Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas.

Materia: Bioqumica Microbiana.

Prctica: Determinacin de la Actividad de la formiato

deshidrogenasa y nitrato reductasa en Escherichia coli.

Alumnos: Aldana Lozano Leslie Alexandra

Bello Barrn Scarlette

Lpez Morales Pedro Daniel

Ramrez Garca Alfredo

Grupo: 5IM2

Seccin: 2

Profesor: Miguel ngel Marn Hernndez

Fecha de realizacin: 04/Abril /2017

Fecha de entrega: 21/Abril /2017

Aspecto Calificacin mn-max Calificacin

Hiptesis 0.0 1.0 puntos
Objetivo 0.0 1.0 puntos
Anlisis de resultados finales 0.0 1.0 puntos
Discusin de resultados 0.0 4.0 puntos
Conclusiones 0.0 2.0 puntos
Bibliografa 0.0 1.0 puntos
TOTAL 0.0 10.0 puntos
 HIPOTESIS

1) Si Escherichia coli es capaz de utilizar al nitrato como ltimo aceptor de electrones y lo

reduce en ausencia de oxgeno, realizando una respiracin anaerobia, con la
participacin de un complejo enzimtico que involucra a la nitrato reductasa y a la
formiato deshidrogenasa, entonces una modificacin en las condiciones de cultivo
altera la sntesis y actividad de este complejo enzimtico, y es distinta la actividad en
aerobiosis, anaerobiosis, presencia de oligoelementos y presencia de nitratos.

2) Si en presencia de nitrato con formiato deshidrogenasa y nitrato reductasa aumentan

su actividad enzimtica, se dice que estas enzimas son inducidas al haber como nico
aceptor de electrones en la cadena respiratoria al nitrato.

3) Si la actividad enzimtica de formiato deshidrogenasa y nitrato reductasa en

Escherichia coli aumenta mayormente al haber en el medio la presencia de
oligoelementos, entonces se dice que estas enzimas necesitan de un cofactor para
poder realizar con mayor eficiencia la reaccin bioqumica.

OBJETIVOS

Determinar la actividad enzimtica de la Formiato Deshidrogenasa (FoDH), Nitrato

Reductasa (NR) y del complejo Formiato Deshidrogenasa-Nitrato Reductasa (FoDH-
NR) en Escherichia coli.
En base a diferentes condiciones de cultivo verificar la reduccin de nitrato a nitrito en
el proceso de respiracin celular de Escherichia coli.
Observar el carcter inducible de este proceso respiratorio en condiciones aerbicas y
anaerbicas y presencia y ausencia de Nitrato.
Contenido de protena y actividades Extracto de clulas de E. coli nativa crecidas en condicion
enzimticas anaerbicas aerb
1 2 3 4
sin NO3 con NO3 con NO3 con
+ + sin +
oligoelementos oligoelementos oligoelementos oligoele
Mg protena/ml extracto 20.772 32.823 32.958 22.6
Actividad especfica de la FoDHasa
(A600/min/mg protena) 0.903 0.0147 0.0125 0.71
Actividad especfica de NRasa
(nmoles de NO2/min/mg protena) 126.664 85.2222 78.5578 167.6
Actividad especfica del complejo
(nmoles de NO2/min/mg protena) 340.5064 57.632 36.157 209.
Poner de manifiesto la importancia de Cofactores (Oligoelementos) en la actividad
enzimtica y como se afecta sta el prescindir de ellos.
RESULTADOS
 DISCUSION DE RESULTADOS

Escherichia coli es un microorganismo facultativo, el cual puede utilizar al oxigeno como

aceptor final de electrones, o bien es capaz de utilizar otras molculas como el nitrato
empleando una respiracin anaerobia. Debido a esto es posible que durante la
experiencia se pueda colocar a dicho microorganismo tanto en ausencia como en
presencia de oxgeno, obteniendo energa ya sea por respiracin anaerobia o aerobia, y
por fermentacin teniendo en cuenta la diferencia de energa obtenida con cada una de
ellas.

El complejo de formiato deshidrogenasa-nitrato reductasa resulta de gran importancia

para el microrganismo E. coli ya que le permite vivir en medios donde las condiciones son
anaerobias llevando a cabo la reduccin de nitratos, e inclusive funciona (de forma menos
activa) en condiciones aerobias lo que le permite desarrollarse en cualquier de las dos
formas anaerbica o aerbicamente.

En la prctica se determina la actividad especfica de la enzima formiato deshidrogenasa

(FoDHasa), nitrato reductasa (NRasa) y del complejo FoDHasa-NRasa. Se obtiene
actividad especifica en base a la protena obtenida por el mtodo de Lowry para cada uno
de los extractos de cultivo (Tabla 1).

Al ser las enzimas que efectan la reduccin de nitrato inducibles, se adiciona KNO 3
esperando que ste favorezca su actividad enzimtica, esto implicara esperar una
actividad muy baja en el caso de el extracto 1 por no tener KNO 3 adicionado en el
extracto; sin embargo no se obtiene lo esperado en los resultados (tabla 1) lo cual podra
deberse a errores en cuestin del mtodo o espectrofotmetro utilizado o debido a los
reactivos utilizados ya que se pudieron haber oxidado antes de emplearlos como el
hidrosulfito.

Comparando los datos del extracto 3 y 2 si se obtiene un comportamiento similar al

esperado, ya que por no tener el tercer extracto los oligoelementos como molibdeno que
ayuda al metabolismo de los cidos grasos en la beta oxidacin como la fijacin y
utilizacin del nitrgeno para los microrganismos, su sntesis es afectada y da as una
baja actividad especfica.

En el caso de la determinacin en condiciones aerobias (4), se espera obtener menor que

lo obtenido para el extracto 2, ya que al utilizar la respiracin aerobia producir ms
energa por el potencial de xido reduccin, el microorganismo tendera a utilizar como
primera opcin al oxgeno como aceptor final de electrones y de ser as, ya no seran
utilizadas las enzimas que llevan a cabo la reduccin del nitrato cuando es ste el ltimo
aceptor.
 CONCLUSIONES
Escherichia coli es capaz de respirar en condiciones aerobias y anaerobias con
nitrato.
Se determin la actividad enzimtica de Formiato Deshidrogenasa, Nitrato Reductasa
y del complejo Formiato Deshidrogenasa-Nitrato Reductasa
Los Oligoelementos son de suma importancia y se demostr al observar la actividad
enzimtica.
Se determin la cantidad de protena por el mtodo de Lowry.
BIBLIOGRAFIA

https://books.google.com.mx/books?id=Io-
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https://books.google.com.mx/books?
id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA166&dq=anaerobios+facultativos&hl=es-
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