FILTRACION POR MENBRANA

ANASTASYS BEDOYA
OBJETIVOS
Entender el fundamento de la tcnica de filtracin a travs de la membrana para la
deteccin de coliformes fecales y E. coli en agua
Analizar la Cantidad de coliformes totales y E. coli de varias muestras de agua mediante
el mtodo de filtracin por membrana

INTRUDUCCION
Debido a que un gran nmero de enfermedades son transmitidas por va fecal-oral
utilizando como vehculo los alimentos y el agua, es necesario contar con
microorganismos que funcione como indicador de contaminacin fecal. Estos deben de
ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener una
sobrevivencia similar a la de los patgenos intestinales y debe de ser capaces de
desarrollarse extra intestinalmente. El grupo coniforme es constante, abundante y casi
exclusivo de la materia fecal, sin embargo, las caractersticas de sobrevivencia y la
capacidad para multiplicarse fuera del intestino tambin se observan en aguas potables,
por lo que el grupo coliforme se utiliza como indicador de contaminacin fecal en agua;
conforme mayor sea el nmero de coliformes en agua, mayor ser la probabilidad de
estar frente a una contaminacin reciente. Cuando los coliformes llegan a los alimentos,
no slo sobreviven, sino que se multiplican, por lo que en los alimentos el grupo coliforme
adquiere un significado distinto al que recibe en el agua. En productos alimenticios que
han recibido un tratamiento trmico (pasteurizacin, horneado, coccin, etc.), se utilizan
como indicadores de malas prcticas sanitarias. Los microorganismos coliformes
constituyen un grupo heterogneo con hbitat primordialmente intestinal para la mayora
de las especies que involucra.1
La identificacin de Coliformes totales es ms difcil ya que estos pueden provenir de
suelo, y de superficies de agua dulce por lo que no siempre son intestinales. La presencia
de Coliformes sugiere fallas en la eficacia del tratamiento y la integridad del sistema de
distribucin. La identificacin de las cepas aisladas puede a veces dar una indicacin
sobre el origen. La filtracin por membrana es el mecanismo mediante el cual se atrapan
en la superficie de la membrana microorganismos cuyo tamao es mayor que el tamao
del poro 0.45 um, esto gracias a que una bomba elctrica ejerce una presin diferencial
sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los contaminantes de tamao menor que
el especfico del poro atraviesan la membrana o se quedan retenidos en su interior, las
bacterias quedan en la superficie de la membrana y luego est es llevada a un medio de
enriquecimiento selectivo, en el IDEAM se utiliza el medio de cultivo Chromocult el cual
promueve el crecimiento y la identificacin.2
 METODOLOGIA

Esterilizacin de los
frascos en el autoclve

Recoleccin de las
muestras por parte de los
diferentes grupos

Se llevaron las muestras de

agua para su posterior
anlisis

Colocamos la porta filtros

estril sobre la base del
manifold

Colocar el embudo y
Adicionar la muestra a
analizar

Agua del estanque Agua del grifo

de perras
 Se conecta la bomba y
comienza a filtrar las
diferentes lquidos y
pudimos observar que el
agua que estaba ms
contaminada se demoraba

Por ultimo se pone la membrana

en el agar brilliance para
observar si hubo crecimiento o
no
Resultados
En la prctica de filtracin por membrana se destacaron varias ventajas importantes
como la rapidez de realizacin del procedimiento y el posterior anlisis de resultados, al
observar el filtrado de las muestra de agua en el agar Briliiance se observ el cabio de
color del cultivo lo que indico la presencia de microrganismos como podemos ver en la
siguiente (imagen 1)

Imagen 1. Crecimiento de coliformes fecales en agar brilliance

Foto tomada con celular Motorola Juan camilo cortes 10MP
Universidad Libre Seccional Pereira

Oxoid Brilliance E. coli/coliform Selectivo Agar es un medio cromo gnico para deteccin y
recuento de E. coli y otros coliformes (importantes indicadores de los status de higiene) en
muestras de alimentos y aguas. Los agentes cromognicos del medio se emplean para
detectar la actividad -glucuronidasa de E. coli y la actividad galactosidasa del grupo
de coliformes (E. coli incluida), ofreciendo una clara diferenciacin entre ellos y sobre el
medio de cultivo (coliformes colonia color rosado, E. coli colonia color prpura) se
pudo determinar la presencia de coliformes cave denotar que el color original es rosado
solo cuando se le agrega el reactivo e Kovacs R21522, BactiDropTM Obtienen el color
rojo caractersticos que nos indica que la prueba fue positiva la muestra de agua potable
no se observ la aparicin de ningn microorganismo fue ms como un control para
observar el contraste de resultados y es apta para el consumo humano segn la
normatividad
CONCLUCIONES
En general la prctica fue exitosa por que aprendimos el fundamento de la filtracin por
membrana realizamos el laboratorio segn la gua pudimos observas las diferencias
notables entre un agua potable y una contaminada realizamos todo el montaje del equipo
y aprendimos a utilizarlo se observ la degradacin de E . coli en medio de cultivo que
nos llev a deducir el grado de contaminacin del liquido

ANEXOS
FILTRACIN POR MEMBRANA:
1. Cules son las precauciones a tener en cuenta para tomar la muestra de agua potable,
con fines de analisis microbiologico?
2. Qu sugiere la guia del IDEAM para la determinacin de E.coli y Coliformes, haciendo
uso de la metodologa de filtracin por membrana?
3. Qu es una validacin? y cmo podra validarse un mtodo de filtracin por
membrana?

1. Primero que todo esterilizar los recipientes en los cuales va a depositar el agua , tener en
cuenta el lugar de extraccin del lquido si es muy lejano o no para su debida conservacin la
forma adecuada para hacer un muestreo segn la norma que lo rija en caso especifico

2 E. coli: Escherichia coli: Bacilo gram negativo, capaz de desarrollarse en

presencia de sales biliares u otros agentes (tensoactivos) que tengan
propiedades similares e inhibitorias del crecimiento y que son capaces de
fermentar la lactosa a temperaturas de 35C +/- 2C, con produccin de cido,
gas y aldehdo en un lapso de 18 a 48 horas. Oxidasa negativa, no esporgena
y reduce el nitrato a nitrito. Tambin es capaz de producir indol a partir de
triptofano a una temperatura de 44c +-05 en un tiempo de 21+/- 3 horas.
Poseen la enzima B-glucoronidasa, la cual es detectada por medios
cromgenos o fluorgenos. Medio de Cultivo Selectivo: Medio que promueve el
crecimiento de microorganismos especficos, al tiempo que inhibe, total o
parcialmente, el crecimiento de otros microorganismos. Como es este medio de
cultivo UFC/100mL: Unidades formadoras de colonias por 100 mililitro
mL:mililitros. LDM: Limite de Deteccin del Mtodo Salmon-GAL: Sustrato
cromognico que reacciona con la enzima galactosidasa y las colonias toman
color rojo salmn X-glucoronide: Sustrato cromognico que reacciona con la
glucoronidasa y produce color azul en las colonias. 3. ASPECTOS DE SALUD Y
SEGURIDAD LABORAL En el laboratorio de microbiologa se debe tener en
cuenta que los profesionales y auxiliares, estn en contacto permanente con
microorganismos potencialmente peligrosos capaces de producir enfermedad,
por lo tanto, debe haber una manipulacin con la debida responsabilidad y
cuidado. El riesgo de infeccin por agentes microbianos se produce por:
inhalacin, ingestin, contacto directo, a travs de cortes de piel y a travs de
la conjuntiva. Las manipulaciones de mayor riesgo de accidentes en el
laboratorio son: pipeteado, apertura de envases que contienen
microorganismos patgenos, aerosoles, homogenizadores, centrifugas, asas,
cajas de petri, y ruptura de tubos. El personal del laboratorio debe estar
entrenado contra los peligros potenciales relacionados con su trabajo

Validacin
Validacin es demostrar mediante un proceso que ofrece evidencia de quedicho mtodo
es capaz de servir para su propsito planeado, es decir, paradetectar o cuantificar un
grupo microbiano o microorganismo especifico, con una correcta precisin y exactitud
(GTC 84).La validacin en sus mtodos de ensayo debe reflejar las condiciones reales
del ensayo. Para lograr dicho propsito se pueden utilizar muestras o
productos en su forma natural, o muestras inoculadas previamente con concentraciones
conocidas de microorganismos. La persona a cargo del anlisis debe ser tener en cuenta,
que al inocular una matriz con l, o los microorganismos que se quieren detectar, tan solo
est recreando de manera superficial la presencia de contaminantes naturales (ENAC,
2002).Los mtodos de ensayo microbiolgicos cualitativos, tales como los que el
resultado se expresa en trminos de presencia/ausencia, y los procedimientos de
confirmacin e identificacin, deben ser validados estimando, cuando sea apropiado, su
especificidad, exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, lmite de
deteccin, efecto matricial, repetibilidad y reproducibilidad(ENAC, 2002).
Yo crea que se hara un control de calidad a los equipos como bombas y alas membranas
para verificar su buen funcionamiento ptimo tambin la regulacin de los patrones de
control de los mismo evaluar la eficacia un control de esterilidad y pruebas que den la
certeza y confiabilidad de que la tcnica garantiza el mejor de los resultados

Referencias
1Mtodo para la determinacin de bacterias coliformes, coliformes fecales y
Escherichia coli por la tcnica de diluciones en tubo mltiple (Nmero
ms Probable o NMP) Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y
O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed.
Facultad de Qumica, UNAM. Mxico

2 DETERMINACIN DE ESCHERICHIA COLI Y COLIFORMES TOTALES EN AGUA

POR EL MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA EN AGAR CHROMOCULT
3 Alta tecnologa en Medios de Cultivo Bacteriolgico