Bioreactor Aspergillus Niger

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA
INGENIERIA DE LA REACCIONES QUIMICAS II

- PRODUCCIN DE CIDO CTRICO CON Aspergillus niger ATCC 16404
UTILIZANDO SUERO DE LECHE COMO MEDIO DE CULTIVO DE
FERMENTACIN-
PROFESOR: Ing. LEONARDO FELIX MACHACA GONZALES

G.H: 01Q
GRUPO: N 3
INTEGRANTES: CDIGO
Alania Medrano Yeltsina 1126120372
Atahualpa Ore Rosa Edith 972933K
Azorza Guillen Kevin 1026120053
Chumpitaz Zarate Jos 092100H
Criales Amao Gerardo 1116120266
Huaraca Aguado Romn 0928841
Quispe Salazar Darlin 1116120408
Sulca Chumpitazi Jordan 1126120452
Vega Dvalos Diego 1126120497
FECHA DE PRESENTACIN: 25 de octubre del 2016
BELLAVISTA CALLAO
Universidad Nacional del Callao
Facultad de Ingeniera Qumica
NDICE
1. INTRODUCCIN............................................................................................................... 3
2. FUNDAMENTO DE DISEO ............................................................................................ 6
2.1. Aspergillus niger ......................................................................................................... 6
2.2. Suero de leche ............................................................................................................ 7
2.3. cido ctrico ................................................................................................................. 7
2.4. Crecimiento Microbiano ............................................................................................. 8
2.4.1. Medicin del Crecimiento Microbiano ............................................................. 8
2.4.2. Crecimiento de cultivo intermitente................................................................ 9|
2.5. Factores que Afectan el crecimiento ..................................................................... 10
2.6. Cintica de crecimiento de Microorganismos ...................................................... 10
2.6.1. Velocidad volumtrica de generacin de clulas microbianas por peso seco .... 10
2.6.2. Velocidad especfica de generacin de clulas microbianas por peso seco. ..... 11
2.6.3. Consumo de nutrientes.................................................................................... 11
2.6.4. Formacin de Producto ................................................................................... 12
2.6.5. Rendimiento de cultivo .................................................................................... 13
2.7. Equipos (tipos de reactores) ................................................................................... 14
2.7.1. Tanques agitados ............................................................................................. 14
2.7.2. Lechos empaquetados .................................................................................... 16
2.7.3. Lechos fluidizados ............................................................................................ 17
2.7.4. Lechos de goteo ............................................................................................... 18
3. PROCEDIMIENTO DE DISEO .................................................................................... 21
3.1. Base de diseo ............................................................................................................. 21
3.1.1. Tipo de proceso: Fermentacin ........................................................................... 21
3.1.2. Capacidad de produccin: 100kg/da (ASUMIDO)........................................... 21
3.1.3. Materia prima.......................................................................................................... 21
3.1.4. Condiciones de operacin .................................................................................... 22
3.2. Calculo de capacidad ................................................................................................... 22
3.3. Diseo de detalles o dimensionamiento ................................................................... 23
3.4. Especificaciones ........................................................................................................... 23
3.5. Plano del Fermentador ................................................................................................ 24
4. DISCUSIN ....................................................................................................................... 26
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ............................................................... 29
6. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA.................................................................................... 30
ANEXOS .................................................................................................................................... 31
APENDICE ................................................................................................................................ 36
1
Resumen
En el presente trabajo bibliogrfico se analiza el diseo del bioreactor para el

proceso de fermentacin por el mtodo sumergido, cuya finalidad es la
obtencin de cido ctrico usando como microorganismo la cepa de Aspergillus
niger ATCC 16404 y como medio fermentativo suero de leche.
El suero de leche es una fuente de carbono de bajo costo.
La bibliografa que se revis indica la obtencin del cido ctrico por tres
procesos de fermentacin nombrados con los rtulos E1, E2 y E3 cada uno con
diferente valor de pH en el rango de 3 a 4, bajo las mismas condiciones de
agitacin y suministro de oxgeno. Con el fin de poder determinar las condiciones
de fermentacin ms adecuadas para la produccin de cido ctrico dentro del
bioreactor.
A cada una de las muestras se les determina el pH, los grados brix, la biomasa
(peso seco), azucares totales (fenol sulfrico) y produccin de cido ctrico
(Saffran -Densted).
El proceso fermentativo E3 segn la bibliografa utilizada indica que este rotulado
present una mejor cintica microbiana obtenindose un rendimiento mximo de
0.38 mg/ml a las 144 horas de iniciado el proceso de fermentacin.
El cido ctrico es una materia prima importante en la industria farmacutica y
alimenticia, por lo cual se recopilo bibliografa para fin de conocer los
fundamentos de diseo, los procedimientos de diseo que conllevan a elaborar
un plano posible del bioreactor a usar, para poder lograr su adecuada obtencin
y a la vez disminuir el dao ambiental que el suero de leche produce como
desecho agroindustrial.
2
1. INTRODUCCIN
En la actualidad los altos ndices de contaminacin han llevado a los

gobiernos de todo el mundo a exigir a las industrias una produccin limpia,
lo cual hace que las empresas planteen soluciones para disminuir sus cargas
contaminantes. La industria alimenticia genera una gran cantidad de residuos
orgnicos e inorgnicos, de caractersticas contaminantes; la biotecnologa
es una excelente alternativa en la biodegradacin de estos desechos,
convirtindolos en materias primas para la obtencin de importantes productos
de consumo. Adems de ser una alternativa de produccin, la biotecnologa
es una herramienta para el control de residuos contaminantes. El suero de
leche es un medio de cultivo con la lactosa como fuente de carbono, y por
ello se utiliza en un gran nmero de procesos fermentativos para la
produccin de etanol, cido actico, cido lctico, cido propinico, cido
glucnico, cido succnico, cido ctrico, glicerol, protena unicelular, enzimas
(-galactosidasa o lactasa), grasas y aceites, butanol y acetona, polisacridos
extracelulares y vitaminas, entre otros. (Betancourt, 2003, Snchez et al.,
2005).
El cido ctrico es un producto con una demanda mundial creciente, debido a

sus aplicaciones en la industria de alimentos (bebidas, embutidos),
farmacutica, cosmtica, plsticos y detergentes (Saniez, 1999, Betancourt,
2003); por este motivo se ha estudiado su produccin a partir de diferentes
sustratos como la melaza de caa (Mayilvahanan et al., 1996, Adham, 2002,
Haq et al, 2002a, Haq et al, 2002b, Al et al., 2002a, Al et al., 2002b), melaza
de remolacha (Berovic, 1999, Berovic and Papovic, 2001), desechos de
cervecera (Roukas and Kotzekidou, 1986), almidn (Suzuki et al., 1996,
Saniez, 1999, Haq et al., 2003b), desechos de pias (Muoz et al., 2000),
sacarosa (Kim et al., 1995, Jernejc y Legisa, 2002, Peksel and Kubicek,
2003), glucosa (Rugsaseel et al., 1995), tuzas de maz (Hang, 2001) y suero
de leche (Hossain et al., 1983, Hossain and Ahmed, 1992, El- Samragy et
al., 1993, El- Samragy et al., 1996, El-Holi and Al- Delaymy, 2003,
3
Betancourt, 2003, Snchez et al., 2005), entre otros. Se h a r e p o r t a d o

q u e l a sacarosa es la fuente de carbono ms favorable seguida por
glucosa, fructosa y lactosa (Grewal and Kalra, 1995).
Para la utilizacin del suero de leche se han realizado investigaciones acerca

de la hidrlisis cida y enzimtica de la lactosa como pretratamiento para
los procesos fermentativos (Amiot, 1991, Arias y Osorio, 1994, Gonzlez,
1996, Szczodrak, 2000, Douglas et al., 2001, Di Serio et al., 2003, Betancourt,
2003, Jurado et al., 2004).
Entre los microorganismos capaces de producir y acumular cido ctrico se

encuentran las especies de los gneros Aspergillus, Citromyces, Penicillium,
Monilia, Candida y Pichia. Las especies de Aspergillus negros y
especialmente Aspergillus niger, son las ms empleadas en este tipo de
produccin; las ms efectivas son las que presentan baja actividad de las
enzimas isocitrato deshidrogenasa y aconitasa hidratasa y una alta actividad
de la citrato sintetasa (Grewal and Kalra, 1995, Saniez, 1999, Anastassiadis
et al., 2002, Betancourt, 2003). La produccin de metabolitos con hongos
filamentosos se ve favorecida cuando se presenta un crecimiento en forma
de pellets; en los pellets grandes la regin central sufre de autolisis debido a
la limitacin de nutrientes como el oxgeno; por el contrario, los pellets
pequeos son deseables en el desarrollo de las fermentaciones (Papagianni,
2004).
En la produccin de cido ctrico con Aspergillus niger los niveles de los

nutrientes y las condiciones ambientales, como pH, agitacin, temperatura,
iones metlicos, concentracin de fosfato, fuente de nitrgeno y carbono,
alcoholes y aditivos, son factores importantes que regulan la morfologa del
microorganismo y el proceso fermentativo (Hossain et al., 1983, Hossain and
Ahmed, 1992, Rugsaseel et al., 1995, Mayilvahanan et al., 1996, El-Samragy
et al., 1996, Netik et al., 1997, Pera and Callieri 1997, Papagianni et al.,
1998, Jianlong and Ping, 1998, Papagianni, et al., 1999, Adham, 2000,
4
Jianlong, 2000, Ali et al., 2002b, Haq et al., 2002a, Haq et al., 2002a, Ali et
al., 2002b, Jernejc and Legisa, 2002, Ates et al., 2002, El-Holi and Al-Delaimy,
2003, Haq et al., 2003a, Peksel and Kubicek, 2003, Papagianni, 2004). El
Aspergillus niger es utilizado para la obtencin de enzimas a nivel industrial,
como la -Amilasa, amiloglucosidasa, catalasa, celulasa, -Galactosidasa, -
Galactosidasa, -Gluconasa, glucoamilasa, glucosa aerodeshidrogenasa,
glucosa oxidasa, - Glucosidasa, -D-Glucosidasa, -Glucosidasa,
hemicelulasa, hesperidinasa, invertasa, lipasa, pectinasa, pitasa, proteasa y
tanasa (Papagianni, 2004).
Los procesos de produccin de cido ctrico se han llevado a cabo por

fermentacin en estado slido (FES) (Rugsaseel et al., 1995, Muoz et al.,
2000), fermentacin sumergida (Hossain et al., 1983, Hossain and Ahmed,
1992, Rugsaseel et al., 1995, Mayilvahanan et al., 1996, Netik et al., 1997,
Paul et al., 1999, Berovic, 1999, Ates et al., 2000, Jianlong, 2000, Berovic
and Papovic, 2001, Jernejc and Legisa, 2002, Ali et al., 2002a, Al et al.,
2002b, Haq et al., 2002a, Haq et al., 2003a, Papagianni, 2004) y
fermentacin en superficie (Roukas and Kotzekidou, 1986). Adems, se ha
estudiado la produccin de cido ctrico por Aspergillus niger inmovilizado en
un reactor de lecho fluidizado (Sanromn, 1996).
Este trabajo tuvo como objetivo encontrar las condiciones nutricionales

adecuadas para la mejor produccin de cido ctrico a partir del suero de
leche con Aspergillus niger. Se seleccionaron los tratamientos previos, como
el mtodo de la hidrlisis cida y enzimtica de la lactosa y la reduccin,
de ser necesaria, de metales pesados en el suero. Se evalu el mejor medio
de cultivo al complementar con nitrgeno, fsforo, magnesio, metanol,
gelatina y CMC.
5
2. FUNDAMENTO DE DISEO
2.1. Aspergillus niger

Se trata un hongo filamentoso, su nombre Aspergillus niger hace
referencia al color negro de sus esporas. Se clasifica dentro de la
familia Trichocomaceae, orden Eurotiales, clase Eurotiomycetes, filum
Ascomycota.
Figura N 1 Aspergillus niger
La Aspergillus niger est distribuido en suelos con pH entre 4 a 8 y su

abundancia aumenta luego de las actividades de labranza y
fertilizacin del suelo, tolera altas concentraciones de herbicidas.
Habita en una gran variedad de sustratos incluyendo: granps. Forraje,
fruto d, vegetales, semillas y en la rizosfera de una gran variedad de
plantas.
Este hongo es empleado en varios procesos industriales, por la
variedad de enzimas que produce y por qu no necesita medios
exigentes ni condiciones estrictas para su crecimiento.
Los cidos ctrico y glucnico son obtenidos comercialmente por el uso
de este microorganismo. As mismo se producen preparaciones
enzimticas y algunos antibiticos.
La cepa de referencia ATCC 12845 produce cido ctrico y
degrada melazas
6
2.2. Suero de leche

Tiene un perfil de minerales en el que se destaca sobre todo la
presencia de potasio y sodio que favorece la eliminacin de lquidos y
toxinas. Cuenta con una cantidad relevante de otros minerales como
calcio (50% ms que el contenido en la leche), fsforo, magnesio y
oligoelementos como zinc, hierro, cobre, formando todos ellos sales
de gran biodisponibilidad para nuestro organismo.
Para la fermentacin ctrica utilizando Aspergillus niger es de gran
importancia el control de los metales; los cationes divalentes deben
estar en concentraciones muy bajas, sin llegar al punto de su ausencia.
El Mn+2 tiene efectos sobre la morfologa del microorganismo
favoreciendo la formacin de pequeos pellets esponjosos y
redondeados, que son los deseados para una mxima productividad
de cido ctrico. Altos niveles de zinc en cultivos de hongos mantienen
el microorganismo en fase de crecimiento y el cido ctrico no se
acumula; se citan como valores ptimos 0,3 ppm de Zn+2 y 1,3 ppm de
Fe+2.
Para el caso del suero de leche como medio de crecimiento, la
remocin de metales divalentes no es necesaria ya que los elementos
de mayor influencia como el manganeso, el zinc y el hierro que se
encuentran en concentraciones de 0,001, 0,2 y 1 ppm,
respectivamente, estn dentro de los intervalos recomendados para la
produccin de cido ctrico con Aspergillus niger.
2.3. cido ctrico

El cido ctrico es uno de los aditivos ms utilizados y apreciados por
la industria alimentaria como conservante y antioxidante natural de
muchos alimentos preparados y enlatados.
Es un slido translucido o blanco, de forma granular; es inodoro, de
sabor cido no desagradable; cristaliza en soluciones acuosas
concentradas calientes en forma de grandes prismas rmbicos, con
una molcula de agua, la cual pierde cuando se caliente a 100C,
fundindose al mismo tiempo.
7
La acidez del cido ctrico es debida a los tres grupos carboxilos -

COOH que pueden perder un protn en las soluciones. Si sucede esto,
se produce un in citrato. Los citratos son unos buenos controladores
del pH de soluciones cidas.
2.4. Crecimiento Microbiano

Una clula microbiana no viable se define como, la clula incubada en
un medio de apoyo para el crecimiento por un perodo suficientemente
largo, es incapaz de aumentar su tamao o de multiplicarse.
Es importante entender que una clula que aparentemente no crece,
aun puede ser viable, pero el medio es incapaz de apoyar el
crecimiento debido a la disminucin de un nutriente esencial, la
presencia o produccin de materiales txicos o un cambio en el medio
fsico (como la disminucin de oxgeno, pH o temperatura). A menudo,
las clulas pueden vivir en este estado sin crecimiento particularmente
como esporas o quistes, por perodos largos.
2.4.1. Medicin del Crecimiento Microbiano

Existen muchos mtodos para la determinacin del crecimiento
de clulas microbianas entre los cuales podemos mencionar:
peso seco, absorcin, peso hmedo, volumen de clulas
empacadas, nmero de clulas, masa de componente celular,
mediciones fsicas.
Cuadro N1. Mtodos para la cuantificacin de crecimiento de

poblaciones microbianas
Mtodos Fundamento Observaciones
Requiere clulas
Recuento de celda Conteo directo del individuales y medio
nmero de clulas limpio
8
Requiere clulas
individuales,
Conteo del nmero
Recuento de placa incidencia de las
de colonias
condiciones de
incubacin
Requiere clulas
N.M.P Estadstico individuales y medio
limpio
No admite slidos
Peso seco Medicin directa
en el medio
Requiere clulas
Transmisin de la
Turbidimetra individuales y
luz
medios limpios.
Volumen
Centrifugacin Poco preciso
empacado
2.4.2. Crecimiento de cultivo intermitente

El cultivo por lotes o intermitente representa el crecimiento en un
sistema cerrado puesto que no se aade medio nuevo al cultivo.
Cuando un medio de crecimiento adecuado se inocula con
clulas, tiene lugar una secuencia de eventos caractersticos
llamados ciclo de crecimiento el cual se puede describir por medio
de una grfica del peso seco celular (x) (g 1-1) contra el perodo
de incubacin en horas (h).
9
Figura N 2: Ciclo de Crecimiento Intermitente.
Fases de crecimiento (a) latencia; i(b) aceleracin; (c)

exponencial; (d) desaceleracin; (e) estacionaria; (f) declinacin.
2.5. Factores que Afectan el crecimiento

En la produccin de cido ctrico con Aspergillus niger los niveles de
los nutrientes y las condiciones ambientales (como pH, agitacin,
temperatura, iones metlicos, concentracin de fosfato, nitrogeno,
carbono y aditivos) son factores importantes que regulan la morfologa
del microorganismo y el proceso fermentativo
2.6. Cintica de crecimiento de Microorganismos
2.6.1. Velocidad volumtrica de generacin de clulas microbianas por

peso seco
2 1
= =
2 1
Donde:
: Velocidad volumtrica (g/ L.h)
10
2 : gramos de biomasa en tiempo final
1 : gramos de biomasa en tiempo inicial
1 : tiempo inicial
2 : tiempo final
2.6.2. Velocidad especfica de generacin de clulas microbianas por

peso seco.
1
=

Donde:
: velocidad especfica
: gramos de biomasa / litros de muestra analizada

: velocidad volumtrica de biomasa

2.6.3. Consumo de nutrientes
2.6.3.1. Velocidad volumtrica de consumo de sustrato
2 1
=
2 1
Donde:
: velocidad volumtrica de consumo de sustrato (g / L.h)
2 : Concentracin (g/L) de sustrato en el tiempo final
1 : Concentracin (g/L) de sustrato en el tiempo inicial
2 : tiempo final
1 : tiempo inicial
11
Las unidades son: gramos de sustrato consumido /

Litrohora
2.6.3.2. Velocidad especifica de consumo de sustrato
1
= ( )

Donde:
: velocidad especfica de consumo de sustrato(g/L.h)

: velocidad volumtrica de consumo de sustrato
Las unidades son: gramos de sustrato consumido / gramos

de biomasa x hora
2.6.4. Formacin de Producto
2.6.4.1. Velocidad volumtrica de formacin de productos.
2 1
= =
2 1
Donde:
: velocidad volumtrica de produccin de cido ctrico (g /

L*h)
2 : Concentracin (g/L) de cido ctrico
1 : Concentracin (g/L) de cido ctrico
2 : tiempo final
12
1 : tiempo inicial
Las unidades son: gramos de producto formado / Litrohora
2.6.4.2. Velocidad especfica de formacin de productos.
1
=

Donde:
: velocidad especfica de produccin de cido ctrico

: velocidad volumtrica de produccin de cido ctrico

Las unidades son: gramos de producto formado / gramos de

biomasahora
2.6.5. Rendimiento de cultivo

=

Donde:
: gramos de cido ctrico / gramos de sustrato consumido

: gramos de cido citrico
: gramos de sustrato consumido
Las unidades son: gramos de producto / gramos de sustrato

consumido
13
2.7. Equipos (tipos de reactores)

El tanque cilndrico con o sin agitacin es el reactor ms utilizado en
el bioprocesado. Sin embargo, existe una gran cantidad de
configuraciones de fermentadores en diferentes industrias de
bioprocesos. Continuamente se desarrollan nuevos biorreactores
para aplicaciones especficas y nuevas formas de biocatalizadores
como tejidos animales y vegetales, as como clulas y enzimas
inmovilizadas.
Un factor importante que afecta al rendimiento del reactor es el modo

de operacin. Existen tres modos principales de operacin de los
bioreactores:
Discontinuo
De alimentacin intermitente
Continuo.
La eleccin de la estrategia de operacin presenta un importante

efecto sobre la conversin del sustrato, las concentraciones de
producto, la posibilidad de contaminacin y la fiabilidad del proceso.
Gran parte del reto que representa el diseo de un reactor, para la

gran parte de fermentaciones que necesitan oxgeno, recae en la
provisin de una mezcla y aireacin adecuadas. Los reactores
utilizados en cultivos anaerobios, sin inyeccin de aire ni agitacin,
son generalmente de construccin ms simple. En la siguiente
discusin sobre configuraciones de biorreactores se supondr que
son para operacin aerobia.
2.7.1. Tanques agitados

La mezcla y dispersin de las burbujas se alcanza mediante
agitacin mecnica, lo cual requiere una relativa gran cantidad de
energa por unidad de volumen. Los deflectores se utilizan para
14
reducir la formacin de vrtices. Existe una amplia variedad de

formas y tamaos diferentes de rodetes que producen diferentes
tipos de flujo dentro del recipiente. En los fermentadores altos se
instalan varios rodetes para mejorar la mezcla.
Figura N 3: Fermentador de tanque agitado
Generalmente, solo el 70-80% del volumen de los reactores

agitados se llena con lquido, lo que permite que exista un espacio
en la parte superior para retirar las gotas que arrastra el gas de
salida y para dar cabida a cualquier espuma que se forme. Si la
formacin de espuma es un problema, se puede instalar otro
rodete denominado separador de espuma. Otra posibilidad
consiste en aadir agentes antiespumantes al caldo de cultivo,
aunque estos pueden reducir la transferencia de oxigeno por lo
que se suele preferir la opcin de dispersin mecnica de la
espuma.
El factor de forma de los reactores agitados, es decir, la relacin

entre la altura y el dimetro, puede variar considerablemente. La
forma ms barata de construccin tiene una relacin aproximada
15
de 1, ya que esta forma presenta la menor superficie, y por tanto

necesita la mnima cantidad de material para un determinado
volumen. Sin embargo, cuando se necesita aireacin la relacin
de forma aumenta, lo cual proporciona tiempos de contacto
mayores entre las burbujas que ascienden y el lquido, as como
una mayor presin hidrosttica en el fondo del reactor.
El control de la temperatura y de la transmisin de calor en los
reactores agitados puede resolverse mediante la colocacin de
serpentines de refrigeracin internos.
2.7.2. Lechos empaquetados

Los reactores de lecho empaquetado se utilizan con
biocatalizadores inmovilizados o en forma de partculas. El reactor
consiste en un tubo, generalmente vertical, relleno o empaquetado
con partculas del catalizador. El medio de cultivo puede
alimentarse por la parte superior o inferior de la columna y forma
una fase lquida continua entre las partculas. En los lechos
empaquetados, el dao debido al desgaste de las partculas es
mnimo en comparacin con los reactores agitados. Los reactores
empaquetados han sido utilizados a nivel comercial con clulas y
enzimas inmovilizadas para la produccin de aspartato y fumarato,
la conversin de penicilina a acido 6-aminopenicilanico y en la
resolucin de ismeros de aminocidos.
La transferencia de materia entre el medio lquido y el catalizador
solido se facilita trabajando a caudales elevados del lquido a travs
del lecho para lo cual normalmente se recircula el lquido. Para
evitar que el catalizador se arrastre fuera de la columna se colocan
pantallas a la salida del lquido. Las partculas deben ser
relativamente incompresibles y capaces de soportar su propio peso
en la columna sin deformarse y obstruir el flujo del lquido. El medio
recirculado debe estar bien limpio y libre de desechos para evitar
el taponamiento del lecho. La aireacin se realiza generalmente en
un recipiente separado ya que, si se inyecta en el aire directamente
16
en el lecho, la coalescencia de las burbujas producira bolsas de

gas y canalizaciones o una distribucin deficiente del flujo. Los
lechos empaquetados no pueden utilizarse en aquellos procesos
que produzcan grandes cantidades de dixido de carbono u otros
gases que puedan quedar atrapados en el relleno.
Figura N 4: Reactor de lecho empaquetado con recirculacin del medio
2.7.3. Lechos fluidizados

Cuando se hace fluir hacia arriba un lquido sobre un lecho
empaquetado de partculas de catalizador de tamao y densidad
apropiados, este se expande debido al movimiento ascendente de
las partculas. Este es el fundamento de operacin de los reactores
de lecho fluidizado. Aprovechando que las partculas presentes en
los lechos fluidizados estn en continuo movimiento y no se
producen canalizaciones ni atascos en los mismos, el aire puede
introducirse directamente en la columna. Los reactores de lecho
fluidizado se utilizan en el tratamiento de residuos con arena o un
material similar que soporta la mezcla de poblaciones microbianas.
Tambin pueden usarse con organismos floculantes en los
procesos de fabricacin de la cerveza o en la produccin de
vinagre.
17
Figura N 5: Reactor de lecho fluidizado
2.7.4. Lechos de goteo

El reactor de lecho de goteo es otra variacin del lecho
empaquetado. El lquido es rociado en forma de spray sobre la
parte superior del empaquetamiento y las gotas descienden a
travs del lecho en forma de pequeas corrientes. El aire puede
introducirse por la base, y puesto que la fase liquida no es
continua a travs de la columna, el aire o cualquier gas se mueve
con relativa facilidad alrededor del empaquetamiento. Los
reactores de goteo se utilizan ampliamente para el tratamiento
aerobio de aguas residuales.
Figura N 6:
Reactor de lecho de goteo
18
2.8. Determinacin de los coeficientes estequiomtricos-

Balances elementales
Consideremos la siguiente reacion bilgica, que corresponde al crecimiento del

Aspergillus Niger (habitualmente usadas para la fermentacin alcohlica) en
forma aerbica sobre glucosa.
6 12 6 + 2 + 3 1.72 0.55 0.21 + 2 + 2 + 6 8 7
Ahora veamos los pasos que seguiremos para determinar la estequiometria de

esta reaccin:
1. Llevamos los tomos de C a 1 en cada molcula en la cual exista este

elemento:
2 + 2 + 3 1.72 0.55 0.21 + 2 + 2 + 6 8 7
2. Dividimos por a:
2 + 12 2 + 13 3 1 1.72 0.55 0.21 + 11 2 + 12 2
3. Planteamos los balances de los elementos C, H, O y N, para ello

consideremos los valores absolutos de los rendimientos.
Balance de C:
1 1 11 = 0
Balance de H:
2 + 313 1.721 212 = 0
Balance de O:
1 + 212 0.551 211 12 = 0
19
Balance de N:
13 0.211 = 0
Hay 5 rendimientos para determinar (o lo que es lo mismo 6 coeficientes

estequiomtricos), sin embargo disponemos de 4 ecuaciones linealmente
independiente. Esto indica que un rendimiento debe ser informacin
experimental.
De acuerdo al tiempo de reaccin encontrado podemos encontrar el coeficiente

de respiracin.
- El tiempo de bioreaccin, para clulas:
1 S0 Sf
t biorxn = ln(1 + 1 qp m
)
max ( + + s ).xA
Yxs YPs ., max max
t biorxn = 43.19789
11
= 1.04 = = 21 =
12
20
Esto implica que:
11 = 0.9612
Esta es una quinta ecuacin que junto con los balances elementales permiten el
clculo de los coeficientes estequiomtricos, los que para el ejemplo resultan
(expresado en cmol):
CH2 O + 0.059O2 + 0.198NH3 0.943CH1.72 O0.55 N0.21 + 0.057CO2 + 0.486H2 O
3. PROCEDIMIENTO DE DISEO
3.1. Base de diseo
3.1.1. Tipo de proceso: Fermentacin
3.1.2. Capacidad de produccin: 10 kg/da (ASUMIDO)
3.1.3. Materia prima
- Microorganismo: Aspergillus Niger ATCC 16404
- Medio/Inoculo: Agar Sabouraud
- Sustrato: Suero de leche (Lactosa, como fuente de carbono)
21
3.1.4. Condiciones de operacin
- Temperatura de operacin: 30C (Proceso ISOTERMICO)
- pH: 3.66
- Velocidad de agitacin: 160 rpm
3.2. Calculo de capacidad
- Volumen del Bioreactor
productos t biorxn + t muerto

Vbioreactor = Fp . ( ).( ) 1,2
reactantes S0 . conversin
De la cintica de reaccin tenemos:
productos = 1,486 Fp = 0.38/
reactantes = 1,257 t muerto = 3 ()
De los datos experimentales tenemos:
max = 0.018591 , max = 7.726 103 /.
q p = 0.000434/. xA = 1.762/
Yxs = 1.25236/ Conversin=99%
YPs = 0.326239/ t biorxn = 43.19789

S0 = 2.3419/
Sf = 0.23419/
Se desprecia los requerimientos de mantenimiento:
Por lo tanto, el volumen del bioreactor ser:
Vbioreactor = 10.74
22
3.3. Diseo de detalles o dimensionamiento
Dimetro y altura del bioreactor
Vbioreactor = 0,252
45
= = 4.
1
Entonces:
Vbioreactor = 3 = 15,06 = 60,26
Redondeando
= =
3.4. Especificaciones
- El material de construccin del bioreactor debe soportar la corrosin

generada por el ambiente acido (2 < pH < 6).
- El reactor debe contar con una entrada de aire constante para la

alimentacin.
- De igual manera que para el oxgeno debe contar con una entrada
para la alimentacin de la fuente de nitrgeno (NH3).
23
3.5. Plano del Fermentador
Figura N 7: Plano del Fermentador
En las siguientes figuras se muestra las especificaciones (partes,

distribuciones de orificios, relaciones geomtricas y dimensiones) del
fermentador diseado. Se recomiendan dos tipos de agitadores, una turbina
tipo Ruhston de seis palas paralelas al eje de agitacin, para mezclar medios
de baja viscosidad caracterstico de la fermentacin ABE (figura 8), y un
agitador tipo hlice de tornillo para mezclar sistemas sensibles a esfuerzos
de corte o cuando se requiere agitacin de medios viscosos. Para asegurar
homogeneidad en todo el volumen de trabajo, se recomienda instalar 5
turbinas a lo largo del eje de agitacin (figura 8), las cuales se encuentran
ubicadas de manera equidistante. As mismo, se sugiere instalar cuatro
bafles removibles con la finalidad de mejorar el sistema de agitacin y facilitar
la limpieza.
24
Para garantizar condiciones de aerobiosis y anaerobiosis en el sistema de

fermentacin, se recomienda utilizar un difusor tipo anillo (figura 8), que
consigue dispersar altos flujos de gas, a travs de perforaciones en la base
del tubo, sin tendencia a obstruirse, lo que resulta beneficioso en la
durabilidad del dispersor. Por otro lado, es aconsejable instalar disco o pala
(cortadora de espuma) en la parte superior del fermentador como se ilustra
en la figura 8 para evitar la formacin de espuma.
Figura N 8:
Fermentador
diseado en
SolidWork
25
Figura N 9: Relaciones geomtricas del fermentador
4. DISCUSIN
Los resultados de la fermentacin en el biorreactor de 3,26L con

A. niger seala que los azcares reductores no son completamente
utilizados (porcentaje de utilizacin del 90%) por lo que se puede explorar la
posibilidad de aumentar su tasa de utilizacin en futuros trabajos. En este
aspecto es fundamental profundizar en la determinacin de los valores
ptimos de las condiciones de cultivo (pH, temperatura, aireacin) que
contribuyan a una mayor asimilacin del sustrato y produccin de cido
ctrico. Igualmente, es necesario hacer un estudio a la concentracin de
nitrgeno inorgnico en el medio para correlacionarlo con la biosntesis del
cido.
Los procesos comerciales para la produccin de cido ctrico se llevan a

cabo por fermentacin de melazas empleando A. niger. Las melazas tienen
como fuente de carbono principal la sacarosa. La utilizacin de suero de
26
leche para la produccin de cido ctrico implica la seleccin de

microorganismos que tengan la capacidad de asimilar la lactosa del suero.
Otra opcin a considerar para aumentar la produccin de cido ctrico tanto

en el caso de A. niger, como en el de A. carbonarius, consiste en explorar la
mutacin inducida de los microorganismos estudiados con el fin de obtener
cepas productoras de cido ctrico de mayor rendimiento. De esta manera,
la combinacin de esta tcnica con los diferentes tratamientos de suero
estudiados permitira aumentar las concentraciones de cido que sealan
las fuentes bibliogrficas utilizadas para este trabajo.
Existe un estudio que demuestra la viabilidad de utilizar las cepas NRRL 368
y NRRL 67 de A. carbonarius para biosintetizar cido ctrico a partir de suero
de leche. En particular, la cepa de A. carbonarius NRRL 368 presenta un
promedio de concentraciones de cido ctrico para todos los tratamientos de
9.27 g/L, que es mayor a la concentracin alcanzada para A. niger sealan
otras fuentes bibliogrficas el valor (0.34 g/L) como en otros estudios
reportados. Por ejemplo, en el estudio de El-Holi y Al-Delaimy (2003) se
obtuvo una concentracin de 2.28 g/L a los 10 das de fermentacin
empleando suero sin suplementar en cultivo superficial. En el caso del
trabajo de Hossain et al. (1983) se reporta una concentracin de 5.0 g/L a
los 10 das de cultivo sumergido para la mejor cepa productora de A. niger de
las 10 cepas estudiadas, siendo las restantes muy inferiores en produccin;
slo llevando a cabo un programa de mutacin para esta cepa se logr incre-
mentar la concentracin de cido ctrico hasta un nivel de 8.3 g/L para el
permeado de suero sin suplementos adicionales.
27
Otros estudios segn la bibliografa encontrada y revisada sealan la

produccin de cido ctrico como se ve en la siguiente tabla:
Tipo de cido
Cepa Tratamiento Tiempo Referencia
cultivo ctrico
Del suero (d)
(g/l)
A. niger Hossain et
Sumergido Permeado 10 5.0
IMI 41874 al.
A. niger
IMI 51433
A. niger
ATCC 26550
A. niger MH
15-15*
El-
A. niger CAI
Sumergido Entero 9 1.1 Samragy e
M 111
t al.
A. niger El-Holi y
Superficial Entero 10 2.3
ATCC 9642 Al-Delaimy
Desproteiniz
A. niger
ado,
NRRL 3 Sumergido 10 5.7
hidrolizado,
(ATCC 9029)
evaporado
A. carbonarius
Sumergido Varios 10 9.3
NRRL 368
* Mutante de la cepa IMI 41874
28
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
El suero lcteo es un medio de cultivo muy adecuado para el

crecimiento del Aspergillus niger ATCC 16404, debido a las
condiciones nutricionales requeridas por el microorganismo para la
biosntesis del metablico cido ctrico.
El suero de la leche obtenido por procesos artesanales y semi-

industriales, posee una adecuada y rica composicin de lactosa, sales
minerales, protenas y grasas; lo que lo vuelve un desecho
agroindustrial conveniente para su reaprovechamiento en procesos
fermentativos en la produccin de metablitos y de esta manera se
evita la contaminacin ambiental.
Hacer uso de un biorreactor que permita controlar de manera ms

eficiente los parmetros de pH, temperatura, agitacin y aireacin, lo
que conviene para mejorar el rendimiento en la obtencin de cido
ctrico en un proceso fermentativo.
La alta disponibilidad y bajo costo del suero de leche, aporta a nivel

industrial un equilibrio de rentabilidad entre el volumen de metablito
obtenido y el precio de la materia prima.
El biorreactor, es sin duda, uno de los equipos fundamentales de la

microbiologa industrial. Es el recipiente donde se realiza el cultivo, y
su diseo debe ser tal que asegure un ambiente uniforme y adecuado
para los microorganismos.
29
6. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
VAZQUEZ, OROZCO Y LEOBARDO (2007). MANUAL DE PRCTICAS:

LABORATORIO DE BIORREACTORES. Instituto Politcnico Nacional.
Colombia.
WARD, Owen P. (1991). BIOTECNOLOGA DE LA FERMENTACIN:

PRINCIPIOS, PROCESOS Y PRODUCTOS. Editorial Acribia. Zaragoza
Espaa.
GACESA, P. Y HUBBLE, J. (1990). TECNOLOGIA DE LAS ENZIMAS. Editorial

Acribia. Zaragoza Espaa.
DOTRAN, P. (1995). PRINCIPIOS DE INGENIERIA DE BIOPROCESOS.

Editorial Acribia. Zaragoza Espaa.
SCRAGG, A (2002). BIOTECNOLOGA PARA INGENIEROS. Editorial

Limusa. Mxico
ROJAS, A. Y GONZLES, G. (2011). DISEO CONCEPTUAL DE UN

FERMENTADOR PARA PRODUCCION DE N-BUTANOL A PARTIR DE
GLUCOSA EMPLEANDO CLOSTRIDIUM ACETOBUTYLICUM ATCC 824.
30
ANEXOS
1. Anexo N1: Aprovechamiento del suero de queso
31
2. Anexo N2: Ficha tcnica para el agar del sustrato
32
33
34
35
APENDICE
1. Estrategia de Diseo para Reactores Discontinuos Isotermos
Este el procedimiento que servir de gua para el diseo de reactores
discontinuos isotermos:
Comenzamos aplicando la ecuacin del balance molar general (nivel 1) a un
reactor especfico para obtener la ecuacin de diseo del reactor (nivel 2).
Si las condiciones de alimentacin estn especificadas, todo lo que
necesitamos conocer para evaluar la ecuacin de diseo es la velocidad de
reaccin como funcin de la conversin de reaccin. Lgicamente en las
mismas condiciones en las que operar el reactor (presin, temperatura,
etc). Cuando (-rA = f(XA)) est dada, iremos del nivel 3 al nivel 7 bien para
determinar el volumen o el tiempo de reaccin necesario para alcanzar una
determinada conversin de reaccin.
Inicio
Balance general molar

1

+ =

Ec. de diseo
=

2 O bien = ( )

Evaluar la integral (Ec. de

Si 7 Diseo)
Esta ( ) = ( )
3 Determinacin de y
?

Determinar la ley de la velocidad en
4 trminos de la concentracin de
especies reaccionantes
36
5 6
Utilizar la estequiometria para Combinar los pasos
expresar la concentracin como funcin
de la concentracin
4 5
y
Para obtener ( ) = ( )
Nivel 5
0 (1 )
= =

Volumen constante Volumen variable

(1 ) 0
= = 0 (1 + )
0 0
= 0 (1 )
Presin Constante

= 0 (1 + )
0
(1 )
= 0
(1 + ) 0
Temperatura Constante
(1 )
= 0
(1 + )
37

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

INGENIERIA DE LA REACCIONES QUIMICAS II

PROFESOR: Ing. LEONARDO FELIX MACHACA GONZALES

FECHA DE PRESENTACIN: 25 de octubre del 2016

En el presente trabajo bibliogrfico se analiza el diseo del bioreactor para el

En la actualidad los altos ndices de contaminacin han llevado a los

El cido ctrico es un producto con una demanda mundial creciente, debido a

Betancourt, 2003, Snchez et al., 2005), entre otros. Se h a r e p o r t a d o

Para la utilizacin del suero de leche se han realizado investigaciones acerca

Entre los microorganismos capaces de producir y acumular cido ctrico se

En la produccin de cido ctrico con Aspergillus niger los niveles de los

Los procesos de produccin de cido ctrico se han llevado a cabo por

Este trabajo tuvo como objetivo encontrar las condiciones nutricionales

2.1. Aspergillus niger

Figura N 1 Aspergillus niger

La Aspergillus niger est distribuido en suelos con pH entre 4 a 8 y su

2.2. Suero de leche

2.3. cido ctrico

La acidez del cido ctrico es debida a los tres grupos carboxilos -

2.4. Crecimiento Microbiano

2.4.1. Medicin del Crecimiento Microbiano

Cuadro N1. Mtodos para la cuantificacin de crecimiento de

Mtodos Fundamento Observaciones

2.4.2. Crecimiento de cultivo intermitente

Figura N 2: Ciclo de Crecimiento Intermitente.

Fases de crecimiento (a) latencia; i(b) aceleracin; (c)

2.5. Factores que Afectan el crecimiento

2.6. Cintica de crecimiento de Microorganismos

2.6.1. Velocidad volumtrica de generacin de clulas microbianas por

: Velocidad volumtrica (g/ L.h)

2 : gramos de biomasa en tiempo final

1 : gramos de biomasa en tiempo inicial

2.6.2. Velocidad especfica de generacin de clulas microbianas por

: gramos de biomasa / litros de muestra analizada

2.6.3. Consumo de nutrientes

2.6.3.1. Velocidad volumtrica de consumo de sustrato

: velocidad volumtrica de consumo de sustrato (g / L.h)

2 : Concentracin (g/L) de sustrato en el tiempo final

1 : Concentracin (g/L) de sustrato en el tiempo inicial

Las unidades son: gramos de sustrato consumido /

2.6.3.2. Velocidad especifica de consumo de sustrato

: velocidad especfica de consumo de sustrato(g/L.h)

: gramos de biomasa / litros de muestra analizada

Las unidades son: gramos de sustrato consumido / gramos

2.6.4. Formacin de Producto

2.6.4.1. Velocidad volumtrica de formacin de productos.

: velocidad volumtrica de produccin de cido ctrico (g /

2 : Concentracin (g/L) de cido ctrico

1 : Concentracin (g/L) de cido ctrico

Las unidades son: gramos de producto formado / Litrohora

2.6.4.2. Velocidad especfica de formacin de productos.

Las unidades son: gramos de producto formado / gramos de

2.6.5. Rendimiento de cultivo

: gramos de cido ctrico / gramos de sustrato consumido

: gramos de cido citrico

: gramos de sustrato consumido

Las unidades son: gramos de producto / gramos de sustrato

2.7. Equipos (tipos de reactores)

Un factor importante que afecta al rendimiento del reactor es el modo

La eleccin de la estrategia de operacin presenta un importante

Gran parte del reto que representa el diseo de un reactor, para la

2.7.1. Tanques agitados

reducir la formacin de vrtices. Existe una amplia variedad de