Tcnicas de hibridacin de cidos nucleicos

La estructura primaria o secuencia de nucletidos de los cidos nucleicos es

el soporte fsico de la informacin Gentica y, por ello. El objetivo final de
todos los mtodos analticos y de manipulacin incluidos en lo que se
conoce hoy como Ingeniera Gentica. El acceso a ese nivel estructural se
encuentra por el momento restringido exclusivamente a tres tipos de
tcnicas: las enzimticas, las qumicas y las de hibridacin. Las
herramientas ms perfectas para alcanzar el nivel primario de los cidos
nucleicos, reconocerlo y actuar en consecuencia son las enzimas, protenas
que han alcanzado a lo largo de la evolucin un nivel de especificidad y
ecacia inigualables y en las que se basan la mayora de los procedimientos
analticos y, sobre todo, de manipulacin de cidos nucleicos. Por otro lado,
uno de los procedimientos para analizar la secuencia del DNA se
fundamenta en la posibilidad de romper la cadena polinucleotidica por
ocasiones (bases nitrogenadas) mas o menos especificas mediante una
serie de reacciones qumicas: la especificidad de la reaccin qumica nunca
tan grande como la enzimtica. es la base para la deduccin de datos de
secuencia. La tercera via es la hibridacin, que explota la capacidad de una
estructura polinucleotica

La hibridacin es el proceso en que dos hebras polinucleotidicas de distinta

procedencia interaccionan para formar una serie de pares de bases y, por
tanto, una estructura bicatenaria en doble hlice cuya longitud y correccin
depende del grado de complementariedad de las dos hebras originales. Se
trata de un tipo especial de renaturalizacin cuyo mecanismo es complicado
y conviene conocerlo, aunque sea superficialmente, para poder entender el
porqu de las condiciones experimentales en que se desarrolla.

Contemplado como la unin de dos largas cadenas polinucleotidicas, es fcil

ver su aplicacin al conocimiento estructural de ambas; por ejemplo, la
evaluacin del grado de semejanza de DNAs genmicos y la proximidad
filogentica de las especies biolgicas de las que provienen, o la
investigacin del nmero y disposicin de intrones en una secuencia gnica
de DNA mediante su hibridacin con el mRNA procesado. Pero visto desde
una perspectiva ms asimtrica, esta tcnica permite detectar, localizar,
identificar o incluso aislar una determinada molcula mediante el uso de
otra conocida y con secuencia complementaria que, previamente marcada,
acta como una sonda que sealiza la situacin de la molcula problema
incluso cuando sta se encuentra diluida en una mezcla de gran
complejidad. La capacidad de una secuencia de bases para reconocer a otra
con suciente grado de complementariedad permite acceder al nivel de
secuencia, aun sin Conocerla, para localizar una molcula especfica.

Las hibridaciones del primer tipo se suelen llevar a cabo en disolucin. Sin
embargo, el uso de sondas marcadas requiere previamente fijar las
posiciones de las molculas que se van a investigar. Se necesita llevar a
cabo una transferencia de estas molculas a un soporte slido, donde
quedarn retenidas y fijadas en posiciones relacionables con su situacin
original. Este soporte actuar, a partir de aqu, como una copia de la
mezcla de molculas, y sobre l se realizara la hibridacin con la sonda.
4.1. Desnaturalizacin y renaturalizacin de estructuras bicatenarias

La estructura bicatenaria, en forma de doble hlice, enormemente

extendida entre las molculas de cidos nucleicos, est mantenida
fundamentalmente por los enlaces de puente de hidrgeno, que se
establecen entre bases nitrogenadas complementarias a lo largo de
longitudes ms o menos largas. Esta estructura se presenta, de manera casi
universal, en las grandes molculas de DNA bicatenario o de doble hebra
(dsDNA) y, de manera ms restringida pero aun as frecuente, en las
molculas monocatenarias de los distintos tipos de RNA, formando regiones
en doble hlice intracatenaria.

La desnaturalizacin es el proceso de rotura o desaparicin de esa

estructura bicatenaria. Es un fenmeno que se produce in vivo
acompaando a los procesos de replicacin del DNA, donde la doble hlice
ha de abrirse en su totalidad, y de transcripcin, donde el alcance de la
apertura es mucho ms limitado. En ambos casos, la clula posee protenas
y actividades enzimticas capaces de realizar la separacin de las dos
hebras de la doble hlice de manera controlada, reversible, eficaz y en
condiciones fisiolgicas.

Pero por distintos caminos, la desnaturalizacin del DNA o del RNA puede
tambin
lograrse in vitro y es algo que resulta ser muy til para:

- Facilitar su eliminacin: en los procedimientos clsicos de preparacin

de DNA plasmidico, el DNA cromosmico es precipitado en forma de
agregado nucleoproteico despus de su desnaturalizacin, debido a que su
gran tamao le impide recuperar la forma soluble cuando las condiciones
desnaturalizantes revierten.

- Permitir su anlisis: Las molculas monocatenarias de acidos nucleicos

pueden ser analizadas mediante electroforesis en geles; su movilidad es
funcin de su tamao siempre que en su movimiento a travs del gel
mantengan esa estructura en monohebra; la formacin de regiones ms o
menos grandes con doble hlice intracatenaria ("horquillas") altera mucho
su velocidad de migracin y anula las posibilidades analticas. Por otro lado,
un control fino del proceso permite valorar la resistencia de una molcula
bicatenaria a la desnaturalizacin, lo que puede relacionarse con ciertos
detalles de la propia estructura de la molcula.

- Permitir su lectura por ciertas enzimas: algunos procedimientos de

anlisis y manipulacin de cidos nucleicos se basan en el uso de ciertas
actividades enzimticas (Polimerasas) capaces de catalizar la sntesis de
poli nucletidos cuando son dirigidas por un DNA o un RNA con estructura
de monohebra. La enzima tiene que interaccionar y reconocer una tras otra
todas las bases presentes en la hebra directora. Para conseguir un buen
resultado ha de impedirse al mximo la aparicin de horquillas
intracatenarias que afecten o incluso impidan esa lectura.

- Facilitar su reconocimiento por parte de otras molculas

monocatenarias: como se vera en seguida, los mtodos de
renaturalizacin e hibridacin se basan en la interaccin entre bases
nitrogenadas de hebras complementarias. Para conseguir un buen
acoplamiento entre ellas, se requiere que lleguen al momento de la
interaccin con el menor grado posible de estructura intracatenaria.

Entre los distintos agentes desnaluralizantes se pueden sealar los

siguientes:

- La temperatura: su elevacin produce un aumento de la energa de las

molculas y dado que los puentes de hidrgeno son enlaces dbiles, se
aumenta la probabilidad de que se formen pequeas burbujas en una doble
hlice. Conforme se alcanzan mayores valores de temperatura, las burbujas
van creciendo en tamao y nmero, y el alcance de la desnaturalizacin
tambin, pudindose llegar a la separacin completa de las dos hebras. Este
proceso recibe el nombre de desnaruralizacin trmica y tiene un notable
valor analtico: una estructura en doble hlice es tanto ms resistente a la
desnaturalizacin cuanto mayor es la proporcin de pares GEC que
participan en ella, de manera que el anlisis del rango de temperaturas en
que se produce la desnaturalizacin de una molcula bicatenaria permite
determinar el porcentaje de pares GEC que hay en ella. Puesto que la
absorcin a 260 nm aumenta con el proceso

- Los valores extremos de pH: las uniones por puentes de hidrgeno son
sensibles a valores extremos de pH; en medios muy cidos, los tomos que
reciben al hidrgeno del puente resultan protonados y, por tanto,
bloqueados para formar dicho enlace; en medios muy alcalinos, los
hidrgenos del puente se separan del tomo donador; en ambos casos. los
puentes de hidrgeno desaparecen.

- Productos caotropicos: son molculas de pequeo tamao y con alta

capacidad para formar puentes de hidrgeno, tales como el formaldehdo, la
forma mida o la urea; se introducen en el interior de la doble hlice y
deshacen los enlaces que mantenan unidas a las bases nitrogenadas
complementarias al saturar los centros donadores y receptores del puente
de hidrgeno. Su capacidad desnaturalizante es funcin de la concentracin
en que se encuentran.

- Protenas con actividad belicasa (catalizan la rotura de puentes de

hidrgeno y, por tanto, la apertura de la doble hlice) y protenas con alta
afinidad de unin al DNA: son componentes centrales de los sistemas
celulares que realizan la desnaturalizacin parcial o total del DNA; aislados y
purificados, son comerciales en muchos casos y se utilizan para provocar la
desnaturalizacin controlada en ensayos in vitro
La reconstitucin de la estructura en doble hlice a partir de dos hebras
complementarias recibe el nombre de renaturalizacion. Es un proceso que in
vivo siempre acompaa a la desnaturalizacin su seguimiento es in vitro
tiene tambin utilidad aunque en este caso el mayor inters radica en
analizar la cinetica del proceso.
Sin embargo, el mecanismo del proceso es mucho ms complejo que en el
caso de la separacin progresiva de cadenas. La renaturalizacin se trata de
una reaccin bimolecular en donde dos molculas han de encontrarse e
interaccionar correctamente. Lo primero supone que a concentracin de
molculas es un parmetro fundamental en la velocidad de la
renaturalizacin.

Lo segundo plantea problemas prcticos: cuando dos hebras

polinucleoticlicas chocan, interaccionarn y quedaran enlazadas a travs
(de los primeros puentes de hidrgeno que se formen, pero, lo ms
probable, es que esa primera unin no sea adecuada y, cuando a partir
de ese primer ncleo de renaturalizacion el proceso se extienda a otras
zonas de las cadenas, antes o despus se alcancen regiones no
complementarias. Ese conato de doble hlice no progresar; el choque
inicial fue no fructfero. Y esa molcula, parcialmente en doble hlice
parcialmente en hebra simple, no podr recuperarse para el proceso, salvo
que aquellos primeros enlaces que se formaron pudieran deshacerse y las
hebras, de nuevo libres, pudieran intentar nuevos choques. En la prctica
esto se puede conseguir siempre que la variacin de las condiciones que
fuerzan la renatumlizacin (disminucin de la tempemtura, ncutmlizacin,
etc.) sea suficientemente lenta y permita que las hebras puedan disponer
de mltiples intentos en la bsqueda de uniones fructferas.
Hibridacin entre cidos nucleicos

La hibridacin, en terminos generales es la reconstitucin de estructuras

bicatenarias a partir de molculas monocatenarias de distinto origen y con
secuencias ms o menos complementarias. La reaccin se lleva a cabo con
diferentes molculas persiguiendo objetivos distintos

a) Hibridacion entre DNAs hererlogos: ssDNAs de distintas fuentes

reasocian para formar un DNA hbrido, estructurado en doble hlice en

aquellas regiones que tengan secuencia complementaria y formando
burbujas en el resto. El anlisis estructural del hbrido permite deducir el
porcentaje de doble hlice en la molcula, lo Que, asu vez, es ndice del
grado de complementariedad de ambas cadenas. Mediante el aislamiento
de DNA de dos especies biolgicas, su desnaturalizacin y posterior
hibridacin, se puede estudiar el grado de semejanza de sus genomas y
deducir relaciones logenticas entre ambas.

b) Hibridacin entre DMA y mRNA: los mensajeros son transcritos a partir de

sus genes y, obviamente, encuentran regiones complementarias en el DNA
genmico desnaturalizado.

c) Hibridacin preparativa entre una secuencia de DNA y una poblacin de

mRNAs: las tcnicas actuales, como se ver ms adelante, permiten
disponer del DNA de un gen aislado; una hibridacin frente a la poblacin
completa de mensajeros permite el aislamiento de aquel mRNA que fue
transcrito a partir del gen en cuestin; tras liberarlo del hibrido, su posterior
traduccin in vitro producir la protena correspondiente

d) Hibridacin entre una poblacin de DNA o RNA y un oligonucletido

marcado: de igual manera que en el caso anterior, el oligonucletido hibrida
con la(s) regin(es) complementaria(s) que localice en la mezcla de
molculas de la poblacin en cuestin (previa desnaturalizacin de todos los
componentes). En este caso, el proceso no va mas all: si el oligonucletido
se encuentra marcado de alguna manera (por incorporacin de istopos
radiactivos, por ejemplo), la molcula con la que haya formado hibrido
podr ser detectada entre toda la poblacin inicial. El oligonucletido acta
como una sonda capaz de sealizar una molcula entre muchas
permitiendo su deteccin y aislamiento.

Transferencia de cadenas de cidos nucleicos a soportes

slidos

Para poder aprovechar la posibilidad que ofrece la hibridacin, a saber. la

deteccin de una molcula con una secuencia de bases especifica entre las
presentes en una mezcla mas o menos compleja, se requiere previamente la
fijacin de los componentes de la mezcla en un soporte slido, con el fin de
poder posteriormente relacionar una seal positiva con una de las
molculas de la mezcla. stas han de ser fijadas en estado monocatenario
para que puedan formar un hibrido correcto con la sonda.

Los tipos de soportes capaces de retener estructuras monocatenarias ms

utilizadas son:

- Los filtros de nitrocelulosa son el soporte clsico de las molculas de DNA

o RNA desnaturalizadas se unen por fuerzas hidrofbicas y, posteriormente,
se fijan a l mediante secado a vaco en estufa.
- Las membranas de nailon, introducidas posteriormente, son de un material
mucho ms duradero, lo que permite su utilizacin mltiple en hibridaciones
con distintas sondas; adems, mediante iluminacin con luz ultravioleta de
254 nm, las hebras polinucleotidicas quedan covalentemente unidas a l, lo
que evita perdidas a lo largo del proceso.

Las molculas de la mezcla que va a ser explorada pueden encontrarse:

En el interior de las clulas de un cultivo, siguiendo el procedimiento que se

describe a continuacin, se puede llevar a cabo el anlisis de todas las
secuencias de DNA presentes en cada una de las clulas de un cultivo
bacteriano. El cultivo se siembra, diluido, en placas con medio slido; tras el
crecimiento de colonias aisladas, su DNA es transferido y fijado a un filtro
que se coloca en condiciones de hibridacin con una sonda marcada. La
deteccin del marcaje identificar la colonia con la secuencia buscada.

- En los balas de lisis de un cultivo infectado, como se ver ms adelante,

los bacterifagos son herramientas extensamente usadas en ingenieria
Gentica. La deteccin de alguna secuencia particular en una poblacin de
fagos se logra mediante infeccin y siembra de 'un cultivo bacteriano en
medio slido y a una dilucin adecuada.
Las clulas infectadas dan lugar a balas de lisis (o placas de fagos), cuyos
cidos nucleicos pueden ser transferidos a un soporte slido de manera
anloga a lo que se hace con colonias aisladas.

En el interior de un gel en el que las molculas de la mezcla han sido

previamente separadas por electroforesis; su transferencia por capilaridad a
un soporte slido, fijacin e hibridacin en condiciones apropiadas con una
sonda en disolucin, permitir identificar la banda electrofortica donde se
encuentra la secuencia en cuestin.

Transferencia del DNA de colonias bacterianas y de halos de lisis

Este procedimiento permite el anlisis (screening) de un cultivo bacteriano
para detectar en l las clulas que contienen una determinada secuencia de
DNA. Se basa en la lisis in situ de las colonias bacterianas sobre el filtro que
acta de soporte, y en la fijacin del DNA celular al mismo. Permite analizar
cientos de miles de colonias a la vez.
El cultivo se siembra en placas Petri sobre un medio slido adecuado,
tratando de conseguir una dilucin tal que, cuando las clulas crezcan den
lugar a colonias suficientemente separadas.
Transferencia de DNA o RNA de bandas electroforetcas

De esta manera se pueden analizar distintos fragmentos o incluso

molculas de DNA o RNA, previamente separados por electroforesis en gel,
y detectar entre ellos a los que incorporan una secuencia determinada. El
mtodo fue descrito por primera vez para el caso del DNA por E. M.
Southern en 1975 y, como se ver, es la base de uno de los procedimientos
analticos ms utilizados; hoy se conoce por el nombre de su autor:
transferencia de Southern
Posteriormente se desarroll la tcnica anloga para la transferencia de
molculas de RNA a un soporte slido, que es hoy conocida como northern
blotting. Por extensin de esta lnea de nomenclatura, la transferencia de
protenas separadas por electroforesis en gel a un soporte slido (filtro de
nitrocelulosa, membrana hidrofbica, etc.) recibe el nombre de western; en
este caso, el anlisis posterior de las molculas transferidas se lleva a cabo
mediante reaccin con anticuerpos contra la protena que se' busca. As se
completa un conjunto de mtodos que permite el estudio de la presencia
Soutbern
Existe incluso otro mtodo relacionado denominado south-western que
incluye la transferencia de protenas separadas por electroforesis y la
incubacin del filtro con una sonda marcada de DNA; una seal positiva
indica una unin especifica del DNA de la sonda con una de las protenas del
filtro.

Existen tres mtodos para transferir las molculas presentes en las bandas
electroforticas desde el gel de agarosa hasta el soporte de nailon o de
nitrocelulosa, sin que se modifiquen sus posiciones relativas.

a) Transferencia por capilaridad: las molculas de cido nucleico son

arrastradas desde el gel hasta el soporte slido en contacto con l, gracias
al flujo capilar originado por la accin absorbente de una pila de papeles. El
peso colocado sobre ella ayuda al mantenimiento del flujo y, al mismo
tiempo, fuerza la salida del lquido del interior del gel que queda al final
deshidratado y reducido a una fina capa de agarosa. En el caso del DNA, los
fragmentos que se van a transferir son previamente desnaturalizados en el
propio gel sumergindolo en una disolucin adecuada, de forma que cuando
alcancen el filtro o membrana queden unidos a l en estructura
monocateriana.

b) Transferencia electrofortica: este mtodo se basa en la movilidad de las

molculas de cido nucleico en un campo elctrico para forzar su salida del
gel y su transferencia al soporte slido. Las membranas de nailon son el
soporte ms efectivo en este caso. El gel tras su tratamiento en medio
desnaturalizante, se coloca en contacto con la membrana, y ambos se
colocan entre dos placas de material poroso antes de someter al conjunto a
un campo elctrico normal a su superficie. El tiempo necesario para una
transferencia completa depende del tamao de las molculas que se
transfieren, de la dureza (concentracin de agarosa) del gel y del voltaje
aplicado. La eliminacin del calor producido por el paso de corriente suele
conseguirse por refrigeracin de la cubeta de transferencia. La eficacia es
buena incluso para molculas relativamente grandes por lo que no suele ser
necesario fragmentarlas previamente por despurinizacin.
c) Transferencia a vaco: el gel se pone en contacto con el filtro y este se
coloca sobre una placa porosa de una cmara de vaco; desde un depsito
superior, la solucin de transferencia fuerza a las molculas a abandonar el
gel y quedar retenidas en el filtro. De esta manera, fragmentos tanto de
DNA como de RNA son transferidos a un soporte slido rpida y
eficientemente
Aplicaciones de la hibridacin

La hibridacin de sondas marcadas con polinucletidos inmovilizados sobre

soportes slidos presenta mltiples aplicaciones analticas y preparativas,
entre las que se pueden destacar:

- la deteccin de secuencias genmicas: la hibridacin permite definir

la presencia o ausencia de una secuencia en un DNA genmico siempre que
se disponga de alguna otra secuencia ms o menos homloga que pueda
funcionar como sonda. El procedimiento supone el aislamiento del DNA total
de un cultivo, tejido u organismo completo, su rotura enzimtica y
separacin de fragmentos mediante electroforesis, la transferencia de stos
a un soporte slido. ste es el paso inicial para el posterior aislamiento de
secuencias genmicas. Adems, la posibilidad de detectar secuencias
especficas, incluso en una mezcla de gran complejidad, es la base de
procedimientos analticos de gran valor en medicina forense y preventiva
(anlisis gentico prenatal)

- La deteccin de secuencias en colonias bacterianas: tras un clonaje tpico,

se requiere aislar aquella colonia bacteriana donde se encuentra la
secuencia objeto del experimento. Una manera de conseguirlo consiste en
sembrar el cultivo en medio slido y a una dilucin adecuada; tras la
incubacin procedente, cada clula bacteriana habr dado lugar a una
colonia (un clon). Se toman filtros de esas placas y el DNA de cada colonia
es desnaturalizado y fijado al soporte; la hibridacin de estos filtros con una
sonda adecuada, permitir detectar la colonia buscada se dispondr de un
clon en el que todas las clulas son portadoras de la secuencia; se habr
logrado el clonaje de la secuencia en cuestin.

- La deteccin y anlisis de mRNAs: la poblacin de mensajeros en un

cultivo bacteriano o en un tejido u rgano eucariota suele tener una notable
complejidad. Su anlisis electrofortico produce imgenes difusas en las que
resulta muy difcil identificar molculas especficas de mRNA. Pero la
transferencia a un soporte slido de las molculas separadas en gel,
seguida de su hibridacin con una sonda marcada (procedente, por ejemplo,
de un determinado gen), permite definir:
a) si el mensajero est o no presente (es decir, si el gen en cuestin se
expresa en ese cultivo, tejido u rgano); b) su concentracin en la poblacin
(el nivel, alto o bajo, de su expresin); y c) el tamao que presenta. El
estudio de la expresin gnica diferencial en tejidos eucariotas tiene una
herramienta esencial en este conjunto de mtodos. El anlisis de operones,
el estudio de promotores o de la maduracin de precursores de mensajeros
son otros temas que se apoyan en esta tcnica.

- La deteccin de mRNAs en Iisados celulares: es un procedimiento

menos sofisticado que el anterior pero que resulta prctico en algunos
casos. Sin necesidad de separar las distintas especies de mRNAs mediante
electroforesis, la hibridacin con una sonda adecuada se puede realizar
sobre gotas de lisado celular de distintos orgenes, previamente aplicadas
sobre un soporte (filtro, membrana). Una seal positiva permite concluir la
presencia del mensajero complementario a la sonda. Aunque,
evidentemente, el anlisis no puede ir ms all.

Microchips de DNA

Una modalidad muy particular del proceso de hibridacin entre una mezcla
de secuencias y un conjunto de sondas es la base de la reciente tecnologa
de los denominados microchips de DNA. En esta sofisticada versin de la
hibridacin se han incorporado ciertas modificaciones para permitir su
aplicacin a mezclas muy complejas de secuencias.

La sonda mltiple es un conjunto de fragmentos de DNA, de secuencia

conocida, fijados covalentemente a una superficie slida, en la que son
dispuestos en forma de matriz, cada uno en una posicin determinada. Esta
pieza constituye el microchip. La mezcla de secuencias a analizar se marca
previamente con uno o varios fluorforos para su posterior deteccin, se
desnaturaliza "y se pone en contacto con el chip en condiciones que
favorecen la hibridacin. La lectura de la superficie del microchip se lleva
a cabo con fluorimetros por barrido con lser. La deteccin de seal en una
posicin particular de la matriz permite concluir la presencia en la muestra
de DNA analizada de una secuencia complementaria al fragmento sonda
fijado en esa posicin.

El soporte sobre el que se fija el DNA puede ser de diferentes tipos de

material; as se encuentran chips construidos sobre cristal, membranas de
nailon o silicio. la aplicacin de las tcnicas de la microelectrnica al campo
de la Ingeniera Gentica, en lo que se ha dado en llamar nano
biotecnologa, ha facilitado el desarrollo de la construccin de estos
microchips de DNA.

En la actualidad existen dos formatos de chips que se diferencian en funcin

de la naturaleza de la sonda inmovilizada en su soporte. El que exige una
tecnologa menos compleja utiliza un brazo robot dirigido por ordenador
para depositar con precisin secuencias monocatenarias catalogadas de
CDNA o DNA genmico sobre un soporte de vidrio. Un ejemplo de este tipo
de microchip es el construido inmovilizando ms de 6.000 secuencias
procedentes de marcos abiertos de lectura (ORFs) del genoma de
Snccharomyces cerevisiae.

Estas sondas se depositaron en una matriz de 80 x 80 puntos, en una

superficie que no llega a los 4 cm 2. Este chip se utiliz para estudiar los
perfiles de poblaciones de mRNA aisladas de cultivos de levadura crecidos
en diferentes condiciones.

Otros chips se construyen mediante la inmovilizacin de oligonucleticlos

que pueden haber sido sintetizados previamente por tecnologas
convencionales que se sintetiza directamente sobre la superficie del propio
soporte en el que quedan fijados. Las tcnicas de fotolitografa, utilizadas en
la construccin de semiconductores, se han aplicado a la sntesis de
oligonucletidos in situ, en placas de vidrio no ms grandes de 1 cm2 que
pueden contener una matriz de un milln de oligonucletidos distintos. Esto
permite trabajar con sondas complejas con unas 107 molculas distintas,
Los oligonucletidos sintetizados por tcnicas convencionales tambin se
han llegado a inmovilizar mediante la aplicacin de robots en una densidad
de hasta 30.0000 oligonucletidos por centmetro cuadrado. Aplicando una
tecnologa un poco ms sofisticada se han desarrollado verdaderos chips
electrnicos.