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Braz. J. Therm. Anal. Vol. 2 No. 1 (2013) 50 - 54

Uso de curvas termogravimtricas para a determinao do teor de

mineralizao em hidrogis
M. M. Horn1, M. de Paula2, V. C. A. Martins2 e A. M. de Guzzi Plepis2*
Interunidades em Bioengenharia EESC, USP, So Carlos, Brasil
1
2
Instituto de Qumica de So Carlos IQSC, USP, So Carlos, Brasil
Received 07/10/2013; accepted 16/12/2013
Available online 23/12/2013

Resumo
Os hidrogis tm sido estudados para aplicaes biomdicas, como em sistemas de liberao de frmacos e em engenharia de tecidos. Os
materiais contendo fosfato de clcio tm sido frequentemente utilizados para a substituio e reconstituio de defeitos sseos. Assim, este
trabalho descreve a obteno de hidrogis mineralizados e sua posterior caracterizao. A quantificao do teor de mineralizao foi
determinada por termogravimetria, sendo encontrados valores em torno de 40% de calcificao, que corresponde a valores de resduo a 750oC.
Os resultados por EDX e raios-X indicam que o fosfato de clcio depositado hidroxiapatita estequiomtrica e que os cristais esto distribudos
na superfcie dos hidrogis.
Palavras-chave: Termogravimetria, mineralizao, hidrogis.
composio ser majoritariamente gua, essa caracterstica
1. Introduo torna os hidrogis compatveis com a maioria dos tecidos
vivos. Alm disso, so maleveis e macios o que minimiza
A sntese de materiais biomimticos consiste na os danos para o tecido circundante durante e aps o
combinao de fosfato de clcio com uma matriz polimrica implante. Assim, os hidrogis podem ser utilizados tanto
que permite a obteno de materiais que quando implantados para a rea de regenerao tecidual, como tambm para
estimulem a osteogneses [1]. Uma grande variedade de liberao controlada de frmacos e fatores de crescimento
substitutos sseos naturais e sintticos tem sido considerados [5].
para a reparao ssea. Dentre estes substituintes, A combinao de hidrogis e cermicas de fosfato de
biomateriais contendo fosfato de clcio tem sido clcio levam a formao de uma matriz promissora para a
frequentemente utilizado para a substituio e reconstituio rea de regenerao tecidual com a combinao das
de defeitos sseos [2]. Este uso est baseado em uma srie propriedades dos materiais [6]. Como forma de melhorar a
de caractersticas como biocompatibilidade, bioatividade e bioatividade e propriedades mecnicas de hidrogis, neste
excelentes propriedades osteocondutoras. trabalho se prope a formao de materiais compsitos entre
A hidroxiapatita (HA) o mais importante os biopolmeros quitosana, xantana e colgeno e um material
biomineral encontrado em tecidos duros naturais, mas como inorgnico (fosfato de clcio), atravs da mineralizao in
outros fosfatos de clcio, apresentam baixas propriedades vitro, com o intuito de induzir o crescimento de HA na sua
mecnicas. Por isso, sua combinao com matrizes superfcie. Poucos trabalhos na literatura descrevem a
polimricas pode promover o aumento das propriedades determinao quantitativa do teor de mineralizao por
mecnicas e biocompatibilidade do material formado [3]. A termogravimetria, mas esta tcnica pode ser utilizada, uma
biomineralizao, que o processo de formao natural de vez que a hidroxiapatita, o produto desejvel no processo de
apatita em humanos e animais pode ser simulada in vitro, mineralizao, estvel at 1200C.
com a deposio de fosfato de clcio na superfcie de
hidrogis pela imerso da matriz polimrica em uma soluo 2. Experimental
aquosa de clcio e fosfato. Este mtodo conhecido como
2.1 Componentes dos hidrogis
mtodo biomimtico, que o principal passo para iniciar a
nucleao de clcio e fosfato na matriz polimrica [1]. Para a extrao da -quitina a partir de gldios de
Para a obteno de hidrogis, polissacardeos tm lula, seguiu-se o um processo corriqueiro no laboratrio,
sido utilizados devido a sua biocompatibilidade, fontes baseado no protocolo de obteno da quitosana descrito
abundantes e baixo custo. Os hidrogis so redes anteriormente [7] que consiste em trs etapas:
polimricas tridimensionais, compostos por uma fase slida desmineralizao, desproteinizao e desacetilao. Para o
que representa 10% do volume total do gel e o restante da processo de desmineralizao foi utilizado 40,0 g de gldio
composio, a fase liquida, gua. [4]. A fase slida garante de lula modo com HCl 0,55 mol L-1 temperatura de 25oC
a consistncia do gel, proporcionando a capacidade de por 2 h com agitao mecnica constante. Aps isso, o
absorver grandes quantidades de gua, mas ao mesmo material foi lavado at a neutralidade e seco a 37 oC. No
tempo, mantendo-se insolvel no meio aquoso. Devido a sua

* Endereo para correspondncia: Tel.: +55 16-3373-9976

E-mail: amplepis@iqsc.usp.br (A. M. de Guzzi Plepis)

2013 Published by IIAT Instituto Internacional de Anlise Trmica

doi: s/n
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processo de desproteinizao o slido obtido foi aquecido a
80oC por 1 hora com NaOH 0,30 mol L-1, lavado at a
neutralidade e seco em estufa, sendo obtida a -quitina. Na
ltima parte do procedimento obtm-se a quitosana atravs
da desacetilao parcial dos grupos acetamida em que a -
quitina obtida aquecida com NaOH 40% (massa/massa) a
80oC durante 3 h em atmosfera de nitrognio. A partir da
quitosana obtida preparou-se uma soluo com concentrao
0,5% em cido actico 1,0%. O grau de acetilao foi
determinado por titulao condutimtrica [8] e o valor
encontrado foi de 10,53 % 0,03.
O colgeno aninico foi obtido por hidrlise alcalina
de tendo bovino por tratamento com uma soluo alcalina
contendo hidrxidos, sulfatos e cloretos de Na+, K+ e Ca2+
por um perodo de 24 h a 25C, seguido da estabilizao
com uma soluo contendo cloretos e sulfatos dos mesmos
ctions. Aps isso, foram realizadas lavagens com cido
brico (3%), gua destilada, EDTA 0,3% e gua destilada
novamente. O gel foi obtido por extrao e homogeneizao
em soluo de cido actico pH 3,5 e preparada uma soluo
com concentrao de 0,5%. A reao de hidrlise do
colgeno produz uma matriz de colgeno polianinico
carregado negativamente, a pH 7,4 [7].
A xantana utilizada foi produzida pela bactria
Xanthomonas campestris e comercializada pela Fluka
BioChemica. O material foi utilizado sem prvia
purificao. A soluo de xantana (concentrao 0,5%) foi
preparada pela dissoluo desta em gua desionizada a
temperatura de 25oC.
2.2 Obteno dos hidrogis
janela ultrafina ATW II (Atmosphere Thin Window), de
resoluo de 133 eV 5,9 keV, acoplado a um Microscpio
Eletrnico LEO 440 (LEO Electron Microscopy Ltd), com
um detector Oxford (Oxford Instruments Inc.). Esta tcnica
foi utilizada para determinar a relao Ca/P do fosfato de
clcio depositado na matriz. Esta relao foi obtida pela
mdia dos teores dos elementos clcio e fsforo presentes
nas matrizes em trs reas distintas.
As curvas termogravimtricas foram obtidas
utilizando-se amostras de aproximadamente 10 mg, em
atmosfera de ar sinttico com variao de temperatura de 25
a 800oC e razo de aquecimento de 10oC min-1 em um
equipamento TGA 2050 (TA Instruments).
Os difratogramas de raio-X das matrizes
mineralizadas foram obtidos em um difratmetro automtico
Rigaku-Rotaflex Ru-200B, com radiao monocromtica de
CuK (1,5418 ) com potncia de 50 kV, 100 mA.
3. Resultados e Discusso
A tcnica de microscopia eletrnica de varredura
(MEV) foi utilizada para observar a deposio de sais de
fosfato de clcio na superfcie dos hidrogis. Atravs das
fotomicrografias por MEV (Fig. 1) possvel observar que
houve deposio de sais de fosfato e que estes esto
distribudos de forma homognea na superfcie das matrizes
polimricas. Para QXm (Fig.1A), esta distribuio foi
observada somente na superfcie do hidrogel e diferena nos
materiais mostra que para o hidrogel QXCm, alm de se
distriburem na superfcie, os sais de fosfato tambm se
depositam na fibra de colgeno (Fig. 1B).

Os hidrogis foram preparados nas propores

quitosana/xantana (1:2) e quitosana/xantana/colgeno
(1:2:0,5) e denominados QX e QXC. Aps isso, foram
dialisados em tampo (fosfato dissdico cido ctrico) pH
5,6, lavados com gua desionizada, congelados e
liofilizados.

2.3 Mineralizao e caracterizao

A mineralizao in vitro foi feita pelo mtodo de

imerso alternada (6 x 10 min), processo utilizado no grupo,
e descrito anteriormente [9]. Para isso, foram utilizadas
solues de CaCl2 0,20 mol L-1 (pH 7,4) e Na2HPO4
0,12 mol L-1 (pH 9,0) ambas preparadas em tampo Tris
(0,050 mol L-1). Os hidrogis denominados QXm e QXCm
foram lavados, liofilizados e caracterizados por
termogravimetria (TGA), microscopia eletrnica de
varredura (MEV), espectroscopia de energia dispersiva por
raio-X (EDX) e raios-X.
Para a tcnica de microscopia eletrnica de varredura
(MEV) as amostras foram colocadas nos suportes
apropriados e recobertas com uma fina camada de carbono
de 20 nm de espessura, e as fotomicrografias obtidas em um Figura 1. Fotomicrografias por MEV. Em A, QXm e em B,
microscpio da marca ZEISS modelo LEO-440. QXCm. Aumento de 10 000 x.
A anlise de Energia Dispersiva por raio-X (EDX) foi
realizada em um equipamento EDX LINK ANALYTICAL,
(Isis System Series 200), com detetor de SiLi Pentafet,

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O EDX foi utilizado para verificar a razo Ca/P do
sal de fosfato de clcio que foi depositado na matriz. Com
isso, possvel identificar o tipo de sal de fosfato depositado
na matriz polimrica. A Figura 2 mostra um espectro de
EDX obtido para o hidrogel QXm, indicando a presena dos
picos revelando presena dos principais compostos do
mineral: carbono (0,2 KeV), oxignio (0,5 KeV), clcio
(4,0 KeV) e fsforo (2,0 KeV). A razo Ca/P foi de 1,67
para QXm e de 1,65 para QXCm, que so valores prximos
ao valor terico da hidroxiapatita (HA) estequiomtrica
(1,67), conforme descrito em literatura [10].
intervalo de temperatura estudado, no ocorre perda de
massa deste composto inorgnico, o que permite o uso desta
tcnica para a determinao da quantidade de fosfato de
clcio depositado nos hidrogis.
Para os hidrogis no mineralizados (QX e QXC)
observa-se os trs estgios de perda de massa, caractersticos
para materiais formados por polmeros: o primeiro se refere
perda de gua estrutural (25-200C), o segundo,
degradao trmica das cadeias polimricas (200-400C) e o
terceiro (400-700C), carbonizao dos polmeros. Os
valores de resduos, obtidos a 750C mostram valores de
1,8% para QX e de 4,5% para QXC, que provavelmente
esto relacionados a sais residuais do processo de obteno
de colgeno e tambm porque a xantana utilizada no passou
por um processo prvio de purificao. A Tabela 1 mostra os
valores de porcentagem de perda de massa obtidos para cada
intervalo de temperatura.
Tabela 1. Porcentagem de perda de massa obtida atravs das
curvas termogravimtricas

% Perda de Massa
Amostra
1 etapa 2 etapa 3 etapa Resduo
(25-200C) (200-400C) (400-700C) (750C)
HA 0,5 0,6 0,4 98,5
Figura 2. Espectro de EDX do hidrogel QXm. QX 13,9 66,8 17,5 1,8
QXC 12,3 53,7 29,5 4,5
As curvas termogravimtricas (Fig. 3) foram
QXm 11,2 40,3 8,9 39,6
utilizadas para determinar a quantidade de resduo
QXCm 9,8 32,2 14,2 43,8
inorgnico presente a 750 oC, que expressa o teor de
mineralizao dos hidrogis. O uso desta tcnica til, pois
a hidroxiapatita (produto mais desejvel durante a Para os hidrogis mineralizados (QXm e QXCm),
mineralizao) estvel at 1200C [11] e nesta observa-se uma mudana no comportamento das curvas
temperatura, todo o material orgnico presente j se quando comparado as curvas obtidas para os hidrogis no
decomps. Foram obtidas curvas termogravimtricas das mineralizados. Neste caso, ainda so observados os trs
amostras de hidrogis mineralizados e no mineralizados, estgios de perda de massa descritos anteriormente, mas a
com o intuito de comparar a diferena no perfil de perda de partir de 600C, as curvas tornam-se constantes e no mais
massa quando os sais de fosfato so depositados na matriz observado a mudana nos valores de perda de massa. Os
polimrica. resultados mostraram que para o QXm a quantidade de
resduo foi de 39,6 % e para o hidrogel QXCm foi de
43,8 %, indicando que HA est presente pois termicamente
estvel nesta temperatura. A presena de colgeno provoca
um aumento de cerca de 4% na quantidade de fosfato de
clcio depositado, que pode estar relacionado ao material
que alm de depositado na superfcie dos hidrogis, tambm
se deposita nas fibras colagnicas, como mostrado pelas
fotomicrografias por MEV (Figura 1B).
A difrao de raios-X permite verificar a estrutura
cristalogrfica do sal de fosfato de clcio obtido na
mineralizao. A Tabela 2 mostra que os resultados para os
hidrogis mineralizados so similares aos da HA sinttica de
acordo com o difratograma padro da JCPDS (9-0432).
Tabela 2. Principais valores de d para as matrizes
mineralizadas
Figura 3. Curvas termogravimtricas da HA, dos hidrogis
no mineralizados e mineralizados (ar sinttico, 25 a 800 oC Amostras Principais valores de d ()
e 10 oC min-1). QXm 2,83 2,70 3,33 1,90
QXCm 2,86 2,65 3,36 1,88
A Figura 3 mostra o perfil de perda de massa da JCPDS (9-0432) 2,81 2,72 3,43 1,84
hidroxiapatita (HA), em que se observa que dentro do

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Os difratogramas dos hidrogis mineralizados so 4. Concluso

mostradas na Figura 4A e 4B.
Os resultados de mineralizao in vitro indicaram que
os hidrogis preparados neste trabalho induzem a deposio
de fosfato de clcio na superfcie do material, com uma
relao Ca/P semelhante hidroxiapatita estequiomtrica.
Alm disso, a presena de colgeno aumenta a quantidade de
sal depositado no hidrogel, confirmado pela tcnica de
termogravimetria. Devido s suas caractersticas, estes
materiais so promissores para aplicao na rea de
regenerao ssea.

Agradecimentos

MMH agradece ao CNPq pela bolsa concedida

(Processo 140362/2008-8).

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