CAPTULO I

AGUA, SOLUCIONES, pH, pK y AMORTIGUADORES

Como sabemos, el agua es el componente ms abundante de la materia viva debido a una

serie de propiedades fsicas y qumicas muy propias de ella, que le han permitido ser
elegida como el solvente de todos los organismos vivos.
De estas propiedades, aquellas que permiten explicar el rol biolgico de la misma son el
PUNTO DE FUSIN, el PUNTO DE EBULLICIN, CALOR DE VAPORIZACIN,
CAPACIDAD CALRICA y CALOR DE FUSIN, los que son ms altos que aquellos
correspondientes a otras sustancias relacionadas.

Punto de fusin Punto de Calor de

(C) ebullicin (C) vaporizacin (J/g)
AGUA 0 100 2260
METANOL -98 65 1100
ETANOL -117 78 854
ACETONA -95 56 523
BENCENO 6 80 394
CLOROFORM -63 61 247
O

Este comportamiento es el resultado de la fuerza de atraccin que ejercen entre s sus

molculas; esto se debe a que el agua est altamente polarizada debido a que los ncleos de
los tomos de oxgeno atraen fuertemente a los electrones de los tomos de hidrgeno,
debido a si diferente electronegatividad (O=3,5, H=2,1), determinando dos campos
elctricos, uno negativo constituido por los electrones atrados y otro positivo formado por
los protones de los tomos de hidrgeno. Esto determina que las molculas del agua en
solucin, tiendan a estar rodeadas por otras 4 molculas de agua debido a la atraccin
elctrica:

La atraccin de los tomos de oxgeno de una molcula con los tomos de hidrgeno de
otra molcula de agua se conoce con el nombre de ENLACES DE HIDRGENO o
PUENTES DE HIDRGENO. Este tipo de enlace diferente al electrovalente y al
covalente, tiene especial inters en Bioqumica ya que permite explicar la estructura
SECUNDARIA de las protenas y cidos nucleicos como veremos mas adelante. Estos
enlaces pueden tambin establecerse entre tomos de nitrgeno e hidrgeno.
El enlace de hidrgeno tiene una energa de unin relativamente baja (alrededor de 4,5
Kcal/mol) comparada con la energa promedio de los enlaces covalentes del tipo C---C
(aproximadamente 80 Kcal/mol), pero por su orientacin, la fuerza de atraccin queda
reforzada constituyendo estructuras relativamente estables.

H H
O 0,09 nm
0,18 nm

H 104,5
H
O H O H O H
H
H
H O

SOLUCIONES:

Las soluciones vienen a ser dispersiones homogneas de un tipo de molculas en el seno de

otro tipo; para que esto ocurra es fundamental el tamao y la polaridad de las mismas; es
as que el tamao de las molculas a dispersarse debe ser menor a 1m (MILIMICRON o
MILIMICRA o NANMETRO ms correctamente), para constituir soluciones verdaderas;
aunque tambin molculas mas grandes como los cidos nucleicos y protenas (1 a 100
nm), pueden disolverse homogneamente; a este tipo de dispersin se le llama coloide. En
relacin a la polaridad, se dice que una molcula con carga elctrica solo podr distribuirse
en el seno de otra que tambin tenga carga; del mismo modo si es apolar, solo se distribuir
en el seno de otra apolar.

De las dos sustancias, la que se encuentra en menor cantidad se le conoce con el nombre de
SOLUTO y la de mayor cantidad se llamar SOLVENTE. Pueden conformarse soluciones
constituidas por muchos tipos de molculas, el solvente siempre ser la sustancia mas
abundante y los otros sern considerados como solutos.

Para los organismos vivos el solvente es el agua, constituyendo todos los lquidos
biolgicos como orina, saliva, lgrimas, sangre, lquido amnitico, etc en el caso de
animales y sabia bruta, sabia elaborada, etc en el caso de las plantas. A una solucin donde
el solvente es el agua se le conoce con el nombre de SOLUCIN ACUOSA.

En Bioqumica es importante conocer la cantidad de los diferentes solutos en los lquidos

biolgicos y para ello existen muchas formas de representar la concentracin de los
mismos; as tenemos 4 conceptos que deben ser bien conocidos por el estudiante de
Enfermera: PORCENTAJE EN PESO, PORCENTAJE EN VOLUMEN, MOLARIDAD Y
NORMALIDAD.
PORCENTAJE EN PESO (% P/P): Viene a ser la cantidad en gramos de soluto que hay
en 100 gramos de solucin, ejm.: una solucin acuosa al 5% P/P de cido clorhdrico,
contiene 5 gramos de cido clorhdrico puro al cual se le aade agua destilada hasta
alcanzar exactamente el peso de 100 gramos.
Esta forma de expresin se la utiliza para la elaboracin de cidos fuertes industriales

PORCENTAJE EN VOLUMEN (% P/V): Es la cantidad en gramos de soluto que hay en

100 ml de solucin; ejm: una solucin al 0,9% P/V de cloruro de sodio viene a ser 0,9
gramos (o 900 mg) de ClNa puro, al cual se le adiciona agua destilada hasta completar
exactamente el volumen de 100 ml.
Esta forma de expresar la concentracin se emplea actualmente en el laboratorio clnico
para los distintos metabolitos en los lquidos biolgicos.

MOLARIDAD (M): Representa la cantidad de MOLES de soluto que hay en un litro de

solucin. Un MOL viene a ser el peso molecular de una sustancia, en gramos. Ejm.: un mol
de cido oxlico viene a ser el peso molecular del mismo: 126.08, en gramos es decir,
126.08 gramos; medio mol o 0,5 moles de cido oxlico sern 63.04 gramos del mismo.
Asimismo, 0,1 moles del cido en mencin, sern 12.608 g del mismo.
Para completar el concepto diremos que, una solucin de cido oxlico 0,1 M (se lee 0,1
molar) vienen a ser, 12.608 g del cido al cual se le completa con agua destilada hasta
alcanzar un volumen final de exactamente un litro.
Esta forma de expresin es la ms importante en nuestro curso y como se explicar, lo ser
aun ms con el transcurso de los aos.

NORMALIDAD (N): Es otra forma de expresar la concentracin de los solutos, representa

la cantidad de EQUIVALENTES GRAMO de soluto que hay en un litro de solucin. Un
EQUIVALENTE GRAMO viene a ser el peso molecular de una sustancia dividido entre su
valencia (*), en gramos. Ejm. Un equivalente gramo de cido oxlico (PM: 126.08 y
valencia 2) ser 126.08 / 2 = 63.04 gramos del cido.
Completemos el concepto diciendo que una solucin de cido oxlico 0,1N (se lee 0,1
normal) vienen a ser 6.304 g del cido en mencin al cual se le completa con agua destilada
hasta alcanzar un volumen final de exactamente un litro.

Las distintas formas de expresar concentracin pueden interconvertirse entre s, muchas

veces hay que hacerlo en Bioqumica, por esta razn es que el estudiante debe
familiarizarse con estos procedimientos:

Ejercicio 1: Qu normalidad tiene una solucin de cido oxlico al 5% P/V?

Esto significa que se tienen 5 gramos del cido disueltos en 100 ml de
solucin.

* La valencia en una sustancia es muy fcil de determinar; si se trata de un cido lo determina el

nmero de hidrgenos el nmero de COOH si los tiene en su estructura. Para el caso de los
hidrxidos lo determina el nmero de OHs.

Primero: la normalidad se expresa en un volumen de un litro ( 1000 ml), por lo tanto

veamos cuantos gramos del cido habrn en un litro de esta solucin al 5% P/V:
 5 g -------- 100 ml
x -------- 1000ml x = 50 g

Segundo: Calculemos cuantos equivalentes gramo hay en 50 g de cido oxlico:

1 Eq g --------- 63.04g
x --------- 50.0g x = 0,793 Eq g

Tercero: 0,793 Eq g disueltos en un litro de solucin corresponden a una solucin 0,793

N.

EQUILIBRIO DE UNA REACCION QUMICA o EQUILIBRIO QUMICO

Cuando un reactante se transforma en su producto correspondiente durante una reaccin

qumica, Ejm.

AB

no significa que todo el reactante A se transforma en el producto B, sino que ocurre mas o
menos lo siguiente:

Al inicio solo hay A y nada de B, con el transcurrir del tiempo disminuye A y aumenta B
cada vez ms; llega un momento en que B se hace mayor que A y en ese instante, la
reaccin ocurre en sentido inverso. Se repite el fenmeno pero en el nuevo sentido y as
sucesivamente ocurren las transformaciones, pero cada vez en menor grado hasta que llega
un momento en que la velocidad de formacin de B (o velocidad de desaparicin de A) se
hace igual a la velocidad de formacin de A (o velocidad de desaparicin de B); en ese
instante se dice que la reaccin ha alcanzado el equilibrio, la reaccin ha concluido:

Concentracin

B
Tiempo
LEY DE ACCIN DE LAS MASAS
Ya en el ao de 1867 se estableci que exista una relacin entre la velocidad de una
reaccin qumica y las concentraciones moleculares de las sustancias reaccionantes, que es
conocida como la ley de accin de las masas y que se enuncia as: La velocidad de una
reaccin qumica en un tiempo dado, es proporcional a la concentracin molecular de las
sustancias reaccionantes presentes en ese tiempo Ejm:

A + B C + D

En donde para la reaccin de ida, los reaccionantes son A y B, y los productos que se
originan son C y D. La velocidad para esta reaccin ser proporcional a las concentraciones
moleculares de A y B.

V [A] [B]

Con la introduccin de una contante de proporcionalidad (K1), que mida la afinidad

qumica propia de la reaccin, la ecuacin anterior puede escribirse:
V1 = K1 [A] [B]

Para la reaccin de vuelta anlogamente se tendr:

V2 = K2 [C] [D]

Donde K2 es la constante de proporcionalidad que mide la afinidad qumica de la reaccin

de derecha a izquierda.

Cuando la reaccin alcanza el equilibrio, las concentraciones de las cuatro sustancias ya no

se modifican, lo que quiere decir que la velocidad de la reaccin de ida; se hace igual a la
velocidad de la reaccin de vuelta.V1 = V2
Por lo tanto
K1 [A] [B] = K2 [C] [D]

Lo que tambin puede ser escrito as:

K1 [C] [D]
K
K 2 [A] [B]

Donde K es otra constante, que expresa la relacin K1 / K2 y que se conoce como constante
de equilibrio, y mide la afinidad qumica de las sustancias reaccionantes, siendo especfica
y caracterstica de cada reaccin qumica. Cuando K es alta, las concentraciones de C y D
son altas en el equilibrio en relacin a las concentraciones de A y B; indicando que la
afinidad entre A y B es grande y que la reaccin hacia la derecha predominar. Por otro
lado, un valor de K pequeo, expresa un predominio de la reaccin hacia la izquierda y una
afinidad grande entre C y D.
CIDOS Y BASES

Se acostumbra definir cido, como aquella sustancia que en solucin, aporta hidrogeniones
(H+) Al medio y base aquella sustancia que al disolverse da iones oxidrilos (OH-).

Bronsted, Lowry y otros, desarrollaron un concepto ms amplio para cido y base; y que
resulta ms adecuado que la definicin anterior. Ellos consideran como cidos a las
sustancias que ceden protones y bases a las sustancias que aceptan protones. Este concepto
de cido es idntico al anterior; en tanto que el de base es ms general y tiene otras
implicaciones.

Veamos algunos ejemplos:

HCl Cl- + H+
CH3 COOH CH3-COO- + H+
NH4+ NH3 + H+
CIDOS BASES

De acuerdo con esta teora, un cido se disocia en un protn y una base. Esta ltima puede
regenerar el cido al combinarse con un protn. Un cido y su base correspondiente se
denominan conjugados, as el NH3 es la base conjugada del cido NH4+.

Se comprende fcilmente que las bases clsicas, como el KOH, NaOH, etc. No pueden ser
consideradas como tales segn la teora de Bronsted, pero si consideramos que al disolverse
rinden OH- estos se comportarn como verdaderas bases, ya que aceptarn protones
(recordemos que los oxidrilos son los iones que tienen la mayor afinidad por los
hidrogeniones). Hay quienes prefieren denominar a estas sustancias como lcalis en lugar
de bases.

Disociacin de los cidos

Con frecuencia se usan las denominaciones de cidos dbiles y cidos fuertes, veamos cual
es el significado de esta nomenclatura.
Representemos la ecuacin general de disociacin de un cido.

HA H+ + A-

Un cido fuerte, como el cido clorhdrico, en solucin se encuentra casi completamente

disociado en los iones Cl- y H+. Esto se explica por el grado de afinidad de su base
conjugada y de las molculas del solvente para con los protones del cido; en el caso de los
cidos fuertes, sus bases conjugadas (BASES DEBILES) tienen escasa afinidad por los
protones, prefiriendo estos combinarse con el solvente y determinando un alto grado de
disociacin del cido.
En el caso de los cidos dbiles, sus bases conjugadas (BASES FUERTES) tienen una gran
afinidad por los protones, prefiriendo estos seguir combinados a sus bases que al solvente y
determinando un escaso grado de disociacin del cido.

Se entiende que la naturaleza del solvente, influye poderosamente en el grado de

disociacin del cido. Puede suceder que un cido considerado como dbil en soluciones
acuosas, no lo sea en soluciones con un solvente diferente al agua. Es el caso del cido
actico, que es considerado cido fuerte cuando se encuentra disuelto en amonaco lquido,
lo que habla de una mayor afinidad de los H + por el amonaco que por su base conjugada
(in acetato).

CH3 COOH + NH3 CH3-COO + NH4+

Representemos a seguir, la disociacin del cido actico en soluciones acuosas:

CH3 COOH CH3-COO- + H+

La constante de equilibrio, que en estos casos se denomina constante de disociacin o

acidez, estar dada por:
- +
[CH COO ] [H ]
3
_________________________
K=
[CH3COOH]
Como quiera que en este caso el cido est muy pobremente disociado, en el equilibrio
predominar la reaccin hacia la izquierda y el denominador tendr un valor numrico muy
superior al del numerador y por 1o tanto el valor de K ser muy pequeo. Esto tiene su
demostracin experimental, ya que la determinacin de la constante de ionizacin para esta
reaccin da un valor de:

1.86 X 10-5

Teniendo en cuenta que K para la mayora de cidos dbiles es sumamente pequeo, resulta
ms conveniente expresarlos por sus logaritmos negativos, los cuales s e denominan pK. El
concepto de pK tiene especial inters en el caso de las soluciones amortiguadoras, como
veremos ms adelante.

K, del cido actico = 1.86 x 10-5

pK = -log K
pK = - (log 1.86 x 10-5)
pK = - (log 1.86 + log 10-5)
pK = - [(0.2695) + (-5)]
pK = - (-4,73)
pK = 4,73

pH (Potencial de Hidrogeniones)
La estructura de los componentes qumicos de la clula, y la realizacin de las reacciones
en los seres vivos dependen extremadamente de la concentracin de hidrogeniones (H +) del
medio. Por stas y varias otras razones, resulta muy importante revisar el concepto de pH.

La concentracin de H+ da el grado de acidez de una solucin, de all que la manera ms

racional de expresar la acidez de una solucin sea en funcin de la concentracin de
hidrogeniones expresada en normalidad; es decir en equivalente gramo de
hidrogeniones/litro. Por ejemplo, una solucin con 1 g de hidrogeniones por litro tendr una
acidez 1N. Sin embargo, en los lquidos biolgicos se dan concentraciones de
hidrogeniones sumamente pequeas, correspondiendo a cifras de manejo fastidioso,
expuestas a error y muy difciles de memorizar; as la concentracin de H + en el plasma
humano es de 0.0000000398 N. Si omitimos un solo cero al escribir esta cifra, estamos
alterando 10 veces la concentracin.

Teniendo en cuenta estas dificultades, Srensen ide una forma ms prctica de expresar la
concentracin de hidrogeniones, utilizando el exponente con signo cambiado, as, una
solucin con una concentracin de hidrogeniones de 0.000001 N, que expresada en forma
exponencial es 10-6, le corresponder un valor de 6. Esto mismo, expresado en trminos
matemticos adecuados es el logaritmo negativo de la concentracin hidrogeniones

A esta expresin Srensen la denomin, como potencial de hidrogeniones y se la conoce

ms comnmente por su abreviatura: pH.

Para el caso del ejemplo anterior el pH sera igual

pH = -log 10-6
pH = - (-6)
pH = 6

Acidez, Neutralidad y Alcalinidad

Arbitrariamente se ha establecido una escala de concentraciones de hidrogeniones que va

desde 1N hasta 10-14N, y cuyos logaritmos negativos (pH) se extendern respectivamente
desde cero hasta 14. Esto no quiere decir que no existan valores de pH que escapen a esta
escala (esto sucede en soluciones que no son acuosas), slo que ellos no tienen inters
prctico.

Lo importante recordar que cambios en una unidad de pH equivalen a modificaciones en la

concentracin normal de hidrogeniones de 10 veces. Esto quiere decir, que grandes
modificaciones en la concentracin de hidrogeniones representan sorprendentemente
pequeas modificaciones en el pH.

Con frecuencia se habla de soluciones cidas cuando su pH es menor que 7 y de soluciones

alcalinas cuando su pH es superior a 7. Veamos el fundamento de esto:
En el agua qumicamente pura, slo una pequea cantidad de sus molculas se encuentran
disociadas.
 H2O H+ + OH-

A temperatura normal, la concentracin de ambos iones del agua es de 10 -7N, lo que

determina un pH de 7.0. Como a este pH la concentracin de hidrogeniones y de oxidrilos
es igual, se dice que este pH es neutro.
Podemos tambin decir, que el producto de la concentracin de iones hidrgeno y
oxihidrilo, para el caso del agua, es constante y es igual a 10 -14. Este valor, representado
comnmente como Kw, se le denomina constante de disociacin del agua.

[H+] [OH-] = 10-14 = Kw

Esto ltimo, no slo es vlido para el agua sino tambin para cualquier solucin acuosa, por
lo que se puede concluir que en una solucin acuosa cualquiera, el producto de la
concentracin normal de hidrogeniones y de hidroxilos es una cantidad constante y asume
un valor aproximado de 10-14. Por lo tanto, si conocemos la concentracin de hidrogeniones
en una solucin, podemos estimar la de hidroxilos, y de manera anloga, al conocer la de
OH- podemos estimar la de H+

Por ejemplo, a una solucin acuosa que tiene una concentracin de hidrogeniones de 10 -11,
le corresponder una de hidroxilos de:

Kw 10-14
- _______ ________
OH = = = 102
+ -11
[H ] 10

Aquellas soluciones con un predominio de OH- tendrn pH mayores que 7 y sern

alcalinas; en tanto que aquellas con predominio de H+ tendrn pH menores que 7 y sern
cidas. A continuacin se dan los pHs de algunos lquidos biolgicos:
Plasma sanguneo : 7,4
Citosol de hepatocito : 6,9
Lizosoma : 5,5 6,5
Jugo gstrico : 1,5 3,0
Leche materna : 7,4
Saliva : 6,4 7,0
Orina : 5,0 8,0
Jugo pancretico : 7,8 8,0

Amortiguadores o Buffers

Una solucin amortiguadora, es aquella que resiste a los cambios de pH, luego de aadir
cidos o lcalis al medio.
La mayor parte de soluciones amortiguadoras, consiste en una mixtura de cidos dbiles
con su base conjugada correspondiente; por ejemplo cido lctico y lactato. Revisemos los
mecanismos por los cuales las soluciones buffer ejercen control sobre los cambios bruscos
de pH.
Al aadir lcali a un tampn, que puede ser cido actico - acetato de sodio 1, ocurrir la
siguiente reaccin:

CH3COOH + OH- CH3COO- + H2O

Los iones OH- reaccionan con los protones que da el cido al disociarse y se forma agua.

Cuando se aade cido al buffer acetato (cido actico - acetato) la reaccin que ocurre es
la siguiente:

CH3 COO- + H+ CH3 COOH

Los protones aadidos se combinan con los iones acetato formando el cido dbil
correspondiente. En ambas condiciones, el cambio de pH es mucho menor que el que
ocurrira si el buffer no estuviera presente.

Estimacin del pH de soluciones buffer

Cuando la disociacin de un cido, determina la liberacin de un protn y un anin por

molcula de cido disociada, la estimativa de su concentracin de hidrogeniones estar
dada por:

[H+] [A]
_____________
K=
[AH] Como [A-] = [H+]

Sustituyendo:

[H+][H+]
K= _____________
[AH]

Luego,[H+]2 = K [AH]

[H+] = K [AH]

Donde AH para el caso de los cidos dbiles ser prcticamente igual a la concentracin
inicial del cido, ya que slo una pequea cantidad de sus molculas estn disociadas y por
lo tanto la expresin anterior puede quedar transformada en:

K AH
+
[H ] =

1 Una base no se presenta en el mercado como tal, se encuentra como sal, de all que no hablamos de acetato
sino de acetato de sodio, entonces base o sal resulta ser lo mismo ya que la sal al ponerla en la solucin
inmediatamente libera el sodio y queda como base.
Cuando en el medio se forma o se aade cierta cantidad de base conjugada,
independientemente de aquella que proviene de la disociacin del cido, la concentracin
de hidrogeniones ser igual a:

K [AH] [AH]
+ __________ + ________
[H ] = [H ] = K Aplicando logaritmos:
[A-] [A-]

log [H+] = log K + log [AH] / [A-] Multiplicando ambos miembros por 1:

- log [H+] = - log K - log [AH] / [A-] Reemplazando:

pH = pK + log [A-] / [AH]

Teniendo en cuenta que la concentracin de A- corresponde a la concentracin de la base o

SAL y que [AH] se refiere a la concentracin del cido, la ecuacin anterior se puede
generalizar:

[SAL]
pH = pK + log _____________
[ACIDO]

Esta ecuacin se conoce como de HENDERSON- HASSELBALCH y es de gran utilidad

para el clculo del pH de las soluciones amortiguadoras. Por ejemplo, un BUFFER que
tiene una concentracin de cido actico de 0,05N y 0,02N de acetato de sodio, su pH ser:

0,02
________
pH = 4,73 + log
0,05

pH = 4,73 + log 0,4

pH = 4,73 + (-0,398)

pH = 4,33
 CAPTULO II
PR O T E N AS

Las protenas son las molculas ms importantes de la vida pues constituyen ms del 50%
del peso seco de las clulas. Cumplen con casi todas las funciones posibles de las molculas
orgnicas, de all que han sido elegidas para ser la expresin de la informacin gentica.

FUNCIONES BIOLGICAS DE LAS PROTENAS

1. Funcin enzimtica
Las enzimas son los catalizadores biolgicos ya que aumentan enormemente la
velocidad de las reacciones qumicas que ocurren en los organismos vivos, actuando bajo
condiciones moderadas de pH, temperatura y presin, compatibles con la vida; todas las
enzimas son protenas.

2. Funcin energtica
A pesar de que las protenas son consideradas como alimentos plsticos, se sabe que el
organismo humano obtiene cerca del 15% de la energa que consume diariamente, de la
degradacin de las protenas, porcentaje que se incrementa en situaciones de inanicin.

3. Funcin estructural
Las protenas forman parte de muchos tejidos, por ejemplo queratina en pelo y uas,
colgeno y elastina en tejido conectivo, actina y miosina en tejido muscular, etc.
Asimismo, todos los organoides celulares as como las membranas celulares, tienen
protena en su estructura.

4. Funcin hormonal
Algunas hormonas son de naturaleza proteica, por ejemplo la insulina, el glucagon, la
hormona del crecimiento, la hormona adrenocorticotrpica (ACTH), etc.

5. Funcin de transporte
Muchos compuestos por su carcter hidrofbico no pueden circular libremente por los
lquidos biolgicos como la sangre, el citosol, el lquido intersticial, etc., por lo que
requieren de algn vehculo de transporte; este generalmente es una protena. As tenemos:
el cobre es trasportado por la ceruloplasmina, el fierro por la transferrina, la bilirrubina y
los cidos grasos son transportados por la albmina, el oxgeno por la mioglobina en el
msculo y por la hemoglobina en la sangre.

6. Funcin de reserva
Existen muchas protenas que actan como reserva energtica para ser usada con
posterioridad, ejm. la casena en la leche, la ovoalbmina en los huevos de especies
ovparas, la gliadina en la semilla de trigo, la cena en la semilla de maz, etc.

7. Funcin Amortiguadora del pH

 Adems de los buffers inorgnicos que han sido comentados en el captulo I, las
protenas tambin pueden evitar cambios bruscos en el pH, lo cual se debe a la presencia de
aminocidos cidos y bsicos en su estructura.

8. Funcin inmunolgica
Actualmente se sabe que los anticuerpos que sintetizan los organismos superiores, son
protenas, especficamente inmunoglobulinas. Asimismo, los antgenos que causan esta
sntesis, tienen necesariamente que tener un componente proteico en su estructura.

Podramos citar otro tipo de funciones ms especficas como la participacin de la actina y

la miosina en la contraccin muscular, la fibrina en la coagulacin sangunea, los canales de
iones (que son protenas presentes en las membranas celulares) que permiten el paso de
ciertos iones a travs de ellos, etc.

COMPOSICIN ELEMENTAL DE LAS PROTENAS

Las protenas presentes en la naturaleza se agrupan en dos grandes clases, protenas

SIMPLES y protenas CONJUGADAS; las primeras estn conformadas solo por
aminocidos mientras que las segundas adems de aminocidos contienen otro tipo de
molculas de naturaleza orgnica y/o inorgnica denominada GRUPO PROSTTICO.

Las protenas simples estn constituidas qumicamente por: carbono 50%, oxgeno 23%,
nitrgeno 16%, hidrgeno 7% y azufre 3%. La cantidad de nitrgeno es bastante constante
y eso nos permite estimar el contenido proteico de una muestra biolgica si se conoce el
nitrgeno proteico. Para esto es suficiente aplicar en la prctica la siguiente frmula:

P = Np (100/16)

Donde P es el contenido proteico de la muestra y Np es el nitrgeno proteico de la muestra.

Esta frmula tiene su aplicacin cuando se hace la determinacin proteica de algn
alimento teniendo en cuenta que el mtodo mas utilizado en nuestro medio para este fin, es
el de Kjeldahl el que justamente da sus resultados como nitrgeno proteico.

COMPOSICIN DE LAS PROTENAS

Las protenas estn formadas por una o mas cadenas de aminocidos; los aminocidos que
conforman estas cadenas son solo de 20 tipos y estn unidos entre si por ENLACES
PEPTDICOS. Cada protena a su vez est constituida por miles de aminocidos, el nmero
mnimo de estos para considerar a la cadena como protena, es de 50; como quiera que el
peso molecular promedio aproximado de los aminocidos es de 100, se puede concluir que
la protena ms pequea pesa 500.

El peso molecular de la mayora de protenas oscila entre 10000 y 50000, aunque existen
muchas protenas que sobrepasan de lejos esta cantidad como la protena del virus del
mosaico de tabaco cuyo peso es de aproximadamente 40 millones, el nmero de
CADENAS PEPTDICAS que tiene es cercano a 200.
AMINOCIDOS

Los aminocidos, sillares de la estructura de las protenas, tienen la estructura comn

siguiente:
Un grupo alfa amino: NH2-
Un grupo alfa carboxilo: - COOH
Un carbono alfa: CH
y un grupo R que es lo que diferencia a los 20 tipos de aminocidos

NH2 CH COOH
R

A pH neutral que es el que predomina en las distintas estructuras de los organismos vivos,
los aminocidos se encuentran cargados elctricamente, constituyendo un ZWITTERION:

NH3+ CH COO-
R

En la siguiente tabla se muestra en orden alfabtico el nombre de los 20 aminocidos, junto

con su abreviatura de tres letras, la de una letra y el peso molecular:

Abreviatura de Abreviatura de Peso

AMINOCIDO
tres letras una letra molecular
Acido asprtico ASP D 133
Acido glutmico GLU E 147
Alanina ALA A 89
Arginina ARG R 174
Asparragina ASN N 132
Cistena CIS C 121
Fenilalanina FEN F 165
Glutamina GLN Q 146
Glicina GLI G 75
Histidina HIS H 155
Isoleucina ILE I 131
Leucina LEU L 131
Lisina LIS K 146
Metionina MET M 149
Prolina PRO P 115
Serina SER S 105
Treonina TRE T 119
Triptofano TRI W 204
Tirosina TIR Y 181
Valina VAL V 117
CLASIFICACIN

Existen muchos criterios para clasificar a los aminocidos; por ejemplo, los aromticos, los
ramificados, los que presentan azufre, los hidroxilados, etc. Pero el que ms conviene por
fines didcticos es aquel que considera la polaridad o hidrofobicidad de sus grupos R. En
ese sentido se consideran cuatro grupos:

Grupo I.- Aminocidos con grupo R hidrofbico

Alanina ALA Valina VAL Leucina LEU

NH3 NH3 NH3
CH COO- CH COO- CH COO-

CH3 CH CH2

H3C CH3 CH

H3C CH3

Isoleucina ILE Prolina PRO Metionina MET

NH3 NH CH COO- NH3
CH COO- CH COO-
H2C CH2
CH CH3 CH2
C
H2
CH2 CH2

CH3 S
CH2

Fenilalanina FEN Triptofano TRI

Grupo Grupo
Benceno Indol
GRUPO II: Aminocidos con grupo R hidrofbico a pH neutral (si se modifica el pH del
medio donde se encuentran estos aminocidos, se pueden cargar positiva o negativamente;
con excepcin de la glicina que es considerado en este grupo por su solubilidad).

Glicina GLI Serina SER Treonina TRE

NH3 NH3 NH3
CH COO- CH COO- CH COO-

H CH2 OH CH OH

CH3

Tirosina TIR Cistena CIS

Asparragina ASN Glutamina GLN

NH3 NH3
CH COO- CH COO-

CH2 CH2


CH2
CONH2

CONH2

GRUPO III: Aminocidos con grupo R cargado negativamente (aminocidos cidos).

 cido Asprtico o cido glutmico o
Aspartato ASP Glutamato GLU

GRUPO IV: Aminocidos con grupo R cargado positivamente (aminocidos bsicos)

Lisina LIS Arginina ARG Histidina HIS

Aminocidos adicionales que pueden formar parte de las protenas

Son el resultado de algunas modificaciones de los 20 anteriores despus de que la protena

ha sido sintetizada:

4 OH Prolina: en la protena colgeno

5 OH lisina: en colgeno
Cistina: unin de 2 cistenas ( constituyen el puente disulfuro)
Desmosina: unin de los grupos R de 4 lisinas presente en la protena elastina, lo que le
da flexibilidad.
Isodesmosina: igual que la anterior
N metil lisina: presente en la protena miosina
Aminocidos que no forman parte de las protenas pero participan en el metabolismo
Citrulina: en el ciclo de la urea
Ornitina: en el ciclo de la urea
Gaba (cido gamma amino butrico): neurotransmisor
Homocistena: residuo que queda luego de la accin metiladora de la forma activada de
metionina (S adenosil metionina o SAM)
beta Alanina: conforma los pptidos anserina y carnosina

Compuestos derivados de los aminocidos

a. Adrenalina: hormona

b. Noradrenalina: hormona

c. Histamina: vaso depresor

d. Taurina: constituye las sales biliares

PROPIEDADES FSICAS DE LOS AMINOCIDOS

1. Actividad ptica: Es la capacidad que tienen los compuestos de rotar el plano de luz
polarizada y se debe a que presentan como mnimo algn carbono asimtrico (carbono
asimtrico es aquel carbono que tiene sus cuatro sustituyentes diferentes).

Todos los aminocidos tienen por lo menos un carbn asimtrico, con excepcin de la
glicina, el cual no tiene actividad ptica. Algunos rotan el plano de luz polarizada hacia
la derecha por eso son dextrgiros (+) y otros hacia la izquierda por eso son levgiros
(-), ejemplo: arginina es (+), triptofano es (-).

2. Los aminocidos por su estereoisomria pueden ser: L o D

Todos los aminocidos que forman parte de las protenas son de tipo L. Esto viene
del gliceroaldehido el cual presenta la siguiente semejanza:

CHO COOH

OH C H H2N C H

CH2 R

L-gliceraldehido L-aminocido

3. Absorcin de luz: todos los compuestos coloreados absorben luz visible, la cual tiene
longitudes de onda () comprendidas entre 400 700 nm. Los aminocidos son
incoloros por lo tanto no absorben luz visible, pero los aromticos, absorben luz de una
de 280 nm (esto corresponde a luz ultravioleta).

PROPIEDADES QUMICAS DE LOS AMINOCIDOS

Los aminocidos tienen en comn sus grupos alfa amino y alfa carboxilo, pero difieren
entre s en su grupo R, por lo tanto una reaccin en cualquiera de los dos primeros
grupos, ser positiva para todos en la misma forma; una reaccin del grupo R ser
especifica para cada aminocido.

1. Reacciones del grupo amino

a. Reaccin de Sanger: Los aminocidos del extremo N- terminal de las protenas,

sufren ARILACIN cuando reaccionan con el compuesto 1 fluoro 2,4
dinitrobenceno; esta reaccin fue utilizada para identificar todos los aminocidos
que conforman a la insulina, primera protena en ser SECUENCIADA (esto le
permiti obtener el premio Nobel a Frederick Sanger en 1958) la reaccin se
muestra en la siguiente figura:
 + NH3 + CO2 + RCHO
O
O

H
OH
Cada 2,4-dinitrofenil del aminocido N-terminal, puede ser luego identificado
fcilmente.

+ NH2 de
b. Reaccin CHEdman:
COOH el fenilisotiocianato reacciona tambin con los aminocidos
O formando un derivado muy particular para cada tipo de aminocido (una
O feniltioidantona)
R de fcil identificacin.

c. Reaccin de la ninhidrina, de alta sensibilidad:

Cuando los aminocidos se calientan con un compuesto que se llama ninhidrina, ocurre una
reaccin compleja y se produce un color violeta. Este reactivo es til para determinar la
presencia de aminocidos en pequeas cantidades, en algunas muestras, o en hidrolizados
de protenas. El nico aminocido que no da coloracin violeta es la prolina, pues da una
OH
coloracin amarilla, al igual que su derivado la hidroxiprolina. La reaccin ocurre en dos
etapas:
OH

Ninhidrina Ninhidrina Reducida

H + 3H2O
OO
O OO

N
OH
O H
OH
O OH

+ + NH3

2. Reacciones del grupo Carboxilo

Reduccin del grupo carboxilo a un grupo alcohlico

R COOH R CH2OH

3. Reacciones del grupo R

Reaccin Aminocidos Color

Milln Tirosina Rojo
Ehrlich Triptofano Azul
Nitroprusiato Cistena Rojo
Pauli Histidina y tirosina Rojo

Aminoacidurias: (Aminocidos en la orina), son enfermedades genticas en donde falla

alguna enzima del metabolismo de los aminocidos, determinando que este se acumule en
la sangre y se elimine por la orina, ejemplo la fenilcetonuria, la enfermedad del jarabe de
arce.

PROPIEDADES ELCTRICAS DE LOS AMINOCIDOS

Los aminocidos se cargan de diferentes maneras dependiendo del pH del medio en el

que se encuentra.
Los aminocidos pueden tener 2 o 3 grupos ionizables (grupos que pueden cargarse).
Cada grupo ionizable tiene su propio pK.

pKs de los grupos ionizables de algunos aminocidos

Grupo alfa Grupo alfa Grupo R

 carboxilo amino
AMINOCIDO pK1 pK2 pK3
Glicina 2,3 9,6 -
Alanina 2,3 9,7 -
Aspartato 2,1 9,8 3,9
Glutamato 2,2 9,7 4,3
Cistena 1,7 10,8 8,3
Tirosina 2,2 9,1 10,1
Histidina 1,8 9,2 6,0
Lisina 1,2 9,0 10,5
Arginina 2,2 9,0 12,5

Obsrvese que solo hay 7 aminocidos que tienen pK3 (con grupo ionizable en su grupo R).

FORMAS ELCTRICAS EN LAS QUE PUEDE EXISTIR UN AMINOCIDO:

El nmero de formas elctricas posibles que puede tener un aminocido es igual al nmero
de grupos ionizables mas uno; ejemplo la glicina tiene 2 grupos ionizables, el grupo alfa
amino y el grupo alfa carboxilo, por lo tanto existirn 3 formas elctricas posibles. La
cistena por tener 3 grupos ionizables (como puede verse en la tabla anterior), tendr cuatro
formas elctricas posibles. Cada forma elctrica es designada por las letras del alfabeto: A,
B, C, etc., siendo la forma A la ms positiva y la ms negativa la ltima letra consecutiva.

Forma isoelctrica:
Es aquella que no tiene carga elctrica neta es decir, cuando su nmero de cargas elctricas
positivas es igual al nmero de cargas negativas.

Punto isoelctrico:
Es el pH en donde solo existe la forma isoelctrica. En cada punto de la escala del pH solo
puede existir o una forma elctrica o dos de ellas; tres o ms, nunca.

Veamos un ejemplo: La alanina tiene dos grupos ionizables es decir dos pKs; estos son el
grupo alfa carboxilo de pK 2,3 y el grupo alfa amino de pK 9,7. Quiere decir que existirn
en todo lo largo de la escala del pH solo tres formas elctricas posibles de la alanina que
denominaremos A, B y C:

H+ H+
NH3 NH 3
CHCOOH CHCOO- NH2 CHCOO-

CH3 CH3 CH3

A B C
A pH cero, donde el medio es fuertemente cido, los hidrogeniones (que estn en exceso),
se introducen en los grupos ionizables del aminocido, cargando al grupo alfa amino
positivamente y al grupo alfa carboxilo lo hace perder su carga negativa (vase forma A)

A medida que subimos el pH (agregando OH -), los oxidrilos van a retirar hidrogeniones del
aminocido, pero lo harn primero del grupo ionizable cuyo pK es ms bajo (pK 2,3 del
grupo carboxilo) y no del mayor (9,7); esto hace que ahora el grupo alfa carboxilo se
cargue negativamente pues ha perdido su hidrogenin, en tanto que el grupo amino sigue
con su carga positiva (ver forma B); esta es la forma isoelctrica.

Si aumentamos an ms el pH, es ahora el grupo alfa amino el que se desprotona,

perdiendo su carga positiva; el grupo alfa carboxilo ya no puede perder su protn porque no
lo tiene (forma C).

Si analizamos la carga neta que tiene cada una de estas formas, vemos que la forma A es
positiva (+), la forma B es neutra (+-) y la forma C es negativa (-). Pero, En qu momento
ocurren estos cambios?

Ubiquemos en la escala del pH los valores de pK de la alanina y observemos las formas que
existen en ellos:

0 2,3 7,0 9,7 14

6,0
A A>B A=B B>A B B>C B=C C>B C

A pH cero solo existe la forma A, a pH 6,= solo existe la forma B (la forma isoelctrica),
mientras que a pH 14 solo existe la forma C. Cmo calculo el valor de 6,0?; sumo 2,3+9,7
y lo divido entre 2.

A pH 2,3 A es igual a B es decir, la mitad de las molculas de la alanina que tenga, estarn
en la forma A y la otra mitad en la forma B. A pH 9,7 la mitad de las molculas de alanina
estarn en la forma B y la otra mitad en la forma C.

En el rango entre 0,1 y 2,2 habr dos formas elctricas, A y B; pero A ser mayor que B.
Entre 2,4 y 5,9 tambin estarn presentes solo las formas A y B, pero B ser mayor que A.
De la misma manera ocurre en el segundo pK con B y C.

FORMACIN DEL ENLACE PEPTDICO:

El enlace peptdico es el enlace covalente que une a los aminocidos entre si, formando
largas cadenas de cientos o miles de los mismos; esto ocurre durante la sntesis proteica en
el ribosoma. Cuando se forma el enlace, los grupos alfa amino y alfa carboxilo pierden su
carcter de grupos ionizables:
R-CH-COO- + NH3-CH-COO- R-CH-CO-NH-CH-COO- + H2O

R1 R2 R1 R2
PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LAS PROTENAS

Las protenas son molculas de alto peso molecular, la insulina que es la protena mas
pequea, pesa cerca de 5000 Daltons. Por esta razn, las protenas no atraviesan
membranas semipermeable (estas estructuras presentan poros de un dimetro tal, que no
permiten el paso de las protenas pero si el de cualquier molcula de bajo PM).

Las protenas por ser grandes, no atraviesan la membrana, realizando una presin osmtica
sobre la misma. La presin osmtica se debe a que el agua del lado derecho intenta disolver
a las protenas del lado izquierdo para mantener concentraciones de soluto iguales en
ambos lados, as se produce una migracin de agua pura hacia el compartimiento izquierdo,
con lo cual su nivel sube respecto al derecho. La fuerza necesaria para llevar el nivel del
agua del lado izquierdo, al nivel del agua del lado derecho se llama presin osmtica y
depende de la concentracin de protenas de la izquierda.

1. Dilisis
Es el comportamiento que tienen las protenas frente a una membrana semipermeable.
Son ejemplos de membranas semipermeables, la piel, las paredes de los vasos
sanguneos, la membrana celular y nuclear, el papel celofn, etc.
Presin Onctica: Es la capacidad que tienen las protenas de halar agua a travs de una
membrana semipermeable; esta es una funcin muy importante de las protenas de la
sangre, pues constantemente retiran agua de los espacios intercelulares. Una persona
desnutrida que no tiene la cantidad adecuada de protenas en su sangre, retirar menos
agua de lo normal, quedndose esta en los espacios intercelulares, provocando edema.

2. Cuando las protenas son sometidas a ultracentrifugacin (ms de 500000 veces la

fuerza de gravedad) precipitan de acuerdo a su peso molecular, las mas pesadas lo
hacen mas rpidamente y las menos pesadas mas lentamente. Esta precipitacin se mide
en unidades Svedberg y se representa con la letra S; ejemplo: 20S, 40S, etc.

3. Accin Buffer de las Protenas:

Buffer o tampn, amortiguadora, es la capacidad que tienen ciertos compuestos de
evitar cambios bruscos del pH; los aminocidos con carga positiva en su grupo R son
 los responsables de amortiguar a los oxidrilos evitando que aumente el pH, mientras
que los aminocidos de las protenas con carga negativa en su grupo R son los que
atrapan a los hidrogeniones evitando que baje el pH.

Son los aminocidos con carga en su grupo R los nicos responsables de la accin
amortiguadora, los dems no participan (ni el grupo alfa amino ni el grupo alfa
carboxilo pues por estar formando ENLACES PEPTDICOS pierden su capacidad de
carga):

---NH-CH-CO---NH-CH-CO---NH-CH-CO---

R1 R2 R3

De los 5 aminocidos implicados en la accin tampn, la histidina es el que esta ms

involucrado y esto se debe a que tiene un pK de 6 en su grupo R (muy cercano al
neutral, propio de la mayora de los lquidos biolgicos) lo que determina que coexistan
las dos formas (cido y base) del mismo, mostrando doble capacidad amortiguadora:

_____NH CH CO _____ _____NH CH CO _____

-
OH H2O
CH2 CH2

HC C HC C

+HN N H+ N N

C C

4. Las protenas tienen carga elctrica neta que le permite disolverse en el agua: Se debe
H H
a la presencia de los 5 aminocidos con carga elctrica: una protena con exceso de
aspartatos y glutamatos tendr carga neta negativa mientras que una protena con
exceso de LIS, HIS y ARG tendr carga neta positiva

PUNTO ISOELCTRICO DE LAS PROTENAS

Es el pH en donde se encuentran sin carga elctrica neta, cuando una protena, esta a un pH
mayor que su punto isoelctrico esta se cargara negativamente y si est a un pH menor que
su PI esta se cargar positivamente

Cada protena tiene su propio punto isoelctrico y esto nos permite separarlas utilizando un
procedimiento llamado ELECROFORESIS. Por ejemplo, para separar tres protenas que se
encuentran juntas en una solucin y que tienen los siguientes puntos isoelctricos: A=5,2,
B=6,8 y C=9,2; llevamos a esta solucin a pH 6,8. A este pH, A se cargar
negativamente, C lo har positivamente y B estar en su PI (es decir no tendr carga
elctrica neta).
 Si llevamos a un campo elctrico esta solucin tal como se muestra en el siguiente dibujo y
la sometemos a un voltaje de 300 voltios de corriente continua, las protenas se separan de
acuerdo a su carga, as la protena A migrar al polo positivo o nodo, la B no tendr
movimiento y la C migrar al polo negativo o ctodo (recordemos que cargas opuestas se
atraen):

V
+ __

BUFFER

MUESTRA
Aplicaciones de la Electroforesis

El suero sanguneo tiene 5 tipos de protenas: albmina, globulinas 1, globulinas 2,. -

globulinas, y -globulina, cuando se realiza una electroforesis a pH 8,6. La cantidad de
estas protenas es estable en personas normales y vara ante la presencia de ciertas
enfermedades como Hepatitis, mieloma mltiple, infecciones agudas, desnutricin,
reumatismo, entre otras.

Valores Normales:
Albmina: 4,0 g%
Globulina 1 0.4 g%
Globulina 2 0,6 g%
-Globulina 0,9 g%
-Globulina 1,2 g%

En las infecciones agudas, aumenta 1; en el Mieloma mltiple aumentan las ; en la

Hepatitis viral aumenta la -globulina y disminuye 2. En la Desnutricin, disminuye la
albmina y en el Reumatismo, aumenta la y la 2, en tanto que disminuye la albmina.
Este procedimiento es un mtodo muy eficaz para el diagnstico de muchas enfermedades.

REACCIN BIURET
Cuantifica las protenas del suero sanguneo

VN 6-8 g%
Hiperprotenemia = infecciones
Hipoprotenemia = desnutricin

Se basa en la capacidad que tienen las cadenas de protenas de formar enlaces con el cobre,
formando complejos de color morado; a mayor intensidad de color, mayor contenido de
protenas. La reaccin se lleva a cabo en 30 minutos y se hace a pH alcalino para que la
desnaturalizacin provocada por el hidrxido, facilite la unin al cobre.

NIVELES ESTRUCTURALES DE LAS PROTENAS

ESTRUCTURA PRIMARIA
La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena; nos indica qu
aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que los mismos se encuentran.
La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte debido a
la presencia de esos aminocidos.

ESTRUCTURA SECUNDARIA
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio.
Los aminocidos a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias
a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial simtrica y
estable, la estructura secundaria, la que es mantenida nicamente por puentes de hidrgeno.

Existen dos tipos de estructura secundaria:

1. la alfa-hlice
2. la conformacin beta
Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la cadena proteica. Se
debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un aminocido y el -NH- del
cuarto aminocido que le sigue; la estructura alfa se rompe ante la presencia de un
aminocido voluminoso.

En la estructura beta, los aminocidos forman puentes de hidrgeno entre sectores no

contiguos de la cadena proteica, formando unas estructuras que semejan un techo de
calamina, denominado lmina plegada. Casi todas las protenas tienen en algn sector de
sus cadenas, estructura secundaria, sea alfa, beta o ambas.

ESTRUCTURA TERCIARIA
La estructura terciaria viene a ser el enrollamiento asimtrico que sufre la cadena peptdica,
determinando la forma de ovillo de la misma (conformacin globular). Estos arreglos no
son al azar sino que dependen de la secuencia de aminocidos que conforman la cadena.
Para mantener la estructura terciaria de una protena participan cinco tipos de enlaces:

Puentes disulfuro: se presenta cuando dos cistenas cercanas de la protena, forman un

enlace covalente luego de liberar dos tomos de hidrgeno (oxidacin).
Interacciones elctricas: se dan entre aminocidos con carga elctrica, cargas opuestas
se atraen y cargas iguales se repelen.
 Interacciones hidrofbicas: los aminocidos hidrofbicos de la protena, tienden a
ocultarse en el interior del ovillo, influenciando enormemente en la conformacin.
Enlaces amida: son uniones covalentes que se dan entre un grupo carboxilo (del R) de
un aminocido cido con un grupo amino (del R) de un aminocido cargado
positivamente; es idntico al enlace peptdico.

Puentes de hidrgeno: entre cadenas cercanas.

Esta conformacin globular facilita su solubilidad en agua y as permite realizar funciones

de transporte, enzimticas, hormonales, etc.

ESTRUCTURA CUATERNARIA
Esta estructura se presenta en protenas oligomricas; es decir, aquellas que estn
conformadas por ms de una cadena polipeptdica. Todos aquellos enlaces que mantienen a
las cadenas peptdicas de la protena unidas, son los que mantienen la estructura cuaternaria
de la misma; estos enlaces son exactamente los mismos que mantienen la estructura
terciaria de las protenas.
El nmero de protmeros vara desde dos como en la hexoquinasa, cuatro en la
hemoglobina, o muchos como la cpsula del virus de la poliomielitis, que consta de 60
unidades proteicas.

DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

Consiste en la prdida de las estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria (si la tiene), por
romperse los puentes que las mantienen. Todas las protenas desnaturalizadas tienen la
misma conformacin, muy abierta y con una interaccin mxima con el disolvente, por lo
que una protena soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y
precipita.

La desnaturalizacin se puede producir por cambios de temperatura, (huevo cocido o frito),

variaciones del pH, etc. En algunos casos, si las condiciones se restablecen, una protena
desnaturalizada puede volver a su anterior plegamiento o conformacin, proceso que se
denomina renaturalizacin.

Agentes Desnaturalizantes:
Solventes orgnicos (etanol, cloroformo, ter, etc.)
Metales pesados (Hg, I, etc.)
pHs extremos (cidos y lcalis concentrados)
Calor
Radiacin UV
Ultra sonido
Agitacin mecnica
Urea a concentracin mayor a 8M
Detergentes
Algunos de estos producen desnaturalizacin irreversible dependiendo de su concentracin
y el tiempo de su aplicacin. Otros son reversibles.

HIDRLISIS DE UNA PROTENA

Es la ruptura de los enlaces pptidos de una protena, liberando aminocidos.
Se puede realizar de varias formas, en el laboratorio se hidroliza, hirviendo las protenas en
cidos fuertes o en hidrxidos a altas concentraciones.
En forma natural, una protena se hidroliza durante la digestin, con el uso de enzimas
proteolticas presentes en el estmago y en el intestino delgado:

LUGAR DE
ENZIMA ACTIVIDAD
SINTESIS
Pepsina Estmago Corta el enlace peptdico cuando el
aminocido de la derecha del mismo es
grande e hidrofbico
Quimotripsina Pncreas Corta el enlace peptdico cuando el
aminocido de la izquierda del mismo
 tiene carga +
Tripsina Pncreas Corta cuando el aminocido de la
izquierda del enlace peptdico es grande e
hidrofbico
Elastina Pncreas Rompe el enlace peptdico cuando el
aminocido de la izquierda es pequeo e
hidrofbico
Carboxipeptidasa Pncreas Corta al aminocido C- terminal (ltimo
de la derecha)
Aminopeptidasa Intestino Delgado Corta el aminocido N-terminal (1ro de la
izquierda)

El aminocido N-terminal es el primer aminocido de la cadena, el del lado izquierdo y N

viene de grupo amino. El aminocido C-terminal es el ltimo aminocido de la cadena, el
del lado derecho y la C viene de carboxilo.

Las dos ltimas enzimas de la tabla son exopeptidasas en tanto que las otras son
endopeptidasas.

EJERCICIOS
Haga las frmulas de la alanina D y L
Haga las frmulas de los aminocidos adicionales que pueden formar parte de las protenas
Averige que aminocido se elimina en la orina en la enfermedad del jarabe de arce
La siguiente protena:

Es una toxina con actividad ribonucleasa presente en el hongo Aspergillus giganteus, tiene
150 aminocidos. Tiene estructura secundaria y de qu tipo? Tiene estructura terciaria?
Tiene estructura cuaternaria? Cul es su peso molecular aproximado? (para esta ltima
pregunta asuma que el peso molecular promedio de los aminocidos es de 100)
 CAPTULO III
ENZIMAS

Son catalizadores biolgicos.

Catalizador: sustancia que aumenta la velocidad de una reaccin.

CARACTERSTICAS

1. Todas las enzimas son protenas, aunque se descubri que existen molculas de ARN
con actividad cataltica (toman el nombre de RIBOZIMAS).

2. Actan en condiciones de pH, temperatura y presin moderadas, compatibles con la

vida.

3. Para cada reaccin qumica que ocurre en el organismo existe una enzima especfica;
esto quiere decir que las enzimas son muy especficas.

4. Alta eficiencia; aumentan la velocidad de las reacciones grandemente

La transformacin por ejemplo del CO2 y el agua en cido carbnico, si la realizamos:

a. Sin catalizador: la reaccin se da en cerca de 20 horas.

b. Con catalizador qumico como el platino coloidal: se completa en 1 hora.
c. Con la enzima propia de esta reaccin: anhidrasa carbnica: en menos de 0,1
segundos.

5. Las enzimas como cualquier catalizador no modifican la constante de equilibrio de las

reacciones, es decir que no todo el reaccionante se transforma en producto, sino la
reaccin acaba cuando se alcanza el equilibrio de la misma,

6. Las enzimas disminuyen la energa de activacin (Ea) de las reacciones.

Sin enzima

Con enzima

Ea: es la energa que se debe suministrar a un mol de molculas de reactante para que
alcance un nivel energtico tal que les permita transformarse en su producto
correspondiente.
TERMINOS ENZIMTICOS

Sustrato
Es el reactante, de acuerdo al nmero de reactantes puede ser: monosustrato, bisustrato,
trisustrato, etc. De acuerdo a la nomenclatura propuesta actualmente, los sustratos se
denominan como A, B, C, etc.

Producto
Es el resultado de la transformacin del sustrato o sustratos, puede haber un producto o
ms; estos se denominan como P, Q, R, S, etc.

Sitio de unin del sustrato

Es el lugar de la enzima que reconoce al sustrato y permite su unin; antiguamente se
pensaba que esta unin era como de llave a cerradura (modelo propuesto por Fischer),
pero este resulta ser muy esttico para lo que realmente ocurre durante la interaccin.
Actualmente se acepta el modelo de Koshland llamado encaje inducido (guantemano)
ya que durante la unin tanto el sustrato como la enzima sufren cambios conformacionales
necesarios para la catlisis.

"La fijacin del sustrato a una enzima provocara fuerzas adicionales que contribuiran a
dar una determinada conformacin a la enzima y a configurar con precisin el sitio activo
(hiptesis del encaje inducido, de Koshland)."

La interaccin del sustrato con la enzima se da a travs de diferentes tipos de interacciones:

elctricas, hidrofbicas, fuerzas de Van der Walls y puentes de hidrgeno, como puede
deducirse, todas son interacciones dbiles, aunque tambin pero en pocos casos, se
presentan enlaces covalentes.
El espacio de la enzima donde se une el sustrato, es complementario al mismo; a mayor
nmero de interacciones entre la enzima y el sustrato, habr ms especificidad de unin.

Centro cataltico
Es el lugar de la enzima donde ocurre la catlisis, generalmente se localiza en el sitio de
unin al sustrato.

Cofactor
Algunas enzimas (el 50% aproximadamente del total) necesitan de una molcula adicional
diferente a la cadena peptdica, para realizar su actividad; esta se conoce como cofactor; el
cofactor participa directamente en la reaccin ya que si no esta presente, no hay reaccin;
puede ser:
 Ion metlico
Mn2+, Cu+, Fe2+, Fe3+, Co3+, Zn2+ y Mg2+
Existen otros iones que participan estabilizando a la enzima o ayudando a la unin con
el sustrato, estos no son cofactores, ejm: Ca2+, K+, Na+, I, etc.

Forma activa de una vitamina hidrosoluble

VITAMINA COFACTOR (Forma Activa) FUNCIN

Biotina Biocitina Carboxilar (introducir un grupo
carboxilo)
Tiamina TPP (Tiamina pirofosfato) Descarboxilar
Niacina NAD+ (Nicotin amida adenin Deshidrogenizar
dinucletido) y NADP+(Nicotin
amida adenin dinucletido fosfato)
Riboflavina FAD y FMN Flavin adenin Deshidrogenizar
dinucletido y Flavin mono
nucletido
Piridoxina Piridoxal fosfato Transferir grupos funcionales a
aminocidos
cido Flico THF (Tetra hidrofolato) Transferir grupos de un solo
tomo de carbono
Cobalamina Ciano cobalamina Transferir grupos de 1 tomo
de carbono en isomerizaciones
cido Pantotnico Coenzima A Transferir grupo ACILO

Coenzima
Es un cofactor pero que no se encuentra estrechamente unido a la enzima, por lo tanto es
dializable.
Son cofactores de ms de una enzima. Son ejemplos, el NAD +, el NADP+, el Coenzima A y
el Coenzima Q.

Zimgenos
Llamados tambin proenzimas, son precursores inactivos de una enzima, para evitar su
accin en el lugar de su sntesis. Esto se observa en las enzimas de la digestin las cuales
son sintetizadas en las clulas pancreticas, en las clulas del estmago o en los enterocitos,
pero actan en la luz del tracto intestinal. Asimismo en la coagulacin sangunea.
Ejemplos:
___________
Tripsina Tripsingeno
___________
Pepsina Pepsinogeno
___________
Quimotripsina Quimotripsingeno
___________
Carboxipeptidasa Precarboxipeptidasa
___________
Fibrina Fibringeno (protena de la coagulacin)
___________
Trombina Protrombina (protena de la coagulacin)

Enzima marcadora
Son enzimas que se localizan exclusivamente en determinados tejidos u rganos.
Ejemplos:
Amilasa Pncreas
Fosfatasa Acida Prstata
Transaminasa glutmico pirvica (TGP) Hgado
Creatino kinasa MB (CK-MB) Corazn
CK MM Msculo
CK-BB Cerebro
Pepsina Estmago

Estas enzimas nos permiten diagnosticar dao, en algn tejido u rgano en particular a
travs de la medida de su actividad en sangre; asimismo el grado del dao.

Isoenzima:
Son ismeros de una misma enzima, catalizan la misma reaccin pero con diferente
afinidad por el sustrato.
Son protenas oligomricas y para la sntesis de sus monmeros constituyentes se requiere
de la participacin de ms de un gen.

Ejemplo:
Lactato deshidrogenasa (LDH): est conformada por 4 cadenas peptdicas; para su
sntesis participan dos genes, el gen h (de heart) y el gen m (de muscle)
5 isoenzimas

HHHH, HHHM, HHMM, HMMM y MMMM

Esta enzima cataliza la siguiente reaccin:

LDH
PIRUVATO LACTATO

HHHH, propia del corazn, convierte preferencialmente el lactato en piruvato, mientras que
la isoenzima MMMM que se localiza en msculo esqueltico, transforma el piruvato en
lactato ante un ejercicio intenso y prolongado.
Del mismo modo, las isoenzimas hibridas tienen distribuciones especiales en determinados
tejidos: HHHM en eritrocitos, HHMM en rin y cerebro, etc. Esto nos permite utilizar a
las isoenzimas tambin como enzimas marcadoras.

Apoenzima: Parte proteica de una enzima

Holoenzima: Apoenzima + cofactor

CLASES DE ENZIMAS
Se clasifican en 6 grupos:

1. OXIDOREDUCTASAS
Son las enzimas que transfieren tomos de hidrgeno u oxgeno o electrones de una
molcula a otra.
En estas reacciones participan 2 sustratos uno que se reduce y otro que se oxida a este
grupo pertenecen las deshidrogenasas, las oxidasas, las oxigenasas, la catalasa, las
peroxidasas y los citrocromos.

2. TRANSFERASAS
Son enzimas que transfieren grupos funcionales de una molcula a otra, estos grupos
pueden ser fosfato (el ms comn), carboxilo, metilo, formilo, etc.

3. HIDROLASAS
Son enzimas que rompen enlaces simples y utilizan agua como segundo sustrato; los
tomos del agua luego van a formar parte de los productos.

Las hidrolasas son las enzimas de catabolismo pues su funcin es degradar. Para
nombrarlas se coloca el nombre del sustrato terminado en ASA.

4. LIASAS
Son enzimas que catalizan la formacin o ruptura de enlaces, pero

durante el proceso se forma o se rompe necesariamente un doble enlace.

COO- COO-
CH + H2O HO-C-H
Fumarato
HC Liasa CH2
COO- COO-
FUMARATO MALATO

5. ISOMERASAS:
Catalizan, reacciones de isomerizacin, es decir movimiento de tomos dentro de una
misma molcula, solo requieren de un sustrato.
6. LIGASAS
Son enzimas que forman enlaces simples: C-C, C-S, C-N; se las conoce como sinteasas
o sintetasas. Lo caracterstico de ellas es que para su accin requieren de la
participacin de una molcula de alta energa, la cual al romper su enlace libera energa
para que se forme el enlace, pero esta molcula energtica no cede sus tomos a los
productos de la reaccin.

La molcula energtica que ms emplean es el ATP aunque tambin puede ser el CTP
(en el metabolismo de lpidos), el UTP (en el metabolismo de carbohidratos), etc. Estas
son las enzimas del anabolismo.

NOMENCLATURA ENZIMTICA
En el ao de 1964 en la reunin de la UIB (Unin Internacional de Bioqumica) celebrada
en Mosc, se nombr a una comisin para que se encargue de dar nombre a todas las
enzimas conocidas hasta ese entonces, la comisin estaba integrada por los bioqumicos
ms renombrados de esa poca, los cuales trabajando durante 5 aos llegaron a la
conclusin final de dar a cada enzima un nmero debido a los diferentes idiomas
mundiales. Este nmero se conoce como el N EC y viene del ingls Enzime Comissin

Ejemplo: EC 2.3.4.7. El nmero consta de 4 dgitos separados por un punto. El primer

dgito corresponde a la clase de enzima. Los otros especifican an ms al catalizador.

CINTICA ENZIMTICA
Es la parte de la Enzimologa que estudia los factores que afectan la actividad de una
enzima:
Temperatura
pH
Concentracin de ligandos (sustrato, cofactor, coenzima, producto, activadores e
inhibidores)
Concentracin de la enzima
Desarrollaremos los ms importantes:

Efecto de la temperatura: Al aumentar la temperatura aumenta la energa cintica tanto

del sustrato como de la enzima, con lo cual aumenta la posibilidad de encuentro de ambos;
pero a temperaturas mayores a 40 C, se compromete la conformacin de la enzima, la cual
empieza a desnaturalizar, lo que provoca disminucin en la actividad.

Efecto del pH: En este caso, existe un pH donde la enzima muestra su mejor actividad (pH
ptimo); por debajo y por encima del mismo, la actividad decae y a pHs muy alejados del
ptimo se observa desnaturalizacin de la enzima. Es importante recalcar que el pH ptimo
de una enzima no es necesariamente el neutral: 7,0, este depende del sitio donde acta el
catalizador, por ejemplo la pepsina que acta en la luz del estmago tiene un ptimo de 1,5,
la fosfatasa cida que esta dentro del lisosoma celular, acta a pH 5,0 etc.

Efecto del [E]: A medida que aumenta la concentracin de la enzima (se supone colocando
bastante sustrato), aumenta tambin la velocidad de reaccin.
ECUACIN DE MICHAELIS MENTEN
Los primeros en abordar la cintica enzimtica en forma cientfica fueron los bioqumicos
Leonor Michaelis y Maud Menten a inicios del siglo XX. Ellos recopilaron toda la
informacin que hasta ese entonces se tuvo y dedujeron su ecuacin a partir del siguiente
principio: la transformacin de un sustrato en producto ocurre en dos fases, la primera era
la unin de la enzima al sustrato y la segunda era la transformacin de este en producto:

k1 k2
E + S ES E + P
k-1 k-2

Deduciendo la ecuacin en la condicin de equilibrio llegamos a la ecuacin de Michaelis-

Menten:

Vmax S
v0
Km S

en donde: v0 es la velocidad inicial de la reaccin

Vmax es la velocidad mxima
KM es la constante de Michaelis y Menten
S es la concentracin de sustrato

Esta ecuacin grafica una hiprbola rectangular, como puede verse a continuacin

HIPRBOLA RECTANGULAR

Esta grfica se da porque al inicio hay mas sustrato que enzima, entonces no se consigue
hacer trabajar a toda la enzima disponible, por eso es que a medida que aumentamos el
sustrato aumenta tambin la velocidad; pero llega un momento en que el sustrato est en
mayor cantidad que la enzima, es decir, la enzima est saturada por el sustrato; en ese
instante alcanzamos la Velocidad mxima (Vmax), la cual es constante y va a depender de
la cantidad de enzima que tengamos (si tenemos ms enzima, esta Vmax ser mayor).

La KM es una constante para cada enzima y viene a ser la concentracin de sustrato donde
se alcanza la mitad de la velocidad mxima; esta no depende de la cantidad de enzima que
tengamos, siempre va a ser la misma.
La KM mide la afinidad de la enzima por su sustrato, a mayor K M menor afinidad y a menor
KM mayor afinidad. Si la enzima tiene ms de un sustrato, cada sustrato tendr su propio
KM para la enzima.

ALTA AFINIDAD

BAJA AFINIDAD

Cuando se hace una determinacin enzimtica en el laboratorio clnico se debe colocar

concentraciones de sustrato lo suficientemente altas para obtener la velocidad mxima pues
lo que se desea averiguar es cuanto de enzima existe en una muestra.
Una forma de garantizar que se esta en velocidad mxima todo el tiempo que dure la
determinacin, es utilizar concentraciones de sustrato iguales a mayores a 10 KM.
Velocidad inicial: Es la actividad que tiene una muestra enzimtica; se mide en Unidades
de Actividad Enzimtica U.
U: Las Unidades de Actividad Enzimtica, son los micromoles (moles) de sustrato
transformado por minuto en condiciones de pH y T adecuadas.

INHIBICIN ENZIMTICA
Es la disminucin de la actividad de una enzima puede ser en forma natural o
artificialmente, existen dos tipos de inhibicin:

a. Irreversible: El inhibidor se une covalentemente a la enzima y la destruye.

b. Reversible: donde la actividad se puede recuperar retirando al inhibidor.

Inhibicin Reversible
Tiene mucha aplicacin en clnica. Puede ser de 3 subtipos:

Competitiva
El inhibidor se parece al sustrato en su totalidad o en algn sector del mismo, de tal
forma que la enzima no los puede diferenciar; es decir, el inhibidor compite con el sustrato
por el sitio de unin a la enzima. En este tipo de inhibicin el inhibidor produce un
aumento en la KM sin modificar la Vmax de la reaccin

Un ejemplo de este tipo de inhibicin es el uso de alopurinol para inhibir a la enzima

Xantino deshidrogenasa y evitar la sntesis de cido rico en el tratamiento de la gota.
Asimismo, la quimioterapia contra el cncer no son ms que inhibidores competitivos de
alguna enzima de la replicacin del DNA, para evitar la proliferacin de las clulas
malignas.

No competitiva
En este tipo de inhibicin el inhibidor se une a un lugar diferente al sitio de unin del
sustrato, por lo tanto la unin del sustrato y del inhibidor son totalmente independientes; es
posible que se una primero el sustrato y luego el inhibidor o viceversa, en cualquiera de los
casos la reaccin no se lleva a cabo; es decir, la enzima solo acta si no est unido el
inhibidor no competitivo.
En este tipo de inhibicin disminuye la Vmax pero no vara la K M de la reaccin. Un
ejemplo es el efecto del cianuro sobre la enzima citocromo oxidasa.
 Acompetitiva
En este tambin el inhibidor se une a un lugar distinto al sitio de unin al sustrato, la
diferencia esta en que el inhibidor solo se puede unir a la enzima despus de que lo haya
hecho primero el sustrato, indicando que la unin del sustrato produce un cambio
C SI
conformacional en la enzima el cual recin permite la unin del inhibidor.
E I
C
Aqu disminuyen tanto la Vmax como la KM. Es Sejemplo de este tipo de inhibicin, el
efecto de los aminocidos aromticos sobre la enzima fosfatasa alcalina.
E
S

REGULACIN ENZIMTICA
A pesar que las enzimas por s mismas son reguladoras del metabolismo, ya que su
presencia es un indicador de que la reaccin que catalizan se esta llevando a cabo, existen
enzimas cuya actividad puede ser modulada por algn metabolito o por el propio sustrato;
estas tienen una vida media prolongada, generalmente son las primeras enzimas de una ruta
metablica y catalizan reacciones irreversibles.

En los organismos vivos existen 4 mecanismos que permiten regular una enzima, estos son:

1. Zimgenos
Algunas enzimas son sintetizadas como zimgenos y se activan cuando pierden un
trozo de cadena peptdica, el cual se encuentra cubriendo el sitio de unin al sustrato.
Luego de que cumplen con su actividad el organismo sintetiza una protena pequea
especfica que vuelve a cubrir el sitio de unin al sustrato, inactivando a la enzima. Ejemplo
la tripsina que se sintetiza como tripsingeno, acta como tripsina y detiene su actividad al
unirse a una protena pequea llamada antitripsina.

2. Isoenzimas
Es el segundo mecanismo de regulacin y es como dijimos anteriormente por diferente
actividad cataltica en los diferentes tejidos.

3. Regulacin covalente:
Algunas enzimas son moduladas covalentemente es decir, una molcula activadora o
inhibidora se una a ellas, proceso que requiere de la participacin de una segunda enzima
para unir al modulador y de una tercera enzima para retirarlo; esta modulacin es por lo
tanto lenta y se da en minutos. Ejemplo la fosforilacin de la glucgeno sinteasa que la
vuelve inactiva, para activarse debe defosforilarse; o la fosforilacin de la glucgeno
fosforilasa la cual se activa con el proceso y se inactiva al defosforilarse.

4. Regulacin no covalente, Alostrica:

Este es el mecanismo regulatorio ms importante, en este caso el modulador no se une
estrechamente a la enzima sino lo hace en forma dbil, a travs de interacciones elctricas,
interacciones hidrofbicas, puentes de hidrgeno y/o fuerzas de Van der Walls.
El modulador puede activar (+) o inactivar (-) a la enzima, el proceso se realiza
rpidamente, en fracciones de segundo.
Las enzimas alstericas, tienen las siguientes caractersticas:

No cumple con la cintica de Michaelis Menten, su grfica no es una hiprbola

rectangular sino una curva de tipo sigmoidal:
Son moduladas por el propio sustrato, lo que se conoce como efecto cooperativo
(homotrpico)
Son protenas oligomricas (tienen varias cadenas peptdicas)
Cada cadena peptdica tiene su propio centro cataltico.
A los moduladores que pueden activarla o inhibirla se les llama moduladores positivos
y moduladores negativos respectivamente.
El aumento en el medio de modulador positivo hace que la enzima alostrica se haga
cada vez ms Michaeliana. El aumento del modulador negativo hace que la enzima
alostrica se haga cada vez ms sigmoidal.
Se representa una enzima alostrica con 4 cadenas peptdicas; obsrvese que el sustrato
solo puede interactuar con las subunidades verdes, mas no con las plomas por su forma, lo
que ocurre en realidad es que ambos tipos de subunidades pueden interactuar con el
sustrato, la diferencia est en que las verdes lo procesan mas rpido, las plomas ms
lentamente pues tienen que sufrir un cambio conformacional, que terminan por volverse
verdes. Esto es la modulacin por el propio sustrato, el cual al comienzo solo encuentra
monmeros plomos, pero a medida que aumenta, el mismo transforma los monomeros
plomos en verdes, facilitando el ingreso de ms sustrato; por eso el comportamiento
sigmoidal.

EJERCICIOS

1. Cul es el rol del NAD+ para las enzimas de la gliclisis, gliceraldehido 3 fosfato
deshidrogenasa y lactato deshidrogenasa?

2. Cmo sera la grfica de Michaelis-Menten en una inhibicin acompetitiva?