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MODO DE OPERACIN DE BIORREACTORES

Ctedras:
Biotecnologa (Optativa, IQ)
Ing. Bqca. (Orientacin, IQ)
Biotecnologa de los Alimentos (IA)

Dra. Mara Alicia Martos


Prof. Adjunta a cargo

1
El lugar donde se lleva a cabo el proceso se denomina
biorreactor o fermentador.

Los biorreactores pueden funcionar


en forma continua o discontinua.

Al modo de operar de un biorreactor se lo denomina


sistema de cultivo, los cules pueden ser:

Cultivo batch
Cultivo continuo
Cultivo batch alimentado
CULTIVO BATCH

Consiste en un recipiente cerrado en el que no existe aporte de


nutrientes ni egreso de productos.

El sustrato se aade al comienzo del proceso y los productos son


retirados solo al finalizar el mismo.
En un cultivo batch el microorganismo, crece hasta que se agota un
nutriente esencial (sustrato limitante).

La evolucin del cultivo con el tiempo sigue una curva tpica denominada
curva de crecimiento microbiano.

Los sucesos que tienen lugar durante la misma pueden separarse en


cuatro fases (Fig. 1):

Figura 1: Curva de
crecimiento microbiano
Fases del crecimiento microbiano en cultivo batch:

1. Fase de retardo o de latencia ( fase lag):

Es el perodo de tiempo durante el cual el inculo se adapta a las


condiciones del medio fresco sobre el que se ha sembrado.

2. Fase de crecimiento exponencial (fase logartmica)

El incremento por unidad de tiempo de la masa celular, N de clulas, se


mantienen en un valor constante.

Crecimiento balanceado o equilibrado.

La velocidad de crecimiento aumenta exponencialmente y esta


influenciada por las caractersticas genticas del microorganismo y por las
condiciones ambientales (pH, temperatura, sustrato, etc.)
3. Fase de desaceleracin:

El crecimiento exponencial contina hasta que un nutriente del medio se


agota.

4. Fase estacionaria:

En la fase estacionaria no hay aumento del nmero de clulas. Pero an


ocurren reacciones metablicas (ej. metabolismo energtico y algunos
proceso biosintticos).

5. Fase de muerte exponencial: Se produce la muerte y en algunos casos lisis


celular. Se debe al agotamiento de reservas de energa.
Balance de materia en un biorreactor batch

F1 F2
Ci2 Ci2

Ci, V

Veloc. de acumul. = veloc. de ingreso veloc. de salida + veloc. de


formacin veloc. de consumo

d (VCi )
= F1 Ci1 F2 Ci + V r fi V rci ec. 1
dt

F1 y F2 = 0 y V = constante

dCi
= r fi rci (ec. 2)
dt
Balance para biomasa:
dCi
= r fi rci
dt

Aplicando la ec. 2 a la biomasa se obtiene:


dx
= rx (ec. 3)
dt

En un cultivo batch se puede medir la velocidad de crecimiento a los


distintos tiempos, midiendo en cada punto de la pendiente de la grfica x vs
tiempo.

t
dx
Recordando que rx = . x, se obtiene: rx = =X (ec. 4)
dt

Recordando la ec de Monod:
s
= m
ks + s

Reemplazando en la ec. 4 se obtiene:

dx s
rx = = m x (ec. 5)
dt ks + s

Se aplicar esta ecuacin a las distintas fases del crecimiento


microbiano.
a) Fase de crecimiento logartmico o exponencial:

Al principio del cultivo batch, todos los nutrientes son saturantes, an el


sustrato limitante, (S >> ks) y segn la ecuacin de Monod:
= m

El microorganismo crecer a m mximo y constante, la ec. 5 se reduce a:

dx
rx = = m x (ec. 6)
dt
Integrando la ec. 6 y suponiendo que a t = 0, x =x0 se obtiene:

ln x ln xo = m. t (ec. 7)

Si hubiera fase lag: ln x ln x0 = m. (t - tlag)


Graficando el logaritmo de la concentracin de clulas (x) frente al
tiempo (ec. 7) se obtiene una lnea recta cuya pendiente es m .

ln x ln xo = m. t

Ln x

pte = m

t (h)

Por ello a esta fase se la denomina fase logartmica.


Despejando x de la ecuacin ln x ln xo = m. t

x
xf = xo . em.t
S >> kS
Por ello a esta fase se la = m = cte.
rx = m . x
denomina tambin fase
exponencial.
t

Segn Monod:
Cultivo irrestricto:

En esta zona hay Fase logartmica
= m = cte.
exceso de sustrato:
= m = cte.
S >> kS
 No se puede controlar
el crecimiento del
microorganismo, este
crece a m .
b) Fase de desaceleracin

A medida que el cultivo transcurre, S disminuye hasta que llega a ser


comparable a ks.

La velocidad especfica (
) ir disminuyendo segn la ecuacin de
Monod.

s
1 m dx s
ks + s rx = = m x
dt ks + s

S 0
= f (s) < m Fase de
x
desaceleracin
m

S ~ kS
< m
t
s
d) Fase estacionaria:

Finalmente S = 0 en el cultivo: =0

dx dx
rx = = .x rx = =0
dt dt

No se acumulan ms clulas en el reactor y se est en la fase estacionaria.


rx = 0
x
m

t s
Resumiendo
En la grfica de la ec. de Monod se observan dos zonas:

a) Zona A-B: siendo s>> ks y = m (cultivo irrestricto). Sustrato saturante.


Fase exponencial del cultivo batch

b) Zona B-C: S se va agotando y S ~ ks, = f (S), en esta zona juega la


ecuacin completa de Monod. Fase de desaceleracin del cultivo batch

C
= f (s ) B f (s ) A

m

S >> kS
= m = cte.
Zona sustrato saturante
S << ks
< m

s = ks
s rx = m.x

Figura 2: efecto de la concentracin de sustrato limitante en la velocidad especfica


de crecimiento.
Rendimiento de biomasa en cultivo batch:

X f Xo
Y x/s =
X Yx / s =
S S0 S f

Si S es limitante Sf = 0, por lo tanto:

X f Xo
Yx / s =
S0
Balance de sustrato dCi
= r fi rci
dt

Aplicando la ecuacin anterior al ds


= rs
sustrato dt

rx
Segn la ecuacin de Pirt para la FCE (s) rs = + ms x
Yx/ s

ds x
Recordando que rx = .x, se obtiene y sin manten.: rs = =
dt Y x/ s

ds m mt
En fase exponencial = m y x = xo . em.t por lo tanto: = x0 e
dt Yx / s

Integrando esta expresin con la condicin t=0, s=s0,

x0
s = s0 ( )
e m t 1 Da la variacin de s en funcin de t durante
Y x/s la fase exponencial
Balance de producto:

dp
= rp = q p x
dt

En la fase de crecimiento logartmico:

dp
= q p x 0 e m t
dt

Si qp es constante la ec. anterior puede integrarse con la condicin


inicial p = p0 a t = 0, Obtenindose una expresin que representa la
cantidad final de producto obtenido al finalizar el batch.
Tiempo total para un ciclo de reaccin en discontinuo

tL: tiempo para limpiar y


esterilizar le fermentador.

tLl: tiempo de llenado del


reactor.

tl: tiempo de fase lag.

Tiempo no
productivo total (tnp)

tb: tiempo del proceso fermentativo (tiempo en que el microorganismo


crece a m).

El tiempo total del proceso


fermentativo: tT = tnpt + tb
Productividad en cultivo batch

Stanbury y Whitaker (1984) definieron la productividad de un cultivo batch


(Pb) mediante la expresin:

X (g/l.h)
Pb =
t npt + tb

El tiempo total del proceso


fermentativo (tT)

Tiempo del proceso durante la fase exponencial: 1 X


tb = ln
m X0

Adems
X = Yx / s S 0
Yx / s S 0 m
Pb =
x
Por lo tanto: ln f + m t npt
x0
Desventajas del cultivo Batch

 No es posible controlar .

 Altas concentraciones de nutrientes pueden inhibir el crecimiento


debido al aumento de la presin osmtica del medio o toxicidad de
nutrientes.

 Alta demanda de oxgeno puede generar una limitacin debido a una


insuficiente capacidad del reactor para transferir oxgeno.

 Tiempos muertos entre procesos que disminuye la productividad.


Trabajo Prctico: Cintica del crecimiento microbiano

Microorganismo: Levadura Sacharomyces cerevisiae.

Propagacin y condiciones de cultivo.


Medio: Glucosa: 10 g/l; Sulfato de amonio, 3 g/l.
Cultivo batch T: 30 C, pH: 4,5 .

1. Cul es el rendimiento rendimiento real esperado en el medio con glucosa


como FCE?.
2. En base al rendimiento real, cul es la mxima cantidad de biomasa que se
podra obtener al finalizar el cultivo?.
3. Determine que cantidad de FN debera agregar la medio de cultivo para
evitar que el mismo se limite en nitrgeno.
4. Si se prepara una solucin stock de sulfato de amonio de 120 g/l, que
cantidad debera agregar al medio para asegurarse una concentracin final
de sulfato de amonio de 3 g/l.
5. En base al resultado anterior en el Trabajo prctico, es suficiente la
cantidad de nitrgeno que se agrega al medio de cultivo ?.
6. Con el valor de la velocidad especfica de crecimiento microbiano que
obtenga en el cultivo y el valor del rendimiento experimental (Yx/s) determine
el tiempo que demandara el proceso.