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Acta Otorrinolaringol Esp 2006; 57: 383-387

INVESTIGACIN BSICA

Presbiacusia: degeneracin neuronal y envejecimiento


en el receptor auditivo del ratn C57/BL6J
E. Castillo1,2, F. Carricondo1, M. V. Bartolom1, A. Vicente-Torres1, J. Poch Broto2, P. Gil-Loyzaga1
1
Laboratorio de Neurobiologa de la Audicin. Dpto. Oftalmologa y Otorrinolaringologa. Facultad de Medicina. Universidad Complutense de Madrid.
2
Servicio de Otorrinolaringologa. Hospital Clnico San Carlos. Dpto. Oftalmologa y Otorrinolaringologa. Facultad de Medicina. Universidad
Complutense de Madrid.

Resumen: La presbiacusia es una prdida auditiva progresi- INTRODUCCIN


va, ligada al envejecimiento, que se manifiesta como una
sordera asociada a cambios degenerativos cocleares. En el La presbiacusia se define como una prdida progresi-
presente estudio se analizan los efectos del envejecimiento va, bilateral y generalmente simtrica de la audicin, rela-
sobre el sistema auditivo del ratn C57/BL6J mediante tc- cionada directamente con el envejecimiento del sistema au-
nicas electrofisiolgicas y morfolgicas. Con este fin se re- ditivo 1 , que no puede ser explicada por procesos
gistraron los potenciales auditivos en animales de 1, 3, 6, 9, traumticos, genticos o patolgicos extraordinarios2.
12, 15, 18, 21 y 24 meses de edad, con posterior anlisis En la gnesis de los distintos tipos de presbiacusia, ade-
morfolgico de sus ccleas. Los potenciales auditivos mos- ms del factor determinante fundamental de la edad, inter-
traron un incremento de latencia y una disminucin de am- vienen otros factores genticos y medioambientales. Entre
plitud progresivos con la edad. Los estudios morfolgicos los primeros, adems de la edad, destacan el sexo, antece-
demostraron una total degeneracin del rgano de Corti, dentes familiares de sordera y las patologas cocleovestibula-
que apareca reemplazado por un epitelio plano con ausen- res concomitantes, como la enfermedad de Menire. Entre
cia de clulas ciliadas. los ambientales destaca la exposicin al ruido3.
Se han descrito varios tipos anatomopatolgicos4. En la
Palabras clave: Presbiacusia. Potenciales auditivos. Ratn presbiacusia sensorial, se observa atrofia del rgano de Cor-
C57/BL6J. Modelo experimental de Presbiacusia. ti en la extremidad basal de la cclea, con prdida continua
de clulas ciliadas, sobre todo externas, afectando la zona
conversacional. Se caracteriza por una cada abrupta en fre-
Presbycusis: neural degeneration and aging on the cuencias agudas. En la presbiacusia neural, hay prdida de
auditory receptor of C57/BL6J mice 50% o ms de neuronas cocleares. Aparece una prdida pro-
gresiva de la discriminacin del habla, en presencia de una
Abstract: Presbycusis is a progressive hearing impairment audiometra tonal normal5. En la presbiacusia estrial se pier-
associated with aging, characterized by hearing loss and a de el 30% o ms del tejido estrial, con una audiometra to-
degeneration of cochlear structures. In this paper we analyze nal plana que afecta a todas las frecuencias, asociada a una
the effects of aging on the auditory system of C57/BL6J mice, discriminacin del habla normal. La presbiacusia mecnica
with electrophysiological and morphological studies. With o coclear se debe a alteraciones de los sistemas mecnicos;
this aim the auditory potentials of mice aging 1, 3, 6, 9, 12, membrana basilar y ligamento espiral. Su diagnstico se ha-
15, 18, 21 and 24 months were recorded, and then the mor- ce por exclusin, o en ausencia de alteraciones histolgicas
phology of the cochleal were analyzed. Auditory potentials aparentes1. Cuando los pacientes renen criterios patolgi-
revealed an increase in wave latencies, as well as a decrease cos significativos en ms de una estructura coclear, se clasi-
in their amplitudes during aging. Morphological results sho- fican como presbiacusia mixta. El 25% de los casos de pres-
wed a total Cortis organ degeneration, being replaced by a biacusia no rene criterios morfolgicos ni audiomtricos
flat epithelial layer, and a total absence of hair cells. de ninguno de los tipos anteriores. Se clasifican como pres-
biacusias indeterminadas1.
Key words: Presbycusis. Auditory potential. C57/BL6J mice. Al tratarse de un proceso involutivo carece de trata-
Presbycusis experimental model. miento, aunque son tiles las prtesis auditivas, el entrena-
miento auditivo, el tratamiento de las patologas concomi-
tantes, vitaminas, antioxidantes3, trimetazidina (Idaptn)6 y
Correspondencia: Pablo Gil-Loyzaga factores neurotrficos7,8.
Apdo. Correos 60075
28080 Madrid
El objetivo de este estudio es determinar las caracters-
E-mail: loyzaga@gmail.com ticas electrofisiolgicas y morfolgicas de aparicin y evolu-
Fecha de recepcin: 29-9-2005 cin de la presbiacusia en un modelo experimental animal:
Fecha de aceptacin: 21-8-2006 el ratn C57/BL6J.

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E. CASTILLO ET AL.

MATERIAL Y MTODOS del tipo estmulo-respuesta o input-output, tras caracteri-


zarlas por su Media Aritmtica y su Desviacin Estndar.
El animal escogido para los estudios propuestos en es- Para el registro del Potencial de Accin Compuesto
te trabajo es el ratn de la cepa C57/BL6J (Fig. 1), que pre- (PAC) del nervio auditivo, se realiz un abordaje laterocer-
senta un envejecimiento neurosensorial muy precoz9, con vical con diseccin de los msculos digstrico, esternoclei-
un patrn anatmico similar al de la presbiacusia humana10. domastoideo y omohioideo, hasta exponer la zona ventral
Se estudiaron 66 animales adultos, 46 machos y 20 hembras, de la bulla auditiva (pared postero-lateral), en la que se
de alrededor de 30 g de peso, divididos en 9 grupos de practic un orificio con bistur, para acceder a la ventana re-
edad postnatal: 1 mes, 3 meses, 6 meses, 9 meses, 12 meses, donda de la cclea. En ella se coloc el electrodo activo, de
15 meses, 18 meses, 21 meses y 24 meses. Se siguieron las hilo de plata con aislamiento de tefln y extremo distal re-
indicaciones del Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimen- dondeado para evitar daar la membrana redonda. Un elec-
tacin y de la Declaracin de Helsinki de 1975 relativas al trodo de aguja se situ en la musculatura mandibular o ma-
respeto en el uso de los animales de experimentacin. setera del lado del registro (electrodo de referencia) y un
Como anestsico se utiliz una solucin de Pentotal tercero tambin de aguja, en la axila contralateral al registro
Sdico11, en dosis de 60 mg/Kg de peso, mediante adminis- (electrodo de tierra)6. Se emple estimulacin mediante
tracin intraperitoneal. clicks filtrados de 100 ms de duracin, con una frecuencia
El material electrofisiolgico estuvo compuesto por un de 10 clicks/s. El generador de funciones HP 8904 A, con-
equipo de registro de potenciales evocados (Medelec Int. fiere al click un retraso de 15,4 ms, a partir de los cuales se
Woking England Mistral SM 280M), un generador de est- comienzan a medir las latencias y las amplitudes de la onda
mulos (Hewlett Packard HP 8904 A), una cmara anecoica, N1. El estmulo se configur en 6 frecuencias: 22, 18, 16, 12,
electrodos de aguja y de cclea, un microscopio de micro- 8 y 4 kHz. Se realizaron 64 mediciones para cada intensidad
ciruga articulado, e instrumental de microciruga de odo. de cada frecuencia, a intensidades de 100 a 30 dB SPL, re-
Para el registro de los Potenciales Evocados Auditivos duciendo de 10 en 10 dB SPL hasta encontrar el umbral de
de Tronco Cerebral (PEATC), se colocaron tres electrodos audicin en cada frecuencia. El odo contralateral al del es-
subcutneos de aguja; dos en regin submandibular y tudio se enmascar mediante ruido blanco de intensidad
uno en vrtex. La estimulacin se realiz mediante clicks coincidente con la del sonido estimulante. La latencia y la
de 100 ms con una frecuencia de 10 clicks/s de intensidad amplitud se estudiaron mediante grficas del tipo estmulo-
variable, comenzando por 100 dB SPL de intensidad, redu- respuesta o input-output para cada frecuencia. El umbral
ciendo de 10 en 10 dB SPL, hasta encontrar el umbral audi- se cosider como la mnima intensidad de estimulacin a la
tivo o bien hasta un mnimo de 30 dB SPL. En todos los re- que apareca la onda N1.
gistros se utiliz enmascaramiento del odo contralateral Las grficas se realizaron confrontando la intensidad
con ruido blanco10, una ventana de anlisis de 10 ms, y del estmulo utilizado en dB SPL, con la latencia en ms, o la
unos filtros de paso bajo y alto de 30 y 3.000 Hz. Se prome- amplitud en mV; por lo que cada punto de la grfica indica
diaron 1.024 mediciones. De cada uno de los registros del la Media Aritmtica obtenida en la poblacin a una intensi-
PEATC se estudiaron las ondas I, II, III, IV y V. En cada on- dad de estmulo determinada, con el valor de la Desviacin
da se midi la latencia desde el inicio del estmulo hasta el Estndar de la Media. Para el estudio de dichos resultados,
punto de mximo voltaje, y la amplitud desde el punto de se utiliz un test de Anlisis de la Variancia (ANOVA) de
mnimo al de mximo voltaje. El umbral se consider como una va (latencia o amplitud); con un test a posteriori o
la mnima intensidad de estimulacin a la que apareca la post hoc de Bonferroni. Se considera que dos grupos po-
onda II. Las medidas efectuadas se trasladaron a grficas seen caractersticas estadsticamente distintas, para valores
de p<0,05.
Por ltimo se extrajeron las ccleas, se fijaron y decal-
cificaron en diferentes soluciones, para terminar con su es-
tudio morfolgico mediante cortes semifinos para microsco-
pa ptica.

RESULTADOS

LATENCIA PEATC. Se observ una disminucin en la


latencia media desde el primer hasta el sexto y el noveno
mes, en el que se alcanz una audicin mxima, inicindose
a partir del doceavo mes un aumento de la latencia que se
mantuvo hasta los estadios finales de supervivencia (Fig.
2a).
Figura 1. Ratn C57/BL6J de 18 meses. Es de color oscuro, de unos 7,5 cm de
largo y unos 30 g de peso. Presenta un patrn de presbiacusia similar al AMPLITUD PEATC. Los valores de la amplitud del
humano, aunque de aparicin muy precoz. PEATC, aunque ms irregulares, alcanzaron sus mximos

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MODELO EXPERIMENTAL DE PRESBIACUSIA

Figura 3. a) Latencia PAC 12 kHz. Aumenta con la edad. Su elevacin a la edad


de 1 mes se debera a inmadurez auditiva; b) Amplitud PAC 12 kHz. Tiende a
disminuir con la edad.

clulas de los pilares persistieron, pero con alteraciones mor-


folgicas. El rgano de Corti apareci colapsado, con notable
reduccin de la luz del tnel de Corti. La estra vascular se
mostr atrfica a nivel de la espira basal. El nmero de clu-
las ganglionares tambin era menor en la espira basal, que-
dando algunos espacios entre las clulas remanentes. Las
Figura 2. a) Latencia onda II PEATC. Su valor mnimo se alcanza entre el 6 y
CCIs permanecieron en su localizacin normal sin mostrar
el 9 mes, coincidiendo con la mxima audicin; b) Amplitud onda I PEATC.
Tiende a disminuir con la edad; c) Intervalo I V PEATC. Sufre aumentos cambios degenerativos. La poblacin neuronal y las fibras
dependientes de la edad. nerviosas apicales mantuvieron a simple vista su nmero y
morfologa normales. A los 18 y 21 meses de vida, se apre-
valores en los animales ms jvenes, es decir, menores de 6 ciaba una progresin que alcanzaba la espira apical, siendo
y 9 meses, mientras que en los animales ms longevos, di- difcil individualizar las clulas ciliadas por aparecer agru-
chos valores fueron variando de forma gradual y en rela- padas. La membrana tectoria todava estaba presente, al
cin inversa a la edad (Fig. 2b). igual que las fibras nerviosas, aunque estas ltimas reduci-
INTERVALOS PEATC. Los menores intervalos corres- das en nmero, al igual que las clulas ganglionares. La es-
pondieron a las edades de 6 y 9 meses y los mximos a los tra vascular mostraba un ligero aspecto escleroso. En la es-
de 1 y 3 meses, seguidos por los de 18, 12, 21 y 24 meses pira basal el rgano de Corti haba degenerado totalmente.
(Fig. 2c). No existan clulas ciliadas internas ni externas, ni clulas de
LATENCIA PAC. Los ratones de un mes exhibieron la Deiters ni de los pilares. La estra vascular era atrfica, exis-
latencia ms alta, con importantes diferencias respecto al tan pocas fibras nerviosas y la poblacin neuronal era esca-
resto de edades, para las que las latencias se agruparon, sin sa (Fig. 4c). A los 24 meses en la espira basal haba una pr-
grandes diferencias entre s (Fig. 3a). dida total de la estructura del rgano de Corti, que estaba
AMPLITUD PAC. La mxima amplitud del PAC se al- reemplazado por una monocapa de clulas epiteliales muy
canz a los 3 y 6 meses. Ambos grupos fueron diferentes aplanadas, con ncleos visibles (Fig. 4d).
del resto, con un nivel de significacin mximo (p<0,001),
respecto a los grupos de 9, 12, 15,18, 21 y 24 meses. A partir
de 9 y 12 meses se produjo una cada notable de la ampli-
tud (Fig. 3b).
RESULTADOS MORFOLGICOS. La cclea de los ra-
tones de 1 mes, present la morfologa tpica del animal
adulto. En cada espira se identificaba el rgano de Corti de
aspecto y grosor normales por microscopa ptica, as como
sus componentes celulares; CCIs, CCEs, clulas de Deiters y
clulas de los pilares, que delimitan el tnel de Corti. El gan-
glio espiral present una estructura normal (Fig. 4a). A los 3,
6 y 9 meses comenzaron a observarse en la cclea agrupa-
mientos discretos de las CCEs y leve atrofia de las clulas de
soporte limitados a la espira basal coclear. Las fibras nervio-
sas y las clulas ganglionares conservaban su aspecto nor-
mal (Fig. 4b). A los 12 y 15 meses de vida postnatal, el rga- Figura 4. MT: Membrana tectoria; CCI: Clulas ciliadas internas; CCE:
no de Corti se caracteriz por presentar una atrofia severa a Clulas ciliadas externas; TC: Tnel de Corti; MB: Membrana basilar; a)
Espira basal 1 mes; CP: Clulas de los pilares; delimitan el tnel de Corti; b)
nivel de la espira basal y media con ausencia y degeneracin
Espira basal 6 meses; X: Discretos agrupamientos de las CCEs; c) Espira basal
de las CCEs. Las clulas de Deiters perdieron su morfologa 18 meses, con ausencia total de clulas ciliadas; d) Espira basal 24 meses; EP:
como clulas de soporte, siendo ms difcil reconocerlas. Las Monocapa de epitelio plano que sustituye al Organo de Corti.

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E. CASTILLO ET AL.

DISCUSIN frecuencias, reflejando cierta inmadurez funcional del recep-


tor auditivo perifrico. A partir de 1 mes, dicha latencia dis-
Segn estos resultados el ratn C57/BL6J a la edad de minua gradualmente con la edad del animal, hasta alcan-
1 mes ya presenta un desarrollo completo del receptor y la zar sus mnimos valores en los animales ms viejos
porcin distal intracoclear del VIII par craneal, como se estudiados (24 meses). Dicha evolucin slo adquira signi-
puede comprobar en los resultados morfolgicos (Fig. 4). ficacin estadstica entre los grupos extremos de edad.
Sin embargo, a juzgar por los altos valores que alcanzaron En el presente trabajo, para frecuencias medias-altas
las latencias desde la onda II en adelante a esta edad (Fig. (12 a 22 kHz), la mxima amplitud del PAC se obtuvo a los
2), podra existir un desarrollo incompleto de las estructuras 3 meses, y la mnima a los 24 meses. Desde 3 hasta 24 me-
que integran la va auditiva a partir del ganglio espiral (n- ses, en todas las frecuencias estudiadas, existi un descenso
cleos cocleares, complejo olivar superior y colculo inferior). gradual y progresivo de la amplitud del PAC con la edad.
Hasta los 6 y 9 meses el sistema auditivo del ratn La significacin estadstica de las diferencias entre los dis-
C57/BL6J no alcanzara plena funcionalidad, pues en dichas tintos grupos de edad, aument tambin de forma gradual
edades las latencias de todas las ondas de los PEATC fue- hacia las frecuencias altas, lo que implicara una prdida de
ron menores segn estos resultados. Desde 9 a 12 meses las la capacidad auditiva de las frecuencias altas al avanzar la
latencias experimentaron aumentos que marcaran el co- edad. Dicha significacin fue evidente desde los 3 y 6 meses
mienzo de los cambios degenerativos de la va auditiva de edad y mxima entre 9-12 meses y las edades preceden-
afectando a la transmisin neural. A partir de 12 meses, se tes (excepto 1 mes), lo que marcara el comienzo del dete-
observ que la latencia no presentaba grandes variaciones, rioro auditivo para frecuencias altas a los 3 meses, con un
aunque sufra un incremento progresivo con la edad. empeoramiento ms brusco al llegar a los 9 y 12 meses de
La gran amplitud de los PEATC obtenida en los rato- edad. A partir de los 12 meses, las diferencias volvan a ser
nes de 1 mes podra indicar que la porcin perifrica del menores, lo que indicara que el deterioro de la audicin de
nervio auditivo, incluyendo el ganglio espiral y el rgano frecuencias altas a los 12 meses se hace ms lento. El grupo
de Corti, poseen una estructura completamente desarrolla- de 1 mes present una amplitud del PAC inferior a la de 3,
da. En el resto de edades, la amplitud sufri una disminu- 6 y 9 meses, pero superior al resto de edades en todas las
cin progresiva dependiente de la edad, en todas las ondas frecuencias, que denotara una inmadurez funcional en lo
de los PEATC. Las diferencias ms significativas por edades relativo a la selectividad frecuencial, ya que en comparacin
se encontraron en la onda I (receptor y porcin distal del con los grupos con mayores amplitudes (3, 6 y 9 meses), los
nervio auditivo), lo cual indicara que los cambios degene- animales de 1 mes oiran peor las frecuencias ms altas.
rativos ms acusados y precoces en relacin con la presbia- En resumen, el ratn C57/BL6J presentara al nacer
cusia, ocurriran a nivel perifrico. Su comienzo, aunque una audicin perifrica inmadura en todo su espectro fre-
muy lento, podra fijarse a los 3 meses de edad, pero su cuencial. Desde el nacimiento, sufrira un proceso de madu-
progresin fue ms rpida hacia los 12 meses de edad. El racin rpido y progresivo, hasta alcanzar la mxima audi-
ratn C57/BL6J hacia los 9 meses de vida, desarrolla un pa- cin para frecuencias altas a los 3 meses, junto con la
trn de reclutamiento muy marcado, como atestiguan estos mxima selectividad frecuencial. Posteriormente se iniciara
datos electrofisiolgicos. El reclutamiento consiste en au- un proceso degenerativo, gradual hasta 9 meses y ms mar-
mentos de la amplitud de los potenciales evocados mayores cado entre 9 y 12 meses, para alcanzar una meseta entre 12
de lo esperado, ante aumentos determinados de la amplitud y 24 meses, donde finalizara la progresin del proceso de-
del estmulo, lo cual es tpico de las lesiones cocleares por generativo.
degeneracin de las clulas sensoriales12. El proceso de degeneracin del rgano de Corti del ra-
La latencia del PAC era menor en los grupos de 21 y tn C57/BL6J es muy similar al observado en el hombre. Se
24 meses, indicando que la velocidad y la frecuencia de des- tratara de un modelo adecuado de presbiacusia de tipo
carga de la 1 neurona del nervio auditivo en los animales Neurosensorial, de inicio precoz y progresiva; muy similar
ms viejos, permaneca conservada (Fig. 3). Los valores de al tipo ms frecuente de presbiacusia humana13,14.
latencia mayores del PAC correspondieron al grupo ms jo- En conclusin, el ratn C57/BL6J presentara al mes de
ven, es decir de 1 mes, que indicara una inmadurez funcio- vida un receptor auditivo perifrico maduro y de caracters-
nal del receptor auditivo en lo que respecta a la velocidad y ticas adultas, pero con signos de inmadurez de la va auditi-
a la frecuencia de descarga de la 1 neurona. A los 3, 6 y 9 va. Los grupos de 3, 6 y 9 meses tendran la mejor audicin.
meses de edad, observbamos una variacin de la latencia Los cambios relativos a presbiacusia seran muy precoces
inversamente proporcional a la frecuencia, con latencias me- pero discretos, hacindose mucho ms evidentes entre 9 y
nores para frecuencias superiores a 12 kHz que indica- 12 meses, para estabilizarse finalmente entre 12 y 24 meses.
ran la existencia de una maduracin funcional a partir de En la presbiacusia del ratn C57/BL6J existira reclutamien-
los 3 meses de vida, traducida en una mejor audicin de las to, siendo ste ms marcado a partir de los 12 meses de vi-
frecuencias medias y altas. A la edad de 12, 15 y 18 meses la da, confirmando el componente coclear de esta entidad.
velocidad de respuesta empeor ligeramente. Los primeros cambios morfolgicos comenzaran a los
En resumen y a grandes rasgos, se deduce que la laten- 3 meses por la espira basal. A los 12 meses existira una
cia del PAC, estaba aumentada al nacimiento para todas las atrofia severa de la espira basal y media, con colapso del t-

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MODELO EXPERIMENTAL DE PRESBIACUSIA

nel de Corti. A los 1821 meses el receptor quedara reem- Trimetazidine prevents cochlear lesions induced by intraperitoneal
plazado por un epitelio cbico. A los 24 meses un epitelio and perilymphatic administration of kainic acid. Brain Research
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en monocapa de clulas planas, sustituira al receptor. Sin
7. Bartolom MV, Vago P, Gil-Loyzaga P, Humbert G, Joubert-Caron R,
embargo, persistiran algunas clulas y neuronas desestruc- Pujol R, Lenoir M. Sequential changes in anti-GAL-1 staining of the
turadas funcionantes. rat organ of Corti following amikacin exposure. Brain Research
Los primeros efectos de la presbiacusia son muy preco- 1999;822:43-51.
ces; por ello el tratamiento de la presbiacusia debe ser pre- 8. Gil-Loyzaga P (1999). Regeneracin de los receptores del odo inter-
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