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Resumen: Los biosensores microbianos electroqumicos son dispositivos analticos que, a travs de la combinacin de un microorganismo con
un transductor adecuado, son capaces de generar una seal medible y proporcional a la concentracin de analito en estudio. En este artculo
se describen las caractersticas y aplicaciones de este tipo de biosensores, as como las tendencias y estrategias posibles que contribuirn a
aprovechar en el futuro todo su potencial.
Abstract: Electrochemical microbial biosensors are analytical devices that, by means of the combination of a microorganism with an adequate
transducer, are capable to generate a measurable signal which is proportional to the concentration of the analyte under study. This article
describes the characteristics and applications of this type of biosensors, as well as the trends and possible strategies that will contribute in the
future to explore all their potential.
Transductor
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con enzimas inmovilizadas. Un ejemplo es el biosensor de transporte no deseados cuando se trabaja con clulas via-
de urea basado en la combinacin de una membrana de bles. Finalmente, la difusin del sustrato y de los productos
ureasa y un sensor microbiano de NH3 usando bacterias a travs de la pared celular se traduce en una velocidad de
que causan nitracin. Este sensor resulta ventajoso fren- respuesta lenta en comparacin con los biosensores enzi-
te al convencional potenciomtrico de amonio ya que se mticos convencionales. No obstante, esta limitacin puede
minimizan interferencias inicas o de compuestos voltiles superarse expresando la enzima de inters en la superficie
como las aminas. celular por ingeniera gentica o permeabilizando las clulas
con tratamientos fsicos (congelacin y descongelacin),
qumicos (disolventes orgnicos o detergentes) o enzimticos
Ventajas de los biosensores microbianos (lisozima, papana).
Desde un punto de vista general, los aspectos venta-
josos que presentan los biosensores microbianos frente a
los convencionales de enzimas aisladas derivan principal-
Tcnicas de inmovilizacin
mente del empleo de microorganismos como elemento de Con el fin de transformar de manera efectiva la respues-
reconocimiento.1,2 Por un lado, los microorganismos estn ta bioqumica en una seal fsica, las clulas microbianas
presentes por todas partes y son capaces de metabolizar que sirven como elemento de reconocimiento en el biosen-
una amplia variedad de compuestos qumicos. Por otro sor, deben estar asociadas ntimamente con el transductor.
lado, el empleo de microorganismos como fuente de enzi- Por lo tanto, la inmovilizacin de los microorganismos en
mas intracelulares evita los procesos caros y laboriosos que los transductores tiene un papel esencial en la fabricacin
se requieren para su aislamiento y purificacin, adems de de los biosensores microbianos y condiciona de manera
preservar las enzimas en su entorno natural, evitando los significativa su funcionamiento y estabilidad. La seleccin
problemas de regeneracin de cofactores o de disminucin de la tcnica y/o el soporte de inmovilizacin dependen de
de la actividad enzimtica al operar en ambientes in vitro.3 la naturaleza del biomaterial (clulas viables o no viables)
As las enzimas quedan protegidas de la inactivacin por y del sustrato y la configuracin del transductor emplea-
txicos externos, como metales pesados, lo que mejora do. Por lo general, la inmovilizacin covalente, estrategia
la estabilidad y el tiempo de vida til de los biosensores empleada frecuentemente para la inmovilizacin de enzi-
resultantes. Adems, los microorganismos, con una gran mas y anticuerpos, no es til para la inmovilizacin de
capacidad de adaptacin a condiciones adversas, hacen clulas viables. Uno de los principales problemas de esta
posible la fabricacin de biosensores menos susceptibles tcnica es que las clulas estaran expuestas a potentes
de inhibirse por solutos y ms tolerantes a ambientes de grupos reactivos y a otras condiciones de reaccin severas
pH subptimo. Hay que tener en cuenta, tambin, que los que comprometen su viabilidad. Con este tipo de inmovi-
microorganismos pueden producirse masivamente a travs lizacin tambin puede haber un deterioro de la integridad
de cultivos celulares y que las clulas microbianas son estructural de la clula durante el uso continuado, lo que
fcilmente manipulables y tienen mejor viabilidad y estabi- conlleva a la prdida de las enzimas intracelulares. Sin
lidad en ambientes in vitro, lo que simplifica enormemente embargo, las tcnicas de entrecruzamiento con agentes
la fabricacin de estos biosensores y mejora su rendimien- bifuncionales, utilizando reactivos como el glutaraldehdo,
to.4 El progreso actual en tcnicas de biologa molecular y se han empleado con xito para la inmovilizacin de clulas
de ADN recombinante ofrece posibilidades ilimitadas para en varios soportes (gelatina, albmina, clara de huevo). A
el diseo de microorganismos a la carta (altamente espec- pesar de que esta metodologa evita algunas de las limi-
ficos o con actividades enzimticas mejoradas, entre otras taciones de la unin covalente, los reactivos qumicos de
caractersticas).4 Por ltimo, si un nico microorganismo entrecruzamiento utilizados frecuentemente, tambin afec-
no contiene todas las enzimas necesarias para una serie tan a la viabilidad celular. As estas tcnicas resultan tiles
secuencial de reacciones, es posible usar una mezcla de para la inmovilizacin de clulas no viables que contienen
varias especies para el desarrollo del biosensor. enzimas activas intracelulares. Por otro lado, las tcnicas
En cuanto a los inconvenientes, debe sealarse que los de atrapamiento y adsorcin resultan ms tiles cuando
biosensores microbianos son inapropiados para medicio- se emplean clulas viables. Un enfoque comn consiste en
nes in vivo y en ambientes biolgicos complejos. Por otra retener las clulas en las proximidades de la superficie del
parte, el gran nmero de enzimas y cofactores presente en transductor mediante membranas como las de dilisis. En
los microorganismos puede dificultar las interpretaciones general, dichas membranas deben ser qumica y mecnica-
analticas y comprometer la selectividad de la determina- mente estables, con un espesor de 10-15nm y un tamao de
cin en comparacin con el empleo de enzimas puras. En la poro de 0,1-1,0 nm. Especialmente adecuadas para este pro-
actualidad se estn investigando varios enfoques para reducir psito son las membranas porosas de policarbonato o polif-
al mnimo estas reacciones no especficas. As por ejemplo, talato. Se ha utilizado tambin una gran variedad de geles
la permeabilizacin de las clulas hace que se pierda la de polmeros sintticos o naturales para la inmovilizacin
mayora de los cofactores de pequeo peso molecular, mini- de clulas microbianas para su aplicacin en transforma-
mizndose de este modo reacciones secundarias indeseadas. ciones industriales. Entre los polmeros sintticos destacan
Tambin pueden evitarse reacciones secundarias debidas a la poliacrilamida, los hidrogeles basados en poliuretano,
la presencia de otras enzimas, inactivando las mismas por las resinas fotoentrecruzables y el alcohol polivinlico; los
tratamientos fsicos (calor) o qumicos cuando se emplean naturales incluyen el alginato, el carragenano, la agarosa de
clulas no viables, o bloqueando vas metablicas o sistemas bajo punto de fusin o el quitosano, entre otros. Las clulas
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a b
se han inmovilizado en estas membranas por atrapamiento,
entrecruzamiento, congelacin y descongelacin, radia-
cin-c o fotoentrecruzamiento, entre otros procedimientos.
Sin embargo, la mayor limitacin del empleo de polmeros
sintticos es la posible prdida de viabilidad de la clula,
mientras que los polmeros naturales son muy tiles en la c d
obtencin de sistemas viables de clulas inmovilizadas.
La captura pasiva de clulas en los poros o la adhe-
sin superficial de membranas de celulosa u otras mem-
branas sintticas ha sido tambin ampliamente utilizada.
La principal ventaja de este mtodo es que las clulas e f
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MOX
S P Mred
membrana exterior
periplasma
DH
e- Pseudomonas putida
Os (II)
citoplasma O2
Os (I)
NADH+H+
NAD+ -gluconolactona
GDH
Microorganismo
b-D-glucosa
Figura 3. Esquema de la oxidacin del sustrato S catalizada por la
Figura 4. Configuracin y funcionamiento de un biosensor microbiano
enzima DH en la membrana de un microorganismo. Mox y Mred son
para la deteccin de glucosa. Esquema basado en la referencia 15.
las formas redox del mediador. Adaptado de la referencia 14.
La preparacin de biosensores microbianos por combi- estos biosensores son electrodos sensibles a gases o a iones1,17
nacin de los microorganismos con mediadores redox que y condicionan la sensibilidad y selectividad del biosensor
faciliten las reacciones de transferencia electrnica entre el resultante. Estas configuraciones requieren un electrodo de
compuesto en estudio y la superficie del electrodo, ha sido referencia muy estable y preciso, a veces difcil de mantener,
una estrategia utilizada para la deteccin de diferentes anali- lo que puede limitar su aplicacin.
tos como glucosa o fenol, en ausencia de oxgeno. Debido a En el grupo de los biosensores microbianos electroqu-
la eficiencia en el transporte de electrones, la sensibilidad que micos se suelen incluir tambin los dispositivos conductim-
se alcanza es elevada. Las bacterias Gluconobacter oxydans, tricos, en los que se relaciona la concentracin del analito
Pseudomonas putida ATCC 126633 y Pseudomonas fluores- con los cambios de conductividad (o de resistividad) asocia-
cens son algunas de las utilizadas en combinacin con pol- dos a la produccin o el consumo de especies inicas duran-
meros redox de osmio. En la Figura 4 se ha representado un te la actividad metablica de los microorganismos.18 Con
esquema de la preparacin de un biosensor microbiano basa- los instrumentos sofisticados modernos, la medida de con-
do en la fabricacin de una monocapa de cisteamina sobre un ductancia es extremadamente rpida y sensible, lo que hace
electrodo de oro seguido de la incorporacin de un polmero que estos biosensores sean muy atractivos analticamente.
de osmio y del microorganismo, as como el mecanismo de Adems, se trata de dispositivos fcilmente miniaturizables,
la posible reaccin enzimtica y la obtencin de la seal puesto que no se requiere la presencia de un electrodo de
electroqumica en el caso de la deteccin de glucosa sobre el referencia en el sistema. Sin embargo, debido al carcter
electrodo modificado.15 universal de las medidas, en muchos casos la selectividad de
Ms recientemente se han desarrollado configuraciones los biosensores conductimtricos es escasa.4
similares basadas en el empleo de electrodos de pasta de Finalmente, las clulas de combustible microbianas con-
carbono preparados con una pequea cantidad de nanotubos vierten la energa qumica en energa elctrica por medio de las
de carbono (CNTs). La adicin de CNTs al material del elec- actividades metablicas de los microorganismos.19 Puesto que
trodo amplifica el efecto del mediador, prolongando tambin tanto el consumo microbiano de los compuestos de inters como
la estabilidad del biosensor, aunque se observan corrientes de la inhibicin de la actividad metablica de los propios microor-
fondo elevadas debido al aumento de la corriente capacitiva. ganismos por compuestos txicos, pueden alterar el funciona-
Esta estrategia fue seguida para la preparacin de biosensores miento de las clulas, stas se pueden aplicar como biosensores
basados en el uso de Pseudomonas putida DSMZ 50026 como para el anlisis in situ y la determinacin de analitos.
material biolgico y del polmero [poli(1-vinilimidazol)12-
[Os-(4,4-dimetil-2,2-dipiridil)2Cl2]2+/+] como mediador. La
bacteria se cultiva en medios salinos ricos en glucosa o en
Aplicaciones
fenol, con el fin de desarrollar, respectivamente, un biosen- Anlisis ambiental
sor de glucosa, con respuesta lineal en el intervalo de 0,05 El mayor campo de aplicacin de los sensores microbia-
a 2,0 mM, y un biosensor de fenol, con un intervalo lineal nos electroqumicos es el anlisis ambiental, utilizndose
de 0,54,0 mM, que result adecuado para el anlisis de principalmente microorganismos con actividad enzimtica
aguasresiduales.16 para la deteccin de pesticidas, productos industriales y
Se han descrito tambin diversos biosensores micro- otros contaminantes de las aguas. Los nitrocompuestos
bianos potenciomtricos basados en la dependencia de la aromticos del tipo del nitrobenceno, los nitrotoluenos y
concentracin de la especie en estudio con la diferencia de nitrofenoles se utilizan en la fabricacin de explosivos,
potencial medida entre un electrodo de trabajo y un electrodo pesticidas, colorantes, plastificantes y productos farma-
de referencia. Los transductores empleados comnmente para cuticos, y son contaminantes ambientales frecuentes de
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las aguas naturales y la atmsfera. El uso de biosensores tos y otros insecticidas organofosforados sin sustituyentes
enzimticos para la deteccin sensible e in situ de estos PNP. Adems, este biosensor es estable durante una semana
compuestos ha sido, desde hace algunos aos, un objetivo cuando se almacena a 4 C y su aplicabilidad se demostr
prioritario de la Qumica Analtica, habindose descrito analizando agua de lago.22
tambin varios diseos de biosensores microbianos basados Los biosensores microbianos tambin se han aplicado
en microorganismos modificados genticamente con acti- a la determinacin de fenol y otros derivados fenlicos. La
vidad organofosforo-hidrolasa, capaces de detectar txicos capacidad de degradacin del fenol por parte de la bacteria
organofosforados como Paraoxn, Metil Paratin, Paratin, Pseudomonas putida DSM 50026 es bien conocida. Esta
Fenitrotin y etil p-nitrofenol tiobenceno fosfonato.20 Por propiedad la convierte en un interesante componente bio-
ejemplo, la bacteria Moraxella sp. posee un complejo lgico de algunos biosensores basados en la medida de la
sistema enzimtico capaz de degradar especficamente el actividad respiratoria de las clulas. La preparacin del bio-
p-nitrofenol a hidroquinona (HQ), y adems es adecuada sensor requiere que las clulas crezcan en presencia defenol
para estudios de degradacin in situ, porque sobrevive en como nica fuente de carbono. Para la construccin de un
ambientes contaminados durante largos periodos de tiempo. biosensor basado en un electrodo de grafito y resina epoxi
Esta capacidad se ha aprovechado para la construccin de (GECE) modificado con este microorganismo, las clulas
varios biosensores microbianos electroqumicos. Por ejem- crecidas durante 24 h se centrifugaron, y una capa del mate-
plo, se prepar un biosensor amperomtrico para la detec- rial biolgico se deposit sobre la superficie del electrodo,
cin altamente especfica, sensible y rpida de p-nitrofenol, inmovilizndola con ayuda de una membrana de gelatina y
que se basa en la medida de la corriente de oxidacin de la por entrecruzamiento con glutaraldehdo. El biosensor micro-
HQ sobre un electrodo de pasta de carbono que contiene biano proporcion una respuesta lineal en el intervalo de 8a
las clulas, y que puede relacionarse con la concentracin 40nM de fenol y fue aplicado con buenos resultados al an-
del fenol (Figura5). Para preparar el electrodo, se mezclan lisis de aguas residuales.23
15 mg de clulas por cada gramo de pasta de carbono, y se Una de las tendencias ms recientes en esta rea es la
utiliza un potencial de +0,3 V vs Ag/AgCl.21 Este mismo basada en el empleo de microchips. As, por ejemplo, usan-
equipo dise un biosensor microbiano para la determina- do una de estas plataformas se ha desarrollado un biosen-
cin de organofosfatos p-nitrofenil sustituidos (PNPs-OPs), sor microbiano micro-fludico para la determinacin de la
consistente en un electrodo de oxgeno disuelto modificado toxicidad del agua. Se basa en clulas bacterianas diseadas
con la Moraxella sp. modificada genticamente. Se utiliza para generar una secuencia de reacciones bioqumicas que
la enzima organofsforo hidrolasa (OPH) en tndem con la en presencia de agentes genotxicos suministran una seal
maquinaria de oxidacin que posee el microorganismo para elctrica. El ensayo requiere un tiempo de induccin que
degradar los PNPs-OPs, al tiempo que se monitoriza el con- oscila entre 30 y 120 min. Se aade un sustrato enzimtico,
sumo de oxgeno, que es proporcional a la concentracin p-aminofenilfosfato, que genera un material electroactivo,
de analito. Las condiciones ptimas de trabajo se alcanzan p-aminofenol, slo cuando los txicos son detectados por la
para una cantidad de 0,35 mg de clulas, que son capaces bacteria. Las clulas se integran en un microchip manufactu-
de detectar hasta una concentracin 0,1 nM de Paraoxn, rado por la tecnologa MEMS que contiene varias microc-
con una excelente selectividad frente a triazinas, carbama- maras con volumen entre 2,5 y 157nL y radios electrdicos
O2 NO2
a) b) RE, Ag/AgCl
WE, AuE
AE, AuE
Pared de la .
1 mm microcmara
clula Polmero~50 nm
Au/Cr Au/Cr~215 nm
electrodo modificado con Moraxella sp.
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i, nA
i1
-8,1
LED CE
out -8,0
i2 el largo tiempo de espera (cinco das) que requiere su determi-
n
+RE
-7,9
60s
ON
nacin por el mtodo convencional (DBO5), desde hace algn
potenciostato -7,8
adicin de atrazina tiempo se vienen desarrollando biosensores microbianos de
WE
caja negra desecho tiempo diversos tipos que permiten una estimacin precisa aunque
mucho ms rpida de este parmetro de calidad de las aguas.
c) conductor de plata En una configuracin reciente se emple un sistema
basado en la eucariota Saccharomyces cerevisiae, y un doble
clulas sobre la superficie mediador, combinando el ferricianuro y la menadiona. El
del electrodo de carbono ferricianuro es un mediador muy eficiente para transportar
pelcula .
no conductora electrones desde el centro redox de las enzimas bacterianas
Figura 7. a) Sistema de flujo utilizado. La clula electroqumica est reducidas a la superficie del electrodo en presencia de com-
equipada con tres electrodos (WE, RE y CE). El electrodo de trabajo puestos orgnicos, mientras que la menadiona es un mediador
(WE) se irradia peridicamente con un LED rojo. b) Serie de seales lipoflico que puede penetrar a travs de la membrana externa
obtenidas al iluminar durante 15 s (ON) seguido de oscuridad durante de la clula, formndose un radical que transfiere el electrn
45 s (OFF), y adicin de atrazina; E= 0,7 V vs Ag/AgCl. c) Electrodo al ferricianuro. De este modo, el ferrocianuro formado alcan-
serigrafiado modificado con clulas de Chlorella vulgaris. Adaptado za el electrodo y es finalmente reoxidado, generando la res-
de la referencia 28. puesta electroqumica. En resumen, el ferrocianuro se forma a
expensas de la materia orgnica que es asimilada por la clula
en presencia de ferricianuro y menadiona, y su concentracin
entre 37,5 y 300 nm (Figura 6). Este biosensor se ha probado puede relacionarse a travs de la seal electroqumica gene-
con diferentes txicos: cido nalidxico (NA) y 2-amino-3- rada, con la de la materia orgnica presente en la muestra. Se
metilimidazo-[4,5-f]quinolina (IQ), detectndose una con- dise un sensor en la escala de los nL con un volumen de
centracin mnima de 10 ng/mL y 0,31 nM para IQ.24 560 nL y dos electrodos de carbono (Figura 8). La respuesta
Otras aplicaciones medioambientales de estos biosenso- electroqumica se genera por cronoamperometra, aplicando
res incluyen la determinacin de metales pesados. Como es un potencial de 900 mV al electrodo de trabajo durante 3 s
sabido, estos metales, entre los que se encuentran Cu2+, Hg2+, y tomando la respuesta final del cronoamperograma como
Cd2+, Zn2+ y Pb2+, estn distribuidos en el ambiente y son seal analtica. Este biosensor premite determinar DBO en el
la causa de uno de los problemas de polucin ms serios de intervalo de 6,6 a 220 mg O2 /L en 15 minutos, y es aplicable
nuestro tiempo. Proceden de fuentes antropognicas particu- a distintos tipos de aguas dulces y marina.29
lares, que originan el aumento de la concentracin de alguno
o de varios de ellos. Generalmente su toxicidad deriva de la Anlisis de alimentos
formacin de enlaces con los grupos tiol de las protenas.25 Los biosensores microbianos han demostrado ser de gran
Como ejemplo, puede citarse la preparacin de un biosensor utilidad en el campo del anlisis de alimentos y en el segui-
amperomtrico basado en Saccharomyces cerevisiae para miento de procesos de fermentacin. Se han descrito varios
la determinacin de Cu2+. Las clulas utilizadas contenan diseos basados en el consumo de oxgeno por la actividad
un plsmido con el promotor inducible por el Cu2+ del gen respiratoria o metablica de los microorganismos, para la
CUP1 de S. cerevisiae fusionado al gen lacZ de E. coli, res- determinacin de glucosa30 y de otros hidratos de carbono.31
pondiendo cuantitativamente a la presencia de Cu2+ mediante Para preparar este ltimo biosensor se utilizaron dos tipos
la sntesis de b-galactosidasa, el producto del gen lacZ. La diferentes de clulas: P. fluorescens y P. putida inmoviliza-
b-galactosidasa transforma la lactosa en glucosa y galactosa, das sobre un electrodo de grafito modificado con una mezcla
y el catabolismo de estos sustratos originan una disminucin de chitosan y nanotubos de carbono. La respuesta se obtuvo
de la concentracin de oxgeno, que se mide en un electrodo.25 midiendo la seal amperomtrica de reduccin del oxgeno a
Basndose en la actividad metablica de distintas bacterias un potencial de -700 mV vs Ag/AgCl. Se alcanzaron buenos
adaptadas, tambin se han diseado configuraciones para la resultados para la determinacin de galactosa, manosa y
deteccin de otros compuestos txicos. Entre ellos figuran ben- xilosa, sin interferencia de otros hidratos de carbono excepto
ceno, tolueno y etilbenceno,26 cido 2,4-diclorofenoxiactico,27 la glucosa.31
atrazina y 3-(3,4-diclorofenil)-1,1-dimetilurea (DCMU).28 En Entre las configuraciones descritas en la literatura para
este ltimo caso se utilizaron electrodos serigrafiados sobre la determinacin de etanol, cabe destacar un biosensor
los que se inmovilizaba una mezcla de clulas de Chlorella amperomtrico mediante inyeccin en flujo basado en un
vulgaris, nanotubos de carbono y alginato sdico, detectn- electrodo de carbono vitrificado modificado con la bacteria
dose amperomtricamente el oxgeno generado fotosinttica- Gluconobacter oxydans, que permite la monitorizacin off-
mente por la microalga. En la Figura 7 se ha representado un line del etanol producido en la fermentacin alcohlica. La
esquema de la configuracin empleada, as como el electrodo bacteria utilizada se caracteriza por poseer una elevada canti-
y el tipo deseales obtenido. La respuesta del biosensor a la dad de deshidrogenasas en su membrana periplasmtica, una
presenciade atrazina o de DCMU se mide como una seal de de las cuales es la alcohol deshidrogenasa PQQ-dependiente
inhibicin dela corriente de reduccin del oxgeno. (PQQ-ADH). Esta enzima es ms selectiva al etanol que el
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a)
barrita . Tendencias futuras
agitadora
Aunque los biosensores microbianos se han estudiado
ampliamente durante dcadas, su comercializacin se ha visto
electrodo limitada por las desventajas intrnsecas de emplear microorga-
nismos como elementos de reconocimiento (respuesta lenta,
poca sensibilidad, pobre selectividad y escasa estabilidad). De
ah que las tendencias actuales y futuras vayan encaminadas
al desarrollo de tecnologas que permitan superar o minimizar
estas limitaciones y ampliar las aplicaciones de estos biosen-
agitador .
sores en el mercado. Afortunadamente, con el desarrollo en
magntico los ltimos aos de la biotecnologa, la micro/nano-tecnologa,
y estrategias novedosas de inmovilizacin, los biosensores
microbianos resultan cada vez ms poderosos para la resolu-
cin de problemas analticos prcticos. Con los avances en
conector biologa molecular y la disponibilidad de la secuencia genmi-
cade ms tipos de clulas, se ha abierto un sinfn de posibili-
b) dades de adaptar los microorganismos para mejorar la actividad
muestra
de una enzima existente, expresar protenas en organismos
husped distintos o en distintas localizaciones, sobreprodu-
mezcla de .
reaccin cir enzimas microbianas de inters o desarrollar organismos
capaces de trabajar en condiciones extremas de temperatura
PET y resistentes a txicos. La ingeniera gentica (metablica)
PET
tambin puede aplicarse a la mejora de la selectividad de estos
biosensores mediante la activacin de ciertas vas metablicas
de inters y la absorcin celular, a la vez que se desactivan
otras rutas indeseables. Desde el punto de vista de la respuesta,
clula . PET otra manera de mejorar la selectividad es desarrollar redes de
capa . viva barrita .
electrodo sensores microbianos. La introduccin del analito de inters en
adhesiva agitadora estas redes genera un patrn de respuesta caracterstico que,
Figura 8. a) Esquema y b) seccin transversal del biosensor microbia- combinado con el anlisis de redes artificiales, posibilita su
no utilizado para la determinacin de DBO. PET, polietilentereftalato. identificacin inequvoca. Por otra parte, con el desarrollo de
Adaptado de la referencia 29. la nanotecnologa, los materiales nanoestructurados encuen-
tran en estos biosensores una enorme utilidad, al objeto de
mejorar su sensibilidad, debido a su buena biocompatibilidad,
sistema NAD-ADH o la alcohol oxidasa (AOX). Un incon- propiedades de transferencia electrnica mejoradas y mayor
veniente es que la bacteria tambin contiene una glucosa rea superficial. Adems, con el desarrollo de la tcnica de
deshidrogenasa (PQQ-GDH), por lo que existe selectividad Laboratorio-en-un-chip, la integracin de microorganismos en
cruzada entre ambas especies cuando se analizan muestras un chip de microfludica seguramente proporcionar enel futu-
que contienen etanol y glucosa. Es preciso, por tanto, realizar ro, no slo aspectos novedosos en la investigacinen elcampo
una determinacin aparte de la concentracin de glucosa. de los biosensores microbianos, sino tambin caractersticas
En estas condiciones la respuesta a etanol es lineal en el analticas mejoradas, ya que tales sistemas slo requeriran
intervalo de 10 nM y 1,5 mM, con un tiempo de respuesta de cantidades mnimas de muestra y ofreceran una mayor rapidez
3minutos. El tiempo de vida del biosensor se estim en 72 h de respuesta y una buena sensibilidad.
de trabajo continuado.32 Desde el punto de vista comercial, tambin es deseable la
Los antibiticos de la familia de las b-lactamas se utilizan puesta a punto de nuevas estrategias de inmovilizacin senci-
para el tratamiento de la mastitis en el ganado vacuno. Para la llas que conduzcan a preparaciones de clulas inmovilizadas
determinacin de residuos de estos antibiticos en leche se desa- estables, con un mejor almacenamiento y estabilidad opera-
rroll un biosensor microbiano basado en la medida de CO2 cuya cional. En este sentido, la inmovilizacin reversible bioespe-
produccin est relacionada con el crecimiento del microorga- cfica de enzimas utilizando lectinas ofrece una alternativa
nismo Bacillus stearothermophilus var. calidolactis. La presen- prometedora para la inmovilizacin de clulas microbianas
cia del antibitico inhibe el desarrollo de este microorganismo y, por tanto, para la fabricacin de este tipo de biosensores.
y, consecuentemente, la produccin deCO2. La determinacin Sin duda alguna, una fusin fructfera entre las ciencias bio-
se basa en la medida de la diferencia de concentracin de CO2 lgicas y otras disciplinas contribuir a aprovechar todo el
entre la muestra de leche contaminada con b-lactamas y una potencial de esta tecnologa en el futuro.
muestra de control conteniendo b-lactamas y una b-lactamasa de
amplio espectro, que inactiva selectivamente a estos antibiticos.
En este caso, la diferencia de potencial entre los dos electrodos
Agradecimientos
dispuestos en el sensor de CO2 es la que se relaciona con la con- S. Campuzano agradece la inestimable ayuda prestada por
centracin de analito.33 la Prof. P. Yez-Sedeo en la preparacin de este artculo.
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