CROMATOGRAFIA

DEFINICIN
Conjunto de tcnicas basadas
en el principio de retencin
selectiva, cuyo objetivo es
separar los distintos
componentes de una mezcla,
permitiendo identificarlos.
La cromatografa se utiliza
tanto para lograr la
separacin de los
componentes de una mezcla
como para medir la
proporcin de cada elemento
en la mezcla.
PASOS GENERALES
Una columna con partculas
adsorbentes
Una fase mvil con una mezcla de
solutos es aadida en el sistema.
Una fase mvil con solvente
(eluyente o buffer) es pasado por la
columna
La muestra se desplaza por impulso y
sale como un componente disperso
Diferentes solutos interactan de
forma diferente con el material
adsorbente.
TCNICAS DE CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFA DE ELUCIN: El
soluto es purificado al mismo
tiempo que es diluido.

CROMATOGRAFA DE DESPLAZAMIENTO: Para

cantidades grandes de material. La sustancia
desplazadora tiene mayor afinidad por la
columna adsorbente que la que tiene el
soluto. Es necesario graduar y optimizar el
gradiente de empuje del solvente
 OTROS TIPOS DE CROMATOGRAFA
CROMATOGRAFIA DE ADSORCIN: se basa principalmente
en las diferencias en la afinidad relativa de los compuestos
por el slido utilizado como fase estacionaria. Las
separaciones obtenidas se determinan casi exclusivamente
por interacciones polares, siendo la fase estacionaria ms
polar que la fase mvil. La fase estacionaria es un slido sobre
el que se adsorben los componentes de la muestra.
CROMATOGRAFIA DE PARTICIN LIQUIDO-LIQUIDO: trabaja
por diferencias de solubilidad de soluto entre la fase de
lquido adsorbido y la fase mvil.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO: la fase
estacionaria es una resina de intercambio inico y la
separacin se produce por la unin de los iones a la fase
estacionaria.
 CROMATOGRAFIA DE FILTRACIN EN GEL: se
realiza empleando unas matrices formadas por
unas esferas porosas. El volumen de los poros es
muy elevado y su dimetro se conoce. Es un tipo
de cromatografa de exclusin
CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD: se fundamenta
en la especificidad de algunas macromolculas
biolgicas. stas se unen especficamente a la
fase estacionaria y para separar dicha
macromolcula, bastar con variar el pH una
vez que la columna este limpia y slo se
encuentre de inters.
CROMATOGRAFIA HIDROFBICA: Interaccin
hidrofbica (HIC)
La tcnica de Interaccin Hidrofbica (HIC)
separa las protenas en base a su hidrofobicidad
superficial, y se caracteriza por la adsorcin de
las biomolculas a la superficie dbilmente
hidrofbica de la resina en una solucin
fuertemente salina y su posterior elucin
mediante una gradiente salino negativo.
 CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA
PRESIN (HPLC): La cromatografa
lquida de alta presin es una
tcnica de separacin basada en la
distinta retencin de los
componentes de una muestra
disueltos en la fase mvil al pasar por
la fase estacionaria. Se caracteriza
por la elevada presin de operacin
necesaria para conseguir una
velocidad ptima de la fase mvil.
La interaccin entre el soluto de la
fase mvil y la fase estacionaria
puede ser modificada eligiendo
diferentes disolventes y fases
estacionarias, siendo en
consecuencia una tcnica de gran
versatilidad.
ECUACIONES
COMPORTAMIENTO DE VELOCIDAD LINEAL VELOCIDAD Y TIEMPO
RETENCIN: refleja la PROMEDIO: de la DE RETENCIN
distribucin del soluto fase mvil AJUSTADOS
entre la fase mvil y
estacionaria.

Donde: Donde:
VR: Volumen de retencin tM: tiempo de trnsito de un Donde:
tR: tiempo de retencin soluto no retenido VM: Volumen vaco
FC: gasto o flujo volumtrico L: longitud columna
 COEFICIENTE DE DISTRIBUCIN
O DE REPARTO: Cuando un
soluto entra al sistema
cromatogrfico
inmediatamente se reparte o
distribuye entre la fase mvil y
la estacionaria. Si la fase mvil
se para en cualquier
momento, el soluto establece
un equilibrio de distribucin
entre las dos fases. La
concentracin en fase est
dada por el coeficiente
termodinmico de reparto:
FACTOR DE CAPACIDAD: El
factor de capacidad k es la
cantidad ms importante en
cromatografa en columna.
Relaciona el equilibrio de
distribucin de la muestra
dentro de la columna con las
propiedades
termodinmicas de la
columna y con la
temperatura

Donde:
CS: Concentracin de soluto
en la fase estacionaria.
CM: tiempo de retencin
FC: gasto o flujo volumtrico