ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE

CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
CARRERA: BIOTECNOLOGA AMBIENTAL

MICROBIOLOGA
PRCTICA No. 5:
Recuento de hetertrofos a partir de una muestra de suelo

1. DATOS GENERALES:
NOMBRES: CDIGOS:
Evelyn Cristina Gutirrez Quero 2622
Paola Fernanda Arregui Arellano 2656
Jessica Patricia Altamirano Eguez 2647
Jhony Daniel Alvario Quisatasig 2616

GRUPO No. : 5
FECHA DE REALIZACIN: FECHA DE ENTREGA:
17 de Enero del 2017 03 de Febrero del 2017
2. OBJETIVOS:

2.1.GENERAL

Aplicar la tcnica de recuento en placa para conocer el nmero de

microorganismos heterotrficos viables que contiene las diferentes muestras.

2.2.ESPECFCOS

2.2.1. Comprender la tcnica de recuento en placa de microorganismos.

2.2.2. Emplear el mtodo UFC para realizar el respectivo conteo de colonias.
2.2.3. Establecer las caractersticas morfolgicas de las colonias encontradas en
cada medio de cultivo.

2. MARCO FUNDAMENTAL

La tcnica de recuento en placa es un mtodo de recuento de clulas viables, es

decir, una clula que es capaz de dividirse y originar descendencia. Se cuentan las
clulas de una muestra que son capaces de formar colonias cuando se inoculan en
un medio de cultivo slido. Por lo general, antes de realizar la siembra las muestras
tienen que diluirse (diluciones seriadas). Una vez inoculadas, las placas deben ser
incubadas a una temperatura adecuada1.

El recuento en placa permite el crecimiento de microorganismos hetertrofos,

aquellos que obtienen el carbono y el nitrgeno de la materia orgnica (glcidos,
lpidos, protenas y cidos nucleicos) de otros organismos.

Normalmente, una clula origina una colonia, pero con el fin de evitar errores al
momento de dar el resultado se suele hablar de Unidades Formadoras de Colonias.
(UFC), en lugar de clulas. En esta tcnica existen dos modalidades de siembra:

Siembra por extensin2: Un volumen de la muestra (0,1 ml) se coloca sobre la

superficie de la placa que contiene el medio y se extiende con ayuda de un asa
digrasky.
Siembra por vertido en placa3: La muestra se mezcla con el medio de cultivo y se
vierte en la placa estril. Permite inocular volmenes mayores de la muestra.
3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales y equipos
10 tubos de ensayo
15 cajas Petri
1 eelenmeyers de 250 ml
1 pipeta
Gradilla
1 mechero de alcohol
Autoclave
Balanza
Incubadora
7 jeringas de 1 ml

Medios y reactivos
Caldo soya tripticasa (CST)
Agar soya tripticasa (AST)
Agar standard mtodos (ASM)

5. PROCEDIMIENTO

1. Para la preparacin del banco de diluciones se necesitan tubos con 9 ml de

disolucin salina estril
2. Tomar 1 ml de la muestra del erlenmeyer, este corresponde a la muestra 1/10y
transferirlos al primero de los tubos con 9 ml de disolucin salina estril. Este
primer tubo corresponde a la dilucin 1/100 o 10^-2.
3. Agitar bien el tubo 10-2 y con una nueva pipeta estril transferir 1 ml a un
segundo tubo con 9 ml de suero salino. Marcarlo como 1/1000 o 10-3.
4. Agitar bien el tubo 10-3 y con una nueva pipeta estril transferir 1 ml a un tubo
con 10 ml de suero salino. Marcarlo como 1/10000 o 10-4
5. Es as que se realiza estas operaciones repetidamente donde se obtienen las
diluciones 1/100, 1/1000, 1/10000, 1/100000, 1/1000000.
6. Sembrar 1 ml de la muestra directa y de cada dilucin en cajas de agar
previamente identificadas.
7. Insertar en cada caja Petri aproximadamente 15 ml de agar anteriormente
preparado.
8. Mezclar el inculo con el medio fundido, inclinando y girando las placas.
9. Una vez solidificado el agar, invertir las placas rpidamente para prevenir el
crecimiento de colonias invasivas por acumulacin de humedad
10. Incubar a temperatura ambiente de 24 a 48 horas aproximadamente.
 6. RESULTADOS

Tabla 1

AGAR SOYA TRIPTICASA

Caja 1 Caja 2 Caja 3 Caja 4 Caja 5
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
464 colonias 149 colonias 10 colonias Incontable 3 colonias

Tabla 2

AGAR ESTNDAR MTODOS

Caja 1 Caja 2 Caja 3 Caja 4 Caja 5
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
400 colonias 268 colonias 220 colonias 9 colonias 1 colonia

Tabla 3
AGAR STANDAR
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Caja 4 Caja 5
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
10 colonias 3 colonias 0 colonias 0 colonias 1 colonia
 Tabla 4

AGAR SOYA TRIPTICASA

Caja 1 Caja 2 Caja 3 Caja 4 Caja 5

10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Forma Circulares,puntiformes,i Circular,puntiforme,irre Rizoide,irregular,circular Irregular Circular,rregular

rregulares gulares
Bordes Entero,lobulado,ondulad Entero,lobulado,ondulad Ondulado, filamentoso Lobulado Entero, lobulado
o o
Elevacin Convexa, plana Plana Plana Plana Plana
Superficie Lisa Lisa, rugosa Lisa Lisa Lisa
Consistencia Cremosa,membraosa Cremosa, membranosa Cremosa Cremosa Cremosa
Color Amarillas, cremosa Amarillas, cremosa Amarilla, cremosa Amarilla, cremosa Blanquecina
Luz Translucida Translucida Translucida Opaca Transparente
transmitida
Luz Brillante Brillante Brillante Opaco Brillante
reflejada
 Tabla 5
AGAR STANDAR MTODOS
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Caja 4 Caja 5
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Forma Puntiformes,irregulare Circular, irregulares Circular,puntiforme,irre Circular,irregular,puntifo Circular

s,circulares gular,rizoide rme

Bordes Entero, lobulado Entero ,ondulado Entera, lobulada Entera, ondulado Entero
Elevacin Plana, convexa Plana Plana Plana, convexa Plana
Superficie Rugosa Lisa Lisa Rugosa, lisa Lisa
Consistencia Cremosa Cremosa Cremosa, membranosa Membranosa Membranosa
Color Amarilla, cremosas Amarilla, cremosas Amarilla, cremosa Blanquecina Blanquecina
Luz Opaca Translucida Opaca Translucida Opaca
transmitida
Luz Opaca Brillante Opaca Brillante Opaca
reflejada
 Tabla 6

HONGOS AGAR STANDAR

Caja 1 Caja 2 Caja 5
10-2 10-3 10-6

Forma Circular Circular Circular

Bordes Filamentoso Filamentoso Filamentosa
Elevacin Plana, elevada Elevada Elevada
Superficie Rugosa Rugosa Rugosa
Consistencia Membranoso Membranosa Membranosa
Color Cremosa Cremosa Cremosa
Luz Opaca Opaca Opaca
transmitida
Luz reflejada Brillante Opaca Opaca

Tabla 7
CALDO SOYA TRIPTICASA
Tubo 1 Tubo2 Tubo 3 Tubo4 Tubo 5
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Turbidez Poco turbia Turbia Turbia Menos turbia No turbia

Pelcula No existe No existe No existe Una pelcula No existe

Sedimento Tiene Tiene No tiene Tiene No tiene

7. DISCUSIN
Tabla 1.-Al aplicar la tcnica por inoculacin en la caja que contena Agar Soya
Tripticasa se pudo obtener un decrecimiento de colonias que va desde 464 hasta a
3 colonias, existiendo una falla en la cual result ser incontable el nmero de
colonias en una de las cajas. Concluyendo as que hubo un ndice de erros en la
tcnica, pero se obtuvo lo esperado.
Tabla 2.-Repitiendo la tcnica anterior se obtuvo un resultado en la primera caja de
400 colonias y en la ltima tan solo se obtuvo 1.Afirmando as que la tcnica
aplicada en este agar fue totalmente eficaz, ya que en esta vez se observ un
decrecimiento ms notable.
Tabla 3.- A comparacin con los dos agares ya descritos, en el agar Standar se pudo
observar un crecimiento mnimo de colonias teniendo como resultado, en la primera
caja 10 colonias y en la quinta una sola colonia, y es importante tomar en cuenta que
en el resto de cajas no hubo crecimiento. Finiquitando as que la tcnica no fue
aplicada correctamente.
Tabla 4 y 5.-En la tabla numero 4 tenemos microorganismos sembrados en agar
soya tripticasa y en la tabla nmero 5 microorganismos sembrados en agar standar
mtodos. De las cuales se describi su: forma, elevacin, bordes, superficie,
consistencia, color y tambin se determin el paso de luz transmitida y reflejada.
Deduciendo que en la mayora de colonias obtenidas en dichas cajas posean formas
y colores parecidos.
Tabla 6.-En la prctica en la cual se utiliz agar standar para la siembra de hongos,
tambin se realiz la debida descripcin para as poder conocer sus caractersticas
morfolgicas y poderlo diferenciar del resto.
Tabla7.- En los tubos en los cuales se utiliz caldo soya tripticasa para sembrar
microorganismos se observ cierta falla al momento de aplicar la tcnica, ya que el
objetivo era que el primer tubo tenga mayor turbidez, pelcula y sedimento, en
comparacin con el ltimo tubo. Determinando que la prctica no se realiz
adecuadamente ya que no se observ el correcto decrecimiento que deba darse en
cada tubo.

8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

8.1.Conclusiones
8.1.1. Se aplic la tcnica de recuento en placa para conocer el nmero de
microorganismos heterotrficos viables que contiene las diferentes
muestras.
8.1.2. Se comprendi la tcnica de recuento de clulas viables, las cuales son
capaces de dividirse y originar descendencia; estas son tratadas
nicamente en el laboratorio. Dicha tcnica se aplica en el conteo de
clulas de una muestra las cuales son capaces de formar colonias
cuando se inoculan en un medio de cultivo solido adecuado.
 8.1.3. Se emple el mtodo UFC para realizar el respectivo conteo de
colonias, el cual nos ayud a determinar el nmero de clulas viables
que da lugar al desarrollo de colonias visibles en cada muestra.
8.1.4. Se estableci distintas caractersticas morfolgicas, en el caso de cajas
se describi la forma, relieve, consistencia, entre otros. En los tubos
solo se pudo determinar la turbidez, pelcula y sedimento.

8.2. Recomendaciones
8.2.1. Se debe realizar controles de ambiente, control de esterilidad del medio
de cultivo y diluyente.
8.2.2. Registrar toda la informacin que se obtenga en los registros
respectivos con el fin de validar los resultados
8.2.3. Sembrar al menos dos placas por cada dilucin.
8.2.4. Se debe tomar en cuenta la incubacin a temperatura entre el rango de
20C a 28C durante 6 das 1 da.
8.2.5. Realizar el clculo para recuento de microorganismos hetertrofos en
placa, dividiendo el nmero total de colonias por placa por el volumen
de muestra

7.- BIBLIOGRAFA:

1.- Bartha R. (2012). Ecologia microbiana y microbiologa ambiental. Cuarta

edicin. Addison Wesley. Nueva York, Usa pp 217-262
2.- Madigan, M. T., Martinko, J. M. "Brock Biology of Microorganisms, 11th Ed." (2005)
Pearson Prentice Hall, Upper Saddle River, NJ
3.- Elliott M (1999). Comparasison of medida and diluents for enumeration of
aerobis bacteria from bermda grass golf course putting greens, journal
Microbiological Methods. 34(3): 1994-202
 ANEXOS 1

a) b) c)

Notas: Recuento de hetertrofos a partir de

una muestra de suelo
a)Autoclave ,tubos de cultivo
y erlenmeyer CATEGORIA ESPOCH
b) Tubos de cultivo con tapa LMINA ESCALA FECHA
c) Tcnica de inoculacin FACULTAD DE CIENCIAS
DEL DIAGRAMA ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS

POR CALIFICAR LABORATORIO 1 A4 03-02-2017

MICROBIOLGA
 ANEXOS 2

e) f) g)

Notas: Recuento de hetertrofos a partir de

una muestra de suelo
e) Cajas Petri -con Agar-zona
asptica
f) Muestra de suelo CATEGORIA ESPOCH LMINA ESCALA FECHA
g)Cajas Petri-muestras FACULTAD DE CIENCIAS
DEL DIAGRAMA ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS

POR CALIFICAR LABORATORIO 2 A4 03-02-2017

MICROBIOLGA