Tcnicas Histolgicas

Se denomina tcnica histolgica al conjunto de operaciones a que se somete

una materia organizada (tejido biolgico), a fin de que sea posible su estudio por
medio del microscopio, posibilitando la observacin de estructuras no visibles al
ojo humano.

Pasos de la tcnica histolgica

Obtencin del material histolgico para estudiar

Proceso de fijacin

Lavados

Deshidratacin

Aclaramiento

Infiltracin

Inclusin

Microtoma

Tincin

Observacin

Obtencin del material histolgico

Los tejidos se pueden obtener de diferentes formas:

Biopsia

- Biopsa excisional - Biopsia incisional - Biopsa endoscpica - Biopsia

colposcpica - Puncin aspiracin con aguja fina (PAAF) - Biopsia por puncin con
aguja gruesa (Tru-cut)

Abiopsia

Necropsia/autopsia

Fijacin
En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los
cambios post-mortem y para lograr conservar ("fijar") la forma original del tejido.
En caso de que utilicemos ms adelante el microscopio electrnico, usaremos
glutaraldehdo (para protenas) u osmio (para lpidos). Unos de los fijadores ms
usado es el formol al 10% (formaldehido).

Lavados

Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador.

Deshidratacin

Suena incoherente que se deba lavar el tejido y despus deshidratarlo. El exceso

de fijador al momento de la infiltracin, incluso en la microtoma, podra afectar los
cortes histolgicos, y por ello se debe lavar. La deshidratacin se hace empleando
diferentes soluciones de alcohol de concentracin creciente.

Aclaramiento

En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. El ms usado

es el xilol (xileno) ya que como la muestra est deshidratada, el xilol entrar hasta
lo ms profundo del tejido. Tambin el tejido pierde color y adquiere un tono
acaramelado.

Infiltracin

En este paso la muestra se coloca en parafina lquida, cabe mencionar que se

debe usar parafina histolgica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido est
completamente lleno de xilol, ahora debido a smosis sale el xilol y entra la
parafina.

La deshidratacin, aclaramiento e infiltracin pueden ser realizadas manualmente

pero hoy en da se realizan de modo automtico en mquinas especficas.

Inclusin

Aqu se forman bloques de parafina dentro de los cuales estn las muestras a
estudiar. Tambin hay maquinas especializadas para la inclusin en parafina de
tejidos. Despus de su inclusin y posterior secado, estos se deben poner a
enfriar en un congelador para su posterior corte. Puede llevarse a cabo en
Parafina.

Microtoma
Se realizan cortes histolgicos muy delgados segn lo requerido o la costumbre
del laboratorio donde se realice la tcnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta
8 u 10 micras. Los cortes se echan al bao de flotacin y se pescan con un
portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tincin con que se van a
procesar. El ngulo de corte entre el cuchillo del microtomo y el bloque ha de estar
entre 10 y 15. Una vez realizado el corte se da un bao de agua destilada, para
que la parafina se estire. Un buen corte histolgico debe tener un grosor
aproximado de 3-5 micras para que sea fcilmente atravesado por la luz del sol
atraviesa los poros celulares.

Tincin

Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes
estructuras o sustancias.

La tincin ms usada o tambin llamada "de rutina" es la de hematoxilina y eosina

(H&E). Se usa un colorante llamado hematoxilina que tie las sustacias cidas o
que las contengan, como el ncleo que contiene cido desoxirriboncleico (ADN)
La eosina amarillenta tie las estructuras bsicas como el citoplasma y dems
orgnulos eosinoflicos de la clula.

Como se mencion anteriormente hay muchas tinciones Otros ejemplos son:

Masson

PAS

Perls

Plata metenamina

Warthin-Starry

Ziehl-Neelsen

Van Gieson

Azul alcian

Sudn III

Rojo Congo

Observacin
Algunos autores no consideran la observacin como un paso de la tcnica
histolgica sino el objetivo final de la misma. Como se puede deducir, se observa
la laminilla al microscopio y se busca lo que se necesite ver para llegar a un
diagnstico.

La tcnica histolgica es muy empleada en laboratorios y hospitales. Permite

hacer diagnsticos de distintas enfermedades, como para saber si un tumor es
maligno o beningno, etc.