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Laboratrio LDL Liquiform POPBIO xxx/xx

LDL Liquiform
INDICAO MDICA DO EXAME
Estudos retrospectivos e prospectivos demonstram claramente uma inter-relao curvilinear
entre os nveis do colesterol srico, mais especificamente o colesterol LDL, e a patognese da
arteriosclerose e da Doena Arterial Coronariana (DAC).
PRINCPIO
Na primeira fase da reao, um surfactante especfico presente no Reagente 1 solubiliza os
quilomcrons, as lipoprotenas de alta densidade e as lipoprotenas de muito baixa densidade
(HDL e VLDL). O colesterol solubilizado consumido pela ao da colesterol esterase (CE) e
colesterol oxidase (CO) em uma reao no formadora de cor.
Na segunda fase, um surfactante presente no Reagente 2 solubiliza o colesterol da LDL, que
hidrolisado pela colesterol esterase a colesterol livre e cidos graxos. O colesterol livre
oxidado pela colesterol oxidase a colest-4-en-ona e perxido de hidrognio. Em seguida, ocorre
uma reao de acoplamento entre perxido de hidrognio, 4-aminoantipirina e
disulfobutilmetatoluidina sdica (DSBmT), catalisada pela peroxidase, produzindo uma
quinoneimina que tem mximo de absorbncia em 546 nm.
A intensidade da cor formada diretamente proporcional concentrao de colesterol LDL na
amostra.
AMOSTRA
Preparo do paciente
Jejum de no mnimo 8 horas.
Tipos de amostra
Usar soro ou Plasma (heparina-ltio e EDTA).
Armazenamento e estabilidade da amostra
O analito estvel por 14 horas entre 15 30 C, 5 dias entre 2 8 C e 30 dias a 20 C
negativos.
Volume mnimo
(Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise)
Volume ideal
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise)
Critrios para rejeio da amostra
Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material.
PRODUTO UTILIZADO
LDL Liquiform, Catlogo 111-1/40 ANVISA - 10009010136
Labtest Diagnstica
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600
Lagoa Santa, MG, 33400-000
Reagente 1 - Reagente lquido pronto para uso. Armazenar entre 2 8 C. No congelar.
Contm tampo pH 6,3; colesterol esterase <1500 U/L; colesterol oxidase <1500 U/L,
peroxidase <1300 U/L, 4-aminoantipirina <0,1%; ascorbato oxidase <3000U/L e surfactante
<1,0%.
Reagente 2 - Reagente lquido pronto para uso. Armazenar entre 2 8 C. No congelar.
Contm tampo pH 6,3; surfactante <1,0% e DSBmT <1,0 mM.
3. Calibrador Reagente liofilizado. Concentrao no rtulo do frasco. Armazenar entre 2 8
C. Aps reconstituio estvel 2 semanas entre 2 8 C. Preparao contendo colesterol
LDL humano e azida sdica 0,1%.
Preparo do Calibrador: Adicionar 1,0 mL de gua qualidade reagente (ver observao no. 2),
ao contedo do frasco do Calibrador. Deixar em repouso durante 5 minutos. Misturar por
inverso suave evitando a formao de espuma. Estvel 2 semanas entre 2 8 C em
recipiente hermeticamente fechado para evitar evaporao do solvente.

Precaues e cuidados especiais

1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do
reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.
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2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so

estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os
reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que
podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade
em suas condies operacionais.
3. O calibrador contm derivados de sangue humano e apresentou resultados
negativos para a presena de HBsAg e anticorpos HCV e HIV utilizando testes
aprovados. Entretanto, nenhum teste conhecido pode assegurar que produtos
derivados de sangue humano no transmitam doenas infecciosas. Recomenda-se
manuse-lo como potencialmente infectante.
4. O calibrador contm tambm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para
evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com
grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar
compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar
grandes volumes de gua para descartar o reagente. Fazer referncia ao manual ou
POP de segurana.
EQUIPAMENTOS
Procedimento manual
1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 546 nm (540 a 550).
2. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C).
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.
4. Cronmetro.
Procedimento automatizado
Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao
manual ou POP para utilizao do mesmo.
Procedimento alternativo
Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as
diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos
automatizados.
CONTROLE DA QUALIDADE
Materiais
Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de
catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos.
Limites de tolerncia
Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para
utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem
tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou
POP para utilizao dos materiais de controle.
Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes
Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes.
Gerenciamento dos dados
Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados.
Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.
PROCEDIMENTO
Procedimento manual
A metodologia em formato bi-reagente deve ser necessariamente realizada em dois tempos.

Rotular 2 tubos de ensaio e proceder como a seguir:

Teste Calibrador
Amostra 0,01 mL -
Calibrador - 0,01 mL
Reagente 1 0,75 mL 0,75 mL
Homogeneizar e incubar a 37C durante 5 minutos. O nvel da gua no banho deve ser
superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. Determinar as absorbncias A 1 do teste e
do Calibrador em 546 nm (540 550), acertando o zero com gua deionizada.
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Reagente 2 0,25 mL 0,25 mL

Manter a 37C durante 5 minutos. Determinar as absorbncias A2 do teste e do Calibrador em
546 nm (540 550), acertando o zero com gua deionizada. As absorbncias so estveis por
15 minutos.

Procedimento automatizado
Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de
aplicao dos reagentes para o sistema automtico.
Precaues e cuidados especiais
1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas
estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.
2. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a
estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao
manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais.
3. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao.
Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1
megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos 0,1 mg/L
(gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com
resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final
utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada
ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e
substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes
em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel.
Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua.
Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente.
CLCULOS
Ver Linearidade.
A primeira leitura da absorbncia (A1) deve ser corrigida para o volume final da reao obtendo-
se A1cor, antes de realizar o clculo da concentrao de LDL.
A1cor = A1 x 0,75
Teste (A2 A1cor)
Colesterol LDL (mg/dL) = ------------------------------------ x CC
Calibrador (A2 A1cor)
CC: concentrao do Calibrador
Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o mtodo do fator
pode ser empregado.
CC
FATOR = -------------------------------
Calibrador (A2 - A1cor)
Colesterol LDL (mg/dL) = Teste (A2 -A1cor) x Fator
RESULTADOS
Unidade de medida
mg/dL
Converso de mg/dL para Unidade SI: mmol/L = mg/dL x 0,0259
VALORES DESEJVEIS OU RECOMENDADOS
Os valores a seguir substituem os valores de referncia e foram determinados a partir de dados
epidemiolgicos tratados estatisticamente, que relacionam as concentraes do colesterol com
a prevalncia de doena arterial coronariana (DAC).
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Adultos3
Classificao ATP III - Colesterol Total, LDL e HDL (mg/dL)
Colesterol Total
<200 Desejvel
200 239 Limiar elevado
240 Elevado
Colesterol LDL
< 100 timo
100 129 Limiar timo
130 159 Limiar elevado
160 189 Elevado
190 Muito elevado
Colesterol HDL
<40 Baixo
60 Elevado (desejvel)

Crianas e Adolescentes4
Colesterol Total
Idade: 2 a 19 anos
<170 mg/dL Desejvel
170 a 199 mg/dL Limtrofe
200 mg/dL Elevado
Colesterol LDL
Idade: 2 a 19 anos
<110 mg/dL Desejvel
110 a 129 mg/dL Limtrofe
130 mg/dL Elevado
Colesterol HDL
Idade: <10 anos
40 mg/dL Desejvel
Idade: 10 a 19 anos
35 mg/dL Desejvel

LIMITAES DO PROCEDIMENTO
Linearidade
A reao linear entre 6,6 e 992 mg/dL. Para concentraes superiores a 992 mg/dL, diluir a amostra
com NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nova determinao e multiplicar o resultado obtido pelo fator de
diluio. Diluir a amostra para obter um resultado entre 100 e 200 mg/dL. Sugerimos a verificao da
linearidade metodolgica e fotomtrica, no mnimo semestralmente, utilizando amostras com valores at
992 mg/dL. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio.
Interferncias
1- Concentraes de bilirrubina total at 20 mg/dL, hemoglobina at 500 mg/dL, cido ascrbico at 50
mg/dL, gamaglobulinas at 5000 mg/dL e triglicrides at 1293 mg/dL no interferem significativamente
na reao. Amostras com concentrao de triglicrides >1293 mg/dL no devem ser diludas.
Amostras com bilirrubina, hemoglobina, cido ascrbico e gamaglobulina em concentraes maiores
que as acima referidas devem ser diludas em NaCl 150 mmol/L (0,85%) antes de se realizar os ensaios.
Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.
2- Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na
metodologia sugere-se consultar: www.fxol.org/aaccweb/
SIGNIFICADO CLNICO
A LDL um produto do catabolismo da VLDL. A hidrlise dos triglicrides da VLDL pela lipoprotena
lipase (LPL) leva formao de uma lipoprotena de vida curta, denominada lipoprotena de densidade
intermediria (IDL). Esta , em seguida, catabolizada pela lipase heptica, formando a partcula de LDL,
rica em colesterol.
O catabolismo da LDL ocorre no fgado e nos tecidos perifricos, atravs principalmente da interao
desta lipoprotena com receptores de alta afinidade presentes na membrana celular. Aps a ligao da
LDL com o receptor na superfcie celular, a membrana da clula se invagina, interiorizando a
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lipoprotena e formando vesculas endocticas, as quais se fundem com lisossomos intracelulares, e a

LDL hidrolisada por enzimas. O componente protico hidrolisado a aminocidos e o colesterol
esterificado hidrolisado a colesterol livre por ao de uma lipase cida. Este colesterol formado
utilizado na sntese de membranas e na regulao de eventos metablicos que envolvem a sntese de
colesterol endgeno e a esterificao do colesterol livre. O colesterol formado inibe tambm a sntese
dos receptores de LDL, interrompendo a fixao da LDL, evitando assim que as clulas fiquem
sobrecarregadas de colesterol.
Com o aumento dos nveis de LDL no plasma, as clulas removedoras captam maiores quantidades da
lipoprotena circulante para degradao. Um receptor no macrfago liga-se a formas oxidadas da LDL e
as internaliza. Na parede arterial, tanto os macrfagos quanto as clulas de msculo liso,
sobrecarregadas de steres de colesterol, por terem atuado no mecanismo de remoo descrito acima,
transformam-se em clulas espumosas que so o marco da placa aterosclertica.
Estudos retrospectivos e prospectivos demonstram claramente uma inter-relao curvilinear entre os
nveis do colesterol srico, mais especificamente o colesterol LDL, e a patognese da arteriosclerose e
da Doena Arterial Coronariana (DAC). Entretanto, observa-se que o colesterol HDL tem um efeito
protetor na DAC.
Mesmo com valores de colesterol dentro dos limites desejveis, valores elevados do colesterol LDL
esto associados ao aumento do risco para DAC.
Valores aumentados de LDL podem ser encontrados no diabetes mellitus, no hipotireoidismo, nas
hepatopatias, na doena renal crnica, na hipercolesterolemia familiar, na menopausa, em fumantes, em
hipertensos, em indivduos em uso de medicamentos como: atenolol, propranolol, captopril,
carbamazepina, furosemida, lacidipina e anticoncepcionais orais.
Tanto o colesterol total quanto as fraes LDL e VLDL podem ser diminudas com dieta ou medicamento.
A reduo de 1% no valor do Colesterol Total diminui a prevalncia de DAC em aproximadamente 2%.
As concentraes do colesterol nas fraes LDL e VLDL e na frao HDL dependem de metabolismos
distintos e no se deve fazer qualquer tentativa de buscar correlao entre seus valores de
concentrao.
REFERNCIAS
1. Bachorik PS, Ross JW. Clin Chem 1995;41:1414-20.
2. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981; 27:493-501.
3. Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert
Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment
Panel III). JAMA 2001;285:2486-97.
4. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca FAH, Dias JCA. Risco
cardiovascular: fatores metablicos e nutricionais: diagnstico e tratamento. So Paulo: Loyola, 1994.
p.56.
5. Labtest: Dados de Arquivo.
6. Instrues de Uso Labtest Diagnstica SA.

Nome Assinatura Data

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Implantado por: ___/___/___
Substitui POP:
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Razo:
Nmero Destino
Cpias