MESA #6

INTEGRANTES:
BELLIDO BORDA, MAX. (-)
FIGUEROA ESCUDERO, NATALY ISABEL.(+)
RAMOS ALVA, NADIA MISHELL.(+)
OTINIANO MEGO, GREYS LASTENIA. (+)
PROFESORA:
Mg. JORGE MONTALVO, PAOLA.
GRUPO:
LUNES (F*)
HORA: 2-4pm
INTRODUCCION

La creatinina ha sido tomada como un indicador muy confiable de la funcin renal. Cuando el rin tiene
algn tipo de compromiso, el nivel srico de creatinina aumenta, advirtiendo sobre un mal funcionamiento
incluso antes de que el paciente reporte sntomas. Los valores normales de creatinina son
aproximadamente 0.5-1.2 mg/dl. Individuos jvenes o de edad media musculosos pueden tener valores
mayores, mientras los ancianos tienden a tener valores menores.
El hallazgo de Jaff, que consista en que la creatinina reaccionaba en medio fuertemente alcalino con
cido pcrico originando un compuesto (complejo de Janovski) de color rojo, permiti el desarrollo de un
amplio abanico de determinaciones basadas en la formacin de este complejo y su medicin
espectrofotomtrica.

OBJETIVOS

1. Observar aplicacin directa y til de la Ley de Lambert y Beer en los metodos

espectrofotometricos con uso de un unico estandar, particularmente para la
cuantificacion de creatinina.
2. Ejercitarse ene el concepto de factor de calibracion para calculos de concentraciones
en espectrofotometria.
RESULTADOS

TUBO REACTIVO BLANCO ESTANDAR MUESTRA

Sol. Estndar de creatinina - 3ml -

Muestra clarificada - 3ml

H2O destilada 3ml - -

Sol. De picrato alcalino 1:1 1.5ml 1.5ml 1.5ml

(preparado en el
momento)
Mezclar y agitar Por inversin: Dejar reposar Por 10 min y 520
nm
Mesa1 0.084 0.203 0.117

Mesa2 0.053 0.170 0.110

Mesa3 0.06 0.223 0.106

Mesa4 0.079 0.227 0.125

Mesa5 0.078 0.084 0.142

Mesa6 0.091 0.214 0.133

SOLUCION DE CREATININA

100mg (Creatinina) -------------100ml (solucin)

X: 0.6mg -------------0.6ml (2/3) N

0.6mg (Creatinina) -----------100ml (solucin)

Y: 1.8 x 10^-2mg (Creatinina) -----------3ml

1.8 x 10^-2mg ---------4,5ml ( Standar + picatro )

 2 mg
1.8 x 10
--------1ml
4,5

2 mg
1.8 x 10
C(st): 4,5 = 4 x 10^-3 mg/ml

FORMULA
C(m) C(st)
A (m) : A (st )

4 x 103 mg/ml
Cm: 0.123 x 0.042

Cm: 1.366 x 10^-3 mg/ml

Grupo 6
A (st): 0.214-0.091: 0.123
A (m): 0.133-0.091: 0.042
1.366 x 10^-3 mg (Creatinina) ---------------- 1ml
(1.366 x 10^-3 mg x 4.5)=6,147 x 10^-3mg -----------------4,5ml

6,147 x 10^-3 ------------

3ml (filtrado)
M: 0,04098mg-----------20ml (filtrado)

0,04098mg ------------- 2ml (sangre)

S: 2,049 mg-----------------------100ml (sangre)

Piden en mg/dL
2,049 mg 1000 ml 20,49 mg
100 ml = 0.02049mg/ml x L = L

20,49 mg 2 , 0 49 mg
L X 0,1 = dL
DISCUSIONES Y CONCLUSIONES

Valores normales de creatinina

Los valores normales de creatinina se sitan en los hombres adultos entre 0,7 y
1,3 mg/dl.

En las mujeres adultas, se sita entre 0,5 y 1,2 mg/dl.

Mientras que en los nios, se suele situar de 0,2 y 1 mg/dl.

Por tanto, unos niveles de creatinina por encima de lo normal puede ser un indicativo de
que los riones no estn funcionando correctamente.

En la clase, se trabaj con sangre de vaca, y la concentracin de creatinina en la

muestra de sangre en 100ml de sangre del vacuno, encontraremos 2.049mg de
Creatinina.
Como el nivel de creatinina esta relacionando con la masa muscular el valor de la
creatinina en vacunos ser mayor que en humanos, alcanzando 1.5 mg/dl. En la
prctica de laboratorio tras la evaluacin de la sangre se obtuvo como 2.049 mg/dl
de concentracin de creatinina. Como se puede observar el valor obtenido difiere
bastante del valor normal, lo cual significa que hay
Los instrumentos y equipos deben estar limpios y libre de sustancias que
interfieran con las reacciones.
Se tiene que hacer la desproteinizacin debido a que las protenas interfieren en
la reaccin de creatina.
Cuando el reactivo tiene color, se tiene que usar un blanco de reactivo.
Normalmente se usa para todas las reacciones.

BIBLIOGRAFIA
GT Lab. Avance. 2011. Creatinina U.V. Liquid One Step. Rosario-Argentina.
Manual de diagnstico rpido de medicina veterinaria de especies de granja
.Fennen.W.1997.edit.LIMUSA.pag535, 536.
Mario A. Dvrokin, Daniel P. Cardinali, 2010, Bases Fisiolgicas de la Practica Medica, 14va edicin,
editorial Panamericana, Espaa, pg. 31.
CUESTIONARIO

1. Una disolucin aislada de E. Coli da una absorbancia de 0.7930 a 260

nm en una celda de 1 cm, a pH 4.5. Si el E es 197. Calcular la
concentracin en mg/Ml

Absorbancia = 0.7930
b = 1 cm
a = 197
A=axbxc
7930= 197 x 1 x c
c = 0.00403 mg/mL
2. Calcular el coeficiente de extincin molar a 361 nm para la
acuocobalamina en tampn fosfato 0.1 M a pH 7.0 a partir de los siguientes
datos obtenidos en una celda de 1 cm. (hallar el coeficiente de extincin
molar para cada solucin y luego el promedio de estos valores
SOLUCION CONC x 10-5 I0 I
M
A 2.23 93.1 27.4
B 1.90 94.2 32.8

solucin A:

Io
Log EM361bc
I
93.1
Log A EM361x1x2.3x10 -5 A EM361 = 2.3821x10 4 cm-1M-1
27.4

solucin B:
 Io
Log EM361bc
I
94.2
Log B EM361x1x1.90x10 -5 B EM361 = 2.4115x10 4 cm-1M-1
32.8

Promedio:

EM361 = A EM361 B EM361

EM361 = 2.3821x10 4 cm-1M-1 + 2.4115x10 4 cm -1M-1
EM361 = 2.3968x10 4 cm-1M-1

3. En una determinacin de glucosa se obtuvieron los siguientes

resultados:
1 2 3 4 5 6 7 8
Glucosa 50 75 100 125 150 175 200 250
mg%)
tramitancia 92.9 89.9 86.3 84.3 81.3 78.7 73.8 70.5
Absorbanci 0.032 0.046 0.064 0.074 0.09 0.104 0.132 0.15
a

Hallar el factor de calibracin promedio, y la concentracin de dos muestras

de suero que resultaron con una tramitancia de 88.3 y 85.11.

Fc1 = 0.50 mg/ 0.032 = 15.625 mg

Fc2 = 0.70 mg/ 0.046 = 15.217 mg

Fc3 = 1.00 mg/ 0.064 = 15.625 mg

Fc4 = 1.25 mg/ 0.074 = 16.892 mg

Fc5 = 1.50 mg/ 0.090 = 16.667 mg

Fc6 = 1.75 mg/ 0.104 = 16.827 mg

 Fc7 = 2.00 mg/ 0.132 = 15.152 mg

Fc8 = 2.50 mg/ 0.152 = 16.447 mg

FcPromedio = (Fc1 + .........+ Fc8 ) / 8 = 6.0565

Clculo de la concentracin:

Amp = 2 - T%

Amp1 = 0.054

Amp2 = 0.070

Cmp = Fc x Amp

Cmp1 = 16.0565 x 0.0540 = 0.8611 mg/mL

Cmp2 = 16.0565 x 0.0700 = 1.1239 mg/mL

4. Para evaluar un metabvolito x, una muestra fue sometidaa dilucin

tomando una parte de ella con 4 partes de agua y luego fue comparada
espectrofotomtricamente con un estndar de 10 mg/mL obtenindose las
siguientes lectruas de absorbancia blanco = 0.023 estndar 0.357 muestra
0.677. Calcule la concentracin de la muestra en mg%.

Concentracin ST/Absorbancia ST = Concentracin Muestra /Absorbancia Muestra

10/0.357= X/0.677
X = 18.96mg/ml

94.8mg/ml de metabolito x
9480mg%
5.-Qu es el factor de disolucin? Explique mediante un ejemplo
FACTOR DE DILUCIN
Para obtener diferentes concentraciones de muestras se requiere realizar diluciones de la misma para
esto se emplea el Factor de Dilucin, el cual se presenta en la siguiente ecuacin:

6. Factor calibracin.-

Es un trmino que relaciona la concentracin de una sustancia con su absorbancia.

Con el factor de calibracin se puede fcilmente determinar la concentracin de una muestra
de concentracin desconocida.

7. Explique la preparacin de la muestra problema(sangre) para la determinacin de creatinina

1.-Desproteinizacion: cido tungstico como agente desproteinzante:
Na2WO4.2H2O+H2SO4H2WO4+Na2SO4
2.-Filtracion: se elimina lo precipitado (sin protenas).
3.-Reaccion de Jaff: creatinina+pricato de Na Acido pricramico

8.-

Solucin estndar Solucin stock Solucin trabajo

una solucin Se denomina solucin
estndar o disolucin madre o stock a
estndar es una disolucin que composiciones
contiene
una concentracin conocida de
un elemento o sustancia especfi
ca, llamada patrn primario que,
por su especial estabilidad, se
emplea para valorar la
concentracin de otras
soluciones, como las
disoluciones valorantes.
concentradas de
nutrientes las cuales
estn formuladas por
sales minerales que se
emplean en un medio
particular. Debido al
elevado nmero de
compuestos que incluye y
a que algunos de ellos se
emplean a muy baja
concentracin, resulta
ms prctico preparar
soluciones madre o
"stocks" concentrados.

9.- Qu funcin cumple la creatinina? Escriba su formula

Permite conocer el estado del rin (nefropatas, insuficiencia renal, entre otros.)

10.- Qu papel cumplen los siguientes reactivos en la cuantificacin de la creatinina?

Tungstato de sodio: acta como agente desprotreinizante, formando H2WO4.
Acido sulfrico: tambin participa en el proceso de desproteinizacion:
Na2WO4.2H2O+H2SO4H2WO4+Na2SO4
Acido pcrico: se reduce a cido picrmico al ponerse en contacto con la creatinina (reaccin de
Jaff), coloracin naranja-rojo cobrizo.

11.- El coeficiente de extincin molar de un complejo yodo-glucgeno a 450nm es 0.20. Calcule la

concentracin del glucgeno en una solucin de complejo en yodo que tiene una absorbancia de
0.36, medida en una cubeta de 3cm.
E=0.2
C=?
A=0.36
L=3cm

A=cxlxE
0.36=cx(3cm)x(0.2M)
C=0.6