qui est la seule
concerne dans les phnomnes de croissance et une paroi secondaire qui vient sajouter
lintrieur de la prcdente la fin du grandissement de la cellule.

La paroi primaire est constitue essentiellement de molcules polysaccharidiques.

Cellulose enchanement linaire dunits glucose liaison -


Hmicelluloses htroglycanes associations de divers oses (glucose, xylose,
galactose)
Composs pectiques lamelle moyenne et paroi primaire (ac. Galacturonique
et glucuronique + divers oses)
En plus faible proportion la paroi renferme de nombreuses protines : protines
structurales = extensine, protines fonctionnelles = proxydase

Au-del des composants de la paroi on assiste dautres synthses :

Synthse des protines enzymatiques et structurales


Synthse dacides nucliques DNA et RNA dans le cas de la division cellulaire
RNA dans le cas du grandissement cellulaire.

Toutes ces synthses exigent donc des units de base (oses, ac. amins, bases puriques et
pyrimidiques) qui proviennent de la photosynthse et de la respiration.

II A 2-b Besoins nergtiques :

Dans la synthse des polysaccharides et des protines les units monomres


sont initialement actives ex : aminoacylAMP, GDP glucose avec
consommation dATP ou dautres donneurs de groupements phosphates (GTP).
Pour la synthse dacides nucliques les nuclotides phosphats ou
dsoxynuclotides sont la fois donneurs dnergie et dunits de base.

La croissance exige donc une fourniture dnergie importante qui est confirme par le fait que
la respiration est particulirement importante dans les tissus en croissance par longation. Par
ailleurs, la charge nergtique (paramtre utilis) pour mesurer ltat nergtique dun tissu ou
dun organe, doit dpasser une certaine valeur (80 %) pour que la croissance se produise.
II-A3-Mesure de la croissance :

II-A3- a-La croissance de lorganisme ou dun organe :

En fonction de la dfinition que nous avons donn de la croissance diffrents critres de


mesure lis une dimension linaire apparaissent utilisables.

Hauteur (tige)
Diamtre (tronc)
Surface (feuille)
Volume (fruit)
Masse frache ou sche
Constituant cytoplasmique comme protine

On procde donc des mesures des temps chelonns et on apprcie laugmentation du


critre considr.
Les mthodes retenant la mesure des dimensions prsentent lavantage de ne pas tre
destructives et donc de pouvoir tre rptes sur le mme individu.
Le critre masse frache est considrer avec rserve tant donn les fluctuations des entres
deau dans la plante.
La mesure des teneurs en protine est longue destructive mais reflte bien la croissance
active.

II-A3- b- Mesure des composantes individuelles de la croissance sur l organe


donn

La division cellulaire peut tre apprci par numration cellulaire, aprs dissociation et
comptage des cellules :

Quantit de DNA : Une autre manire dapprcier la division cellulaire rside dans le dosage
du DNA. La quantit de DNA est en principe proportionnelle au nombre de cellules mais la
relation est en fait souvent perturbe en raison de la polyplodie de certaines cellules vgtales
(en particulier la suite du phnomne dendomitose = division des chromosomes sans
sparation en deux noyaux).

Le grandissement cellulaire :

Il peut tre apprci par des observations microscopiques ou par des mesures de volume
cellulaire : connaissant le volume total dun chantillon (fragment de tissu) et le nombre de
cellules par chantillon on peut obtenir le volume cellulaire moyen.
Les dterminations indpendantes des deux composantes de la croissance sont utilises pour
situer dans lespace et le temps les deux phnomnes mais aussi pour apprcier leffet de
traitements ou de substances chimiques (hormones) retardant de croissance sur ces
phnomnes considrs individuellement.

Chez les animaux lembryon est une version miniaturise de lorganisme adulte puisquil
possde la plupart des organes et tissus sous une forme simplifie qui subiront seulement une
augmentation de taille et une maturation lors du dveloppement post-embryonnaire.
Chez les vgtaux la morphogense se poursuit pendant toutes les phases de la vie de la plante
et lembryon trs rudimentaire ne prsage pas de la taille, forme et organisation de la plante
adulte.
Cet embryon est en fait trs comparable dune espce lautre mme si la taille finale des
individus est trs diffrente.
Le dveloppement post-embryonnaire est donc trs important chez les vgtaux, il assure la
complexification de lorganisme et se rvle flexible en fonction des conditions
denvironnement. Il dpend de petits massifs de cellules indiffrencies qui conservent une
capacit se diviser, les mristmes et qui sont responsables de la formation des cellules
lorigine de ldification de la plante adulte.
Il existe diffrents types de mristmes mais le mieux connu et le plus important est le
mristme apical caulinaire qui produit des tiges, des feuilles, contrle la disposition spatiale
des feuilles et des bourgeons sur la tige (phyllotaxie le temps qui spare lapparition de deux
feuilles successives sur la tige est le plastochrome).
Les autres mristmes qui assurent la croissance en longueur de la plante sont pour la partie
arienne les mristmes axillaire et les mristmes adventifs et pour la partie souterraine les
mristmes racinaires.

Les mristmes axillaires sont issus du mristme caulinaire et sont situs laisselle des
feuilles. Ils sont souvent au repos (dominance apicale) et constituent pour la plante une
rserve de mristmes en cas de blessure, dcapitation, du mristme apical.
Les mristmes adventifs correspondent des noformations rsultant dune phase de
ddiffrenciation puis de rediffrenciation de tissu dj diffrencis (limbe foliaire). Ils
peuvent se mettre en place spontanment sur certains tissus de plantes intactes phnomne
dpiphyllie sur les feuilles de Kalancho mais sont plus frquents en rponse des blessures
ou lors de la culture in vitro de vgtaux o ils reprsentent une voie de rgnration de tissus
dj diffrencis. On a pu induire la formation de mristme axillaire ou le phnomne
dpiphyllie par transformation gntique du tabac avec le gne IPT (synthse de
Cytokinines) ou le gne Kn1 impliqu dans le fonctionnement du mristme.

Les mristmes racinaires assurent seulement une production de nouvelles cellules et une
longation de la racine sans production de nouveaux organes la diffrence des mristmes
caulinaires. Les mristmes racinaires latraux ne sont pas issus du mristme apical racinaire
mais dune diffrenciation de tissus dj en place.

Au-del, une deuxime catgorie de mristme proprits compltement diffrentes assure


la croissance en paisseur en particulier des espces prennes et des arbres ce sont les
mristmes latraux ou cambium, anneaux de quelques cellules dpaisseur lintrieur des
tiges et des troncs. Les cellules issues de ces mristmes se diffrencient en phlome
lextrieur et en xylme lintrieur de laxe vertical.

Ces cambium comprennent deux types cellulaires :

1. longues cellules lorigine des vaisseaux et des fibres du bois ce sont les
initiales fusiformes
2. cellules de type isodiamtrique lorigine des rayons ligneux (parenchyme
ligneux du bois) : initiales radiales.

Les mristmes apicaux caulinaires sont organognes ils engendrent des tiges et des feuilles
puis des fleurs lors de la transition mristme vgtatif mristme floral.

Les mristmes latraux sont seulement histognes ils produisent de nouveaux tissus.
Structure, fonctionnement, caractristiques du mristme apical caulinaire

Le mristme se situe lapex des tiges et comprend diffrents zones qui se distinguent selon
la structure des cellules et surtout leur devenir. Dune manire gnrale, les cellules
mristmatiques sont de petites tailles, cubiques, avec un fort rapport nuclo-cytoplasmique et
peu ou pas de vacuoles.

Zone centrale : cellules relativement grandes, avec quelques vacuoles se divisant


moins que les cellules de la zone priphrique, maintiennent une population de
cellules indtermines
Zone priphrique : cellules plus petites se divisant rapidement et conduisant la
formation de primordia foliaires
Zone support ou (rib. zone) la base du mristme fournissent les tissus de la tige.

Une autre distinction au sein du mristme correspond aux appellations :

tunica pour les cellules de la couche extrieures du mristme qui se divisent de faon
perpendiculaire la surface (divisions anticlinales) de faon accrotre la surface du
mristme
corpus pour les cellules des couches intrieures du mristme qui se divisent de faon
parallle la surface (divisions priclinales)

lmergence dun primordium foliaire correspond un changement dans 1 plan de division au


niveau tunica

anticlinal priclinal avec formation dune protubrance premire


indication dun nouveau primordium

Fonctionnement des mristmes lchelle molculaire

Les rsultats ont t essentiellement obtenus la suite danalyse de mutants (principalement


chez A. Thaliana) affects dans le fonctionnement du mristme.
Plusieurs des gnes ainsi identifis ont la particularit de coder des protines
homodomaines qui contiennent une squence de 61 ac. Amins trs conserve et se
retrouvent chez les mammifres impliqus dans le contrle du dveloppement. Les gnes
renferment une squence conserve de 180 bp appele homebox on retrouvera lintervention
de ce type de gne dans le contrle de la floraison.

Exemples de gne :

Stm (shoot meristem less) mutant incapable de conserver son mristme


Knotted 1 (Kn1). Chez le mutant on empche la formation du mristme,
localis par hybridation in situ dans la zone centrale. Le gne code pour un
facteur de transcription jouant un rle de rpresseur de diffrenciation
Clavata. Le mutant prsente 1 mristme anormalement grand (mille fois la
taille du mristme normal) avec une augmentation du nombre de feuilles.
Clavata serait donc un rpresseur du dveloppement du mristme.
Dautres gnes peuvent tre cits comme MGOUN impliqu dans la formation
des primordia foliaires la mutation rduit leur nombre ou CUC impliqu dans
la sparation des organes son extinction entrane la fusion des organes floraux.
Un travail intressant (2003) a t publi par le groupe de Sarah Hake ; il
concerne le gne BREVIPEDICELLUS un gne homebox de la famille de
Kn1(Knox genes).
Ce gne a t dmontr agir comme un rpresseur de la lignification processus
de diffrenciation cellulaire trs marqu, antagoniste du maintien de la cellule
mristmatique indiffrencie.

Le fonctionnement du mristme implique donc un ensemble de gnes


activateurs et rpresseurs en interactions complexes. Ce problme est
maintenant de comprendre comment ces informations sont intgres au sein du
mristme qui doit rpondre une double exigence

sautoentretenir
voluer dynamiquement mais de faon rgule avec la production de primordia
foliaire

Lexistence de domaines lintrieur du mristme suggre des fonctionnements spcifiques,


les cellules de lensemble du mristme tant en contact travers les plasmodesmes et
lexpression de gnes en interactions conduisant finalement des profils hormonaux
spcifiques de sous ensembles du mristme.

Au total on doit souligner que chez la plante la croissance est continue grce au
fonctionnement des mristmes (croissance indtermine). Elle ne sarrte quavec la
floraison chez les monocarpiques ou chez les espces prennes ligneuses la mort de
lindividu aprs des dizaines ou des centaines dannes.

II-A4 b- Dans lespace : les zones dlongation

Elongation : les zones dlongation sont souvent nettement diffrencies des zones de
multiplication. Cest le cas classique de la croissance des racines pour lesquelles la zone
dlongation sous mristmatique est facilement reconnaissable. Chez les tiges llongation se
fait au niveau des entre-nuds (nud : niveau dinsertion des feuilles sur la tige).

En revanche, chez les feuilles et les fruits les zones dauxsis et de mrsis sont beaucoup
plus mal dlimites et leur localisation varie avec les espces.

Organes croissance dfinie organes croissance indfinie : En raison de lexistence


des mristmes apicaux et latraux les tiges et les racines ont une croissance dite indfinie.
Ce terme est peut tre un peu exagr mais il est retenu pour opposer cette croissance la
croissance dfinie des feuilles, des fruits et des fleurs. Pour ces derniers organes la croissance
se poursuit pendant une certaine dure puis cesse. Si au dpart lorgane est initi partir de
cellules mristmatiques, les zones mristmatiques disparaissent, seul le grandissement
cellulaire permet la croissance puis lorgane atteint sa taille dfinitive. En revanche, les tiges
et les racines ont une croissance limite par la mort de la plante mais potentiellement
indfinie. Des extrmits de racine de tomates sont conserves en culture strile depuis plus
de 40 ans et continuent se diviser (repiquage hebdomadaire). Une branche darbre (Saule)
espce particulirement apte au bouturage prleve sur un arbre de plusieurs dizaine dannes,
mise en terre, donnera un arbre identique au prcdent. Ces exemples tendent justifier
lexpression croissance indfinie et dmontrer limmortalit des mristmes.

II-A4-c- Localisation de la croissance dans le temps :

Localisation dans le cycle de dveloppement de la plante :


Plantes annuelle : Si lon considre le cycle complet depuis luf
jusqu la fructification on peut distinguer :

o Une phase active de croissance qui conduit de luf


lembryon, cest lembryognse. Nous tudierons plus
tard cette phase qui est mal connue, lembryon en raison
de sa taille et de sa position lintrieur de la graine
nayant pas servi de modle pour ltude de la
croissance.
o Aprs cette embryognse la croissance peut tre
interrompue pendant des dlais trs variables parfois
plusieurs annes. Elle reprendra avec la germination
phase de croissance trs active. La croissance se ralentit
ensuite. Elle peut reprendre de faon spectaculaire lors
de la formation du fruit. Corrlative de la formation de
lembryon.

Sparation temporelle des phases de division et dlongation

Dans de nombreux organes en particulier les feuilles, les fruits, la sparation


entre division cellulaire et longation cellulaire est plutt temporelle que
spatiale.

Ce comportement est frquent dans de nombreux fruits (concombre, tomates)


mais nest pas universel. Un exemple retenir est celui du coloptile davoine.
Si on fait germer lobscurit des caryopses de gramines, on observe autour
des premires feuilles une graine : le coloptile capable datteindre 4 5 cm en
quelques jours. Tant que sa longueur nexcde pas 1 cm sa croissance se ralise
uniquement par allongement des cellules dj formes. Cest au cours de cette
phase de croissance uniquement par grandissement que lon utilise le coloptile
comme matriel dtude dans les recherches sur lauxine (action sur une seule
composante), un autre exemple de sparation temporelle est reprsent par la
croissance du spadice dArum maculatum (voir figure).

II-A5- Cintique de la croissance Vitesse de croissance :

Les diffrentes mthodes de mesure de la croissance que nous avons examines ont permis
daccumuler de nombreuses informations sur la cintique de la croissance et les vitesses de
croissance.
Quelle que soit la mthode et lorgane tudi les courbes donnant lvolution du critre retenu
(masse, longueur, etc) en fonction du temps ont une grande analogie. Ce sont des courbes
dont lallure gnrale est toujours une sigmode (courbe en S).

II-A6- Vitesse de croissance

La vitesse de croissance dune espce est bien sr dpendante des conditions nutritives,
climatiques mais dans des conditions comparables les diffrentes espces prsentent des
vitesses de croissance plus ou moins rapides
Bambou 60 cm/24h
Mas 13 cm/24h

Ces valeurs sont des valeurs extrmes mais de nombreuses espces ont pendant la priode
active de croissance des vitesses dallongement des tiges de 1 4 cm/24h.

II-A6 a- Relation avec lefficacit photosynthtique :

Ces caractristiques de croissance sont lies des potentiels gntiques diffrents, cependant
dune manire gnrale, on a pu montrer une relation entre vitesse de croissance et efficacit
de la photosynthse.

La vitesse dassimilation nette = vitesse daccroissement de masse sche par unit de


surface foliaire est un reflet direct des capacits photosynthtiques. Il y a toujours
correspondance entre cette valeur et la vitesse relative de croissance.

Taux dassimilation Vitesse relative de


CO2 g/m/semaine croissance mg/g/semaine
Herbaces
Zea mays (C4) 152 2310
Hordeum vulgare (C3) 68 920

Feuilles caduques
Fraxinus excelsior 33 300

Feuilles persistantes
Pinus abies 20 58

On peut dduire de ce tableau que les herbaces ont gnralement des vitesses relatives de
croissance plus leves que les espces arborescentes et les arbres feuilles caduques un
meilleur rendement que les rsineux. Parmi les herbaces les plantes les plus performantes sur
le plan photosynthtique ont la croissance la plus rapide. Ces comparaisons entre espces C3
et C4 sont valables dans des conditions de culture identiques, il faut cependant penser que la
croissance vgtale est comme dautres phnomnes physiologiques soumise la loi du
facteur limitant (eau, nutrition minrale).

II-A6 b- Vitesse de croissance et choix des espces cultives :

Lorsque lon examine la productivit des espces cultives deux cas sont considrer :
Les vgtaux dont on exploite lappareil vgtatif
Les vgtaux dont on exploite lappareil reproducteur (graines, fruits) en fait les
plus nombreux.

Dans le premier cas sylviculture, plantes annuelles : tabac, potagresil faut donc privilgier
la croissance de lappareil vgtatif et rechercher des espces croissance rapide (Peuplier,
Eucalyptus).
Dans le 2me cas un aspect trs important rside dans la distribution des assimilats selon le
principe de la relation organe source (feuille) organe puit (fruits, graines), cest dire un
transfert des produits de la photosynthse et de leurs drivs des feuilles aux parties rcoltes.

Comparaison portant sur diffrentes varits de bl

Index de rcolte (1) Taux dassimilation (2)


Triticum boeticum (diplode) 33.8 45.7
Triticum aestivum (hexaplode) 49.3 31.4

(1) index de rcolte =poids sec grains / poids sec plante entire
(2) taux dassimilation = mg CO2 fixe / dm / heure

Avec une meilleure efficacit photosynthtique Triticum boeticum est moins productif que
Triticum aestivum une varit cultive, car ce dernier prsente une meilleure capacit
orienter les photosynthtats vers les graines.

Les paramtres de slection pourront donc porter sur la distribution des assimilats.

Par ailleurs si dans les cas prcdents une croissance maximale est souhaite dans dautres
cest au contraire une croissance lente qui est recherche.

Certains arbres dornement


Arbres fruitiers (permettant une cueillette directe) chaque individu
produit moins mais la production lhectare est comparable.

II-A6 c- Croissance vgtale et associations symbiotiques :

La croissance des plantes cultives est lie la constitution gntique des espces et au
conditions de milieu que vont conditionner la vitesse de croissance potentielle.

Il faut ici insister sur le fait que pour une constitution gntique donne la nutrition carbone
est rarement limitante mais la nutrition minrale (azote, lments minraux) et lalimentation
en eau sont plus souvent les facteurs limitants.

Lagriculteur peut pallier les insuffisances du milieu par le biais de la fertilisation et de


lirrigation qui peut rgulariser les rendements en vitant les alas de la scheresse.

Des recherches importantes ont ports ces dernires annes sur des associations symbiotiques
entre plantes et microorganismes qui naturellement facilitent la nutrition minrale des plantes,
il sagit des associations :

+ Plantes bactries lgumineuses rhizobium


Alnus frankia
+ Plantes champignons champignons mycorhiziens

Ce dernier cas recouvre des associations entre champignons (Basidiomyctes et Ascomyctes)


et les racines de vgtaux suprieurs on distingue

les ectomycorhizes qui se dveloppent la surface des racines et concernent 10


% des plantes y compris les essences forestires les plus importantes
(Fagaces, Btulaces, Salicaces, Abitaces)
les endomycorhizes qui concernent 90 % des espces vgtales et se
dveloppent lintrieur des racines.

La mycorhization stimule la croissance

en amliorant la nutrition minrale (phosphore, azote)


en protgeant les plantes contre les agents pathognes par la production de
substances de type antibiotiques.

Le champignon bnficie des excrtions racinaires de la plante au plan nutritif et facilite la


nutrition minrale en augmentant la surface de contact entre le sol et plante et en ralisant un
certain nombre de raction chimiques intermdiaires facilitant labsorption des lments
minraux.
CHAPITRE III : LES HORMONES VEGETALES

III-A -LES FACTEURS QUI CONTROLENT LE DEVELOPPEMENT ET LEURS


INTERACTIONS :

Le dveloppement dune plante ne se droule pas au hasard mais la fois de faon :

Harmonieuse
Coordonne
Reproductible

Harmonieuse : une plante est gnralement quilibre dans ses proportions , la taille relative
des diffrents organes est proportionne le rapport surface arienne / surfaces parties
souterraine demeure relativement constant.

Coordonne : apparition squentielle dorganes. Une semence lors de sa germination met


dabord une radicule qui pntre dans le sol et fixe la jeune plantule qui va dvelopper sa
partie arienne. (les fleurs apparaissent aprs les feuilles)

Reproductible : pour une espce donne, si les conditions sont identiques les dimensions de
lindividu arriv maturit sont comparables, les priodes de floraison ou de fructification se
retrouvent des poques comparables.

Le dveloppement comprend une srie dvnements au niveau cellulaire : division,


longation, diffrenciation, mort cellulaire qui sont intgrs lchelle du tissu et de lorgane
via des interactions cellulaires gnrant en particulier des gradients morphogntiques.
Le dveloppement se droule donc selon un plan propre chaque espce qui dans les
conditions normales correspond la mise en place squentielle de programmes gntiques de
dveloppement se recouvrant partiellement. Par exemple, dans la floraison les gnes didentit
du mristme floral comme leafy interviennent dans la conversion mristme vgtatif
mristme floral mas activent galement lactivation des gnes didentit dorganes floraux
intervenant plus rapidement.

Dans le cas du dveloppement vgtal lenvironnement a un poids particulier, une trs forte
influence sur le dveloppement. Il sagit des contrle externes.

Contrles externes

Les facteurs de lenvironnement peuvent agir selon des effets que nous qualifierons de
trophiques en conditionnant lintensit du mtabolisme cellulaire (T, lumire,etc), parfois
selon des effets mcaniques (exemple vent).
Et enfin selon une 3me catgorie deffets beaucoup plus subtile que nous appellerons effets
signaux, une modification du milieu extrieur correspondant pour la plante un signal qui va
influencer son dveloppement.
Ces effets signaux peuvent faire intervenir les hormones comme intermdiaires ou agir aprs
avoir t enregistr au niveau de la plante par des rcepteurs capable de percevoir ces signaux
et de les transformer en information utilisable par la plante.
Les photorcepteurs comme le phytochrome reprsentent un exemple typique de perception
de lenvironnement lumineux et de contrle de dveloppement.
Les contrles internes :

Ils sont directement lis la constitution gntique des individus, leur gnome qui contient
une information de base (protines enzymes facteur de transcription) et une information
dorganisation susceptibles de percevoir, dintgrer les signaux externes et de coordonner
leurs effets.

III-B-GENERALITES SUR LHORMONOLOGIE VEGETALE :

III-B- a - Notion dhormone et comparaison hormones vgtales hormones


animales :

La notion dhormone (du grec hormao : exciter le terme fait son apparition en 1905)
sapplique des substances organiques biologiquement actives et fait intervenir 3 ides
essentielles :

1. activit de trs faibles concentrations (aucun rle nergtique ni nutritif)


2. synthse par lorganisme lui-mme
3. transport du site de synthse au site daction o elle influence spcifiquement des
cellules cibles.

Hormones vgtales : composs organiques synthtis par la plante qui de trs faibles
concentrations ont une action sur le mtabolisme et le dveloppement gnralement dans des
tissus diffrents du lieu de production.

Les hormones vgtales comme les hormones animales sont impliques dans les
communications intercellulaires.

Certaines substances qui ont des effets analogues ceux des hormones mais qui ne sont pas
synthtises par les vgtaux sont appeles rgulateurs de croissance. Ce sont gnralement
des substances chimiques de synthse qui sont abondamment utilises en agriculture et
horticulture.

Ltude des hormones, messagers chimiques agissant sur le mtabolisme et le dveloppement,


est trs avance chez les animaux, o on a pu montrer que :

- des structures chimiques varies jouaient le rle dhormone : strodes, peptides


comme : linsuline, protines comme lhormone de croissance, drivs dacides
amins (adrnaline), gaz comme le monoxyde dazote
- les hormones agiraient par le biais de rcepteurs membranaires ou cytosoliques
- la production dhormones tait souvent cyclique (cycle dovulation chez la femme,
hormone de croissance produite la nuit..)
- les avances du gnie gntique ont conduit la production dhormones (protines)
recombinantes des fins thrapeutiques : insuline, hormone de croissance,
rythropotine

Les hormones vgtales tout en prsentant un certain nombre de points communs avec les
hormones animales (perception, voies de transduction) sen distinguent sous diffrents
aspects.

- Molcules de faibles PM < 500 li aux difficults de translocation de cellules


cellules
- Structures chimiques gnralement diffrentes lexception des brassinostrodes
voisins des strodes animaux
- Produites dans diffrentes rgions de lorganisme (mme si une zone de production
majoritaire est frquente) et active la fois au lieu de synthse et distance. Ceci la
diffrence des hormones animale, o la distinction site de production (ex : glande
endocrine) et site daction est plus claire.
- Enfin les hormones vgtales agissent frquemment de faon additive, antagoniste, ou
en synergie sur divers phnomnes physiologiques (action moins cible que les
hormones animales).

Ce dernier point met laccent sur la difficult des tudes dhormonologie vgtale. Une
hormone nagit gnralement pas seule sur un phnomne mais en prsence dautres hormone
qui agissent dans le mme sens ou en sens contraire.

III-B b- Les diffrents types dhormones vgtales :

La vritable mise en vidence dune hormone vgtale remonte 1926 il sagit des travaux de
WENT sur lauxine. Jusquen 1950 on considra que lauxine reprsentait la seule
phytohormone mais aprs cette date dautres hormones vgtales ont t dcouvertes, dont
limportance sest confirme avec les annes. Chronologiquement il sagit des gibberellines
(1950), des cytokinines (1955), de lthylne (1960), de lacide abcissique (1965) et des
brassinostrodes (1995).

A lheure actuelle on connat donc 6 types dhormones vgtales pour lesquels on peut
distinguer :

Des hormones stimulatrices (qui induisent ou stimulent un phnomne


physiologique) :

- Auxines
- Gibberellines
- Cytokinines
- Brassinostrodes
pour ces hormones on observe des familles de molcules actives

En parallle on distingue des hormones effets mixtes comme

- lthylne
- lacide abcissique
dans ce cas une seule structure active a t identifie.

Dautres molcules rle de mdiateur chimiques chez les vgtaux comme les
polyamines, le jasmonate, le salicylate, les oligosaccharides nont pas encore obtenu le
statut dhormone vgtale vraie.

III-B c- Mthodes dtudes des hormones vgtales et de leurs mcanismes


daction :

a Approches biochimiques

Elles sont utilises pour le dosage des hormones, la mesure dactivit des
enzymes des voies de synthse, caractrisation biochimique des rcepteurs
Examen du cas particulier du dosage des hormones. Historiquement 3
mthodes ont t retenues

1. les tests biologiques sensibles, peu spcifiques parfois complexes


mettre en uvre
2. les mthodes physico-chimiques sensibles et spcifiques mais
demandant une instrumentation lourde (HPLC GC spectro de masse)
3. les test immunochimiques ou radioimmunoessais ultrasensibles et trs
spcifiques exigeant des anticorps vis--vis des hormones et une
hormone sous forme radioactive (expriences de comptition).

b Approches de biologie molculaire et de gnie gntique, elles sont utiles pour


la :

- Caractrisation des gnes impliqus dans les voies de biosynthse des


hormones, des gnes qui rpondent lapplication dhormones
(Northern blot, RT PCR, hybridation in situ)
- Analyse des promoteurs des gnes rpondant aux hormones :
lments cis / facteurs trans
- Recherche de gnes par la technique de promoteur trapping
- Modulation des taux dhormones par gnie gntique aspects
fondamentaux et appliqus, y compris lutilisation de promoteurs
spcifiques

c Approche gntique
Caractrisation de mutants de sensibilit aux hormone
de mutants de production dhormones

d Approche pharmacologique

Base sur lapport de drogues, inhibiteurs y compris par microinjection pour


dissquer les tapes des voies de transduction du signal hormonal.

III-B d- Notion de rcepteur hormonal :

La reconnaissance dun signal chimique (hormone) par une cellule et sa transformation en


information utilisable ne peuvent se raliser que si la cellule contient au moins un constituant
qui est capable de se lier initialement lhormone : le rcepteur doit ainsi avoir une forte
affinit et une forte spcificit vis--vis de lhormone.

Les seules molcules qui prsentent assez de variations dans leur composition et leur structure
pour rpondre ces exigences de spcificit sont les protines il est donc admis que les
rcepteurs hormonaux sont gnralement des protines .
La liaison hormone-rcepteur activerait le rcepteur de faon ce quil puisse assurer la
transduction du signal hormonal.

Cette activation correspond gnralement un changement de conformation qui stimule une


activit enzymatique sur la molcule de rcepteur (ex : protine kinase) ou induit une capacit
nouvelle dinteraction avec une autre protine.

Cette premire tape est suivie dune srie dvnements molculaires, la chane de
transduction, qui aboutit finalement des modifications dcisionnelles
- Transcription de nouveaux gnes
- Degr douverture de canaux ioniques
- etc

Le rcepteur (son abondance) peut se rvler un facteur limitant dans laction hormonale. On
a parl dtat de comptence dun tissu selon la plus ou moins grande abondance de
rcepteurs.

Enfin tant donn les effets pliotropiques des hormones vgtales (effets diversifis) il a t
envisag une pluralit de rcepteurs affects des effets cibles spcifiques ( ex : cas de
lthylne).

III-B- e- Un exemple dapproche biochimique pour la caractrisation de


rcepteur hormonal : le marquage par photoaffinit

Technique utilise pour la caractrisation de protines fixatrices de lacide abscissique (ABA)


sur le plasmalemme des cellules de garde au niveau des stomates de Vicia Faba.

Les stomates jouent le rle fondamental dans la rgulation des changes gazeux et des
changes deau entre la plante et son environnement. Il sagit dun ensemble cellulaire,
lappareil stomatique (cellules de garde pore stomatique souvent entour de cellules
pidermiques diffrentes par leur taille et leur forme des autres cellules pidermiques
voisines- les cellules subsidiaires).

Ces stomates peuvent tre ouverts ou ferms et dans ce dernier cas les changes gazeux et
lvapotranspiration sont alors trs rduits. Le mcanisme de fermeture des stomates repose
sur une fuite dagents osmotiques au niveau des cellules de garde les faisant passer dun tat
turgescent un tat moins turgescent ou semi-plasmolys dterminant ainsi le resserrement du
pore stomatique.

Lors du stress hydrique les stomates se ferment en rponse lABA, un stimulus hormonal,
dont la concentration augmente dans les feuilles (suppos tre libr ou synthtis de novo
au niveau du msophylle foliaire) et plus spcifiquement au niveau des cellules de garde.
LABA entrane une fuite de K+ au niveau des cellules de garde.

Le gros problme de ltude des interactions hormone / rcepteur rside dans le caractre
labile des liaisons chimiques faibles qui stablissent entre les 2 partenaires. Une approche
pour rsoudre ce problme rside dans le marquage par photoaffinit.

Le principe du marquage de protines, de rcepteurs par photoaffinit est le suivant : certaines


molcules comportent des groupements chimiques qui par photoactivation deviennent trs
ractifs et peuvent former des liaisons covalentes irrversibles. Si la molcule est par ailleurs
radioactive, ou fluorescentes on peut ainsi marquer de faon stable la protine rceptrice.
LABA contient un groupement ctone qui peut tre photoactiv par irradiation par des
longueurs donde de 330 nm. Ceci peut fournir un moyen de marquer irrversiblement des
rcepteurs protiques potentiels de lABA sans utiliser dhormones modifies.

Quand lhormone naturelle ne contient pas de groupement photoactivable on peut travailler


avec des drivs dhormones sur lesquels on a greff des groupements photoactivables
(groupement azido dans le cas de lauxine) avec bien sr conservation de lactivit
biologique.
Protocole exprimental :

On prpare des protoplastes dpiderme de fve en pelant les pidermes de Fve et en les
mettant en contact avec des enzymes de digestion des parois ce qui libre le protoplaste
entour par la membrane plasmique.
Par un procd de centrifugation diffrentielle on peut mme obtenir spcifiquement des
protoplastes de cellules de garde.

Les protoplastes sont ensuite incubs avec de lABA triti H-cis(S)-ABA. La forme active de
lABA sur la fermeture des stomates..
On irradie la suspension de manire provoquer le marquage par photoaffinit dventuels
sites rcepteurs.
Des contrles sont effectus

1. avec lnantiomre cis(R) ABA qui est biologiquement inactif


2. avec une protine banale lalbumine de srum de buf pour valuer la possibilit de
fixations aspcifiques.

Linterprtation des diffrents rsultats montre quil existe une fixation spcifique et
aspcifique de lABA physiologiquement actif au niveau des protoplastes de cellules de
garde.
Cette fixation est moins importante au niveau des protoplastes de msophylle foliaire.

La fixation de lhormone radioactive sur son site de fixation obit une cintique de
saturation et peut tre dplace par de lhormone froide non radioactive de faon trs
spcifique (isomre physiologiquement actif seul efficace pour le dplacement).
Des traitements mnags des protoplastes des cellules de garde par une protase, la trypsine
supprime compltement la fixation de lABA en conservant lintgrit du protoplaste. Les
sites de fixation seraient donc des protines. Ces expriences ne dmontrent cependant pas le
caractre fonctionnel du rcepteur, la protine ayant lie lABA pouvant tre un transporteur
ou une enzyme de dgradation.

III-B- f- Un exemple dapproche gntique pour la caractrisation de rcepteur


hormonal : le cas des rcepteurs de lthylne

Le rcepteur de lthylne est un des rcepteurs les mieux caractriss au plan molculaire et
gntique. Sa caractrisation repose sur ltude de mutants de sensibilit lthylne dont le
mutant ETR1 dArabidopsis qui ne prsente plus le phnomne de triple rponse lors
dapplication dthylne.
Le clonage positionnel du gne mut et lanalyse du produit du gne a montr une analogie
marque avec une famille de protines senseurs de lenvironnement chez les bactries : les
systmes deux composantes constitus dun domaine de perception du signal et de
transmission du signal : une histidine Kinase et dun domaine receveur : le rgulateur de
rponse.
La perception du signal entrane gnralement une autophosphorylation dans un domaine
conserv de lhistidine Kinase la phosphate tant ensuite transfr un rsidu aspartate du
receveur.
Ce type de systme double composante se retrouve chez les bactries dans la perception de
la lumire, de loxygne et chez les plantes a t aussi impliqu dans la rponse la lumire et
aux cytokinines.
Dans ces diffrents exemples on retrouve le domaine conserv des histidines Kinases
HNGFG. Dautres caractristiques communes entre le gne ETR1 et des gnes bactriens
suggre une origine volutive partir des bactries.
Le gne ETR 1 a t exprim dans des levures ce qui leur confre laptitude fixer lthylne.
Il sagit donc bien dun rcepteur dthylne car on associe ici les preuves gntiques et
biochimiques.

Un ion cuivre est ncessaire pour la fixation de lthylne sur le rcepteur dArabidopsis et le
cuivre est co-purifi avec la protine rcepteur. Une cystine en position 65 est par ailleurs
indispensable pour linteraction entre le cuivre et la protine. Au total le rcepteur qui est un
dimre interagit avec lthylne ce qui rsulte en un changement conformationnel de site de
liaison propag en suite au domaine transmetteur.

Par analyse du gnome, plusieurs gnes ETR ont t caractriss chez Arabidopsis (au moins
une famille de 5 membres) qui comprennent des domaines communs mais aussi des
spcificits.
Ceci permet de les classer en 2 sous familles ETR1 et ERS1 qui ont en commun le domaine
conserv de lhistidine Kinase, ETR2, EIN4, ERS2 qui ne lont pas.
Ces diffrents gnes pourraient coder des rcepteurs affects des rponses spcifiques ou
des tissus spcifiques.

Il faut noter cependant quil nexiste quune redondance fonctionnelle partielle entre les
diffrents gnes de rcepteurs car les mutants insensibles lthylne au niveau de la triple
rponse nauraient pu sinon tre obtenus.

III C- LACIDE INDOLACETIQUE ET LES AUXINES

Rappelons tout dabord les tapes essentielles dans la connaissance de lAIA.

Darwin 1880 observation du phototropisme chez les coloptiles de gramines


excitation perue au sommet et transmise vers la base

Went 1926 rcupration par diffusion dune substance active sur la croissance
appele auxine, dauxein = crotre. Mise au point dun test biologique
permettant dapprcier les teneurs en substance active

Kgl 1934 identification chimique de lauxine lacide indolactique (isol


initialement partir durine humaine) puis caractrisation de cette
structure dans les tissus vgtaux (Zea mays) par Haagen Smith en
1942

1925-1970 recensement des diffrentes rponses des plantes laction de lAIA.


Caractrisation de substances naturelles ou synthtiques action
auxinique.

1970-1990 tudes sur le mode daction de lAIA au niveau molculaire en


particulier dans le phnomne de grandissement cellulaire
dveloppement des substances action auxinique en agriculture.

1990-2005 perception / transduction du message auxinique. Exploitation de la


gnomique et de mutants pour la comprhension de la production et des
mcanismes daction de lAIA.

III C a- Nature chimique des auxines :

Nous utilisons le terme auxine au pluriel car au-del de lidentification chimique de lacide
indolactique dautres substances se sont rvles actives sur les tests biologiques initialement
dfinis pour quantifier lAIA. Ces tests ne sont pas en fait absolument spcifiques de lAIA
mais dune famille de compos action biologique commune : les auxines.

Auxines naturelles : il sagit de structure noyau indole trs voisine de lAIA.

Il faut cependant noter que la plupart de ces substances sont impliques dans les voies de
synthse de lAIA, en tant quintermdiaires, et il nest pas clairement tabli si elles ont une
action auxinique par elles mmes ou si leur effet rsulte de leur conversion rapide en AIA lors
du test biologique (effet de prcurseurs).
Dautres substances non indoliques comme lacide phnylactique ont une action auxinique
cependant plus faible, mme concentration, que lAIA.

Auxines de synthse : il sagit de molcules qui miment les effets des auxines naturelles. Ce
sont gnralement des structures de type indolique ou bien :

de type phnoxycarboxylique
de type naphtalne actique
de type benzoque

Les plus connues de ces molcules sont le NAA et le 2-4 dichlorophnoxyactique qui de
fortes concentrations sont utilises comme herbicide (effet hyperauxinique toxique car la
molcule qui nest pas dgrade saccumule).
Des tudes importantes ont t ralises dans une optique relation structure-fonction pour
dgager des points communs entre toutes ces structures actives.
La plupart de ces molcules ont un noyau insatur et un groupement carboxylique. Une
thorie intressante a t propose par Thimann (1969). Elle fait apparatre des analogies
marques dans la rpartition des charges dans lespace (charge positive 5,5 de la charge
ngative porte par le carboxyle).

Ces observations suggrent la fixation de lhormone sur un rcepteur selon un processus de


complmentarit de charges. Par exemple la charge positive de lazote de lindole et la charge
ngative du carboxyle dans le cas lAIA seraient associes deux sites de charges
complmentaires sur le rcepteur.

La spcificit de la reconnaissance est confirme par le fait que de lgres modifications


dune molcule peuvent supprimer son activit, le 2-4 D est actif mais le 2-6 D est inactif.
Par ailleurs des molcules structures proches des auxines inhibent comptitivement lauxine.
Ce sont des anti-auxines : exemple 2-4-6 trichlorophnoxyactique. Ces substances
occuperaient les sites rcepteurs de lAIA ou un site particulier du rcepteur sans induire la
suite des vnements et la chane de transduction du signal auxine.
III C- b- Rpartition et volution dans la plante :

Initialement caractrise dans les coloptiles de gramines, lAIA et les autres auxines
semblent prsentes chez toutes les plantes vasculaires. Chez les formes vgtales infrieures
(Bryophytes, algues, champignons) la rpartition et laction biologique sont trs limites.
LAIA est galement produit par les bactries Agrobacterium tumefaciens, Pseudomonas
syringae mais par des voies de synthse diffrentes. Le rle de la molcule pour la bactrie
nest pas clair mais elle intervient dans linteraction plante/bactrie.
Chez les plantes les sites de synthse maximum sont souvent les sites daccumulation (apex,
jeunes feuilles) mais il faut aussi noter comme nous le verrons plus loin que lAIA un
transport polaris qui conduit sa migration de lapex vers la base.
Dune manire gnrale les racines sont plus pauvres en auxine que les parties ariennes (les
concentrations dans les tissus vgtaux varient de 10 300 g/kg matriel frais).
La fig. ( ) donne une volution des teneurs en diffrentes auxines dans les diffrents rangs
foliaires de plantes de tabac la suite dune sparation des molcules par chromatographie en
phase gazeuse.

IIIC- c- Facteurs intervenants dans la rgulation du taux dauxine


Biosynthse Dgradation Transport Inactivation :

Lauxine comme les autres hormones doit pour jouer son rle de messager chimique ne pas
demeurer une concentration constante dans les tissus mais voir ses teneurs fluctuer. Cest la
vague auxinique qui va dterminer une rponse dans le temps, adapte au contexte de
morphogense et de la diffrenciation.
Le taux dauxine active dans un tissu qui va contrler lintensit des rponses physiologiques,
en parallle avec la sensibilit de ce tissu lauxine peut tre potentiellement rgul par
diffrents facteurs qui relvent du mtabolisme de lauxine ou de son transport.

+ Biosynthse
+ Dgradation
+ Inactivation rversible
+ Transport
+ Compartimentation

Ces mcanismes qui sont particulirement bien connus dans le cas de l AIA peuvent
intervenir pour lensemble des hormones nous les tudierons particulirement dans le cas de
lAIA.

Biosynthse : Le tryptophane est un prcurseur de lAIA ceci a t clairement dmontr par


des expriences dapport de tryptophane marqu dans le cas de plantes obtenues en conditions
striles (pour viter des effets de contamination bactrienne).
Cependant selon les vgtaux les voies de conversion du tryptophane en AIA diffrent et on a
pu identifier au moins 3 squences principales de conversion.

La voie de lindoleactonitrile
La voie de la tryptamine
La voie de lacide indole pyruvique

On na pas jusqu prsent caractris de mutants dficients en AIA (mutants de synthse)


soit parce que la dficience est lthale soit parce que lAIA est synthtis par plusieurs routes.
Effectivement en dehors des voies passant par le tryptophane il existerait une (des) voie(s) ne
faisant pas intervenir cet acide amin.
Ainsi le mutant orp de mas (pour orange pricarpe) comporte une mutation dans la voie de
synthse du tryptophane. Les graines germent mais les plantules meurent aprs le stade 4
feuilles si il ny a pas de supplmentation en tryptophane. Or ces plantules contiennent de
lAIA.
Le prcurseur serait dans ce cas un driv indolique antrieur au tryptophane. Pour un mme
plante la contribution des voies dpendante ou indpendante du tryptophane pourrait varier en
fonction du dveloppement (ex : chez Arabidopsis).

Le transport :

Transport polaris de lAIA : (Rubery Raven Goldsmith)

En effet il sagit dun transport polaris de lapex vers la base. Des expriences simples qui
sont reprsentes sur le schma ( ) ont permis de confirmer ce phnomne. Ce transport est
donc suppose tre unidirectionnel.

Par ailleurs il sagit dun transport actif de cellules cellules stimul par lATP, dpendant de
la T, de la prsence dO2 et sensible aux inhibiteurs mtaboliques (cyanure, azide de
sodium).

La vitesse de transport est de 10 20 mm/heure.


La polarit diminue mesure que lon sloigne de lapex et au niveau des racines les
rsultats obtenus sont contradictoires.
Ce transport de lauxine qui conduit lauxine des sites de synthse principaux : les apex, vers
le reste de la plante peut tre artificiellement perturb par des analogues dauxine du type
TIBA : acide triiodo-benzoque (inhibiteur) ou des composs fluorne (morphactines) qui
entranent des morphologies anormales.

Raccourcissement des tiges


Ramification dsordonne des rameaux
Nanisme

La thorie propose pour le transport polaris est appele thorie chimiosmotique de la


diffusion polaire.
Cette thorie implique que la cellule vgtale dpense de lnergie pour maintenir un gradient
de pH de part et dautre du plasmalemme de telle manire que lespace parital est acide par
rapport lintrieur de la cellule. Ce sont des ATPases qui expulsent les protons vers la paroi.
Puisque les membranes sont plus permables aux molcules non ionises lauxine sous sa
forme non dissocie pntre facilement de la paroi vers le cytoplasme par simple diffusion.

Une fois dans le cytoplasme la plupart de ces molcules se dissocient en raison du pH


cytoplasmique plus lev et ce phnomne permet une accumulation de lauxine dans le
cytoplasme par dplacement de lquilibre, la membrane tant relativement impermable la
forme ionise.

La thorie implique en outre que la portion basale du plasmalemme est plus permable
lanion auxine ou possde une plus grande proportion de transporteurs defflux que la partie
apicale.
En fonction de ces diffrents lments on peut concevoir le transport polaris de lAIA.

Il a t effectivement localis par des techniques dimmunofluorescence, un transporteur


dauxine la partie basale de parenchyme de tiges de pois. Les gnes codant le transporteur
defflux, les gnes PIN sont au nombre de 8 chez Arabidopsis thaliana.
Des travaux rcents ont remis en cause le dogme du transfert unidirectionnel de lauxine.
Ainsi a t dmontr un changement de localisation de certains gnes PIN au cours du
dveloppement et le rle de ces gnes dans ltablissement dun axe apico-basal lors de
lembryognse : Nature 13 novembre 2003 Vol 426 p 147 Friml et al.

La mise en place de cet axe est commune aux plantes et aux animaux. La premire tape chez
les plantes consiste en la division du zygote en deux cellules distinctes. Chez Arabidopsis par
exemple la cellule apicale est plus petite que la cellule basale. La cellule apicale se divise
ensuite verticalement et la cellule basale continue se diviser horizontalement pour produire
le suspenseur.
Il a t montr que dans les premiers stades la cellule basale transporte lauxine et que la
cellule apicale rpond lauxine.
Cette complmentarit est lie lintervention dune protine implique dans lefflux de
lauxine lapex de la cellule basale : PIN 7.

PIN 7 est localis par immunoraction dans la cellule basale immdiatement aprs la division
du zygote dans le systme endomembranaire et sur la membrane plasmatique linterface
avec la cellule apicale.
Jusquau stade 32 cellules PIN 7 continue tre localis au sommet du suspenseur
linterface avec lembryon en dveloppement.

Aprs le stade 32 cellules la localisation asymtrique de PIN 7 volue se dplaant vers la


partie basale des cellules du suspenseur.

Il existe un redondance entre les diffrents gnes PIN et des mutants simples naboutissent
pas 1 phnotype particulier, en revanche des quadruples mutants (pin1, pin3, pin4, pin7)
montrent des dfauts profonds dans ltablissement dune polarit apico-basale.

Ces rsultats montrent :

Le polymorphisme gnique des gnes PIN


Leur redistribution spatiale / polarise au cours du dveloppement prcoce de lembryon
Leur rle dans la cration de gradients dauxine important pour la cration dun ple
apico-basal et pour la morphogense.

Inactivation :

LAIA peut tre converti en formes conjugues inactives par associations avec des
mtabolites prsents dans les cellules.

ac. amins - liaisons peptidiques ex : indolyl aspartate


oses - liaisons esters ex : indolyl glucose
indolyl inositol

Ces formes conjugues peuvent tre mise en vidence la suite de lapport dAIA radioactif
une plante : 50 % de lAIA est parfois retrouv sous forme conjugue aprs 3 heures. On peut
galement montrer par identification et dosage que lAIA conjugu reprsente 50 90 % de
lAIA total (dans les feuilles de pois de 2 semaines). Ces formes conjugues sont souvent
prsentes des concentrations suprieures aux formes libres et elles sont trs rpandues dans
les graines, o elles semblent participer la libration dAIA libre (par hydrolyse de liaisons
esters alors que les liaisons peptidiques sont stables).
Ainsi chez les semences de mas les formes conjugues diminuent lors de la germination alors
que lAIA libre augmente, on caractrise la prsence dune enzyme qui hydrolyse lAIA
inositol.

Ces formes conjugues peuvent contribuer maintenir une certaine homostasie des teneurs
en AIA. Ainsi chez les mutants tryp 5-1 chez Arabidopsis lanthramilate synthase est
insensible au tryptophane son effecteur allostrique normal. On observe ainsi une forte
augmentation des teneurs en tryptophane mais une stabilit de lAIA libre avec une
augmentation des teneurs en AIA conjugues.

La dgradation de lauxine :

LAIA peut tre dgrad par des oxydase de type proxydase (lAIA oxydase) selon
cependant un mcanisme atypique des proxydases ne consommant pas dH2O2.

Les produits de dgradation correspondent une voie catabolique sans dcarboxylation


produisant de l acide oxindole 3-actique ou une voie catabolique avec dcarboxylation :
dans ce cas le mthylne oxindole et lindolaldhyde sont les produits caractristiques.
Les tissus gs sont gnralement riches en AIA oxydase ainsi que les racines, ce qui
contribue un faible taux dAIA libre dans ces organes.
Le catabolisme auxinique bien tudi dans les annes 1950 1980 est actuellement peu
abord dans les recherches.

IIIC- d- Diversit des effets biologiques. Exemple particulier de la croissance


des fruits :

Nous avons dis prcdemment quune mme hormone avait des effets multiples sur le
dveloppement des plantes. On parle deffets pliotropiques. Ces rponses multiples
dpendent du tissu tudi, du stade de dveloppement et correspondent ce que nous avons
appel un certain tat de comptence des tissus li la proportion de rcepteurs et leur
nature.

Les effets pliotropiques pourraient compenser le faible nombre de messagers hormonaux


chez les plantes (6) en comparaison avec les systmes animaux (40). Ceci sous toute rserve,
tant donn la complexit suprieure des animaux au plan fonctionnel.

Ces effets multiples sont mis en vidence par :

Apport dhormones exogne sur les tissus


Par ltude de corrlations entre laccumulation dhormones dans lespace et le temps
et les rponses physiologiques observes.

Cette multiplicit daction est particulirement bien illustre dans le cas de lauxine qui
intervient sur :

Division cambium
Elongation action typique sur les coloptiles
Diffrenciation action rhyzogne classique en interaction
avec les cytokinines
Leffet sur le grandissement cellulaire est classique. Il est noter :

1. que gnralement lauxine est sans effet lorsquon lapporte sur des apex de plantes
intactes. La plante disposant alors de ses centres producteurs dauxines aurait une
concentration optimale et un apport exogne est sans influence. En revanche lauxine
est active sur les tiges dont les apex ont t dcapits ou sur des parties isoles
dorganes.
2. que la sensibilit des diffrents organes varie considrablement
tiges 10 M
racines 10 M

Au-del de ces concentrations, lauxine exerce un effet inhibiteur sur la croissance effet
hyperauxinique.

Lauxine intervient dans des phnomnes plus complexes lchelle de la plante entire
faisant intervenir des interactions entre diffrentes hormones et dont nous reparlerons : rle
dans la dominance apicale, labscission ou le retard de snescence.

Nous dtaillerons ici le problme de la croissance des fruits. La formation des fruits
correspond chez le vgtal une priode de croissance souvent rapide par division et
longation cellulaire. Dune manire gnrale les fruits rsultent de la croissance des parois de
lovaire de la fleur ou du rceptacle floral qui se produit ds la pollinisation et se poursuit la
fcondation et pendant la formation des graines (lovaire est une partie de la fleur femelle qui
renferme les ovules o se produira la double fcondation conduisant lembryon et au tissu
de rserve).

Nous avons dit que la croissance du fruit pouvait commencer ds la pollinisation, ceci se
produit par exemple chez lOrchide et chez cette espce on a pu montrer que des extraits de
pollen pouvaient dterminer la croissance des parois de lovaire. Ces extraits contenaient de
lAIA et le pollen est ainsi une source dauxine. Dune manire plus gnrale, il semble donc
trs probable que ce soit lAIA qui, produit par le pollen ou les graines en formation, soit
responsable de la croissance du fruit. Si on limine les graine de certains fruits en formation
(fraise) on arrte la croissance du fruit. Par ailleurs, on a pu galement montrer que lembryon
et lalbumen tissu de rserve de la graine produisaient de lAIA au cours de leur formation.

On peut ainsi observer lobtention de fruits sans pollinisation ni fcondation par simple
application dAIA sur la fleur femelle (Tomates, Figue), on obtient alors des fruits sans
graines : parthnocarpiques.

On peut galement citer les expriences de NITSCH sur la Fraise ou les aknes sont la source
dauxine, leur ablation sur le jeune fruit empche son dveloppement normal. La forme du
fruit peut ainsi tre affecte par llimination spcifique de certains aknes mais laddition
dauxine peut remplacer les aknes manquants. La production naturelle de fruits sans ppins
(agrumes) correspond dautres situations ou certains mutants ont t slectionns.

IIIC- e- Mcanismes daction dans le phnomne de grandissement


cellulaire :

Avant daborder ltude dun mcanisme daction de lauxine dans le grandissement


cellulaire, rappelons les conditions du grandissement cellulaire. Ce grandissement est
conditionn par une entre deau dans la cellule.
Ainsi quatre types dvnements se produisent chronologiquement au niveau de la paroi lors
de la croissance de la cellule.

1. accroissement des proprits dextensibilit de la paroi


2. entre deau rsultant de la diminution de la pression de turgescence
3. extension des parois et grandissement de la cellule
4. synthse de nouveaux lments des parois.
Les mouvements de rentre deau dans la cellule qui se font par osmose sont conditionns par
la concentration saline du contenu cellulaire (pression osmotique). Mais la cellule est entoure
par un cadre rigide la paroi qui va lors de lentre deau opposer une rsistance (pression de
turgescence).
Lattraction relle que subissent les molcules deau va donc tre gale la diffrence entre
pression osmotique et pression de turgescence.
Pression de succion = Pression osmotique pression de turgescence.
Il apparat donc quun lment dterminant dans lentre deau peut tre la diminution de la
pression de turgescence, rsultat de laccroissement des proprits dextensibilit des parois.

De nombreux arguments sont en faveur dun rle de lauxine sur le grandissement cellulaire
via une action sur lextensibilit de la paroi.

Les facteurs intervenants dans le relchement parital :

1. rle du pH

Les mcanismes de modification de la structure paritales au cours de llongation ont t


tudis sur des fragments dpicotyles, hypocotyles ou coloptiles, organes dont la croissance
est due uniquement de llongation cellulaire (Figure). Placs dans une solution additionne
dauxine, ces organes subissent une longation plus importante.

Les tudes des facteurs capables de remanier les parois ont montr que llongation de
coloptiles sous contrle de lauxine tait associe une acidification du milieu dans lequel
tait effectue lexprience. Il a ensuite t observ que la mme longation tait obtenue
par lincubation des coloptiles dans une solution acide. Rayle et coll. ont alors propos
que les chantillons traits lauxine acidifient leur parois et que cette acidification (pH=5,5)
pourrait permettre lactivation denzymes capables de remanier la paroi (Rayle and Cleland,
1992). Cest lhypothse de la croissance acide.

Des expriences complmentaires de mesure de potentiels lectriques sur des protoplastes


traits par une auxine (NAA) ont permis de montrer une hyperpolarisation des protoplastes
lis une excrtion de protons en dehors de la membrane plasmique et une inhibition de cette
hyperpolarisation par des anticorps anti-ATPase.

Ces rsultats suggrent fortement que lauxine augmenterait lactivit ATP-ase via une action
sur la transcription, la traduction ou le transport de la protine vers la membrane plasmatique.

Comment lacidification agit-elle sur lextensibilit de la paroi ?

Sans rappeler la structure et la composition chimique de la paroi en dtail on peut prciser que
la paroi I est un composite form de plusieurs polymres associs par diffrents types de
liaison

- cellulose
- hmicellulose
- matires pectiques
- protines

Ce sont surtout les interactions entre cellulose et hmicelluloses (2 composants majeurs) par
lintermdiaire de liaisons H qui ont t considrs.
Ces liaisons H stabilisent le composite et leur suppression le fragilise en le rendant plus
mallable, plus extensible.

3 modes daction de lacidification sur lextensibilit de la paroi ont t envisags :

1. Hypothse dune action chimique dune concentration accrue de H sur la rupture de


liaisons hydrognes Hypothse peu confirme par lexprimentation.
2. Hypothse de loptimisation en milieu acide de lactivit denzymes de dgradation
des polysaccharides type glucanases. Certains arguments plaident en faveur de leur
intervention = blocage de lexpansion par des anticorps antiglucanases, lauxine
induit par ailleurs certains glucanases (chez la tomate).
3. Hypothse de lintervention dautres protines.

2. Rle des expansines :

La paroi contient de nombreuses enzymes hydrolytiques (actives sur les polysaccharides, Fry,
1995) : glycosylhydrolases catalysant soit des hydrolyses au milieu des chanes
(endoglycosylases comme les -,4- endoglucanases) ou leur extrmits (exoglycosylases
comme les xylosidases). Par ailleurs, des transglycosylases spcifiques des xyloglucanes
(xyloglucane transglycosylases hydrolases ou XTH, anciennement XET, voir 3) ont t
identifies. Nanmoins, aucune de ces enzymes napparat plus active pH acide, et aucune
ninduit une longation in vitro quel que soit le pH.
Par contre, la purification dextraits paritaux dhydrocotyle de concombre a permis
didentifier des protines, appeles Ex29 et Ex30 pour expansines, sans activit catalytique
dtectable, capables dinduire une importante longation cellulaire pH acide
(McQueen-Mason et al., 1992). Le clonage des gnes correspondant a conduit
lidentification dune famille multignique subdivise en expansines et expansines
conserves chez les Dicotyldones et les Monocotyldones (Cosgrove, 1999). Rcemment,
grce au squenage complet du gnome dArabidopsis thaliana, une nouvelle classe est
galement distingue : les expansines ou expansin-like proteins (Li et al., 2002).
Lensemble des expansines comporte, dune part une domaine similaire au domaine
catalytique dendoglucanases mais sans acides amins catalytiques, dautre par un domaine
similaire aux CDB (Cellulose Binding Domains) de cellulases microbiennes (Figure).

Les expansines forment une famille de 38 gnes chez Arabidopsis thaliana


(www.bio.psu.edu/expansins/). Elles sont largement exprimes dans tous les organes, et en
particulier dans les tissus en longation (Cosgrove, 1999 ; Cosgrove, 2000 ; Li et al., 2002).
On peut noter en particulier diffrentes observations en faveur de leur rle majeur dans le
relchement parital (revue par Cosgrove, 2000) : en particulier : les expansines Ex29 et Ex30
ne sont prsentes que dans des zones en longation de lhypocotyle.

3. Rle des XTH (ou xyloglucanes transglycosylases hydrolases) :

Malgr leur incapacit induire in vitro un relchement parital plusieurs enzymes


hydrolytiques sont exprimes spcifiquement dans les tissus en expansion.
Les XTH peuvent couper une molcule de xyloglucane et rattacher un des fragments sur une
seconde molcule. Dans certains cas le transfert peut avoir lieu sur une molcule deau
rsultant en un clivage simple comme celui ralis par une endoglucanase.

Les XTH sont exprims dans des tissus en longation et induites par des traitements
inducteurs de llongation (auxine).

Par ailleurs, des fragments courts de xyloglucane (oligosaccharides) induisent une longation
cellulaire mais les longs fragments linhibent. Les rsultats suggrent que le mtabolisme des
xyloglucanes contrle llongation.

33 gnes de XTH ont t identifies chez Arabidopsis associs des profils dexpression
tissus spcifiques mais aussi des spcificits de substrats.

4. Rle des endoglucanases :

Elles sont incapable dinduire llongation in vitro mais des arguments plaident en faveur de
leur intervention comme linduction par IAA de la glucanase CEL 7 chez la Tomate.

IIIC- f- Les rcepteurs dauxine :

Des protines de liaisons (Auxin binding proteins : ABP) pour lauxine ont t caractriss
initialement par des techniques chimiques du type photoaffinit.

Les expriences ont conduit la caractrisation danticorps vis--vis de ces protines et


lidentification de gnes correspondants.

Une difficult dinterprtation a port sur la localisation majoritaire dABP sur le reticulum
endoplasmique, seule une faible proportion dABP tant situ au niveau de la membrane
plasmique (en contradiction avec la localisation thorique des rcepteurs sur la M. P. et sur
leffet biologique dauxines non permantes).

La protine est un dimre de 44 Kd correspondant 2 sous-units de 22 Kd.


Son rle fonctionnel est dmontr par quatre types darguments :

1. Lapport dABP1 de mas purifi des protoplastes de tabac, augmente la


rponse dhyperpolarisation en prsence de NAA
2. Au contraire lapport danticorps ABP supprime cette rponse
3. Un mutant dinsertion dans le gne ABP1 a t identifi chez Arabidopsis
thaliana. A ltat dhomozygote le mutant meurt dans la phase globulaire de
lembryognse dmontrant le caractre essentiel de ce gne.
4. La surexpression du gne ABP1 chez le tabac (associ un promoteur
inductible par la ttracycline) amplifie certaines rponses lAIA.

Ces diffrents rsultats ne prjugent pas de lexistence dautres rcepteurs au-del dABP1.

IIIC- g- Lauxine et le contrle de lexpression des gnes :

Limpact de lauxine sur le grandissement cellulaire via une acidification de la paroi nest
quune des rponses biologiques lAIA. Cette action biochimique sur une ATPase
saccompagne par ailleurs dun effet positif sur lexpression de gnes dans le cas du
grandissement cellulaire ou dautres phnomnes. En clair, lapport dAIA entrane
laugmentation dexpression dun grand nombre de gnes (le plus souvent dans le sens dune
surexpression). Bien quon connaisse mal la chane de transduction du signal auxine on a
approfondi au cours des dernires annes certains des mcanismes impliqus au niveau du
contrle de la transcription par lAIA.

Les promoteurs des gnes sensibles lAIA possdent en commun des


squences (simples ou composites) communes qualifies dauxine
responsive lments AUX-RE. Cette situation est exprimentalement
dmontre par des expriences de dltion du promoteur ou par un
couplage dun promoteur minimum contenant ces lments avec le gne
GUS, qui est ainsi exprim et rponse lAIA. Cette prsence de
squences spcifiques dans les promoteurs des gnes dont lexpression est
contrle par les hormones est gnrale pour lensemble des hormones.

Au-del, des facteurs de transcription capables de reconnatre les squences AUX-RE ont t
caractriss : les ARF1 (auxine response factor) et 23 gnes ARF1 ont t caractriss chez
A. thaliana (pour des protines de 67 129 Kd).

Cette multiplicit de facteur de transcription qui peut correspondre des voies de transduction
spcifiques se complique encore par lintervention dune autre classe de gnes la famille
AUX/AIA pour laquelle on a dmontr lexistence de 25 gnes. Ces gnes rpondent trs
rapidement lauxine et comportent dans leur squence des lments trs comparables la
squence de gnes ARF1 (dans la partie C terminale).

Cette identit de domaine (domaine III et IV) facilite linteraction des protines AUX/AIA et
ARF1 et cette liaison avec ARF1 module sa capacit dactivation de la transcription. Les
protines AUX/AIA ont des demi-vies trs courtes de 8 10 minutes et leur dgradation
contrle par le systme protasome ubiquitine dpendant est stimule par lAIA.

Une complexit du systme rside dans le fait que selon les situations le complexe
AUX/AIA/ARF1 stimule ou inhibe la transcription (le cas plus frquent est linhibition).

Des mutants manquant de certains facteurs ARF prsentent des anomalies de dveloppement
ainsi que certains mutants des gnes AUX/AIA. Rcemment un travail sur la tomate
impliquant la sous expression selon la stratgie anti-sens dun gne AUX/AIA, le gne DR4, a
montr lapparition de phnotypes caractristiques dune hyperauxinie telle que par exemple
lapparition de fruits parthnocarpiques, AUX/AIA serait dans ce cas un rgulateur ngatif et
dune manire gnrale le systme AUX/AIA pourrait reprsenter un systme de rtrocontrle
par lAIA des phnomnes induits par lAIA (empchant que la machine semballe ).

On a ici une dmonstration de la complexit des facteurs qui interviennent dans la rgulation
de la nature et de lintensit des mcanismes transcriptionnels contrls par lAIA.

- Spcificit des gnes et protines ARF1 et AUX/AIA.


- Teneurs en protines ARF1 et AUX/AIA.

Dans le cas des gnes AUX/AIA la teneur en protines correspondantes rsulte la fois de
lintensit de la transcription et de la vitesse de dgradation, toutes deux contrles par lAIA.

IIID- LES GIBBERELLINES :


Les gibbrellines constituent un deuxime groupe de substances de croissance qui paraissent
actuellement avoir une importance peut tre aussi grande que les auxines dans le
dveloppement de la plante. Si les premires observations relatives la dcouverte de
lauxine taient lies une rponse physiologique normale de la plante (les tropismes), les
gibbrellines ont t mises en vidence la suite de lobservation dun fonctionnement
pathologique. Elles ont en effet t caractrises la suite de ltude dune maladie du riz.

IIID a Historique Dcouverte :

Ds le dbut du sicle, des fermiers japonais avaient constat que certains plants de riz taient
atteints de gigantisme. Ces plants cependant ne fructifiaient pas et ne prsentaient donc pas
dintrt pour la production. Il fut tabli que cette anomalie dans la croissance rsultait de
linfection par un Ascomycte parasite appel Gibberella fujikuroi (KUROSAWA, 1926) ou
Fusarium moniliforme quand le champignon est cultiv in vitro = un extrait de son milieu de
culture provoque les mmes symptmes dlongation, et vers 1938 on arriva isoler de ces
milieux de culture un mlange de substances actives appeles gibbrellines.
Ces travaux ne furent pendant longtemps connus quau Japon et ce nest quaprs la deuxime
guerre mondiale que des recherches furent entreprises dans le monde occidental.
Vers 1956, partir dune souche de Gibberella ne produisant quune seule gibbrelline on put
isoler et caractriser chimiquement lacide gibbrellique ou GA3 (travaux de CROSS).
Pendant ce temps, les physiologistes dmontraient les effets spectaculaires des gibbrellines
isoles des filtrats de cultures de champignons sur la croissance de vgtaux ( trs faibles
doses ces substances stimulent en particulier la croissance des espces naines : haricot, pois,
mas) qui sont souvent des mutants de production de GA. Une dose de 0,1 g par plant permet
de doubler la hauteur de pois nains.
Paralllement on dmontrait la prsence des gibbrellines dans les tissus vgtaux (non
infects) (PHINNEY et WEST en 1956 chez le concombre).
Avec la mise en vidence de la rpartition gnrale des gibbrellines il apparaissait donc que
lon tait en prsence dun nouveau groupe dhormones vgtales.

IIID b-Nature Chimique et Diversit des Gibbrellines Naturelles :

Nous avons parl de ces substances au pluriel car la caractrisation de la premire gibbrelline
GA3 a t suivie de la mise en vidence de nombreuses autres gibbrellines dans les tissus
vgtaux puisquon connat plus dune centaine de gibbrellines (130) lheure actuelle
caractrises chez les vgtaux suprieurs et les champignons (certaines tant prsentes dans
les deux sources). Ces diffrentes structures possdent en commun un squelette carbon le
squelette gibbane qui constitue un systme de cycles pratiquement unique dans la chimie des
substances naturelles. Les substituants carbons ports en 7 et 9a du noyau C tant runis par
une liaison pour donner un 4me cycle.

Dfinition des gibbrellines :

Substances synthtises par les plantes possdant le squelette gibbane et actives vis--vis de
tests biologiques spcifiques tels que la croissance de mutants nains (Mas) ou la production
damylase par des albumens dorge.

Les diffrentes gibbrellines se diffrencient par :


Le nombre total datomes de carbone (gibbrellines en C19, ex :
GA3 et en C20, ex : GA18).
La prsence ou non de doubles liaisons
Le nombre de carboxyles
Le nombre et la position des substituants (OH ou CH3 en
particulier).

Diffrentes remarques propos de cette multiplicit de gibbrellines naturelles :

La progression dans le nombre des gibbrellines connues est lie lutilisation des
techniques trs efficaces de chromatographie en phase gazeuse associe la
spectromtrie de masse (ce qui permet la fois sparation et analyse de la structure
des molcules).
Les gibbrellines sont affectes dun nombre qui correspond la chronologie de leur
dcouverte (exception GA3, la premire mise en vidence).
Un mme vgtal ne contient au maximum que 8 10 formes diffrentes (nous
verrons lexemple du mas).
Ces diffrentes formes ont des activits diffrentes vis--vis des tests biologiques ou
mme peuvent tre inactives.
GA3, GA4, GA7, GA14 ont le plus grand spectre dactivit.
Cette diversit de structures actives pose un problme au niveau de la finalit. Sagit-il
de substances hormonales voisines mais plus particulirement affectes une fonction
particulire ? ou dintermdiaires dans la synthse dune seule forme active.
Lexemple du mas permet de conclure en retenant la 2me hypothse. Chez le mas 8
gibbrellines ont t identifies GA53, GA44, GA20, GA29, GA19, GA17, GA1,
GA8. Chez cette espce o de trs nombreux mutants sont disponibles diffrents
mutants nains ont t tudis en particulier d1 et d5 (d pour dwarf) dont nous verrons
les caractristiques aprs la description de la voie de biosynthse des gibbrellines.

Pour conclure propos de cette diversit il faut noter que lon retrouve cette pluralit de
structures pour les hormones strodes chez les vertbrs qui prsentent par ailleurs des
analogies de structure avec les gibbrellines.
Sur un plan pratique des mlanges commerciaux de GA4 et GA7 sont produits partir de
cultures de Gibbrella fugikuroi.

IIID c Biosynthse et Mtabolisme des Gibberellines :

Alors que les gibbrellines ont une structure assez complexe on a une bonne ide de leurs
voies de synthse. Travaux initiaux de WEST (1965-1970) aux USA.

Les gibbrellines appartiennent au groupe des terpnodes composs rsultant de la


condensation dunits isoprne elles-mmes provenant dunits actate.

Actate isoprne terpnes (mono sesqui diterpnes)

Appartiennent ce groupe une autre hormone vgtale lacide abcissique et des constituants
vgtaux importants comme les strols vgtaux, les carotnodes, le caoutchouc polymre de
milliers dunits isoprnes.
Sur un premier schma o est reprsent une voie de biosynthse simplifie des gibbrellines
vous pouvez voir : lorigine mtabolique de diffrents terpnes, le niveau dintervention de
certaines substances (rgulateurs de croissance) comme lAMO16-18 ou le CCC qui sont des
antigibbrellines car elles bloquent la synthse des gibbrellines (ce sont des retardants de
croissance).
Sur un deuxime schma plus complet on peut voir que la voie de biosynthse des
gibbrellines se droule 3 niveaux localisation subcellulaire distincte : chloroplaste,
rticulum endoplasmique, cytoplasme.
Toutes les enzymes de la voie de synthse ont t caractrises ainsi que la plupart des gnes
correspondants. Certaine de ces enzymes sont multifonctionnelles (elles catalysent plusieurs
ractions squentielles sur la chane) et certaines sont codes par de petites familles
multigniques dont les membres sont rguls indpendamment par des facteurs endognes ou
exognes (stade de dveloppement, lumire, hormones). Voir figure.

La copalyl phosphate synthase est trs fortement exprime dans les tissus en croissance. La
kaurne synthase est la premire tape spcifique de la synthse des gibbrellines il sagit
vraisemblablement dune enzyme rgulatrice.
Des cytochromes monooxygnases transforment le kaurene en GA 12 aldhyde.
Des GA 20 oxydases transforment GA12 en GA 20.
Finalement 2 classes dhydroxylases sont importantes :

Les 3hydroxylases conversion de GA 20 en GA 1


ou de GA 9 en GA4 les formes actives.

les 2hydroxylases qui transforment GA1 en GA8 en linactivant en participant ainsi


lhomostasie du pool de gibbrellines actives en limitant laccumulation excessive de GA1.

Plusieurs commentaires sont faire propos de cette voie de synthse


- Laccumulation de gibbrellines entrane par un phnomne de feedback la rpression
des gnes de GA20 oxydases et 3hydroxylases.
- Diverses expriences de gnie gntique ont montr le rle in vivo de ces gnes et
enzymes ex : la surexpression de la 2hydroxylases entrane le nanisme des plantes
par inactivation des gibbrellines. Un mutant de pois mut sur cet enzyme conduit au
contraire un phnotype de rponse exagre aux gibbrellines.
La multiplicit des gibbrellines une ou plusieurs formes actives ? Si lon revient
maintenant aux mutants nains de mas d1 et d5 on a pu montrer que le mutant d5
voyait sa croissance rtablie par addition de Kaurne : le gne mut est celui de la
Kaurne synthase. En revanche pour le mutant d1 seul lapport de GA1 permet la
reprise de croissance toutes les autres gibbrellines en particulier GA20 sont
inefficaces. Ces rsultats permettent donc de conclure, quau moins chez le mas, une
seule gibbrelline GA1 est active et que toutes les autres gibbrellines sont des
prcurseurs ou des formes dinactivation/ dgradation. Le gne mut correspond dans
ce dernier cas lenzyme de conversion de GA20 en GA1.
- Les gibbrellines existent galement sous forme lies avec des oses (glucosides
inactifs) dont le rle physiologique est peu clair. Rle dans le transport, rversibilit de
la liaison ?

IIID- d- Les Gibberellines dans la plante Rpartition- Transport :

Les gibbrellines sont prsentes chez toutes les plantes suprieures, elles sont synthtises
galement par certains champignons.
Comme nous lavons dit on ne retrouve que quelques gibbrellines chez une espce donne, et
les gibbrellines dtectes varient selon le stade de dveloppement.
On pense que les sites de synthse sont les organes contenant les concentrations les plus
leves en gibbrellines, apex des tiges et des racines, jeunes feuilles, mais aussi embryon et
tissu de rserve des graines en dveloppement, fruits
Les concentrations habituelles sont de 0,1 100 ng / g de tissu frais mais de 1 10 g au
niveau des graines.

Les gibbrellines ne prsentent pas de transport polaris la diffrence de lauxine.


Appliques un niveau quelconque de la plante, elles peuvent avoir des effets rgulateurs sur
toutes les autres parties. Elles ont t retrouves dans la sve brute et la sve labore et leur
vitesse de transport (5 cm/h) analogue celle des sucres laisse supposer quelles sont
transportes passivement dans les flux de sve dans le xylme et le phlome.

Un transport de cellules cellules de type symplastique est galement probable, on constate


en effet une rduction du transport par des inhibiteurs mtaboliques de type azide.

IIID eEffets Physiologiques :

Au niveau cellulaire comme les auxines, les gibbrellines ont la fois une action sur la
division, llongation et la diffrenciation. Parmi les effets observables on peut citer :

- Laction sur la croissance des tiges (au niveau des racines et feuilles on observe de trs
faibles rponses) Cette action est particulirement spectaculaire sur des :

1) Mutants nains qui dans la majorit des cas ont perdu la facult de synthtiser des
gibbrellines, par blocage gntique. Les retardants de croissance peuvent dterminer
galement un nanisme chez des espces comme Chrysanthemum et leur effet est lev
par apport de gibbrellines exognes.
2) Espces en rosette bisanuelles choux, laitue dont les entre-nuds sont trs courts
pendant la 1re anne de vgtation et les feuilles sont accoles les unes aux autres.
Dans la nature, chez ces espces les tiges sallongent la deuxime anne. Un
traitement par les gibbrellines (0,1 mg / semaine) peut conduire rapidement des
croissances spectaculaires (3 m de haut). Cependant, les gibbrellines ont un effet sur
la croissance de nombreuses plantes normales et intactes comme la Tomate (qui ne
possderaient donc pas des concentrations optimales pour leur croissance). Le plus
souvent on assiste un accroissement des entre-nuds existant par des phnomnes
dlongation essentiellement).

Croissance des fruits

Effet commun avec les auxines, mais les gibbrellines agissent sur des espces pour lesquelles
lauxine na pas daction (Rosaces, Pcher, Pommier, Raisins). La parthnocarpie peut tre
obtenue avec des gibbrellines.
Leve de dormance

Lapplication de gibbrellines des bourgeons dormants permet la leve de dormance et leur


dbourrement. Mme effet sur la leve de dormance des graines.

Initiation de la floraison

Pour des espces ayant des exigences photopriodiques ou de vernalisation pour fleurir, la
transformation dun mristme vgtatif en mristme floral peut tre obtenue dans de
nombreux cas par application de gibbrellines. Sans que lon sache si ces hormones sont
directement impliques dans le processus physiologique normal.

IIID f- Mcanismes Molculaires daction des Gibbrellines :


Nous lavons vu les gibbrellines dterminent un nombre important de rponses mais leur
mode daction au niveau molculaire a t, comme dans le cas de lauxine, essentiellement
tudi en dtail vis--vis dun seul phnomne : linduction des enzymes dhydrolyse de
lamidon dans les graines de crales.

Exposition du problme

Lembryon des graines de crales est entour dun tissu de rserve : lalbumen qui est lui-
mme entour dune fine couche de cellules riches en protines (grains daleurone) appele
couche daleurone.
Quand la germination dbute, sous linfluence de lhumidit par exemple, les cellules de la
couche daleurone librent des enzymes qui hydrolysent lamidon, les protines et le RNA de
lalbumen, les produits solubles forms tant ensuite utiliss pour le dveloppement de
lembryon.
En 1958, YOMO au Japon et PALEG en Australie trouvrent que des graines dOrge prives
de leur embryon et places lhumidit ne produisaient pas damylase. Si les grains et les
embryons taient placs en suspension dans une mme fiole, les grains prsentaient alors une
activit amylasique comme des semences normales. YOMO montra de plus que des extraits
purifis dembryon appliqus sur les graines dterminaient lapparition de lactivit amylase.
Ceci suggre, bien que lembryon fournit normalement la couche daleurone une substance
qui lui permet de librer l amylase. Il sagit dune hormone la gibbrelline qui a t isole
des grains dOrge sous la forme GA3 et qui peut remplacer laction de lembryon.

Les tapes suivantes ont permis de montrer que laugmentation de lactivit amylase
provenait dune synthse de novo de lenzyme (expriences de marquage en densit DO ou
avec des acides amins 0 suivi dune centrifugation lquilibre) et que cette synthse
provenait elle-mme de la production de nouveaux ARN messagers spcifiques (exprience
de Northern, inhibiteurs de la transcription).

De nombreuses tudes ont ensuite port sur la chane de transduction du message gibbrelline.

Si diverses expriences dmontrent la prsence de rcepteurs de GA sur le plasmalemme


(action dhormone non permante, inefficacit de la microinjection de GA) la nature
molculaire du rcepteurs nest pas connue.

En revanche, de nombreux messagers secondaires et lments de la chane de transduction ont


t proposs dans le mcanisme daction des gibbrellines avant la stimulation de la
transcription :

Lion Ca
Le pH cytosolique
La calmoduline
Le GMP cyclique

Ces diffrents paramtres augmentent squentiellement lors du traitement de protoplastes de


cellules daleurone par GA. Par exemple, GA3 accrot la teneur en calcium cytosolique via
louverture de canaux calciques, le retour des concentrations normales de calcium serait
du des Ca ATPases de la membrane plasmique et un influx de calcium vers le RE. Des
protines G htrotrimriques sont galement impliques dans les premires tapes de la
transduction : le MAS 7 qui stimule lchange GDP/GTP stimule la production d amylase.
Au niveau terminal de la chane de transcription il faut souligner dans le promoteur du gne
d amylase lexistence dun Gibberellic acid responsive complex GARC avec 3 rgions
essentielles dont une le GARE (gibberellic acid responsive element). Par ailleurs, un cDNA
codant une protine de 60 Kda (GAB1) avec un domaine en doigt de Zinc rpt a t
caractris ainsi quun gne GAMyb (facteur myb) stimulant la production d amylase en
labsence de GA.
GA stimule, par ailleurs, la production de GAMyb. La rponse finale dpend dun quilibre
entre GAB1 inhibiteur de la transcription et GAMyb activateur.

Enfin il faut souligner que l amylase est une glycoprotine scrte lextrieur des cellules
daleurone (pour quelle puisse migrer ensuite vers lalbumen). Des inhibiteurs de
glycosylation bloquent donc cette scrtion.

IIID g Modification des taux de Gibberellines chez les plantes par gnie
gntique :

Une amlioration de la productivit des crales a repos sur lobtention de varits semi-
naines chez lesquelles lutilisation de lazote des amendements tait plutt utilis pour la mise
en place du grain que de la tige.
De ce point de vue on peut rappeler que deux gnes dits de la rvolution verte le gne de
bl Rht et le gne de riz Sd1 sont impliqus dans la signalisation associ GA et sa
biosynthse respectivement.
Par gnie gntique plusieurs approches peuvent tre envisages pour rduire les taux de GA

1. rduire la biosynthse
2. augmenter le catabolisme

1. Par exemple des constructions anti-sens du gne de GA 20 oxydase


rduisent les taux de gibberellines chez Arabidopsis
2. Surproduction de GA2 oxydase une enzyme du catabolisme de GA. Un
groupe Japonais (2003) vient dobtenir des rsultats intressants selon cette
approche en transformant une varit de riz par une construction associant
le gne de GA2 oxydase au promoteur (la synthse de GA chez le riz est
dpendante des organes) dun gne de biosynthse de GA dans les tiges.
Les plantes transformes ont un phnotype semi-nain mais une floraison et
un dveloppement du grain normal contrairement des plantes o le gne
tait associ un promoteur constitutif (actine).

IIIE - LES CYTOKININES

La troisime catgorie dhormones que nous abordons aujourdhui les cytokinines prsentent
comme les prcdentes AIA, gibberellines des effets biologiques multiples mais leffet
initialement mis en vidence porte sur la division cellulaire, plus particulirement sur la
cytokinse do le nom de cytokinines.

IIIE a- Historique et dcouverte :

La dcouverte des cytokinines a t associe la recherche des exigences hormonales des


cultures dorganes ou de tissus vgtaux in vitro. Ces tissus ou organes isols de la plante
exigent en effet pour se dvelopper des lments divers dans le milieu et en particulier des
hormones.
1941 Van Overbeek met en vidence les proprits actives du lait de noix de coco* vis--vis
de la croissance de jeunes embryons de Datura stramonium. Ce milieu est toujours utilis en
culture de tissus vgtaux.

* endosperme liquide de la noix de coco qui se solidifie par la suite et qui est trs riche en
acides nuclques.

1954 Le groupe de SKOOG montre que la croissance in vitro des tissus de moelle de tabac
ne peut se faire avec la seule prsence dauxine (faible croissance pas de division, seulement
grandissement cellulaire). La recherche de substances actives conduit mettre en vidence
laction positive
Du lait de noix de coco
Dextrait de levure
De DNA autoclav

1955 Miller obtient partir de sperme de Hareng autoclav (trs riche en ac. nuclques)
une substance capable dinduire la division cellulaire des tissus de moelle de tabac de trs
faibles concentrations 1 g/litre.

Cette substance a t identifie il sagit de la 6-furfurylaminopurine ou kintine actuellement


encore utilis comme rgulateur de croissance.
Dautres substances synthtiques de nature voisine et des drivs de ladnine isols des
vgtaux ont une action comparable. Lensemble de ces substances est regroup sous le terme
de cytokinines : Adnines substitues ayant une action sur la croissance et la diffrenciation
des tissus vgtaux en culture in vitro

IIIE b- Nature chimique :

A ct de la kintine dautres substances synthtiques activits cytokinine existent dont la


plus connue est la benzyladnine disponible commercialement trs utilise en culture in
vitro .

Des activits cytokinines ont t initialement caractrises dans divers extraits vgtaux : lait
de noix de coco, extraits de divers fruits mais sans identification des structures actives.

En 1964, 9 ans aprs la dcouverte des cytokinines LETHAM identifie dans les endospermes
laiteux de mas (Zea Mays) la 4-hydroxy-3mthyl-2butnyl amino purine ou Zatine.
Depuis cette molcule a t caractrise dans de nombreuses plantes ; elle est responsable de
lactivit biologique du lait de noix de coco.

Par la suite on a abouti la caractrisation chez les vgtaux de lisopentenyladnine libre ou


sous forme de riboside qui semble la plus largement rpandue. Ces cytokinines naturelles sont
plus efficaces que les cytokinines synthtiques.

Relations structure activit : De nombreuses substitutions sont possibles au niveau du


groupement NH2 de ladnine tout en conservant lactivit.

Substitution sur les cycles : perte dactivit lexception de la


substitution en 9 dun hydrogne par un groupement ribose ou
ribose phosphate.

IIIE c- Biosynthse Mtabolisme :


La voie de Biosynthse est trs simple. Les cytokinines sont des adnines substitues,
ladnine est une base purique, constituant naturel des vgtaux qui intervient dans la
synthse des acides nucliques. Les cytokinines naturelles connues rsultent de la substitution
dun hydrogne du NH2 (en 6) par une chane, 5 atomes de carbone correspondant une
unit isoprne de type pyrophosphate disopentnyle (Cf synthse Gibb-ABA).

Cette origine a t dmontre par des incorporations de mvalonate marque dans les
cytokinines. Une enzyme ralisant le couplage 5AMP + pyrophosphate disopentenyle est
lisopentenyltransfrase IPT (cytokinine synthase) cette enzyme naccepte pas ladnine ou
ladnosine comme substrats elle a t caractrise initialement ainsi que son gne chez les
microorganismes et cest La caractrisation rcente du gne chez les vgtaux qui conclut
dfinitivement le dbat polmique relatif la production des cytokinines non pas par la plante
mais par la flore piphyte qui la colonise.

Les cytokinines existent et sont actives la fois ltat libre ltat de nuclosides et de
nuclotides. Curieusement on trouve des structures de type cytokinine dans les ARN de
transfert (tRNA). Les t RNA aprs avoir fix un ac. amin vont le transfrer et permettre son
incorporation dans une chane polypeptidique en voie de formation au niveau des ribosomes.
Chaque t RNA possde 2 rgions de sa molcule particulirement typiques

celle o se fixe lac. Amin


celle appele anticodon (correspondant une squence de 3 nuclotides) qui lui
permet de sapparier avec le codon correspondant du RNA messager et donc de
contribuer la traduction de cet ARN messager en introduisant au bon endroit le bon
ac. amin.

Les ARN de transfert qui ont une structure secondaire en feuille de trfle en raison de liaisons
hydrognes entre bases complmentaires comportent de nombreux nuclotides rares ou
inhabituels : natures des bases mthyles, addition, substitution
type de liaisons entre base et sucre

et parmi ces nuclotides rares on trouve des structures de type cytokinine comme les adnines
substitues.

Ces cytokinines occupent une position spcifique adjacente lanticodon se terminant


par un A.
Cette prsence des cytokinines dans les t RNA se retrouve donc chez les vgtaux
mais aussi chez les animaux et bactries.
On a envisag que les cytokinines proviendraient de la dgradation des t RNA
vgtaux mais les tudes ralises sur le renouvellement (turn over) des t RNA
vgtaux semblent indiquer que celui-ci nest pas suffisamment rapide pour maintenir
une quantit de cytokinines compatible avec les exigences pour la croissance.

Par ailleurs cest la forme isomrique cis-zatine qui est prsente dans les t RNA alors que la
forme trans-zatine est la forme prdominante et la plus active dans les tissus, il existe
cependant une cis-trans isomrase dans les tissus vgtaux.

Au final on pense que les cytokinines ont une double origine : synthse via lIPT et via la
dgradation des t RNA.

Les cytokinines lorsquelles sont apportes de faon exogne subissent 3 types de


transformation.
Formation de nuclotides mono-di-triphosphates qui sont actifs au mme titre que les
cytokinines bases et qui pourraient mme tre les formes actives les plus gnrales.
Formation de glucosides O-cytokinines glucosyls sur la chane latrale ces
ractions sont rversibles et les glucosides constituent donc des formes de rserves
inactives.
N-cytokinines glucosyls sur les N en 7, 9, 3 ; il sagit
dans ce cas dune dsactivation rversible (le glucose est dans ce cas li un atome
dazote du noyau purique).
Dgradation par limination de la chane latrale et perte dactivit sous laction dune
cytokinine oxidase. Cette enzyme maintiendrait lhomostasie du taux de cytokinines
(elle est ainsi inhibe par la diphnylure qui mime, par effet indirect, les effets de
lapport de cytokinines exognes).
La raction catalyse est du type : isopentenyladnosine adnosine.

IIIE d- Cytokinines dans la plante :

Il est classiquement admis que les cytokinines sont produites de faon prfrentielle dans les
racines, bien que les embryons, les jeunes fruits, les bourgeons aient aussi une autonomie de
production.

Elles sont prsentes dans les racines en grande quantit et sont synthtises partir de
prcurseurs radioactifs.
On retrouve des cytokinines dans les exsudats racinaires de certaines plantes (Mas)
Les feuilles sont dpendantes des racines pour la production de cytokinine

Exemple : Phaseolus vulgaris lorsque lon sectionne une tige feuille et si on la


maintient en survie dans leau le taux de cytokinines diminue mais recommence
augmenter lors de la formation de racines adventives.

Les cytokinines seraient transportes dans le xylme. Appliques de faon exogne au niveau
des feuilles elles migrent peu.

Division cellulaire :

Un des effets des cytokinines est de permettre la cytokinse c'est--dire la formation dune
paroi transversale assurant la sparation de deux cellules filles. Cest en raison de cette action
spcifique sur cette phase de la division cellulaire que le nom de cytokinine a t donn ces
hormones.

Il faut galement remarquer que dans les conditions des essais biologiques les cytokinines
seules sont sans action sur la division cellulaire mais quelles ne peuvent agir quen prsence
dauxine.

Ceci est un exemple de complmentarit daction entre deux substances de croissance =


synergie qui doit vraisemblablement se retrouver dans de nombreux cas.

Si lon considre lintervention des cytokinines dans les conditions naturelles on peut faire
rfrence aux tissus tumoraux pour lesquels on a montr une nette activation de la synthse
des cytokinines et on peut penser que dans les zones mristmatiques des tissus normaux ces
systmes de synthse sont particulirement actifs.
Diffrenciation

Les cytokinines permettent la diffrenciation de bourgeons sur des tissus en culture leur action
est contrebalance par celle des auxines qui favorisent la production de racines, la
diffrenciation du tissu dpendant en fait de lquilibre auxine .
cytokinines

Leve de dormance : les semences de diverses graines Tabac, Laitue, voient leur
germination stimule par les cytokinines. Cet effet peut avoir des rpercussions
cologiques. Aux USA les graines dune plante parasite des cultures Striga asiatica ne
germent quau contact des scrtions racinaires de la plante-hte Mas. Au-del de
cette observation il est possible que les cytokinines aient un rle plus gnral dans la
germination des semences dans les conditions naturelles.
Effet sur la mobilisation des mtabolites
MOTHES (1961) a dcouvert que des applications localises de cytokinines des
feuilles entranait une mobilisation de mtabolites apports de faon exogne des
zones de dpt vers la zone traite ou une rtention de mtabolites au niveau du
traitement (sels minraux acides amins).
Cet effet actuellement inexpliqu peut tre en partie lorigine des deux autres
manifestations de laction des cytokinines que nous dvelopperons plus tard

Laction sur la dominance apicale


Laction anti-snescence

Les cytokinines produites par les bactries : diffrentes bactries pathognes ou colonisatrices
des plantes produisent des cytokinines ce qui entrane au niveau des vgtaux des
phnomnes tumoraux par multiplications cellulaires anarchiques.

Agrobacterium tumefaciens avec transfert du gne IPT la plante


Pseudomonas savastanoi sans transfert de gne mais excrtion de cytokinines
Rodococcus fascians producteur de cytokinines produit un phnotype particulier que
nous verrons propos de la leve de dominance apicale : les balais de sorcire.

On ne connat pas de mutants affects dans la synthse des cytokinines ni dinhibiteurs de la


synthse des cytokinines. Cependant la transformation gntique des plantes par diffrents
gnotypes dAgrobacterium tumefaciens a apport des conclusions intressantes.
En culture de tissus les tissus tumoraux rsultant de laction de cette bactrie se rvlent
autotrophes par rapport aux hormones suggrant que le transfert de TDNA entrane une
surproduction dhormones (ils nont pas besoin dapport dhormones exognes contrairement
aux tissus normaux).
Trois gnes ont t ainsi identifis dans le TDNA. Deux impliqus dans la production dAIA.
Le gne 1 code une enzyme de formation dindole actamide.
Le gne 2 code une enzyme hydrolysant lindole actamide en tryptophane.
Le 3me gne correspond lIPT enzyme de synthse des cytokinines.

Des expriences de mutagense par insertion de transposons (transposon TN) chez


agrobacterium tumefaciens ont conduit des souches affectes dans certains de ces gnes.

La transformation des plantes par ces souches modifies a conduit des phnotypes
tumoraux spcifiques qui on conduit associer le locus affect lallure de la tumeur.
tms pour tumour shooty
tmr pour tumour rooty

Les mesures de teneurs en hormones de ces tissus tumoraux ont montr une rduction des
quantits en auxine chez tms, une rduction des quantits en cytokinines chez tmr.
Les locus ont t ensuite associs des gnes codant des enzymes de synthses de ces
hormones mais ces expriences ont surtout montr limpact des balances hormonales sur la
diffrenciation.
La corrlation observe confirme les rsultats dcrits lorigine pas Skoog et Miller pour les
tissus de tabac en culture.

Formation de tiges favorise par un rapport lev cytokinines


auxine
racines favorise par un rapport faible cytokinines
AIA
IIIE e- La perception et la transduction du signal cytokinine :

Un des systmes les plus conservs pour la transduction des signaux extracellulaires est la
voie des protines G liant le GTP. Ce sont les protines G qui en changeant de conformation
lors de lchange GDP-GTP se lient des protines effecteurs et les activent (enzymes,
canaux ioniques).
De nombreuses vidences dmontrent lexistence de ce systme chez les plantes.

Systmes affines pour P GTP


Systmes ragissant aux anticorps contre les units G , G mais pas G

Il est vraisemblable que le systme des G protines existe donc chez les plantes. Ces
observations suggrent que des rcepteurs membranaires 7 domaines transmembranaires
(qui sont coupls aux protines G) existent donc galement chez les plantes. Ces rcepteurs
sont trs nombreux 1 % du gnome chez les animaux et sont capables de reconnatre des
messages aux structures aussi varies que les photons, les ions, des effecteurs chimiques

En 1998 le groupe de Hooley Bristol en exploitant les homologies de squence aux niveaux
des EST de Arabidopsis, riz, pin a pu trouver des squences prsentant des homologies avec
les 7 TM receptors.
A partir de ces informations on est arriv au clonage dun gne chez Arabidopsis : GCR1 qui
est exprim un faible niveau dans diffrents organes de la plante. La transformation de
plantes avec des constructions antisens (promoteur 35 S) conduit des transformants
phnotype modifi analogue celui de plantes manquant de cytokinines ou celui dun
mutant CVR1 insensible aux cytokinines.

Par ailleurs, le transformant est moins sensible lapport exogne de benzyladnine.

Arguments en faveur dun systme double composante dans la perception /


transduction du signal cytokinine

Ces systmes comprennent comme cela a t mentionn prcdemment :

une partie rcepteur


une partie transmetteur (histidine kinase)
une partie rgulateur de rponse

Une approche par Activation TDNA Tagging a consist transformer un grand nombre de
plantes (50 000 cals dA. thaliana) par une construction comprenant un ttramre du domaine
enhancer du promoteur 35S. Linsertion au hasard de cette squence dans un promoteur
quelconque va amplifier la transcription du gne correspondant et permettre galement de
localiser le promoteur interrompu (par hybridation).
Le crible de slection a port sur la recherche de plantes prsentant un phnotype comparable
celui rsultant dun apport de cytokinines (prolifration de tiges, verdissement acclr,
inhibition de la formation de racines).
Le gne CKI1 a t caractris, il code pour un systme deux composantes et sa
surexpression donne un phnotype correspondant lapport de cytokinines exognes (pas
encore de liaison entre la protine et les cytokinines dmontre).

Enfin un screening de mutants par rapport la perte de sensibilit aux cytokinines en cultures
de tissu a conduit isoler le mutant Cre1-1 cytokinine .
Le mutant ne rpond pas lapport exogne de kintine, zatine, IPA.
Le gne correspond une histidine kinase et la mutation correspond au changement dune
Glycine 467 par Asparagine 467.
Cependant le mutant ne prsente pas danomalie au niveau du systme arien sur la plante
entire mais seulement des altrations du systme vasculaire des racines suggrant le
fonctionnement majoritaire de CRE 1 dans les racines, do lide de rcepteurs tissus
spcifiques.

IIIE f- Ingnierie de la production des cytokinines :

Deux dmarches ont t envisages des fins soit fondamentales ou appliques.

La surexpression du gne IPT. Ce gne a t associ diffrents promoteurs.

- un promoteur constitutif fort comme le 35 S entrane une surproduction de


cytokinines avec les symptmes associs classiques :

perte de dominance apicale


rduction du systme racinaire
augmentation du nombre de chloroplastes.

Cependant la plante a un dveloppement gnral perturb par excs de cytokinines.


Le gne IPT a donc t associ des promoteurs inductibles ou exprims de faon spcifique
dans le temps.

gne de protine de heat shock induit par un lvation de T


gne exprim lors de la snescence

Dans ces conditions la surproduction de cytokinines modre ou limite dans le temps se traduit par
des effet positifs, antisnescence en particulier.

La deuxime approche consiste inhiber par une stratgie antisens ou RNAi le gne de cytokinines
oxydase. Cette approche potentiellement intressante a t encore peu utilise.

IIIF - LETHYLENE
IIIF a- Dcouverte du rle hormonal :

La dmarche qui a conduit la dcouverte du rle hormonal de lthylne est tout fait
diffrente de celle que nous avons voque pour les autres hormones.

En effet, laction de lthylne exogne est connue depuis longtemps sur les vgtaux et ce
nest qu la suite de la dmonstration de la prsence naturelle de lthylne chez les plantes
que lon a conclu son action hormonale.

Ds 1886 une jeune Botaniste russe NELJUBOW observait leffet du gaz dclairage sur la
morphologie de plantules de pois : raccourcissement et paississement des tiges, perte du
gotropisme ngatif : ensemble de rponses regroupes sous le terme de triple rponse.

Parmi les diffrents effets de lthylne ce sont cependant les observations relatives la
maturation des fruits qui ont t dcisives dans la dcouverte de son rle hormonal.

1924 : DENNY : lthylne permet le jaunissement et la maturation des citrons


1937 : GANE : montre que les manations gazeuses de pommes
mres initient la maturation des fruits verts et que lthylne
constituait le gaz actif (premire dmonstration de la production dthylne
par un vgtal). A partir de ce moment on attribue un rle lthylne dans
la maturation des fruits et lon montre que de nombreux fruits mettent de
lthylne.

1955-1960 : le dveloppement de chromatographie en phase gazeuse fit


franchir une nouvelle tape car cette mthode trs sensible et
particulirement adapte la dtection de ce gaz permet de montrer que
lthylne tait prsente dans toute les parties de la plante.

Paralllement on dmontrait au-del de la maturation les actions diverses


de lthylne sur le dveloppement des vgtaux et en 1969 ce compos
tait finalement rang parmi les hormones vgtales.

Produite par les vgtaux, active faible dose et distance du lieu de


synthse lthylne rpond tout fait la dfinition dune hormone.
Elle reprsente cependant des caractristiques particulires au niveau du
transport : on observe en effet une diffusion gazeuse lintrieur de la
plante mais aussi lextrieur do la possibilit daction sur dautres
individus. Cette proprit suggre une analogie avec les phromones
animales.
Son caractre gazeux la fait, par ailleurs, comparer un autre gaz loxyde
nitrique (NO) molcule gazeuse implique dans la signalisation chez les
animaux (les vgtaux produisent aussi de loxyde nitrique).

IIIF b Production par la plante :

En raison de la sensibilit et de la spcificit de lanalyse chromatographique en phase gazeuse


on ne retient pratiquement pas de test biologique pour estimer les quantits dthylne dans la
plante (sensibilit 10 mole - 10 l).
Les fruits, les fleurs et diffrents organes de la plante produisent de lthylne. On distingue
gnralement :

La teneur interne (TI)


Lmission dans latmosphre (EAth)

Exemple pour la Poire Williams : TI= 80 l/g


EAth = 200 l/g/24h

Aux USA, ABELES a estim que la production dthylne par les plantes tait de 2.10
tonnes par an. Cette production peut tre compare celle provenant des vhicules et des
industries 15.10 tonnes par an. Ces concentrations pourraient tre toxiques pour les plantes
mais lthylne est soit transform par oxydation par lozone par raction avec les oxydes
dazote la lumire ou utilise par les microorganismes du sol.

Il est noter :

1) Que la production dthylne est trs sensible aux facteurs de lenvironnement :


lumire, temprature, diffrents types de stress (blessures, radiations, scheresse,
attaques par les microorganismes, etc). Dans le cas de ces agressions cette synthse
accrue dthylne saccompagne de la formation de composs phnoliques, les
enzymes de synthse PAL ou doxydation (peroxydase) de ces composs tant
nettement actives. Lthylne dclenche ainsi des ractions de la plante qui peuvent
tre assimiles des sortes de ractions de dfense de la plante (cicatrisation,
protection) do lappellation dHormone de Stress.
2) Que la production dthylne est stimule par les auxines (naturelles ou synthtiques).
Les travaux d ABELES et de BURG (1968-1972) ont montr que de nombreuses
rponses obtenues chez les plantes lors de lapplication dauxine pouvaient tre
reproduites par lexposition des plantes lthylne. Ainsi de nombreuses rponses
attribues lauxine aux fortes concentrations se produiraient par lintermdiaire de
lthylne (inhibition de llongation). Cette interaction pourrait fournir un contrle
naturel lors de la production excessive dauxine.

IIIF c Voies de biosynthse et rgulation de la synthse :

Depuis longtemps il avait t dmontr que la mthionine (ac. amin) tait un prcurseur de
lthylne. En effet, si on apporte de la mthionine marque des tranches de pommes ou de
bananes on observe une incorporation de la radioactivit dans lthylne.
Lthylne driverait des carbones 3 et 4.

Les tapes intermdiaires ont t ensuite caractrises selon la squence :

Mthionine S-adenosyl mthionine Acide cyclopropane carboxylique (ACC) Ethylne

Lenzyme de synthse de S-adenosyl mthionine la SAM synthase nest pas spcifiquement


impliques dans la synthse de lthylne car son produit est majoritairement utilis comme
donneur de mthyle dans dautres synthses : lignines, polyamines
Les autres enzymes plus en aval ont un rle plus spcifique. Lenzyme de synthse de lACC
semble jouer un rle rgulateur important dans la production de lthylne. Cest une ACC
synthase enzyme comportant un groupement prosthtique pyridoxal phosphate dont
lactivit est bloque par des inhibiteurs, des enzymes pyridoxal-P.

LACC synthase a t purifie et clone. Cest un exemple dune famille multignique dont
chaque membre est diffremment exprim en rponse des facteurs du dveloppement, de
lenvironnement ou des facteurs hormonaux. Avec des sondes spcifiques une expression
diffrentielle des diffrents gnes a t value par exemple :
Une forme augmente lors de la maturation
Une autre forme augmente en rponse des blessures
Une dernire forme augmente en rponse lauxine

LACC oxydase qui transforme lACC en thylne est une dioxygnase qui demande du fer et
de lascorbate et fonctionne en prsence dO2. Elle correspond galement une famille
multignique et subit galement une augmentation de son activit lors du stress.

Plusieurs observations tendent montrer que la stimulation de la production dthylne la


suite du stress procde dune nosynthse dACCsynthase qui jouerait un rle limitant dans la
production dthylne. En effet, le systme de conversion de lACC en thylne apparat
constitutif dans la plupart des tissus car lapport dACC une large varit de plantes ou de
tissus dtermine un accroissement trs important de production dthylne.

Lauxine, le wounding , le flooding stimulent la synthse dACC synthase et la


production dACC et dthylne.
Certains mutants de tomate rin sont incapables de mrir en raison dun dfaut dans la
production dthylne. Lapport dACC maturation.
La mutation concerne le gne de lACC-synthase leffet ngatif de lapport de diffrents
prcurseurs de lACC.

Lpinastie constate au niveau des feuilles lors de la croissance sur sols inonds est due au
transport vers les parties ariennes dACC non transform au niveau des racines en raison de
labsence dO2.

Enfin lACC peut tre transform en une forme conjugue de manire irrversible : le
malonyl ACC. Il a t propos de faon humoristique que la quantit de malonyl ACC
retrouve chez une plante soit un indicateur des situations de stress vcues par la plante.

Au-del des voies de biosynthse naturelle un certains nombre de composs chimiques


exognes sont utiliss comme prcurseurs dthylne il sagit de lethephon ou de lethrel.

La dgradation de lthylne essentiellement lextrieur de la plante implique une


conversion en oxyde dthylne ou en thylne glycol.

IIIF d Effets physiologiques :

Lthylne peut tre considr comme une hormone mixte avec des effets positifs : initiation
de la floraison, et des effets ngatifs sur le dveloppement : inhibition de la croissance,
abscission, snescence.

Elle exerce une influence sur toutes les phases du dveloppement de la germination la
snescence souvent en interaction avec dautres hormones.
Maturation des fruits :

Le phnomne de maturation englobe des changements biochimiques profonds qui conduisent


des modifications de texture, du got, de la couleur du fruit et le rendent apte la
consommation.

Sans entrer dans le dtail de ces modifications il faut signaler quelles sont prcdes chez de
nombreux fruits par un accroissement trs net de lintensit respiratoires que lon appelle crise
climactrique, la priode antrieure ou phase pr climactrique tant une priode dactivit
mtabolique ralentie (voir figure).

Changements biochimiques lors de la maturation :

Hydrolyse des composs pectiques pectine soluble


Hydrolyse de lamidon sucres
Disparition des acides organiques oses

Disparition des substances astringentes (tannins)

1. on a pu montrer que lapport de lthylne dclenche la crise climactrique et les


phnomnes de maturation qui sen suivent.
2. des mesures de la production dthylne dans le fruit rvlent que la quantit de gaz
saccrot avec la crise climactrique.
3. enfin lutilisation dinhibiteur de la production dthylne la rhizobitoxine retarde
la maturation des pommes.

Selon les fruits on constate que la production dthylne est parallle la monte de la crise
climactrique ou la prcde en revenant sa valeur initiale lors de la monte (Banane).

On considre donc que lthylne est lhormone de maturation naturelle des fruits. Le contrle
de la production thylne a des applications commerciales dans le contrle de la maturation
des fruits.

La maturation des fruits peut tre considre comme une tape prcoce de la snescence qui
est dfinie par rapport des critres de consommation. Lthylne de faon plus gnrale,
induit la snescence chez dautres organes comme les fleurs ou les feuilles.

IIIF e Mcanismes daction de lthylne :

Lthylne est sans doute lhormone vgtale dont les mcanismes molculaires daction
(perception, transduction du signal) sont les mieux connus.

Ces rsultats sont lis une exploitation extensive de mutants dArabidopsis thaliana
insensibles lthylne au niveau de la rponse physiologique classique de la triple rponse.

Le mutant ETR1 (thylne rsistant) a permis lisolement du rcepteur dthylne. Ce gne


isol par clonage positionnel code une protine qui comporte des homologies avec les
systmes rgulateurs bactriens deux composantes :

Domaine senseur
Domaine histidine kinase (transmetteur)
Domaine receveur (rgulateur de rponse).
La protine rcepteur existe sous forme de dimres les 2 sous units tant lie par 1 pont
disulfure.

La protine recombinante est capable de fixer lthylne au niveau de sa rgion N terminale


hydrophobe. La cystine 65 est implique dans cette fixation.

Dautres mutants de sensibilit ont t caractriss tels que CTR1, EIN2, EIN3, ETR2, EIN4,
ERS.

Certains des gnes correspondants (ETR2, EIN4) correspondent peut tre une redondance
des rcepteurs, dautres codent pour des intermdiaires de la chane de transduction.

CTR1 code pour une protine rpresseur, car la mutation entrane une triple rponse
constitutive.

La liaison du rcepteur ayant fix lthylne avec CTR1 dsactive ce dernier. Lordre
dintervention de ces diffrentes protines le long de la cascade perception transduction a
commenc tre identifi : ETR1 CTR1 EIN2 EIN3 ERF1 Rponses

Le domaine cytoplasmique de ETR1 interagit avec le domaine rgulateur de CTR1(protine


kinase de type RAF).
EIN2 protine membranaire, EIN3 et ERF1 (Ethylene response factor) qui sont pour les deux
derniers des protines nuclaires rle de facteur de transcription se situent plus en aval.
ERF1 est rapidement induit en rponse lthylne et dclenche un ensemble de rponses
physiologiques quand il est exprim ectopiquement.

Lintervention de ces gnes sur une mme voie de transduction a t ordonne par des tests
gntiques dpistasie qui permettent par croisement de 2 mutants suivie dune
autofcondation de dterminer par analyse du phnotype le gne qui agit avant lautre sur la
chane (le gne qui agit en 1er donne le phnotype).

IIIF f Applications biotechnologiques :

Le mtabolisme de lthylne a fait lobjet de manipulations gntiques en vue de contrler la


maturation. De nombreuses pertes de fruits rsultent en effet de phnomnes de maturation /
snescence non contrls aprs la rcolte.

Les interventions ont port sur la sous-expression des gnes dACC


synthase ou dACC oxydase ou sur la surexpression dun gne
bactrien dACC dsaminase du genre Pseudomonas qui ralise la
conversion (ACC actobutyrate)

Par ces diffrentes stratgies on a pu obtenir des plantes maturation diffre (tomate,
melon).

La maturation peut tre dclenche par apport dthylne (comme cest le cas industriellement
pour la banane rcolte verte).

Une amlioration du procd consiste en lutilisation de promoteurs spcifiques associs ces


gnes.

Fruit spcifique pour viter des effets pliotropiques


Ou inductibles par des conditions particulires
Lumire inductible et transfert lobscurit par exemple pour initier la
maturation.

IIIG LACIDE ABCISSIQUE

Des inhibiteurs de croissance ont depuis longtemps t caractriss chez les plantes il sagit
souvent de composs phnoliques scrts ou excrts souvent actifs aprs leur oxydation.
Ces composs sont impliqus dans les phnomnes dalllopathie c'est--dire linhibition de
croissance dune plante par une autre plante proximit.
Au-del de ces phnomnes une substance effet inhibiteur de la croissance qui a une
rpartition gnrale et une fonction hormonale est lacide abcissique.

IIIG a Historique Dcouverte :

La dcouverte de lacide abcissique est intressante car elle a t ralise simultanment par
des chercheurs travaillant dans des laboratoires diffrents sur des problmes physiologiques
distincts.
Dans les annes 1960, WAREING et ses collaborateurs au Pays de Galles recherchaient la
cause de larrt de la croissance des arbres en automne et le facteur qui provoque la formation
des bourgeons dormants. Ils obtinrent partir des feuilles dAcer pseudoplatanus un extrait
acide qui tait un puissant inhibiteur de la croissance et qui appliqu aux apex des tiges
feuilles tait capable dinduire la formation de bourgeons dormants. Ils appelrent la
substance active encore inconnue : la dormine.

ADDICOT et ses collaborateurs lUniversit de Californie DAVIS sintressaient au


problme de labcission des feuilles et obtinrent partir du cotonnier deux substances
abcissine I et abcissine II capables dacclrer labcission des feuilles de jeunes plants de
coton. Paralllement tait caractris un inhibiteur de croissance du Lupin par WAIN en
Angleterre.

Lisolement de la dormine par CORNFORTH et al. (1966) permet sa caractrisation chimique


et fut suivie par des travaux qui montrrent que dormine inhibiteur de croissance du Lupin et
abcissine II taient en fait la mme substance qui fut dfinitivement appele acide abcissique
en 1967 (ABA).

IIIG b Nature chimique Biosynthse :

LABA est un sesquiterpne, molcule en C rsultant de lassociation de 3 molcules


disoprne.
LABA prsente 2 types disomrie li dune part la prsence dun carbone assymtrique (le
compos naturel est dextrogyre, le produit commercial est un racmique mlange des 2
isomres optiques) et dautre part lexistence dune double liaison sur la chane latrale
isomrie cis-trans.
Le cis ABA est le seul actif dans le cas de laction de lABA sur la fermeture des stomates.

Deux voies de biosynthse ont t successivement proposes pour lABA, la premire dite
voie en C correspondrait la condensation de 3 molcules disopentenyl pyrophosphate
selon un mcanisme analogue celui de la synthse des gibberellines.
La 2me voie dite en C a t caractrise plus rcemment elle correspond une coupure de
carotnodes en C du type zeaxanthine selon la squence :
Zaxanthine Violaxanthine Xanthoxine ABA aldhyde ABA
(C) (C) (C) (C) (C)

Divers mutants ont permis de caractriser cette voie de synthse travers des tudes qui sont
de bons exemples de combinatoire dapproches gntiques, molculaires et biochimiques.

Des mutants de tabac dficients en ABA (mutants ABA) sont altrs au niveau de la
zaxanthine poxydase (cette enzyme possde en fait 2 activits conversion de la zaxanthine
en antheraxanthine puis en violaxanthine).
La zaxanthine qui est non dtectable chez la plante sauvage est bien reprsente chez le
mutant alors que la violaxanthine prsente chez la plante sauvage nest pas caractrisable.
Dautres mutants chez la tomate comme flacca (phnotype fltrissement permanent) sont
affects dans des tapes terminales comme la conversion de ABA aldhyde en ABA.

Diffrents mutants dits vivipares chez le mas (les graines germent sur le pied mre par dfaut
dABA) sont bloqus diffrents niveaux de la chane de synthse du -carotne (Vp1, Vp2,
Vp5, Vp9, Vp7) Vp7 par exemple est bloqu au niveau de la conversion lycopne en
carotne.

Au total il est maintenant admis que la voie en C nest pas oprationnelle chez les plantes
mais chez certains champignons, la totalit de lABA venant de la voie en C chez les
organismes chlorophylliens o la synthse de lABA a dailleurs lieu dans les chloroplastes
riches en carotnodes (la zaxanthine epoxydase correspond un cDNA prsentant une
squence dadressage vers le chloroplaste).
Le catabolisme de lABA procde via une hydroxylation pour donner le 8 hydroxy ABA
ensuite converti en acide phasque, lABA 8 hydroxylase est une monooxygnase
phytochrome P. Cette dgradation intervient, par exemple lors du retour un tat hydrique
normal aprs une priode de scheresse pour rduire le taux dABA.

LABA peut galement tre converti en formes conjugues inactives :

ABA glucosyl ester sur le COOH


ABA glucoside sur lOH du carbone assymtrique.

Au cours de la priode hivernale on assiste chez certaines espces une interconversion entre
formes libres et formes conjugues.

IIIG c Effets physiologiques et mcanismes daction :

Action sur la fermeture des stomates : il sagit dun phnomne trs important au plan
physiologique puisquil permet de contrler les pertes deau de la plante et de maintenir
lhomohydrie.

Cest un exemple de rponse rapide une hormone de lordre de quelques minutes (lors de
lapport dABA exogne).
Harris et coll (1990) en utilisant un radio immuno essai (extrmement sensible) pour lABA
ont t capables de quantifier lABA dans une seule cellule de garde. A la suite dun stress
hydrique on observe un accroissement du taux dABA par un facteur 20.
La production dABA se ferait en 1er au niveau des racines stresses qui peroivent le stress et
lABA serait transport vers les apex.
Le mcanisme daction de lABA sur la fermeture des stomates a t tudi via des mesures
lectrophysiologiques au niveau de canaux ioniques. On a montr que lABA active un canal
calcique du plasmalemme ce qui entrane un accroissement en calcium cytoplasmique qui
secondairement induit louverture dun canal potassique sortant, de canaux anioniques et la
fermeture canal K entrant. Le rsultat global est une fuite de K et la fermeture des stomates.

Le mcanisme fin est plus complexe faisant intervenir des phnomnes de phosphorylation /
dphosphorylation. Certains mutants insensibles lABA et prsentant une tendance au
fltrissement ont permis lisolement dun gne mut qui est une phosphatase.
De plus diffrentes tudes pharmacologiques laide dinhibiteurs de Kinases ou de
phosphatases ont montr limportance dtapes de phosphorylation et de dphosphorylation
dans la rgulation de lactivit des canaux ioniques impliqus dans la fermeture des stomates.
A linverse des autres cellules vgtales, les cellules de garde ne comportent pas de
plasmalemmes et sont donc isoles de leurs voisines. Il sagit dun systme clos adapt aux
techniques lectrophysiologiques et aux micro-injections.

Une approche originale ayant confirm lintervention de lABA dans la fermeture des
stomates repose sur lexpression ectopique, obtenue par transgnse, danticorps contre
lacide abcissique, ARTSAENKO et al, 1995. Un anticorps monoclonal prsentant une forte
spcificit et affinit pour lABA a t caractris et le cDNA correspondant clon puis
introduit dans une construction avec un promoteur fort pour la transformation du tabac. Le
gne tranger est exprim dans le tabac et son expression conduit un phnotype fltri
analogue aux mutants phnotype fltri de tomate (flacca).

Diffrents travaux dj dcrits ont montr que le rcepteur lABA tait sur la face extrieure
de la membrane plasmique (voir partie du cours concernant les rcepteur dhormones) mais la
structure molculaire de rcepteur nest pas connue.

Formation des graines et dormance :

LABA intervient comme nous le verrons ultrieurement dans le contrle de lexpression de


gnes qui correspondent des protines de rserve des graines et des protines permettant
sans dommage la dshydratation des tissus (les dhydrines). Parmi ces protines une classe
particulire a t spcialement tudie ce sont les LEA protines (late embryogenesis
abundant) produite durant les phases tardives de lembryognse. Leur expression est associe
lacquisition de la tolrance la dshydratation et elles sont censes protger les structures
cellulaires des effets de la perte deau (protection de protines ou de membranes). LABA est,
par ailleurs, ncessaire lentre en dormance des graines et des bourgeons.

LABA est dune manire gnrale un antagoniste des gibbrellines dans des phnomnes
comme la dormance ou la production d-amylase par les cellules daleurone.

Abcission :

Bien que lhormone ait t initialement caractrise en relation avec labcission. Ce sont des
doses supraphysiologiques qui sont actives et on pense que ces doses entraneraient la
surproduction dthylne vritable hormone responsable de labcission. En conclusion le nom
de dormine aurait t beaucoup plus adapt pour ce que nous appelons aujourdhui lacide
abcissique.

IIIH - LES BRASSINOSTEROIDES

Les Brassinostrodes (BR) reprsentent une classe dhormones vgtales prsentant en


commun des structures de strodes qui ont de multiples effets sur le dveloppement :
germination des graines, longation des tiges, expansion des feuilles, diffrenciation du
xylme.

Le rle des Br a t clairement dmontr par ltude de mutants soit dficients, soit
insensibles aux brassinostrodes qui prsentent diffrentes anomalies de dveloppement. Des
phnotypes comparables peuvent tre obtenus par des inhibiteurs de biosynthse des Br
comme le brassinazole (Brz).

IIIH a- Dcouverte , Historique :

Ces molcules ont t initialement isoles en 1970 du pollen de Brassica majus sous le terme
de brassines, une molcule particulire appele brassinolide tant caractrise en 1979. Ces
molcules appliques sur divers systmes exprimentaux des concentrations nanomolaires
prsentent un effet marqu sur llongation cellulaire ou sur la prolifration cellulaire. Ceci
indpendamment des effets induits par dautres hormones comme lauxine, les cytokinines ou
les gibbrellines.

Une quarantaine de structure actives ont t actuellement caractrises les Brs tant prsents
chez les algues, fougres, gymnospermes, angiospermes mais pas chez les microorganismes.
Le brassinolide est le plus actif biologiquement et le plus rpandu.

Les preuves gntiques, dmontrant que les Brs taient essentiels pour le dveloppement
normal des plantes, ont t trs rcemment apportes par ltude de mutants ainsi que des
informations sur les mcanismes daction des brassinostrodes.

IIIH b- Structure et Biosynthse des Brassinostrodes :

Le brassinolide (Br type) est un strode prsentant un squelette cholestane qui possde un
cycle B-7oxalolactonique et 2- hydroxyles adjacents sur le cycle A(C et C) et sur la
chane latrale C et C.
Des analyses de structure fonction des Brs ont montr que les structures actives devaient
prsenter un certain nombre de caractristiques qui sont retrouves dans le Br type le
Brassinolide.
Les diffrents Brs se distinguent par le nombre et la nature des substituants sur les cycles A et
B et sur la chane latrale.
La voie de synthse du Brassinolide partir du campestrol, un strol vgtal de rpartition
trs gnrale a t tablie au cours des dernires annes. Elle comprend une srie de
rductions, doxydation et dpimrisation (voir figure).

Diffrents mutants ont t caractriss sur les nombreuses tapes de la chane de synthse.
Le mutant nain det est un mutant dficient en BR qui est complment par lapport de Br
exogne. La mutation concerne une strode rductase assurant la conversion du campestrol
en campestanol. Lauxine et les gibbrellines ne complmentent pas la mutation au plan
fonctionnel.

Le fait que le gne det est ncessaire la biosynthse des Brs et que la perte de fonction
entrane des modifications profondes du dveloppement : nanisme mais aussi dautres
manifestations sur la dominante apicale, la snescence dmontre sans ambigut le rle
hormonal des Brs.

Un autre mutant nain appel CPD a t tudi, le gne a t clon et squenc. Les analogies
de squence observes montrent que ce gne code pour une tape dhydroxylation dans la
chane de synthse des Brs. Les apports de teasterone, thyphastrol, castastrone
complmentent la mutation. Lapport de casthastrone est sans effet.

La protine correspondant au gne mut catalyse la conversion de casthastrone en teasterone.


Cest une hydroxylase a cytochrome P (appele CYP 90) qui prsente des analogies avec
les strodes hydroxylases. Le phnotype sauvage est retrouv par transformation gntique
avec le cDNA de cette hydroxylase.

Mutants insensibles aux Brs :

Des mutants de sensibilit au Br ont t caractriss par un crible de slection simple :


absence dinhibition de la croissance racinaire par des doses leves de Br. Un excs de Br
comme dans le cas de lAIA, entrane en effet, une inhibition de croissance.
Un de ces mutants BRI1 (Brassinosteroid insensitive) correspond ces critres. A maturit il
est nain et prsente dautres altrations phnotypiques. Il demeure sensible aux autres
hormones : lauxine, cytokinines, AIA, thylne. La caractristique du gne a permis
lidentification du rcepteur aux Brs (voir plus bas).

IIIH c- Effets physiologiques des brassinostrodes :

Les brassinostrodes ont des effets pliotropiques sur les systmes vgtaux. Nous avons dj
parl de leur action sur la division et llongation cellulaire. Ils interviennent galement dans
la diffrenciation des tissus vasculaires qui est supprime par apport duniconazole inhibiteur
de la synthse des strodes mais rtablie par apport de Brassinolide.

Ils acclrent la snescence dans des systmes simplifis (feuilles, cotyldons isols) par des
effets antagonistes des cytokinines.

Les effets sur llongation cellulaire prsentent des cintiques diffrentes de ceux induits par
lAIA dont les premires manifestations sobservent aprs 15 et le maximum aprs 30 45.
Les premiers effets des Brs se manifestent, en effet, aprs 45 et peuvent se prolonger et
augmenter pendant plusieurs heures.

IIIH d- La perception et la transduction des brassinostrodes :

Trends in Plant Science Vol 9 Feb 2004.

Une premire remarque concerne le lieu de perception des hormones strodes qui est
diffrent dans le rgne animal et le rgne vgtal. La plupart des rponses aux strodes chez
les animaux impliquent la perception du message par des rcepteurs nuclaires alors que la
perception se fait par un rcepteur plasmalemmique chez les vgtaux.
Des tudes sur des mutants de sensibilit au Br chez Arabidopsis qui sont des mutants nains
ont conduit lidentification dun rcepteur et dlments de la chane de transduction.

Le rcepteur a t appel BRI1 pour Br insensitive cest un leucine rich repeats LRR
receptor like kinase : LRR-RLK.

BRI1 a un domaine extracellulaire contenant 25 LRR, un domaine transmembranaire et un


domaine cytoplasmique qui porte une activit srine / thronine Kinase. La fixation de Br sur
le rcepteur provoque son autophosphorylation et des mutations sur le domaine extracellulaire
suppriment la fixation de Br et lactivation de la Kinase.

La situation est cependant plus complexe avec lintervention potentielle de deux autres
composants BAK1 qui pourrait former un htrodimre avec BRI1 et une srine
carboxypeptidase BRS1 qui raliserait le processing dune partie extracellulaire de la protine
BRI1 (voir figure).

Divers composants de la voie de transduction ont t caractriss BIN2 est un rgulateur


ngatif dont leffet est lev par lactivation du rcepteur.

BZR1 et BES1 sont des protines nuclaires rgulateurs positifs en aval de BIN2.

Au total lactivation du complexe BRI1 BAK1 inhibe BIN2 travers un mcanisme


inconnu, ce qui permet laccumulation des formes non phosphoryles de BZR1 et BES1 qui
sous cette forme activent les gnes cibles des Br.

En labsence de Br la kinase BIN2 inhibe les rponses en phosphorylant BZR1 et BES1 et en


les orientant vers la voie de dgradation impliquant le protosome 26S.

Cette voie de transduction prsente de nombreuses analogies avec des voies impliques pour
dautres signaux chez les animaux et les vgtaux (par exemple lauxine ou lthylne).

De faon surprenante le rcepteur BRI1 de tomate a deux fonctions : la fixation de Br mais


aussi de systmine, une hormone peptidique qui induit des rponses la blessure chez la
tomate via la production dacide jasmonique. Les fixations se produisent sur 2 sites diffrents,
se pose alors le problme de la spcificit de la rponse en aval et du choix de ce rcepteur
commun parmi les centaines de LRR-RLKcaractriss chez les plantes (210 chez
Arabidopsis).

Une situation comparable a t trouve chez la Drosophile avec le rcepteur Toll, la fois
important pour le patterning dorsoventral et pour lacquisition de limmunit inne aux
bactries et aux champignons. Dans ce cas les 2 phnomnes sont temporellement spars
lors du dveloppement ce qui nest pas le cas chez la tomate pour BRI1.

Les Brs contrlent lexpression gnique :

Il a t montr par des expriences dapport de Brs des systmes vgtaux et de suivi de la
synthse protique, et de la transcription et par des analyses de criblage diffrentiel (transcrits
produits uniquement ou stimuls en prsence de Br) que les Brs favorisent la transcription de
certains gnes.

Chez le soja un gne a t caractris appel BRU1 (brassinosteroid upregulated) dont les
transcrits augmentent 2h aprs lapport de Br mais non lors de lapport dauxine de
cytokinine, de gibbrelline ou dacide dabcissique.
La squence de ce gne BRU1 prsente des analogies fortes avec celle du gne connu codant
pour la xyloglucane endotransglycosylase (XET).

Laugmentation du message BRU1coincide avec laccroissement dextensibilit de la paroi et


il est probable que les Brs agissent sur llongation cellulaire par lintermdiaire de la
production de XET (gne appel aussi TCHU). Lactivation de la transcription se faisant par
lintermdiaire dun facteur de transcription TCH4-BF1 qui se lie au promoteur du gne
TCH4.
CHAPITRE IV - LES PHOTORECEPTEURS CHEZ LES
VEGETAUX

IV A - INTRODUCTION :

Les vgtaux qui ont volu dans un environnement dont la lumire est un facteur
prpondrant ont mis en place au cours de lvolution des systmes de perception de lumires
de diffrentes longueurs donde qui sont capables davoir un effet sur diffrentes phases du
dveloppement.

Le phytochrome est le plus anciennement connu de ces photorcepteurs. Il faut noter que cette
capacit des vgtaux lire et exploiter des signaux lumineux de leur environnement pour
rguler leur dveloppement double une autre caractristique retrouve trs tt chez les
organismes photosynthtiques la capacit utiliser lnergie lumineuse pour crer de lnergie
chimique via le processus de photosynthse.

Plusieurs points sont noter :

- Cette action de la lumire nest pas limite au fonctionnement des vgtaux. Chez les
animaux, la vision ainsi que le dveloppement sexuel, certaines migrations sont contrles
par la lumire. Cependant la lumire contrle une gamme deffets beaucoup plus large
chez les vgtaux que chez les animaux.
- On regroupe sous le terme de photomorphognse le contrle du dveloppement des
plantes par la lumire indpendamment de la photosynthse. La distinction fondamentale
est dordre nergtique ; dans la photomorphognse de trs faibles
nergies sont mises en jeu
concerne la nature des photorcepteurs impliqus chlorophylle et
pigments accessoires dans le cas de la photosynthse, autres
photorcepteurs dans le cas de la photomorphognse.

La lumire varie par sa quantit, sa qualit (longueur donde) et son rythme de distribution
(photopriode) et on peut distinguer dans la photomorphognse plusieurs aspects et aboutir
des dfinitions plus restrictives.

Stimulus lumineux

unilatral non priodique priodique


non unilatral

(1) phototropisme (3) photomorphognse (2) photopriodisme


proprement dite

Photorcepteurs impliqus: phototropine phytochromes

(1) croissance unidirectionnelle en rponse un stimulus unilatral ( caractre


adaptatif : recherche dune lumire maximale)
(2) tapes du dveloppement en rponse un stimulus lumineux priodique ( entre et
sortie en dormance : contrle de la floraison)
(3) rponses non directionnelles un stimulus non unilatral et non priodique ex :
photocontrle de la germination
Dans la rponse dun organisme vivant la lumire on peut gnralement envisager la
squence dvnements suivante :

- absorption dun rayonnement dune certaine longueur donde par un photorcepteur


- modification de ce photorcepteur (activation)
- action primaire du photorcepteur modifi
- diffrentes tapes de la chane de transduction conduisant leffet observ.

Ces tapes sont trs comparables celles intervenant lors de la liaison dune hormone son
rcepteur.

Les premire tudes de photobiologie chez les vgtaux ont port sur un photorcepteur le
phytochrome, puis on sest aperu quil existait plusieurs phytochromes, que dautres
catgories de photorcepteurs intervenaient et que ces diffrents photorcepteurs agissaient de
faon concerte et en interactions ce qui complexifie fortement la situation.
Pour des raisons pdagogiques on abordera tout dabord les tapes initiales de la dcouverte
du phytochrome considr lorigine comme unique photorcepteur.

Avant de terminer cette introduction prsentons une exprience simple qui illustrera tout
dabord lintervention de la lumire indpendamment de la photosynthse.

Trois plantules tioles de moutarde de mme constitution gntique sont places, clairement
except, dans des conditions identiques de culture.

La premire reste lobscurit


La deuxime reoit de la lumire blanche
La troisime reoit de la lumire rouge lointain (730 nm).
Au bout de 72 heures laspect des plantules est trs diffrent. Les tiges des spcimens rests
lobscurit sont plus longues et les cotyldons sont plus petits (cest le port des plantes
tioles) (figure).

Ces diffrences ne sont pas dues la photosynthse en effet les plantules qui ont pouss la
lumire blanche sont identiques celles qui ont pouss la lumire rouge lointain, or ces
dernires radiations ne permettent pas la photosynthse. Le phnomne observ est donc bien
un phnomne pur de photomorphognse li la prsence des radiations rouge lointain.

IVB LE PHYTOCHROME :

IVB1 Dcouverte du phytochrome :

Au-del dobservations initiales isoles sur limpact de la lumire deux types de rsultats ont
permis de progresser :

- Dune part, le fait que de nombreuses photorponses chez les plantes et les graines ont
pratiquement le mme spectre daction (nergie ncessaire pour obtenir une rponse
donne en fonction des longueurs donde).
- Dautre part, la dcouverte du caractre rversible des photorponses.

Ainsi, BORTHWICK, en 1952, tudiant la germination des laitues sous laction de bandes
passantes de longueurs dondes de 10 20 nm obtint les spectres daction reprsents sur la
figure.
On remarque un effet inducteur maximum au voisinage de 660 nm (lumire rouge = rouge
clair = red). Si sur ces semences qui ont acquis la potentialit de germer on fait agir des
longueurs donde dans lextrme rouge on constate une inhibition de la germination avec un
effet maximum 730 nm (lumire rouge lointain = rouge sombre = far-red).

Sur ces figures sont galement reprsents les effets des lumires rouge et rouge lointain sur
linduction ou linhibition de linitiation florale de Xanthium saccharatum plante de jour
court. On peut constater la similitude des spectres daction. Dans les deux cas les nergies
mises en jeu restent trs faibles.

La figure 3 dmontre clairement le caractre rversible de laction de la lumire. En


soumettant les semences une srie dexpositions aux lumires rouge et rouge lointain on
peut obtenir linduction ou linhibition de la germination : le rsultat dpendant de la nature
du dernier clairement. Si une priode dobscurit est intercale entre les lumires rouge et
rouge lointain le pourcentage de germination obtenu dpend de la dure de la phase obscure
(figure 4). Au bout dun certain temps, le phnomne tant dclench, une nouvelle
irradiation ne modifie plus son expression.

Le caractre rversible de laction de la lumire sest avr tre commun aux diffrentes
photorponses prouvant ainsi lidentit de lacte photochimique initial dans le contrle de
rponses varies.

A la suite de ces expriences, BORTHWICK et HENDRICKS ont propos lexistence de


deux formes dun mme photorcepteur, laction de la lumire correspondant la conversion
dun systme dans lautre, dune forme inactive en une forme active ou inversement, ce
pigment fut appel : phytochrome.

Rc
P660 P730
Rs

P660 absorbe dans le rouge avec un maximum dabsorption 660 nm et se transforme en


P730 forme physiologiquement active dont le maximum dabsorption est dplac vers le
rouge lointain.

Pr = P660 = forme inactive du phytochrome


Pfr = P730 = forme active du phytochrome

IVB2 Gnralisation des rsultats : Universalit du Phytochrome Diversit des


effets :

Depuis ces premiers rsultats de trs nombreuses observations ont montr la gnralit de la
prsence de phytochrome chez les plantes vasculaires et ont galement permis dobserver la
diversit de rponses physiologiques contrles par la lumire (rouge) :

- Germination des semences


- Croissance des feuilles et des cotyldons (stimule)
- Synthse de pigments : flavonodes, chlorophylles
- Mouvements dorganes (photonasties chez le Mimosa pudica ou lAlbizzia
julibrissin)
- Mouvements dorganites (chloroplastes chez lalgue verte Mougeotia)
- Induction de la transcription de nombreux gnes et de la synthse des protines
correspondantes.
- Croissance des tiges (inhibe)

IVB3 Mthodes dtude du phytochrome :

Le pigment nest jamais apparent, en raison de sa trs faible concentration, mme dans les
germinations tioles, o il nest pourtant pas masqu par les chlorophylles.

Historiquement diffrentes techniques ont t utilises pour ltude du phytochrome dont la


spectrophotomtrie in vivo qui mettait en jeu un spectrophotomtre diffrentiel mesurant des
diffrences de densit optique entre 2 longueurs donde prdtermines 660 730 nm sur du
matriel vgtal tiol soumis diffrentes irradiations ce qui donnait une estimation de la
quantit de phytochrome rversible.

La purification partir de quantits importantes de matriel vgtal (plusieurs Kg) selon des
techniques de la biochimie des protines (300mg de phytochrome partir de 20 Kg de jeunes
plantules tioles de seigle).

Ultrieurement des techniques de purification par immunoaffinit, plus rapides ont t mises
au point.

La biologie molculaire a permis par la suite dobtenir le gne du phytochrome et de plus


grandes quantits de la protine recombinante.

IVB4 Structure du phytochrome :

Il sagit dune chromoprotine (association entre un groupement chromophore responsable de


la coloration et une protine) de couleur bleue (P660) ou bleu-vert (P730) selon la forme sous
laquelle elle se trouve. Une telle modification de couleur peut tre obtenue in vitro en
irradiant une solution de phytochrome purifi.

Le phytochrome est un dimre rsultant de lassociation de 2 monomres denviron 120 KDa


portant chacun une molcule de chromophore. La caractrisation au plan structural du
chromophore est difficile car il reprsente une faible proportion de la molcule de
phytochrome et est fortement associ la protine par des liaisons covalentes.

Le chromophore prsente des proprits voisines de certaines biliprotines et de la


phycocyanine, pigment accessoire des algues bleues intervenant dans la photosynthse. Il
sagit dune structure ttrapyrrolique ouverte (ferme dans le cas de la chlorophylle).
Diffrents modles structuraux ont t proposs celui de Rdiger et Corell (1969) est report
sur la figure ( ) et fait intervenir des interactions avec la protine au niveau dun groupement
propionyl et du groupement hydroxy-thyle.

Quand P660 est converti en P730 on assisterait une limination dun proton du cycle 1 qui
deviendrait alors charg ngativement mais pourrait tre stabilis par interaction avec la
protine.
Le clonage et la caractrisation de lADNc correspondant au phytochrome ont permis de bien
progresser dans la caractrisation structurale de la protine. Chez lavoine il sagit dune
protine de 1128 ac. amins et dune masse molculaire de 125 Kda. La rgion N terminale de
fixation du chromophore est trs conserve et fait intervenir la cystine en position 322 dans
une interaction directe avec le phytochrome. La rgion C terminale est moins conserve elle
est responsable de la dimrisation du phytochrome et est implique dans la transduction du
message lumire. On trouve dans cette rgion C terminale un domaine prsentant des
similarits avec les histidines Kinases et un domaine PAS (per, arnt, sim) impliqu dans
les interactions protine- protine dont la mutation entrane la perte de lactivit biologique.

IVB5 - Photorversibilit :

Nous avons dj vu que le phytochrome pouvait tre converti dune forme dans lautre par
action de lumire Rc ou Rs. La raction ne ncessite pas de cofacteurs et la transformation
peut tre ralise pour des clairement trs brefs de faible nergie.

Il a pu tre montr quaprs irradiation par la lumire rouge P660 disparaissait en un temps
infrieur 10 s et P730 apparaissait en 0,15 s (ce temps est considrablement plus long que
celui ncessaire lexcitation dune mole de chlorophylle (infrieur 10 seconde)).

Ces rsultats suggrent quune raction obscure lente fait donc suite la phase photochimique
de la phototransformation.

HENDRICKS donne un schma de la phototransformation (figure) qui fait apparatre


lexistence dintermdiaires entre les deux formes P660 et P730 (les deux formes les plus
stables). On voit que le chromophore reste constamment li la protine et que cette dernire
change de configuration au cours de la transformation, lappui de cette dernire hypothse,
la sensibilit diffrente des deux formes vis--vis des agents dnaturants tels que : ure, les
composs thiols, les protases.

La premire action de la lumire rouge clair 660nm dtermine la transformation en un premier


intermdiaire (transformation qui dure quelques millionimes de seconde). Laction sarrte l
si la temprature est < 110 C (ces tudes ont t faites de trs basses tempratures dans le
glycrol pour apprcier les diffrentes tapes intermdiaires. A ces basses tempratures la
molcule peut tre reconvertie dans sa forme initiale par action de la lumire. A des
tempratures suprieures 110 C plusieurs formes intermdiaires apparaissent qui se
diffrencient par leur maximum dabsorption avant lapparition de la forme finale, P730.

La lumire rouge lointain dtermine la raction inverse mais avec de nouveaux intermdiaires.
Il existe donc deux types de ractions : photochimiques pouvant se produire trs basses
tempratures, et sombres se ralisant des tempratures plus leves. Il faut environ trois ou
quatre fois plus de quanta pour raliser la raction P730 P660 que la raction inverse.
Cette diffrence dexigence quantique explique en partie que la lumire blanche puisse avoir
les mmes effets que la lumire rouge clair (elle est par ailleurs plus riche en longueur donde
660nm).

Il faut signaler une analogie tout fait remarquable entre ces transformations et celles
intervenant dans le mcanisme de la vision. Dans ce cas le chromophore, le cis- rtinal,
(aldhyde de la vitamine A) est aussi associ une protine lopsine pour former la
rhodopsine. Quand le systme est excit par la lumire il y a conversion du rtinal dune
forme cis en une forme trans puis transformation de la protine avec une srie
dintermdiaires maximum dabsorption caractristiques.

Notion dquilibre photostationnaire :

Lorsque lon irradie un vgtal par de la lumire dont les proportions relatives en longueurs
donde 660 nm et 730 nm sont diffrentes il stablit ce que lon dfinit comme un quilibre
photostationnaire qui correspond au rapport P 730 / P total qui dpend des proportions de
lumires rouge et rouge lointain et de la dure dclairement. La valeur de lquilibre
photostationnaire peut varier entre 0,8 et 0,02.

IVB6 Proprits du phytochrome in vivo :

La synthse du phytochrome et sa stabilit dpendent comme nous le verrons ultrieurement


des types de phytochrome mais on peut signaler que le phytochrome voit un contrle
transcriptionnel de son propre gne sexercer positivement par la lumire et ngativement par
le produit lui-mme (la protine).

Conversion enzymatique P730 P660 lobscurit :

Dans les tissus tioles ou dans les graines lobscurit on ne trouve gnralement que du
phytochrome P660. La forme P730 napparat quaprs exposition la lumire rouge clair.

Si lon suit lvolution de la teneur en P730 aprs avoir replac le vgtal lobscurit elle
diminue progressivement et paralllement la proportion de P660 augmente. Cette
reconversion dpend de la temprature (rapide 27 C, nulle 3) elle est sensible la
prsence dinhibiteurs, on pense quil sagirait dune transformation enzymatique.

Localisation cellulaire :

Le phytochrome est prsent dans tous les organes de la plante et particulirement dans les
organes jeunes. Sa localisation cellulaire tudie par diffrentes techniques (fractionnement
cellulaire, immunocytochimie) a conduit proposer une localisation multiple : membranes,
cytoplasme, noyaux, mitochondries. Une observation intressante plusieurs fois rapporte
concerne la conversion dun Pr soluble dans le cytoplasme en un Pfr li aux membranes. Chez
le coloptile davoine un traitement par la lumire rouge conduit un accroissement
considrable de la quantit de phytochrome sdimentable (insoluble) de 5 60 %.

La sdimentabilit du phytochrome induite par la lumire a t interprte comme une


interaction entre le phytochrome et un rcepteur membranaire ce qui reprsenterait une tape
initiale dans le mode daction. Plus rcemment on a montr que lactivation du phytochrome
saccompagnait dune migration du photorcepteur du cytoplasme vers le noyau.

Deux thories sont en prsence pour rendre compte de laction du phytochrome en rponse
la lumire.

1. le contrle de la permabilit cellulaire :

Il existe, en effet, chez de nombreuses plantes des photorponses physiologiques qui ne


peuvent tre expliques par la thorie de lactivation des gnes parce quelles sont soit trop
rapides (mouvements dorganes, mouvements dorganites, 1 10 minutes) soit trs troitement
associes aux membranes cellulaires.

Leffet primaire du phytochrome pourrait alors sexpliquer par un effet de membrane . Le


changement de forme du phytochrome son association aux membranes modifierait leur
permabilit ce qui pourrait se rpercuter sur diverses fonctions de la cellule.

2. le contrle de la transcription que nous allons dtailler par la suite.

IVB7 La multiplicit des phytochromes :


Des observations initiales avaient montr quil ny avait pas toujours de corrlations entre la
teneur en Pfr mesurable par spectrophotomtrie in vivo et lintensit des rponses
physiologiques.

Le clonage des gnes de phytochrome chez diffrentes espces : pois, avoine et surtout
Arabidopsis a conduit la mise en vidence de 5 gnes codant pour 5 apoprotines
diffrentes : PhyA PhyE avec le mme chromophore.

Les homologies de squence entre les gnes de ces diffrents phytochromes sont relativement
faibles 50 90 %.

Certains mutants affects dans la voie de synthse des ttrapyrroles linaires (chromophore)
manquent de lensemble de phytochrome : mutants hy1, dautres que nous examinerons plus
tard manquent de certains phytochromes spcifiques.

Ces diffrences ont permis dobtenir des anticorps spcifiques de chaque forme (en particulier
anticorps monoclonaux) et de les quantifier dans diffrentes conditions.

PHYA PHYB
(valeur exprime en ng/individu)

Embryon de pois obscurit 0,2 0,05

Trs jeunes plantules de pois lumire 0,01 0,05

Conclusion PHYA et PHYB coexistent : PHYA majoritaire lobscurit


PHYA dgrad la lumire
PHYB stable la lumire ou lobscurit.

Les 5 phytochromes sont regroups en 2 catgories en fonction

- de leur expression dans les organes


- de leur stabilit aprs conversion de Pfr
- de certaines rponses spcifiques.

Type 1 comprenant PhyA rapidement dgrad la lumire


Type 2 comprenant PhyB, PhyC, PhyD, PhyE
Relativement stable la lumire aprs conversion en Pfr.

La dgradation de PhyA sous la forme Pfr est mdie par un systme de protolyse ubiquitine
dpendant. Il sagit dun moyen de prvenir la persistance des effets de la lumire lorsque
la plante est replace en conditions dobscurit. Ce mcanisme est commun la signalisation
hormonale ou intervient la notion de vague hormonale augmentation transitoire du taux
dhormones.

Les mutants affects dans la production de Phytochromes spcifiques :

Les tudes ont surtout port sur A. thaliana et mis en jeu 2 types de cribles

- recherche de plantes prsentant un phnotype tiol la lumire


- recherche de plantes detioles lobscurit
0. mutants (hy1, hy2, hy6) sans phytochromes muts dans la chaine de synthse
de chromophore (phytochromes non fonctionnels)
1. mutants PhyA hypocotyle long sous FR
mutants PhyB hypocotyle long sous R
mutants PhyA chez la tomate (mutant aurea) PhyB est au mme niveau
2. mutants dans la chaine de transduction : DET, COP, FUS prsentent un
phnotype lumire lobscurit, les gnes codent, en effet, pour des
rpresseurs.

Il nexiste pas de mutants pour PhyC mais la surexpression du gne indique une implication
dans le phnomne dexpansion des feuilles.

Au-del dune sensibilit commune aux longueurs donde spcifiques du phytochrome ces
diffrentes formes se distinguent par leur rponse diffrentes quantits dnergie.

Nb de photons
On parle de VLF trs faible fluence 1
LF faible fluence 1 1000
HIR radiation forte intensit > 1000

Si lon considre par exemple linhibition de la croissance de lhypocotyle il y aurait au moins


trois niveaux de contrle

VLF PhyA
LF PhyB
HIR PhyA

Cette 3me rponse tant amplifie par la formation de Pfr B. On peut donc conclure que les
diffrentes rponses rgules par le phytochrome sont souvent dues laction combine de
diffrents phytochromes intervenant de faon redondante en synergie ou de faon antagoniste
ce qui rend ltablissement dun schma de synthse global extrmement difficile.

PhyA prsente une proprit unique parmi les diffrents phytochromes, celle dtre activ,
la fois, par les radiations VLF et HIR. Les rponses la lumire VLF impliquent par exemple
lexpression de diffrents gnes, la germination des graines.

Les rponses de type HIR comprennent par exemple linhibition de llongation de


lhypocotyle, lexpression des cotyldons, laccumulation des anthocyanines.

Le dogme central de la photorversibilit (Pfr forme active) sapplique en fait essentiellement


aux rponses LF mdie par PHYB-PHYE et aux rponses VLF mdie par PHYA.

La localisation subcellulaire des phytochromes :

Les premiers rsultats ont abouti un panorama assez confus, le phytochrome tant associ
diffrents compartiments cellulaires dont une localisation membranaire. Une perce intervient
en 1996 quand des chercheurs japonais ayant fusionn la rgion C terminale de gne de
Phytochrome B avec le gne GUS ont montr que la protine de fusion tait associe avec le
noyau.
Des expriences complmentaires ont dmontr la translocation induite par la lumire rouge
de Phy B du cytoplasme vers le noyau (Low fluence response) (translocation complte en
peu prs 4h).

Le mme type dexprience avec le gne de protine GFP associ au gne de Phytochrome A
a permis de montrer limport nuclaire de PhyA sous laction de VLF et HIR, les deux
phytochromes majeurs prsentent ainsi des localisations subcellulaires et des dynamiques de
translocation qui dpendent fortement de la qualit et de la quantit de lumire. Il semble en
revanche que les Phyto C E sont constitutivement nuclaires.

IVB8 - Mcanismes daction et chane de transduction du signal lumire :

Le phytochrome est-il une protine phosphoryle ? Il sagit dune question abondamment


dbatue.

Le phytochrome de mousse : Ceratodon purpureus est cod par un gne codant pour une
protine de 145 Kd alors que le Phyto classique est une protine de 120 Kda. On aurait fusion
entre le phytochrome et un domaine de 300 aa avec des homologies substantielles avec des
protines kinases. Le phytochrome de ceratodon a une activit kinase et sautophosphoryle.

Hypothse envisage chez les plantes suprieures au cours de lvolution on aurait assist la
sparation des 2 systmes. Chaque forme de phytochrome aurait sa propre kinase associe.
Plus rcemment on a pu montrer que des prparations purifies de phytochrome A
recombinant chez Saccharomyces cerevisiae possdent une activit de phosphorylation
dpendante de la lumire, cette activit Kinase a t trouv intrinsque du phytochrome et
propose comme tant parti du mcanisme daction. Il sagit dune activit srine/thronine
Kinase.

La voie de transduction du phytochrome sous laction de la lumire surtout connue pour PhyA
comprend donc initialement la translocation de PhyA vers le noyau et lactivation de sa
composante kinase.

Le contrle de lexpression gnique par PHYA :

Lutilisation de microarrays a permis de montrer que la lumire via PHYa contrlait un trs
grand nombre de gnes.

Les effets interviennent chronologiquement sur des gnes codant des facteurs de transcription
et plus tardivement de gnes correspondant des enzymes. On est donc dans un cas classique
de cascade transcriptionelle avec des cibles primaires et des cibles secondaires indiques sur
la Figure.

Le Phytochrome nuclaire qui possde une activit Kinase (srine thronine Kinase) est
capable de sautophosphoryler et de phosphoryler diffrentes protines substrats par exemple
les phytochromes interacting factor comme PIF3 mais aussi dautres protines comme
CRY1 et CRY2 dont nous parlerons plus tard, ainsi que des AUX/IAA protines. Cependant
la signification physiologique de ces interactions nest pas encore trs claire.

PIF 3 est un rgulateur transcriptionnel et le fait que le phytochrome puisse interagir avec
PIF3 est un indice dune activation relativement directe de la transcription. Il a t montr que
PHYB pouvait spcifiquement et photorversiblement se lier PIF3 dj associ ses sites de
liaison au niveau de lADN (la G box CACGTG sensible la lumire). Les gnes portant ces
Gbox codent des facteurs de transcription de type MYB (CCA 1, LH4) qui secondairement
activeraient des cibles secondaires.

Lintervention de la protolyse dans la signalisation associe PhyA :

- PhyA sous sa forme Pfr est rapidement dgrad par un mcanisme ubiquitine dpendant.
- Lactivation de PhyA entrane galement une diminution de la dgradation des facteurs de
transcription en aval dans la chane de transduction comme HY5.

La dgradation de HY5 lobscurit implique une protine COP1 (un rgulateur ngatif de la
photomorphognse) COP1 interagit lobscurit avec HY5 et loriente vers la dgradation
via un processus mdi par le protasome. COP1 fonctionne vraisemblablement en tant
quubiquitine ligase. Dautres gnes (9) tels que COP9/DET/FUS fonctionnent comme des
rpresseurs de la photomorphognse.

Des tudes ralises avec une protine de fusion COP1-GUS indiquent une rduction de
labondance de COP1 la lumire dans le noyau mais les mcanismes ne sont pas encore
clairs. La lumire aurait donc un effet sur les photorponses via la dgradation de molcules
effet rpresseurs et lactivation de molcules effets promoteurs.

La transduction du signal lumire par le phytochrome : un exemple dinteractions complexes


en rseau :

Tout dabord on doit souligner lintervention de plusieurs compartiments cellulaires dans le


processus. La base simplifie du mcanisme implique la translocation de PHYA et PHYB
vers le noyau et lactivation de diffrentes protines pouvant ragir avec lADN et contrler
lexpression gnique.

Quels sont les mcanismes qui contrlent lintensit des rponses ?


La vitesse de translocation vers le noyau
Le fonctionnement des systmes de dgradation protolytique
Lintensit de production de facteurs de transcription effets promoteurs
Lintervention de facteurs cytosoliques et chloroplastiques qui interagissent avec les voies de
signalisation.

En conclusion la signalisation lie aux Phytochromes en rponse la lumire est extrmement


complexe et fait intervenir de multiples interactions entre facteurs protiques y compris
lintervention dautres photorcepteurs tels que les cryptochromes dont nous allons
maintenant parler.

IVC- LES CRYPTOCHROMES :

Les rponses la lumire bleue sont nombreuses chez les plantes on peut citer par
exemple le phnomnes suivants :

- Phototropisme
- Inhibition de llongation de lhypocotyle
- Ouverture des stomates
- Production danthocyanes
- Expression de gnes spcifiquement rguls par la lumire bleue.
- Certaines de ces rponses sont par ailleurs galement induites par les phytochromes
activs. Linhibition de llongation des hypocotyles fait en effet intervenir 3
photorcepteurs :

Phytochrome
Cryptochrome
photorcepteur sensible aux UVA

Le photorcepteur cryptochrome na t caractris que tardivement, do le nom de


cryptochrome cach . On supposait initialement quil sagissait dun carotnode en raison
de la nature du spectre action.
Lisolement du photorcepteur CRY1 chez Arabidopsis thaliana a t ralis par les
techniques de la gntique molculaire.

Des mutants long hypocotyle sous lumire blanche ont t caractriss. Parmi ces mutants
on peut citer le mutant HY4 insensible la lumire bleue caractris chez une collection de
mutants taggs avec du TDNA chez Arabidopsis. Le gne mut identifi, a t appel CRY1
et code une protine de 681 acides amins. Il sagit dune chromoprotine de 75 Kd. Les 500
premiers acides amins, extrmit N-terminale, montrent une forte homologie avec les
photolyases de lADN de type 1 microbiennes, une classe de flavoprotines qui catalysent la
rparation lumire dpendante de dimres de pyrimidine de lADN endommag par la lumire
dUV.
Cependant CRY1 se distingue par une extension de 200 acides amins au-del de la rgion
dhomologie. Le chromophore est une ptrine (mthnylttrahydrofolate) avec pour la
chromoprotine une absorption maximale 450 nm. Le gne CRY1 est exprim dans tous les
tissus et la protine, qui ne prsente pas de domaines hydrophobes, na pas vraisemblablement
de localisation membranaire mais une localisation nuclaire dmontr grce une
transformation gntique avec un gne codant pour une protine de fusion avec GFP.

La surexpression de CRY1 chez des plantes transgniques entrane une hypersensibilit la


lumire bleue dans le cadre de rponses du type longation de lhypocotyle et production
danthocyanines. Un mutant HY4 dpourvu de cryptochrome ne prsente plus ces rponses en
conservant toutefois la rponse phototropique qui contrle par la lumire bleue nimplique
donc pas le cryptochrome.

- Les rponses contrles par CRY1 ne se produisent pas en labsence de phytochrome


(doubles mutants manquant de Phya et Phyb). Lexpression des rponses la lumire
bleue (via CRY1) requiert donc les phytochromes dans la voie de signalisation.

On a observ une multiplicit de formes de cryptochromes avec au moins 2 membres


CRY1 et CRY2 sans doute en partie redondants.

- Questions demeurant ouverte ?

o comment un rcepteur la lumire bleue a-t-il pu voluer partir dune


enzyme de rparation de lADN
o quelle est la modification molculaire induite par la lumire au niveau du
cryptochrome
o quelle est la 1re cible molculaire de laction du cryptochrome et la chane de
transduction.
Des rsultats indiquent que le cryptochrome interagit avec dautres protines et que
labsorption de lumire bleue contrlerait ces interactions.

IVD-LES PHOTOTROPINES :

Comme nous lavons dit un certain nombre de rponses physiologiques chez les plantes sont
contrles par la lumire bleue indpendamment de lintervention du cryptochrome.

Ainsi

les hypocotyles se courbent vers la lumire pour maximiser la photosynthse dans les
cotyldons (phototropisme)

les chloroplastes
- se dplacent vers la lumire pour la capture maximale de lnergie
- sloignent de trop fortes intensits lumineuses pour viter les photodommages.
les stomates

- souvrent le jour pour passage des gaz


- se ferment la nuit pour viter perte deau

Dans ces diffrents contextes la lumire bleue est la plus efficace et les phototropines sont les
rcepteurs la lumire bleue contrlant ces mouvements.

La phototropine est une protine de 120 Kda soumise phosphorylation dpendant de la


lumire bleue. Elle a t dcouverte la suite de ltude de mutant Nph1 (non phototropic
hypocotyl) ce qui a initialement permis de caractriser la phototropine 1 (Phot1).

Ce gne code pour une protine de 996 ac. amins comprenant deux domaines LOV
(caractristiques des protines rgules par la lumire, loxygne ou le voltage).

La protine se lie de faon non covalente 2 flavines mononuclotide et comporte sur son
extrmit C terminale une activit srine / thronine kinase.

Deux phototropines ont t caractrises phot1 et phot2. Des doubles mutants sont affects
dans lensemble des 3 fonctions contrles par la lumire bleue voques plus haut alors que
le simple mutant pour Phot 1 ne lest pas pour certaines rponses. Ce qui implique une
redondance de fonctions.

Transduction du signal lumire bleue via les phototropines :

Phot 1 est localis dans la membrane plasmique. Un lment de la chane de transduction est
cod par le gne nph 4 qui correspond un facteur de transcription de la famille ARF. On
assiste donc ce niveau un cross-talk entre la lumire et lauxine qui est galement
implique dans le phototropisme.

Dautres voies de signalisation impliquent une augmentation des teneurs en Ca par la


lumire bleue dmontre par utilisation daequorine. Cette augmentation est trs attnue chez
le mutant nph1 mais pas chez les mutants Cry1 et Cry2.

La phototropine 1 pourrait catalyser la phosphorylation de transporteurs de Ca au niveau de


la membrane plasmique.
Perspectives Conclusion :

Dans ce domaine des photorcepteurs mineurs la progression a t grandement facilite


par les tudes de gntique sur Arabidopsis mais la nature des photoractions pour le
cryptochrome nest pas bien connue alors que dans le cas des phototropines elle est mieux
apprcie.

En effet, la lumire bleue semble faciliter via les phototropines la phosphorylation de


diffrentes protines de la membrane plasmique ce qui secondairement contrle les
mouvements dions et de molcules.

Les protines concernes sont potentiellement des ATPases, canaux calciques, transporteurs
dauxine.
CHAPITRE V - LE DEVELOPPEMENT VEGETATIF A
LECHELLE DE LA PLANTE ENTIERE

A) Les corrlations de croissance


B) La dormance des bourgeons

Au-del dune approche un niveau danalyse cellulaire et molculaire et dobservations


ralises au niveau de tissus ou dorganes spcifiques (coloptiles, stomates, cellules
daleurone) nous allons maintenant considrer des phnomnes plus globaux lchelle de la
plante. La plante est un tout avec des interactions entre ses diffrentes parties dont le
dveloppement est fortement contrl par lenvironnement, ce sont donc ces phnomnes
intgrs avec des chanes dvnements complexes entre stimulus et rponse que nous allons
aborder dans ce chapitre.
Cette notion dinteractions en particulier entre organes peut tre illustre en comparant la
situation reprsente par un cal ensemble de cellules indiffrencies ncessitant la prsence de
nutriments et dhormones pour se dvelopper et une jeune plantule dont le schma
dorganisation rsulte dinteractions entre tissus et organes de ltablissement de gradients
hormonaux et de la perception et du dcodage de signaux de lenvironnement.

VA- LES CORRELATIONS DE CROISSANCE

Les vgtaux la diffrence des animaux ont peu dorganes spcialiss (tiges, racines, feuilles
pour lappareil vgtatif) et chacun de ces organes est particulirement adapt une fonction.
La feuille est le sige de la photosynthse, les racines sont le sige de labsorption minrale.
Il existe donc une complmentarit entre ces organes. Par ailleurs, les organes dune plante
sils sont peu nombreux sont prsents pour chacun deux en un trs grand nombre
dexemplaires.
Entre organes de types varis et entre organes de mme type stablissent des relations
rciproques effets rgulateurs (corrlations) qui vont intervenir dans le dterminisme de la
taille de lindividu : aspect quantitatif, et le dterminisme de la forme de lindividu : aspect
qualitatif.

Nous allons prendre deux exemples :

Les interactions entre systme radiculaire et systme arien


Les interactions entre bourgeons
qui vont faire la fois apparatre la nature trophique (concernant des lments nutritifs) et
hormonale de ces interactions.

VA1 Interactions systme radiculaire systme arien :

Elles sillustrent par des observations trs simples :


Quand on taille un jeune arbre svrement au niveau de sa partie arienne on constate aprs
un certain temps que son systme radiculaire est plus chtif que celui des arbres du mme ge
non taills.
Inversement, quand on maintient une plante dans un pot trop petit on empche le libre
dveloppement des racines et cela retarde la croissance de la partie arienne (Bonsa : arbres
nains japonais).
RICHARDSON a apport des preuves exprimentales objectives lappui de ces interactions
en tudiant linfluence de lintensit lumineuse sur la vitesse de croissance des racines chez
Acer saccharinum.
Une diminution de lintensit de lclairement de 5000 200 lux provoque une douzaine
dheures plus tard un ralentissement trs marqu de la croissance radiculaire. Le retour aux
conditions premires ayant un effet inverse (figure).
Ces interactions sexpriment essentiellement par une complmentarit dans la production des
lments indispensables une bonne nutrition densemble.
La croissance des vgtaux se ralise linterface de deux environnements le sol et lair. Les
racines et les parties ariennes exploitent ces 2 environnements au bnfice du dveloppement
de la plante et dans les conditions naturelles la plante tend raliser un quilibre entre le
dveloppement de ces 2 systmes en raison de leur rle complmentaire (le rapport surface
foliaire / surface des racines peut rester dans certains cas dune grande stabilit).

Nature des lments changs :

1. Elments nutritifs : eau, sels minraux (en provenance des racines)


Photosynthtats, vitamines (produits par les feuilles)
La thiamine, la pyridoxine, lacide nicotinique sont des
vitamines produites par les feuilles indispensables la
croissance des racines dont le dveloppement in vitro est
impossible en labsence de vitamines.

2. Hormones en particulier auxine produite par lapex caulinaire et cytokinines produites


par les racines

Exemple : une partie arienne dune plantule de tomate maintenue dans une solution
nutritive quilibre ne se dveloppe que lorsque des racines adventives sont apparues.
Ces dernires ont un effet mme si elles apparaissent en dehors de la solution nutritive
et nont alors aucun rle de conduction dlments nutritifs.

Les corrlations entre systmes radiculaire et arien proviennent donc dchanges portant sur
des aliments minraux ou organiques et sur des lments catalytiques (vitamines, cofacteurs,
hormones).

Applications pratiques - La greffe : opration qui consiste runir 2 vgtaux par la mise en
contact de leurs tissus dans des conditions permettant leur soudure au cours de la cicatrisation,
cest donc une symbiose entre 2 plantes dont lune, le greffon, fournit lappareil arien,
lautre, le porte-greffe lappareil souterrain. Lobjectif est de propager un appareil arien
intressant en profitant des qualits de vitesse de croissance, de robustesse, de rsistance des
maladies du porte-greffe (vigne franaise greffe sur des pieds amricains rsistant au
phylloxra.

VA2 Les corrlations entre bourgeons la dominance apicale :

La dominance apicale est lexemple le mieux tudi des nombreuses corrlations de


croissance qui ont leur sige dans la plante. Elle se manifeste sous linfluence du bourgeon
terminal par linhibition de croissance des bourgeons latraux. Il faut ici remarquer quune
caractristique du dveloppement de nombreuses plantes rside dans la formation dun
nombre de mristme apicaux trs largement suprieur au nombre de mristmes se
dveloppant rellement (rserve de mristme adaptation valeur de survie pour remplacer
lapex limin par le vent ou les animaux).
VA2- aMise en vidence :

Sur une jeune tige de Pois en croissance seul le mristme terminal est en activit, il engendre
les feuilles et les entre-nuds. A laisselle des feuilles lvolution des mristmes axillaires
est imperceptible.

Si on dcapite lextrmit dune tige de Pois en enlevant le sommet de lpicotyle, le


bourgeon axillaire situ le plus prs de la section et qui tait alors inactif va se dvelopper. Si
on enlve ce nouveau rameau cest le bourgeon immdiatement en dessous qui prendra le
dpart. La priode de latence entre llimination du bourgeon terminal et les premiers
changements au niveau du bourgeon en dessous est denviron 6h.

Cest donc lextrmit en voie de croissance active qui maintient au repos les bourgeons
situs au-dessous, on dit quil y a dominance apicale, ou encore inhibition corrlative.

Il faut ici remarquer :


1. que le bourgeon terminal ninhibe pas perptuellement les bourgeons axillaires. Quand
la tige principale a atteint une certaine longueur linhibition ne sexerce plus ou
sexerce moins et les bourgeons de la base donnent quelques rameaux.
2. que la dominance apicale nest pas gnrale chez toutes les plantes (forte chez le
tournesol Helianthus anuus, faible chez la Tomate, inexistante chez des espces port
buissonnant (Kochia trichophylla).
3. que la dominance apicale est en partie responsable du port des arbres. Si elle est faible
toutes les branches se dveloppent sensiblement de la mme faon et on a un port en
boule. Si elle est importante il existe une flche comme chez certains conifres ou des
feuillus comme le Peuplier.

VA2- b- Mcanisme de la dominance apicale :

Il sagit dun problme complexe qui malgr de nombreuses recherches nest pas encore
lheure actuelle compltement lucid.
Deux types de thorie se sont initialement opposes :

La thorie dite nutritive selon laquelle le bourgeon apical crot prfrentiellement car il
dtourne son profit les aliments venant des racines et des feuilles. Il serait privilgi car le
premier form et cela lui confrerait un avantage initial dans la comptition pour les
composs nutritifs.

La thorie hormonale selon laquelle il y aurait transmission dun inhibiteur du bourgeon


apical vers les axillaires.

Chez Vicia Faba, lAIA peut remplacer lapex dcapit. Ce phnomne a t retrouv chez de
nombreuses espces. Il est suggr que lauxine pourrait tre linhibiteur qui saccumulerait
dans les bourgeons axillaires et crerait une situation hyperauxinique.
En fait les expriences rcentes de dosage dAIA montrent quon ne trouve que peu dAIA
dans les bourgeons axillaires, do explication abandonne. Les 2 thories se sont maintenant
rejointes et on pense que les 2 types dinfluence trophiques et hormonales interviennent
conjointement.

Causes trophiques :

1. la dominance apicale sexprime dautant mieux que le milieu nutritif est pauvre, elle
est leve sur sols riches en particulier en azote cas du lin linum usitatissimum
2. ltude de la rpartition dun mtabolite marqu confirme le pouvoir attractif de lapex
(voir figure).
3. lauxine peut sur un apex dcapit reproduire en partie ce pouvoir attractif.

Ceci donne lieu une hypothse sur laction indirecte de lauxine via un dtournement des
mtabolites dont le mcanisme est inexpliqu (effet comp. au cytok.).

Causes hormonales :

Par ailleurs, dautres types darguments sont en faveur dinterventions hormonales. Les
apports exognes dhormones ou de composs perturbant le transport des hormones modifient
les rponses observes.

a) TIBA ou MORPHACTINES qui inhibent le transport de lAIA entranent 1 dpart des


bourgeons axillaires
b) Apport dAIA rtablit la dominance apicale. Les expriences dhormones exognes
sont toujours critiquables mais une transformation gntique par le gne IaaH codant
la tryptophane monooxygnase amplifie la dominance apicale.
c) La benzyladnine applique sur bourgeons axillaires entrane leur dpart de croissance
ainsi que la surexpression du gne IPT.

Conclusions :

1. lAIA constitue un signal transmissible vers les parties infrieures de la plante et nagit
pas uniquement au niveau de lapex par dtournement des mtabolites.
2. les cytokinines sont impliques dans la croissance des bourgeons axillaires. La
condition de bourgeon inhib semble lie a une dficience en cytokinines et
initialement la leve de dominance apicale est lie une reprise des mitoses sous
laction des cytokinines.
Il est intressant de noter la relation entre cet effet des cytokinines et les phnomnes
de fasciation provoqus chez les plantes par corynebacterium fascians. Le symptme
de la maladie est une perte de dominance apicale qui se traduit par une prolifration de
tiges pour donner ce que lon appelle des balais de sorcire (chez le Saule par
exemple). Le symptme peut tre reproduit par application de kintine, ce qui suggre
lintervention des cytokinines dans ce phnomne. Ceci a dailleurs t confirm par
lidentification dans les extraits de la bactrie disopentnyladnine.

Lapex grce sa haute teneur en auxine mais aussi en cytokinines et gibberellines, car on a
montr que lapport de ces substances de croissance sur la tige sectionne en prsence dAIA
augmentait le maintien de la dominance apicale assurerait lattraction de composs nutritifs et
de composs hormonaux et en diffusant vers le bas lAIA empcherait les bourgeons latraux
de recevoir ou de synthtiser les substances hormonales sans lesquelles ils ne sauraient
voluer.
Le phnomne est donc complexe impliquant plusieurs hormones et au-del des interactions
entre bourgeons, des interactions potentielles entre bourgeons et feuilles ou racines. On
conoit donc quune multitude dquilibres puissent exister ce qui rend compte des divers
degrs de dominance apicale selon les espces et de lvolution de lintensit de la dominance
apicale avec le dveloppement chez une mme espce.

Applications pratiques :
Pincement : lopration consiste supprimer lextrmit dune jeune pousse herbace en voie
dallongement, elle stoppe son expansion et provoque la naissance de nouvelles ramifications
moins vigoureuses situes plus bas.
Taille : mme principe mais sur vgtation au repos : taille formative, taille fruitire.

Contrle gntique de la dominance apicale chez la pomme de terre :

Rosin et al, avril 2003.

Les gnes bote MAD (Mads box genes) sont des gnes de type homotique contrlant de
nombreux aspects du dveloppement. Chez la pomme de terre, le gne POT M1 (pour potato
Mads box 1 gene) est exprim activement dans les tissus croissance rapide, par exemple,
dans les zones tunica et corpus des mristmes caulinaires.

La rduction dactivit de POT M1 (stratgie antisens) active la croissance du mristme


axillaire avec un port ramifi de la plante (et surproduction de cytokinines). On observe
chez ces plantes un phnotype similaire celui de transformants qui surproduisent des
cytokinines par introduction gne ipt.
Ce rle du gne POT M1 est encore hypothtique.
POT M1 peut tre impliqu dans la rgulation de la balance de croissance entre
mristmes apicaux et axillaires.
La suppression de POT M1 modifierait le rapport auxine/cytokinine en stimulant la
production de cytokinines et en diversifiant les centres de croissance par un effet indirect
sur mobilisation des nutriments.

V A 2- c - Autres phnomnes influenant la forme, larchitecture des


vgtaux :

Au-del de la dominance apicale qui peut avoir un rle important sur la forme des vgtaux
dautres phnomnes peuvent chez certaines plantes jouer galement un rle.

Le gravimorphisme
Les dormances ingales
Les mouvements.

VB- LA DORMANCE DES BOURGEONS UN EXEMPLE DE PERIODICITE


SAISONNIERE :

Il existe une priodicit saisonnire trs marque de la croissance chez les plantes prennes
des zones tempres. Habituellement les arbres cessent leur croissance ds la fin de lt ou
au dbut de lautomne (ils entrent en tat de vie ralentie) ils la reprennent au printemps avec
des tempratures plus favorables et des jours plus longs (reprise de la vie active).

VB- a- Notion de vie ralentie et de vie active

Lexemple de vie ralentie fourni par les bourgeons des arbres pendant lhiver va nous
permettre de dfinir cet tat comme un tat physiologique normal et rversible qui se
caractrise par une rduction des activits mtaboliques et des changes avec lextrieur, cet
tat ne sapplique pas uniquement aux bourgeons mais est galement caractristiques des
organes de dissmination et de conservation des espces : graines, tubercules, bulbes.

Pour les bourgeons et les graines qui sont les organes en vie ralentie les plus importants on
peut noter des caractres communs :

Faible teneur en eau


Prsence dorganes protecteurs (cailles des bourgeons,
tguments des graines)
Ces caractristiques sont la fois une cause de la rduction des
activits mtaboliques (pas deau, rduction des changes gazeux)
et en mme temps constituent une adaptation aux conditions
climatiques dfavorables (froid en particulier).
Rserves pour permettre le dmarrage du mtabolisme lors du
retour la vie active.

Pour les bourgeons les rserves sont localises distance dans les rayons ligneux du bois.

Par opposition la vie ralentie, la vie active est la priode de retour aux activits mtaboliques
normales et une croissance active.

VB b- Les deux types de vie ralentie :

Le repos impos ou quiescence cet tat de vie ralentie se caractrise


par un retour immdiat la vie active ds que les conditions favorables sont ralises. Cest le
cas gnral de tous les organes qui nont pas de croissance active en raison des tempratures
trop basses de lhiver mais qui ds que la temprature slve commencent crotre (la
scheresse, le manque doxygne peuvent aussi empcher la croissance).
Dans ce type de repos impos on peut galement inclure le cas des bourgeons axillaires
soumis des inhibitions corrlatives et qui reprennent leur croissance ds que lapex
dominant est supprim.

La dormance :

Le deuxime type de vie ralentie est plus complexe il sagit de ltat de dormance. Un organe
dormant plac dans des conditions favorables de croissance nvolue pas. Les causes de la vie
ralentie ne sont plus rechercher dans les conditions de lenvironnement mais dans lorgane
lui-mme. La dormance est dfinie comme une inaptitude interne au retour la vie active (un
bourgeon dormant ne pourra clore mme si ses voisins sont supprims et sil est plac dans
une serre convenablement climatise). (une graine dormante ne germera pas mme si les
conditions de temprature, humidit sont tout fait favorables). La dormance comme nous le
verrons est cependant rversible.

Dans le cadre de cette tude de la priodicit de la croissance nous allons dvelopper ici le
problme de la dormance des bourgeons. Nous examinerons le problme de la dormance des
graines lors de ltude de la physiologie de la germination.

VB c- La dormance des bourgeons :

La dormance des bourgeons est essentiellement une caractristique des espces ligneuses des
rgions tempres.
De nombreuses espces herbaces par exemple croissent chaque fois que la temprature le
permet et sont donc dpourvues de dormance. Ainsi des espces vivaces des prairies croissent
pendant lhiver ne cessant leur croissance que si la temprature est infrieure 5 C. Parmi les
plantes ligneuses certaines comme la Bruyre Calluna vulgaris sont dans le mme cas et leur
allongement reprend en hiver ds quil ne fait pas trop froid. Parmi les arbres lEucalyptus est
un exemple despce nentrant pas en dormance.
Alors que cest lapproche de lhiver qui induit le plus souvent la dormance dans les zones
tempres, dans les rgions chaudes les fortes scheresses peuvent galement induire lentre
en dormance.

VB c-1- Signification biologique de la dormance en relation avec


ladaptation aux conditions de vie dfavorables :

Pour survivre dans un environnement variable et souvent hostile la plante organisme


immobile si elle interrompt ses activits physiologiques dans des conditions dfavorables doit
se prparer lavance pour survivre ces conditions dfavorables.

Exemples : Des graniums laisss au froid meurent car ils nont pas de bourgeons dormants.
En revanche, un arbuste ou un arbre un Marronnier par exemple se prpare la mauvaise
saison en dveloppant des bourgeons dormants protgs de diffrentes manires du monde
extrieur.

Adaptations :

A lintrieur du bourgeon prsence de matriel cotonneux isolant provenant dune


modification des feuilles du bourgeon donnant des sortes de poils qui entourent le point
vgtatif.
A la place des feuilles produites au niveau des nuds, formation dcailles protectrices ; qui
sassemblent pour donner une protection particulirement efficace. De plus, les cailles sont
couvertes par une scrtion visqueuse qui rend le bourgeon impermable : le propolis.

Anticipation :

Pour que ces adaptations morphologiques contre la mauvaise saison soient efficaces il faut
quelles soient mises en place avant larrive du froid, la plante a donc du dvelopper des
systmes permettant de prvoir et danticiper sur lapproche de la priode dfavorable.
Dure :

Une autre caractristique importante de la dormance rside dans la dure du phnomne


lorsquil est install. Une dure suffisante (quelques mois) est en effet ncessaire pour que la
finalit de protection du processus soit atteinte.

VB c-2- Lentre en dormance :

Causes internes, les entres en dormance autonomes :

Chez de nombreuses espces lentre en dormance est autonome . Le Lilas dbourre fin
mars et son allongement cesse obligatoirement en mai juin quelles que soient les conditions
de culture (temprature, longueur du jour). De nombreux arbres en particulier les arbres gs
ont galement une priode de croissance relativement brve 1 2 mois pendant laquelle se fait
lallongement et le grandissement des feuilles. Larrt de croissance dont on ne connat pas le
dterminisme (puisement des mtabolites, quilibres hormonaux) est ensuite suivi par un tat
de dormance caractristique. Gnralement une entre en dormance par anne.
Un cas plus complexe est celui du Chne dont les bourgeons closent en avril, voluent durant
2 3 semaines puis passent par une priode de repos (formation dcailles sur le bourgeon
apical). Un deuxime veil lieu en juin qui donne naissance de nouvelles pousses (pousses
de la St Jean). Puis, aprs cette priode de croissance on assiste une nouvelle entre en vie
ralentie suivie dun nouveau dpart en aot (pousses daot). Ainsi le bourgeon terminal se
recouvre dcailles 2 3 fois au cours de la priode de vgtation des moments o les
conditions externes sont trs diffrentes. De plus, maintenus en chambre climatise dans des
conditions constantes de jeunes chnes prsentent de la mme manire des vagues successives
de croissance. En revanche, les racines croissent dans les mmes conditions de manire
continue.

Ces arrts de croissance des bourgeons attribus initialement des phnomnes de dormance
sont en fait dus des phnomnes dinhibition corrlative exercs par les jeunes limbes dont
lablation supprime le phnomne, les limbes devenant plus grands, leur pouvoir inhibiteur
diminue. En septembre en revanche on assiste une entre en dormance typique des
bourgeons.

Causes externes :

A ces entres en dormance autonomes on peut opposer celles qui sont troitement lies une
variation dun facteur du milieu.

La dure des jours : des expriences trs prcises portant sur diverses espces ont dmontr en
chambre climatise ou au champ que lallongement des nuits induit larrt de croissance et la
formation dun bourgeon terminal cailleux qui devient dormant (Robinia pseudoacacia
Populus sp. Larix decidua Salix repens, ce dernier maintenu au tide en jours longs pousse
indfiniment).

Donc dans les zones tempres o lapproche de lhiver est annonc par une diminution de la
longueur des jours, la prparation ltat de dormance rsulte de la perception dun
changement de photopriode. La dormance peut selon les espces tre induites (Populus),
acclre (Acer) ou non contrle (Malus) par la photopriode.
Autres facteurs dont lefficacit a t dmontres :

La scheresse
Le refroidissement des nuits

VB c-3- La leve de dormance :

Le principal facteur du milieu efficace dans la nature est le froid. Les tempratures les plus
efficaces se situent entre 3 et 7 C et la priode de froid requise varie selon les espces de 250
1500 heures (dormance plus ou moins forte). Il est surprenant de noter que le facteur contre
lequel les plantes cherchent lutter en se mettant en tat de dormance soit celui-l mme qui
permet la leve de la dormance. Lhiver nest donc pas un simple inhibiteur de croissance, il a
un rle positif. Il est ncessaire au dveloppement des vgtaux. Vous verrez quil est
galement indispensable pour prparer certaines floraisons (vernalisation).

La plante a donc mis au point des systmes qui lui permettent de mesurer lintensit et la
quantit du froid ncessaire la leve de dormance.

On doit remarquer que chez la plupart des espces la dormance est leve par le froid bien
avant que la croissance reprenne dans les conditions naturelles, en raison mme des
tempratures trop basses qui maintiennent la plante en tat de repos impos (mais ces espces
places en conditions favorables en salles conditionnes verraient leur croissance reprendre
immdiatement).

Autres facteurs naturels :

Jours longs : chez certaines espces comme le Bouleau, le Htre, le transfert en jours
longs limine la dormance des bourgeons alors que linfluence de la temprature est nulle. Les
bourgeons peroivent ici eux-mmes le stimulus lumineux.

Scheresse : la suite dun automne particulirement sec, certains arbres peuvent


dbourrer aprs une forte pluie.

Substances chimiques et hormones : les vapeurs dther de monochlorydrine du glycol


(CHCl- CHOH) peuvent se substituer aux facteurs du milieu. Leur effet est strictement local
(forage du Lilas). On aboutit ainsi lide quun phnomne identique peut tre induit ou au
contraire supprim par diffrents facteurs.

VB c-4- Contrle hormonal de la dormance :

Les preuves exprimentales de lintervention des hormones dans la dormance peuvent tre
groupes en 3 catgories :

1- observations indiquant quun stimulus transmissible est impliqu dans lentre


ou la leve de dormance
2- variations des taux de certaines hormones au cours des phnomnes dentre
en dormance et de leve de dormance.
3- Effets dhormones exognes sur lentre et la leve de dormance.

En ce qui concerne le premier type de preuve nous avons vu que la dormance pouvait tre
provoque par les jours courts chez de nombreuses espces ligneuses, ce sont les feuilles qui
peroivent le stimulus lumineux.

Il y aurait soit une production dune substance au niveau des feuilles qui serait transmises vers
les bourgeons soit larrt de production dune substance (voir : Expriences sur Cornus
florida).

2me type de preuve : de nombreux rsultats ont montr une augmentation des taux
dinhibiteurs de croissance (ABA) avec lentre en dormance et corrlativement une
diminution des gibberellines.

A loppos lors de la leve de dormance on constate un enrichissement progressif des teneurs


en gibberellines (chez Acer pseudoplatanus au cours de lhiver) et une diminution de lABA.

3me type de preuve :


Apports dABA exognes induisent la dormance des bourgeons chez Betula pubescens, Ribes
nigrum, Salix.
Apports de GA 3 lvent la dormance chez certaines espces par exemple : le Pcher, le
Bouleau.
Des apports simultans des deux hormones montrent que les effets dpendent de leurs
proportions relatives.
Ces expriences sont donc en faveur de lhypothse selon laquelle la dormance des bourgeons
serait rgule par une interaction entre hormones stimulatrices et inhibitrices dans les
conditions naturelles.

Caractristiques cytologiques et mtaboliques de ltat de dormance :

Dormance et arrt des cycles en phase G- : 95 % des noyaux des bourgeons


dormants de peupliers sont bloqus dans une phase particulire du cycle cellulaire, appele
G-, dj rapporte par de nombreux auteurs pour des situations darrt de croissance, telles
que celles observes dans des graines et des bourgeons. Daprs CLOWES (1967), les cellules
en G sont les plus aptes prserver lintgrit de leur ADN et les plus susceptibles de
reprendre une activit mitotique aprs une phase de quiescence.

La dormance est un tat pour lequel les activits mtaboliques sont ralenties dune manire
gnrale, des expriences classiques de TUAN et BONNER en 1964 ont montr plus
prcisment que la dormance correspondait un tat de rpression gnralise du gnome.

Ces auteurs ont extrait la chromatine de bourgeons dormants et de bourgeons en activit et fait
agir cette chromatine in vitro sur un ensemble de nuclotides et de cofacteurs ncessaires la
synthse dARN en prsence dARN polymrase on obtient les rsultats suivants :

Synthse ARN
Bourgeons non dormants +
Bourgeons dormants 0

Ce type de rsultat a t confirm par un groupe de franais COUDUROUX (Clermont-


Ferrand) qui a ralis des mesures de lintensit de transcription in situ (incorporation
dadnosine C) sur des tubercules de Topinambour soit dormants soit aprs traitement par
lacide gibberellique ou par le froid.

VB c-5- Variabilit de la profondeur des dormances :

Le gnotype a une grande influence sur la dormance. On le montre en cultivant diffrentes


varits dune mme espce dans les mmes conditions de milieu. Ce fait a des incidences
pratiques : planter des pommiers dont la dormance exige trop de froid pour tre leve sous un
climat hivers trop doux perturbe fortement leur ramification et leur production.

Planter des conifres qui entrent en dormance tardivement dans une rgion geles prcoces
est une erreur irrmdiable.

Dans les rgions tropicales ou quatoriales o les facteurs T et lumire varient peu on
considre que quelques plantes ont une croissance continue mais la plupart des plantes ont des
phases de vie ralentie. En effet, on constate pour de nombreuses plantes des croissance
rythmique (anglo saxon type flush) analogue celle du chne. Il sagit de causes internes
mal lucides.
En outre, pour certains arbres on a sur un mme individu des bourgeons dormants et non
dormants.
Cas des espces des zones tempres transfres dans des zones chaudes : le Htre plant
Java continue perdre ses feuilles priodiquement une fois par an une poque quelconque
de lanne. Plusieurs htres poussant dans une mme localit ne perdent pas forcment leurs
feuilles en mme temps en labsence du mcanisme rgulateur que constitue le cycle des
saisons.
Les priodicits biologiques rsultent donc au moins dans certains cas de la conjonction de
fluctuations endognes et de variations cycliques du milieu.

En conclusion la priodicit de croissance des vgtaux prennes qui se caractrise par des
priodes de vie ralentie associes la dormance est directement lie des facteurs
saisonniers : longueur des jours, froid hivernal.

Ces facteurs au-del de leurs effets trophiques, agissent en tant que signaux perus par la
plante et transforms en information utilisable par le biais de modifications du taux
dhormones.

Facteurs saisonniers niveaux hormonaux tat de rpression du gnome

Le lien entre facteurs climatiques et teneurs en hormones nest pas encore clair.

En fait, les phnomnes sont souvent encore plus complexes impliquant des facteurs
gntiques relatifs lintensit des dormances (dure), linfluence des facteurs du milieu,
lexistence de corrlations entre organes et de rythmes internes.
CHAPITRE VI : LES PRINCIPALES ETAPES DU CYCLE DE
DEVELOPPEMENT

VI A PHYSIOLOGIE DE LA GERMINATION :

La multiplication vgtative et la multiplication sexue :

La germination que nous allons approfondir dans ce chapitre est associe un des moyens mis
en jeu par les vgtaux pour assurer leur propagation : la multiplication sexue qui comprend
squentiellement la formation de fleurs, de gamtes, la fcondation, la formation de graines et
la germination.

Paralllement les vgtaux peuvent se reproduire par lintervention de la multiplication


vgtative, c'est--dire le dveloppement dun nouvel individu autonome partir dune
portion dappareil vgtatif de la plante mre.

Cette deuxime voie de propagation des vgtaux se rencontre chez diffrentes formes
vgtales dont les plus volues (monocotyldones par exemple) et est beaucoup plus
dveloppe que chez les animaux o elle intervient seulement chez des espces infrieures
(vers, spongiaires).

Chez les vgtaux la multiplication vgtative est soit naturelle soit se fait par lintervention
humaine. Cette multiplication vgtative a une grande importance en horticulture et
agriculture.

La multiplication vgtative naturelle :

On peut distinguer la fragmentation pure et simple de lintervention de mcanismes


spcialiss.

- Fragmentation :

Chez les vgtaux qui ont une ramification abondante de leurs axes ariens ou
souterrains au niveau du sol, on peut constater une diffrenciation de ces axes
(enracinement des parties ariennes par exemple) suivie dune sparation
ultrieure.

De nombreuses gramines (chiendent) forment des racines partir des


axes ariens.
Iris, Sceau de Salomon, Bambou produisent des tiges feuilles partir
dorganes souterrains ex : rhizomes

- Intervention dorganes spcialiss :

Stolons : (Fraises Ronces) tiges grles horizontales susceptibles denracinement.

Drageons : Peuplier, racines horizontales susceptibles de bourgeonner.


Bulbilles : Bourgeons charnus en vie ralentie capables de repasser rapidement en
vie active (lieu de formation variable), laisselle des feuilles : Ranunculus ficaria,
sur le limbe foliaire : Bryophyllum et de donner un individu autonome.

La multiplication vgtative artificielle :

La multiplication vgtative artificielle est pratique par lhomme en mettant en jeu diverses
techniques pour rpondre aux motivations suivantes :

- Multiplication despces dont la reproduction sexue est impossible.


- Espces qui ne fructifient par en dehors de leur climat dorigine (espces exotiques
en climat tempr).
- Espces dioques ou 1 seul sexe a t implant (lode).
- Espces dont on a slectionne des varits sans graines ou dont la constitution
gntique interdit la multiplication sexuelle : bananier.
- Acclration de la production (exemple de la pomme de terre : graines 4 ans,
tubercule 1 an). La multiplication vgtative acclre le cycle de dveloppement
par rapport au semis (palmier dattier).
- Maintien de la constitution gntique et obtention dun clone dans le cas de plante
proprits intressantes.

Les techniques utilises sont classiques le bouturage (Peuplier, Vigne, Hortensia), le


marcottage, la greffe.

Des rgulateurs de croissance sont utiliss pour faciliter la rhizognse dans le cas du
bouturage, ce sont des composs auxiniques aux noms vocateurs : exubrone, rootone.

VI-A1- Introduction Problme de terminologie concernant la germination :

Plusieurs aspects de la germination se rvlent particulirement intressants. Pour la plante il


sagit dune tape trs importante du cycle de dveloppement, cest le dpart dune nouvelle
vie, la perptuation de lespce.

Pour le chercheur il sagit dune transition vie ralentie vers vie active facile tudier sur le
plan mtabolique et biochimique.

Pour lconomie, les graines sont la fois un lment de comptition conomique


(industrie des semences) et ont une grande importance dans lalimentation de lhomme et des
animaux. Le contrle de la germination est un lment essentiel de lobtention des plantes
cultives en Agriculture.

Quelques problmes de termes : la graine est un lment caractristique des spermaphytes


(plantes graines : angiospermes, gymnospermes) qui assure la propagation des espces.

Le terme graine a une signification botanique bien prcise. Il sagit de lorgane rsultant de la
double fcondation de lovule, contenant lembryon, un tissu de rserve et des tguments.

La propagation des espces nest cependant pas assure par des graines uniquement, on parle
plus gnralement de semences : il sagit de lorgane ou de la partie de lorgane que lon
sme : graine le plus souvent mais aussi fruit (le caryopse est un fruit), groupe de graines ou
de fruits (betterave). Par extension, le terme de semences concerne les tubercules (de pomme
de terre) ou les bulbes.
Germination : Processus physiologique qui permet lembryon contenu dans la graine de
donner une jeune plantule.
- Conception courante : la germination recouvre la squence des vnements
allant de la graine au repos jusqu lobtention dune plantule autotrophe
(viable).
- Conception des physiologistes : la germination commence avec
limbibition de la graine et finit avec la perce des tguments par la radicule
ou par lhypocotyle sil sort le premier, les tapes ultrieures tant des
tapes de croissance.

Dune manire gnrale la squence dvnements intervenant est la suivante :

1. imbibition des lments vivants dshydrats et gonflement de la graine.


2. dmarrage de la digestion des rserves.
3. grandissement des cellules de la radicule dj forme dans lembryon puis
prolifration des cellules du mristme radiculaire.
4. clatement des tguments et sortie de la radicule.
5. dveloppement de la partie arienne et libration des tguments

VI-A2- Conditions de formation et viabilit des graines :

La double fcondation caractristique des Angiospermes (voir par ailleurs rappel sur
lanatomie et la cytologie des tissus concerns) conduit la formation de la graine. Luf
principal donnant lembryon avec des bauches de gemmule et de radicule, luf accessoire
(initialement triplode et syncitial mais redevenant rapidement diplode) aboutissant la
formation de lalbumen ou tissu de rserve. Les tguments de lovule donnent pour leur part
les tguments de la graine alors que la paroi de lovaire donne la chair du fruit.

On distingue gnralement :

- Les graines albumen (crales)


- Les graines cotyldon (lgumineuses)
pour lesquelles les cotyldons ont digr lalbumen
- Les graines prispermes peu nombreuses (cafier) dans lesquelles le
nucelle tissu entourant lovule persiste.

La maturation des semences se produit gnralement sur la plante mre associe une
dshydratation trs pousse (les graines ne renferment que 10 % deau) ce qui entrane leur
entre en vie ralentie.

Les graines sont maintenues dans les fruits au niveau de la plante mre ou rapidement
disperses par dhiscence des siliques par exemple. Un niveau important de lamlioration des
plantes cultives a port sur le blocage de cette dispersion spontane afin de prserver la
rcolte sur pied.

Les graines sont trs variables dans leurs dimensions, une des plus volumineuses est celle
dune varit de Palmier (Lodoicea maldivica) qui se forme pendant environ 7 ans et pse
environ 10 kg.

Dautres graines sont de vritables poussires (Orchides) ou sont de trs petite taille sans
relation avec la taille finale de lindividu (Carotte, tabac).
En rsum, une graine est toujours fondamentalement constitue dun embryon lment
essentiel, dun tissu de rserve rle nourricier et denveloppes (tguments ou autre :
pricarpe).

Le problme des rserves sera dvelopp ultrieurement mais on peut dire que lon connat
trs mal la faon dont les lments nutritifs sont transports des organes assimilateurs :
feuilles vers les organes de rserves, comme les graines, ceci rejoint le problme dont je vous
ai dj parl de la distribution des assimilats.
Il est vident quil est intressant de mieux connatre ces phnomnes pour mieux les orienter.
Ce qui est assez remarquable cest que linformation gntique pour certaines protines ne va
pas sexprimer que dans les tissus de la graine ou vont saccumuler un nombre trs limit de
protines dont la synthse est trs active pendant un temps trs court (exemple globuline) .

La dshydratation et la nature des tguments souvent durs, sclrifis, rsistants et


impermables peuvent confrer aux graines une rsistance tout fait remarquable aux
conditions dfavorables : froid chaud (des semences sches peuvent survivre aprs avoir t
plonges dans azote liquide vers -180 C).

La viabilit des semences varie selon les espces. Elle dpasse souvent 15 ans et peut
atteindre une centaine dannes (graines viables retrouves dans les herbiers).
Exemples de viabilit :

Mimosa glomerata 221 ans


Lupinus articus 10 000 ans ltat gel dans le Yukon.

A loppos certaines graines ont une viabilit limite comme le Peuplier ou Acer saccharinum
et meurent en quelques semaines la T ambiante (les basses T, latmosphre sche
prolongent la survie).

La proxydation et loxydation des acides gras insaturs des lipides provoquent des radicaux
libres hautement ractifs, des hydroperoxydes, et des produits secondaires qui acclrent le
vieillissement via des dgts causs aux membranes, aux enzymes et la chromatine.

VI-A3- Aspects biochimiques de la germination

- Caractristiques biochimiques des graines, Nature biochimique des rserves :

Ces rserves ont une grande importance car elles assurent lalimentation du jeune embryon en
cours de germination ce qui lui permet datteindre lautotrophie. Mme dans de petites graines
comme celles de Laitue (Lactuca sativa) pesant seulement quelques mg les rserves peuvent
autoriser la croissance de lembryon pendant plusieurs jours. Chez des graines comme la fve
pesant jusqu 1 g les rserves sont suffisantes pour plusieurs semaines.

Ces rserves concentres un niveau jamais atteint dans les autres parties de la plante sont
galement importantes pour la nutrition de lhomme et des animaux. Les crales sont une des
bases de lalimentation humaine. Dautres graines : Tournesol, Colza, Soja, Sorgho, Fverole,
Pois, Haricot ont un rle conomique important. On peut rappeler limpact provoqu il y a
une vingtaine dannes par larrt des exportations de Soja par les USA (alimentation des
animaux). Parmi les graines celles contenant une forte proportion de protines sont
particulirement recherches et actuellement on cherche rduire notre dpendance par
rapport limportation de semences protagineuses par le dveloppement en France despces
comme le pois protagineux, la fverole dont les graines sont riches en protines.
Les protines :

On dfinit 4 groupes de protines base sur des diffrences de solubilit ce qui reprsente une
dfinition oprationnelle.

- Albumine : hydrosolubles
- Globulines : solubles dans des solutions salines
- Glutlines : solubles dans des acides ou bases faibles
- Prolamines : solubles dans alcool

Les crales contiennent des prolamines : zine (mas), hordine (orge)


des glutlines : glutnines du bl qui interviennent en donnant
une structure au pain.

Les lgumineuses contiennent des globulines : lgumine, viciline.

Ces protines sont stockes dans ce quon appelle des corps protiques, (appellation ancienne
grains daleurones) gnralement rpartis dans tout lorgane de rserves, ou concentrs la
priphrie de la graine chez les crales par exemple (couche de cellules aleurone).
Ce sont des organelles cellulaires bords par une membrane qui proviendraient de la
transformation de vacuoles avec dshydratation.
Ces corps protiques ont un diamtre de 0,1 25 . Ils ont une structure variable avec ou sans
inclusions (globode et cristallode)
La composition moyenne des corps protines est la suivante :

Protines : 70-80 %
Phytine : 10 %
Enzymes : Protase, Phosphatases, glycosidases, ribonuclases.

La principale forme de rserve de phosphate dans les grains de crales et les graines
olagineuses est constitue par lacide phytique (myo-inositol hexa phosphate). Le phosphate
de lacide phytique peut constituer jusqu 90 % du phosphate total de la graine, dans le cas
du mas notamment. Lacide phytique forme de plus un sel complexe de K, Mg, Ca, Zn, et Fe
appel phytine et qui reprsente une rserve importante de minraux dans la graine. Pour
permettre lutilisation du phosphate et des cations minraux contenus dans la phytine, celle-ci
doit tre hydrolyse par des phosphatases spcifiques appeles phytases. Lactivit phytase est
gnralement trs faible dans les graines en cours de maturation ou dans les graines sches.
Cette activit augmente considrablement en dbut de germination.

En alimentation animale, la phytine contenue dans les graines utilises pour la


nutrition des animaux monogastriques est considre comme lun des principaux facteurs
limitants de la valeur nutritive des graines. En effet, la phytine des graines ne contenant pas de
phytase ltat sec (ce qui est le cas du mas) nest pas digre dans le tube digestif de ces
animaux et elles est rejete intacte dans les excrments, causant de graves problmes
deutrophisation des eaux dans les rgions dlevage intensif. En labsence dhydrolyse de la
phytine, les minraux fortement chelats sont de plus inutilisables par lanimal, do la
ncessit paradoxale dajouter du phosphate inorganique et des cations minraux aux aliments
base de graines dpourvues de phytase, bien que ces graines possdent dj des teneurs
leves en ces lments.

La prsence dans les grains secs de mas dune phytase endogne (comme cela est le
cas pour le bl dont le son possde une activit phytase leve), serait particulirement
intressante. De nombreux travaux ont envisag le transfert par gnie gntique des gnes de
phytase fongique ou vgtale associs des promoteurs graines spcifiques et plus
particulirement spcifiques de compartiments de la graine qui ne contiennent pas de phytine
(cas de lalbumen chez le mas). Une phytase latente serait alors mise au contact de la
phytine au cours des phases de mastication et de prdigestion (par dcompartimentation) et
devrait permettre damliorer la qualit nutritive des grains et de diminuer les pollutions lies
lexcrtion de la phytine non digre par les animaux.

Les glucides :

Lamidon constitue la forme principale des rserves glucidiques, notamment chez les
Gramines dont il forme presque tout lalbumen. Il reprsente le compos glucidique le plus
important de notre rgime alimentaire.

Les hmicelluloses constituent les albumens corns ou indurs type datte (polymres
de pentoses et hexoses).

Les sucres solubles sont en petites quantits dans la graine au repos (saccharose chez
lAmande ou le Ricin).

Les lipides :

Si la notion de rserve des graines est souvent associe aux glucides en raison de leur
rle dans lalimentation humaine, ce sont les lipides qui constituent la forme de rserve la plus
rpandue, dans 9/10 des plantes. La plus grande partie de ces rserves est constitu dester, de
glycrol et dacides olique et palmitique, prsents en gouttelettes de diffrentes tailles
appeles olosomes.
Phnomnes biochimiques de la germination :

Le premier phnomne rside dans une inhibition de la graine c'est--dire une phase
dhydratation du protoplasme qui amne la teneur en eau environ 50 60 % du
poids frais.

Cette phase dhydratation permet la reprise des activits mtaboliques qui se


manifeste trs rapidement ds le dbut de linhibition. La synthse de nuclotides est
dtectable 15 minutes aprs le dbut de limbibition chez la graine de laitue.

Cette reprise dactivits mtaboliques est lie laugmentation du niveau dactivit


de certaines enzymes.

A) Les enzymes dhydrolyse des rserves qui vont donner les mtabolites ncessaires
la synthse des constituants des nouvelles cellules ou utiliss comme substrats
respiratoires.

Nous avons dj parl de ces phnomnes propos de laction des gibberellines sur
la germination de lOrge. Il est noter que chaque catgorie de graines possde des
enzymes en relation avec son contenu en rserve (voir tableau).

Rserves amylaces : amylase, maltase, phosphorylase


amidon + P1 glucose 1 phosphate

Rserves lipidiques :
Les triglycrides sont dabord hydrolyss par des lipases qui donnent du
glycrol et des acides gras. Les acides gras sont ensuite oxyds en actyl CoA
puis transforms en glucides par le cycle glyoxylique ou intgrs dans le cycle
de KREBS.

Rserves protiques

Protases peptides, ac. amins utiliss dans la synthse protique ou


intgrs dans le cycle de KREBS aprs transamination.

B) Les enzymes du cycle respiratoire qui vont fournir de lATP partir de substrats
librs par les enzymes dhydrolyse. Lintensit respiratoire saccrot trs fortement
au cours des premiers stades de la germination et saccompagne parfois dun
dgagement de chaleur.

Mode de formation de ces enzymes :

Soit ces enzymes sont dj prsentes dans la graine et linhibition et la


rhydratation des tissus permet leur activit (cas denzymes de la respiration).
Soit encore on peut assister une activation denzymes prexistantes sous une
forme inactive (action de protases par exemple). Cependant dans le cas le plus
frquent les enzymes sont synthtises de novo ds le dbut de la germination.
Dans cette synthse denzymes deux mcanismes ont t mis en vidence qui
peuvent dailleurs intervenir squentiellement.

Stimulation de la transcription avec synthse de nouveaux mRNA (cf


amylase chez lOrge).
Stimulation de la traduction par une transition monosomes polysomes
(lactivit de traduction est beaucoup plus importante quand plusieurs
ribosomes se dplacent sur une mme molcule de RNA formant plusieurs
copies du polypeptide dans un mme temps).

Dans ce second cas il faut considrer que des ARN prexistants sont dans les
graines pour permettre la reprise rapide de la synthse protique (on a utilis le
terme dinformosomes pour les caractriser)

Contrle hormonal de la transcription :

Les interactions hormonales entre embryons et tissus de rserves que nous avons
examines dans laction des gibberellines sur la germination du grain dorge sont
certainement trs rpandues. Par exemple chez le Pois lablation de lembryon
empche la synthse de protases au niveau des cotyldons.

VI-A4- Aspects Physiologiques de la germination :

Conditions de la germination :

La germination de la graine dpend :

Des conditions externes lies aux facteurs de lenvironnement


Des conditions internes lies ltat physiologique et aux caractristiques de la
graine.

Conditions externes :
Eau : ncessaire lhydratation de la graine et la reprise des activits
mtaboliques (trop deau empche cependant la germination : asphyxie).
O2 : ncessaire la respiration.
Temprature : convenable pour les activits mtaboliques.
Lumire : 3 catgories : germination induite par la lumire 70 %
germination inhibe par la lumire
germination indiffrente

Ces dernires exigences sont plus thoriques que relles car elles se manifestent pour des
semences frachement rcoltes et des t leves alors que la germination dans les rgions
tempres se produit dans un contexte de tempratures fraches.

Conditions internes :

Lorsque des graines arrives maturit sont places dans des conditions optimales de
temprature, dhumidit et doxygnation pour leur croissance et quelles ne germent pas,
plusieurs types de causes sont envisager : la dormance de lembryon ou les inhibitions de
germination.

On peut dailleurs souligner que les caractristiques de germination des espces cultives
rsultent dune slection trs pousse qui a contribue liminer un grand nombre de
mcanismes de contrles naturels et qui conduit une germination rapide et uniforme
ncessaire dans le cas des plantes cultives.

Inhibition de germination (tout phnomne qui soppose la germination dun


embryon non dormant) :

a. Inhibition tgumentaire : les tguments assurent normalement la protection des


graines mais dans de nombreux cas ils peuvent empcher la germination en jouant un
rle de :

Barrire physique = rsistance mcanique, impermabilit leau


Barrire chimique = pigeage de loxygne par des composs phnoliques,
prsence dinhibiteurs de germination dans les tguments.

Certaines graines ne germent quaprs de trs fortes pluies et lon pense que cest un
lessivage dinhibiteurs de germination qui autorise le phnomne au-del dune simple
rhydratation.

Dans les diffrents cas voqus on peut dmontrer effectivement le rle des tguments
en ralisant leur ablation qui permet la germination.

Dans les conditions naturelles le gel de lhiver (craqulement, putrfaction partielle),


les pluies peuvent altrer lintgrit des tguments. Cette inhibition par les tguments
joue un rle adaptatif car dans les conditions naturelles elle demande une priode
correspondant lhiver pour tre leve et diffre ainsi dune germination prcoce
pouvant se produire dans de mauvaises conditions.

Au laboratoire ou lors de la ralisation de semis par des horticulteurs ou ppiniristes


diffrents traitements sont utiliss pour fragiliser ou altrer les tguments :

- Abrasions : papier de verre


- Incisions : scarification
- Traitements chimiques : HO, solvants, SO4H2 dilu.

b. La dormance de lembryon :

Par dfinition on dit que la dormance est dorigine embryonnaire quand la graine tant
dbarrasse de ses tguments et place dans des conditions convenables ne germe pas.
Lembryon peut tre dormant au moment de la rcolte de la semence on parle alors de
dormance I.
Dans dautre cas lembryon des semences frachement rcoltes est parfaitement
capable de germer mais il perd cette aptitude sous linfluence de diffrents facteurs
externes (T, privation dO2), on parle de dormance II.

Diffrents traitements peuvent lever la dormance au plan exprimental :

- Traitement par le froid : le traitement gnralement utilis, la stratification, consiste


placer les graines dans du sable en couches superposes basses tempratures. Dans
les conditions naturelles cest le froid de lhiver qui ralise la leve de dormance
- Traitement par la lumire : avec le froid, la lumire est le facteur de lenvironnement
actif, avec une porte cependant moins importante que le froid (voir remarque
prcdente).

Contrle hormonal de la leve de dormance des semences :

En particulier dans les leves de dormance par le froid il semble que lon soit en prsence
dun quilibre entre ABA et gibberelline analogue celui dcrit pour la dormance des
bourgeons. Lacide abcissique semble tre linhibiteur fondamental, il est prsent dans de
nombreuses graines et il prsente un puissant effet inhibiteur sur la germination quand il est
apport de faon exogne. Par ailleurs, il existe des corrlations entre degr de dormance
despces voisines dans un mme genre et la teneur en acide abcissique.
Le froid pourrait intervenir en diminuant le taux dABA des graines. De plus, des stimulateurs
comme lacide gibberellique semblent impliqus dans la germination. Ce point est confirm
par linaptitude de nombreux embryons dormants de crales synthtiser des gibberellines,
les potentialits de synthse reprenant avec la leve de dormance. Dautre part, lacide
gibberellique exogne favorise la germination des graines dormantes chez le Noisetier, et le
froid a un effet favorable chez ce mme vgtal dans la production dacide gibberellique.

On retrouve donc le mme type de mcanisme que celui dj mentionn pour la dormance des
bourgeons un quilibre entre inhibiteurs et stimulateurs qui serait sous la dpendance des
conditions de lenvironnement.

Enfin, le rle de lacide gibberellique est clairement dmontr par le comportement de


mutants dficients en GA qui ne germent pas sans apport exogne de GA.

Au-del de variations dans lquilibre entre hormones stimulatrices et inhibitrices pour le


contrle de la dormance, on a not des changements de sensibilit aux hormones chez, par
exemple, lembryon de Tournesol.
Il sagit ici de variations se produisant au cours du dveloppement ( distinguer des mutants
de sensibilit qui induisent des variations irrversibles).
Ainsi la sensibilit GA dcrotrait lors de lentre en dormance et augmenterait dans les
conditions favorisant la leve de dormance (ce qui entrane des rponses variables pour une
mme concentration en GA).
Paralllement des mutants de synthse de lABA nentrent pas en dormance (mutants
vivipares de mas germent sur le pied mre, mutants de tomates rin avec des graines germant
dans le fruit). Un autre argument en faveur du rle de lABA est la suppression de lentre
en dormance par la Fluridone inhibiteur de synthse de lABA.
Un mutant vivipare de mas Vp1 ou (AB1 3) correspond la perte dun gne clon et tudi
en dtail. Ce gne code une protine prsentant des caractristiques de facteurs de
transcription extrmit acide amin terminale acide et trois domaines basiques B1, B2, B3.
Des tudes biochimiques et molculaires ont montr que la protine VP1 a 2 fonctions
spares. Elle active la transcription du promoteur EM (embryo maturation specific protein),
elle rprime la transcription du promoteur d-amylase dans les couches daleurones. Cette
double action permet le contrle de deux processus qui doivent sexclure :

1. maturation
2. germination

Des homologues de VP 1 ont t clons chez diffrentes espces avec un haut degr
dhomologie.

Dune faon gnrale : Dveloppement de la graine et germination sont 2 processus opposs


2 stades physiologiques qui prsentent des volutions inverses et sont spares par une
priode de vie ralentie pendant laquelle la graine est fortement dshydrate.

Dveloppement de la graine Germination


Mise en place des rserves Rhydratation
Dshydratation Utilisation des
Acquisition de la tolrance la rserves
dssication

LABA est un signal de la mise en place des rserves protiques des graines : hlianthine,
crucifrine et de polypeptides de protection contre la dssication (dehydrines).

LABA intervient donc plusieurs niveaux : il joue un rle stimulateur dans les tapes de
formation et de dshydratation de la graine et inhibe de faon gnrale, la germination
prcoce qui est ensuite empche par la dssication. Son taux peut ensuite dcrotre pendant la
priode de conservation. Ainsi lABA nest pas son maximum dans les graines dormantes
o il a au pralable fix la dormance.
Des quilibres multiples entre teneurs en hormones, variations de sensibilit aux hormones,
taux de facteurs rgulateurs peuvent expliquer les diffrents comportements observs au
niveau de la dormance.

VI-A5-Lindustrie des semences en France :

Les travaux de recherche des slectionneurs conduisent constamment de nouvelles varits


qui procurent lagriculteur un produit de haute qualit en fonction de leurs objectifs et de
leur environnement.
Au-del de la cration varitale lindustrie des semences sintresse au contrle, au tri, au
traitement et au conditionnement des semences.

La France est le premier producteur Europen de semences, le 2me producteur mondial


derrire les USA et le 3me exportateur mondial.
Quelques chiffres - Production des semences en tonnes 1 300 000
au niveau national - Chiffres daffaires 1,7 milliard d
- Exportations 500 millions d

La rpartition des espces dans le chiffre daffaires est la suivante :

Mas et sorgho 35 % Fourragres, gazon 9%


et protagineux
Crales paille 15 % Olagineux et fibres 8%
Potagres et florales 18 % Betteraves 8%
Pommes de terre 7%

On assiste dune manire gnrale un dveloppement de lutilisation des semences certifies


par opposition aux semences de ferme .
Lindustrie des semences o la comptition est trs vive entre firmes concurrentes en raison
dun march de taille limite (surfaces cultives constantes) voit des volutions frquentes
dans le primtre des socits (rachats, absorption).
Biogemma en France, Syngenta linternational sont des exemples de socits semencires.

VI-A6- La graine organe cible pour les transformations gntiques :

Lexpression de gnes a t souvent cible vers la graine dans des expriences de gnie
gntique dans le cadre de deux objectifs majeurs.

1. une meilleure valorisation du contenu de la graine.

Ex : phytase mais aussi glucanase pour amliorer la mobilisation des glucanes chez lorge,
lipase pour favoriser directement la production de diester (biocarburant) sans hydrolyse
chimique des triglycrides.

2. une accumulation de molcules intrt pharmaceutique molecular pharming


peptides / proteins (exemple : lipase gastrique pour le traitement de la mucoviscidose
produite dans le grain de mas par la firme Meristem therapeutics).

VI-B- PHYSIOLOGIE DE LA FLORAISON

Aprs la germination et le dveloppement vgtatif la floraison reprsente une transition


particulirement complexe du cycle de dveloppement. Les approches utilises dans ltude
de la floraison ont exploit des mthodes de la physiologie puis plus rcemment des outils
molculaires.

La fleur est lorgane le plus complexe de la plante avec des parties striles spales (rle de
protection), ptales (rle dattraction) et des parties fertiles tamines (pollen), pistil
(ensemble de carpelles contenant ovaires/ovules).

Prs de 70 % des angiospermes sont des hermaphrodites vrais portant les 2 sexes et
sur un mme individu (espces monoques). Environ 5 % ne portent quun seul sexe
(espces dioques : chanvre, peuplier, kiwi, asperge, mercuriale).

La floraison comprend schmatiquement 3 phases :


1. linitiation florale ou vocation florale qui correspond ltape de transition
mristme vgtatif mristme floral avec formation de primordia
dorganes floraux.
2. la formation des bauches florales (bourgeons floraux)
3. lanthse ou panouissement des fleurs qui peut intervenir un temps assez long
aprs la phase 2.

La formation des fleurs correspond une tape typique de diffrenciation associe la mise
en place de protines et de mtabolites spcifiques. Les plus apparents de ces mtabolites sont
les pigments floraux (flavanoides, carotnodes) qui donnent leur couleur aux fleurs. Toutes
les cellules contiennent les gnes correspondants mais ceux-ci ne vont sexprimer souvent
massivement que lors de la formation des fleurs.

Pour terminer cette introduction rappelons que :

1. lapparition des angiospermes ou plantes fleurs a reprsent un succs volutif, les


angiospermes colonisant tous les biotopes. Diffrents types dinnovations ont en effet
mergs
formation dun fruit entranant une amplification des possibilits de dissmination
des graines par les animaux
phnomnes dautoincompatibilit entranant un brassage gntique
laccumulation des rserves plus efficace que chez les gymnospermes.

2. la floraison reprsente une transition importante pour la plante


cest un pralable la reproduction sexue
cest larrt de la croissance et du dveloppement vgtatif chez les plantes
monocarpiques (plantes floraison unique).

3. la production florale est une activit conomique importante dun chiffre daffaires de
lordre dun peu moins dun milliard dEuros en France, avec une forte focalisation
sur un nombre limite despces : roses 40 %, illets 20 % et une localisation
gographique sur le VAR et les Alpes Maritimes.
La production seffectue en serres pour lessentiel et il sagit dun secteur fortement
dficitaire au plan de la balance commerciale avec une forte pntration des produits
Hollandais. La connaissance et le contrle de la floraison sont importants pour ces
activits ainsi quau niveau de larboriculture fruitire.

En conclusion rappelons que la finalit de la fleur c'est--dire la double fcondation


des angiospermes (aggeion, receptacle sperma-graines) plantes ayant des graines
caches est une spcificit des vgtaux par rapport tous les autres tres vivants
luf principal donnant lembryon, luf accessoire le tissu de rserve comme nous
lavons dj vu.

VI-B1- Conditions de la floraison :

Les Botanistes ont t de tout temps intrigus par le fait que certaines espces (Muguet de
mai, Chrysanthme, pour donner des exemples concrets) fleurissent une priode bien prcise
de lanne souvent de faon trs reproductible. On connat maintenant certaines conditions
requises pour la floraison, se sont des conditions internes : maturit de floraison, et des
conditions externes : action de la lumire photopriodisme, de la temprature
vernalisation.
A) Conditions internes :

1. Maturit de floraison :

Pour quune plante puisse fleurir il faut quelle ait atteint un certain dveloppement vgtatif.
On appelle ce stade maturit de floraison. Lacquisition de cette maturit de floraison est de
dure trs variable selon les espces. Avant ce stade la plante est dans un tat dit juvnile et ne
pourra fleurir quels que soient les traitements.

A titre dexemple cette maturit de floraison est atteinte des stades de dveloppement
diffrents :

Seigle : 7 feuilles
Tomates : 13 entre-nuds

Chez les arbres ce temps est beaucoup plus long : Poiriers 5 -7 ans, Chne plusieurs dizaines
dannes.

La notion de maturit de floraison repose sur des explications empiriques. La plus


vraisemblable est de nature trophique il ne serait pas bon pour une plante de fleurir avant
quelle ait suffisamment dvelopp son systme vgtatif (feuilles, racines) afin de permettre
lalimentation des organes le plus souvent non chlorophylliens fleurs, fruits, graines qui
vont rsulter de la floraison.

B) Conditions externes :

Exigences thermiques : la VERNALISATION :

Quand nous parlons ici dexigences thermiques, il ne sagit pas des exigences minimales
ncessaires aux activits mtaboliques et la croissance mais des effets indirects de la T
selon la terminologie dj utilise des effets signaux .

Dfinition :

Cest une transformation interne opre par le froid qui confre certaines plantes laptitude
fleurir (aucune modification morphologique).
Il faut tout de suite diffrencier ce phnomne de la leve de dormance par le froid ou le
traitement thermique agit sur un phnomne de croissance.
Il faut aussi insister sur lexpression aptitude fleurir car la vernalisation confre
seulement une potentialit fleurir qui sexprimera plus tard si dautres conditions sont
remplies. A lobservation macroscopique ou microscopique rien ne distingue un bourgeon
vernalis dun bourgeon non vernalis.

VI-B2- La Vernalisation :

VI-B2- a- Mise en vidence :

1. Lexemple du Bl :

Le Bl prsente deux types de varits :


Le Bl dhiver (plus prcoce et dun meilleur rendement) sem lautomne passe lhiver
ltat de jeune plantule fleurit fin du printemps, piaison au dbut de lt.
Le Bl de printemps : sem au printemps fleurit en t, piaison en t. Cependant sem au
printemps le Bl dhiver ne fleurit pas.

Sem au printemps ou en automne le Bl dhiver prsente peu prs le mme tat de


dveloppement au printemps. Il semble donc que cest la priode dhiver qui ait un effet sur sa
floraison mais non sur le dveloppement et lacquisition dune certaine maturit de floraison.

En U.RS.S. et en particulier en Ukraine la culture du Bl de printemps est impossible (bonne


saison trop courte) et celle du Bl dhiver parfois alatoire (parfois hiver trop rigoureux), aussi
les agronomes sovitiques dsiraient faire subir au Bl dhiver un hiver artificiel pour pouvoir
le mettre en terre au printemps. Lagronome LYSSENKO montra que si dans les conditions
naturelles le froid agit sur une plantule dj forme le froid est galement susceptible dagir
sur la graine non dormante et partiellement imbibe ; celle-ci seme au printemps germe et
donne une plante dont la floraison est aussi rapide que si la mise en terre avait eu lieu en
automne. Laction du froid a donc en quelque sorte transform une varit dhiver en une
varit de printemps do le nom de vernalisation donn au phnomne (en latin vernalis =
printemps).

La vernalisation applique aux semences imbibes maintenues 2 C pendant 1 mois en


chambre froide a donn des rsultats irrguliers applique grande chelle (jusqu 2 millions
dhectares de plantation) et na pu tre gnralise selon loptique initiale (on a plutt cherch
amliorer par slection les varits de printemps).

2. Le phnomne peut galement tre analys chez beaucoup de plantes


bisannuelles comme le Jusquiame noire (Hyoscyamus niger), lOenothre
bisannuelle, la Digitale pourpre. Ces espces maintenues des
tempratures tides (suprieures ou gales 16C) demeurent indfiniment
ltat de rosette sans jamais fleurir. On ne peut arriver les faire fleurir
que si les rosettes sont exposes pendant une assez longue dure de lordre
de plusieurs semaines des tempratures froides (1 5 C). Aprs quoi, en
revenant des tempratures tides et si dautres exigences concernant en
particulier la photopriode sont remplies, les plantes fleuriront. Cette
exigence au froid explique leur caractre bisannuel.

Le terme de vernalisation qui dsignait lorigine le traitement qui confre laptitude fleurir
(froid naturel de lhiver ou froid artificiel ou encore dautres agents) recouvre maintenant
galement la transformation subie par le vgtal devenu apte fleurir et les phnomnes
physiologiques qui sy rapportent.

Le besoin de vernalisation est une caractristique importante dans lamlioration et la


slection des plantes et a conduit lidentification de varits dhiver et de printemps
exploites selon les aires gographiques de culture de diffrentes espces.

VI-B2- b- Classification des espces :

Les besoins de vernalisation sont trs variables selon les espces mais il faut tout de suite dire
quil sagit l dune exigence relativement peu rpandue chez les plantes.
On peut classer les plantes en 3 groupes.
Les premires nont pas besoin de vernalisation elles sont appeles indiffrentes. Ce sont les
plantes annuelles qui semes au printemps fleurissent dans le courant de la mme anne sans
avoir eu besoin de froid (crales de printemps, tabac).
Dautres espces sont dites prfrentes, la vernalisation nest pas indispensable mais elle hte
la floraison, cest le cas de la varit de seigle dhiver ( Petkus ). Vernalise, la floraison se
produit aprs production de sept feuilles, non vernalis il faut attendre lapparition de 25
feuilles pour que la plante puisse fleurir. Les plantes annuelles dites dhiver se comportent de
la mme faon, le Bl dhiver dont nous avons dj parl voit sa floraison acclre par le
traitement vernalisant mais si la belle saison tait suffisamment longue il arriverait fleurir
sans vernalisation.
Les plantes vernalisation obligatoire, cest le cas de la plupart des plantes bisannuelles,
celles que nous avons dj cites mais aussi dautres espces telles que Betterave et Choux,
Carotte et Cleri, de plantes vivaces ex : Geum urbanum, Olivier.

Comme la leve de dormance essentiellement contrle par le froid les phnomnes de


floraison et donc de reproduction de certaines plantes sont donc limits aux climats dont les
hivers sont assez froids. Ladaptation biologique parat ici moins nette mais il semble que ces
espces doivent accumuler des rserves pendant la premire anne avant de pouvoir fleurir de
manire satisfaisante la 2me anne.

Exemples concernant les plantes vivaces dont simplement certains bourgeons sont vernaliss :

La Benote (Geum urbanum). Les bourgeons axillaires les plus jeunes de la


rosette peroivent linduction par le froid hivernal tandis que les autres bourgeons poursuivent
leur croissance vgtative, assurant la prennit de lespce.
Une scrofulaire (Scrofularia alata) fleurit sur la tige principale qui sallonge
aprs vernalisation et les bourgeons axillaires aux aisselles des feuilles les plus anciennes
donneront des rosettes axillaires vgtatives.

Un exemple particulirement net de relation entre laire de rpartition dune espce, et des
exigences thermiques et en particulier un besoin de vernalisation est donn par lolivier :

Lolivier a besoin chaque anne de certains abaissements thermiques durant


lhiver sinon sa floraison est nulle (moyenne thermique de janvier infrieure
10 C).
Ce besoin de froid interdit ainsi lextension de laire de lolivier vers des
rgions aux hivers plus chauds que la rgion mditerranenne c'est--dire la
rgion tropicale, dans ces rgions lolivier peut se montrer vigoureux mais ne
fleurit pas.
Laire de lolivier est donc limite au nord par les froids excessifs et au sud par
le besoin de froid hivernal qui nempche pas la vgtation mais interdit la
floraison.

Les espces cultives ont t slectionnes pour liminer ces barrires la floraison.
Les espces spontanes dont les aires de rpartition la surface du globe sont les plus larges
sont celles qui sont indiffrentes.

VI-B2- c- Caractristiques du phnomne de vernalisation :

Notion de maturit de vernalisation :

Nous avons vu dans le cas du Bl que la vernalisation pouvait tre ralise sur la graine.
Cependant, certaines plantes ne sont sensibles aux traitements vernalisants qu certains
stades de leur dveloppement. Cest le cas de la Jusquiame noire plante bisannuelle qui nest
vernalisable qu ltat de rosette.
Laction du froid ne peut donc tre effective que sur des plantes ayant atteint un tat
particulier appel maturit de vernalisation tout fait distinct de la maturit de floraison.
Conditions de la vernalisation :

Les tempratures efficaces sont comprises entre 1 et 10 C et la priode de froid ncessaire


est variable selon les espces.
Laction est parfois cumulative : chez le Seigle le froid peut tre donn en plusieurs priodes
spares par des retours aux tempratures tides. Cest la quantit totale de jours de froid qui
compte.

Ceci correspond laction des conditions naturelles - alternance priodes froides et priodes
plus douces.
La vernalisation nest pas un phnomne de tout ou rien : sur les plantes prfrentes comme le
seigle on peut obtenir lpiaison sur des plantes de 7 16 feuilles selon la dure de la priode
de froid.

Lieu de perception du stimulus :

Ce sont des cellules des mristmes qui sont capables de percevoir le traitement par le froid.
Ltat vernalis peut tre qualifi dautocatalytique c'est--dire que tous les bourgeons
drivant de lapex vernalis sont vernaliss chez les plantes annuelles. La transformation
opre par le froid semble transmissible au cours des divisions cellulaires.

Dvernalisation :

Ltat vernalis peut tre conserv pendant trs longtemps : graine inhibe vernalise puis
maintenue au sec conserve un tat vernalis pendant plus dun an.

Jusquiame : cette plante prsente pour fleurir une double exigence : froid puis photopriode.
On peut aprs le traitement vernalisant diffrer la floraison pendant 200 jours en conservant
ltat de comptence. Cependant un trop long dlai, des traitements par la chaleur > 30 C,
lanarobiose suppriment ltat vernalis.

VI-B2- d- Mcanisme hypothtique de la vernalisation :

Une comprhension des mcanismes molculaires de la vernalisation a rsult dtudes de


gntique molculaire chez Arabidopsis en exploitant diffrents mutants. En rsum le
traitement par le froid entrane la rpression du gne FLC qui code un inhibiteur de floraison.
Cette expression rduite de FLC est maintenue pendant la suite du dveloppement (aprs le
traitement par le froid) par lactivit des gnes de VERNALISATION (gnes VRN). VRN1
code une DNA-binding protein et VRN2 code un homologue de lun des gnes du groupe
Polycomb qui maintient le silencing de certains gnes durant le dveloppement animal.

FLC est un rgulateur transcriptionnel bote MAD qui fonctionne comme un rpresseur de
floraison en inactivant un ensemble de gnes requis pour la transition dun mristme
vgtatif en mristme floral.

Chez les espces qui nont pas dexigences en vernalisation des gnes comme FCA
interviennent dans la rpression de FLC.
Un des problmes qui se pose est de comprendre comment aprs le traitement par le froid se
maintient la rpression de FLC et on a suggr dans ce contexte un mcanisme pigntique.
On a pu rcemment montrer (Bastow et collaborateurs Nature 427, 164 (2004) des
changements dans le degr de mthylation des histones (dimthylation des lysines 9 et 27 sur
lhistone H3) ce qui correspond une chromatine silencieuse chez la drosophile et
lhomme. Le phnomne de dimthylation de H3 sur la lysine 27 disparat chez le mutant
VRN2. Ce gne ou son produit au voisinage du gne FLC serait donc impliqu dans la
mthylation.
La mmoire pigntique de lhiver est ainsi mdie par un tat des histones qui induit
une chromatine silencieuse, ce type de mcanisme semble conserv chez les animaux et les
plantes.

Modle de synthse

Rpression de gnes
importants pour la
transition vers la
floraison

Froid Diminution de la transcription de FLC Formation dun


complexe entre
rgion 5 de FLC et
VRN2.
Mcanisme
inconnu ?

Maintien dun bas Dimthylation de H3


niveau de FLC aprs sur K27 (chromatine
retour des silencieuse dans
tempratures douces lenvironnement du
locus FLC)

Mthodes utilises :

Prcipitation de la chromatine par des anticorps spcifiques de diffrents tats


(modifications chimiques)
Transformations gntiques avec la fusion FLC-GUS montrant une forte
rduction dexpression du produit de fusion avec le traitement par le froid.

VI-B3- Le photopriodisme : Exigences photopriodiques :

A ct dexigences thermiques qui correspondent au phnomne de vernalisation et qui


concernent un nombre assez limit de plantes, un beaucoup plus grand nombre de vgtaux
prsente pour fleurir des exigences photopriodiques.

Le photopriodisme dsigne les ractions de certaines plantes (et de certains animaux) une
alternance dfinie de lumire et dobscurit au cours dun cycle de 24h. Chez les vgtaux la
mise fleur constitue la raction essentielle, mais dautres ractions comme lentre en
dormance, labcission sont sous contrle photopriodique.

Chez les animaux, la maturation des gonades chez les oiseaux (induction par jours longs)
linitiation de la diapause chez les insectes, la migration des oiseaux (induction par jours
courts) sont des phnomnes contrls par la photopriode.

Ces phnomnes physiologiques du dveloppement ou du comportement chez les animaux ne


sont possibles ou ne sont induits que pour des conditions dclairement dans lesquelles la dure
relative du jour et de la nuit au cours dun cycle de 24 h est bien dfinie.

A lEquateur, Borno, la dure du jour et de la nuit est identique toute lanne. Au fur et
mesure que lon monte en latitude dans lhmisphre Nord ou que lon descend dans
lhmisphre Sud on assiste des variations de plus en plus importantes des dures du jour
selon les saisons. Les plantes qui ont volu dans des conditions o lenvironnement lumineux
subissait des fluctuations lies aux changements de saison se sont adaptes ces conditions
pour mieux contrler leur dveloppement.

A titre de rappel Toulouse :

Le 23 janvier 11h de jour 13 h de nuit


Le 24 juin 16 h de jour 8 h de nuit

Il faut noter :

Que pour une mme latitude la dure relative des jours et des nuits est un paramtre de
lenvironnement qui se reproduit de faon absolument reproductible danne en anne
la mme date, cest donc 1 repre des saisons parfait.
Les exigences photopriodiques de nombreuses plantes sont extrmement strictes ce
qui explique le calendrier de floraison prcis observ : chrysanthme - fin octobre,
muguet fin avril.

VI-B3- a- Mise en vidence de linfluence de la photopriode sur linitiation


florale :

Les travaux de Garner et Allard en 1920 sur la varit de tabac Maryland Mammoth
montrent qu lautomne, alors que les autres varits ont fleuri, celle-ci continue sa croissance
vgtative jusqu ce que le froid larrte. Si la plante est leve en serre elle forme ses fleurs
au dbut de lhiver en jour court. Si on sme les graines tardivement au dbut de lautomne la
floraison se fait comme prcdemment mais sur des plantes plus petites. La longue priode
vgtative observe dans la nature ne correspond donc pas une maturit de floraison
particulirement difficile atteindre.

Garner et Allard attriburent la mise fleur linfluence des jours courts ce quil vrifirent
par dautres expriences. Si en t, on met les plantes lobscurit avant la tombe de la nuit
de faon les soumettre une journe suffisamment courte : elles fleurissent.
Inversement la floraison peut tre empche en hiver grce un clairement dappoint donn
aux plantes la fin de la journe. La floraison de la varit de tabac Maryland
Mammoth dpend donc de la faon absolue dun facteur saisonnier la dure relative du jour et
de la nuit.
Des plants de Soja biloxi sems 15 jours dintervalle de Mai Juillet fleurissaient tous la
mme priode en septembre, malgr des diffrences de dveloppement vgtatif importantes ce
qui montre quil ne sagit pas dune maturit de floraison difficile atteindre.
Depuis ces recherches sur le photopriodisme se sont multiplies et ont abouti classer les
plantes selon leurs exigences photopriodiques.

On appelle hmropriode la priode de lumire, nyctipriode la priode dobscurit et


photopriode la squence hmropriode et nyctipriode au cours dun cycle de 24h.

VI-B3- b- Classement des espces suivant leurs exigences photopriodiques :

On peut classer les espces en 4 grands groupes :

a) Espces aphotiques : ces sont les espces peu nombreuses qui peuvent former
leurs bauches florales lobscurit cest le cas de la Jacinthe. On remarque que
toutes ont des rserves abondantes leur permettant une longue survie sans
photosynthse.

b) Espces indiffrentes : la floraison seffectue quelle que soit la photopriode


condition cependant quelle soit assez longue pour permettre une photosynthse
suffisante. Cette valeur minimale qui est lie non pas des exigences
photopriodiques mais des exigences photosynthtiques constitue le minimum
trophique. La valeur de ce minimum est en gnral de 5 6 heures de lumire
solaire par 24 h.

c) Les plantes de jours courts : ne peuvent fleurir que si lhmropriode est


infrieure une certaine dure dclairement qui est caractristique de chaque
espce. Cette dure correspond la notion dhmropriode critique HC.
Ces espces peuvent tre absolues c'est--dire quelles ne fleurissent jamais en
prsence dune photopriode dfavorable ou seulement prfrentes auquel cas
une photopriode dfavorable retarde seulement leur floraison qui est
nanmoins possible.

Absolues : Kalanchoe Blossfeldiana HC : 12 h


Xanthium pensylvanicum HC : 15 h
Prfrentes : Soja biloxi

d) Plantes de jours longs : ces plantes ne peuvent fleurir que pour une
hmropriode suprieure une hmpriode critique galement caractristique
de chaque espce. On distingue galement des espces absolues ou prfrentes.

Absolues : Hyoscyamus niger HC 10 h


Spinacea oleracea HC 13 h
Prfrentes : Avena sativa
Beta vulgaris
Vicia faba

On peut reprsenter la raction de telles plantes par un graphique o lon porte


en abscisse lhmpriode et en ordonne le temps ncessaire pour obtenir la
floraison de la plante avec une telle hmpriode.

Remarque :
1. le terme de jour court ou de jour long ne signifie pas que la priode
dclairement est courte ou longue en valeur absolue ou mme par rapport
la priode dobscurit mais simplement que la floraison ninterviendra que
pour une dure dclairement plus courte ou plus longue que l hmpriode
critique.
Par exemple le Xanthium plante de jour court ne fleurit que pour une
photopriode infrieure l hmpriode critique 15 h. Il fleurira donc pour
une dure dclairement de 14 h 30 plus importante que la dure dobscurit
9h30 et galement plus importante que la dure dclairement compatible
avec la floraison de certaines plantes de jours longs Epinard HC de 11 13 h
selon les varits.
2. dune faon gnrale, les plantes originaires des zones tempres qui
fleurissent partir du milieu du printemps jusqu la fin de lt sont des
plantes de jours longs prfrentes ou absolues. Celles qui fleurissent plus tt
sont des plantes pralablement vernalises soit des plantes ayant initi leurs
bauches florales lanne prcdente et dont la dormance a t leve par le
froid. Les plantes qui fleurissent tard la fin de lt ou au dbut de
lautomne sont des plantes de jours courts.

VI-B3- c- Etudes physiologiques des mcanismes induisant la floraison en


rponse la photopriode

Prcisons tout dabord que les vgtaux utilisent des signaux de lenvironnement diversifis
pour rguler la transition vers ltat reproducteur via la floraison. Ces mcanismes visent
vraisemblablement synchroniser la floraison de individus pour faciliter la pollinisation
croise et les brassages gntiques et les facteurs de lenvironnement efficaces sont ceux qui
prsentent une variabilit saisonnire importante : T, lumire, mais aussi secondairement
disponibilit en eau.
Ces facteurs peuvent se substituer les uns aux autres dans des cas particuliers. Pharbilis nil peut
tre induit fleurir dans des conditions de photopriode dfavorable par un changement de
temprature ou de conditions nutritives.
Dans le cas plus spcifique du photopriodisme les mcanismes supposs convertir le stimulus
lumineux initial en rponse physiologique appartiennent 3 catgories :

1. le rle de facteurs hormonaux


2. la diversion des nutriments vers lapex
3. le contrle multifactoriel

1. Au plan historique on peut rappeler le concept de florigne, labor par le russe


ChailaKhyan sur la base de nombreuses expriences de greffe montrant la transmission du
stimulus de floraison. La ralit chimique du florigne na pu tre tablie. La notion de
florigne a t ensuite tendue un ensemble dhormones action antagoniste dont
lquilibre serait contrl par la photopriode. Chez Sinapis alba par exemple les
cytokinines peuvent dclencher la floraison en conditions non inductrices. La situation
nest cependant pas claircie.
2. la diversion des nutriments (Sachs et Hackett 1983).
Il sagit dune thorie qui se rapproche de ce qui a t dit pour la dominance apicale. Les
conditions dinduction (bonne photopriode) entraneraient une meilleure alimentation de
lapex en nutriments dclenchant la transition vers ltat floral.
3. le contrle multifactoriel. Il sagit dune thorie intermdiaire dans laquelle interviendraient
des hormones et des nutriments et qui a t bien illustre par les travaux de Bernier sur
Sinapis alba.

Exemples et approches exprimentales

Sinapis alba est un systme modle intressant. Cette plante de jour long lorsquelle est ge
denviron 2 mois peut tre induite fleurir par une exposition un seul jour long.
La perception est effective au niveau des feuilles adultes. Linitiation de la transition
mristme vgtatif / mristme floral commence 2 jours aprs le traitement inducteur.
Lanalyse des exsudats au niveau des ptioles aprs exposition un seul jour long dmontre :

une augmentation de la teneur en saccharose (rsultant de la dgradation de lamidon),


ce saccharose est export vers le mristme apical o sa concentration augmente. Il faut
noter que des expriences de transgnse visant augmenter ou rduire les teneurs en
amidon ont des rpercussions sur laptitude la floraison.
Des modifications dans les teneurs en cytokinines au niveau racinaire apprcie par
lanalyse des exsudats racinaires (riboside de zatine, riboside disopentenyl adnine).
Les cytokinines voient leurs teneurs augmenter de faon rapide et transitoire en rponse
au jour long.
Les rsultats dinterruption de la circulation des sves sont particulirement
intressants.
Llimination dun anneau de tissu contenant le phlome empche la floraison si elle
est ralise vers la 10me heure de jour long mais non la 12me heure ou plus tard.
Ceci indique le transport rapide des feuilles vers les racines dun signal (saccharose ?)
qui conditionne la floraison.
Des essais dinterruption du flux racine/tige ont t raliss par la conservation des
plantes dans 100 % dhumidit. Ces conditions stoppent la transpiration et le
mouvement de sve dans le xylme. Ce traitement quand il est appliqu aprs le JL
abolit la rponse de floraison.
Les mouvements de sves sont essentiels pour la floraison. Le contrle de la transition
vers la floraison est donc multifactoriel chez Sinapis alba et fait intervenir des changes
dinformation longue distance lchelle de la plante. Linduction photopriodique
cause des modifications complexes concernant au minimum le saccharose et les
hormones (cytokinines).

Toutes les parties de la plante participent lchange de signaux et sont rapidement


informes du changement de photopriode auquel sont soumis les feuilles.
Les signaux ne sont sans doute pas universels et peuvent changer dune plante lautre
(Gibberellines pour dautres plantes). Cependant le saccharose et les Cytokinines sont
impliqus chez dautres plantes (xanthium). Malheureusement nous navons ici que des
arguments de type physiologiques bass sur des corrlations mais non des preuves
dfinitives et aucune prcision sur les mcanismes initiaux de laction de la lumire.

VI-B3- d- Intervention du phytochrome et dautres photorcepteurs dans


le contrle de la floraison problme de la mesure du temps

Linduction photopriodique de la floraison implique de la part de la plante.

1. la capacit de distinguer lumire et obscurit (photoperception)


2. la capacit de mesurer les dures de lumire ou dobscurit
3. la capacit de transmettre linformation reue sous une forme utilisable (le
phytochrome est impliqu des titres divers dans ces 3 types de phnomnes)

1. dans le cas de la photoperception le phytochrome est un des photorcepteurs.

Nous avons dj mis en vidence dans le cours sur le phytochrome lintervention de ce


photorcepteur dans le contrle de la floraison. La dmonstration repose sur la nature des
spectres daction et le caractre de photorversibilit des rponses.

Plantes jours longs HC :12h Plantes jours courts HC :12h

9 15 9 15
vgtatif floraison
660 660
floraison vgtatif
660+730 660+730
vgtatif floraison

La floraison fait partie des photorponses mixtes car la floraison peut tre induite ou inhibe
par la forme active du phytochrome selon quil sagit dune plante de jours courts ou de jours
longs et selon le moment ou la lumire est apporte (interruption nuit).
Dautres photorcepteurs que le phytochrome peuvent tre galement impliqus soit
indpendamment soit en combinaison avec le phytochrome.

Dmonstration de lintervention du cryptochrome dans le contrle de la floraison


(Korneef et al, Nature genetics 201 vol 29 p435) :

Les mcanismes semblent cependant plus complexes et impliquent plusieurs photorcepteurs


dont le cryptochrome. Les cotypes dArabidopsis thaliana correspondent des individus de
la mme espce qui se dveloppent dans des environnements et des sites gographiques trs
diffrencis et qui prsentent parfois de profondes diffrences entre eux sur les plans
biochimique et physiologique. On peut parler en quelque sorte de diffrentes varits de la
mme espce.
Ainsi lcotype CV1 localis aux Iles du Cap Vert est peu sensible la photopriode pour sa
floraison la diffrence des cotypes Columbia ou Landberg erecta (Ler) qui sont les varits
dArabidopsis utilises pour les tudes de laboratoires (varits prfrentes qui fleurissent
plus prcocement en jour long quen jour court).
Des tudes gntiques ont montr que chez CV1 un seul locus sur le chromosome 1 est
responsable de cette sensibilit rduite la lumire. Le gne correspondant a t caractris il
sagit dun allle du gne CRY2 codant pour le cryptochrome.
En fait le cryptochrome avait dj t suggr intervenir dans le contrle de la floraison en
jour long. Lallle CV1 ne prsente quune seule substitution dans la protine CRY2 une
mthionine en position 367 remplace la valine retrouve chez les varits Ler ou Columbia.
Cette mutation rduit la dgradation de la protine CRY2 en rponse la lumire bleue. Ainsi
lors de la transition obscurit lumire il y a une perte progressive de CRY2 chez Ler mais pas
chez CV1. La relation entre ce phnomne de dgradation et le contrle de la floraison par la
photopriode nest pas claire mais on peut intuitivement suggrer quune plus grande quantit
de CRY2 demande une quantit moindre de lumire pour un effet physiologique donn et
donc une floraison pour des jours plus courts.
Lexemple dcrit ici est intressant car il reprsente une situation pour laquelle une mutation
sur un seul nuclotide entranant une modification dun seul amin dune protine entrane
une modification physiologique significative chez un variant naturel dArabidopsis.

2. Problme de la mesure du temps :

Les plantes sont capables dapprcier de faon extrmement prcise la dure des priodes
lumineuses et obscures. Des diffrences dune vingtaine de minutes dans la dure du jour
pourront empcher la plante de fleurir.
Le Xanthium qui est une plante de jour court avec une HC de 15h40 ne fleurit pas pour une
hmropriode de 16h.
La plante est donc capable dapprcier avec une extrme justesse la dure du paramtre qui
constitue linformation photopriodique. Une thorie rendant compte de cette aptitude la
mesure du temps repose sur le concept des rythmes endognes (la chronobiologie).

Thorie du pendule faisant appel aux rythmes endognes :

Cette thorie suppose que la mesure du temps est relie au degr de concidence
(superposition) entre conditions lumineuses externes et oscillations internes de sensibilit la
lumire.
De nombreux phnomnes biologiques chez les plantes sont soumis des
fluctuations rythmiques. Les exemples les plus frquents concernent des
rythmes prsentant une priode de lordre de 24 heures Rythmes circadiens :
par exemple les mouvements de repliements nocturne des feuilles de Haricot :
Phaseolus multiflorus.

Le rythme se manifeste spontanment en conditions naturelles ; il peut se maintenir pendant


un certain temps en conditions constantes de lumire ou obscurit mais sattnue et disparat
la longue. En conditions naturelles le rythme est riniti toutes les 24 h par la transition jour
nuit.

Dans le contexte de ltude de ces rythmes circadiens Bnning suggra lexistence dune
alternance chez les vgtaux de phase photophile et de phase scotophile.
Dans la phase photophile la lumire a un effet positif dans la phase scotophile la lumire un
effet ngatif ou pas deffets.
Il proposa galement que la rponse des plantes la lumire dans le cadre du photopriodisme
tait relie au moment dapplication de la lumire par rapport ces phases dun rythme
endogne.

Preuve exprimentale : Expriences de Hamner chez Soja biloxi (plante de jour court). Cette
plante fleurit normalement lorquelle est place dans une alternance de 12h jour/ 12h nuit.
Elle fleurit galement mais moins bien pour une alternance de 8h jour 64h nuit pour des
cycles anormaux de 72 h (7 cycles).
Lauteur interrompt la priode de nuit de 64 h par des priodes de lumire de 4h situes
diffrents moments (il faut ici se rappeler quun clair pendant la nyctipriode dune plante de
jour court peut empcher la floraison).
Il constata que la suppression de la floraison nintervient que si la lumire est apporte
certaines priodes. La lumire apporte pendant la priode ou la plante tait normalement
lobscurit inhibe la floraison phase scotophile.
La lumire apporte au contraire pendant la priode normalement diurne (phase photophile)
amliore la floraison.
Les rsultats dmontrent effectivement lexistence dun rythme de sensibilit la lumire
dans le cas de la floraison, avec lexistence successive de phases photophiles et scotophiles.
Lors des priodes o lclairement est sans action on pourrait penser une insensibilit
gnrale de la plante la lumire, en fait il nen est rien car il suffit de changer le critre de
rponse physiologique , en mesurant par exemple llongation de la tige pour sapercevoir que
la lumire via le phytochrome est parfaitement efficace : il y a donc perception du stimulus
lumineux et naissance dun signal lequel nest pas lu pour la rponse florale certaines heures
du cycle photopriodique.

Dans la rythmicit et la succession des phases photophiles et scotophiles le rythme est rajust
gnralement par le signal aube . Si lon prend le cas de figure dune alternance de 12h /
12h (photophile / scotophile) il est alors simple dexpliquer le comportement dune plante de
jour court qui aurait une hmropriode critique de 12 heures. Au-del de cette valeur la
lumire rentrant dans la phase scotophile la plante ne fleurit plus. La situation est cependant
plus complexe si lon considre que les plantes ont des hmropriodes critiques variables et
quil existe galement des plantes de jour long !
Le 3me aspect est celui de la conversion de laction de la lumire en information utilisable
pour la floraison. Nous aborderons ces problmes avec les aspects molculaires de la
floraison.

VI-B3- e- Photopriodisme et rpartitions des espces :

Les espces les plus largement distribues la surface du globe sont les espces indiffrentes.
On peut cependant observer comme nous lavons vu pour Arabidopsis thaliana lexistence de
diffrentes varits pour une mme espce avec diffrentes exigences de photopriode.

- Boutelona curtispendula : est une espce implante du Canada au Mexique


12 varits de cette espce ont t rcoltes qui prsentent diffrentes rponses
photopriodiques. Les plantes des zones les plus au sud ne pouvaient pas
fleurir pour des hmropriodes plus longues que 14 heures tandis que les races
du nord fleurissaient normalement sous ces photopriodes.

Espces cultives :

Les varits primitives despces comme le soja, le sorgho, dorigine tropicale sont des
plantes de jours courts. Quand ces plantes sont transfres directement des latitudes plus
leves le besoin en jours courts est obtenu trop tard dans la saison pour que ces varits
soient productrices.
Ladaptation de ces cultures a exig la slection de varits moins sensibles la longueur du
jour. Du mas issu directement du Brsil atteint dans nos rgions 3 4 m de haut et ne fleurit
qu la fin septembre lorsque les jours ont moins de 12 heures. Ceci peut avoir un intrt dans
le cas de production de fibre (sorgho papetier) si lon peut se procurer facilement des graines
chaque anne.
Pour dautres rcoltes comme la betterave sucre, pour laquelle la floraison rduit le taux de
sucre la slection a t dans lautre sens c'est--dire vers une slection despces trs
strictement dpendantes de la longueur du jour. Souvent ces slections ont t accomplies
avant que lexplication du processus soit connue (contrle de la floraison par la lumire).

VI-B3- f- Aspects molculaires de la diffrenciation florale :

Quand les plantes fleurs ont atteint un certain dveloppement des signaux de
lenvironnement peuvent dclencher la transition vers le dveloppement floral.
Le mristme apical arrte de produire des primordia foliaires et se met produire des
primordia dorganes floraux : ptales, spales, tamines, carpelle.
Les nombreuses tudes de gntique sur le dveloppement de la fleur ont conduit conclure
que ce processus de dveloppement est dtermin par un rseau trs complexe et conserv de
gnes oprant en cascade et qui sexpriment dans diffrents territoires spcifiques. La
diffrenciation est, en effet un problme dexpression spatio-temporelle particulire de gnes
spcifiques.
Toutes les cellules dun vgtal contiennent les mmes gnes seuls certains dentre eux vont
sexprimer lors de la formation de certains organes. Les tudes sur des mutations qui
affectaient la dure de temps ncessaire pour fleurir ou perturbaient la nature et la structure
normale de la fleur ont permis didentifier diffrents gnes que lon peut classer dans les 4
catgories suivantes.

Gnes impliqus dans la chronologie de floraison


Gnes didentit du mristme floral
Gnes didentit des organes floraux qui agissent plus tardivement dans le
dveloppement floral.
Gnes de construction des organes floraux

Il est signaler cependant que des mutants qui restent indfiniment ltat vgtatif nont pas
t observs, ceci suggre quil existe certainement une redondance entre les gnes qui
induisent la floraison et que linactivation de lun dentre eux est partiellement compense par
dautres.

Par ailleurs, dans les tudes sur Arabidopsis diffrentes voies de promotion de linduction
florale relativement indpendantes selon les varits ont t mises en vidence : une induction
autonome soit une induction par lacide gibberellique ou par les facteurs de lenvironnement
(vernalisation, photopriode).

a) Gnes de chronologie de floraison :

Chez Arabidopsis la floraison est stimule par les jours longs et chez certains cotypes par les
tempratures froides (vernalisation).
De nombreux mutants floraison tardive sous conditions inductives ont permis didentifier de
nombreux loci impliqus dans la floraison.
Mutant de type FCA : retard de floraison dans nimporte quelle condition de jour FCA a t
clon il code une protine qui contient deux domaines de liaison lARN et un domaine
ww typique des interactions entre protines suggrant quil sagit dun facteur rgulateur post
transcriptionnel (2 tryptophanes spars par un motif consensus conserv).
Par ailleurs, le mutant Co prsente un retard dans la floraison en jour long et une rponse
rduite la vernalisation.
La protine correspondante Co contient 2 doigts de Zinc suggrant sa capacit de liaison
lADN et son implication dans la rgulation de lexpression gnique. Son ARN est plus
abondant en jour long. Des mutations sur les rgions doigt de Zinc abolissent la fonction.

b) Gnes didentit de mristme floral :

Le mristme apical caulinaire donne des feuilles, des entre nuds, et des bourgeons
axillaires. Il peut aprs sa transformation en mristme floral donner des organes floraux.
Le mristme floral prsente une activit dtermine de divisions cellulaires et
dorganognse rsultant dans la production de 4 cercles dorganes floraux (spales, ptales,
tamines et carpelles). Chez Arabidopsis spales et ptales sont des organes protecteurs puis
quand la fleur arrive maturation ces organes jouent un rle dattraction des insectes
pollinisateurs.

En retenant comme plante modle Arabidopsis thaliana des tudes de gntique classique et
de gntique molculaire ont permis de caractriser divers gnes associs la transition
mristme vgtatif mristme floral.

Exemple gne Leafy = LFY. Des mutations de LFY causent un blocage de la transition
mristme vgtatif / mristme floral. Les fleurs sont remplaces par des pousses feuilles.
Hypothse : la protine code par LFY serait un facteur de transcription car elle contient une
rgion riche en proline et des rgions acides et basiques caractristiques des facteurs de
transcription.
Une fonction de Leafy serait dagir comme dclic gntique du dveloppement de la fleur en
rgulant positivement lexpression en aval de gnes homotiques. LFY est le 1er gne tre
activ durant la transition. Lexpression du gne est dtectable avant apparition des primordia
et sarrte quand les 4 types dorganes sont en place.

c) Gnes de spcification de lidentit des organes floraux


Modle ABC

Ces gnes interviennent en aval des gnes didentit de mristme floral et en amont des
gnes de construction des organes floraux.

Le modle ABC propos par Meyerowitz, implique des gnes dont lexpression se produit
dans 3 domaines A. B. C.

Ce modle rsulte des rsultats de lanalyse des pertes de fonction de certains gnes.

Gnes du domaine A expression unique spale

expression combine ptale


Gnes du domaine B
expression combine tamines

Gnes du domaine C expression unique carpelle

Domaines Gnes Phnotype perte de fonction

A Apetala 1 pas de ptale pas de spale


B Apetala 3 pas de ptale pas dtamine
C Agamous pas de carpelles pas dtamines

1. Ces gnes correspondent des gnes appels homotiques. Des mutations qui
transforment des parties de lorganisme en structures normalement associes
dautres positions / localisations sont appeles homotiques.
Des mutants homotiques ont t initialement trouvs chez la drosophile
remplacement des antennes par des pattes remplacement des yeux par des ailes.

Ces gnes homotiques ont des caractristiques communes de gnes bote MAD
(MAD box genes) codant des facteurs de transcription comprenant un domaine amino
terminal de fixation de lADN de 58 ac. amins trs conserv.
Chez ces protines le domaine MAD fonctionne la fois dans linteraction avec
lADN et avec des protines (protein-protein interaction) et est hautement conserv au
niveau des contrles dveloppementaux chez diffrents organismes.

2. Ces gnes sont trs conservs entre les espces (A. thaliana et Anthirinium majus par
exemple), ils discriminent les types dorganes floraux mais ne donnent pas
dinformations ou dinstructions sur le dtail de la construction des organes floraux
qui implique des gnes ralisateurs en aval.

Ces gnes ont t caractriss initialement partir de mutations naturelles ou provoques puis
par des expriences de gne tagging (TDNA) conduisant au mme phnotype.

La disponibilit de la squence a permis de faire des expriences dhybridation in situ


conduisant montrer la localisation spcifique de lexpression de ces gnes :

Apetala 2 ptale/spale
Apetala 3 ptale-tamine
Agamous Etamines-carpelles

Lexpression tissu spcifique des gnes homotiques est contrle essentiellement par des
intractions ngatives. Par exemple lexpression du gne agamous (classe C) est rprime
dans les cercles extrieurs par le gne de classe A apetala 1. Lactivation initiale des gnes
homotiques est ralise au moins en partie comme cela a t dit par les produits de gnes
exprims plus prcocement comme les gnes didentit du mristme floral de type LEAFY.

Des gnes autres que les gnes didentit dorganes doivent contrler le nombre dorganes
dans chaque rang puisque les mutations de ces gnes naltrent pas le nombre dorganes mais
seulement leur identit.

Un exemple rcent :
Le contrle de la floraison, un rseau complexe dinteractions entre facteurs inducteurs et
rpresseurs : cas particulier de la rgulation du dveloppement des fleurs par GA (Yu et al
PNAS 2004 101 20 7827).

Chez Arabidopsis le mutant Ga1-3 dficient en gibberelline dveloppe des fleurs dont la
croissance est nettement retarde au niveau des diffrents organes floraux qui conservent
cependant leur identit.

Les progrs dans la connaissance des mcanismes daction des gibberellines conduisent
penser que ces hormones contrlent le dveloppement en supprimant un groupe de protines
nuclaires fonction de rpresseurs : les protines DELLA qui contiennent en commun un
domaine N-terminal DELLA qui serait impliqu dans linactivation de ces protines par le
signal GA. Il existe 5 protines DELLA dans le gnome dArabidopsis (GAI, RGA, RGL1,
RGL2, et RGL3). GA entranerait la disparition de ces protines represseurs en induisant leur
dgradation par lintermdiaire de mcanismes ubiquitine / protasome dpendants.

Comme ces protines ne renferment pas de domaines typiques de liaison lADN il est
suppos que ces rgulateurs transcriptionnels formeraient des complexes actifs avec dautres
facteurs de transcription pour contrler lexpression des gnes.
Il a t montr que la suppression de RGA et de RGL2 (mutations sur les gnes de ces
protines DELLA) restaure un dveloppent floral normal chez le mutant ga1-3 indiquant leur
rle de rpresseur dans le dveloppement des fleurs.

Des tudes ont t ralises visant valuer limpact de lapport de GA et la surexpression de


RGA sur diffrents gnes de contrle de la floraison.

LEAFY un gne en amont nest pas affect. En revanche les gnes homotiques APETALA 3
et AGAMOUS sont induits par GA et rprims par RGA.

Ces rsultats montrent que la croissance des organes floraux ncessite lexpression continue
de certains gnes homotiques.
Il faut enfin mentionner que les protines DELLA intervenant dans le contrle dune large
gamme de processus du dveloppement, leur implication dans la floraison doit faire intervenir
des rgulateurs fleur-spcifique.

Schma rcapitulatif :

Mutant ga1-3 DELLA Gnes homotiques Fleurs


PROTEINS croissance rduite

wt DELLA Gnes homotiques Fleurs normales


GA PROTEINS
Schma de synthse :
Signaux de lenvironnement
ou contrles endognes

Gnes de chronologie de floraison

emfi (rpresseur) constans (Co) luminidependens FCA

Gnes didentit de mristme floral


Leafy CAL

Gnes intermdiaires

AGL2 AGL4 AGL9

Gnes didentit des organes floraux


modle ABC
AP1 AP2 AP3 AG

Gnes ralisateurs

Ex : AGL1 , AGL5 (exprims spcifiquement


dans les carpelles en
diffrenciation par
exemple)

spales ptales tamines carpelles

Les gnes encadrs dun rectangle sont des gnes homotiques bote MAD
Plus de 80 gnes ont t impliqus dans le contrle de la floraison chez Arabidopsis.
Ces gnes codent frquemment des rgulateurs transcriptionnels et sont en
interactions positives ou ngatives dans un rseau extrmement complexe. Les gnes
domaines MAD ont un rle prpondrant.

VI-C- PHYSIOLOGIE DE LA SENESCENCE

La snescence correspond chez les vgtaux une phase normale du cycle de


dveloppement des espces qui se place aprs ltat juvnile, la maturit et lacquisition de
ltat reproducteur et au cours de laquelle sinstallent des processus de dgnrescence
irrversibles des structures et des fonctions cellulaires qui vont conduire une dtrioration
des tissus et organes et finalement la mort de ces organes ou mme de lorganisme (au cours
de cette phase la plante est en tat de snescence).

En particulier, chez les annuelles la snescence nest pas due des conditions externes
dfavorables (elle peut tre acclr par ces facteurs), mais des rgulations internes, il sagit
dun vnement programm. La snescence peut donc se dvelopper en absence de toute
condition extrieure dfavorable mais le froid, la scheresse, lombrage, llimination de
certains organes de la plante peuvent linduire et lacclrer.
On a souvent rapproch la snescence de lapoptose ou mort cellulaire programme
chez les animaux (PCD).

En fait les phnomnes sont assez distincts :

1. On ne retrouve pas lors de la snescence des indicateurs biochimiques propres


de la PCD
Signaux mitochondriaux
DNA ladder
Intervention de caspases

2. Les analogies seraient plus videntes au niveau de la rponse hypersensible


(HR) qui, chez les vgtaux correspond la mise en place dune zone de
cautrisation par mort cellulaire autour dun site dinfection empchant la
diffusion du pathogne ou au niveau de phnomnes de mort cellulaire isols
lchelle de la plante :

Cellules des vaisseaux lintrieur du xylme


Cellules aleurone

Enfin on peut voquer le terme doncose pour dsigner la mort accidentelle de cellules de
plante qui ne sont plus capables de rparer les dommages causs par le stress.

VI-C1- Modalits de la snescence selon les types de vgtaux :

La snescence peut concerner lensemble du vgtal ou seulement certaines de ses parties.


Ainsi chez les espces monocarpiques, elle concerne lensemble de la plante et se produit ds
la floraison (annuelles, bisannuelles, pluriannuelles) seules les graines survivent et assureront
la survie de lespce.
Chez ces espces la snescence au niveau des feuilles peut tre progressive et squentielle par
exemple les feuilles ges meurent les premires alors que les feuilles plus jeunes restent en
vie suggrant aux diffrents niveaux, diffrents quilibres nutritifs et hormonaux.

Espces prennes : Les herbaces peuvent voir leur systme arien mourir chaque anne en
conditions dfavorables mais leur systme racinaire reste en vie et permet le dpart de la
vgtation au printemps.
Chez les arborescentes feuilles caduques
seules les feuilles, les fleurs et les fruits entrent en snescence. Le tronc, les branches, les
bourgeons et les racines restent en vie.
Chez les arborescentes feuilles
persistantes, les feuilles les plus ges deviennent snescentes aprs une priode variables de
1 7 ans alors que les feuilles jeunes continuent crotre et larbre est toujours couvert de
feuilles.

Si la snescence est directement lie au programme de dveloppement pour les espces


monocarpiques qui entrent en tat de snescence ds la floraison [certaines plantes
monocarpiques maintenues dans des conditions dclairement dfavorables pour la floraison
voient leur snescence diffre de plusieurs annes], les facteurs responsables du
dclenchement de la snescence sont moins nets et beaucoup plus complexes au niveau des
espces prennes.

Il existe bien sr des diffrences lies aux caractristiques gntiques, certaines espces ayant
des longvits exceptionnelles, ex : Pinus aristata 4000 ans (Juniperus ostreatus) mais des
maladies, des stress divers, des conditions dfavorables de nutrition, la difficult accrue des
changes au sein de lindividu avec laugmentation de ses dimensions peuvent favoriser la
snescence.

VI-C2- Modifications lies la snescence :

La snescence a t essentiellement tudie chez les feuilles, les fleurs et les fruits (nous
avons parl des fruits propos du contrle de la maturation par lthylne, dbut dune phase
de snescence, nous considrons seulement ici le cas des feuilles).

a) Modifications visibles :
Changement de coloration des feuilles couleur automnale due la
disparition de la chlorophylle qui ne masque plus les carotnodes
de couleur jaune-orange et/ou la synthse de pigments
anthocyaniques rouges/roses.

A la suite de la snescence des feuilles un phnomne visible est


labcission.

b) Modifications ultrastructurales :

Diminution de la taille des choroplastes et des mitochondries puis


dtrioration, diminution du nombre de ribosomes
Altration des systmes membranaires, tonoplaste, disparition de lER,
dictyosomes, altration du plasmalemme lors des tapes finales.
Les ruptures de compartimentation lies aux altrations sont ltales
pour la cellule : invasion du cytosol par les protases,
dcompartimentation ionique

c) Modifications biochimiques :

Elles sont associes aux modifications ultrastructurales prcdentes

Diminution de la photosynthse avec une destruction des chlorophylles


Diminution de la respiration
Diminution de la teneur en protine : dgradation accrue, synthse rduite
Diminution des ac. nucliques dgradation accrue (Rnase).

Ces modifications peuvent tre globalement lies un ralentissement de la synthse et une


acclration de la dgradation. Dune manire gnrale on assiste une diminution des
teneurs en macromolcules lexception des constituants paritaux, et une augmentation
transitoire en petites molcules.

La vacuole jouerait un rle particulirement important dans la snescence avec son rle
lysosomal. Elle renferme en effet des hydrolases normalement spares du cytoplasme et la
dtrioration de la membrane vacuolaire (le tonoplaste) permettrait la libration de protases,
nuclases, phosphatases qui hydrolyseraient les constituants cytoplasmiques.

Si la snescence nest pas associe une activit de croissance ou de morphognse ce nest


pas un phnomne passif mais un processus de diffrenciation particulier, associ
lexpression de nouveaux gnes qui ont t regroups sous lappellation gnes SAG
(snescence associated genes). La ncessit dune synthse protique est, par ailleurs,
dmontre par larrt de snescence provoque par des inhibiteurs de la synthse protique.
Les gnes SAG sont nombreux ils correspondent diverses fonctions

Facteur de transcription potentiellement impliqus dans les cascades de


signalisation associes la mise en place de la snescence ex : WRKY 6
(domaine conserv de 60 acides amins domaine WRKY).
Protases comme SAG12 chez Arabidopsis :Protase cystine
Chlorophyllase : implique dans la dgradation des chlorophylles
Phospholipase (SAG 101) libre de lacide olique partir de trioline.
La dsorganisation des membranes pendant la snescence rsulte en partie de la dgradation
des lipides membranaires par diffrentes enzymes comme la phospholipase D, la
lipoxygnase. Cette dernire enzyme donne lieu la formation de radicaux libres : oxygne
singulet, radical superoxyde trs toxiques pour les structures cellulaires et contribue la
formation dacide jasmonique parfois appele hormone de mort.

Des tudes avec des techniques comme la RPE (rsonance de spin paramagntique) montrent
une augmentation de ces radicaux avec la snescence alors que les enzymes de dtoxification
des radicaux :peroxydase, catalase, superoxyde dismutase voient leur activit diminuer.

VI-C3- Les causes de la snescence

Causes nutritives :

Cette hypothse propose que la snescence des feuilles serait induite par une carence
en ressources nutritives en raison du prlvement de mtabolites pour la formation des fleurs,
des graines et des fruits : organes non photosynthtiques.

Effectivement lablation des jeunes bourgeons floraux ou de jeunes fruits diffre


considrablement la snescence chez des espces comme le soja ou la tomate.

Ceci est en accord avec la snescence des espces monocarpiques qui dbute avec la
floraison. Cependant cette hypothse intressante ne peut-tre gnralise. En effet, ces
observations ne sont pas retrouves chez dautres espces comme les crales. Par ailleurs, sur
certaines espces dioques (Epinard) llimination des fleurs mles a le mme effet que
llimination des fleurs femelles dont les besoins nutritifs sont beaucoup plus importants.
Par ailleurs, lapport massif dengrais, de substances nutritives ne retarde pas la snescence
chez les plantes ayant fleuri, il semble donc que la floraison soit lorigine dun signal
systmique marquant le dbut de la snescence.

Causes hormonales :

Leffet antisnescence des cytokinines est classique il peut tre en partie expliqu au plan
mcanistique par une stimulation de la synthse protique et un effet de rtention des
mtabolites en prsence des cytokinines (effet MOTHES).
On observe une rduction des teneurs en cytokinines ou de lexcrtion de cytokinines au
niveau des exsudats racinaires (Tournesol) lors de linstallation de la snescence.
Lapport de cytokinines exognes (mais aussi dautres hormones comme GA3 ce qui suggre
un contrle multihormonal) retarde la snescence.
Par ailleurs diverses expriences de transgnse visant surexprimer le gne de
lisopentenyltransfrase (IPT) dans diffrentes conditions en particulier en association avec
des promoteurs de gne SAGE montrent un retard spectaculaire de la snescence.
Lthylne a par ailleurs un effet inducteur de la snescence particulirement net chez les
fleurs.

VI-C4- La snescence foliaire une tape de remobilisation des lments


nutritifs pour le remplissage des graines.

La snescence foliaire saccompagne de la dgradation des macromolcules (protines, acides


nucliques..) et de la migration des produits dhydrolyse et dune manire gnrale des petites
molcules prsentes dans les feuilles vers les parties de la plante encore en dveloppement
fruit et surtout graine.

Il sagit dun processus trs adapt de rcupration utile des nutriments forms par la
plante au cours de son dveloppement vgtatif.
Les tudes ont surtout port sur les protines et sur la protine foliaire la plus abondante : la
Rubisco.

VI-C5- Approches Biotechnologiques visant diffrer la snescence :

Nous avons dj parl du problme de la conservation des fruits. En ce qui concerne les
fleurs et les feuilles diffrentes stratgies ont t explores.

Tout dabord il faut noter que peu de mutants affects dans la snescence ont t
caractriss. On peut signaler le mutant Arabidopsis Ore 9 qui correspond la perte de
fonction dune protine F Box composante des systmes de protolyse ubiquitine
dpendant. Ce qui confirme limplication de ce systme dans la snescence.
Pour les feuilles une proccupation des slectionneurs est de privilgier chez certaines
cultures le phnotype stay green qui permet un maintien prolong de lactivit
photosynthtique.
Des expriences exploratoires de transgnse ont t envisages
Par surexpression du gne IPT
Par surexpression de gne de superoxyde dismutase ou de catalase.

Par ailleurs un traitement aprs rcolte (laitue par exemple) par acide ascorbique, EDTA ou
GA3, a t envisag pour viter jaunissement et fltrissement.
Pour les fleurs (la fleur coupe na pas achev sa croissance en gnral lors de la vente), des
solutions nutritives visant 2 objectifs sont commercialises (type SEVAFLOR) afin
damliorer la conservation

Antiseptiques, agents dacidification pour viter la formation de bouchons au


niveau des vaisseaux (dorigine fongique ou rsultant de la prcipitation de
certains sels fluorure, sels de Ca++
Elments nutritifs de type glucose ou saccharose.

On arrive ainsi multiplier la longvit par un facteur 3.

VI-C6 Labcission :

La phase finale de la snescence en ce qui concerne les organes comme les feuilles, les fleurs
et les fruits consiste en leur sparation de la plante mre lors du phnomne dabcission.

Considrons le cas des feuilles :

VI-C6- a- Description du phnomne :

Labcission se produit gnralement la base du ptiole, prs de la jonction avec la tige.

A ce niveau se produit avant labcission une priode de divisions cellulaires intenses qui
aboutit la mise en place de la zone d abcission. Cette zone comprend des cellules
petites parois minces et se met en place des priodes diffrentes avant labcission
selon les espces.
Il se produit ensuite une augmentation des activits enzymatiques : pectinases, cellulases
au niveau de cette zone dabcission entranant la lyse de parois des cellules. Les cellules
se glifient et la feuille nest plus retenue que par les faisceaux conducteurs qui seront
rompus mcaniquement par le vent. Enfin une couche de cicatrisation subrise se met
en place (lige) qui protge la section au niveau de la tige des pertes deau et de
linvasion des pathognes.

VI-C6- b- Mcanismes :

Nous avons dj prcis propos de lABA que cette hormone ne reprsentait pas le vritable
facteur de labcission. Il sagit comme dans de nombreux cas dun contrle plurihormonal.

LAIA produit par la feuille retarde l abcission tant que la feuille est jeune (des rsultats
contradictoires ont t initialement obtenus en relation avec lapplication dAIA exogne lie
la production secondaire dthylne). Au cours de la snescence lauxine diminue
progressivement (lablation du limbe producteur dauxine acclre labcission. Les
cytokinines et gibberellines retardent galement labcission.

A partir dun certain moment il y aurait dans les tissus snescents production dthylne qui
stimule la production denzymes dhydrolyse (cellulases pectinase) actives dans labcission.

Lors de la snescence des feuilles, dans le cas des espces prennes, les constituants de petits
poids molculaire rsultant de lhydrolyse des rserves (protines par exemple) migrent soit
vers les bourgeons dormant soit vers les rayons ligneux du bois (files de cellules
parenchymateuses) o ils seront rutiliss ds le dpart de la vgtation au printemps. Le
contenu en substances minrales et en matire organique des feuilles aprs abcission ou de
lorganisme entier pour les espces monocarpiques sera repris dans les phnomnes
dhumification (formation de lhumus) et aprs passage par les cycles des lments de la
biosphre pourra tre rutilis par la vgtation.

En horticulture et agriculture on peut vouloir prvenir labcission prmature des fleurs ou


fruits par application de rgulateurs de croissance (auxines de synthse) ou au contraire
favoriser l abcission des feuilles pour favoriser la rcolte dautres organes (cotonnier).