Universidade Federal do Tocantins

Qumica Ambiental

Ismael Rocha

PRODUO DE BIOINSETICIDAS UTILIZANDO O

BACILLUS THURINGIENSIS

Gurupi

2016
 SUMRIO

1 INTRODUO...........................................................................................3

2 DESENVOLVIMENTO..............................................................................4
2.1 Bacillus thuringiensis (Bt)...........................................................................4
2.2 Fermentao................................................................................................5
2.3 Metabolismo................................................................................................6

3 CONSIDERAES FINAIS......................................................................7

4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS........................................................7
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1 INTRODUO

A necessidade de produzir mais alimentos tem gerado um grande nmero de

problemas ambientais. No setor florestal e da agricultura, alguns dos principais fatores que
causam danos ao meio ambiente so a m gesto do solo, desmatamento e poluio causada
pelo uso de produtos qumicos, em especial inseticidas qumicos que so usados para
controlar pragas (CAPALBO, 1995). O uso de produtos qumicos contra alguns tipos de
insetos que so vetores de doenas tambm um grande causador problemas (EJIOFOR,
1991).

O uso de pesticidas qumicos eficaz para controlar as pragas de insetos, mas

apresentam algumas desvantagens: eles podem agir em organismos no-alvo (FISHER, 1993;
CARLTON, 1990). Mais de 400 espcies de insetos desenvolveram a capacidade de resistir a
inseticidas qumicos e isto reduz a sua eficcia no campo (ABDEL-HAMEED, 1992;
GEORGHIOU e LAGUNES, 1988; TIRADO MONTIEL et al., 1998). Muitos pesticidas
qumicos so difceis de degradar, pode acumular no meio ambiente e, portanto, pode poluir
as guas superficiais e subterrneas, dos solos e dos gneros alimentcios (CARLTON, 1990).

A este respeito, a utilizao de microrganismos tais como bactrias, protozorios,

fungos e vrus como agentes de controle biolgico (ARONSON et al, 1986;. BURGES, 1986)
minimizou os problemas causados pelos inseticidas qumicos. Entre eles, o Bacillus
thuringiensis (Bt) possui a capacidade para produzir, durante a fase de esporulao, uma
incluso cristalina chamada delta-endotoxina, composta por sequncias de protenas que tm
um efeito muito especfico sobre certos insetos alvo. Devido ao seu modo de ao, B.
thuringiensis apresenta uma potncia biolgica quando comparada aos inseticidas qumicos,
destacando-se sua especificidade a insetos-alvos, seu efeito no poluente ao meio ambiente,
sua inocuidade aos mamferos e vertebrados e a ausncia da toxicidade em plantas.
Formulaes base de B. thuringiensis tem sido usado comercialmente para controlar vrias
pragas de insetos na agricultura e florestas desde 1950 (TIRADO MONTIEL et al., 1998).
Diferentes estirpes de Bt so eficazes contra lepidpteros, dpteros e pragas de colepteros.
Como outros microrganismos, o Bt cresce em meio de cultura contendo fontes de carbono,
oxignio e nitrognio bem como sais minerais (BULLA et al., 1980).
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indiscutvel a importncia do processo fermentativo na produo massal dos novos

microrganismos, tanto os que contm ou expressam a toxina do B. thuringiensis, como
aqueles com potencial para o biocontrole, sejam eles obtidos atravs de manipulao gentica
ou no. Para todos eles, as variveis de produo e recuperao so vlidas e devem ser
cuidadosamente avaliadas para obteno de um produto de qualidade. As possibilidades de
aumento do potencial de biocontrole apresentadas por um microrganismo pode ser ampliada,
desde que o processo de produo seja criteriosamente otimizado (LIMA et al,. Vol. 3, 2001).

2 DESENVOLVIMENTO

2.1 Bacillus thuringiensis (Bt)

O Bacillus thuringiensis uma bactria Gram positiva, em forma de bastonete,

anaerbia facultativa (ANDREWS, 1991), que pode ser caracterizada pela sua habilidade de
formar cristais proticos durante a fase estacionria ou de esporulao. O Bt ocorre
naturalmente em diversos habitats incluindo solo, filo plano, resduos de gros, poeira, gua,
matria vegetal e insetos, seus esporos podem ser isolados em diversos ambientes como solo,
razes de plantas, gua, partculas de poeira e insetos (BIZZARRI; BISHOP, 2008). O cristal
proteico tambm chamado de delta-endotoxinas, possui propriedades inseticidas especficas.
Este cristal protico responsvel por 20-30% da protena total da clula (BOUCIAS, 1998).

A primeira vez que o Bacillus thuringiensis foi isolado, foi em Bombyx mori, no
Japo, pelo pesquisador Ishiwata, no ano de 1901. Essas bactrias foram encontradas em
bicho da seda. Em 1915 foram novamente isolados, mas em traas de farelo de trigo pelo
pesquisador Berliner. No entanto a descoberta s foi oficializada pelo pesquisador Anasgasta
kuehniella, em Thuringia na Alemannha, o que deu o nome para o novo microorganismo.

O Bacillus thuringiesis tem seu ciclo de crescimento atravs da germinao do esporo,

depois a propagao por fico binria que consiste na fase vegetativa. Para concluir a fase
vem a diviso celular, onde se d pelo incio de um novo ciclo de esporulao, e nessa fase
que ocorre a produo de protenas que compe os cristais proticos.
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Estes cristais proticos, classificados como Cry e Cyt toxinas, apresentam um amplo
espectro seletivo de atividade txica para uma srie de insetos (JAMES, 2009). Goldberg e
Margalit isolaram, em 1976, em Israel, uma nova subespcie de Bacillus thuringiensis, a partir
de amostras de solo (GLARE; OCALLAGHAN, 1998). Posteriormente, a subespcie foi
identificada e denominada Bacillus thuringiensis var. israelensis, sorotipo H-14. Este
microrganismo era significativamente mais txico para larvas de mosquitos que outras
bactrias conhecidas at o momento.

As protenas que constituem o cristal apresentam massas moleculares que variam de

60 a 160 kDa. Elas so constitudas de duas partes distintas: uma poro aminoterminal,
normalmente varivel e associada toxicidade, e uma poro carboxiterminal, geralmente
associada formao do cristal (COOPER, 1994; SCHNEPF et al, 1998).

De acordo com Schnepf et al. (1998), as protenas Cry possuem trs domnios
estruturais (I, II e III), que consistem no centro txico ativo. A estrutura de protenas Cry1Aa,
Cry3Aa, Cry11Bb sugerem alta similaridade estrutural entre elas, e, apesar da baixa
homologia entre os aminocidos, estes domnios esto compreendidos nos primeiros 623
aminocidos da protena.

O domnio I est envolvido na insero da membrana, e afeta a funo do canal de

ons e a toxicidade (WU e ARONSON, 1992); enquanto o domnio II est envolvido na
ligao ao receptor e insero na membrana, e atua na determinao da especificidade da
protena (KNOWLES). O domnio III importante para o funcionamento do canal de ons,
ligao de receptores e insero na membrana, estabilidade da protena e especificidade em
relao ao inseto alvo.

2.2 Fermentao
.

A forma mais utilizada o processo submerso onde mantida uma cultura me

liofilizada. Para iniciar o processo de fermentao uma pequena amostra propagada em um
erlenmeyer com gar, onde submetido a condies controladas, nesse mesmo perodo so
feitos testes de pureza. S a partir da o microrganismo transferido para o biorreator. no
estgio final da fermentao que as protenas sero produzidas, no perodo de escassez de
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nutrientes onde ocorre a esporulao. Algumas clulas sofrero lise e o caldo final conter
esporos e algumas clulas remanescente.

2.3 Metabolismo

No estgio inicial ocorre uma enorme demanda de fontes de carbono, nitrognio e

oxignio que so utilizados para a biossntese e crescimento, entretanto so necessrios alguns
sais minerais. Uma fonte de carboidrato muito utilizada so triptona, farinha se soja e torta de
algodo, por se tratarem de subprodutos industriais que possuem um baixo custo. As fontes de
carbono influenciam diretamente na velocidade de sntese dos cristais e em sua toxicidade, em
alguns casos mostrou influncia na especificidade.

necessrio um balano de nitrognio e oxignio pois possuem uma grande influncia

na mudana do pH. Os sais minerais so necessrios para o crescimento do microrganismo,
tais como clcio, zinco, mangans e magnsio, que tambm possui influncia no equilbrio do
pH, e na estabilidade da protena.

O metabolismo da glicose por Bacillus feito pela gliclise, produzindo

principalmente piruvato, mas uma pequena parcela do carboidrato direcionada para a
produo de energia pela via das pentoses-fosfato. Acetato formado durante o crescimento
vegetativo, sendo utilizado para a produo de PHB, componente de reserva de energia
celular, requerido na fase de esporulao, no ciclo dos cidos tricarboxlicos.

A faixa de temperatura para crescimento de diversas linhagens de Bacillus

thuringiensis , segundo Bernhard e Utz (1993), de 15 a 30 C, sendo consideradas ideais para
o cultivo, temperaturas de 26 a 30 C.

Com relao ao pH, a faixa de 6,5 a 7,5 considerada ideal para o crescimento, mas a
bactria pode crescer em valores de 5,5 a 8,5 e valores abaixo de 5,0 podem impedir a
esporulao de bactrias do gnero Bacillus.

2.4 Atividade entomopatognica

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O cristal protico do Bacillus thuringiensis considerado como uma pr-toxina, que

necessita ser ativada para exercer efeito txico no intestino da larva do inseto. Para esta
ativao, necessrio que ele seja primeiramente ingerido pela larva. O pH alcalino do seu
trato intestinal, assim como a atuao de proteases, proporciona a solubilizao do cristal e a
consequente liberao das toxinas na sua forma ativa.

Quando uma larva do inseto susceptvel ingere cristais da protena produzida

juntamente com os esporos da bactria. Esses cristais, aps solubilizao, resultam peptdeos
que formam poros na membrana do epitlio intestinal e desestabilizam os gradientes osmtico
e inico da larva.

A maioria das pr-toxinas conhecidas precisa ser hidrolisada por proteases intestinais
para tornarem-se fragmentos ativos. Uma vez ativos, esses fragmentos ligam-se a receptores
especficos do epitlio do intestino mdio da larva do inseto. Como consequncia, ocorre a
deformao das clulas epiteliais e a desintegrao da membrana microvilar, o que acarreta
danos irreversveis no intestino, culminando com a morte da larva.

Uma vez que o funcionamento do intestino mdio interrompido, ocorre uma reduo
do pH do fludo intestinal, conjuntamente com uma liberao de nutrientes, o que cria
condies para a germinao de esporos do Bt e para a multiplicao de suas clulas
vegetativas

A bactria invade os tecidos larvais, e ento a larva interrompe sua alimentao e

morre. Devido ao processo infeccioso, o inseto se torna mais suscetvel a invases
microbianas secundrias que podem acelerar a sua morte. O ciclo infeccioso concludo
quando o cadver consumido e a bactria garante a sua perpetuao no ambiente na forma
de esporo.

3 CONCLUSO

de extrema importncia o conhecimento das fontes de nutrientes a serem utilizadas

na fermentao do Bt, pois possuem influncia direta no crescimento da bactria e toxicidade.
Outros fatores tambm so muito importantes como pH e temperatura. Contudo, para que aja
um melhor aproveitamento do microrganismo e dos seus cristais o ideal que sejam feitos
estudos detalhados dos ambientes adequados para seu crescimento.
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4 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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