Qumica Analtica Ing. M. Sc.

Juan Jos Salazar Daz

Determinacin
I. Objetivo:
Determinar la cantidad de hierro en una muestra de agua, mediante el mtodo
espectrofotomtrico.

II. Fundamento Terico:

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las

investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite
comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la
misma sustancia.

Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece
ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al
espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo.

La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la

estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.

Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la

energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.

El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de

onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos
aquellas longitudes de onda no absorbida.

1. Naturaleza De La Radiacin Electromagntica

La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que se propaga

en forma de ondas. En este fenmeno ondulatorio se define:

a. Longitud de onda (l): es la distancia entre dos mximos de un ciclo completo

del movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I. en nanmetros (nm) y
sus equivalencias son: 1nm = 1mm =10 A0 = 10-9 m.
b. Frecuencia (n): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud
de onda. Su frmula es: n = c/l, y se mide en ciclos por segundo o hertzios.
c. Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son paquetes discontinuos
de E. La E de un fotn depende de la frecuencia y de la longitud de onda,
segn la siguiente expresin: E = h x n = h x c/n (h = Cte. de Planck =
6,62.10-27erg/seg.). La Energa Electromagntica se mide el Ergios. La
relacin entre la longitud de onda y la Energa es inversa, por lo tanto a
menor longitud de onda mayor Energa y viceversa.

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d. Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E radiante, desde

los rayos g de longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud
de onda larga. Se divide en varias regiones, las ms interesantes para
nosotros son:
Regin Ultravioleta: l = 10-380 nm
Regin Visible: l = 380-780 nm
Regin Infrarroja: l = 780-30.000 nm

En la Regin Visible, la luz se descompone en colores. La luz blanca

contiene todo el espectro de longitudes de onda. Si interacciona con una
molcula puede ser dispersada o absorbida.

2. Fenmenos De Interaccin Entre Luz Y Materia

a) Fenmeno de Absorcin

Cuando una partcula que se encuentra en estado de reposo o estado fundamental

interacciona con un haz de luz, absorbe E y se transforma en una partcula en
estado excitado. La molcula absorbe la E de la onda y aumenta su energa, y ese
aumento de energa es igual a la E de la Radiacin Electromagntica absorbida (E
= h.n). La partcula en estado excitado tiende a volver de forma espontnea a su
estado de reposo desprendiendo la E absorbida en forma de calor.

Espectro de Absorcin. Cada especie absorbente, que recibe el nombre de

cromgeno, tiene un determinado espectro de absorcin. El espectro de absorcin
es un grfico donde se representa en ordenadas la Absorbancia y en abscisas la
longitud de onda. La medida de la cantidad de luz absorbida por una solucin es el
fundamento de la espectrofotometra de absorcin.

Por eso es importante trabajar a la longitud de onda a la que la sustancia estudiada

absorbe la mayor cantidad de luz (a mayor cantidad de luz, mayor cantidad de
sustancia).

b) Fenmeno de Emisin

Algunos compuestos, tras ser excitados por la luz, vuelven al estado fundamental
produciendo la emisin de energa radiante. En este caso, lo que se mide es la
energa emitida y, en este fenmeno se basa la fotometra de llama o la
fluorescencia.

3. Leyes de Absorcin

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Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una cierta prdida de
intensidad, debido a la absorcin por parte de la sustancia.

Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz

transmitida:

T =I s / I o ; %T =( I s /I o )x 100.

Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para

evitar este error se hace una primera medida con una solucin de referencia o
BLANCO, que contiene todos los posibles compuestos que intervienen en la lectura
menos el que vamos a medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad
sern referidas a esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se utiliz
en la medida del blanco.

La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la

relacin entre A y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y
la de la T es inversamente proporcional.

La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente:

Si el %T = 100 A = 2-log T = 2-log 100 = 0

Si el %T = 0 A = 2-log 0 =

En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el

aparato lo que mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia.

3.1. Ley De Beer

La absorbancia de una solucin es directamente proporcional ala concentracin y

a la longitud del paso de la luz.

A = e . b. c

Siendo:

A: absorbancia. No tiene unidades.

e: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente de

absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen
condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de solventes, etc.
Sus unidades son 1/ (mol/cm).

b: es la longitud de paso de la luz, en cm.

c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L.

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La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una

sustancia podemos averiguar su concentracin y esto lo podemos hacer de dos
formas:

1. Por comparacin con una solucin conocida: si tenemos 2 soluciones,

una problema (P) y una estndar (S), podemos establecer la siguiente
relacin matemtica entre ellas:
2. A travs de una curva de calibracin: la curva de calibracin es la
representacin grfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje
de ordenadas) frente a la Concentracin (eje de abscisas). Se ensayan
varias soluciones de concentracin conocida y se determinan sus A,
construyndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez
ensayadas las soluciones problemas, su concentracin se averigua por
interpolacin de las A de las soluciones problema en la curva de
calibracin.

Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones

del cromgeno entre las cuales existe una relacin lineal entre Absorbancia y
Concentracin.

Cuando la concentracin del cromgeno sobrepasa los lmites de linealidad se deja

de cumplir la Ley de Beer, convirtindose la recta en una curva. La lectura de la
Absorbancia fuera de los lmites de linealidad se traduce en una concentracin
falsamente baja de cromgeno. En esta situacin, hay que diluir la muestra para
que su concentracin entre en los lmites de la linealidad.

Empleo de los Factores de Calibracin: Para reactivos estables y sistemas

fotomtricos estables, este factor se puede mantener constante, siendo slo
necesario ensayar las muestras problema multiplicando la A resultante por el factor
F.

4. Espectrofotmetro
Se distinguen dos tipos de aparatos:
Fotmetro o Colormetro: se caracterizan porque utilizan filtros que solo permiten el
paso de una determinada longitud de onda.
Espectrofotmetros: utilizan cromadores. Con ellos se obtiene un haz de luz
monocromtico cuya longitud de onda se vara a voluntad. Los monocromadores
pueden ser de dos tipos: prismas y redes de difraccin.

Monocromador de Prisma

4.1. Componentes Del Espectrofotmetro

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Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no

visible.
Tipos de lmparas:
Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del
espectro visible y el ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro
continuo de energa radiante entre 360-950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor duracin y
emiten energa radiante de mayor intensidad.
Lmparas de Hidrgeno y Deuterio: producen un espectro continuo en la
regin ultravioleta entre 220-360 nm.
Lmparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o
espectro de lneas que se utilizan para calibracin de longitudes de onda, se
emplean solo para espectrofotmetros y cromatografa HPLC.
Precauciones:
- Las subidas y bajadas bruscas de tensin producen sufrimiento de la lmpara y
cambios en las lecturas de la Absorbancia.
- La lmpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para que funcione bien el
aparato.

Rendija de entrada: tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y

evitar que la luz dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de
onda.
Monocromadores. Pueden ser:

Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que permite el

paso de la luz. Ej. De vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para
trabajar en el ultravioleta lejano.
Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas situadas a
distancias iguales entre s y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie
metlica. Cada una de estas hendiduras se comporta como un pequeo
prisma.

Rendija de salida: tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese la
cubeta de la muestra, que provocara desviaciones a la Ley de
Beer.
Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin.
Pueden ser de distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares,
redondas). Se obtienen mejores resultados usando cubetas de bordes
paralelos. Si se utilizan cubetas redondas se deben marcar e introducir en el
aparato siempre en la misma posicin. Suelen estar fabricadas en vidrio o
en plstico.
Detector. Puede ser de dos tipos:
Fotoclulas o clulas fotovoltaicas:

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Es una lmina de Cobre sobre la que se extiende una capa de Selenio o de

xido de Cobre. A esto se le conoce como semiconductor. Sobre el
semiconductor hay una capa de metal transparente que sirve de electrodo.
La luz incide sobre el Selenio y ste desprende electrones, que pasan a la
placa de Cobre originando una diferencia de potencial por existir carga
negativa sobre el Cobre y positiva sobre el Selenio. El conjunto se conecta a
un ampermetro que seala el paso de corriente.
Caractersticas: son resistentes; econmicas; sensibles desde el ultravioleta
hasta los 1.000 nm. de longitud de onda; no se requiere batera externa, ni
vaco,...; la corriente producida es directamente proporcional a la Energa
que llega y tienen efecto fatiga, es decir, que presentan una subida inicial
de corriente, que luego decrece progresivamente hasta el equilibrio. Por eso
hay que esperar entre 30-60 segundos entre una lectura y otra.
Fototubos multiplicadores:

Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un ctodo que emite

electrones de forma proporcional a la Energa que incide sobre l. Tiene un
nodo que recoge los electrones y la corriente se multiplica varias veces al
chocar los electrones sobre sucesivos nodos que van teniendo un voltaje
superior al precedente. La seal se amplifica en cientos o miles de veces.

Caractersticas: el tiempo de respuesta es muy rpido, no tienen efecto

fatiga tan altos como la anterior y son muy sensibles.
Medidor: son sistemas de lectura de la Energa elctrica que recoge el
detector y que puede ser lectura directa (se utiliza una clula fotovoltaica) o
puede ser amplificadores de seal como en el caso del fototubo
multiplicador. Los actuales aparatos incorporan lectura digital y clculos
automticos de concentraciones con relacin a las curvas de calibracin.

4.2. Tipos De Aparatos

Espectrofotmetro de Haz Simple: es igual que la descripcin dada para el

espectrofotmetro en general. Consta de los mismos elementos (Ej.
Bilirrubinmetro: para determinar bilirrubina directa en capilar).
Espectrofotmetro de Doble Haz En El Espacio: todos los componentes
estn duplicados, menos la lmpara y el medidor. Dos haces de luz pasan al
mismo tiempo por los distintos componentes separados en el espacio. Esto
compensa las variaciones de intensidad de luz y de absorbancia.

Espectrofotmetro De Haz Doble En El Tiempo: utilizan los mismos

componentes que el espectrofotmetro de haz simple. Dos haces de luz
pasan por los mismos componentes pero no al mismo tiempo. Emplean un
Chopper consistente en un interruptor rotativo del haz luminoso colocado a
continuacin de la rendija de salida. Un sistema de espejos dirige la porcin

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de luz reflejada por el chopper a travs de una cubeta de referencia y de

ah al detector comn. El detector lee alternativamente el haz procedente de
la muestra y el de la cubeta de referencia. Esto compensa la variacin de
energa radiante.

4. Determinacin Espectrofotomtrica de Hierro:

La determinacin de hierro en muestras que contienen bajas concentraciones de

este elemento, se hacen mediante determinaciones espectrofotomtricas, donde el
elemento forma complejos metal-ligante de color rojo. Por ebullicin con HCl, se
logra liberar el Fe en forma inica, luego el hierro se reduce a in ferroso con cido
ascrbico y el hierro reducido se deja reaccionar con 1-10 Fenantrolina
desarrollndose el color rojo, cuya intensidad es proporcional al contenido de hierro
en la muestra, lo cual puede medirse por espectrofotometra. La reaccin general
es la siguiente:

Fe+2+ 3 L Fe L3+2 Rojo

III. Materiales y Reactivos:

Matraces aforados de 100 ml
Tubos de ensayo
HCl 1 N
Solucin de acetato sdico saturado
Acido ascrbico al 1%
Solucin 1-10 fenantrolina al 0,1%
Solucin patrn de Hierro 100 mg/ml
Solucin hija patrn de hierro de 0,01 g/L
IV. Procedimiento Experimental:

N de Tubos T I II III IV V VI
Patrn de Hierro (0,01 g/L) 0 0.1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Agua destilada (ml) 10 9.9 9,8 9,6 9,4 9,2 9,0
Solucin de HCl, 1 N 1 1 1 1 1 1 1
Solucin Saturada de Acetato 0.5 0.5 0,5 0.5 0.5 0,5 0,5
Solucin de cido ascrbico al 0.3 0.3 0,3 0.3 0.3 0,3 0,3
1%
Solucin de 1-10 fenantrolina 1 1 1 1 1 1 1
Contenido de mg de Fe/Litro 0 0.1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

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a) Preparamos la serie de tubos de ensayos numerados, de acuerdo a la tabla

indicada anteriormente, aadiendo sucesivamente cada reactivo y agitando
despus de cada adicin.
b) Dejamos reposar a temperatura ambiente por 30 minutos y lemos la
absorbancia a una longitud de onda de 510 nm.

Procedimiento con la muestra

A 10 ml de agua en un tubo de ensayo, aadimos 1 ml de HCl 1N,

sucesivamente 0,5 mL de solucin saturada de acetato, 0,3 mL de solucin
de cido ascrbico y 1 mL de 1-10 fenantrolina.

Preparamos un testigo de 10 mL con agua destilada con el cual

efectuaremos las lecturas en el Espectrofotmetro

Datos experimentales
Tubos 1 2 3 4 5 6
Concentracin (X) 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Absorbancia (Y) 0,006 0,007 0,021 0,021 0,021 0,022

Con los datos se puede graficar la siguiente grfica.

0.03

0.02

0.02
Absorbancia
0.01

0.01

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Concentracin de Fe (mg/L)

En la grfica se puede observar que existe cierta tendencia lineal en la

distribucin de los datos. Sin embargo, necesitamos obtener una recta que
represente correctamente la distribucin de los datos. Por ello necesitamos
una curva estndar.

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V. Clculos y Resultados:
1) Para graficar la curva estndar aplicaremos el ajuste por mnimos
cuadrados con el objetivo de encontrar una ecuacin emprica (
y=a1+ a2 x
) que se ajuste a los datos obtenidos en el experimento.
Tendremos como variable independiente (Y) a la absorbancia y a la
variable dependiente (X) a la concentracin.

a1 y a2 .
De acuerdo a la ecuacin calcularemos los parmetros

n X Y
1 0. 0.00
1 6
2 0. 0.00
2 7
3 0. 0.02
4 1
4 0. 0.02
6 1
5 0. 0.02
8 1
6 1. n 0.02 XY X2 Y2
0 1 2 0.0006 0.010 0.000036
3. 2 0.09
0.0014 0.04 0.000049
3 0.0084 0.16 0.000441
1 8
4 0.0126 0.36 0.000441
5 0.0168 0.64 0.000441
6 0.022 1 0.000484 Determinamos las cantidades
siguientes: 0.0618 2.21 0.001892

2
2 ( X ) 9.61
D= X =2.21 =0.6083
n 6

2
( Y ) 0.009604
E= Y 2
=0.001892 =0.0002913
n 6

Clculo de la pendiente B:

X . Y
XY N 0.06180.0506
B= = =0.01836
D 0.6083

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Clculo del intercepto A:

A=
Y B . X = 0.098( 0.01836 ) ( 3.1 ) =0.006849
n 6

Clculo de la desviacin estndar de los valores de Y:

2
EB2 . D 0.0002913( 0.01836 ) (0.6083)
s= = =0.00464
n2 4

Clculo del valor para t de Student para lmites de confiabilidad de 90%,

usando n-2 grados de libertad:

1.592 0.798 2.277

t=1.643+ + + =1.643+0.398+0.0499+ 0.0356
n2 ( n2 )2 ( n2 )3

t=2.1265

Clculo de los lmites de confiablidad del 90% para la pendiente:

t . s 2.1265 0.00464
b= = = 0.01265
D 0.6083

Clculo de los lmites de confiablidad del 90% para el intercepto:

t . s . X 2 2.1265 0.00464 1.4866

a= = =0.000402
N .D 6 0.6083

Entonces la mejor lnea recta, tendr por ecuacin:

Y =( 0.006849 0.000402 )+ ( 0.01836 0.01265 ) X

Por cuestin del anlisis de la grfica elegimos esta ecuacin:

Y =0.006849+ 0.0183 X

A esta ecuacin le corresponde el siguiente grfico:

CURVA ESTANDAR

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0.03

0.03

0.02

0.02
Absorbancia
0.01

0.01

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

Concentracin de Hierro (mg/L)

2) La Absorbancia de la muestra fue de 0,02

3) Utilizando la grfica podemos encontrar su respectiva concentracin.
a. El contenido de Fe en la muestra es de 7,2 mg/L o 7,2 ppm.
VI. Bibliografa
http://ajuste-de-datos.blogspot.com/
www.emagister.com
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa

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