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THESE DE DOCTORAT DE

LUNIVERSIT PIERRE ET MARIE CURIE

Spcialit
Chimie Analytique

Prsente par
Mlle Khadija EL MRABET

Pour obtenir le grade de

DOCTEUR de lUNIVERSIT PIERRE ET MARIE CURIE

Sujet de la thse :

Dveloppement d'une mthode d'analyse de rsidus de pesticides par dilution


isotopique associe la chromatographie en phase liquide couple la
spectromtrie de masse en tandem dans les matrices cralires aprs extraction
en solvant chaud pressuris

Devant le jury compos de :

Mme Hlne BUDZINSKI Rapporteur


M. Claude PEPE Rapporteur
M. Stphane BOUCHONNET Examinateur
M. Didier ORTELLI Examinateur
M. Frdric HOMMET Membre invit
Mme Valrie PICHON Directrice de thse
Mme Batrice LALERE Co-Directrice de thse

Laboratoire Environnement et Chimie Analytique


Ecole suprieure de Physique et de Chimie Industrielles (ESPCI)
10, rue Vauquelin 75231 Paris Cedex 5

Equipe mtrologie chimique organique et biomdical


Laboratoire national de mtrologie et dessais (LNE)
1 rue Gaston Boissier - 75724 Paris Cedex 15
Remerciements

REMERCIEMENTS

Je tiens remercier Mesdames Valrie Pichon et Batrice Lalere.

Ma directrice de thse, Mme Valrie Pichon sans qui cette aventure naurait pu commencer.
Je tiens la remercier pour son soutien, sa disponibilit et ses qualits scientifiques dont jai
pu profiter depuis le DEA.

Mme Batrice Lalere pour mavoir accueillie au sein de son quipe, pour la confiance quelle
ma tmoigne durant ces annes et pour avoir mis ma disposition des moyens performants
pour raliser ces travaux.

Je remercie galement Mme Vronique Le Diouron, pour son soutien technique et moral, si
prcieux tout au long de cette thse, notamment pendant les priodes agites lorsque plus rien
ne fonctionne

Je remercie chaleureusement tous mes collgues ainsi que tous les thsards et stagiaires passs
et prsents du LNE avec lesquelles jai pu partager dagrables moments. Je remercie
galement les diffrentes quipes transverses : lquipe statistique et Mme Coullon du service
documentation du LNE.

Mes remerciements vont aussi tous les membres du Laboratoire Environnement et Chimie
Analytique de lESPCI pour la bonne ambiance partage les quelques mois prcdents la
thse et leur accueil durant mes diffrentes visites.

Jadresse mes sincres remerciements Mme Hlne Budzinski, M. Stphane Bouchonnet,


M. Frdric Hommet, M. Didier Ortelli et M. Claude Pepe qui mont fait lhonneur daccepter
dexaminer et de juger ce travail.

Enfin, une pense concerne bien videmment tous mes proches et en particulier, mes parents,
merci eux pour leur encouragement perptuel.

MERCI tous.
Remerciements
Table des matires

TABLE DES MATIERES


RESUME ET ABSTRACT...................................................................................................... 5
LISTE DES COMMUNICATIONS ECRITES ET ORALES............................................. 7
LISTE DES ABREVIATIONS ET NOTATIONS ................................................................ 9
INTRODUCTION.................................................................................................................. 11
CHAPITRE I : ETAT DE LART ........................................................................................ 15
I.1. PRESENTATION GENERALE DES PESTICIDES ..................................................................... 16
1. Historique et dfinitions ............................................................................................... 16
2. Classification................................................................................................................ 17
2.1. Premier systme de classification ......................................................................... 18
2.2. Deuxime systme de classification...................................................................... 19
3. Effets des pesticides sur la sant et rglementation..................................................... 19
3.1. Effets sur la sant .................................................................................................. 19
3.2. Rglementations .................................................................................................... 21
I.2. PROBLEMATIQUE............................................................................................................. 23
I.3. DETERMINATION DES PESTICIDES .................................................................................... 24
1. Chromatographie en phase gazeuse ............................................................................ 24
2. Chromatographie en phase liquide .............................................................................. 27
3. Dtection par spectromtrie de masse ......................................................................... 30
3.1. Principe de la spectromtrie de masse................................................................... 30
3.2. Sources dionisation pression atmosphrique .................................................... 31
3.3. Composition de la phase mobile ........................................................................... 36
3.4. Analyseurs............................................................................................................. 37
3.5. Limitations associes au couplage de la CPL la SM.......................................... 39
4. Chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem . 40
4.1. Principe et gnralits ........................................................................................... 40
4.2. CPL/SM de type triple quadriple et trappe ionique ............................... 41
4.3. Comparaison de la trappe ionique et du triple quadriple pour lanalyse de
pesticides par CPL........................................................................................................ 47
4.4. Intrt de la CPL/SM pour lanalyse multirsidus de pesticides ......................... 48
4.5. Effets de matrice.................................................................................................... 57
5. Conclusions .................................................................................................................. 59
I.4. EXTRACTION DES PESTICIDES DUNE MATRICE SOLIDE .................................................... 59
1. Interactions analytes-matrice solide ............................................................................ 59
2. Mthodes dextraction de matrices solides .................................................................. 61
2.1. Mthodes dextraction classiques.......................................................................... 61
2.2. Mthodes rcentes dextraction de matrices solides ............................................. 62
2.3. Extraction acclre en solvant chaud sous pression ............................................ 69
3. Purification................................................................................................................... 80
3.1. Principe de lextraction sur phase solide............................................................... 81
3.2. Extraction sur phase solide : applications des analyses alimentaires ................. 83
3.3. Extraction des pesticides des milieux aqueux ....................................................... 86
4. Conclusions .................................................................................................................. 90
I.5. MISE EN UVRE DE LA DILUTION ISOTOPIQUE ................................................................. 90
1. Gnralits et principe ................................................................................................. 90
2. Intrt de la dilution isotopique ................................................................................... 92
I.6. CONCLUSIONS ................................................................................................................. 94

-1-
Table des matires

CHAPITRE II : EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA DI/CPL/SM POUR


LANALYSE DE PESTICIDES DANS LES EAUX........................................................... 97
II. 1. PROBLEMATIQUE ET ETUDES PRELIMINAIRES ................................................................ 98
II. 2. DEVELOPPEMENT DE LA METHODE DANALYSE DE PESTICIDES DANS LES EAUX PAR
DI/SPE/CPL/SM ................................................................................................................. 99
1. Molcules tudies ....................................................................................................... 99
2. Optimisation des conditions de dtection par CPL/SM ............................................ 101
2.1. Paramtres influents en CPL/SM ....................................................................... 101
2.2. Source dionisation ESI....................................................................................... 102
2.3. Dtermination des ions prcurseurs et de fragmentation .................................... 103
3. Influence de la nature de la phase mobile.................................................................. 105
4. Sparation chromatographique des composs cibls ................................................ 107
II. 3. CARACTERISATION DE LA METHODE DANALYSE PAR DI/CPL/SM............................ 108
1. Etalonnage par CPL/SM ........................................................................................... 108
1.1. Dfinition et principe .......................................................................................... 108
1.2. Gamme dtalonnage et rsultats ........................................................................ 109
1.3. Logigramme de dcision ..................................................................................... 110
1.4. Exemple de latrazine.......................................................................................... 113
1.5. Rsultats pour lensemble des composs cibls .................................................. 117
2. Limites de dtection et de quantification.................................................................... 118
2.1. Dfinition ............................................................................................................ 118
2.2. Dmarche et limites de dtection ........................................................................ 119
2.3. Limites de quantification..................................................................................... 120
II. 4. PERFORMANCES DE LA METHODE DANALYSE DES PESTICIDES DANS LES EAUX PAR
DI/SPE/CPL/SM ............................................................................................................... 121
1. Extraction sur phase solide : valuation des rendements .......................................... 121
2. Reproductibilit intralaboratoire de la mthode analytique...................................... 123
2.1. Dfinition ............................................................................................................ 123
2.2. Evaluation............................................................................................................ 124
3. Etude de la justesse de la mthode via la participation un essai inter-laboratoires
........................................................................................................................................ 125
3.1. Dfinition ............................................................................................................ 125
3.2. Exploitation des rsultats et calcul des carts normaliss ................................... 126
4. Evaluation des incertitudes de mesures ..................................................................... 130
4.1. Dtermination des sources dincertitudes ........................................................... 130
4.2. Rsultats des calculs dincertitudes..................................................................... 131
II. 5. CONCLUSIONS ............................................................................................................. 133
CHAPITRE III : PESTICIDES DANS LES MATRICES CEREALIERES :
DEVELOPPEMENT DE LA METHODE DANALYSE PAR CPL/SM...................... 135
III. 1. MATRICES ET COMPOSES CIBLES ................................................................................ 136
1. Critres de choix ........................................................................................................ 136
2. Proprits physico-chimiques des molcules cibles................................................. 137
III. 2. DEVELOPPEMENT DE LA METHODE DANALYSE PAR CPL/SM .................................. 139
1. Optimisation des conditions de dtection par SM .................................................... 139
1.1. Procdure de dtermination des ions prcurseurs et des ions de fragmentation . 139
1.2. Dtermination des transitions : ions prcurseurs > ions de fragmentation ......... 142
2. Optimisation des conditions analytiques par CPL/SM ............................................. 146
2.1. Conditions analytiques ........................................................................................ 146
2.2. Influence de la nature de la phase mobile sur lintensit des rponses ............... 148

-2-
Table des matires

2.3. Influence du pourcentage dacide actique en phase mobile sur lintensit des
rponses...................................................................................................................... 152
3. Etude de linfluence du dbit de phase mobile........................................................... 157
4. Analyse par CPL/SM dune solution multipesticides................................................ 160
5. Influence de la composition de lchantillon inject.................................................. 164
5.1. Etude qualitative et quantitative des pics ............................................................ 164
5.2. Intrt de la dilution isotopique........................................................................... 168
6. Limites de quantification et talonnage ..................................................................... 172
6.1. Limites de quantification..................................................................................... 172
6.2. Etalonnage et intrt de la dilution isotopique .................................................... 173
III. 3. CONCLUSIONS............................................................................................................ 179
CHAPITRE IV : PESTICIDES DANS LES MATRICES CEREALIERES :
DEVELOPPEMENT DE LA METHODE DEXTRACTION EN SOLVANT CHAUD
PRESSURISE ....................................................................................................................... 181
IV. 1 . INTRODUCTION ......................................................................................................... 182
IV. 2. CONTROLE DE LETAPE DEVAPORATION ................................................................... 183
1. Principe et protocole dvaporation .......................................................................... 183
2. Taux de rcupration aprs vaporation ................................................................... 185
IV. 3. ETUDE DE LA STABILITE DES COMPOSES CIBLES EN PLE : UTILISATION DUNE MATRICE
INERTE ........................................................................................................................... 188
1. Conditions utilises en PLE ....................................................................................... 188
2. PLE de sable de Fontainebleau avec lactonitrile comme solvant dextraction...... 189
3. PLE de billes de verre ................................................................................................ 192
4. PLE de sable de Fontainebleau avec un mlange actonitrile/mthanol comme solvant
dextraction .................................................................................................................... 194
IV. 4. INFLUENCE DE LA TEMPERATURE EN PLE ................................................................. 196
IV. 5. APPLICATION A UNE MATRICE REELLE : LE BLE ......................................................... 200
1. Protocole dextraction du bl..................................................................................... 200
2. Principe de la filtration slective ............................................................................... 201
3. Evaluation de la filtration slective sur Oasis HLB................................................... 202
3.1. Protocole de filtration slective........................................................................... 202
3.2. Performances de la filtration slective ................................................................ 203
4. Evaluation du protocole analytique global appliqu au bl ...................................... 208
IV. 6. CONCLUSIONS ........................................................................................................... 215
CONCLUSION GENERALE ............................................................................................. 217
ANNEXES............................................................................................................................. 221
ANNEXE 2-1 : EXTRACTION SUR PHASE SOLIDE DES PESTICIDES DANS LEAU...................... 221
ANNEXE 2-2 : METHODE DANALYSE DE PESTICIDES PAR CPL/SM .................................... 224
ANNEXE 2-3 : METHODE DANALYSE DES PESTICIDES PAR DI/CPL/SM ............................ 226
ANNEXE 2-4 : ADEQUATION DU MODELE DETALONNAGE .................................................. 227
ANNEXE 2-5 : ANALYSE DE LA VARIANCE ........................................................................... 228
ANNEXE 2-6 : ETUDE DE LADEQUATION DU MODELE DETALONNAGE ............................... 229
ANNEXE 2-7 : ESSAI INTER-LABORATOIRES AQUATERRA ................................................... 249
ANNEXE 3-1 : INFORMATIONS CONCERNANT LES PESTICIDES ETUDIES ................................ 253
ANNEXE 3-2 : INFLUENCE DU DEBIT DE PHASE MOBILE EN ANALYSE PAR CPL/SM ........... 261
ANNEXE 3-3 : CONDITIONS ANALYTIQUES CPL/SM .......................................................... 262
ANNEXE 3-4 : ETALONNAGE ............................................................................................... 263

-3-
Table des matires

ANNEXE 3-5 : INTERET DES DIFFERENTES MOLECULES MARQUEES COMME ETALON INTERNE
POUR LANALYSE DE LAZOXYSTROBINE ............................................................................. 270
ANNEXE 4-1 : EXTRACTION PLE......................................................................................... 275
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES :......................................................................... 277
LISTE DES FIGURES ET TABLEAUX ........................................................................... 285
LISTE DES FIGURES : ............................................................................................................ 285
LISTE DES TABLEAUX : ........................................................................................................ 290

-4-
Rsum et Abstract

Rsum et Abstract

Rsum :

Les pesticides sont aujourd'hui reconnus comme ayant des effets nfastes sur la sant
humaine. Les limites maximales de rsidus (LMR) de pesticides autorises dans leau et les
aliments sont de plus en plus faibles. Ainsi, des techniques analytiques trs performantes sont
indispensables pour leur identification et leur quantification. Cette thse avait pour objectif de
dvelopper une mthode danalyse multirsidus de pesticides dans les matrices cralires par
chromatographie en phase liquide (CPL) couple la spectromtrie de masse en tandem
(SM) aprs une tape dextraction en solvant chaud pressuris. Une premire mthode
danalyse de phnylures et de triazines dans les eaux souterraines par dilution isotopique
(DI) associe la CPL/SM aprs une tape dextraction sur phase solide a t dveloppe.
Celle-ci a t valide par la participation un essai inter-laboratoires.

Une mthode dextraction de pesticides dans le bl associe une analyse par


CPL/SM a ensuite t dveloppe pour trente-huit pesticides reprsentatifs de vingt-six
familles chimiques et quatorze de leurs molcules marques. La chromatographie polarit de
phase inverse a t mise en uvre. Les conditions de sparation et de dtection ont t
optimises. Un protocole analytique global comprenant une tape dextraction lactonitrile
chaud (100C) sous pression (100 bars) suivie dune tape de purification de lextrait obtenu
sur un adsorbant de nature polymrique a t mise en uvre. Par cette approche, il a t
possible danalyser lensemble des molcules cibles avec un taux de rcupration moyen de
lordre de 85% (CV = 4%, n=3). Si ces rsultats sont trs satisfaisants, ils ont, par ailleurs,
soulign que lapplication de la dilution isotopique est complexe. Malgr, quelques
amliorations apporter notamment concernant diffrents essais sur matrices vieillies ou
contamines, le potentiel de la mthode dveloppe a t dmontr.

-5-
Rsum et Abstract

Abstract :
Pesticides are nowadays considered as toxic for human health. The maximal residues
levels authorized in water and foodstuff are more and more strict. Therefore, selective
analytical techniques are necessary for their identification and their quantification. The aim of
this thesis was to develop a multiresidue method for the determination of pesticides by
isotopic dilution associated to liquid chromatography (LC) coupled with tandem mass
spectrometry (MS) after pressurized liquid extraction. In a first step, an analysis method of
phenylureas and triazines in groundwater by isotopic dilution associated to LC/MS after solid
phase extraction has been developed. The method has been validated and evaluated by
participating to an interlaboratory study.

Concerning cereals, an extraction method of pesticides associated to an analysis by


LC/MS has been developed for thirty-eight pesticides representative of twenty-six chemicals
families and fourteen labeled compounds in wheat. The analysis has been carried out in
reversed phase chromatography. Separation and detection conditions have been optimized. A
global analytical protocol consisting of a pressurized liquid extraction step using acetonitrile
at 100C and at 100 bars and followed by purification step of the resulting extract on a
polymeric sorbent was developed. The developed method enables to extract thirty-eight
pesticides and fourteen labeled compounds from wheat with recovery yield about 85% (RSD
=4%, n=3). Moreover, the results show that the application of isotopic dilution can be
complex. Although some improvements need to be added regarding experimentation of aged
matrices or contaminated samples, the potential of the method has been demonstrated.

-6-
Liste des communications crites et orales

Liste des communications crites et orales

Liste des communications crites :

Publication :

An interlaboratory study to evaluate potential matrix reference materials for herbicides


in water, Journal of Chromatography A, Volume 1134, Issues 1-2, 17 November 2006, Pages
151-161, K.El Mrabet, M. Poitevin, J. Vial, V. Pichon, S. Amarouche, G. Hervouet and B.
Lalere.

Acte de congrs :

Mthode danalyse multirsidus de pesticides par dilution isotopique associe la


chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem
K. El Mrabet, V. Le Diouron, C. Yardin, B. Lalere, G. Hervouet, V. Pichon, Congrs
international de mtrologie, juin 2007, Lille.

Posters :

Mthode danalyse multirsidus de pesticides par dilution isotopique associe la


chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem
K. El Mrabet, V. Le Diouron, C. Yardin, B. Lalere, G. Hervouet, V. Pichon, Congrs
international de mtrologie, juin 2007, Lille.

Analyse de pesticides, Validation dune mthode de quantification par


DI/SPE/HPLC/MS
K. El Mrabet, V. Le Diouron, C. Yardin, B. Lalere, Forum Labo, mars 2006, Paris.

Analyse multirsidus de pesticides par dilution isotopique associe la chromatographie


en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem
K. El Mrabet, B. Lalere, V. Le Diouron, G. Hervouet, V. Pichon, Congrs SEP07, avril
2007, Grenoble.

-7-
Liste des communications crites et orales

Liste des communications orales :

Validation dune mthode danalyse par DI/SPE/HPLC/MS


K. El Mrabet, V. Le Diouron, C. Yardin, B. Lalere, Afsep : Journe Validation de mthodes,
23 mars 2006, Paris.

Certification dun matriau de rfrence dherbicides dans les eaux par essai-
interlaboratoires, S. Amarouche, M. Dsenfant, B. Lalere, V. Le Diouron, K. El Mrabet, G.
Hervout, V. Pichon, J. Vial, Congrs international de mtrologie, 19 juin 2007, Lille.

Dveloppement dune mthode danalyse de pesticides par extraction en solvant chaud


pressuris et HPLC/MS : application une matrice cralire (bl)
B. Lalere, V. Le Diouron, V. Pichon, K. El Mrabet, Afsep : Journe traitement de
lchantillon, 13 dcembre 2007, Paris.

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Liste des abrviations et notations

Liste des abrviations et notations

2,4D : 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid


2,4 DDE : Dichlorodiphenyldicholorethylene
A : Acaricide
AA : Acide actique
AAS : Atomic Absorption Spectrometry
ACE : Actone
AF : Acide Formique
AFNOR : Association Franaise de normalisation
ANOVA : Analyse de la variance
APCI: Atmospheric Pressure Chemical Ionization
API : Atmospheric Pressure Ionisation
APPI : Atmospheric Pressure Photo-Ionisation
ASE : Accelerated Solvent Extraction
CPG : Chromatographie en Phase Gazeuse
CPL : Chromatographie en Phase Liquide
DAD: Diode Array Detector
DCM : Dichloromthane
DDT : Dichlorodiphnyltrichlorothane
DEA : Dthylatrazine
DGSANCO : Direction Gnrale de la Sant et de la Consommation de lUnion Europenne
DIA : Disopropylatrazine
ECD : Electron Capture Detector
EN : Ecart normalis
EPA : Environmental Protection Agency
ESI : Electrospray Ionization
F : Fongicide
FID : Flame Ionization Detector
FT-ICR : Fourier Transform-Ion Cyclotron Resonance
GPC : Gel Permeation Chromatography
H : Herbicide
HEX : Hexane
HLB : Hydrophilic Lipophilic Balance
HPHTSE : High-Pressure, High Temperature Solvent Extraction
HPSE : High-Pressure Solvent Extraction
HTWE : High Temperature Water Extraction
HWE : Hot Water Extraction
I : Insecticide
I : Intensit de laire du pic de la molcule
I* : Intensit de laire du pic de la molcule marque
IDA : Isotope Dilution Analysis
IDMS : Isotopic Dilution Mass Spectrometry

-9-
Liste des abrviations et notations

IPU : Isoproturon
LD : Limite de Dtection
LMR : Limite Maximale de Rsidus
LQ : Limite de Quantification
MAE : Microwave Assisted Extraction
MCPA : Methyl chlorophenoxyacetic acid
MeCN : Actonitrile
MeOH : Mthanol
MIP : Molecularly Imprinted Polymers
MR : Matriau de Rfrence
MRC : Matriau de Rfrence Certifi
MRM : Multiple Reaction Monitoring
m/z : masse/charge
N : Nmaticide
PB: Particle-Beam
PGC : Carbone Graphite Poreux
PFE: Pressurised Fluid Extraction
PHSE : Pressurised Hot Solvent Extraction
PHWE : Pressurised Hot Water Extraction
PLE : Pressurised Liquid Extraction
PSA : Primary Secondary Amine
PS-DVB : Polystyrene-divinylbenzene
PSE : Pressurised Solvent Extraction
Q : Quantit de molcule
Q* : Quantit de molcule marque
Q-TOF : Quadriple coupl un temps de vol
SBD : Styrne divinylbenzne
SC : Substance de Croissance
SFE : Supercritical Fluid Extraction
SHWE : SuperHeated Water Extraction
SIM : Single Ion Monitoring
SM : Spectromtrie de Masse
SPE : Solid Phase Extraction
SQ : Simple Quadriple
SSE : Subcritical Solvent Extraction
SWE : Subcritical Water Extraction
TID : ThermoIonic Detector
TOF: Time Of Flight
TOL : Tolune
TQ : Triple Quadriple
TR : Taux de Rcupration
TSP: Thermospray
UV : Ultraviolet.

- 10 -
Introduction

INTRODUCTION

Les pesticides, encore appels produits phytosanitaires, sont des substances chimiques
utilises pour la croissance, la protection et la conservation des vgtaux. Ds la fin de la
seconde guerre mondiale, ces produits furent trs employs dans le secteur agricole non
seulement afin daugmenter les rendements de production mais galement dans le but de
protger les plantes tout au long de leur dveloppement.

Compte tenu de sa surface agricole qui reprsente la moiti de son territoire, la France
est le premier consommateur europen de produits phytosanitaires. Elle consomme, en effet,
environ 100000 tonnes de substances actives par an. Bien quelle nait cess daugmenter
depuis ces dernires dcennies, lutilisation des pesticides est aujourdhui en phase de
stabilisation notamment dans les pays dvelopps. Ce nouveau comportement sexplique par
deux lments majeurs : tout dabord la prise de conscience des risques ventuels sur
lenvironnement et la sant lis une utilisation systmatique de ces produits, mais aussi le
dveloppement de nouvelles molcules de plus en plus efficaces de plus faibles doses.

De nombreux travaux ont dmontr la prsence et la persistance de pesticides dans les


eaux, les sols, lair mais aussi dans les produits alimentaires. Certains pesticides sont
dsormais considrs comme des polluants organiques persistants ou encore des perturbateurs
endocriniens. Ils constituent la fois une menace cologique et environnementale certaine
mais galement sanitaire. Afin de garantir la scurit alimentaire des consommateurs et de
prserver lenvironnement, une lgislation concernant lutilisation de ces composs a t mise
en place. Dans de nombreux pays, celle-ci se traduit par une tolrance des rsidus de ces
micropolluants sous un certain seuil maximal (limite maximale de rsidus). Il est alors ais de
comprendre pourquoi la problmatique rside dsormais dans la dtermination et la
quantification de ces pesticides dans diffrents milieux.

De nombreux programmes de suivi des rsidus de pesticides dans des matrices


alimentaires et des chantillons environnementaux ont dj t mens. Cependant, le nombre
de polluants ltat de traces qui doivent tre suivis crot constamment et les niveaux
auxquels ces composs doivent tre dtermins sont de plus en plus faibles. Il est donc devenu
ncessaire de dvelopper des mthodes analytiques capables de dtecter et de quantifier ces

- 11 -
Introduction

molcules de trs faibles teneurs. Aujourdhui, de nombreux laboratoires analysent les


pesticides dans diverses matrices. La disponibilit de matriaux de rfrence certifis (MRC)
dans ce domaine danalyse permettrait dassurer la traabilit des mthodes mises en uvre.
Au niveau mondial, plus de vingt mille matriaux de rfrence sont disponibles. Cependant,
malgr leur grande varit, il nen existe pas pour lanalyse de pesticides dans les matrices
cralires. Le dveloppement doutils et le maintien de rfrences pour assurer la traabilit
des analyses de composs organiques font partie des axes de recherches importants du
Laboratoire National de Mtrologie et dEssais (LNE). Cest pourquoi le LNE souhaite
dvelopper un MRC pour lanalyse de pesticides dans les matrices cralires. Mais au
pralable, il faut tre capable de quantifier et dtecter de faibles teneurs les analytes dintrt
dans ces matrices. Cette thse constitue la premire tape de ce projet et consiste dvelopper
une mthode danalyse primaire multirsidus de pesticides dans des matrices cralires.

Les rsidus de pesticides sont trs souvent analyss par chromatographie en phase
gazeuse (CPG) couple diffrents dtecteurs. Cependant avec les progrs de la recherche et
de lindustrie phytosanitaire, les pesticides sont devenus moins volatils, plus thermolabiles et
de plus en plus polaires. Par consquent, leur analyse par CPG ncessite une tape pralable
de drivation, source potentielle de pollution, derreur et dincertitude dans le rsultat de la
mesure. En revanche, lanalyse par chromatographie en phase liquide (CPL) savre bien
adapte aux proprits physico-chimiques de la majorit des composs actuellement
recherchs. Ainsi, associe la spectromtrie de masse, cette technique sest impose comme
un outil analytique de choix dans le domaine de lanalyse multirsidus de pesticides. Par
ailleurs, la mise en uvre de cette technique aprs une tape de traitement de lchantillon
judicieusement choisie permet datteindre des seuils de quantification compatibles avec ceux
dfinis par la rglementation.

Les travaux de thse sont prsents travers quatre chapitres. Dans un premier temps,
une synthse bibliographique prsente les pesticides de manire gnrale ainsi que ltat de
lart des techniques analytiques employes pour lanalyse de ces composs.

Lquipe de mtrologie chimie organique du LNE a acquis un chromatographe en


phase liquide coupl un spectromtre de masse en tandem en 2005. De ce fait, compte tenu
de la nouveaut de la technique analytique au sein du laboratoire, une des tapes de la thse a
consist matriser cet outil analytique et en valuer les performances. Ainsi, le second

- 12 -
Introduction

chapitre de la thse expose le dveloppement dune mthode danalyse de cinq pesticides par
dilution isotopique dans une matrice aqueuse. Loptimisation des conditions danalyse par
chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem (CPL/SM)
a t effectue et ltude de certaines caractristiques de la mthode a t ralise. La justesse
a en particulier t value lors de la participation un essai inter-laboratoires concernant
lanalyse de ces cinq pesticides dans les eaux souterraines. Les rsultats obtenus au cours de
cet essai inter-laboratoires ont mis en vidence la fois la matrise de la technique analytique
et le potentiel de la mthode analytique dveloppe. Les travaux ont donc ensuite port sur la
thmatique des pesticides dans les matrices alimentaires.

Au vu de la grande diversit des pesticides potentiellement prsents dans les matrices


alimentaires et afin de dvelopper une mthode multirsidus incluant des molcules de
familles et de proprits physico-chimiques diffrentes, il a t ncessaire de slectionner les
composs tudier. Llaboration de ce choix est dcrit dans le troisime chapitre. Ainsi,
aprs la prsentation des pesticides retenus pour cette tude, le dveloppement de la mthode
danalyse de rsidus par CPL/SM est expos. Une attention toute particulire a t porte
dans un premier temps loptimisation des conditions de dtection par spectromtrie de
masse en tandem. Par la suite, linfluence des conditions chromatographiques sur la sensibilit
du signal observ en SM a t tudie pour diffrents composs.

La mthode danalyse des pesticides ayant t dveloppe et optimise, ltude de


matrices relles a t effectue. Avant son analyse, la matrice retenue ncessite une tape
dextraction. Le chapitre quatre est donc consacr au dveloppement et loptimisation de
ltape dextraction en solvant chaud pressuris des pesticides du bl. Compte tenu de la
complexit de cette matrice, une tape de purification a t mise en uvre avant lanalyse des
composs par CPL/SM.

- 13 -
Introduction

- 14 -
Chapitre I

Chapitre I : Etat de lart

Laugmentation des proccupations en matire de sant publique implique un grand intrt


pour les produits phytosanitaires. En effet, du point de vue de lAgence Europenne pour
lEnvironnement, la contamination des aliments est considre, avec la pollution de lair et de
leau, comme les principaux problmes environnementaux en lien avec la sant humaine. Il
est donc important de dvelopper des mthodes analytiques capables de dtecter et quantifier
ces composs de trs faibles teneurs dans diverses matrices. Aprs une prsentation gnrale
des pesticides, de leurs effets sur la sant et de la rglementation en vigueur, un bilan sur les
diffrentes techniques danalyse qui incluent lanalyse chromatographique et les techniques
dextraction est expos. Enfin, le principe de la dilution isotopique pour la quantification en
tant que mthode primaire est dcrit.

- 15 -
Chapitre I

I.1. Prsentation gnrale des pesticides


1. Historique et dfinitions

La premire utilisation des pesticides en agriculture date de lantiquit. Leur


dveloppement a ensuite suivi celui de la chimie minrale. Les composs alors employs
taient des drivs de composs minraux ou de plantes comme par exemple, ceux base
darsenic, de cuivre, de zinc, de manganse ou de sulfate de nicotine. Puis, partir de la
seconde guerre mondiale, les pesticides ont bnfici du dveloppement de la chimie
organique. Les composs synthtiques majoritaires ont dailleurs t lorigine de
lexpansion rapide des produits phytosanitaires partir des annes 1940 (Tableau 1-1).

Tableau 1-1 : Historique de lvolution des trois plus grandes classes de pesticides des annes 1900
nos jours [1].

Une dfinition dtaille de ces composs est disponible dans la directive europenne
91/414/CE du 15 juillet 1991 qui vise assurer la sret et qualit des produits de
consommation [2]. De manire plus concise, les pesticides ou produits phytosanitaires, sont
dfinis comme des substances dont les proprits chimiques contribuent la protection des

- 16 -
Chapitre I

plantes cultives et des produits rcolts. Ce sont des formulations contenant une ou plusieurs
substances chimiques minrales ou organiques, synthtiques ou naturelles. La plupart de
celles utilises aujourdhui sont de nature organique dont un petit nombre est extrait ou driv
des plantes. Les formulations sont en gnral composes dune ou de plusieurs substances
actives et dun ou de plusieurs adjuvants. La substance active exerce une action gnrale ou
spcifique sur les organismes nuisibles ou sur les vgtaux ; cest elle qui confre au produit
leffet dsir. Ladjuvant quant lui est une substance dpourvue dactivit biologique juge
suffisante dans la pratique mais capable de modifier les proprits physiques, chimiques ou
biologiques des produits phytosanitaires. Il renforce lefficacit, la scurit du produit et sa
facilit dutilisation [3].

Les produits phytosanitaires permettent la rgulation de la croissance des plantes et la


conservation des rcoltes. Ils amliorent ainsi la fois la quantit et la qualit des denres
alimentaires. Dans le pass, en labsence de traitement adapt, des rcoltes et des cultures
entires ont t ananties entranant des crises alimentaires (famines). Ainsi, ils aident au
contrle dun grand nombre de maladies et de parasites de plantes [4]. Lusage non agricole
des pesticides concerne lentretien des espaces publics, des infrastructures de transport et des
jardins des particuliers. En France, en 2004, sur les 76 000 tonnes commercialises, 90 94 %
ont t destines lagriculture. Le reste se partage quitablement entre les usages amateurs et
les usages collectifs [5]. Dans de nombreux domaines, le terme rsidus de pesticides est
largement employ ; il correspond aussi bien au compos qu ses produits de dgradation qui
peuvent tre prsents la fois dans lenvironnement mais aussi dans des produits de
consommation.

2. Classification

Les pesticides disponibles aujourdhui sur le march sont caractriss par une telle
varit de structures chimiques, de groupes fonctionnels et dactivits que leur classification
est complexe. En France, 500 matires actives sont effectivement homologues et entrent
dans la composition de prs de 3000 spcialits commerciales utilises en agriculture [3, 5].
Dune manire gnrale, les substances actives peuvent tre classes soit en fonction de la
nature de lespce combattre (1er systme de classification), soit en fonction de la nature
chimique de la principale substance active qui les composent (2me systme de classification).

- 17 -
Chapitre I

2.1. Premier systme de classification

Le premier systme de classification repose sur le type de parasites contrler. Il


existe principalement trois grandes familles dactivits que sont les herbicides, les fongicides
et les insecticides.

Les herbicides reprsentent les pesticides les plus utiliss dans le monde, toutes
cultures confondues. Ils sont destins liminer les vgtaux rentrant en concurrence avec les
plantes protger en ralentissant leur croissance. Cest pourquoi, ils sont aussi bien utiliss
pour lentretien des voiries que pour le jardinage des particuliers. Les herbicides possdent
diffrents modes dactions sur les plantes, ils peuvent tre des perturbateurs de la rgulation
dune hormone, lauxine (principale hormone agissant sur l'augmentation de la taille des
cellules), de la photosynthse ou encore des inhibiteurs de la division cellulaire, de la synthse
des lipides, de cellulose ou des acides amins.

Les fongicides permettent quant eux de combattre la prolifration des maladies des
plantes provoques par des champignons ou encore des bactries. Ils peuvent agir
diffremment sur les plantes soit en inhibant le systme respiratoire ou la division cellulaire,
soit en perturbant la biosynthse des acides amins, des protines ou le mtabolisme des
glucides.

Les insecticides sont utiliss pour la protection des plantes contre les insectes. Ils
interviennent en les liminant ou en empchant leur reproduction, diffrents types existent :
les neurotoxiques, les rgulateurs de croissance et ceux agissant sur la respiration cellulaire.

Outre, ces trois grandes familles mentionnes ci-dessus, dautres peuvent tre cites en
exemple : les acaricides, contre les acariens ; les nmanticides, contre les vers du groupe des
nmatodes ; les rodonticides, contre les rongeurs ; les taupicides, contre les taupes ; les
molluscicides, contre les limaces et escargots ou encore les corvicides et corvifuges,
respectivement contre les corbeaux et les autres oiseaux ravageurs de culture.

- 18 -
Chapitre I

2.2. Deuxime systme de classification

Le deuxime systme de classification tient compte de la nature chimique de la


substance active qui compose majoritairement les produits phytosanitaires. Compte tenu de la
varit des proprits physico-chimiques des pesticides disponibles sur le march, il existe un
trs grand nombre de familles chimiques. Les plus anciens (Tableau 1-1) et principaux
groupes chimiques sont les organochlors, les organophosphors, les carbamates, les triazines
et les ures substitues. Les structures chimiques caractristiques de certaines de ces familles
sont prsentes en figure 1-1.

Triazines Organophosphors

Carbamates Ures

Figure 1-1 : Structures chimiques des principales familles de pesticides.

Ce deuxime systme de classification ne permet pas de dfinir de manire


systmatique un compos. Certains pesticides peuvent en effet tre composs de plusieurs
fonctionnalits chimiques. Ils peuvent alors tre classs dans une ou plusieurs familles
chimiques.

3. Effets des pesticides sur la sant et rglementation


3.1. Effets sur la sant

La contamination de lhomme par les pesticides peut se faire par diffrentes voies. Il
peut les absorber via les aliments, leau, par contact avec la peau ou encore par inhalation. De
plus, les pesticides regroupent un grand nombre de molcules dont les effets sur lhomme sont
diffrents. Certains produits qui prsentent une toxicit aigu importante peuvent tre

- 19 -
Chapitre I

limins facilement par lorganisme. A linverse, dautres substances de toxicit moindre sont
susceptibles de saccumuler dans lorganisme et dinduire des effets plus long terme qui
sont difficilement quantifiables. Par ailleurs, ces produits sont transforms paralllement en
diffrents mtabolites susceptibles dengendrer dautres rpercutions sur lorganisme humain.
Nanmoins, les effets indirects des pesticides sur les organismes vivants sont probablement
plus importants que leur toxicit directe. Ils peuvent tre diviss en deux catgories : dune
part les effets chroniques sur la sant et dautre part les effets cologiques. Ceux traits ici
concernent la sant humaine, la croissance, la physiologie et la reproduction. Certains
pesticides sont par ailleurs reconnus aujourdhui comme tant des polluants organiques
persistants, tels que lendrine, laldrine, la dieldrine, le chlordcone, le lindane ou encore le
chlordane. Leurs principales caractristiques sont la persistance dans lenvironnement,
laccumulation dans les graisses, la dispersion dans lenvironnement via les courants
atmosphriques et marins mais aussi la nocivit pour la sant.

De manire gnrale, dans la littrature scientifique, il a t montr que les rsidus de


pesticides peuvent entraner des dsagrments pour la sant comme des troubles de la
reproduction, du dveloppement et du systme nerveux [6]. Une toxicit neurologique aigu,
l'affaiblissement du dveloppement neurologique chronique, un dysfonctionnement des
systmes immunitaire, de reproduction et endocrinien ont galement t rapports.
Lexposition aux pesticides peut aussi tre la cause du dveloppement de cancer [7]. Les
risques modrs lis une mauvaise application incluent des maux de tte, des ruptions
cutanes ou encore des troubles de la vision [8]. Les rsultats issus de diffrentes tudes
illustrent certains des effets nfastes pouvant tre observs. Il a t effectivement mis en
vidence quune exposition certaines substances pouvait entraner un drglement du
systme immunitaire [8]. Certains pesticides sont aussi considrs comme tant des
perturbateurs endocriniens, cest dire quils interfrent avec les hormones en simulant leur
action. Par ailleurs, il a t montr que chez les agriculteurs, les cancers de la prostate et de
lestomac taient plus frquents [9]. Ce comportement a t confirm par lquipe de
Quintanilla-Vega qui a identifi certains pesticides et leurs produits de dgradation comme
des agents susceptibles de nuire la fertilit masculine en particulier via une toxicit
testiculaire [10]. Par ailleurs, une tude conduite aux Etats Unis a mis en vidence la prsence
de rsidus de pesticides dans diffrentes matrices : urine, sang, tissus adipeux et lait maternel
[5]. Le lien ventuel entre la prsence de ces molcules dans le lait maternel et le

- 20 -
Chapitre I

dveloppement anormal du ftus et des malformations congnitales a t galement soulign


[11].

Des composs de la famille des organophosphors ont fait galement lobjet de


diffrents travaux de recherche. Une tude anthropologique a t ralise par lquipe de
Garcia sur deux groupes semblables denfants mexicains gs de quatre cinq ans. Ceux qui
ont t exposs une dose importante dun mlange de pesticides incluant des
organophosphors ont montr une diminution de la mmoire court terme, une mauvaise
coordination des yeux et des mains ainsi quune diminution de leur capacit dessiner. En
revanche, les enfants non exposs ont montr un dveloppement normal [12]. De plus, il a t
confirm lexistence dun lien entre lexposition denfants amricains un pesticide
organophosphor, le mthyl parathion. Des problmes persistants de mmoire court terme et
dattention ont t galement observs [13]. En outre, dautres tudes pidmiologiques
menes sur des nourrissons ayant t exposs un autre pesticide organophosphor, le
chlorpyriphos, ont montr une diminution significative de la circonfrence de la tte, de leur
poids la naissance et dun ralentissement des principaux rflexes [14-16].

A travers ces diffrentes tudes, il semble clair que les pesticides constituent un danger
sanitaire rel et peuvent avoir des effets nfastes sur la sant humaine. La protection du
consommateur constitue donc un enjeu majeur de sant publique, cest pourquoi, des
rglementations portant sur les pesticides ont t mises en place par les diffrentes autorits
gouvernementales.

3.2. Rglementations

Lintrt public concernant les rsidus de pesticides dans les produits de


consommation na cess daugmenter ces vingt-cinq dernires annes [17] et a conduit les
autorits lgislatives mettre en place des rglementations strictes ainsi que des suivis de la
qualit des produits de consommation. Ces actions sont menes dans le but dviter les
risques pour le consommateur mais aussi pour rguler le march international [4, 18]. Il existe
des normes sur les taux de rsidus de pesticides autoriss dans leau ou les aliments dorigines
diverses. Ils relvent en particulier de la directive du conseil de lUnion Europenne
91/414/CE [2]. Le principal objectif de la lgislation phytosanitaire de lUnion Europenne
consiste assurer la scurit des denres alimentaires produites partir des vgtaux et

- 21 -
Chapitre I

garantir la sant des consommateurs et la qualit des cultures dans tous les tats membres [5].
Des limites maximales de rsidus (LMR) de pesticides dans diffrents produits de
consommation ont donc t mises en place (eau, fruits, lgumes).

Les LMR de pesticides correspondent aux quantits maximales attendues, tablies


partir des bonnes pratiques agricoles (BPA) fixes lors de lautorisation de mise sur le march
du produit phytosanitaire. Elles refltent lutilisation des quantits minimales ncessaires pour
protger efficacement les cultures et qui aboutissent des niveaux de rsidus acceptables,
cest dire sans effet sur la sant. Quand les pesticides sont appliqus suivant les BPA, les
LMR ne sont en gnral pas dpasses. Au contraire, des carts aux BPA peuvent entraner la
prsence de rsidus nocifs entranant des risques sanitaires [19]. Les LMR pour une substance
active et une culture donne sont tablies partir des tudes toxicologiques,
cotoxicologiques, agronomiques, biologiques et diffrent dun compos lautre. La
persistance des rsidus sur et dans les denres agricoles varie avec la nature du pesticide et
celle du substrat, la composition des formulations utilises et les conditions climatiques qui
ont suivi le traitement. Les LMR sont dfinies au niveau international, europen et national.
Toutefois au sein de lUnion Europenne, la primaut des LMR europennes peut conduire un
tat membre publier des LMR pour une substance active contenue dans une spcialit non
homologue sur son territoire.

Des LMR sont ainsi fixes pour leau, les fruits, les lgumes, et ce pour chaque
pesticide individuellement ou par groupe de pesticides. Le march industriel des produits
phytosanitaires est en constante volution en particulier dans le domaine du dveloppement de
nouvelles molcules. Celles-ci sont, en gnral, efficaces de trs faibles doses, rendant leur
estimation dans les diffrents produits complexe du fait des faibles valeurs de LMR
autorises. Ainsi, 17 000 LMR ont t dfinies au sein de lUnion europenne pour diffrents
produits et pour 133 substances actives de pesticides [20].

Cest dans ce contexte de rglementation de la prsence des pesticides, du respect de


la conformit commerciale des produits, de la garantie de la scurit du consommateur que
des mthodes analytiques capables didentifier sans ambigut les pesticides et de les
quantifier de trs faibles niveaux sont trs fortement requises.

- 22 -
Chapitre I

I.2. Problmatique

Due aux faibles niveaux de dtection exigs par la rglementation et la nature


complexe des matrices dans lesquelles les composs dintrt sont prsents, la prparation
dchantillon, la dtection et lidentification des composs des niveaux de traces sont des
aspects importants des mthodes analytiques [21-26].

Malgr lavance des techniques analytiques, les chantillons sont trop complexes
pour tre analyss sans tape pralable de traitement de lchantillon. Cette dernire permet
la fois de fournir un extrait enrichi en composs mais aussi de minimiser au maximum la
prsence dinterfrents lors de la dtection finale. Leur prsence peut rendre en effet plus
difficile lanalyse des composs dintrt. La prparation de lchantillon comprend en
gnral lextraction, la concentration et ventuellement une purification. Le processus
analytique global danalyse de rsidus de pesticides est schmatis sur la figure 1-2.

Transport et Extraction des


Purification Dtermination
chantillonnage stockage de composs et
de lextrait finale de la teneur
lchantillon concentration

Validation des diffrentes tapes et du processus analytique global

Figure 1-2: Principales tapes dune procdure analytique utilise pour la dtermination de pesticides
dans des chantillons alimentaires adapt de [27].

Lextraction doit tre mene avec prcaution lors de lanalyse de matrices complexes
pouvant contenir des interfrents. Leur limination reprsente une tape primordiale du
processus analytique global. Par ailleurs, il a t montr, lors dune tude mene au dbut des
annes 1990, que le traitement de lchantillon avant lanalyse chromatographique constituait
deux tiers du temps total et reprsentait une des principales sources derreurs sur les rsultats
de mesure. Ces procdures occupent donc une majeure partie de la dure globale de l'analyse
et contribuent fortement son cot. De plus, ces tapes influent considrablement sur la
fiabilit et l'exactitude des rsultats [28, 29], ce qui se traduit par la ncessit de contrler le
processus analytique global.

- 23 -
Chapitre I

La surveillance des rsidus de pesticides dans le domaine de la sant publique est


confronte la quantification et lidentification de centaines de molcules ayant des
proprits physico-chimiques diffrentes dans des matrices varies. Aussi, des mthodes
sensibles, slectives, fiables et engendrant un cot modr sont ncessaires et reprsentent un
enjeu non ngligeable voire mme un dfi pour le chimiste analyste.

I.3. Dtermination des pesticides

Selon la nature des pesticides tudis, deux techniques analytiques de sparation sont
gnralement employes pour leur identification et leur quantification : la chromatographie en
phase gazeuse (CPG) et la chromatographie en phase liquide (CPL). Ces techniques peuvent
tre couples des dtecteurs spcifiques ou universels. Ainsi, tout en apportant de la
spcificit, le spectromtre de masse a pour intrt dtre un outil de dtection quasi-
universel.

1. Chromatographie en phase gazeuse

La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est une technique de sparation qui


sapplique aux composs gazeux ou susceptibles dtre vaporiss par chauffage sans
dcomposition [30, 31]. Depuis, son introduction dans les annes 1960, la CPG a t trs vite
adopte pour lanalyse multirsidus de pesticides grce aux grandes slectivit et sensibilit
pouvant tre atteintes. Elle est employe en gnral pour lanalyse de molcules
thermostables, volatiles ou semi-volatiles, non ou moyennement polaires [31-34]. La CPG est
de nos jours applicable environ 60 % des pesticides et de leurs mtabolites disponibles sur le
march [31]. Le dveloppement des colonnes capillaires a fortement contribu
laugmentation significative du pouvoir de sparation. La possibilit dutiliser des dtecteurs
sensibles et slectifs a contribu galement lessor de la CPG [32, 35]. Elle est en effet
compatible de nombreux dtecteurs : le dtecteur ionisation de flammes (Flame Ionization
Detector, FID), le dtecteur thermoionique (ThermoIonic Detector, TID) ou encore le
dtecteur capture dlectrons (Electron Capture Detector, ECD) [35]. Le FID est considr
comme le dtecteur le moins slectif. LECD est particulirement adapt lanalyse de
composs lectrongatifs dont de nombreux pesticides halogns [31, 32]. Les niveaux de
dtection peuvent tre jusqu cent fois plus faibles que ceux obtenus avec un dtecteur FID
[32]. Le dtecteur thermoionique est quant lui employ pour les molcules composes

- 24 -
Chapitre I

datomes dazote et de phosphore tels que les pesticides de la famille des triazines et des
organophosphors [31, 32].

Plus tardivement, le couplage de la spectromtrie de masse (SM) la CPG a permis un


gain en sensibilit et une grande spcificit du signal par rapport aux couplages
prcdemment dvelopps avec dautres systmes de dtection [33]. Il a t en effet mis en
vidence un gain en sensibilit pouvant atteindre un facteur deux cent en CPG-SM en
comparaison la CPG-ECD lors de lanalyse de dix-huit pesticides de la famille des
organophosphors, triazines, anilopyrimidines, triazoles, phtalimides, oximinoactates et
pyrethroides dans les pommes [36]. Ce couplage est relativement facile puisque les
composants de lchantillon sont lus sous forme vapeur la sortie de la colonne CPG qui
peut tre ensuite directement introduite dans le vide du spectromtre de masse. Il offre de
multiples possibilits analytiques et combine harmonieusement les avantages spcifiques des
deux techniques : le pouvoir sparatif de la CPG et le pouvoir didentification de la SM. Par
ailleurs, lun de ses avantages rside dans son pouvoir de confirmation bas sur une
bibliothque regroupant des spectres dionisation obtenus par impact lectronique pour un trs
grand nombre de composs [37]. La multitude dapplications rsulte dune part de lefficacit
de la sparation de la CPG et dautre part aux qualits de la SM savoir, la qualit des
informations et la sensibilit. Un grand nombre de mthodes multirsidus bases sur ce
couplage ont t dveloppes pour une grande varit de pesticides dans des matrices de type
fruits et lgumes. Le tableau 1-2 rsume les performances de certaines de ces mthodes. La
dtection par SM en tandem (SM) dont le principe sera expliqu plus loin a permis
laugmentation du potentiel du couplage de la CPG-SM comme le montrent les valeurs de
limites de dtection obtenues.

- 25 -
Chapitre I

Tableau 1-2 : Exemples dapplications danalyse de pesticides dans les matrices alimentaires par CPG-SM ou SM.

Pesticides Mthode Temps d'analyse LOD


Matrices Rf.
Nombre Familles chimiques analytique (minutes) (mg/kg)

90 Multi-classes Pommes, haricots vert et oranges CPG-SM 110 1.10-2 2.10-2 [38]

105 Multi-classes Raisins, Citrons, oignons, tomates CPG-SM 47 4.10-4 5.10-2 [39]

107 Multi-classes Radis, choux CPG-SM 36 2.10-3 3.10-2 [40]

Pommes, bananes, choux, carottes,


239 Multi-classes concombres, laittues, oranges, poires, CPG-SM 62 5.10-2 1 [41]
poivrons, ananans
Organophosphors, organochlors,
14 carbamates, dicarboximides, Pommes, pches, tomates, pommes de terre CPG-SM 19 5.10-2 25.10-2 [42]
sulfanilamides,

362 Multi-classes Crales : mas, bl, avoine, riz et orge CPG-SM 37 1,25.10-2 5.10-1 [43]

9 Organophosphors et organochlors Fruits et lgumes CPG-SM 15 5.10-6 5.10-3 [44]

Organophosphors, organochlors,
55 Fruits et lgumes CPG-SM 60 7.10-5 4.10-3 [45]
pyrthrodes
Organophosphors, organochlors, Pommes, carottes, horicots verts, cleris,
19 CPG-SM 32 1.10-3 5.10-3 [46]
fongicides et herbicides citrons, poire, melons
Organophosphors, organochlors,
80 Fruits et lgumes CPG-SM 58 1.10-5 35.10-3 [47]
organonitrs, pyrthrodes,

22 Multi-classes Pommes, haricots vert et carottes CPG-SM 35 < 2.10-3 [48]

81 Multi-classes Concombres CPG-SM 68 1.10-5 2.10-3 [49]

- 26 -
Chapitre I

Nanmoins, le march des produits phytosanitaires est en perptuelle volution. De


nouvelles formulations de pesticides sont continuellement introduites sur le march la fois
pour faire face la ncessit dune meilleure slectivit par rapport une culture donne mais
aussi pour diminuer la persistance des composs dans lenvironnement [50]. Lavantage de
ces composs rside dans leur grande efficacit de faibles doses et leur haut degr de
biodgradabilit. Cependant, la plupart de ces composs sont polaires, peu volatils et/ou
thermolabiles et ne sont donc pas adapts une analyse directe par CPG [4, 7, 18, 19, 33, 51-
57]. Par exemple, lanalyse directe des N mthyl-carbamates et des ures par CPG mne en
gnral leur dgradation dans linjecteur ou dans la colonne analytique [22, 35, 58-61]. Les
hautes tempratures utilises entranent ainsi une dcomposition de la plupart de ces
composs.

Toutefois, afin de dterminer ces composs initialement non analysables par CPG, des
mthodes mettant en oeuvre des tapes de drivation ont t dveloppes. Celles-ci sont
ncessaires la synthse de drivs plus volatils et moins thermosensibles. Cest le cas par
exemple, des chlorophnoxyacides qui ont t analyss par CPG aprs une raction de
drivation [32]. Or, ces tapes augmentent la manipulation d'chantillon, le temps global de
l'analyse et sont parfois lorigine de sources derreurs supplmentaires [52, 62]. Elles
peuvent de plus dune part mener une perte de lanalyte et entraner par consquent une
diminution de la sensibilit [52]. Dautre part, la plupart des tapes de drivation sont
slectives pour un groupe de composs cibls, excluant les autres composs dintrt prsents
simultanment dans un mme chantillon [63]. Lanalyse multirsidus devient alors difficile
mettre en uvre si diffrents aliquotes de lchantillon ne subissent pas les mmes tapes
allant de la prparation la dtermination finale.

Ce sont toutes les raisons pr-cites qui ont conduit une forte implantation de la
chromatographie en phase liquide (CPL). Cette tendance a t notamment confirme avec la
possibilit de couplage la spectromtrie de masse et laccessibilit un cot abordable.

2. Chromatographie en phase liquide

La chromatographie en phase liquide (CPL) est une technique de sparation des


constituants dun mlange en solution base sur le partage des composs entre une phase
mobile dans laquelle ils sont solubles et une phase, dite fixe ou stationnaire, qui exerce sur

- 27 -
Chapitre I

eux un effet retardateur [64]. Ainsi, la sparation des composs repose sur les diffrences
daffinit et dinteractions dun compos pour la phase mobile et la phase stationnaire. La
phase stationnaire peut varier en fonction des interactions requises. Ainsi, selon les
phnomnes mis en jeu lors de la sparation, diffrents types de chromatographie existent :
ladsorption, le partage, lchange dions, la paire dions, lchange de ligands, le transfert de
charge et lexclusion strique,. [64].

La CPL polarit de phase inverse avec un gradient dlution est la stratgie la plus
communment utilise pour lanalyse multirsidus de pesticides [7, 65]. Elle permet en effet
lanalyse de composs ayant des proprits physico-chimiques varies. Les composs sont
alors spars selon leur diffrence dhydrophobie par partage entre la phase stationnaire et la
phase mobile. Cette dernire met en jeu une phase aqueuse compose en gnral deau et une
phase organique, le mthanol ou lactonitrile.

La majorit des phases stationnaires sont base de silice chimiquement modifie par
greffage dune chane alkyle octyl C8 ou octadcyl C18. De la silice avec des groupements
aminopropyl, cyanopropyl ou phnyl peut aussi tre utilise. Dautres phases stationnaires
apolaires base de polymres tel que le copolymre styrne divinylbenzne sont galement
cites [66]. Par ailleurs, dautres phases base de carbone graphite poreux (PGC) existent.
Cependant, ce type de phase est rserver lanalyse de composs polaires car les
mcanismes mis en uvre entranent une trop forte rtention des substances apolaires. Ainsi,
le PGC nest pas prconis lors du dveloppement de mthodes danalyse multirsidus.

De nombreux pesticides de polarit varie peuvent tre efficacement analyss par CPL
polarit de phase inverse sans aucune tape pralable de drivation. Ainsi, depuis son
introduction au cours des annes 1980, la CPL couple des dtecteurs de type ultraviolet
(UV) ou fluorescence a t adopte comme une technique complmentaire la CPG dans le
domaine de lanalyse de rsidus de pesticides [51].

De part sa large gamme dapplication, sa stabilit long terme, sa facilit dutilisation,


son faible cot et lamlioration de la slectivit grce au dtecteur barrettes de diode
(Diode Array Detector, DAD), la dtection UV a t longtemps la plus utilise dans lanalyse
de rsidus de pesticides. Nanmoins, lidentification de pesticides dans des chantillons
complexes peut tre un problme pour la CPL couple des dtecteurs conventionnels

- 28 -
Chapitre I

comme lUV. Ces techniques ne sont en effet pas suffisamment spcifiques, manquent de
slectivit (grande ressemblance des spectres UV des pesticides dune mme famille
chimique) et de sensibilit pour lanalyse de traces de composs prsents dans des matrices
complexes [54-57, 67, 68].

Plus sensible et slective que labsorption UV, la dtection par fluorescence peut tre
une alternative intressante lors de lanalyse de pesticides. Cependant, elle sapplique
uniquement aux analytes qui possdent des fluorophores [19, 28, 51, 54, 69]. Son domaine
dapplication est donc limit moins de mettre en uvre une tape de drivation pr ou post
colonne pour llargir [19, 51, 69]. Des pesticides de type N-mthylcarbamates ont ainsi t
analyss dans les fruits et les lgumes par CPL couple une dtection fluorescence aprs
drivation et hydrolyse post-colonne [70]. La CPL couple des dtections lectrochimiques
a t galement utilise pour lanalyse de pesticides dans les fruits mais les mthodes ne sont
pas suffisamment slectives et impliquent que les composs tudis possdent des proprits
oxydo-rductrices [22, 56].

Le manque de dtecteur performant et universel, applicable une grande gamme de


composs et associ la CPL a t surmont avec le couplage la dtection par SM grce au
dveloppement dinterfaces adaptes. Lintrt du couplage de la CPL la SM rside dans la
combinaison dune part du pouvoir de sparation de la CPL et dautre part du pouvoir
didentification et de confirmation de la SM [4, 57]. De plus, lun des atouts de la SM est sa
capacit confirmer lexistence de composs de familles chimiques diffrentes et qui nont
pas de chromophores comme par exemple les acides phosphoniques, mtabolites des
organophosphors [51]. De plus, la CPL/SM prsente dautres avantages comme la capacit
dtecter des composs trs polaires et leurs produits de dgradation sans tape pralable de
drivation [71].

Le premier couplage fonctionnel de la CPL la SM a t rapport il y a plus de 25 ans,


cependant des difficults techniques ont t rencontres pour combiner le volume de phase
mobile issue de la CPL au vide ncessaire au fonctionnement du spectromtre de masse. Elles
ont donc limit pendant de nombreuses annes lessor et lutilisation en routine de la CPL/SM
comme mthode danalyse dans les laboratoires de contrle de rsidus de pesticides [55, 56,
72]. Ainsi, jusque dans les annes 1990, la majorit des applications dans lanalyse par
CPL/SM de rsidus de pesticides impliquait lutilisation dinterfaces de type thermospray

- 29 -
Chapitre I

(TSP) ou de type particle-beam (PB) [73]. Mme si quelques applications ont t russies,
elles ne sont pas vraiment adaptes la fois cause de leur cot lev mais aussi de leur trs
grande variation de sensibilit entre les composs dune mme famille chimique ou de
familles chimiques diffrentes. Malgr les difficults analytiques pouvant tre rencontres lors
de lutilisation de linterface PB en CPL polarit de phases inverses, elle prsente lavantage
de fournir des spectres de masse comparables ceux obtenus en CPG/SM [51, 71]. La
situation a fondamentalement t amliore avec lintroduction et la commercialisation
dinterfaces robustes et fiables telles que les sources dionisation pression atmosphrique.

Ainsi, associes la SM, la CPL et la CPG restent deux techniques sparatives trs
complmentaires dans le domaine de lanalyse de pesticides. Compte tenu du nombre
important de molcules existantes, il nexiste pas de technique capable de toutes les analyser
avec une sensibilit satisfaisante [74]. Le grand nombre dtudes utilisant la fois la CPG et
la CPL [39, 43, 48, 75-77] tmoigne de cette nouvelle tendance qui trouve son origine dans la
diversit des molcules prsentant un intrt tre dtermines et quantifies. Par exemple,
ltude mene par lquipe de Guo met en vidence que malgr lutilisation de la CPG-SM
pour lanalyse de trois cent soixante-deux pesticides dans les crales, la CPL reste ncessaire
et indispensable. En effet, la CPG ne permet pas lanalyse de tous les pesticides et lauteur
cite en particulier vingt-huit composs pour lesquels les performances obtenues en CPG ne
sont pas satisfaisantes comme par exemple le dimethoate, le carbosulfan, le chlorothalonil et
le prochloraze [43].

3. Dtection par spectromtrie de masse


3.1. Principe de la spectromtrie de masse

Le principe de fonctionnement dun spectromtre de masse repose sur laction dun


champ lectromagntique sur une particule charge, afin en particulier den dterminer le
rapport masse/charge (m/z) [78]. Cette technique permet lidentification de molcules
dintrt par transformation des molcules en ions. Un spectromtre de masse est compos de
diffrents lements : la source dionisation, lanalyseur, le dtecteur et lenregistreur. La
source permet lionisation de lchantillon analyser et le transfert des ions vers lanalyseur
de linstrument. Ce dernier trie ensuite les ions en fonction de leur rapport m/z. Enfin, le
dtecteur collecte les ions en sortie de lanalyseur en leur associant leur rapport m/z et une

- 30 -
Chapitre I

intensit. Lenregistreur permet de traiter le signal et de convertir les informations en spectres


de masse et/ou en chromatogrammes lors dun couplage avec une technique
chromatographique [78, 79].

3.2. Sources dionisation pression atmosphrique

Dveloppes au milieu des annes 1990, les sources dionisation pression


atmosphrique (Atmospheric Pressure Ionisation, API) ont permis de saffranchir ou de
limiter les diffrents problmes existants lors de lutilisation dautres interfaces. Elles ont
commenc remplacer les sources de type TSP grce leur facilit dutilisation, la possibilit
dioniser plus de molcules, la compatibilit avec des plus hauts dbits et la stabilit du
processus dionisation [80]. Elles ont amlior la possibilit didentification et de
confirmation de composs des concentrations comparables celles atteintes par CPG/SM
[33]. La disponibilit de telles sources robustes qui permettent lanalyse de pesticides divers a
contribu la perce de la CPL couple la SM [55]. Il existe actuellement de nombreuses
mthodes dionisation, chacune tant adapte la nature de lchantillon et au type danalyse
effectuer, son choix est donc dcisif. Larrive de sources API a rvolutionn lanalyse par
CPL/SM de micropolluants organiques tels que les pesticides. Lelectrospray (ESI,
Electrospray Ionisation) et lionisation chimique pression atmosphrique (APCI,
Atmospheric Pressure Chemical Ionisation) font partie de ces sources dionisation.
Rcemment une troisime source est apparue, la photo-ionisation pression atmosphrique
(APPI, Atmospheric Pressure Photo-Ionisation) [81, 82]. Cependant, peu de travaux ont t
publis pour pouvoir en valuer lefficacit pour lanalyse de pesticides dans les matrices
alimentaires.

2.1. Source Electrospray

LESI est un processus dionisation douce qui transforme les ions, majoritairement
prforms en solution, en ions en phase gazeuse. Aujourdhui, le mcanisme du processus
dionisation par ESI nest pas encore clairement dfini. Cependant, il peut tre dcrit de la
faon suivante : lcoulement de lchantillon provenant de la colonne chromatographique
entre dans le capillaire de la source ESI. Ce dernier est port un potentiel lectrique lev
positif ou ngatif de 3 5 kV. Deux tapes ont lieu lors de la formation des ions par ESI. La
premire est la formation dun nuage de gouttelettes (Figure 1-3) au bout de laiguille sous
laction du champ lectrique appliqu la sortie du capillaire.

- 31 -
Chapitre I

Arrive de lchantillon
Sonde dionisation ESI

Entre du cne
vers lanalyseur

Nuage de gouttelettes

Figure 1-3 : Photo de la source dionisation ESI, adapte de [83].

Un flux de gaz est conjointement appliqu pour aider lvaporation du solvant. La


haute tension entrane les ions de mme polarit vers la surface de la solution pour former
un cne de Taylor (Figure 1-4). Il y alors formation de gouttelettes charges avec des ions
positifs ou ngatifs. Toutefois, les ions majoritairement forms sont de mme polarit que la
tension applique.

Figure 1-4 : Processus dionisation par ESI, daprs [84] .

La seconde qui consiste liminer le solvant est sujette controverse. Le processus


exact de la formation des ions partir des gouttelettes charges est encore mal dcrit [85-87].
Il existe principalement deux thories expliquant le processus dionisation. La premire fait
rfrence au modle de charge rsiduelle. Elle postule que de grandes gouttelettes charges
sont produites par nbulisation pneumatique. Cest dire que, lors du passage de la solution

- 32 -
Chapitre I

travers le capillaire lextrmit duquel est applique une tension suffisamment leve, la
solution est disperse en un spray trs fin de gouttelettes charges. Lvaporation du solvant
entrane le rtrcissement des gouttelettes et donc laugmentation de leur charge surfacique
(Figure 1-4). Par la suite, la limite de Rayleigh , la rpulsion coulombienne dpasse la
tension superficielle et induit lclatement des gouttelettes. Cette explosion coulombienne
forme une srie de petites gouttelettes faiblement charges. Les processus de rtrcissement et
dexplosion sont rpts jusqu lobtention dions individuels [88]. La seconde thorie,
propose un peu plus tard est le modle dvaporation dions. Dans ce modle, il est considr
que les gouttelettes dun rayon infrieur 10 nm peuvent permettre lmission directe dions
gazeux. Ltat de charge des ions dpendra du nombre de charges transfres partir de la
surface de la gouttelette de lion pendant la dsorption [88].

Le procd dionisation peut conduire la formation dions mono-chargs de type


[M+H]+ en mode positif ou [M-H]- en mode ngatif mais galement des ions de charges
multiples appels ions multi-chargs [M+nH]n+ ou [M-nH]n-. Il arrive parfois que des ions
majoritaires correspondant des adduits soient forms par combinaison de lion molculaire
du compos dintrt avec une impuret de la phase mobile (ions sodium, potassium ou
ammonium) [18].

2.2 Source dionisation pression atmosphrique

A la diffrence de la source ESI, les ractions ions-molcules du processus


dionisation par APCI se produisent essentiellement en phase gazeuse [80]. Le liquide est
vaporis par un tube de nbulisation chauff de hautes tempratures (de 250 500C). Ces
tempratures leves doivent tre prises en considration lors de lanalyse de composs
thermo-dgradables.

Arrive de lchantillon
Sonde dionisation
APCI chauffe

Entre du cne
vers lanalyseur Aiguille Coronna

Figure 1-5 : Photo de la source dionisation APCI, adapte de [83].

- 33 -
Chapitre I

Le processus dionisation se droule en trois tapes :


1) la dcharge coronna (Figure 1-5) produit un jet dlectrons qui permet lionisation
du gaz nbulisant par dplacement dlectrons. Des ions primaires de type N2+
et O2- sont alors forms,
2) les ions primaires ragissent alors immdiatement avec les molcules du solvant de
la phase mobile pour former des ions ractifs de type H3O+ en mode positif (Figure
1-6),
3) ces ions ractifs vont ensuite ragir principalement par transfert de proton avec les
molcules caractristiques des composs pour former des ions de type [M+H]+ en
mode positif ou [M-H]- en mode ngatif.
Ce sont ces trois tapes qui font de lAPCI, une mthode dionisation chimique.

Figure 1-6 : Reprsentation schmatique du processus dionisation par APCI en mode positif [89].

En gnral, les ions forms par les sources APCI correspondent des molcules
protones en mode dionisation positif ou dprotones en mode ngatif. De mme que pour
lESI, il se peut parfois que des ions supplmentaires correspondants des adduits soient
forms.

2.3. Comparaison de lESI et de lAPCI

La possibilit dutiliser les sources ESI et APCI rend la CPL couple la SM trs
intressante pour lanalyse de pesticides au vue de la varit de leurs proprits physico-
chimiques. Pour lutilisateur, ces deux sources ne sont pas trs diffrentes physiquement,
toutefois, il demeure quelques distinctions gnrales prendre en compte lors du choix de la
source (Tableau 1-3).

- 34 -
Chapitre I

Tableau 1-3 : Comparaison de la source ESI lAPCI [90] .

ESI APCI
Ionisation en phase liquide Ionisation en phase gazeuse
Ionisation douce : pas de chauffage Bloc source chauff (250 500C)
Analyse de molcules thermolabiles
Analyse de molcules thermolabiles
non recommande
Analyse de molcules de faibles et Analyse de molcules de poids
hauts poids molculaires molculaires < 2 000
Analyse de molcules polaires Analyse de molcules moyennement
(ioniques) faiblement polaires faiblement polaires
Dbit CPL de 1 ~ 1 000 L/min Dbit CPL de 100 > 2 000 L/min
Dpendant de la concentration Dpendant de la masse
Sensible aux effets de matrice Moins enclin aux effets de matrice

Certaines publications ont port sur la comparaison de ces deux sources dionisation
pour lanalyse de pesticides. Lquipe de North a, par exemple, tudi lionisation des
composs de la famille des N-mthylcarbamates la fois en ESI et APCI. Cette dernire a
conduit une mthode plus sensible que lESI et la gamme de linarit observe en APCI est
plus grande quen ESI [91]. Toutefois, des rsultats diffrents ont t obtenus par dautres
quipes qui ont montr que les deux sources taient similaires en terme defficacit [51, 58,
92]. Les conditions opratoires du systme analytique peuvent donc influer sur la sensibilit
pouvant tre atteinte. Par ailleurs, un groupe de soixante-quinze pesticides a galement t
analys avec les deux sources dionisation. Il a ainsi t mis en vidence que lionisation
APCI tait adapte aux composs neutres et faiblement basiques comme les triazines et les
phnylures surtout en mode dionisation positif. Ces composs peuvent facilement tre
protons en phase gazeuse par les ions de la phase mobile selon leur affinit protonique [18,
80, 92]. LESI en mode dionisation ngatif convient aux composs qui possdent des
fonctions carboxyliques et hydroxyles.

De faon gnrale, lAPCI est plus nergtique que la source ESI puisque leffluent est
nbulis par un dbit dazote et rapidement vapor en utilisant de hautes tempratures allant
de 250 500C. En ESI, lchantillon est moins sujet la dgradation thermique car il est
ionis directement en phase liquide une temprature quasi-ambiante [56]. Par ailleurs, lESI
permet lionisation dune plus large gamme de composs que lAPCI. Elle est prconise pour
les composs polaires, ioniques et de haut poids molculaire car ils sont plus sensibles aux

- 35 -
Chapitre I

hautes tempratures utilises en APCI [18, 80]. Cette dernire est quant elle recommande
pour les composs apolaires du fait quelle ne ncessite pas lexistence dions prforms en
phase liquide. Elle convient galement aux pesticides neutres en solution et qui sont
difficilement ionisables en ESI.

Certains pesticides chargs en solution, comme par exemple, le diquat, sont ioniss en
ESI en mode positif mais ne le sont pas en APCI ou en APPI. Dautres en revanche, comme le
mtolachlor ou les chloroactanilides sont ioniss la fois en ESI et APCI en mode
dionisation positif et ngatif. Malgr le nombre important de composs pouvant tre analyss
en CPL/SM par des sources API, certains organochlors comme le DDT ne sont ioniss ni en
APCI ni en ESI mais par impact lectronique. Leur analyse ne peut donc tre effectue quen
CPG [89].

Ainsi, lESI a t identifie comme la source dionisation la plus universelle lors de


lanalyse de pesticides [92, 93]. Cependant, pour conclure, il semble quil n'est pas possible
de prvoir quelle sera la source la mieux adapte savoir celle qui permettra dobtenir la
meilleure sensibilit pour un compos donn. Ceci est dautant plus vrai que les pesticides
sont des molcules complexes dont il est difficile de prvoir la ractivit lors de lionisation.
Ces composs contiennent bien souvent la fois des sites facilement protonables et
dautres dprotonables . Par ailleurs, la diversit des gomtries de sources disponibles
dun fournisseur lautre peut affecter les performances atteintes par les mthodes
dveloppes. De plus, il est indispensable de prendre en compte linfluence de la phase
mobile ncessaire lobtention dune bonne sparation en amont et dont la nature peut
galement avoir une influence sur la sensibilit.

3.3. Composition de la phase mobile

La phase mobile reprsente un enjeu important du dveloppement de mthode car elle


joue plusieurs rles clefs. Elle influe sur la qualit de la sparation chromatographique mais
affecte aussi lionisation des analytes et de ce fait la sensibilit du dtecteur [7]. Par ailleurs,
le processus dionisation est fortement influenc par la quantit et la nature de solvant qui
arrive en mme temps que la molcule tudie dans la source dionisation [80].

- 36 -
Chapitre I

En gnral, la phase mobile en CPL de phase inverse est compose dune phase
aqueuse et dune phase organique. Les solvants organiques les plus utiliss en CPL/SM sont
le mthanol et lactonitrile. Des diffrences peuvent tre observes lors de leur utilisation.
Thoriquement, l'affinit protonique du mthanol de 761 kJ/mol est infrieure celle de
l'actonitrile, 787 kJ/mol [80]. Il est raisonnable de penser que lionisation des composs est
facilite en prsence de mthanol. Toutefois, linfluence de la nature du solvant organique et
donc de la nature de la phase mobile ntant pas encore connue avec prcision, il convient de
tester diffrentes phases mobiles lors du dveloppement des mthodes danalyse multirsidus
de pesticides.

La sparation et lionisation des composs en CPL/SM sont souvent amliores par


lajout dun modificateur qui peut tre de lacide actique, de lacide formique, de lactate
dammonium ou encore du formate dammonium. Il est gnralement reconnu quune faible
volatilit de la phase mobile et des concentrations en sels leves doivent tre vites pour
empcher une instabilit des signaux et une faible sensibilit.

La composition optimale de la phase mobile pour une sparation chromatographique


adquate est parfois peu convenable pour lobtention dune rponse maximale avec les
sources API pour tous les composs cibls. Cependant, laddition de solvant en post-colonne
pour modifier le pH ou laugmentation du pourcentage de solvant organique peuvent
permettre une exaltation du signal [18]. Toutefois, il faut rester prudent lors de lutilisation
de ce type dapproche. La source ESI est effectivement sensible au dbit appliqu et laddition
de solvant entrane une dilution de la concentration et donc une diminution de la sensibilit.

3.4. Analyseurs

Aprs leur formation par la source dionisation, les ions sont acclrs et focaliss
jusqu lanalyseur. Il en existe diffrents types, les plus rpandus dans le domaine de
lanalyse de pesticides sont la trappe ionique et le quadriple.

Trappe ionique

La trappe ionique est constitue de trois lectrodes : une lectrode hyperbolique ayant
la forme d'un anneau dite lectrode annulaire qui est encadre de deux autres lectrodes

- 37 -
Chapitre I

hyperboliques, dites lectrodes chapeau, une dentre et une de sortie. Une reprsentation
simplifie en est donne en figure 1-7.

lectrode annulaire

source dtecteur

lectrodes
chapeaux
abondance

Figure 1-7 : reprsentation dune trappe ionique et de son mode de fonctionnement [94].

Une trappe ionique peut piger des ions, mesurer leurs masses, isoler un ion et le
fragmenter. Lors dune dtection par SM, llectrode annulaire est utilise pour gnrer un
champ lectrique quadripolaire qui permet de piger les ions et de les retenir. La tension
applique cette lectrode est augmente progressivement. Les ions sont alors jects vers le
dtecteur par lorifice de llectrode chapeau de sortie dans l'ordre de leur rapport m/z
croissant. Ainsi, chaque tension de l'lectrode annulaire correspond l'jection d'un m/z
particulier. De plus, un gaz tampon est utilis afin de stabiliser les ions dans la trappe.

Quadriple

Un quadriple est un filtre de masse constitu de quatre barres parallles, idalement


de section hyperbolique (Figure 1-8). Un potentiel continu (DC) et un potentiel
radiofrquence (RF) sont appliqus entre les quatre barres. Selon le choix des valeurs de
masse et de potentiel appliqu, certains ions seront jects ou entreront en contact avec les
barres ( non resonant ion Figure 1-8) et dautres auront une trajectoire leur permettant de
passer entre les barres du quadriple ( resonant ion Figure 1-8) et seront donc dtects. Le
quadriple est un appareil qui utilise la stabilit des trajectoires pour sparer les ions selon
leur m/z.

- 38 -
Chapitre I

Figure 1-8 : reprsentation dun analyseur de type quadriple [95].

La trappe ionique et le quadriple permettent tous les deux deffectuer des acquisitions
en mode SM. Contrairement au simple quadriple, la trappe ionique permet intrinsquement
deffectuer galement de la spectromtrie de masse en tandem (SM). Nanmoins, avant den
expliquer le principe, il convient dexposer les limitations lies au couplage de la CPL la
SM.

3.5. Limitations associes au couplage de la CPL la SM

Ainsi, outre la complexit du phnomne dionisation, le couplage de la CPL la SM


prsente quelques difficults analytiques surmonter. La plus importante provient des
spectres de masse des pesticides qui contiennent en gnral uniquement lion molculaire,
lion adduit ou un ion issu dune trs faible fragmentation [7]. La co-lution de composs
interfrents provenant de la matrice peut alors gner le processus de dtection : au mme
temps de rtention, les composs qui forment des ions de mme rapport m/z sont
indiffrencis et peuvent mener de faux positifs. Le degr de confiance didentification des
composs par une dtection par SM se trouve alors affaibli. Le risque derreur et de ce fait
lincertitude des analyses augmentent dans les cas suivants : une haute complexit de la
matrice ou du produit analyser et un grand nombre de pesticides dtecter en une seule
analyse. Ces aspects sont en gnral prsents lors de l'analyse de rsidus de pesticides dans
des matrices alimentaires. Pour ces raisons, la mise en uvre dune dtection par SM est

- 39 -
Chapitre I

souvent limite aux matrices propres, la dtermination d'un nombre limit de composs et
implique lexploitation maximale du pouvoir sparatif de la chromatographie.

La simple spectromtrie de masse souffre aussi de limportance du bruit de fond du


la matrice de lchantillon et aux clusters issus des solvants de la phase mobile. Le bruit de
fond observ lors de lanalyse dchantillon rel empche lobtention de basses limites de
quantification.

Ces limitations ont t dpasses avec le dveloppement de la CPL couple la SM en


tandem (SM) qui amliore les mthodes traditionnelles de spectromtrie de masse avec deux
tapes danalyses de masse.

4. Chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de


masse en tandem
4.1. Principe et gnralits

La spectromtrie de masse en tandem (SM) constitue un apport trs important dans le


domaine de la chimie analytique. Elle permet dtudier les caractristiques de fragmentation
des molcules tudies. Une premire tape consiste slectionner un ion stable particulier
issu de la source dionisation et appel ion parent ou prcurseur. Cet ion est ensuite excit
pour mener sa fragmentation. Lanalyse des ions issus de la dcomposition (ions fils,
produits ou de fragmentation) est alors effectue. Lanalyse des composs par CPL/SM
seffectue donc travers la dtection de fragments provenant dions prcurseurs
prcdemment slectionns [67].

Parmi les appareils qui permettent doprer en mode SM, le triple quadriple et la
trappe ionique sont les plus largement utiliss pour lanalyse de composs de faibles poids
molculaires [17, 18, 55, 96]. Ainsi, ces appareils prsentent une facilit dutilisation, une
plus grande robustesse et un cot plus faible en comparaison aux analyseurs temps de vol
(TOF, Time of Flight) ou transforme de Fourier (FT-ICR, Fourier Transform-Ion
Cyclotron Resonance). Lanalyseur TOF est bas sur la mesure du temps coul depuis le
dpart des ions qui permet de calculer les rapports m/z et donc la masse des ions
correspondants. Il a souvent t utilis lors danalyse de haute rsolution, lerreur de masse
tant infrieure 2mDa. Cette capacit permet une meilleure discrimination du bruit de fond

- 40 -
Chapitre I

[97, 98]. Le principal avantage de ce type dinstrument est lidentification de pics inconnus
dans un chantillon malgr labsence dtalons [99, 100]. Mais, cet avantage nest pas
ncessaire lors des analyses de routine visant vrifier la conformit (concentration du
compos cibl infrieure la LMR).

Par ailleurs, ces dernires annes, des appareils hybrides sont apparus tels que le
quadriple coupl un temps de vol (Q-TOF). Ces appareils dont le prix reste trs lev
permettent de combiner les points forts des analyseurs quadriples et des temps de vol. Ils
sont constitus d'un double quadriple (1er analyseur et cellule de collision) et d'un analyseur
temps de vol comme second analyseur. Lutilisation dinstrument hybride comme Q-TOF
permet un haut degr de confirmation bas sur la combinaison du temps de rtention, de la
masse de lion quasi-molculaire slectionn par le quadriple et du spectre de masse de
fragmentation obtenu par lanalyseur temps de vol [101]. Ainsi, bien que lutilisation des Q-
TOF puisse tre une bonne alternative pour dterminer les masses avec exactitude, elle reste
encore trs peu rpandue dans le domaine de lanalyse de pesticides [18]. De plus, la
sensibilit des instruments hybrides tel que le Q-TOF est infrieure celle des triples
quadriples [101, 102]. En outre un autre des inconvnients majeurs est la gamme de linarit
trs restreinte des Q-TOF ce qui peut reprsenter une limitation lors de la quantification des
rsidus de pesticides en routine.

Ainsi, la trappe ionique et le triple quadriple tant les analyseurs les plus utiliss dans
le domaine de lanalyse de pesticides, leur principe va tre dcrit.

4.2. CPL/SM de type triple quadriple et trappe ionique


4.2.1. Triple quadriple

Le couplage de la chromatographie liquide la spectromtrie de masse en tandem


analyseur de type triple quadriple est schmatis sur la figure 1-9. La dtection par
spectromtrie de masse en tandem de type triple quadriple repose sur la mise en srie de trois
quadriples. Le premier et le troisime quadriples fonctionnent comme des filtres de masse
qui selon le mode de fonctionnement laissent passer tous les ions ou certains ions
prslectionns. Le second est une chambre de collision o les ions isols sont fragments ;
ces fragments sont ensuite analyss par le troisime quadriple, qui filtre les ions issus de la

- 41 -
Chapitre I

fragmentation [70]. Lavantage dun tel couplage est laugmentation de la slectivit via
lutilisation de deux filtres de masse en srie.

Figure 1-9 : Schma du couplage de la chromatographie en phase liquide


la spectromtrie de masse en tandem.

Diffrents modes dacquisitions sont disponibles lors de la mise en oeuvre de la


CPL/SM de type triple quadriple. En spectromtrie de masse, le mode balayage ( Full
scan ) et le mode acquisition dun rapport m/z donn ( SIM, Single Ion Monitoring ) sont
possibles. Par contre en mode spectromtrie de masse en tandem, quatre modes dacquisitions
supplmentaires sont disponibles : le mode balayage des ions de fragmentation produits
( Product ion scan ), le mode balayage des ions prcurseurs ( Precursor ion ), le mode
perte de neutre ( Neutral loss ) et le mode balayage de plusieurs ions de fragmentation
( MRM, Multiple Reaction Monitoring ). Ces diffrents modes dacquisition sont illustrs
et explicits ci-aprs.

- 42 -
Chapitre I

Mode balayage ou full scan

Lors dune acquisition en mode balayage full scan , un intervalle de rapport m/z est
balay. Il en rsulte la dtection dun grand nombre dions produits dans la source et ayant des
rapports m/z diffrents (Figure 1-10). Ce mode dacquisition peut tre effectu avec le
premier ou le troisime quadriple. Les deux autres sont alors inactifs et ne servent qu
focaliser les ions vers le dtecteur.

Source
dions Dtecteur

Q1 Q2 Q3

Figure 1-10 : Reprsentation schmatique du mode full scan .

Mode Single Ion Monitoring (SIM)

Le mode dacquisition dun rapport m/z donn SIM, Single Ion Monitoring est en
revanche plus slectif car il permet le suivi dun rapport m/z donn pendant un temps fix
(Figure 1-11). Ce mode dacquisition permet daugmenter la slectivit et par consquent la
sensibilit du signal. Il peut tre effectu avec le premier quadriple Q1 et le troisime
quadriple Q3 devient inactif tout comme la cellule de collision et joue le rle de lentille ou
vice-versa.

Source
dions Dtecteur

Q1 Q2 Q3

Figure 1-11 : Reprsentation schmatique du mode SIM .

- 43 -
Chapitre I

Mode dacquisition des ions de fragmentation

Le mode dacquisition des ions de fragmentation produits Product Ion Scan


ncessite la mise en uvre des trois quadriples (Figure 1-12). Dans un premier temps, la
source va produire des ions prcurseurs (ou ions parents) qui vont tre slectionns par le
premier quadriple Q1. Ces ions sont ensuite fragments par collision avec un gaz inerte au
sein du quadriple Q2. Tous les ions de fragmentations ou ions fils obtenus sont alors
focaliss vers le troisime quadriple Q3 puis dtects. Ce mode de dtection est trs slectif
car deux ions prcurseurs ayant le mme rapport m/z ne se fragmentent pas de faon identique
et conduisent des ions fils diffrents qui permettent leur diffrenciation.

Source
dions Dtecteur

Q1 Q2 Q3

Figure 1-12 : Reprsentation schmatique du mode Product Ion Scan .

Mode Multiple Reaction Monitoring (MRM)

Le mode MRM permet le suivi des transitions particulires entre les ions parents et
leurs ions de fragmentation (Figure 1-13). Ce mode trs slectif est donc souvent utilis en
analyse multirsidus.

Source Dtecteur
dions

Q1 Q2 Q3

Figure 1-13 :Reprsentation schmatique du mode MRM.

- 44 -
Chapitre I

Mode perte de neutre

En mode perte de neutre dit Neutral loss (Figure 1-14), les deux analyseurs Q1 et
Q3 balaient une gamme de masse simultanment et avec un dcalage de masse constant. Le
spectre tabli prsentera alors tous les ions parents capables de se fragmenter en gnrant un
neutre de masse gale au dcalage impos.

Source Dtecteur
dions

Q1 Q2 Q3

Figure 1-14 : Reprsentation schmatique du mode Neutral loss .

Mode parent

Enfin, le mode Precursor Ion Scan qui est aussi appel le mode parent permet
de rechercher les ions molculaires parents capables de se fragmenter en un ion fils donn. Ce
mode est illustr sur la figure 1-15.

Source Dtecteur
dions

Q1 Q2 Q3
Figure 1-15 : Reprsentation schmatique du mode Precursor Ion Scan.

Ainsi, pour rpondre la problmatique de la thse, le mode le plus adapt est le mode
MRM, Multiple Reaction Monitoring . Il assure une grande slectivit des analyses
effectues et permet le suivi dun grand nombre de composs.

- 45 -
Chapitre I

4.2.2. Trappe ionique

Comme dj voqu, la trappe ionique utilise un gaz tampon pour stabiliser les ions
dans la trappe. Ce gaz va galement jouer le rle de gaz de collision. La trappe est tout
dabord remplie par les ions produits par la source dionisation. Lion prcurseur est ensuite
isol dans la trappe. Une tension acclratrice est ensuite applique de faon le fragmenter
par collision avec les atomes du gaz tampon. Une fois, les ions fils forms, ils sont accumuls
dans la trappe et jects via llectrode chapeau de sortie par balayage de radiofrquence vers
le dtecteur. Le principe de cette technique est illustr par la figure 1-16.

Remp lissage de la trappe Isolement de lion parent

Frag mentation par collision Ejection des ions fils

Figure 1-16 : Principe de la spectromtrie de masse en tandem pour une trappe ionique,
adapt de[94].

La trappe ionique tout comme le triple quadriple permet deffectuer des acquisitions
en mode MRM dfini prcdemment. Le principe est le mme et consiste effectuer des
acqusitions en mode SM sur plusieurs composs. Les trappes ioniques prsentent lavantage
de pouvoir travailler en mode SMn [18]. Cest dire que les tapes de remplissage,
disolement et de fragmentation vont tre effectues de faon obtenir les ions fils issus de
(n-1) fragmentations successives.

- 46 -
Chapitre I

4.3. Comparaison de la trappe ionique et du triple quadriple pour


lanalyse de pesticides par CPL

Comme prcdemment voqu, la trappe ionique permet la mise en uvre de la SM.


Nanmoins la prslection des ions, la fragmentation et lanalyse des ions fils sont effectues
successivement et ncessitent plus de temps que le triple quadriple qui effectue les
oprations paralllement. De plus, la trappe ionique souffre dune gamme de masse de travail
limite et de la difficult fragmenter les ions trs stables. Elle est inefficace pour
emprisonner des fragments de rapport m/z faibles [66]. Par ailleurs, lavantage des trappes
ioniques de pouvoir effectuer des acquisitions en mode SMn est limit dans le domaine de
lanalyse de rsidus de pesticides. En effet, lors de leur premire fragmentation (mode SM),
de nombreux composs donnent des ions de faibles rapports m/z qui ne peuvent donner lieu
une fragmentation supplmentaire [96]. Par ailleurs, lorsque certains composs fournissent un
ion de fragmentation SM3 ; son intensit est souvent trop faible et mne donc une
augmentation des limites de quantification qui peuvent devenir suprieures aux LMR. Ce
phnomne a t notamment constat lors de lanalyse de rsidus de pesticides dans les
oranges [96].

Le triple quadriple a la capacit de fournir des spectres selon diffrents modes


dacquisition. Son principal inconvnient est le manque de sensibilit en mode balayage (full
scan) alors que lun des avantages de la trappe ionique est quelle peut fournir des rsultats
satisfaisants dans ce mode [96]. Toutefois, il est gnralement reconnu que les spectromtres
de masse de type triple quadriple oprant en mode production dions de fragmentation
(Product ion scan) offrent une plus grande slectivit ainsi quune grande sensibilit en mode
MRM.

Par ailleurs, les dispersions observes sur les rsultats de quantification par triple
quadriple sont en gnral plus faibles que ceux obtenus avec une trappe ionique [17]. En
moyenne sur lanalyse de six rsidus de pesticides dans les oranges, lquipe de Pic a obtenu
des carts types relatifs de 7,25% sur un triple quadriple contre 11,6% sur la trappe ionique
[96]. En outre, lors de lanalyse de pesticides dans les eaux, lcart type relatif est de 32
85% avec la trappe ionique (n=15) alors quil diminue jusqu atteindre des valeurs
infrieures 5% lors de lutilisation dun triple quadriple [103]. Cet aspect est dune grande
importance dans le domaine de la mtrologie dont lun des objectifs est de diminuer les

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Chapitre I

incertitudes de mesures. Toutefois, une tude effectue en Angleterre a montr que les
performances dune mthode danalyse du chlormquat dans les poires sont quivalentes
quelque soit lanalyseur utilis : triple quadriple ou trappe ionique [104].

Le triple quadriple semble tre globalement plus prcis, plus linaire, moins sensible
aux interfrents dus la matrice et plus robuste que la trappe ionique [96]. Toutefois, compte
tenu de la complexit du phnomne dionisation, ces conclusions gnrales sont considrer
avec prcaution. Le phnomne dionisation est en effet dune part compos-dpendant et
dautre part trs sensible aux conditions opratoires (nature de la phase mobile, dbit de phase
mobile et des gaz).

4.4. Intrt de la CPL/SM pour lanalyse multirsidus de pesticides

La SM est aujourdhui reconnue comme tant un mode de dtection sensible. La CPL


couple la SM est capable thoriquement de discriminer plus efficacement que la CPL
couple la SM les diffrences entre un analyte et le signal d un interfrent de la matrice
[53]. La fragmentation gnre des signaux moins bruits entranant une amlioration du
rapport signal/bruit et donc des limites de dtection et de quantification plus faibles [4, 17, 37,
51]. Par ailleurs, lutilisation de la SM permet la dtection de pesticides sans avoir une
sparation chromatographique totale entre les composs et par consquent une analyse plus
rapide peut tre effectue. Il est en effet rare de trouver des molcules ayant la mme et
unique transition [17, 62]. Cet aspect permet daugmenter le nombre de pesticides pouvant
tre analyss simultanment en un temps raisonnable.

Le gain en sensibilit obtenue lors de lutilisation de la CPL/SM a t mis en vidence


par lquipe de Pic lors de lanalyse de cinq fongicides de familles chimiques diffrentes
(triazole, biphnyl, imidazole, thiophosphate et un driv nitr). La comparaison des limites
de quantification (LQ) obtenues lors du couplage de la CPL diffrents dtecteurs : savoir
un dtecteur barrette de diodes (DAD), un simple quadriple (SQ) et un triple quadriple
(TQ) a t effectue. En CPL-DAD, les LQ varient de 0,25 1 mg/kg alors quelles sont
comprises entre 0,002 0,01 mg/kg en CPL-SQ. Lutilisation seule de la SM permet un gain
en sensibilit dun facteur 50 250. Les LQ obtenues en CPL-TQ donc en CPL-SM sont
comprises quant elles entre 0,0005 et 0,01 mg/kg [105]. Par ailleurs, le gain en sensibilit
apport par une dtection par SM et en particulier par SM a galement t mis en vidence

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Chapitre I

par lquipe de Gennaro lors de lanalyse de cinq pesticides de la famille des sulfonylures
dans les eaux de surface. Les limites de dtection obtenues en UV sont infrieures 14,5 ng/L
alors quen SM, elles sont infrieures 8,1 ng/L. Les LQ sont galement plus faibles en SM
de lordre de 27 ng/L contre 48 ng/L en UV [50].

Comme voqu auparavant, la CPG/SM a longtemps t utilise pour lanalyse de


pesticides. Lquipe de Vieth sest particulirement intresse la comparaison de lefficacit
des analyses effectues par CPG/SM et CPL/SM de cinq cent pesticides reprsentatifs de
diffrentes familles chimiques : organophosphors, carbamates, organochlors, sulfonylures,
triazoles, pyrthrinodes, triazines, aryloxyphnoxypropionates et aryloxyacides. Elle compare
les performances pouvant tre atteintes et met laccent sur les difficults pouvant tre
rencontres lors de lanalyse par CPG. Elle dresse la liste des cinq cents pesticides auxquels
sont associs les fragments observs en CPG/SM (impact lctronique) et les transitions
ncessaires la dtection par CPL/SM [74]. Il apparat que les limites de quantification (LQ)
obtenues en CPL/SM ou CPG/SM dpendent du compos tudi. La sensibilit observe est
en gnral meilleure en CPL/SM quen CPG/SM. La majorit des composs sont
quantifiables en CPL/SM partir de teneurs comprises entre 0,1 et 1 ng/mL alors quen
CPG/SM, les LQ sont autour de 100 ng/mL [74]. La figure 1-17 prsente une comparaison
des sensibilits en pourcentage pour diffrentes classes chimiques en fonction de la mthode
danalyse.

Figure 1-17 : Comparaison de la sensibilit de la CPG-SM par rapport la CPL/SM pour diffrentes
familles de pesticides [74] .

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Chapitre I

Pour certaines molcules, il arrive parfois que des sensibilits quivalentes soient
atteintes par les deux techniques. En gnral, une meilleure sensibilit est observe en
CPL/SM sauf pour les composs organochlors dont lanalyse est prfrable en CPG [74].
Par ailleurs, cette tude a mis en vidence que sur les 500 composs, 451 peuvent tre
analyss par CPL/SM contre 365 seulement en CPG/SM.

De part ses nombreux avantages, la CPL/SM est devenue trs rpandue dans le
domaine de lanalyse de pesticides. Le tableau 1-4 prsente de manire synthtique quelques
tudes recenses dans la littrature. Il met en vidence les diversits des conditions
analytiques pouvant tre mises en uvre lors de lutilisation de la CPL/SM pour lanalyse de
rsidus de pesticides. Il convient de constater que le nombre de pesticides varie selon les
objectifs viss. Une centaine de composs peuvent tre tudis avec une mme mthode.
Toutefois, il est important de souligner le fait que selon lobjectif vis les contraintes ne sont
pas les mmes. Par exemple, lors du dveloppement dune mthode des buts quantitatifs, il
est certain que le nombre de composs cibls doit tre limit compar une mthode
qualitative.

Malgr une grande diversit des dimensions des colonnes analytiques utilises,
lutilisation de phase stationnaire de type C18 reste prpondrante. Les phases mobiles
utilises pour lanalyse chromatographique sont diverses. Toutefois, comme voqu
prcdemment, le mthanol et lactonitrile combins une phase mobile aqueuse sont trs
souvent utiliss. Il arrive que les solvants soient utiliss purs ou que les analyses soient
effectues en milieu tamponn. Des modificateurs tels que lacide actique, lacide formique,
lactate dammonium ou le formate dammonium peuvent tre employs. Les dbits de phase
mobile appliqus diffrent selon les mthodes et notamment les dimensions des colonnes.
Toutefois, certaines quipes utilisent des dbits levs pour lanalyse chromatographique qui
sont ensuite diviss avant darriver au spectromtre de masse. La source ESI est en effet
particulirement sensible au dbit appliqu. Par ailleurs, ce tableau confirme la tendance trs
nette dune plus grande utilisation de la source dionisation ESI pour lanalyse multirsidus de
pesticides. LAPCI semble tre utilise lorsque le nombre de composs tudis est faible. En
gnral, les mthodes sappliquent des composs qui sionisent dans le mme mode (positif
ou ngatif). Le dveloppement dune mthode multirsidus de pesticides qui sionisent la
fois en mode positif et ngatif est dautant plus difficile que lalternance de ces deux modes
est un paramtre supplmentaire considrer. Les performances analytiques en terme de

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Chapitre I

limites de dtection et de quantification ne sont pas indiques sur ce tableau car elles
dpendent du volume inject et sont diffrentes si lon considre des solutions talons ou des
matrices plus complexes dont le traitement conduit la concentration pralable des
composs.

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Chapitre I

Tableau 1-4 : Exemples dapplications de la CPL-SM lanalyse de pesticides.

Conditions analytiques
Nombre
Familles chimiques Pesticides Rf.
tudi Source Nature de la phase Dbit Colonne
Mode
d'ionisation mobile l/min analytique

Atraton, atrazine,
Triazines, phnylures, diuron, linuron,
Mthanol/ eau (10 Zorbax SB-C18,
aryloxyacides, mtolachlor,
organophosphors,
8
diazinon,
ESI +/- mM de formate 120 50 *4,6mm; [54]
d'ammonium) 3,5 m
chloroactamides dichlorprop,
dinitro-ortho-crsol

Actonitrile/ formate
Kromasil C8
d'ammonium/ 15
Ammoniums quaternaires 1 Chlormquat ESI + mM d'acide
150 200*2,1 mm ; [106]
5m
heptaflurobutyrique

Aryloxyacides, carbamates, 2,4 D, aldicarbe,


strobilurines, carbamates carbendazime, Hypersil C18
Mthanol/ eau (10 500 puis
benzimidazoles, carbofuran, BDS,
hydroxyanilides, imidazoles,
38
imazalil, kresoxim-
ESI +/- mM dactate division, [107]
100*4,6 mm;
d'ammonium) D = 20
strobilurines, triazoles, mthyl, oxamyl, 3 m
azomthines, pyridines pyrimethanil ...
Discovery
Actonitrile/ eau
C18,
Triazoles 1 Paclobutrazol ESI + acidifis 0,01 % 300 [108]
50*2,1 mm ;
d'acide formique
5 m
Carbendazime,
Discovery
Benzimidazoles, azoles, Thiabendazole,
C18,
carbamates, phnylures, 17 Epoxiconazole, ESI +/- Mthanol/eau 500
150*3 mm ;
[109]
benzoylphnyl-ures flusilazole,
5 m
imazalil

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Chapitre I

Conditions analytiques
Nombre
Familles chimiques Pesticides Rf.
tudi Source Nature de la phase Dbit Colonne
Mode
d'ionisation mobile l/min analytique

Dichlorane,
Drivs nitrs, triazoles, flutriafol, Luna C18,
biphnyls, imidazoles, 5 prochloraze, APCI - Mthanol/eau 600 250*4,6mm ; [105]
thiophosphates tolcofos mthyle, o- 5 m
phnylphnol

Strobilurines, carbamates, Azoxystrobine,


triazoles, morpholines, benfuracareb,
diphnyl-thers, quinazolines, bromucazole,
hydroxyanilides, difeconazole, Synergy
phnoxypyrazoles, dimethomorphe, Actonitrile/eau (0,1 polar-RP
carboxamides,
24
fenazaquin,
ESI + % dacide formique)
250 [53]
150*2 mm;
neonicotinodes oxadiazines, imidacloprid, 4 m
pyridazinones, pyridabne,
benzohydrazides, trifloxystrobine,
pyrazolamides tetraconazole

Zorbax SB-
Mthanol/eau 900 puis
C8,
Dinitroanilines 1 Oryzalin ESI - acidifis 0,1 % division
75 *4,6mm;
[110]
dacide actique D = 200
3,5 m
Methamidophos,
Organophosphors, aldicarbe,
Mthanol/ Eau
carbamates, imidazoles, carbendazime, Genesis C18,
acidifis par acide
carbamates benzimidazoles, 19 methomyl, imazalil, ESI + actique et 20 mM
300 100*3 mm; [111]
phnylures, pyridines, linuron, 4m
actate d'ammonium
hydroxyanilides pyrimethanil,
benfuracarbe.

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Chapitre I

Conditions analytiques
Nombre
Familles chimiques Pesticides Rf.
tudi Source Nature de la phase Colonne
Mode Dbit l/min
d'ionisation mobile analytique
Acetamipride,
aldicarbe,
bendiocarbe,
Benzimidazoles, carbamates, Mthanol/ eau (10 Genesis C18,
32 et 25 butocarbaxime,
N-mthylcarbamates,
mtabolites carbaryl,
ESI +/- mM formate 300 100*3 mm; [93]
organophosphors d'ammonium) 4m
carbendazime,
carbofuran,
fenoxycarb
Restek allure
Actonitrile/eau (10
C18,
Benzohydrazide 1 Mthoxyfenozide ESI - mMd actate 800
50*3,2mm;
[112]
d'ammonium)
5 m
Acetamipride,
aldicarbe,
benfuracarbe, Nucleosil
Mthanol/eau
Carbamates, conazole, carbaryl, 100-5 C18
pyrimidine, benzimidazoles
74
carbendazime,
ESI + acidifis 0,1 % en 300
HD, 70 * 2
[113]
acide formique
carbofuran, mm
fenoxycarbe,
imazalil

Imidacloprid,
carbendazime,
Carbamates, neonicotinodes, Luna C18,
thiabendazole,
carbamates benzimidazoles, 6
mthiocarbe,
APCI + Mthanol/eau 800 150*4,6mm ; [114]
imidazoles, carboxamides 5 m
imazalil,
hexythiazox

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Chapitre I

Conditions analytiques
Nombre
Familles chimiques Pesticides Rf.
tudi Source Nature de la phase Colonne
Mode Dbit l/min
d'ionisation mobile analytique
Carbamates, phnylamides,
Aminocarbe,
phnylures,
oxamyl, methomyl,
spiractalamines,
dimethoate,
phnylaminopyrimidines, Atlantis dC18,
propoxur,
strobilurines, 43
carbofuran,
ESI + Actonitrile/eau 200 150*2,1; [43]
benzohydrazides, 3 m
carbaryl,
aryloxyacides, oxadiazines,
isoproturon, diuron,
triazines, morpholines,
atrazine.
pyridines
methamidophos,
Mthanol/eau
acphate, Alltima C18,
Organophosphors, acidifis par de
carbamates
144 omethoate, asulam, ESI + l'acide formique
300 150*3mm; [115]
tradimefon, 5 m
5mM
tridemorphe.

Carbamates, triazines, Aldicarbe, atrazine,


organophosphors, carbaryl,
strobilurines, carbamates carbofuran,
benzimidazoles, dichlorvos, dodine,
phnylaminopyrimidine, fenoxycarb,
pyrthrinodes, fenpropimorph, Mthanol/ eau (10 Hypurity C18,
57 et 16
organothiophosphates,
mtabolites
fenpyroximate, ESI + mM dactate 200 150*2,1mm ; [116]
triazoles, phnoxypyrazoles, imazalil, d'ammonium) 5 m
morpholines, oxyactamides, imidacloprid,
thiazolidonones, imidazoles, isoproturon,
nitromthylnes, phnylures, fenamiphos,
phnylamides, azomthines, oxamyl,
pyridazines, spiractalamines hexythiazox

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Chapitre I

Conditions analytiques
Nombre
Familles chimiques Pesticides Rf.
tudi Source Nature de la phase Colonne
Mode Dbit l/min
d'ionisation mobile analytique
Methamidophos,
Organophosphors,
omethoate,
carbamates, triazines,
aldicarbe,
carbamates benzimidazoles,
thiadendazole,
nitromthylnes, nicotinodes,
oxamyl, methomyl,
imidazoles, sulfonylures, Mthanol/eau
imidaclopride, Atlantis C18,
spiroactalamines, 43 et 9 acidifis 0,01 %
phnylures, acides mtabolites
actamipride, ESI + par de l'acide
200 100*2,1; [37]
thiaclopride, 5 m
cinnamiques, formique
propoxur,
phnylaminopyrimidines,
carbofuran,
benzoylures, macrolides,
chlorsulfuron,
aryloxyacides, phnylthers,
atrazine,
thiazolidonones
isoproturon.

Aryloxyacides, carbamates,
sulfonylures, triazines, 2,4 D, aldicarbe,
strobilurines, benzonitriles, carbendazime,
carbamates benzimidazoles, carbofuran,
cyclohexanones, dimethoate, diuron,
phnylaminopyrimidines, fenoxycarbe,
Mthanol/eau 5mM Aqua C18,
hydrazides, benzoylures, ioxynil, linuron,
phnylures, hydroxyanilides,
108
methomyl, oxamyl,
ESI +/- de formate 200 50*2mm ; [117]
d'ammonium 5 m
morpholines, phnylpyrroles, pirimicarbe,
organophosphors, pymetrozine,
imidazoles, oxadiazines, quinmerac,
ures, oxazoles, spiroxamine,
phnylamides,pyridazines, vamidothion
pyridines, spiroactalamines,

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Chapitre I

4.5. Effets de matrice

La CPL/SM est une mthode slective en mode SIM ou MRM, seul le signal dintrt
est effectivement enregistr, laissant de ct les informations provenant dautres composs.
Ceci donne lillusion que les autres substances qui co-luent avec lanalyte cibl ninterfrent
pas sur les signaux observs. Cependant malgr le fait quils ne soient pas cibls lors des
acquisitions, ces composs peuvent interfrer sur les rponses [118]. En effet, il est
indispensable de prendre en compte les effets de matrice et ce particulirement lorsque des
chantillons complexes sont analyss tels que les aliments [18]. Ces effets correspondent un
changement de lefficacit de lionisation des composs dintrt en prsence dautres
composs [118-120]. Ainsi, si certaines tudes se basent sur les performances de la CPL-SM
pour ngliger les tapes de traitement de lchantillon, la simplification des tapes de
purification peut mener des extraits sales contenant de nombreuses substances co-extraites
[18]. En effet, il est aujourdhui reconnu que les performances de la CPL-SM mettant en
oeuvre une source API est considrablement influence par la composition du liquide entrant
dans la source dionisation. Il sagit non seulement de la nature et de la quantit de la phase
mobile mais aussi de celles de la matrice de lchantillon. Les substances co-extraites
prsentes dans lchantillon inject peuvent engendrer de srieux problmes de quantification
quand ils co-luent avec les composs dintrt [55]. Le principal problme rencontr lors
danalyse des chantillons complexes par CPL/SM est la survenue des phnomnes de
suppression ou dexaltation des signaux observs [18, 119] et dont les mcanismes exacts ne
sont pas encore totalement matriss [55, 118, 119].

Par ailleurs, ce phnomne est plus marqu lors de lutilisation de source ESI [18,
120]. Par exemple dans le domaine de lanalyse de pesticides dans les eaux, la prsence
dacides humiques entrane une suppression du signal de pesticides polaires lors de lanalyse
par CPL/ESI-SM [121-124] alors que les composs interfrents ninfluent pas de manire
significative sur la sensibilit lors de lanalyse par CPL/APCI-SM [51].

Une tude mene par lquipe dsterdahl a mis en vidence la suppression du signal
lors de lanalyse de cinq rsidus de pesticides dans des extraits de fraises : lthiofencarb-
sulphoxide, la carbendazime, le thiabendazole, le propoxur et le carbaryl [93]. La figure 1-18
illustre le phnomne observ.

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Chapitre I

Temps en minutes
Figure 1-18 : Exemple de suppression dions de certains pesticides dans un extrait de fraises 0,05
mg/kg (0,125 g/mL) (bleu volontairement dcal de 0,3 min sur le graphe) par superposition dune
injection dune solution talon la mme teneur (rouge) et dune injection dun extrait vierge de
fraises (vert) (CPL/ESI(+)SM)
(1 : thiofencarb-sulphoxide, 2 : carbendazime, 3 : thiabendazole, 4 : propoxur, 5 : carbaryl) [93] .

Sur les cinq pesticides concerns par ltude, seuls deux subissent une dcroissance
notable du signal lors de linjection de lextrait de fraise par rapport linjection dune
solution talon. Ce comportement souligne le fait que le phnomne de suppression est
spcifique un compos et ninflue pas sur tous les composs lors de la mise en uvre dune
mthode multi-rsidus. Il est ainsi impossible dutiliser leffet de matrice observ pour un
compos pour prvoir ceux pouvant tre rencontrs pour dautres composs. Ainsi, une
diminution de 10 50 % du signal a t observe pour la carbendazime et le thiabendazole, le
phnomne est ainsi rellement compos-dpendant [93, 119].

En outre, il est rapport que le phnomne observ nest pas toujours identique. Un
pesticide qui subit une suppression de signal lors dune injection peut tre affect par une
augmentation de signal lors de linjection suivante [93].

Toutefois, dans le but de minimiser les effets de matrice, les solutions les plus
efficaces sont dune part, un traitement de lchantillon appropri permettant dliminer le
maximum dinterfrents et aboutissant un extrait le plus propre possible [119, 125, 126] ou
dautre part, le changement des conditions chromatographiques dans le but de sparer au
maximum les composs [126]. Cette dernire solution peut tre compromise du fait que la
tendance actuelle est au dveloppement de mthodes multirsidus combinant un gain de
temps et de cot.

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Chapitre I

5. Conclusions

La CPL/SM a permis un gain en sensibilit et par consquent une amlioration des


limites de dtection par rapport aux autres couplages possibles (UV, fluorescence). Ce facteur
est dune importance majeure dans le domaine de lanalyse de rsidus de pesticides compte
tenu des exigences rglementaires de plus en plus strictes. Le dveloppement de mthodes
multirsidus qui permettent le contrle dun grand nombre de pesticides en une seule analyse
est la stratgie la plus commune. Cependant, les diffrentes classes et les proprits physico-
chimiques rendent difficiles le dveloppement de mthodes qui couvrent un grand nombre de
composs en une seule tape. Une mthode multirsidus se doit dtre sensible, slective,
exacte, prcise, de cot modr et applicable une grande varit de matrices. La CPL/SM
sest impose comme une technique analytique de choix dans le but de quantifier
simultanment le maximum de pesticides existants qui prsentent en gnral des proprits
physico-chimiques trs diverses.

Toutefois, malgr une sensibilit et une slectivit plus leve que dautres techniques
analytiques et compte tenu des risques deffets de matrices, la CPL/SM ne permet pas de
dterminer directement un grand nombre de pesticides ltat de traces dans les matrices
aqueuses ou alimentaires aux niveaux requis par la lgislation. Il est donc ncessaire de mettre
en uvre une procdure adquate de traitement de lchantillon consistant en lextraction des
composs dintrt et la purification des extraits obtenus.

I.4. Extraction des pesticides dune matrice solide


1. Interactions analytes-matrice solide

Lors de ltape d'extraction de matrices solides, les composs sont librs de la matrice
laide dun solvant et via un mcanisme chimique et/ou mcanique puis transfrs dans le
milieu d'extraction. Les tapes suivantes de lanalyse ne pourront en aucun cas compenser une
extraction incomplte et/ou une perte ventuelle des analytes lors de cette tape. Le nombre et
la varit des proprits physico-chimiques des composs recherchs rendent trs complexe
ltablissement dune mthode dextraction [127]. La difficult augmente dune part avec le
nombre de composs cibls et dautre part avec la diversit des interactions analytes/matrice.
En 1993, Pawliszyn a propos un modle permettant de dcrire les diffrentes tapes du

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Chapitre I

processus dextraction [128]. Ce modle a t repris plus rcemment en 2000 par Bjrklund
(Figure 1-19) [129]. Bien quil concerne lextraction de composs de sols ou de particules de
sdiments, il explicite cependant de faon claire les diffrentes tapes dun processus
dextraction de matrices solides. Dans ce modle, les particules de la matrice sont
reprsentes par un noyau recouvert dune couche organique poreuse et les composs
dintrt sont considrs comme tant absorbs sur ce noyau.

Couche organique

Noyau

Figure 1-19 : Reprsentation schmatique des tapes dextraction [129].

Lextraction des composs seffectue gnralement en diffrentes tapes [129] :


1) pntration du solvant dans la matrice,
2) dsorption de lanalyte des sites actifs de la matrice,
3) diffusion travers la couche organique,
4) solubilisation de lanalyte par le solvant linterface matrice/solvant,
5) diffusion du solvant dans les pores de la matrice,
6) diffusion travers la couche de solvant extrieure la matrice,
7) transfert du solut.

Les tapes dextraction sont donc principalement constitues par la dsorption du


compos de la surface du noyau, par la diffusion du compos dans la couche organique et par
la solubilisation du compos dans le solvant. Les phnomnes limitants sont diffrents selon
la nature des interactions entre le compos et la matrice, le solvant et la mthode dextraction
utiliss.

- 60 -
Chapitre I

2. Mthodes dextraction de matrices solides


2.1. Mthodes dextraction classiques

Les extractions de matrices solides sont bases sur le partage des composs, entre la
phase liquide et la matrice solide, qui se produit lorsque les analytes passent de la matrice de
l'chantillon vers le solvant judicieusement slectionn. Diffrentes techniques classiques sont
disponibles telles que les ultrasons et le Soxhlet.

Lextraction de type Soxhlet constitue lune des techniques dextraction dchantillons


solides les plus anciennes. Dveloppe la fin du XIXme sicle, elle est considre comme la
mthode universelle pour lextraction de composs de matrices solides et reste utilise en
routine dans de nombreux laboratoires [129]. Le Soxhlet permet le traitement de solides de
toutes tailles avec des solvants en phase liquide. La matrice solide est introduite dans une
cartouche de cellulose fixe sur un rservoir de solvant qui est surmont d'un rfrigrant. Le
solvant chauff est vaporis puis condens au niveau du rservoir et reste en contact avec le
solide. Quand le volume de solvant condens dans le rservoir atteint un certain niveau, le
solvant repart dans le chauffe ballon par un phnomne de siphon pour tre nouveau
recondens tout en entranant les composs dintrt dans le ballon o ils seront finalement
concentrs aprs plusieurs cycles dextraction. Cette technique permet lobtention de
rendements satisfaisants pour de nombreux composs et a t normalise par lagence
amricaine de protection de lenvironnement (EPA, Environmental Protection Agency).

Un autre type de mthodes dextractions classiques est lextraction aux ultrasons qui
est caractrise par un apport nergtique. Elle a t applique pour lextraction de pesticides
de diffrents chantillons environnementaux [130]. Lutilisation dultrasons conduit
l'enlvement des contaminants de la surface [131]. Toutefois, lefficacit de cette technique
pour aller pntrer la matrice reste limite.

Ces mthodes dextraction classiques prsentent quelques inconvnients. Elles sont


particulirement laborieuses et donc prdisposes des erreurs systmatiques et alatoires. De
plus, elles consomment une grande quantit de solvants organiques [132, 133]. Or,
lvaporation dun grand volume de solvant afin de concentrer le compos avant sa
dtermination augmente la dure globale de traitement de lchantillon [27].

- 61 -
Chapitre I

Ainsi, la tendance ces dernires annes est la rduction de la quantit de solvants


utiliss du fait de leur toxicit et nocivit pour lenvironnement [134, 135]. Les paramtres
prendre en compte lors du dveloppement dune nouvelle procdure de prparation de
lchantillon dans le domaine de lanalyse de rsidus de pesticides sont : la rduction du
temps de prparation, lautomatisation possible, la quantit dchantillon ncessaire et
disponible, la consommation de solvants, la fiabilit, la facilit dapplication, la robustesse, la
scurit, le faible cot, lapplication de nombreux pesticides, des rendements les plus
proches possible de 100 % et une augmentation de la slectivit afin dextraire au minimum
les interfrents potentiels et dliminer des effets de matrices indsirables [7, 136].

Par consquent, cest ainsi que de nouvelles mthodes ont vu le jour comme
lextraction par un fluide supercritique, lextraction sous champ micro-ondes et lextraction en
solvant chaud pressuris. Leur similitude essentielle est lutilisation de conditions qui
permettent dacclrer le processus dextraction. Ces techniques prsentent galement
lavantage de minimiser le volume de solvant dextraction et dtre automatisables [129, 137-
140].

2.2. Mthodes rcentes dextraction de matrices solides

Extraction par les fluides supercritiques

Lextraction par les fluides supercritiques a t dveloppe au dbut des annes 1980.
Ce type dextraction seffectue en prsence dun fluide supercritique qui possde des
proprits intermdiaires entre celles des liquides et celles des gaz. Lextraction par fluide
supercritique (Supercritical Fluid Extraction, SFE) utilise un fluide qui va tre port une
temprature ou une pression suprieure son point critique. En SFE, le fluide sous pression
est introduit dans une cellule, contenant lchantillon, chauffe la temprature dfinie de
manire tre dans ltat supercritique. Le fluide supercritique est alors dlivr dans la cellule
dextraction. La rcupration des soluts peut seffectuer aprs dtente du fluide supercritique
de deux faons diffrentes : soit le fluide aprs dtente barbote dans un solvant, soit il traverse
une phase solide qui pige les soluts qui seront par la suite lus par un faible volume de
solvant. Les paramtres influents en SFE sont la nature du fluide, son dbit et les consignes de
tempratures et de pressions.

- 62 -
Chapitre I

Les fluides supercritiques ont une faible viscosit et un coefficient de diffusion lev
compars aux liquides [28, 141]. Ils peuvent par consquent pntrer dans les pores dune
matrice solide de manire plus efficace quun solvant liquide. Les transferts de masse et donc
les extractions sont plus rapides [141].

Parmi les fluides pouvant tre utiliss, le dioxyde de carbone (CO2) est apparu comme
lun des plus attrayant du fait que son tat est facilement accessible (P = 73 bar et T = 32C).
Il est par ailleurs non toxique, quasiment-inerte, facile vaporer dans les conditions
ambiantes et disponible un haut degr de puret des tarifs raisonnables. Le CO2 permet des
extractions slectives et conduit des cintiques plus rapides que la majorit des liquides.
Cependant du fait de sa faible polarit, le CO2 ne permet pas dextraire les composs polaires
et nest donc pas adapt lanalyse multirsidus de pesticides couvrant une large gamme de
polarit [142, 143]. En SFE, le pouvoir solvant du fluide peut tre modifi en changeant la
temprature et /ou la pression ou par lajout dagent modificateur. Par ailleurs, si lajout de
modificateur au fluide supercritique, comme le mthanol est indispensable lextraction de
pesticides polaires, il dtriore la slectivit en augmentant la co-extraction dinterfrents. Il
est ainsi difficile dextraire des composs couvrant une large gamme de polarit et de
proprits physico-chimiques dans des conditions donnes. Diffrentes conditions
dextraction sont ncessaires au dveloppement dune mthode multirsidus de pesticides.
Laugmentation de la dure de lextraction induit par consquent une diminution de lintrt
dune telle technique. Il est effectivement difficile de trouver des conditions optimales pour
des composs trs diffrents.

Le principal avantage de la SFE est la possibilit d'obtenir des extraits propres sans la
ncessit de recourir systmatiquement une tape de purification. Par ailleurs, la rduction
de la consommation de solvant organique (nulle dans de nombreux cas) et du temps
dextraction sont deux des avantages de cette technique [27]. De plus, elle peut tre applique
des composs thermiquement instables comme les carbamates en slectionnant un fluide de
faible temprature critique [144]. Ainsi, lextraction de lipides et la dtermination de la teneur
en graisses de divers aliments est lune des applications les plus rpandues de la SFE dans le
domaine de lagroalimentaire. Une revue incluant les diverses instrumentations disponibles et
faisant tat des diffrentes applications a t crite par Smith en 1999 [145] et complte plus
rcemment par King [146].

- 63 -
Chapitre I

Plusieurs applications utilisant la SFE pour l'extraction de pesticides des aliments ont
t publies et certaines d'entre elles sont prsentes dans le tableau 1-5. Le CO2 est
effectivement utilis comme fluide supercritique. Les conditions opratoires en terme de
pression et de temps sont trs disparates. Les extractions se font des tempratures comprises
entre 40 et 70C. Des rendements dextractions satisfaisants sont gnralement obtenus pour
les composs non polaires ou trs faiblement polaires tels que les organophosphors et les
organochlors. Cependant, pour les pesticides trs polaires et spcialement les mtabolites, un
modificateur comme par exemple leau ou le mthanol doit tre ajout au CO2 pour
augmenter son pouvoir solvant. Si lajout de modificateur nest pas effectu, lextraction des
pesticides relativement polaires comme le mthamidophos ou lomthoate est difficile. Dans
le cas de ltude mene par Hajsolva et son quipe, les rendements dextraction de ces deux
composs du bl par SFE sont respectivement gaux 16 et 27% alors que les autres
composs sont extraits plus de 70 % [148]. Ainsi, il est difficile de couvrir une large gamme
de polarit avec cette technique dextraction. La SFE est trop slective pour la problmatique
de ltude. Une tape de purification nest pas toujours ncessaire comme le montre le tableau
1-5.

Cette technique prsente ainsi un certain nombre dinconvnients, dune part


loptimisation dpend fortement de la matrice et dautre part une mise au point longue est
ncessaire lors de lajout dun modificateur appropri au fluide pour lextraction de composs
polaires. Les applications existantes dans le domaine du suivi de pesticides dans les matrices
alimentaires ne mettent pas en vidence lefficacit de cette technique lanalyse de
composs ayant des proprits physico-chimiques trs diffrentes notamment en terme de
polarit.

- 64 -
Chapitre I

Tableau 1-5 : Exemples dapplications dextraction de diffrentes matrices par SFE.

Conditions opratoires
Nombre de Purification
Matrices Classes chimiques (fluide, pression, temprature, Rendements Rf.
composs avant analyse
dure de lextraction)
CO2 (mthanol 10%), 200 bars,
Sols 9 Organochlors non 91 107 % [147]
50C, 30 min

Organophosphors, organochlors,
>70 % sauf
imidazole, phnylamide, organothio-
Crales 36 CO2, 123 bars, 50C, 3 min non omthoate, [148]
phosphor, pyrthrinodes,
mthamidophos
phthalimide, isophtalonitrile

Bl et mas 10 Organophosphors CO2, 245 bars, 70C, 35 min oui 85 9% [149]

Fruits 4 Carbamates, aryloxyacides CO2, 333 bars, 55C, 25 min non 85 93 % [150]

Organochlors, organophosphors,
Pommes 92 CO2, 189 bars, 45C, 11 min non > 60 % [151]
organonitrs, pyrthrinodes

Farine de bl 7 Organophosphors CO2, 207 bars, 60C, 60 min oui - [152]

Carbamates benzimidazoles,
Concombres,
imidazoles, dicarboximides
pommes de terre,
27 thiazolidinones, ures, triazoles, CO2, 294 bars, 40C, 40 min oui 25 103 % [153]
pommes, radis,
benzohydrazides, benzoylures,
bananes
phnoxypyrazole

- 65 -
Chapitre I

Lextraction assiste par champ micro-ondes

Une autre alternative aux techniques traditionnellement utilises est lextraction


assiste par champ micro-ondes (Microwave Assisted Extraction, MAE). Elle a t dcrite
pour la premire fois en 1986 [154]. Compare la SFE, la MAE est plus facile optimiser,
les principaux paramtres prendre en compte tant le solvant, la temprature, le temps et la
puissance des micro-ondes.

Cette technique consiste chauffer rapidement le solvant dextraction qui est au


contact de lchantillon par un champ micro-ondes [154]. Contrairement aux techniques
classiques de chauffage par convection, lutilisation des micro-ondes implique une interaction
directe entre un rayonnement lectromagntique et la matire. Le chauffage par micro-ondes
dun produit rsulte ainsi de la conversion en chaleur de lnergie dune onde
lectromagntique au sein dun milieu. Le champ micro-ondes utilis en MAE entrane une
augmentation de la temprature du solvant et de l'chantillon par mise en rotation des diples
lectriques des molcules de solvant. Le chauffage est alors localis et par consquent plus
rapide quun chauffage par convection. Il existe deux types dappareillage permettant la mise
en uvre de la MAE : le systme ferm et le systme ouvert.

En MAE en systme ouvert, lextraction seffectue pression atmosphrique dans un


rcipient surmont dun rfrigrant comme pour le Soxhlet. Lamlioration du systme repose
sur lajout du champ micro-ondes. Lchantillon peut tre plac dans une cartouche de
cellulose, une tape de filtration nest donc pas ncessaire car il suffit dgoutter la cartouche
pour rcuprer le solvant. En revanche, la MAE en systme ferm est effectue dans une
cellule dextraction ferme et tanche avec un matriau transparent aux micro-ondes. Certains
systmes permettent le contrle de la temprature et de la pression. Toutefois, des tapes de
centrifugation et de filtration sont ncessaires avant lanalyse.

La MAE s'est avre tre une alternative intressante de l'extraction au Soxhlet. Elle
maintient en effet les avantages de ce type dextraction classique et permet par ailleurs den
surmonter les inconvnients en acclrant le processus et en rduisant la pollution
environnementale grce une plus faible quantit de solvant utilise [155, 156]. Toutefois, le
solvant choisi doit absorber les radiations micro-ondes.

- 66 -
Chapitre I

Cette technique a t compare au soxhlet lors de lextraction de rsidus dun pesticide


organophosphor, le fenitrothion, prsent dans les haricots. Lefficacit de lextraction par les
deux techniques sest avre similaire avec des rendements suprieurs 84 %. Cependant, un
gain de temps significatif a t obtenu lors de lextraction assiste par champ micro-ondes :
lextraction au soxhlet a en effet t effectue en vingt-quatre heures alors que le temps
ncessaire en MAE est de seulement six minutes. Par ailleurs, une rduction du solvant a
galement t observe lors de la MAE qui ne ncessite que dix millilitres contre deux cent
millilitres avec le soxhlet [156].

Les principaux avantages de ce type dextraction sont l'automatisation savoir, la


possibilit dextraire simultanment en systme ferm des chantillons diffrents [157]. Les
inconvnients de cette technique sont : la ncessit dune tape manuelle de filtration ou de
centrifugation aprs extraction, labsence dabsorption de lnergie micro-ondes par certains
solvants impliquant lutilisation de co-solvants possdant un diple lectrique [17]. Plusieurs
applications utilisant la MAE pour l'extraction de pesticides des aliments ont t publies et
certaines d'entre elles sont rsumes dans le tableau 1-6.

Ce tableau met en vidence la diversit des conditions opratoires. Le choix du solvant


est fondamental pour lobtention dune efficacit dextraction optimale. En effet, selon les
solvants utiliss en MAE, llvation de la temprature ne sera pas la mme. Lorsque lhexane
est utilis, il peut tre mlang un autre solvant car il ne possde pas de moment dipolaire et
ne chauffe pas. En revanche, lorsquil est mlang un solvant soluble comme lactone, le
phnomne de chauffage suite labsorption des micro-ondes se produit. Toutefois, pour
certaines applications et notamment pour limiter la dgradation de composs thermo-
dgradables, certains solvants transparents aux micro-ondes sont utiliss.

Par ailleurs, les dures dextraction sont relativement courtes. En gnral, dix minutes
dextraction suffisent obtenir une efficacit suffisante. Ce facteur constitue lun des
avantages de cette technique. Le tableau met en vidence quune tape de purification reste
souvent ncessaire avant lanalyse proprement dite.

- 67 -
Chapitre I

Tableau 1-6 : Exemples dapplications dextraction de diffrentes matrices par MAE.

Conditions opratoires (solvant,


Purification
Matrices Classes chimiques Pesticides tudis puissance, dure, temprature, Rendements Rf.
avant analyse
nombre de cycle)

Sols Organophosphors Bromophos, Parathion Mthanol, 1140 W, 0,5 min, 7 cycles non 100 0,2 % [154]

4,4' DDT; 2,4' DDD; 4,4' DDD; Tolune/Eau (10:1, v:v), 1100 W,
Sols Organochlors oui 99 1% [158]
4,4'DDT 12 min, 1 cycle

Sols Triazine Atrazine Eau, 600 W, 4 min, 1 cycle non 91,5 3,4 % [159]

Actone/Hexane (1:1, v:v), 900 W,


Haricots Organophosphor Fenitrothion oui 90 2 % [156]
0,5 min, 1 cycle

-HCH;-HCH;-HCH(lindane);-
HCH; heptachlor;heptachlor
Graines de epoxide;dieldrine, aldrine; endrine; Actonitrile/Eau (95:5, v:v), 1200 W,
Organochlors oui 80 12 % [160]
ssame endosulfan I; endosulfan II; 10 min, 100C, 1 cycle
endosulfan sulfate; p,p-DDT; p,p-
DDD; p,p -DDE

97,4 8 % ; 104
Imazethapyr et deux mtabolites :
Plantes Imidazolinone Eau, 1000 W, 3 min, 125C, 1 cycle oui 13 % et 101 [161]
hydroxyl et glyqu
5%

Organophosphors, Chlorpyriphos, chlorthalonil,


Laitues et isophthalonitrile, diazinon, permthrine, Ether de ptrole/ 2-propanol (2:1,
oui 60 250 % [162]
tomates pyrthrinodes, mthoxychlore, azinphos-mthyl, v:v), 500 W, 10 min, 100C
organochlors, dacthal
Chlorpyriphos, parathion mthyl,
Peau Organophosphors et Hexane/Actone (1:1, v:v), 475 W, 93 101
fenamiphos, mthidathion et non [163]
doranges triazine 9 min, 90C 1 3%
atrazine

- 68 -
Chapitre I

2.3. Extraction acclre en solvant chaud sous pression

Une autre contribution rcente et innovante aux techniques d'extraction est lextraction
acclre en solvant chaud pressuris : lASE (Accelerated Solvent Extraction) est le nom
donn cette technique par la socit DIONEX, premier fabricant qui la brevete. Elle est
galement connue sous diffrentes appellations Pressurised Liquid Extraction, PLE ,
Pressurised Fluid Extraction, PFE , Pressurised Solvent Extraction, PSE , High-
Pressure Solvent Extraction, HPSE , High-Pressure, High Temperature Solvent Extraction,
HPHTSE , Pressurised Hot Solvent Extraction, PHSE ou encore Subcritical Solvent
Extraction (SSE) . Par ailleurs, quand leau est utilise comme solvant dextraction dautres
noms lui sont donns : SuperHeated Water Extraction (SHWE) , Subcritical Water
Extraction (SWE), Hot Water Extraction (HWE) , Pressurised Hot Water Extraction
(PHWE) ou High Temperature Water Extraction (HTWE) .

1. Principe

Lextraction en solvant chaud sous pression a t introduite dans les annes 90 aprs
lextraction par fluides supercritiques une priode o les techniques dextraction qui mnent
la rduction de la consommation de solvant et du travail manuel, suscitaient un intrt
croissant. La rduction du volume de solvant ncessaire lextraction, lefficacit de
lextraction et son automatisation sont les principaux avantages de cette technique. Lun de
ces inconvnients majeur est son cot dachat lev. Elle a significativement amlior
lextraction dchantillons solides ou semi-solides par des solvants liquides conventionnels
des tempratures et pressions leves. En effet, lutilisation combine de pressions et de
tempratures leves fournit un procd d'extraction plus rapide qui ncessite de plus petites
quantits de solvants par rapport au Soxhlet, ce qui permet galement lobtention dextraits
plus concentrs [129, 164]. Le temps dextraction ncessaire est pratiquement indpendant de
la masse de l'chantillon et l'efficacit de l'extraction dpend principalement de la temprature
et de la nature du solvant. Une reprsentation schmatique de ce type dappareillage est
prsente sur la figure 1-20. Le systme est compos dune cellule dextraction en acier. Les
programmes de temprature et de pression paramtrs sont maintenus leur valeur spcifique
laide dune pompe et dun four (Figure 1-20). Il existe deux modes dextraction : le mode
statique et le mode dynamique. Leur principale diffrence repose sur le fait quen mode

- 69 -
Chapitre I

dynamique, le solvant dextraction est continuellement pomp et passe en continu travers la


cellule dextraction [129].

Pompe

Solvant(s)

Vanne de purge

Cellule
dextraction

Vanne
statique

Flacon de
Gaz rcupration

Figure 1-20 : Schma dun systme dextraction en solvant chaud pressuris (Dionex).

Aprs avoir charger lchantillon dans la cellule dextraction, la majorit des tudes
seffectue par alternance de modes statiques et dynamiques ce qui implique les tapes
suivantes :
le remplissage de la cellule avec le solvant dextraction (solvant unique ou mlange),
le chauffage et la pressurisation de la cellule aux valeurs choisies,
lextraction de lchantillon pendant un temps donn (extraction statique),
le transfert du solvant vers le flacon de rcupration et le renouvellement du solvant au
contact de lchantillon,
la purge des rsidus de solvant dans lchantillon vers le flacon de rcupration
laide dun gaz appropri [129].

De manire plus dtaille, une fois que la cellule dextraction contenant lchantillon est
mise en place dans le four, le solvant est ajout et la cellule pressurise. Lorsque les consignes
de pression et temprature sont atteintes, ltape dextraction statique se poursuit durant
laquelle les analytes vont passer de lchantillon vers le solvant. Son temps varie selon les
applications. A la fin de cette tape statique, la vanne est ouverte et le solvant est envoy vers

- 70 -
Chapitre I

le flacon de rcupration. Du solvant frais, exempt de composs dintrt, est alors ajout
pour finir dextraire lchantillon. Cette tape peut permettre damliorer le transfert de masse
et par consquent les taux de rcupration. Lintroduction du solvant frais augmente en effet
le gradient de concentration entre la solution prsente dans la cellule et la surface de
lchantillon. Plus le gradient de concentration est grand, meilleur est le transfert des
composs de la matrice vers le solvant dextraction selon les lois de diffusion de Fick. Le
solvant frais est ensuite limin jusquau flacon de rcupration laide dune purge avec un
gaz inerte comme lazote [129].

Cette technique dextraction ncessite certaines prcautions dutilisation. Tout dabord,


aprs remplissage de la cellule par lchantillon, le volume mort de la cellule doit tre rempli
par une matrice de prfrence inerte par rapport aux composs cibls (terre de diatome,
sulfate de sodium anhydre, billes de verre, sable ou hydromatrix).

La PLE est par ailleurs conseille par lEPA pour lextraction de sols et de dchets
solides, dun grand nombre de classes de composs organiques incluant des organochlors et
des organophosphors [17]. Son efficacit la rend applicable l'extraction simultane d'un
grand nombre de pesticides couvrant mme une large gamme de polarit. En effet, il est
possible dextraire un chantillon par diffrents solvants successifs sans pour autant intervenir
sur lchantillon. Cet aspect peut tre dun grand intrt pour notre problmatique qui inclue
des composs prsentant des proprits physico-chimiques trs varies. Par ailleurs, en plus
dtre automatisable, cette technique prsente lavantage dune possibilit de purification in-
situ. Ainsi, si la PLE est quasiment quivalente la MAE en systme ferm en terme de taux
de rcupration, la PLE prsente cependant lavantage que la rcupration du solvant (extrait)
soit effectue de manire automatique et que plusieurs cycles soient possibles avec diffrents
solvants.

Le tableau 1-7 prsente une comparaison de PLE aux techniques prcdemment


dcrites : Soxhlet, MAE et SFE.

- 71 -
Chapitre I

Tableau 1-7 : Comparaison des diffrentes techniques dextraction de matrices solides [165-167].
Techniques d'extraction
Soxhlet MAE SFE PLE
Investissement Faible Moyen Elev Elev
Temps : 3 - 48h Temps : 3 - 30 min Temps : 10 - 60 min Temps : 5 - 60 min
Echantillon : 1- 30 g Echantillon : 1-10 g Echantillon : 1- 30 g Echantillon : 0,4 - 30 g
Caractristiques Solvant d'extraction : 100 - 500 ml Solvant d'extraction : 10 - 40 ml Solvant organique : 2 - 20 ml Solvant d'extraction : 1 - 50 ml
Solvants organiques, eau et Solvants organiques, eau et Fluide supercritique : CO2
Solvants organiques, eau et mlange
mlange mlange majoritairement
Pas de filtration ncessaire Extraction rapide Extraction rapide Extraction rapide
Procdure connue/ Facilit Trs faible consommation de
Faible consommation de solvant Faible consommation de solvant
d'utilisation solvant
Solvant frais en contact avec Possibilit d'extraction
l'chantillon durant toute la dure simultane d'chantillons Systme automatis disponible Systme automatis disponible
de l'extraction diffrents
Avantages Hautes tempratures Tempratures d'extraction de 100
Plus d'un sicle d'exprience
d'extraction 200 C
Relativement slective par Couplage en ligne : SPE/CPL/SM
rapport aux interfrents de la quand l'eau est utilise comme
matrice solvant d'extraction
Pas de filtration ou de
Pas de filtration ncessaire
purification ncessaire
Dveloppement de mthode
Purification ncessaire Purification ncessaire fastidieux car de nombreux Purification ncessaire
paramtres sont considrer
Difficilement adaptable une
Inconvnients Temps d'extraction long Capacit d'absorption des micro- large gamme de composs sans
Dgradation de certains pesticides
ondes par le solvant d'extraction perte de slectivit, intrt
majeur de la technique
Refroidissement des cellules
Grande consommation de solvant
d'extraction lent

- 72 -
Chapitre I

2. Paramtres influents de la PLE

La difficult de lextraction des composs rside dans la diffrence de leurs proprits


physico-chimiques telles que leur poids molculaire, leur structure, leur solubilit, leur
polarit et leur diffrence de volatilit. Ainsi, plus les composs tudis sont diffrents
chimiquement, plus loptimisation de ltape dextraction est difficile. Les paramtres
dextraction sont alors dfinis par des compromis.

Les paramtres ayant un effet significatif sur le processus de la PLE et qui peuvent
tre optimiss sont principalement la nature du solvant d'extraction et la temprature. La
pression est, quant elle, considre comme une variable mineure du fait de sa plus faible
influence sur lefficacit de lextraction. Les solvants utiliss sont en effet habituellement
chauffs des tempratures excdant leurs points d'bullition pression atmosphrique.
Lapplication dune haute pression dans les cellules dextraction est alors ncessaire pour le
maintien ltat liquide des solvants dextraction [133]. Dautres paramtres variables comme
le temps d'extraction et le nombre de cycles d'extraction sont galement optimiser mais une
fois que les tempratures et les solvants ont t judicieusement choisis. Une autre alternative
est lutilisation de plan dexpriences pour lensemble des paramtres.

Solvant :

L'optimisation du processus d'extraction commence gnralement par un choix


appropri du solvant d'extraction qui est lun des paramtres les plus importants lors du
dveloppement dune mthode multirsidus et ce quelle que soit la technique dextraction [7].
Ce dernier doit en effet pouvoir solubiliser les composs d'intrt tout en rduisant au
maximum la co-extraction des autres composants de la matrice. Il est galement important de
tenir compte de sa compatibilit avec les tapes postrieures lextraction (purification et/ou
concentration de lextrait, analyse). Ainsi, le solvant d'extraction est dterminant pour la
slectivit et l'efficacit des extractions. Le choix du solvant est galement troitement li aux
caractristiques physico-chimiques des composs comme leur polarit et leur solubilit dans
les diffrents milieux. La polarit du solvant devant tre proche de celle des composs cibls,
les mlanges de solvants de polarits diffrentes fournissent gnralement des extractions plus
efficaces que les extractions solvant unique lorsque des composs de proprits physico-
chimiques trs varies sont tudis. Le risque encouru lors du dveloppement dune mthode

- 73 -
Chapitre I

multirsidus est que le nombre dinterfrents co-extraits augmente avec le nombre de


composs cibls. Ceci est dautant plus vrai lorsque les composs cibls couvrent une large
gamme de polarit. En gnral, les solvants habituellement utiliss lors des mthodes
dextraction conventionnelles, telle que lextraction au Soxhlet mnent une efficacit
identique lors de leur utilisation en PLE. Cependant, il doit toujours tre considr que leurs
proprits et en particulier leurs polarits et leurs miscibilits peuvent considrablement
changer selon les tempratures utilises. Par ailleurs, les proprits physico-chimiques de
nombreux solvants communs ne sont pas encore assez bien matrises aux tempratures et
pressions leves employes en PLE.

Ces dernires annes, lutilisation deau comme solvant dextraction a suscit un vif
intrt. Leau est gnralement employe en phase condense entre 100C et le point critique.
Lutilisation de ce solvant est plus propre, plus rapide, moins chre et plus respectueuse de
lenvironnement que les solvants conventionnels [139]. Sous pression, plus la temprature de
leau augmente, plus la polarit diminue entranant ainsi des extractions plus slectives
danalyte de plus faible polarit. Entre 100 et 200C, leau peut agir comme un solvant
moyennement polaire voire non polaire. Quelques revues scientifiques citant diffrentes
applications de cette technique ont t rdiges par Smith en 2002 [168] et plus rcemment en
2006 [169]. La majorit de ces applications concernent des matrices solides comme les sols et
incluent la dtermination dhydrocarbures aromatiques polycycliques, de
polychlorobiphnyles et de pesticides. Linconvnient principal de la SHWE pour lanalyse
de traces est que lextrait final obtenu est en solution aqueuse dilue et ncessite donc des
tapes complmentaires de concentrations avant analyse qui ne peuvent se faire par simple
vaporation [139]. De plus, des phnomnes dadsorption peuvent se produire quand leau est
nouveau temprature ambiante.

Lors du dveloppement dune mthode multirsidus de pesticides, le solvant le plus


appropri lextraction ne peut pas tre prdit par les analystes du fait de la diversit des
proprits physico-chimiques des composs pouvant tre tudis.

Temprature

Les hautes tempratures diminuent la viscosit du solvant liquide et permettent ainsi


la fois une meilleure pntration dans les particules de la matrice mais aussi une augmentation

- 74 -
Chapitre I

de lefficacit de lextraction [28, 133, 140]. De plus, elles amliorent la solubilit des
composs dintrt et favorisent leur diffusion la surface de lchantillon. Laugmentation
de la temprature a pour consquence une diminution de la tension de surface entre le solvant,
les composs et la matrice permettant ainsi au solvant de mouiller plus facilement
lchantillon. Les diverses interactions analyte-matrice de type forces de Van Der Waal's,
les liaisons hydrogne et les interactions diple-diple pouvant avoir lieu la surface de la
matrice sont affaiblies avec des tempratures leves. Cependant, si dun ct, lnergie
thermique amliore la dsorption des composs, en contre-partie, elle rduit la slectivit en
augmentant la co-extraction de composs interfrents issus de la matrice. Une tape de
purification est alors souvent ncessaire avant l'analyse chromatographique. Par ailleurs, des
tempratures leves, la dgradation thermique des composs est susceptible de se produire.

3. Exemples dapplications diverses matrices

La PLE a t compare au Soxhlet et lextraction aux ultrasons pour lanalyse de


vingt-huit pesticides de familles chimiques diffrentes (organophosphors, organochlors,
carbamates, chloroacetanilides, triazines) dans les sdiments. Toutes les extractions ont t
effectues avec le mme mlange de solvants, savoir, hexane et actone en proportions
quivalentes. Le temps dextraction au Soxhlet est de vingt-quatre heures, celui aux ultrasons
est de 10 minutes et la PLE de 5 minutes. Au-del, du gain de temps observ, lextraction la
plus efficace a t obtenue avec la PLE pour la majorit des composs avec des rendements
compris entre 63 et 146% et une moyenne de 111%. Le Soxhlet na pas permis une extraction
quantitative de certains composs comme la trifluraline, le diazinon, le dichlofenthion ou
encore le 2,4 DDE. Par ailleurs, des rendements trs faibles de lordre de 35 3,5% similaires
ceux obtenus aux ultrasons ont t obtenus pour le lindane contre 127 14% avec la PLE
[170]. Lefficacit de la PLE par rapport lextraction aux ultrasons a t confirme lors de
lanalyse de vingt-quatre pesticides de familles chimiques diffrentes (triazines, carbamates,
organophosphors, organochlors, phnylures, pyrthrodes, triazinones, ures,
dinitroanilines, dacarboximides) dans les sols [171].

Le tableau 1-8 prsente quelques exemples dapplications dextraction en solvant


chaud pressuris de pesticides de diffrentes matrices alimentaires. Il met en vidence la
varit des diffrentes conditions opratoires (solvant dextraction, temprature, nombre de
cycles, ) pouvant tre utilises. Dans la littrature, de nombreux solvants organiques et

- 75 -
Chapitre I

mlanges de solvants organiques diffrents ont t employs. Lactone, l'actonitrile, le


mthanol et l'actate dthyle ont tous t et sont toujours utiliss pour extraire les pesticides
non polaires et polaires partir d'une diversit de produits agricoles et de produits
alimentaires traits. Les trois premiers sont entirement miscibles l'eau, tandis que l'actate
dthyle ne lest que trs faiblement. L'actonitrile a l'inconvnient d'tre plus cher et plus
toxique que l'actone et l'actate dthyle mais reste nanmoins trs utilis. Cependant,
lquipe de Guo a utilis lactonitrile pour lextraction de 405 pesticides dans des matrices
cralires avant lanalyse par CPG/SM et CPL/SM [43]. Les rendements observs font de
lactonitrile un bon solvant candidat pour une problmatique comme la ntre qui consiste
dvelopper une mthode dextraction multirsidus de pesticides dans les matrices cralires.
Par ailleurs, le tableau 1-8 met en vidence les possibilits dapplication de la PLE un grand
nombre de composs diffrents. La compatibilit des extraits avec les techniques
chromatographiques, la disponibilit des systmes automatiss commercialiss ont t des
facteurs dterminants pour le choix de cette technique.

- 76 -
Chapitre I

Tableau 1-8 : Exemples dapplications dextraction de diffrentes matrices par PLE.

Conditions d'extraction
Nombre de Purification
Nbre Rendements Techniques
Matrices Familles chimiques pesticides P Dure avant Rf.
Solvant T C de % analytiques
tudis (bar) (min) analyse
cycles
Jus d'orange,
Actate
Pamplemousses, Organophosphors 19 100 100 5 1 oui > 40 CPG-FID [172]
d'thyle
brocolis, farine

Organophosphors,
phthalimide,
organochlors, phnol,
carbamate,
phnylamine,
dinitroaniline,
Tomates 58 Actonitrile 60 138 2 1 oui > 50 CPG-SM [173]
nitroaniline, triazine,
oxazolidine,
benzimidazole,
imidazole, triazole,
imidazolidine,
pyrthrodes

Champignons,
Carbendamate CPL-UV et
citrons, oranges, 2 Eau 75 - 5 20 1 oui > 45 [174]
benzimidazole Fluorescence
riz

Bananes,
haricots verts,
N-mthylcarbamates 17 Actonitrile 100 130 5 1 oui 70 110 CPL-UV [175]
brocolis, melons,
carottes

- 77 -
Chapitre I

Conditions d'extraction
Nombre de Purification
Nbre Rendements Techniques
Matrices Familles chimiques pesticides P dure avant Rf.
Solvant T C de % analytiques
tudis (bar) (min) analyse
cycles

Organochlors,
organophosphors,
carbamates, triazines,
Bl 29 Actonitrile 100 100 5 12 oui 54 116 CPG-ECD [176]
phnylures,
imidazoles,
aryloxyacides

Actanilide,
organophosphors, > 70 % sauf
organochlors, Actone/ dichlorvos,
Melon, pommes
nitroanilines, Dichloro- malathion, CPG-ECD et
de terre, poires, 28 110 100 - 2 oui [177]
chloroactanilides, mthane diclofop- SM
chou
triazoles, (3:1; v:v) mthyl et
dinitroanilines, permthrine
pyrthrodes

Organochlors,
organophosphors, Hexane
52 115 CPG-ECD et
Graines de colza pyrthrodes, 25 satur en 60 100 10 1 oui [133]
3 23 SM
chloroactanilide, actonitrile
dicarboximide

- 78 -
Chapitre I

Nombre Conditions d'extraction


Purification
de Nbre Rendements Techniques
Matrices Familles chimiques P dure avant Rf.
pesticides Solvant T C de % analytiques
(bar) (min) analyse
tudis cycles
Nourriture organophosphors,
4 Actonitrile 80 100 5 3 oui 34 139 CPG-SM [178]
infantile organochlors

Dinitroanilines, phnylures,
chloroactanilides,
dicarboximides, triazines et
mtabolites, amides,
organophosphors, oxadiazoles,
pyrimidines, cis-crotoanilides,
anilides, organochlors,
triazoles, aryloxyacides, 40 131 2
pyrtrinodes, sulfones 38 (sauf
Crales : mas, sulfonates, benzonitriles, oxychlordane,
carbinols, sulfamides, CPG-SM et
bl, orge, riz, carbamates, benzoylures, ures, 405 Actonitrile 80 100 3 2 non pyridaben, [43]
CPL-SM
avoine strobilurines, pyridines, isobenzan et
phnoxyniconanilides, paraoxon-
phnylpyrroles, pyridazones, mthyl)
diphnylthers,
cyclohexanediones, N-
phnylimides, chloroactamides,
phnylaminopyrimidines,
pyrrolidones, uraciles,
thiazolidones,
pyridinylphnylthers

- 79 -
Chapitre I

3. Purification

Lun des inconvnients majeurs inhrent au dveloppement de mthodes multirsidus


est que plus le nombre danalytes cibls est grand et couvre une large gamme de polarit plus
le risque de co-extraction augmente. En effet, malgr une optimisation de tous les paramtres
d'extraction d'chantillons alimentaires dans le but dobtenir une mthode slective, les
analytes ne sont pas les seuls composs tre extraits et les composants de la matrice tels que
des lipides, des colorants, des hydrates de carbone, de l'eau, de la chlorophylle sont
frquemment prsents dans l'extrait.

Ainsi, afin de rduire au maximum les interfrents, lajout dune tape de purification
est souvent ncessaire [27, 179]. Comme dj voqu, les effets de matrice influent sur les
systmes de dtection comme par exemple sur lefficacit de lionisation en SM, la valeur du
bruit de fond et les limites de dtection et de quantification. Ils sont la preuve mme de
limportance de la qualit de ltape de prparation dchantillon. De plus, une dtection
sensible allie une rduction maximale des interfrents facilite lidentification et la
confirmation sans ambigut des composs [139].

Les procdures de purification qui suivent lextraction peuvent mettre en uvre la


saponification, la chromatographie par permation de gel (GPC, gel permeation
chromatography) ou lextraction sur phase solide [27, 179].

La digestion acide ou la saponification sont des mthodes destructives permettant


llimination des lipides. De lacide sulfurique a t utilis pour liminer les lipides aprs
extraction aux ultrasons de pesticides chlors dans les foies doiseaux [180] ou dextraction
au Soxhlet de pesticides organochlors dans le poisson [181]. Toutefois, cette technique peut
gnrer alors de multiples rsidus polaires qui peuvent tre problmatiques.

Le principe de la GPC repose sur lexclusion strique. La colonne de GPC, qui se


compose de grains de polymres poreux, retient les molcules qui sont assez petites pour
entrer dans les pores. Les molcules de grandes tailles sont lues en premier. La plupart des
pesticides synthtiques ont des masses molculaires entre 200 et 400 g/mol tandis que celles
de la plupart des lipides s'tendent de 600 1500 [182]. La phase la plus communment
utilise est un gel de copolymre de divinylbenzne - polystyrne. Pour l'lution des

- 80 -
Chapitre I

pesticides, plusieurs mlanges de solvants tels que le cyclohexane, le dichloromthane,


lhexane, le tolune, lactone ou lactate dthyle ont t recommands [182] Les colonnes
de GPC peuvent tre utilises pendant plusieurs mois sans effet sur lefficacit de la
purification ce qui prsente un avantage non ngligeable. Par ailleurs, cette procdure de
purification peut tre automatise [28, 182]. En raison de ses proprits, la GPC a
principalement t applique pour la purification des extraits riches en matires grasses. Elle a
t employe aprs PLE de soixante-cinq esticides davocat et de trente-et-un pesticides de
muscles de volailles, de porcs et dagneaux [183, 184]. Elle a galement t utilise pour la
purification dhuile d'olive avant analyse de trente-et-un pesticides par CPG couple
diffrents dtecteurs [185].

Nanmoins, la mthode de purification la plus communment utilise est cependant


lextraction sur phase solide (SPE, Solid Phase Extraction).

3.1. Principe de lextraction sur phase solide

La SPE introduite au milieu des annes 1970 [186] est devenue la technique la plus
rpandue de traitement des chantillons liquides avant analyse. Cette mthode dextraction est
de plus en plus souvent mise en uvre en raison de sa grande facilit dutilisation. Elle peut
tre utilise pour lextraction directe de composs dchantillons liquides ou la purification
dextraits issus du traitement de matrices solides.

Lextraction liquide-solide est base sur la distribution des composs entre la phase
liquide reprsentative de lchantillon et la phase solide qui est un adsorbant. Elle sapparente
un processus chromatographique dans lequel ladsorbant joue le rle de phase stationnaire et
lchantillon percol constitue la phase mobile. En effet, si le solut prsente une forte affinit
vis vis de ladsorbant alors il y restera totalement fix au cours de la percolation de
lchantillon. La matrice de lchantillon peut alors tre limine en partie ou totalement
grce une tape de lavage. Les composs dintrt sont ensuite lus par un solvant de
grande force luante [187]. La procdure globale illustre par la figure 1-21 est compose de
diffrentes tapes.

- 81 -
Chapitre I

Figure 1-21 : Principe de lextraction sur phase solide.

La premire tape consiste au conditionnement de ladsorbant contenu dans la


cartouche dextraction. Son but est de mouiller ladsorbant et de solvater les groupements
fonctionnels prsents sa surface. Plusieurs solvants peuvent tre percols successivement.
Le support est initialement conditionn par un solvant de polarit voisine. Un autre solvant de
polarit proche de celle de lchantillon est ensuite utilis dans le but de prparer ladsorbant
recevoir lchantillon. La seconde tape correspond la percolation de lchantillon sur le
support, tape au cours de laquelle les composs dintrt seront retenus. Cependant, des
composs interfrents peuvent tre simultanment retenus sur le support. Le volume
dchantillon percol au cours de cette tape dpend du facteur denrichissement recherch
mais galement de la nature de la matrice. Pour les chantillons biologiques, le volume est
parfois de quelques microlitres alors que pour les chantillons aqueux, il peut tre ncessaire
de percoler un volume important pouvant atteindre un litre. La troisime tape de ce
processus est le lavage. Il a pour but dliminer les composs interfrents faiblement retenus
sur ladsorbant. Une attention particulire est porte au choix de ce solvant de lavage car il
doit permettre llution des composs interfrents tout en naltrant pas la rtention des
composs cibls. La dernire tape consiste llution des composs dintrt. Elle seffectue
avec un solvant judicieusement choisi de faon rompre les interactions entre les composs

- 82 -
Chapitre I

dintrt et ladsorbant. Toutefois, le solvant doit dans la mesure du possible ne pas luer les
composs interfrents fortement retenus sur le support.

Lvolution de la SPE a t facilite par la commercialisation de phases de natures trs


varies et ddies des composs et des chantillons diffrents. Par ailleurs, il existe une
trs grande varit de formats de supports : des cartouches, des disques, des plaques de 96
puits et des prcolonnes [187, 188]. Llment cl de lextraction sur phase solide est en effet
le choix de la nature de ladsorbant. Ce choix est influenc la fois par le type de matrice
considre et par la nature des analytes extraire. Deux usages diffrents de la SPE vont tre
traits sparment : lutilisation de la SPE comme moyen de purification dextraits issus de
matrices solides et lutilisation de la SPE pour lextraction de pesticides dans les chantillons
aqueux tels que leau et les jus de fruits.

3.2. Extraction sur phase solide : applications des analyses


alimentaires

Une tude mene par lquipe de Panton a mis en vidence les avantages de la SPE en
comparaison la purification par GPC lors de lextraction de dix organophosphors du bl et
du mas. Il sest avr que la purification sur SPE est plus rapide et consomme une plus faible
quantit de solvant [149]. Traditionnellement, des phases stationnaires polaires de type
Florisil (silicate de magnsium), alumine, silice ont t utilises, particulirement dans le cas
dchantillons gras dans lesquels il est ncessaire d'liminer les lipides co-extraits qui ne sont
pas retenus sur ce type dadsorbant [182]. Lors de lutilisation de phases stationnaires
polaires, lextraction peut avoir lieu si les composs dintrt sont prsents dans un milieu non
polaire.

Nanmoins, lextraction des composs dintrt est malheureusement accompagne en


gnral de la co-extraction de composs pouvant interfrer au cours de lanalyse. De
nouveaux matriaux ont donc t dvelopps pour augmenter la slectivit des extractions de
composs cibls dans les divers chantillons comme les immunoadsorbants et les polymres
empreintes molculaires (MIP, molecularly imprinted polymers). Dans le cas des
immnuoadsorbants, des anticorps spcifiques des composs recherchs sont utiliss pour
lextraction directe dun compos ou dune famille danalogues structuraux dans des
chantillons aqueux. Ainsi, pour la purification dextraits contenus dans des solvants

- 83 -
Chapitre I

organiques issus du traitement dchantillons solides, le solvant constituant lextrait doit tre
vapor sec et repris dans une solution aqueuse [187]. Dans le cas des MIP, lapproche
consiste crer un polymre synthtique possdant des sites spcifiques mais artificiels dune
molcule cible. Les MIP sont utiliss prfrentiellement du fait de leur plus faible cot que les
immunoabsorbants. Par ailleurs, ils prsentent souvent une plus grande stabilit thermique et
chimique.

Ces deux approches sont caractrises par une grande slectivit qui mne
lobtention dextraits propres. Cependant, elles mettent en uvre des mcanismes trop
slectifs qui ne conviennent pas aux mthodes multirsidus couvrant des molcules de
proprits physico-chimiques et de structures trs diverses.

Il convient alors dutiliser les performances des diffrents adsorbants conventionnels


disponibles. Le tableau 1-9 rsume quelques applications de la SPE comme technique de
purification lors de lanalyse de pesticides dans des chantillons alimentaires. Ce tableau met
en vidence la diversit des adsorbants pouvant tre utiliss. Lune des causes de cette
diversit est quaprs extraction, lextrait est souvent trait de faon utiliser un solvant
compatible avec les tapes suivantes du traitement de lchantillon. Lextraction peut par
exemple tre effectue par un solvant de type mthanol, lextrait est ensuite vapor et
reconstitu par un solvant plus apolaire avant purification sur des adsorbants polaires. Cette
reconstitution est par ailleurs effectue avec un faible volume de solvant (Tableau 1-9).

Certaines applications mettent en vidence la complexit des matrices alimentaires


avec la ncessit dutiliser en tandem des adsorbants de natures diverses. Cette ncessit est
dautant plus vraie que le nombre de composs cibls ayant des proprits physico-chimiques
varies est grand.

- 84 -
Chapitre I

Tableau 1-9 : Applications de la SPE la purification dans le domaine alimentaire


(ACE : actone, DCM : dichloromthane, HEX : hexane, MeCN : actonitrile, MeOH : mthanol, TOL : tolune, PSA : primary secondary amine).

Purificaton sur phase solide


Familles chimiques des Nature de
Nombre Matrices Rf.
pesticides tudis l'extrait
Quantit
Nature Elution
(mg)
Bananes, haricots Silice grffe
ACE/HEX ACE/HEX
N-mthylcarbamates 17 verts, brocolis, acide 500 [175]
(13 mL) (3: 7, v:v)
melons, carottes carboxylique

Actanilide, organophosphors,
Melon, pommes Florisil +
organochlors, nitroanilines, HEX HEX/DCM/ACE
28 de terre, poires, carbone (en 1000 et 250 [177]
chloroactanilides, triazoles, (2 mL) (10:60:30 ; v:v)
chou tandem)
dinitroanilines, pyrthrodes
Organophosphors, Nourriture MeCN, et MeCN
4 DCM Carbone - [178]
organochlors infantile (20% DCM)
ACE MeCN/ TOL
Organophosphors 10 Bl et mas Carbone 500 [149]
(5 mL) (3:1, v:v)
Carbamates benzimidazoles,
Concombres,
imidazoles, dicarboximides PSA + HEX (15% ther) +
pommes de terre, HEX
thiazolidinones, ures, triazoles, 27 Florisil 500 + 690 ACE (20% HEX) [153]
pommes, radis, (2 mL)
benzohydrazides, benzoylures, (tandem) +ACE (50% HEX)
bananes
phnoxypyrazole
HEX
Organophosphors 1 Haricots Silice - HEX + DCM [156]
(0,5 mL)
Graines de HEX HEX (20% d'actate
Organochlors 15 Florisil 1000 [160]
ssame (0,5 mL) d'thyle)
MeOH
Phnylures 3 Pommes de terre C8 500 MeCN [189]
(1 mL)
H2O
Triazoles, anilides, pyridines 6 Raisins C18 500 DCM/MeOH (50/50) [190]
(25 mL)

- 85 -
Chapitre I

3.3. Extraction des pesticides des milieux aqueux

Lune des applications les plus rpandues de la SPE est le traitement de matrices
aqueuses. Cette partie est traite de manire succincte car elle ne constitue pas la thmatique
principale de la thse mais sera utilise au cours de la participation lessai inter-laboratoires
concernant lanalyse de pesticides dans les eaux (Chapitre 2). Elle est base principalement
sur un article paru dans les Techniques de lingnieur portant sur lextraction sur phase
solide pour lanalyse de composs organiques [187].

Dans les matrices aqueuses de natures diverses (de surface, souterraine, de


consommation), les pesticides sont en gnral prsents de faibles teneurs lexception dune
contamination accidentelle. Malgr, les progrs constants des techniques analytiques,
lanalyse de traces de pesticides dans les eaux ncessite une tape pralable de traitement de
lchantillon. Les composs doivent tre extraits de la matrice aqueuse afin de les concentrer
avant leur analyse. Du fait de leurs faibles teneurs, leur extraction ncessite un facteur
denrichissement lev ce qui sous-entend la percolation de grands volumes dchantillon. Ce
facteur est dfini par le rapport du volume analys au volume prconcentr. Or, lorsque des
grands volumes dchantillon sont ncessaires, il convient dutiliser des quantits de phases
importantes pour viter datteindre le volume de fin de fixation.

Pour lextraction de composs dchantillons aqueux, les supports les plus


couramment utiliss sont de nature hydrophobe. Leau prsente en effet dans ce cas un faible
pouvoir luant ce qui est favorable la rtention des composs par interactions hydrophobes.
Concernant ltape dlution, lobjectif est de minimiser le volume dluant afin daugmenter
le facteur denrichissement. Cependant, dans la majorit des cas, ce volume, souvent trop
grand, devra tre rduit par vaporation avant injection pour augmenter ce facteur [187].

Au-del des supports hydrophobes conventionnels, les immunabsorbants et les MIP


peuvent tre utiliss. Les immunoabsorbants ont par exemple t employs pour lanalyse de
phnylures et de triazines dans les eaux [191], de l'imazalil dans les agrumes [192] et
dherbicides de la famille des phnylures dans du jus de citron [165]. Les MIP ont montr
leur efficacit lors de la purification dextraits de jus de raisins pour lanalyse des pesticides
de la famille des triazines [193]. Malgr la performance des immunoabsorbants et des MIP,

- 86 -
Chapitre I

ces approches sont slectives et il nest pas possible de les utiliser lors danalyse multirsidus
de pesticides.

Le tableau 1-10 rsume quelques applications de la SPE comme technique


dextraction lors de lanalyse de pesticides dans les matrices aqueuses telles que leau
dorigines diverses et de jus de fruits.

Les diffrents adsorbants utiliss sont des supports hydrophobes de type C18 ou
polymrique. Lune des diffrences essentielles entre lextraction de pesticides dans leau et
les jus de fruits rside dans la quantit dchantillon percol. Ce sont les faibles seuils de
pesticides autoriss dans leau par la rglementation qui induisent lutilisation de grands
volumes dchantillon. Le but tant dobtenir un facteur denrichissement lev permettant la
dtermination des pesticides de faibles teneurs.

- 87 -
Chapitre I

Tableau 1-10 : Exemples dapplication de la SPE dans des matrices aqueuses pour lextraction de pesticides
Oasis HLB (Hydrophilic Lipophilic Balance) : N-vinylpyrrolidane divinylbenzene, SBD : styrne divinylbenzne,
PS-DVB : polystyrene-divinylbenzene.

Extraction sur phase solide


Nbre. de Rendements d'extraction
Classes chimiques des pesticides tudis Matrices Vol cht Rf.
composs Nature Qt. (mg) %
(mL)
Carbamates, phnylaminopyrimidines,
nitromthylnes, nicotinoides, ures, triazines, Eaux de
32 500 Oasis HLB 200 60 110 15% [194]
phnylures, macrolides, benzolyures, rivires
pyrazolamides, pyridazones
Trictones, triazines, phnylures, aryloxyacides, Eaux de
15 1000 Oasis HLB 60 94 112% [67]
chloroactamides, surfaces
Organochlors, organophosphors, triazines,
60 composs : 75 120%
carbamates, phnylures, pyrthrinodes, Eaux de
26 composs : 50 75% et
dicarboximides, pyridazones, isophtalonitriles, 96 surfaces, 1000 C18 - [195]
les dix plus polaires de 12
morpholines, triazoles, phnylamides, dinitroanilines, souterraines
50%
chloroacetanilides, amides

Eaux de
Organochlors, organophosphors, carbamates, surfaces, 72 118 sauf mthamidophos
20 300 C-18 - [196]
triazoles, acides cinnamiques, pyridazones rsiduaires, 50% et pp' DDT 60%
souterraines

Organophosphors, triazines, organochlors, amides, Eaux de


22 500 SDB 200 47 131% [197]
benzonitriles, dinitroanilines, chloroactanilides distribution
N-Mthylcarbamates, phnylures, triazines 12 Eau pure 50 C18 250 80 111% [198]
N-Mthylcarbamates, phnylures, triazines 12 Eau pure 50 Oasis HLB 200 53 123% [198]
N-Mthylcarbamates, phnylures, triazines 12 Eau pure 50 PS-DVB 500 33 125% [198]

- 88 -
Chapitre I

Nombre Extraction sur phase solide


Classes chimiques des pesticides tudis de Matrices Vol cht Rendements d'extraction % Rf.
composs Nature Qt. (mg)
(mL)

Triazines (et mtabolites), imidazoles, morpholines,


macrolides, spiractalamines,
phnylaminopyrimidines, thiazolidinones,
quinazolines, cyclohexanones, carbamates, Jus de fruits :
azomthines, acides picoliniques, carbamates pommes, 2 mL de jus
benzimidazoles, oxazoles, uraciles, 90 pches, de fruits + 2 Oasis HLB 200 > 50% [199]
chloroactanilides, stobilurines, aryloxyacides, ananas, mL d'H20
triazoles, anilides, benzonitriles, hydroxyanilides, oranges
phnylures, benzoylures, sulfonylures, ures,
pyridazones, quinolines, nicotinoides, triazinones,
nitromthylnes

Carbamates, chloroactanilides, triazines,


Jus de fruits :
organoclors, isophtalonitriles, organophosphors, 10 mL de
carrottes,
dinitroanilines, dicarboximides, oxadiazoles, 50 jus + 3 mL C18 1000 > 91 9% [24]
raisins,
triazoles, phnylamides, sulfones sulfonates, de MeOH
oranges
pyrthrinodes, pyrimidines

Jus de fruits :
25 mL de
Dicarboximide, isophtalonitriles, sulfone sulfonate, pommes,
5 jus + 15 mL C18 200 94 99,5 3% [200]
dinitroanilines cerises,
de MeOH
pches

- 89 -
Chapitre I

4. Conclusions

Lextraction des pesticides de matrices solides est une tape primordiale du processus
danalyse global. Cette tape est cependant difficile lorsque de nombreux composs sont
recherchs simultanment. Dautant plus que la tendance aujourdhui est au dveloppement
dune seule et unique procdure. De part sa capacit extraire des composs en un temps
relativement court, de labsence de filtration aprs extraction, de sa faible consommation de
solvant et de sa capacit tre automatis, lASE semble tre un choix idal pour lextraction
de pesticides dans les matrices cralires. Par ailleurs, compte tenu de la complexit de ces
matrices et malgr les sensibilits pouvant tre atteintes par CPL/SM, il semble ncessaire
davoir recours une tape de purification. La SPE savre tre une technique de purification
efficace et pratique.

Le processus analytique global prenant en compte le traitement de lchantillon et


lanalyse par CPL/SM doit tre strictement contrl. Lune des techniques utilises pour
pallier les ventuelles imperfections dextractions mais aussi les perturbations analytiques
pouvant se produire est la dilution isotopique.

I.5. Mise en uvre de la dilution isotopique


1. Gnralits et principe

Lun des objectifs du LNE est le dveloppement de mthodes danalyse primaire de


rfrence qui implique la mise en uvre de la dilution isotopique.

La mthode de dosage par dilution isotopique, parfois dsigne sous le sigle IDA
(Isotope Dilution Analysis) a t propose pour la premire fois en 1932 par Hevesy et
Robbie. Cette mthode danalyse de traces a largi considrablement son champ dapplication
avec la dcouverte de la radioactivit artificielle qui permet dobtenir par irradiation de trs
nombreux radiolments. Aussi, ce fut lune des mthodes radiochimiques les plus utilises.
Elle permet de faire des analyses quantitatives exactes dans les cas o une sparation
chimique quantitative est impossible ou trs laborieuse. Elle ncessite la disponibilit dun
radio-isotope de llment doser. Il existe diffrentes applications de dilution isotopique,
celle employe en mtrologie chimie organique ncessite lutilisation disotopes stables [201].

- 90 -
Chapitre I

Lexploitation des rsultats rside dans lutilisation des rapports isotopiques. Ces
mesures sont faites par spectromtrie de masse, qui est la mthode la plus sensible et la plus
prcise pour la mesure de rapport isotopique. Cette application est alors gnralement
dsigne sous le sigle IDMS (Isotopic Dilution Mass Spectrometry) [201].

Pour le domaine de lanalyse organique, le principe consiste ajouter aux composs


recherchs, des molcules au sein desquelles des atomes sont remplacs par des isotopes
stables. Comme par exemple, la substitution dun atome dhydrogne 1H par un atome de
deutrium 2D ou dun atome de carbone 12C par un atome de carbone 13C. Ainsi, la similitude
entre la molcule doser et son homologue marqu suppose le mme comportement au cours
du processus global danalyse de ces deux molcules. La molcule dintrt et son homologue
marqu sont alors doser simultanment. Le principe de la dilution isotopique est schmatis
sur la figure 1-22.

1. Ajout dans lchantillon 3. Lecture du rapport M / M*


des molcules marques

2. Traitement de lchantillon
et analyse simultane des
molcules marques et des
M
molcules dintrt

M*

temps

Molcules marques M* SIGNAL


Molcules dintrt M

Figure 1-22 : Reprsentation schmatique du principe de dilution isotopique.

Lutilisation de molcules marques est cependant onreuse, en particulier lors


danalyse multirsidus, o un talon est priori ncessaire pour chaque compos. Toutefois,
outre le prix excessif, il manque beaucoup dtalons internes marqus qui ne sont pas
commercialiss [55, 202, 203]. En gnral, lutilisation dtalon marqu est plus rserv
lanalyse dune seule molcule [55].

- 91 -
Chapitre I

2. Intrt de la dilution isotopique

Intrt gnral :

Au sein de lquipe de mtrologie chimique du LNE, la dilution isotopique avec des


isotopes stables a dj t largement mise en uvre. Son utilisation en chimie inorganique est
antrieure la chimie organique. Son intrt a t mis en vidence au cours de diffrentes
campagnes dinter-comparaison. Lune dentre elles a port sur le dosage du cadmium dans
une matrice qui refltait la composition typique dune matrice alimentaire aprs
minralisation. Les diffrents laboratoires participants ont mis en uvre leur propre mthode :
spectromtrie dabsorption atomique (AAS, Atomic Absorption Spectrometry) par talonnage
externe note AAS cal , spectromtrie dabsorption atomique par talonnage interne note
Std Add (standard addition) , la voltammtrie note Voltametry et la dilution
isotopique par spectromtrie de masse note IDMS. Les diffrents rsultats sont prsents sur
la figure 1-23.

2%
Valeur de rfrence

Laboratoires

Figure 1-23 : Intrt de la dilution isotopique mis en vidence lors dune campagne dinter-
comparaison [204].

La valeur de rfrence obtenue gravimtriquement est caractrise par la droite en noir


sur la figure. Les rsultats des diffrents laboratoires sont indiqus avec leur cart-type. Dune
part, les laboratoires mettant en uvre la spectromtrie dabsorption atomique ou la

- 92 -
Chapitre I

voltammtrie ont annoncs des rsultats de mesure loigns de la valeur de rfrence. Dautre
part, la dispersion observe sur les rsultats est leve, les carts vont de 9 18%. En
revanche, la mise en uvre de la dilution isotopique par spectromtrie de masse permet
lobtention de rsultats trs proches de la valeur gravimtrique. Les carts types restent
infrieurs 4%. Ces rsultats mettent en vidence que la dilution isotopique associe un
protocole mtrologique permet datteindre des incertitudes de mesures relativement faibles.
Par ailleurs, la dilution isotopique permet de compenser les variabilits ventuelles lies
linstabilit des appareils de mesures et/ou aux pertes ventuelles pouvant se produire lors des
diffrentes tapes de lanalyse.

Intrt pour lanalyse de pesticides par CPL/SM

Le processus dionisation qui est crucial pour les analyses buts quantitatifs par
CPL/SM peut tre affect par la matrice de lchantillon. Une matrice trs complexe peut en
effet influencer le processus de formation dions quand la solution de lchantillon est
introduite dans le spectromtre de masse. La suppression et lexaltation du signal sont
attribues la comptition qui se produit entre les composants de la matrice et les analytes
pour lionisation et laccs aux gouttelettes pendant lmission en phase gazeuse.

Dans le but de surpasser les effets de matrice lors du dveloppement de mthode de


dtermination et de quantification, diffrentes procdures peuvent tre mises en uvre pour
liminer ou attnuer ces effets : un traitement de lchantillon appropri permettant de
supprimer les interfrents de la matrice, ltalonnage sur des chantillons reprsentatifs de la
matrice relle et la quantification par addition dtalon interne ou dilution isotopique [72].

La dilution isotopique constitue la meilleure approche lorsque les composs dintrt


marqus sont disponibles [18, 55]. Cette approche est base : sur le fait les molcules et leurs
homologues marqus ont dune part, des formules chimiques trs similaires et qui ne diffrent
que par la substitution dun ou plusieurs atomes par leurs isotopes stables, et dautre part, ils
possdent des temps de rtention trs proches. Ainsi, la dilution isotopique permet de corriger
une suppression ou une exaltation du signal du fait que la matrice co-lue devrait affecter
thoriquement les deux composs de la mme faon [18, 55]. Par ailleurs, elle est aussi
utilise pour corriger linstabilit et le manque de reproductibilit du signal [120, 205].

- 93 -
Chapitre I

Pour lquipe de Mller, lutilisation dtalons internes marqus est la seule manire
efficace de surmonter ce problme et de conduire lanalyse quantitative fiable en CPL/SM.
Cette quipe a par ailleurs illustr lcart de justesse qui rsulte de lutilisation dun seul
talon pour la quantification de huit pesticides de familles chimiques diffrentes dans les
eaux. En effet, lorsque le mcoprop D3 est utilis comme talon interne pour la quantification
de la msotrione, de la sulcotrione (trictones), du MCPA, du 2,4D (aryloxyacides), des
mtabolites du mtolachlore (chloroactanilide) et des mtabolites du dimethenamide
(chloroactamide), la teneur en pesticides est errone, elle peut tre, soit surestime jusqu
32%, soit sous-estime jusqu 85% [67].

Lidal est de disposer dune molcule marque identique la molcule doser.


Lindisponibilit et le cot trs cher de la mise en uvre de la dilution isotopique peuvent
entraner des erreurs de quantification du fait de la difficult du choix de ltalon idal.
Limportance de ce choix pour la quantification de pesticides dans des matrices complexes a
par ailleurs t souligne. Ainsi, pour la quantification de neuf pesticides : laldicarbe,
laldicarbe sulfoxide, laldicarbe sulfone, le carbaryl, le fenobucarb, le methiocarb, le
methomyl, loxamyl et le pirimicarbe, trois talons marqus ont t utiliss savoir, le
methomyl D3, le carbaryl D7 et le fenobucarb D3. Il est admis en gnral que les talons
internes ayant un temps de rtention trs proche du compos doser sont efficaces pour
corriger les ventuels effets de matrice. Cependant, il a t montr que le temps de rtention
nest, en ralit, pas le seul critre prendre en compte lors du choix de ltalon marqu. La
solubilit est aussi une des proprits considrer. En effet, une quantification plus juste est
obtenue lors de lutilisation de ltalon marqu ayant la solubilit la plus proche du compos
doser. Par exemple, les rendements dextraction varient de 46 148% lors de lutilisation du
compos ayant le temps de rtention le plus proche. En revanche, lors de lemploi de ltalon
marqu ayant la solubilit la plus proche du compos doser, les rendements varient de 54
116% [70]. Lexaltation du signal due aux interfrents prsents dans la matrice est ainsi
mieux corrige.

I.6. Conclusions

Au vu des diffrentes techniques de dtermination de pesticides dans les aliments, il


semble clair quune procdure universelle applicable tous les chantillons nexiste pas.
Cependant, la CPL/SM semble convenir lanalyse multirsidus de pesticides. Par ailleurs,

- 94 -
Chapitre I

combine une tape dextraction en solvant chaud pressuris, elle devrait permettre
datteindre les objectifs fixs savoir le dveloppement dune mthode danalyse
multirsidus de pesticides prsents dans des matrices cralires. Le challenge analytique
rside dans le nombre de pesticides recherchs au cours du processus analytique. Dautant
plus que pour le chimiste analyste, la difficult du dfi crot avec le nombre de composs
recherchs ayant des proprits physico-chimiques diffrentes. Par ailleurs, compte tenu de la
complexit du processus global danalyse, la dilution isotopique sera mise en uvre chaque
fois que la molcule marque sera disponible.

- 95 -
Chapitre I

- 96 -
Chapitre II

Chapitre II : Evaluation des performances de la DI/CPL/SM


pour lanalyse de pesticides dans les eaux

Avant daborder la problmatique de lanalyse de pesticides dans les crales, la matrise de la


chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem a t lun de
nos objectifs. Une mthode danalyse de pesticides dans les eaux aprs extraction sur phase
solide (SPE) par dilution isotopique (DI) associe la CPL/SM a t dveloppe. Lors du
dveloppement dune telle mthode, il est ncessaire de valider le processus analytique global
afin den valuer les performances. Cette validation se traduit par ltude des diffrentes
caractristiques de la mthode. De ce fait, la reproductibilit de la mthode SPE/DI/CPL/SM,
la linarit ainsi que les limites de dtection et de quantification de la DI/CPL/SM pour les
diffrents composs ont t tudies. Par ailleurs, lune des caractristiques importantes dune
mthode danalyse et qui constitue galement lune des plus grandes difficults est sa justesse.
Celle-ci a t value grce la participation un essai inter-laboratoires danalyse de
pesticides dans les eaux souterraines. Enfin, les calculs des incertitudes lors de lanalyse
deaux souterraines ont t effectus pour chacun des composs cibls.

- 97 -
Chapitre II

II. 1. Problmatique et tudes prliminaires

Une attention particulire a t porte lanalyse de pesticides dans les eaux par
CPL/SM avant daborder la problmatique des pesticides dans les crales par cette mme
technique. Les objectifs viss sont la fois la matrise de cette technique analytique mais
aussi lvaluation de ses performances en comparaison une analyse par CPL/SM. Ainsi, une
mthode danalyse de pesticides dans les eaux aprs extraction sur phase solide (SPE, Solid
Phase Extraction) par dilution isotopique (DI) associe la CPL/SM a t dveloppe partir
des connaissances auparavant existantes au Laboratoire Environnement et Chimie Analytique
(LECA, ESPCI) et au LNE en matire danalyse de pesticides dans les eaux.

Les teneurs en pesticides et certains de leurs mtabolites dans les eaux sont
rglementes par des limites maximales de rsidus (LMR) fixes 0,1 g/L par pesticide et
0,5 g/L pour la totalit des pesticides dans les eaux destines la consommation [206]. Ces
faibles valeurs ncessitent un protocole analytique intgrant une tape de pr-concentration
avant lanalyse proprement dite. La validation du processus global de lanalyse passe par
lutilisation de matriaux de rfrence (MR). Ils sont essentiels pour assurer la traabilit des
analyses chimiques effectues sur les eaux. Cependant, jusqu ces dernires annes, aucun
MR ntait disponible sur le march pour lanalyse de pesticides dans les eaux.

Ltude de la faisabilit et le dveloppement dun MR certifi (MRC) matrice pour


lanalyse de dix pesticides de la famille des triazines et de phnylures dans les eaux ont t
mens pendant plusieurs annes au LECA en collaboration avec le LNE [207, 208].

Le MRC dvelopp se prsente sous forme dun kit compos notamment dune
cartouche dextraction. Cette dernire permet une extraction quantitative des pesticides de la
famille des triazines et des phnylures de leau. Lannexe 2-1 dtaille les proprits physico-
chimiques de la cartouche dextraction Oasis HLB utilise, le protocole dextraction y est
galement dcrit. Par ailleurs, au cours du dveloppement de ce MRC, une mthode danalyse
de triazines et de phnylures par CPL/SM a t mise au point au LNE. Les diffrentes
conditions opratoires de cette mthode ainsi quun chromatogramme obtenu en mode full
scan sont prsents en annexe 2-2. Les limites de quantification atteintes sont comprises entre
1,7 et 5,3 g/L. Ces valeurs sont reprsentatives de la sensibilit de la mthode et vont
permettre dapprcier le gain en sensibilit pouvant tre acquis lors dune dtection par

- 98 -
Chapitre II

spectromtrie de masse en tandem. La mthode danalyse de pesticides dans les eaux par
SPE/DI/CPL/SM dveloppe dans ce chapitre sinspire donc des acquis en matire
dextraction et danalyse des pesticides dans les eaux.

Par ailleurs, en 2005, alors que la qualification du chromatographe en phase liquide


coupl un spectromtre de masse en tandem tait en cours, le LNE a t contact par le
Bureau de Recherches Gologiques et Minires (BRGM) pour participer un essai inter-
laboratoires. Cet essai sinscrit dans le cadre dun projet europen AquaTerra concernant
lanalyse de trois pesticides et de deux de leurs mtabolites polaires dans les eaux
souterraines.

Ainsi, aprs la prsentation des molcules tudies, le dveloppement de la mthode


danalyse par DI/CPL/SM est dcrit. La validation de cette mthode a ensuite t effectue
grce ltude de ses diffrentes caractristiques telles que la reproductibilit de la mthode
SPE/DI/CPL/SM, la linarit de la mthode DI/CPL/SM, les limites de dtection et de
quantification des diffrents composs et la justesse.

II. 2. Dveloppement de la mthode danalyse de pesticides dans


les eaux par DI/SPE/CPL/SM
1. Molcules tudies

Les molcules concernes par cette tude sont des pesticides habituellement prsents dans
les eaux. Ces composs sont :
latrazine,
deux de ses mtabolites : la dthylatrazine (DEA) et la disopropylatrazine (DIA),
lactochlore,
lisoproturon (IPU).

Les modes daction, la classe chimique, les structures et les caractristiques physico-
chimiques de ces composs sont indiqus dans le tableau 2-1.

- 99 -
Chapitre II

Tableau 2-1 : Modes daction, classes chimiques, structures et proprits physico-chimiques des
molcules tudies.

Proprits physico-
Masse chimiques
Mode Classe
Compos Structure molaire
daction chimique
g/mol log P pKa Seau
(mg/l)

Atrazine Herbicide Triazine 215 2,7 1,7 33

Actochlore Herbicide Chloroactanilide 269 3 - 233

Mtabolite
DEA Triazine 187 1,6 1,3 3200
de l'atrazine

Mtabolite
DIA Triazine 173 1,2 1,3 670
de l'atrazine

IPU Herbicide Phnylure 206 2,5 - 70

Le LNE a pour objectif de dvelopper des mthodes danalyses primaires. Elles


reposent sur la mise en uvre de la dilution isotopique. Son principe, comme expliqu dans le
chapitre prcdent, consiste analyser simultanment les composs cibls et leurs
homologues marqus. Les molcules marques sont utilises du fait quelles simulent au
mieux le comportement rel des molcules doser. Celles-ci correspondent aux molcules
cibles auxquelles ont t substitues des atomes dhydrogne par des atomes de deutrium :
latrazine D5, lactochlore D11, la DEA D6, la DIA D5, lIPU D6.

- 100 -
Chapitre II

Lessentiel du travail a consist optimiser les conditions de dtection par


spectromtrie de masse en tandem. Comme dj voqu, les pesticides sont prsents ltat
de traces dans leau, une tape de pr-concentration sur phase solide avant leur analyse
chromatographique et leur dtermination est donc ncessaire. Le support retenu
conformment aux travaux antrieurs [207, 208] est la cartouche Oasis HLB. Cependant,
malgr, son efficacit dmontre pour lextraction des pesticides de la famille des triazines et
des phnylures, il est ncessaire de confirmer sa performance pour lextraction dune matrice
aqueuse de la molcule dactochlore et de son homologue marqu, lactochlore D11.

2. Optimisation des conditions de dtection par CPL/SM

Le laboratoire est quip dune chane chromatographique couple un spectromtre


de masse en tandem. Le couplage est constitu dune part dun chromatographe en phase
liquide : Surveyor (ThermoFischer Scientific) et dautre part dun spectromtre de masse :
TSQ Quantum Discovery Max (ThermoFischer Scientific). Le TSQ Quantum dispose de deux
sources dionisation pression atmosphrique : la source lectrospray (ESI) et la source
dionisation chimique pression atmosphrique (APCI). Comme la mthode dveloppe
sinspire de la mthode prcdemment mise au point au LNE par CPL/SM, seule la source
dionisation ESI a t utilise.

2.1. Paramtres influents en CPL/SM

Comme dj abord au cours du premier chapitre, lors dune analyse par CPL couple
la SM en tandem, diffrents facteurs influent sur la sensibilit. Certains dentre eux sont des
paramtres chromatographiques tels que la phase mobile (nature et dbit) ou les
caractristiques physiques de la colonne analytique ou des paramtres dionisation tels que la
position de la sonde, les grandeurs de nbulisation/ dsolvatation. Dautres sont lis
lanalyseur tels que loptique ionique, les paramtres de collision et les choix des transitions,
la vitesse dacquisition, la rsolution et les fentres de balayage. Les paramtres dionisation
lis lanalyseur dpendant de la conception spcifique de chaque interface et de chaque
instrument, les rglages effectuer varient dun fournisseur lautre.

La qualit dune analyse par CPL/SM est trs dpendante de ltape dionisation qui
permet le passage en phase gazeuse et lionisation de lchantillon liquide. Malgr lexistence

- 101 -
Chapitre II

de controverses concernant le phnomne dionisation (chapitre 1), il est indispensable de


matriser les diffrents paramtres dionisation qui peuvent tre rgls par lutilisateur. Dans
un premier temps, ce dernier dfinit les paramtres des diffrents gaz utiliss pour lionisation
et des valeurs du systme optique afin de slectionner lion molculaire majoritaire ion
parent . Par ailleurs, les mthodes danalyse par CPL/SM repose sur lexploitation des
transitions ion parent >ion de fragmentation. Il convient alors doptimiser les paramtres de
dtection par spectromtrie de masse et de dfinir les ions de fragmentation majoritaires
correspondant lion molculaire dtermin prcdemment.

2.2. Source dionisation ESI

Lors de la mise au point de la dtection de nouvelles molcules sur un appareil TSQ


Quantum avec une source ESI, diffrents paramtres doivent tre optimiss :
la tension applique laiguille mtallique spray voltage pour obtenir lionisation
des molcules, elle dpend surtout de la phase mobile et peut varier en fonction de sa
force ionique ;
la pression du gaz schant et ionisant sheath gas , ce gaz assiste lionisation et
permet la cration dun spray. Il sert dsolvater les molcules de la phase mobile et
donc produire des ions. La pression applique dpend essentiellement du dbit de la
phase mobile ;
la pression du gaz rideau ion sweep gas situ derrire le cne dentre, il provoque
des turbulences dans le spray et est trs efficace pour casser les liaisons faibles ;
la pression du gaz auxiliaire qui assiste lionisation en asschant la source. Sa pression
dpend aussi exclusivement du dbit et de la nature de la phase mobile ;
la temprature du capillaire, lutilisation dune haute temprature sert complter le
processus de dsolvatation, la valeur de la temprature dpend elle aussi du dbit et de
la nature de la phase mobile. Toutefois, une attention particulire doit tre porte la
temprature lors de lanalyse de composs thermolabiles ;
la tension applique au systme de lentilles Tube Lens Offset en amont du premier
quadriple. Elle permet la focalisation des ions vers le filtre des ions (skimmer) en
fonction des rapports m/z et aide la dsolvatation. Sa valeur dpend aussi de la phase
mobile. Elle influe sur lnergie cintique des ions et est fonction de la stabilit et de
la structure des composs. Si la valeur est trop leve, il y a un risque de
fragmentation des ions ;

- 102 -
Chapitre II

la tension de la source CID : potentiel appliqu sur les lentilles, la valeur dpend de la
nature et du dbit de la phase mobile, elle participe laugmentation de lintensit des
ions molculaires ;
la pression du gaz de collision (argon), la valeur par dfaut est de 1,5 mTorr ;
lnergie de collision : elle correspond la tension applique sur le deuxime
quadriple (ou cellule de collision), elle dpend de la pression du gaz de collision. Elle
permet en effet un ion parent donn de se fragmenter par collision avec les
molcules ionises du gaz en un ion fils spcifique.

Tous ces paramtres peuvent tre classs en deux catgories lors dune acquisition ;
dune part les paramtres fixes, cest dire identique toutes les molcules et dautre part les
paramtres variables dpendant de la molcule tudie. Par ailleurs, si certains ont une faible
influence, dautres au contraire sont dterminants. La pression des diffrents gaz est lun des
paramtres communs tous les composs analyss. Il est donc important de trouver les
conditions optimales de pression de gaz pour lensemble des molcules. Dautant plus, quelle
dfinit la qualit du spray obtenu la sortie de laiguille de la sonde ESI et influe
significativement sur lefficacit de lionisation des molcules. En revanche, certains
paramtres sont spcifiques aux molcules doser, comme les valeurs des nergies de
collision qui sont dterminer pour chacune des molcules tudies.

Compte tenu du nombre de paramtres pr-cits, il apparat clairement que la difficult


et la complexit de loptimisation dune mthode danalyse par CPL/SM augmente avec le
nombre de composs doser.

2.3. Dtermination des ions prcurseurs et de fragmentation

Pour chaque molcule, lion majoritaire a t dtermin par infusion directe dans la
source ESI dune solution de chacun des composs 1 mg/L. Cette tape a t effectue en
labsence de colonne chromatographique et en appliquant un dbit de phase mobile de 0,4
ml/min pour se mettre dans les conditions de dtection les plus proches des conditions relles
danalyse chromatographique. La mthode dveloppe sappuie sur la mthode
chromatographique prcdemment mise au point au LNE (Annexe 2-2). Par consquent, la
phase mobile initialement utilise est compose deau et dactonitrile acidifis lacide
formique (0,1%).

- 103 -
Chapitre II

Toutes les molcules donnent un signal en mode positif et conduisent un ion


molculaire proton [M+H]+ du fait de la prsence dun atome dazote favorable la
protonation. La fragmentation de cet ion molculaire donne des ions fils dont labondance
dpend de lnergie de collision applique. Ces ions de fragmentation sont rpertoris dans le
tableau 2-2.

Tableau 2-2 : Composs tudis avec les ions parents correspondants ainsi que les ions de
fragmentations et les nergies de collision (Ecoll) associs.

Ions Ions de fragmentation


Composs parents Ions primaires Ions secondaires Ions tertiaires
(m/z)
m/z E coll (V) m/z E coll (V) m/z E coll (V)
Atrazine 216,1 173,9 17 103,9 22 68,0 32
Atrazine D5 221,1 179,0 19 101,0 23 69,0 36
Actochlore 270,0 223,9 10 148,0 20 133,0 34
Actochlore D11 281,1 235,0 10 159,0 27 142,0 34
DIA 174,0 103,9 21 131,9 15 68,0 26
DIA D5 179,1 136,9 17 101,0 20 69,0 40
DEA 188,1 145,9 18 103,9 30 78,9 22
DEA D6 194,1 146,9 18 104,9 31 110,9 14
IPU 207,1 72,0 17 164,9 14 46,1 30
IPU D6 213,1 78,0 23 171,1 17 133,9 28

Les ions les plus abondants sont les ions primaires et la transition ion parent> ion
primaire est utilise lors de la quantification. En revanche, les ions secondaires moins
abondants permettent de dfinir une transition de confirmation. Les ions tertiaires quant eux
malgr leur trs faible intensit peuvent tre ventuellement utiliss comme seconde transition
de confirmation en cas de doute sur lidentification de la molcule. La fragmentation des
composs de la famille des triazines met en vidence que lion 104 est caractristique des
pesticides de cette famille. Il sagit en effet de lion de fragmentation primaire de la DIA et
secondaire pour latrazine et la DEA. Par ailleurs, ce tableau montre quil arrive parfois que
les nergies de collision des molcules natives sont diffrentes de celles des molcules
deutres.

- 104 -
Chapitre II

3. Influence de la nature de la phase mobile

La colonne utilise est celle prcdemment employe lors des analyses par CPL/SM,
savoir une colonne Symmetry Shield RP18 (Waters, 250*3,1mm, dp=5 m). Un dbit de 0,4
ml/min est appliqu.

La phase mobile joue un rle essentiel en CPL/SM. En plus de son importance pour la
sparation des composs, elle influe notamment sur les intensits des signaux observs. Une
tude a t mene sur linfluence de la nature du solvant organique et de lagent acidifiant
ajout la phase mobile sur lionisation des composs.

Les compositions testes sont : une phase mobile compose dune part dactonitrile et
deau acidifis 0,1% soit par de lacide formique (note MeCN/AF), soit par de lacide
actique (note MeCN/AA) ; et dautre part, une phase mobile compose de mthanol et
deau acidifis 0,1% soit par de lacide formique (note MeOH/AF) soit par de lacide
actique (note MeOH/AA) (Figures 2-1 et 2-2). Dans tous les cas, un gradient linaire
dlution pour sparer les diffrents composs est utilis, il consiste incrmenter la
proportion de solvant organique de 50 90% en 12 minutes puis maintenir cette proportion
jusqu la fin de lanalyse. Linfluence de la composition de la phase mobile sur lintensit
des signaux a t tudie lors de linjection dune solution contenant les composs 0,1
mg/L. Par ailleurs, les conditions opratoires dtailles sont dcrites en annexe 2-3.

Les intensits daires observes obtenues par dtection en mode MRM sont illustres
sur les figures 2-1 et 2-2. Seules les transitions ions prcurseurs> ions primaires ont t
reportes.

La variation des aires observes souligne linfluence significative de la composition de


la phase mobile sur lionisation des molcules, tape clef du processus danalyse. La phase
mobile compose deau et dactonitrile acidifis 0,1% par de lacide formique est favorable
lionisation des composs et conduit une augmentation des intensits observes.

- 105 -
Chapitre II

3,1E+07
Isoproturon
Isoproturon D6
2,6E+07
Atrazine
Atrazine D5
2,1E+07
Intensits

1,6E+07

1,1E+07

6,0E+06

1,0E+06
MeCN/AF MeCN/AA MeOH/AF MeOH/AA
Composition de la phase mobile

Figure 2-1 : Evolution du signal de latrazine, latrazine D5, de lIPU et lIPU D6 en fonction de la
nature de la phase mobile lors de linjection dune solution 0,1 mg/L (n=3) (mode MRM, ESI +),
les conditions opratoires dtailles sont dcrites en annexe 2-3.
9,2E+06
DIA DIA D5
8,2E+06
DEA DEA D6

7,2E+06

6,2E+06

5,2E+06
Intensits

4,2E+06

3,2E+06

2,2E+06

1,2E+06

2,0E+05
MeCN/AF MeCN/AA MeOH/AF MeOH/AA
Composition de la phase mobile

Figure 2-2 : Evolution du signal de la DIA, la DIA D5, la DEA et la DEA D6 en fonction de la nature
de la phase mobile lors de linjection dune solution 0,1 mg/L (n=3) (mode MRM, ESI+),
les conditions opratoires dtailles sont dcrites en annexe 2-3.

- 106 -
Chapitre II

Cette tendance est vraie pour tous les composs lexception de lisoproturon pour
lequel les intensits sont faibles et restent quasi-identiques quelque soit la phase mobile
utilise. De faon gnrale, la prsence dactonitrile amliore la sensibilit. Par ailleurs, en
prsence dactonitrile, linfluence de lacide utilis est beaucoup plus marque quelle ne
lest lors de lutilisation de mthanol. Lacide formique semble favoriser lionisation par
rapport lacide actique pour les molcules tudies.

Ces observations ont permis de retenir pour notre tude, une phase mobile compose
deau et dactonitrile acidifis 0,1% en acide formique.

4. Sparation chromatographique des composs cibls

Une solution contenant les composs en mlange 0,05 mg/L a t injecte en


utilisant pour la sparation une phase mobile compose deau et dactonitrile acidifis
0,1% en acide formique. Les transitions suivies sont celles correspondants aux ions de
quantification (ions primaires du tableau 2-2) de chacune des molcules cibles. Le
chromatogramme obtenu dans ces conditions est prsent figure 2-3.

1 2 3 4 5

Figure 2-3 : Sparation des composs une teneur de 0,05 mg/L, dtection MRM (mode positif)
1/ DIA et DIA D5 tr = 3,5 min 2/ DEA et DEA D6 tr = 4,2 min 3/ IPU et IPU D6 tr = 7,2 min
4/ Atrazine et Atrazine D5 tr = 7,9 min 5/ Actochlore et Actochlore D11 tr = 11,5 min,
les conditions analytiques dtailles sont celles prsentes en annexe 2-3.

- 107 -
Chapitre II

Le chromatogramme prsente uniquement cinq pics du fait que les composs marqus
ont le mme comportement chromatographique que les molcules doser et donc des temps
de rtention identiques. Les composs sont tous spars dans les conditions analytiques
appliques. Les mtabolites de latrazine ont des temps de rtention trs voisins du fait de la
similitude de leurs proprits physico-chimiques. Latrazine et lisoproturon sont galement
trs proches, ils ont galement des coefficients de partage octanol/eau relativement similaires
(tableau 2-1). La sensibilit de la mthode sera discute par la suite lors de la caractrisation
de la mthode danalyse par DI/CPL/SM.

II. 3. Caractrisation de la mthode danalyse par DI/CPL/SM

Une fois la mthode danalyse par DI/CPL/SM de pesticides dveloppe, il a t


ncessaire de la valider. La validation est dfinie comme la confirmation par examen et
lapport de preuves objectives du fait que les prescriptions particulires en vue de lutilisation
prvue dtermine sont remplies [209]. Cest ainsi que les diffrentes caractristiques de la
mthode comme la linarit, les capacits de dtection et de quantification, la reproductibilit
ont t values. La justesse a galement t estime via la participation un essai inter-
laboratoires. Lvaluation des incertitudes associes aux rsultats des mesures effectues dans
les eaux souterraines sappuie sur la quantification des diffrentes caractristiques obtenue
lors de la caractrisation de la mthode.

Dans un premier temps, la slectivit de la mthode a t tudie. Celle-ci est assure


la fois par la spcificit des temps de rtention et par la dtection base sur le suivi des
transitions ion molculaire > ion de fragmentation pour chacune des molcules cibles. La
slectivit de la mthode a t vrifie par linjection individuelle de chacun des composs
afin de vrifier labsence dinterfrents aussi bien avec les ions de quantification quavec les
ions de confirmation. La mthode dveloppe permet le dosage slectif des composs
dintrt.

1. Etalonnage par CPL/SM


1.1. Dfinition et principe

Ltalonnage en CPL/SM seffectue en injectant plusieurs solutions contenant la


molcule tudie une concentration variable et lhomologue marqu une concentration

- 108 -
Chapitre II

fixe. Lutilisation de la DI associe la CPL/SM implique lexploitation des rapports entre


les intensits observes pour la molcule tudie (I) et son homologue marqu (I*) en
fonction des rapports entre les quantits de molcule (Q) et de molcule marque (Q*). Cette
exploitation repose sur le fait que la teneur en molcule marque est identique quelle que soit
la solution talon considre. A partir des rsultats obtenus, un modle dtalonnage
permettant de dcrire les points observs est recherch. En gnral, en chimie analytique, le
modle dtalonnage recherch est linaire et de type y = b1x + b0, dans notre cas, I/I* =
f(Q/Q*).

La linarit est dfinit comme la capacit dune mthode danalyse, lintrieur dun
certain intervalle, fournir une rponse ou des rsultats proportionnels aux valeurs de la
grandeur mesure [210]. Une fois le modle postul, il faut vrifier son adquation lors de
lexprimentation. Le coefficient de corrlation (not r) caractristique dune fonction affine
nest pas un outil suffisant pour confirmer ladquation du modle postul avec les points
exprimentaux. Il est ncessaire dutiliser dautres indicateurs ou tests statistiques.

1.2. Gamme dtalonnage et rsultats

Le modle dtalonnage a t tudi sur une gamme de neufs concentrations comprises


entre 1 et 125 g/L (1/ 3/ 5/ 10/ 25/ 50/ 75/ 100/ 125). Quelle que soit la solution talon
considre, la concentration de la molcule marque est constante et fixe 50 g/L. Les
droites dtalonnage obtenues en mode MRM ESI (+) correspondant au suivi des transitions
ions prcurseurs>ions de fragmentation pour chaque couple de composs sont prsentes sur
la figure 2-4. Les conditions analytiques appliques sont dcrites en annexe 2-3.

- 109 -
Chapitre II

3,5
Atrazine/Atrazine D5
DIA/DIA D5 y = 1,2533x + 0,01
R 2 = 0,9997
3 DEA/DEA D6
y = 1,1764x + 0,0031
Actochlore/Actochlore D11
R2 = 0,9997
IPU/IPU D6
2,5 y = 0,991x + 0,004
R 2 = 0,9998
y = 0,8983x + 0,0021
R2 = 0,9999
Rapport I/I*

2
y = 0,8702x + 0,0177
R 2 = 0,9993
1,5

0,5

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3
Rapport Q/Q*
Figure 2-4 : Evolution du rapport des intensits entre la molcule (I) et la molcule marque (I*) en
fonction du rapport des concentrations de la molcule (Q) et la molcule marque (Q*) pour
latrazine, la DIA, la DEA, lactochlore et lIPU, dtection MRM, mode positif n=1
Q : gamme de concentrations allant de 1 125 g/L et Q* = 50 g/L.

Visuellement, la droite passe au plus prs des points exprimentaux. Les valeurs des
coefficients de corrlation sont dailleurs trs proches de 1. Afin de confirmer cette
observation, le test dadquation du modle dtalonnage est effectu pour chaque compos
tudi.

1.3. Logigramme de dcision

Comme dj voqu auparavant, le modle recherch est un modle linaire de type


y = b1x + b0. Le test dadquation est alors appliqu aux droites dtalonnage obtenues. Les
estimateurs de la pente (b1) et de la constante (b0) sont obtenus par la mthode des moindres
carrs. Le test dadquation au modle est obtenu par lanalyse de la variance. Il permet de
sassurer que le modle explique les valeurs observes mais galement que la rponse est
proportionnelle la quantit introduite sur toute la gamme considre. Le test consiste en fait
vrifier si la part de la variance due lerreur de modle nest pas suprieure la variance de
lerreur exprimentale. Lors de ltude de ladquation de la droite dtalonnage, le cas idal

- 110 -
Chapitre II

correspond un modle qui la fois explique les donnes mais est galement linaire.
Malheureusement, cette situation est rarement rencontre. Faut-il alors changer de modle
mathmatique ? Faut-il restreindre le domaine ? Dans tous les cas, lobjectif principal est de
minimiser les incertitudes.

Les diffrences de comportements observs pour les composs cibls ont conduit
une rflexion sur la prise de dcision dans le cas o le modle nest pas linaire. Un
logigramme de dcision a t labor et illsutr par la figure 2-5. En appliquant ce
logigramme tous les composs tudis, diffrentes situations se sont prsentes. Tout
dabord, lors de la modlisation de la fonction dtalonnage, le cas idal correspond un
modle qui la fois explique les donnes mais est galement linaire. Cependant, dans le cas
o ltude de ladquation du modle dtalonnage na pu aboutir sur un modle considr
comme linaire. Il convient de dtudier tout particulirement les rsidus :
les points suspects sont recherchs et ventuellement limins aprs justification.
Ltude de ladquation du modle linaire est ensuite de nouveau effectue (cas de
latrazine et de lactochlor).
les rsidus prsentent une allure parabolique, le test dadquation un modle
quadratique (y = b2x + b1x + b0) est effectu :
si le modle explique les donnes :
et la linarit est vrifie, une saturation du signal aux grandes
concentrations peut tre suspecte et le domaine de la gamme
dtalonnage peut tre rduit. Ladquation un modle linaire
est ensuite de nouveau effectue (cas de la DEA).
mais la linarit nest pas vrifie, il convient de rechercher les
points suspects : si des points suspects existent, leur limination
est possible aprs justification. Ladquation un modle
linaire est ensuite de nouveau effectue (cas de la DIA).
si le modle nexplique pas les donnes, il convient de rechercher les
points suspects :
parfois, aucun point ne peut tre considr comme suspect (cas
de lisoproturon).
Dans tous les cas, une incertitude de modlisation est prendre en compte lors du calcul de
lincertitude finale du rsultat de la mesure.

- 111 -
Chapitre II

Droite
dtalonnage

Elimination des
Adquation du points aberrants
modle y=b1x+bo
Rpartition non alatoire
ou existence de points
aberrants
Dcision : modle
satisfaisant
tude des rsidus
rduits
Rpartition alatoire Dcision : modle
satisfaisant

Incertitude due au modle


( X X )
u( y c ) = srs (1 / n ) +
( X X )
i

Figure 2-5 : Logigramme de dcision concernant ladquation du modle dtalonnage.

- 112 -
Chapitre II

1.4. Exemple de latrazine

Le tableau 2-3 reprsente un tableau Excel dvelopp au LNE qui permet


lexploitation des donnes obtenues pour les neufs niveaux de la gamme dtalonnage de
latrazine et de latrazine D5. Comme dj voqu, les rsultats du tableau sont exprims en
rapport. Les calculs des diffrents lments ncessaires ltude du modle postul sont
dtaills dans lannexe 2-4.
Tableau 2-3 : Exploitation de la gamme dtalonnage pour latrazine et latrazine D5.

- 113 -
Chapitre II

Lanalyse de la variance (ANOVA) est ensuite effectue, elle permet de tester


linfluence dune ou de plusieurs variables qualitatives sur une variable quantitative, un
risque donn., le tableau 2-4 prsente les rsultats obtenus. Les calculs des diffrents lments
ncessaires lanalyse de la variance sont prsents en annexe 2-5.

Tableau 2-4 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de latrazine/atrazine D5.

Somme
Source de Degr de Carr
des carrs Fobs F(5%)
variation libert moyen
des carts
Expliqus
24,589 1 2,46E+01 1553045 4,11
(rgression)
Non Linarit 1,24E-03 7 1,77E-04 11,19 2,28
Rsiduels 5,7E-04 36 1,58E-05
Totaux 24,591 44

Les rgles de dcision sont effectues en deux tapes qui consiste vrifier:
si la rgression est valide, cest dire si le modle explique les donnes, pour cela, il
faut que, F obs Expliqus > F(95 %),
si le modle est linaire, pour cela, F obs Non-linarit < F(95 %) .

Dans le cas de latrazine et de latrazine D5, le modle postul explique les donnes
mais la linarit nest pas vrifie. Il convient alors dtudier de manire plus dtaille le
comportement des rsidus (figure 2-6).

- 114 -
Chapitre II

0,06

0,04
Somme des rsidus

0,02

0,00
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

-0,02

-0,04

-0,06

Rapport Q/Q*

Figure 2-6 : Reprsentation graphique de la somme des rsidus en fonction du rapport des
concentrations (Q/Q*) entre latrazine et latrazine D5.

Cette figure montre que les rsidus ont une dispersion alatoire. Cependant, la valeur
du rapport Q/Q* denviron 1,9 correspondant une concentration en atrazine de 100 pg/l
prsente une dispersion suprieure aux autres. Par ailleurs, la septime colonne du tableau 2-3
met en vidence que les valeurs des rsidus de non linarit pour ce point sont suprieures aux
autres niveaux de la gamme. Ce point semble suspect, il est donc limin. Ltude du modle
dadquation est de nouveau mene sur les huit points restants de la gamme (tableau 2-5).

- 115 -
Chapitre II

Tableau 2-5 : Exploitation de la gamme dtalonnage pour latrazine et latrazine D5 sans le


point 100 pg/l.

Malgr un cart type plus lev pour le point le plus haut de la gamme (125 pg/l),
lhomognit des variances est respecte et lanalyse de la variance a t effectue (tableau
2-6 ).

- 116 -
Chapitre II

Tableau 2-6 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de latrazine/atrazine D5 sans le


point 100 pg/l.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
18,809 1 1,88E+01 3075020 4,15
(rgression)
Non Linarit 8,78E-05 6 1,46E-05 2,39 2,40
Rsiduels 2,0E-04 32 6,12E-06
Totaux 18,809 39

Aprs limination du point 100 pg/l, le modle explique les donnes et est linaire
avec un degr de confiance de 95 %.

1.5. Rsultats pour lensemble des composs cibls

Ltude de ladquation du modle dtalonnage a t effectue pour tous les


composs laide du logigramme (figure 2-5). La dmarche adopte pour chacun des
composs est dtaille en annexe 2-6. Le tableau 2-7 rsume les diffrents comportements
observs pour les composs tudis lors de ltude de ladquation du modle dtalonnage.

Tableau 2-7 : Comportements des molcules lors de ltude de ladquation du modle dtalonnage.

Composs Modle Adquation

droite non
Atrazine
droite sans concentration 100 pg/l oui
droite non
Actochlore
droite sans concentration 75 pg/l oui
droite non
DEA degr 2 oui
droite sans concentration 125 pg/l oui
droite non
DIA degr 2 non
droite sans concentration 125 pg/l oui
droite non
Isoproturon degr 2 non
droite sans concentration 125 pg/l non

- 117 -
Chapitre II

Les principales causes du dfaut dadquation au modle dtalonnage linaire de la


mthode dveloppe par DI/CPL/SM sont dune part ltude dun trop grand domaine de
concentrations et dautre part, lexistence de donnes suspectes ayant par exemple un cart de
non linarit suprieur aux autres points de la gamme et pouvant tre dues des problmes
analytiques. Dans tous les cas, une incertitude de modlisation est associe aux diffrents
rsultats. Son expression est indique sur le logigramme de dcision (figure 2-5). Dans le cas
de lisoproturon, lincertitude de modlisation va prendre en compte le dfaut de linarit.

2. Limites de dtection et de quantification


2.1. Dfinition

La reprsentation graphique des rponses en fonction des concentrations est souvent


dcrites comme ayant deux zones (figure 2-7).

LQ

LD

Concentration (C)

Comportement Modle mathmatique


dynamique R = f (C)

Figure 2-7 : Reprsentation schmatique des limites de dtection et de quantification.

Une zone o la gamme est considre comme linaire. La limite basse de ce domaine
est la limite de quantification (LQ). Il sagit de la plus petite quantit dun compos analyser
dans un chantillon pouvant tre dtecte et quantifie avec un risque connu [211].

En revanche, la gamme est considre comme dynamique au sein de la deuxime


zone, cest dire que la rponse nest plus proportionnelle la concentration. Cest dans cette
zone que se trouve la limite de dtection (LD). Il sagit de la plus petite quantit dun analyte

- 118 -
Chapitre II

doser dans un chantillon pouvant tre dtecte et considre comme diffrente de la valeur
du blanc mais non ncessairement quantifie avec un risque connu [211].

La connaissance des valeurs des LD et LQ est ncessaire afin dvaluer les


performances dune mthode analytique et de vrifier sa capacit quantifier les pesticides
des seuils faibles conformes la rglementation.

2.2. Dmarche et limites de dtection

Aucune approche de dtermination de LD et LQ nest fondamentalement impose


dans le domaine de la chimie analytique. Diffrentes dmarches sont proposes dans les
documents normatifs : une mthode issue de ltude de la linarit, une mthode issue de
ltude du blanc de matrice et une mthode par vrification dune limite de quantification
choisie [212]. Au cours de cette tude, seule les LD ont t values selon diffrentes
approches.

Les diffrentes approches retenues pour dterminer la LD de la mthode CPL/SM


pour les diffrents composs sont :
approche a : injection de la solution la plus faible de la gamme dtalonnage savoir
1 g/L : recherche de la concentration pour laquelle Hsignal/hbruit # 3 avec Hsignal tant la
hauteur du signal obtenu pour 1g/L et Hbruit, la hauteur du bruit de fond observ,
approche b : dfinition de la droite dtalonnage (y = b1x + b0) avec y, les intensits
observes et x, les concentrations. Les concentrations tudies sont trs infrieures au
domaine de travail et sont comprises entre 0,025 et 0,1 g/L. La valeur de yLOD est
dtermine comme yLOD = b0 + 3u(b0) si b0 nest pas significativement diffrent de 0.
Cette approche sapparente la mthode issue de ltude de la linarit.
approche c : injections dune solution faiblement dope, savoir 0,1 g/L, le calcul de
lcart type observ sur les rponses (n=5) est effectu et yLOD = 3* , qui se
rapproche de la mthode issue de ltude du blanc de matrice.

Des solutions des concentrations correspondantes aux valeurs de LD obtenues ont


t prpares et injectes afin de les vrifier exprimentalement. Si les solutions injectes ne
permettent pas une diffrenciation du signal observ gal trois fois le bruit de fond, une
autre solution est prpare jusqu obtention dun rapport Hsignal/hbruit # 3. Les diffrentes

- 119 -
Chapitre II

valeurs de LD obtenues pour les composs par les diffrentes approches sont donnes dans le
tableau 2-8.

Tableau 2-8 : Valeurs de limites de dtection obtenues par les diffrentes approches
* Valeur non calcule car lordonne lorigine b0 est significativement diffrent de 0.

LD en g/L
Approches Vrifications
Composs
a b c exprimentales
Atrazine 0,003 0,004 0,014 0,005
Actochlore 0,06 * 0,041 0,05
DEA 0,012 0,013 0,013 0,04
DIA 0,04 * 0,036 0,05
Isoproturon 0,002 0,003 0,006 0,005

Lexemple de la DEA confirme limportance de la vrification exprimentale, la


valeur trouve est en effet quasiment quatre fois plus leve que les valeurs calcules. Dans le
cas de latrazine, la vrification exprimentale permet de confirmer les LD obtenues selon les
approches a et b qui diffrent de celle obtenue avec lapproche c. Les LD obtenues sont trs
basses compares celles obtenues avec des techniques classiques o la CPL est couple
lUV ou une dtection par simple quadriple. Les valeurs de LD obtenues pour les
composs de la famille des triazines et des phnylures par CPL/SM sont de 16 320 fois
plus faibles que celles observes en CPL/SM (annexe 2-2).

2.3. Limites de quantification

La LQ est considre comme la concentration pour laquelle la reproductibilit est de


lordre de 20% [212]. Il est toutefois largement admis que la limite de quantification (LQ)
correspond la concentration pour laquelle le rapport Hsignal/hbruit # 10. Les LQ ont t
dduites partir des rsultats obtenus pour les LD et ont t par ailleurs vrifies
exprimentalement. La LQ est calcule partir des valeurs exprimentales obtenues pour la
LD. Les LQ obtenues sont indiques sur le tableau 2-9.

- 120 -
Chapitre II

Tableau 2-9 : Valeurs de LQ estimes partir des LD (LQ = 10 LD/3).

Composs LQ en g/L
Atrazine 0,02
Actochlore 0,17
DEA 0,13
DIA 0,17
Isoproturon 0,02

Tout comme les LD, les valeurs de LQ obtenues pour les composs de la famille des
triazines et des phnylures par CPL/SM sont de 16 265 fois plus faibles que celles
observes en CPL/SM (annexe 2-2). Ces limites mettent en vidence la fois le gain en
sensibilit apport par une dtection par spectromtrie de masse en tandem mais galement le
potentiel de la mthode analytique dveloppe pour lanalyse de pesticides dans les eaux.

Pour latrazine et lisoproturon, les valeurs de LQ obtenues sont cinq vingt cinq fois
infrieures aux seuils fixs par la rglementation dans le domaine de leau qui sont de 0,1
g/L par pesticide et 0,5 g/L pour la totalit des pesticides. En revanche, au vu des valeurs
de LQ values pour lactochlore, la DEA et la DIA, toutes suprieures 0,1 g/L, une tape
dextraction sur phase solide des pesticides et de pr-concentration reste ncessaire. Ainsi,
malgr la sensibilit de la dtection par SM, ltape de traitement de lchantillon est
indispensable pour contrler au mieux les composs aux seuils fixs par la rglementation.
Par ailleurs, celle-ci peut tre ncessaire lors de lanalyse deaux de diverses natures
composes dinterfrents polaires qui peuvent tre limins au cours de ltape de lavage.

II. 4. Performances de la mthode danalyse des pesticides dans


les eaux par DI/SPE/CPL/SM
1. Extraction sur phase solide : valuation des rendements

La mthode de sparation et de dtection ayant t dveloppe, la mise en place du


protocole analytique global incluant une tape pralable dextraction des pesticides des eaux a
t effectue.

Une tude ralise prcedemment [207] a mis en vidence le potentiel de la cartouche


Oasis HLB pour lextraction de pesticides tudis dans les eaux. Cette tude a port sur les

- 121 -
Chapitre II

molcules de la famille des triazines et des phnylures mais na pas concern la molcule
dactochlore et dactochlore D11. Cependant, il se trouve que ces deux molcules sont les
molcules les plus retenues sur la colonne analytique constitue de phase C18. Par consquent,
il est raisonnable dimaginer quelles le soient galement sur ladsorbant polymrique
hydrophobe de la cartouche. Il est cependant ncessaire de vrifier si les conditions dlution
pralablement dtermines sont suffisantes leur lution. Lors de ltude antrieure, le
protocole dextraction repose sur la percolation dun volume de 250 ml deau ultra-pure dop
sur cartouche Oasis HLB suivant le protocole rappel en annexe 2-1. Le volume de reprise est
alors de 0,25 mL. Les valeurs de LD et LQ ont mis en vidence que la mise en uvre dune
dtection par triple quadriple induit une sensibilit plus leve quune dtection par simple
quadriple ou une dtection UV. Aussi, le protocole dextraction a du tre ajust la
technique analytique utilise. Plusieurs possibilits taient envisageables, dune part le
volume deau pr-concentr pouvait tre diminu de faon quivalente au volume dadsorbant
contenu dans la cartouche et dautre part le volume final de reprise de lextrait sec pouvait
tre augment. La seconde possibilit a t retenue. Par consquent, la seule diffrence avec le
protocole expos en annexe 2-1 rside dans le fait que le volume de reprise est de 1 ml et non
de 0,25 ml. Le facteur de pr-concentration appliqu dans ce cas est donc de 250 au lieu de
1000. Lefficacit de lextraction pour toutes les molcules a t vrifie. Les moyennes des
rendements observs sont illustres par la figure 2-8

- 122 -
Chapitre II

Ions de quantification Ions de confirmation

120

100
Rendements d'extraction en %

80

60

40

20

DIA

DIA D5
DEA

DEA D6
Atrazine

Atrazine D5

Actochlore

Isoproturon

Isoproturon D6
Actochlore D11

Figure 2-8 : Rendements moyens dextraction des pesticides dune eau dope 0,05 g/L (n=3),
V = 250 ml sur cartouche Oasis HLB (Annexe 2-1) et analyse par CPL/SM.

Les rendements moyens obtenus quelle que soit la transition balaye et toutes
molcules confondues sont de 105,5%. Les comportements similaires observs entre les
molcules et leurs homologues marques lors de lanalyse chromatographique laissaient
supposer des comportements identiques lors de lextraction. Les rendements obtenus
confirment cette tendance. Par ailleurs, les conditions dlution sont suffisantes pour dsorber
lactochlore et lactochlore D11. Ces rsultats permettent de confirmer lefficacit de
lextraction de pesticides dans les eaux au moyen dune cartouche Oasis HLB. Le protocole
dextraction est donc valid et utilis pour lanalyse de pesticides dans les eaux.

2. Reproductibilit intralaboratoire de la mthode analytique


2.1. Dfinition

La reproductibilit intralaboratoire est la mesure de la fidlit, lorsque les rsultats


sont obtenus par la mme mthode dans un seul laboratoire en faisant varier une ou plusieurs

- 123 -
Chapitre II

conditions opratoires telles que loprateur, le temps ou lenvironnement [212, 213]. La


fidlit tant le terme gnral qui exprime la variabilit entre des mesures rptes [213, 214].

2.2. Evaluation

La reproductibilit de la mthode a t dtermine au cours de lanalyse des


chantillons de lessai inter-laboratoires AquaTerra . Le dtail des chantillons concerns
par AquaTerra sont prsents en annexe 2-7. La reproductibilit de la mthode
DI/SPE/HPLC/MS a t dtermine sur les rsultats obtenus par deux oprateurs, deux jours
diffrents et sur trois chantillons deaux de concentrations et de natures diffrentes. Les
facteurs temps, oprateurs et matrices ont ainsi t valus (tableau 2-10). Toutes les analyses
ont t conduites en triplicat (A, B et C).

Tableau 2-10 : Rsultats obtenus par le LNE pour les diffrents chantillons deaux.

Concentrations en [ng/L]
Eau souterraine 1 A B C Moyenne CV %
atrazine 9,0 9,5 9,5 9,3 3,4
DEA 74,3 71,6 69,1 71,7 3,6
DIA 41,5 38,7 38,8 39,7 4,0
IPU 12,8 12,1 32,4* 12,5 (sans C) 4,0
actochlore 78,1 79,3 77,1 78,2 1,4
Eau souterraine 2 A B C Moyenne CV %
atrazine 343,2 342,9 341,8 342,6 0,2
DEA 193,0 196,7 191,8 193,8 1,3
DIA 139,4 147,5 140,4 142,4 3,1
IPU 227,0 236,5 226,7 230,1 2,4
actochlore 150,3 148,9 148,3 149,2 0,7
Eau distille A B C Moyenne CV %
atrazine 69,6 70,3 69,8 69,9 0,5
DEA 9,9 9,2 10,0 9,7 4,6
DIA 127,7 130,7 125,5 128,0 2,0
IPU 29,7 30,1 29,7 29,8 0,9
actochlore 251,7 244,6 251,1 249,1 1,6

* : cette valeur a t confirme par le deuxime oprateur Oprateur 1


Oprateur 2

- 124 -
Chapitre II

Tout dabord, lanalyse de lisoproturon dans lchantillon C de leau souterraine a


mis en vidence une erreur lors de la prparation de la solution par lorganisateur de lessai
inter-laboratoires. La valeur de 32,4 a en effet t vrifie et confirme par un deuxime
oprateur. Concernant lensemble des rsultats, la reproductibilit de la mthode
DI/SPE/CPL/SM varie avec le compos et le niveau de concentration considrs de 0,2
4,6%. Ces valeurs de dispersion ont t juges satisfaisantes compte tenu du nombre
important dtapes composant le protocole analytique global de dtermination de ces
pesticides dans leau. Par ailleurs, la dispersion maximale a t observe sur les faibles
teneurs qui sont dix fois infrieures au seuil fix par la rglementation.

3. Etude de la justesse de la mthode via la participation un essai


inter-laboratoires
3.1. Dfinition

La justesse est dfinie par ltroitesse de laccord entre la valeur moyenne obtenue
partir dune large srie de rsultats dessais et une valeur de rfrence accepte [213, 214].
Les valeurs de rfrence peuvent provenir de matriaux de rfrence, de mthodes de
rfrence ou en dernier ressort de valeurs issues dessais inter-laboratoires. La mesure de la
justesse est gnralement exprime en termes de biais ou dcart. Le biais est la diffrence
entre lesprance mathmatique (moyenne) des rsultats dessais et la valeur de rfrence
accepte [214]. La participation lessai inter-laboratoires europen a permis destimer
lexactitude de la mthode dveloppe. La justesse de la mthode DI/SPE/CPL/SM a t
value par le calcul de lcart normalis EN not :

XLNE Xrf
EN =
u LNE + u rf
avec : XLNE moyenne des rsultats du LNE (n=3),
Xrf valeur de rfrence,

uLNE incertitude type associe la moyenne des rsultats du LNE pour la grandeur
mesure,
urf incertitude type associe la valeur de rfrence.
Si la valeur |EN | < 2, alors la mthode dveloppe peut tre considre comme ne prsentant
pas dcart de justesse significatif.

- 125 -
Chapitre II

3.2. Exploitation des rsultats et calcul des carts normaliss

Les rsultats de lessai inter-laboratoires obtenus par les diffrents laboratoires sont
prsents en annexe 2-7. Toutefois, ils ont galement t fournis par les organisateurs sous
forme de z-scores qui permettent de comparer un laboratoire particulier lensemble des
laboratoires. La valeur trouve par le laboratoire en question est compare la valeur de
rfrence en tenant compte de la dispersion des rsultats de tous les laboratoires participants.
Les valeurs de z-scores sont calcules selon :

avec : xlab : la valeur de la moyenne des trois chantillons dun laboratoire donn,
x: la concentration de leau dope (valeur de rfrence),
: la dispersion des laboratoires.
Pour quun laboratoire ait des rsultats comparables aux autres, le |Zscore| doit tre infrieur
2. Si |Zscore| est suprieur 2 alors la valeur du laboratoire est significativement diffrente de
la valeur de rfrence. Les valeurs de z-scores obtenues pour lanalyse des diffrents
chantillons deaux sont prsentes sur les figures 2-9 2-11. Le LNE correspond au
laboratoire n10.

- 126 -
Chapitre II

Figure 2-9 : Rsultats exprims sous forme de z-scores pour lanalyse des pesticides dans
lchantillon deau souterraine (level 1).

- 127 -
Chapitre II

Figure 2-10 : Rsultats exprims sous forme de z-scores pour lanalyse des pesticides dans
lchantillon deau souterraine (level 2).

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Chapitre II

Figure 2-11 : Rsultats exprims sous forme de z-scores pour lanalyse des pesticides dans
lchantillon deau distille (level 3).

Plus le laboratoire est proche de la valeur de rfrence accepte, plus la valeur de z-


score est faible. Lorganisateur de lessai inter-laboratoires a soulign le fait que le laboratoire
10 est celui qui a obtenu les rsultats les plus proches des concentrations de dopages. En effet,
quels que soeient le compos recherch, le type deau ou le niveau de concentration, les z-
scores obtenus par le LNE (laboratoire 10) sont compris entre -0,4 et 0,05 ; ce qui est trs
satisfaisant.

Ainsi, la justesse a t value partir des rsultats de lessai inter-laboratoires, les EN


ont t calculs pour les trois chantillons deaux de nature et concentrations diffrentes
(tableau 2-11).

- 129 -
Chapitre II

Tableau 2-11 : Valeurs des carts normaliss pour les trois chantillons deaux de nature et
concentration diffrentes.

Ecart normalis
Composs
Eau souterraine 1 Eau souterraine 2 Eau distille
Atrazine -0,22 0,11 0,05
Actochlore -0,11 -0,05 -0,05
DEA -0,33 -0,21 -0,10
DIA -0,05 -0,21 -0,02
IPU -0,42 0,03 0,06

Toutes les valeurs absolues des carts normaliss EN sont infrieures 2. Par ailleurs,
les valeurs caractristiques de EN sont la fois positives et ngatives ce qui indique labsence
deffet systmatique. Quels que soient la teneur et le type deau, il nexiste pas de diffrence
significative entre les valeurs donnes par le LNE et les valeurs consensuelles.

4. Evaluation des incertitudes de mesures

Comme le prconise la norme ISO/CEI 17025, une incertitude doit tre associe aux
rsultats fournis. Les diffrentes caractristiques de la mthode ayant t values, les
incertitudes de mesures peuvent tre estimes en exploitant les informations recueillies lors de
la caractrisation de la mthode.

4.1. Dtermination des sources dincertitudes

En mtrologie, il est communment rpandu que le rsultat dune mesure nest pas une
valeur unique mais un ensemble de valeurs numriques pouvant avoir des probabilits
diffrentes. Lincertitude de mesure est dfinie comme un paramtre associ au rsultat dune
mesure, qui caractrise la dispersion des valeurs. Diffrentes sources peuvent tre identifies
et la loi de propagation des incertitudes est alors applique. La variance de la mesure peut tre
exprime comme tant :
umthode= ujustesse + ureproductibilit+ umodle+ uautre(s) facteur(s)

- 130 -
Chapitre II

Il sagit de combiner les incertitudes associes aux diffrentes caractristiques values ainsi
qu dautres facteurs qui sont dtermins par loprateur technique en fonction de sa
connaissance et de la difficult du protocole analytique global.

4.2. Rsultats des calculs dincertitudes

Au cours de cette tude, lincertitude considre est :


umthode= ujustesse + ureproductibilit+ umodle
Ainsi, seules les incertitudes lies la justesse, la reproductibilit et au modle seront prises
en compte. Lincertitude de la mthode SPE/DI/HPLC/MS a t dfinie pour tous les
composs. Les rsultats des calculs dincertitudes de mesure sont indiqus sur le tableau 2-12.
Lincertitude due la reproductibilit est calcule partir de lcart-type des chantillons
analyss. Les mesures ayant t rptes trois fois de manire indpendante :
ureproductibilit = LNE/n.
Lincertitude due la justesse est calcule partir de lcart-type des valeurs obtenues
par les dix laboratoires. En ce qui concerne lincertitude de modlisation, elle est calcule
partir de la formule donne dans le logigramme de la figure 2-5.

Les rsultats obtenus montrent une variation de lincertitude en fonction la fois du


compos et de la concentration (tableau 2-12). Les valeurs sont comprises entre 1,4 et 6,6%
pour des concentrations comprises en 0,03 et 0,35 g/L. Cependant, pour des niveaux trs de
10 50 fois plus faibles que les valeurs fixes par la rglementation, les incertitudes obtenues
sont lgrement plus leves et sont de lordre de 12%. Globalement, ces incertitudes restent
faibles et satisfaisantes compte tenu du nombre important dtapes intgres dans le protocole
analytique global.

- 131 -
Chapitre II

Tableau 2-12 : Incertitudes des rsultats de mesures associes chacune des molcules pour deux niveaux de concentration diffrents.

Incertitude Incertitude
Incertitude due Incertitude Part due la
Moyenne en due la due au u mthode
Eau souterraine 1 la reproductibilit relative reproductibilit
ng/L justesse modle ng/L
ng/L globale % %
ng/L ng/L
Atrazine 9,32 0,18 0,97 0,002 0,99 10,6 18,6
DEA 71,70 1,50 3,13 0,003 3,47 4,8 43,2
DIA 39,70 0,92 1,44 0,005 1,71 4,3 53.8
IPU 12,45 0,29 1,82 0,007 1,84 14,8 15,5
Actochlore 78,20 0,64 3,22 0,005 3,28 4,2 19,4
Eau souterraine 2
Atrazine 342,63 0,45 7,49 0,002 7,51 2,2 6,0
DEA 193,80 1,47 7,37 0,003 7,52 3,9 19,6
DIA 142,40 2,55 9,03 0,005 9,39 6,6 27,2
IPU 230,10 3,22 0,28 0,007 3,23 1,4 99,6
Actochlore 149,20 0,59 3,83 0,005 3,88 2,6 15,3
Eau distille
Atrazine 69,88 0,19 1,66 0,002 1,67 2,4 11,6
DEA 9,66 0,26 0,97 0,003 1,00 10,4 25,8
DIA 127,97 1,51 2,89 0,005 3,26 2,5 46,2
IPU 29,83 0,15 0,48 0,007 0,51 1,7 29,0
Actochlore 249,10 2,28 12,82 0,005 13,02 5,2 17,5

- 132 -
Chapitre II

II. 5. Conclusions

Une mthode de dilution isotopique associe la chromatographie en phase liquide


couple la spectromtrie de masse en tandem a t dveloppe pour la dtermination de
pesticides dans les eaux. Les diffrentes caractristiques de la mthode ont t values et les
incertitudes de mesures calcules. Cette tude a abouti la validation du protocole analytique
dvelopp pour le suivi de rsidus de pesticides dans les eaux des seuils trs infrieurs
ceux de la rglementation. De plus, avec cette mthode de faibles incertitudes sont obtenues
quels que soient le compos et le seuil considrs.

Au vu des performances obtenues avec la mthode dveloppe pour lanalyse de


pesticides dans les eaux, la DI/CPL/SM associe une tape de traitement de lchantillon
judicieusement choisie semble tre une technique prometteuse pour lanalyse de rsidus de
pesticides dans les matrices cralires.

- 133 -
Chapitre II

- 134 -
Chapitre III

Chapitre III : Pesticides dans les matrices cralires :


dveloppement de la mthode danalyse par CPL/SM

La France est le premier producteur agricole de crales ; le traitement de ce type de cultures


ncessite lutilisation dune grande varit de pesticides. Cette diversit rend ncessaire
lanalyse de nombreuses molcules. Cependant, comme la quantification dun nombre illimit
de composs nest pas ralisable, il est ncessaire deffectuer un choix judicieux de ceux
analyser. Les molcules choisies doivent tre reprsentatives des produits appliqus aux
diffrents stades sur les cultures de crales. Ainsi, aprs avoir slectionn les molcules
dintrt, le dveloppement de la mthode danalyse par CPL/SM a t effectu. Ainsi, il
convient dans un premier temps de dfinir les conditions de dtection par SM puis de
dterminer ensuite les conditions chromatographiques. Par ailleurs, linfluence de la
composition de lchantillon inject a galement t tudie. Enfin, les limites de
quantification ont t values et ltalonnage effectu dans les conditions analytiques
retenues.

- 135 -
Chapitre III

III. 1. Matrices et composs cibls


1. Critres de choix

Les matrices cibles au cours de cette tude sont les crales. Ces cultures reprsentent
effectivement la plus grande surface agricole cultive en France. Ce type de denres occupe
une place importante dans l'conomie mondiale. Elles sont indispensables l'alimentation
humaine et en constituent la base. Ainsi, les pesticides slectionns pour cette tude sont ceux
lis la culture des crales (bl, avoine, seigle, triticale, sorgho, mas) mais aussi leur
stockage. Les substances actives utilises lors du stockage sont en effet susceptibles dtre
retrouvs sur le produit final. Les matrices cralires prsentent un intrt particulier tre
tudier et ceci est dautant plus vrai pour le bl. Actuellement, 580 millions de tonnes de bl
sont effectivement produites chaque anne dans le monde, c'est--dire prs de 100 kg par
habitant et par an. En outre, 66% des surfaces de bl reoivent au moins deux traitements
dherbicides, 80% des surfaces font lobjet dau moins deux traitements fongicides et 52% des
surfaces reoivent au moins un traitement insecticide [215].

En France, plus de 500 substances actives sont actuellement homologues et


disponibles sur le march europen [3]. Comme il nest pas possible de toutes les tudier, un
choix a du tre effectu. Les composs retenus doivent tre reprsentatifs des diffrents
produits appliqus sur les cultures de crales et donc des pesticides susceptibles dy tre
retrouvs.

Dans un premier temps, les molcules ont t choisies en fonction des traitements
prconiss par lindex phytosanitaire [3]. Il sagit dun document qui rpertorie toutes les
substances actives ayant une autorisation de mise sur le march dlivre par le ministre
charg de lAgriculture. Cette premire liste a ensuite t rvise suite aux conseils donns
par des contacts de la Direction Gnrale de la Concurrence, de la Consommation et de la
Rpression des Fraudes (DGCCRF). Ils ont en effet eu la gentillesse dattirer notre attention
sur les rapports concernant les niveaux de contamination europennes des denres
alimentaires dits par la Direction Gnrale de la Sant et de la Consommation de lUnion
Europenne (DGSANCO). Ltude du rapport relatant les donnes de surveillance de lanne
2004 a permis de dfinir les substances actives les plus retrouves au sein de lunion
europenne pour les matrices tudies. Ces substances, dites du top ten sont le pirimiphos
mthyl, la deltamthrine, le chlorpyriphos, le lindane, la bifenthrine, le parathion thyl, le

- 136 -
Chapitre III

dimethoate, le dichlorvos, le malathion, le butoxyde de piperonyle et le chlorpyriphos mthyle


[216]. Ainsi, les molcules faisant partie du Top Ten prsentent un intrt particulier
tre tudies. Cependant, certaines dentre elles ne sont pas favorables une analyse par CPL
comme le lindane, la deltamthrine ou la bifenthrine. Compte tenu de leurs proprits
physicochimiques, la mthode qui semble la plus adapte pour les analyser est la CPG
couple un dtecteur capture dlectron spcifique aux composs halogns ou un
spectromtre de masse.

2. Proprits physico-chimiques des molcules cibles

Les molcules slectionnes sont reprsentatives des molcules les plus appliques et
dun grand nombre de classes chimiques diffrentes (Tableau 3-1). Au total, 38 composs
sont tudis au cours de cette tude et sont reprsentatifs de vingt-sept familles chimiques ;
les plus abondantes sont : les aryloxyacides, les carbamates, les organophosphors, les
triazoles et les chloroactamides. Pour chaque molcule cible, les proprits physico-
chimiques ont t recherches [217, 218]. En effet, une donne comme le coefficient de
partage octanol/eau (log P) reflte la polarit dune molcule, facteur important lors de la mise
au point dune mthode danalyse chromatographique. Leurs proprits physico-chimiques
(log P, pKa) sont donnes dans le tableau 3-1. Les formules chimiques des composs sont
indiques en annexe 3-1. Au vu des proprits physico-chimiques des diffrentes molcules, il
apparat trs clairement que les molcules couvrent un large panel en terme de polarit et
dacido-basicit. Les valeurs de log de P stendent de -2 4,9 et traduisent des proprits
antagonistes en terme de polarit des pesticides. Les pKa des molcules varient de 2,3 10,5,
les composs prsentent aussi bien des proprits acides que basiques. La varit des
proprits physico-chimiques augmente la difficult du dveloppement dune mthode
danalyse multirsidus.

- 137 -
Chapitre III

Tableau 3-1 : Modes daction, classes chimiques et proprits physico-chimiques associs aux 38
pesticides cibls (A : acaricide, F : fongicide, H : herbicide, I : insecticide, N : nmaticide, SC :
substance de croissance) [217-218].

Substance active Mode d'action Famille chimique log P pKa


2,7 (pH 1)
2,4 D H Aryloxyacide 2,8
-1,01 (pH 9)
Actochlore H Chloroactamide 4,14 -
Aldicarbe I/N Carbamate 1,15 -
Strobilurine,
Azoxystrobine F 2,5 -
mthoxyacrylate
0,77 (pH 5)
Bentazone H Thiadiazinone 3,28
-0,55 (pH 9)
1,31 (pH 2)
Bromoxynil H Benzonitrile 3,86
1,04 (pH 7)
Carbofuran I/N Carbamate 1,52 -
Carfentrazone thyle H Triazolinone 3,36 -
Chlorpyriphos I Organophosphor 4,7 (pH 7) -
Chlortoluron H Phnylure 2,5 -
Cyproconazole F Triazole 2,91 (pH 7) -
Cyprodinil F Anilinopyrimidine 4 (pH 5-9) 4,44
Dichlorvos I Organophosphor 1,9 -
Diflufnicanil H Phenoxynicotinanilide 4,9 -
Dimthenamide H Chloroacetamide 1,89 -
Dimethoate I/A Organophosphor 0,71 2
Fenpropidine F Pipridine 2,58 (pH 7) 10,5
Fipronil I Pyrazole 4 -
1 (pH 4)
Florasulam H Sulfonamide 4,54
-2,06 (pH 10)
Fludioxonil F Phnylpyrrole 4,12 -
Fluroxypyr H Acide picolinique 2 2,94
Flutriafol F Triazole 2,3 2,3
Hexaconazole F Triazole 3,9 2,3
Imazaquine H/SA Imidazolinone 0,34 3,8
Imidaclopride I Nitromethylene 0,57 -
2,2 (pH 5)
Ioxynil H Benzonitrile 4,1
0,23 (pH 9)
Isoxaben H Amide 2,64 -
Malathion I/A Organophosphor 2,89 -
Mcoprop H Aryloxyacide -0,19 (pH 7) 3,11
0,9 (pH 5)
Mesotrione H Trictone 3,12
-1 (pH 7-9)
Metolachlor H Chloroactanilide 2,9 -
2,12 (pH 5)
Mtosulam H Triazolopyrimidine 4,8
3,08 (pH 9)
Prochloraze F Imidazole 4,12 3,83
Pyrimiphos-mthyl I/A Organophosphor 4,2 -
Quinoxyfne F Quinoline 4,66 3,56
Spiroxamine F Spiractalamine 2,8 (pH 7) 6,9
Triallate H Carbamate 4,66 -
Tridemorphe F Morpholine 4,2 (pH 7) 6,5

- 138 -
Chapitre III

Par ailleurs, le but de cette tude est le dveloppement dune mthode danalyse
primaire, par consquent la dilution isotopique doit tre mise en oeuvre. Cependant, il na pas
t possible dobtenir pour toutes les molcules, leurs homologues marqus. Ainsi, sur les
trente-huit pesticides retenus seuls quatorze composs marqus sont disponibles sur le
march : le 2,4 D 13C6, lactochlore D11, laldicarbe D3, la bentazone D6, le carbofuran D3, le
chlorpyriphos D10, le chlortoluron D6, le dichlorvos D6, le dimthoate D6, limidacloprid D4,
le malathion D6, le mcoprop D3, le mtolachlor D6 et le pirimiphos mthyl D6.

Les molcules ayant t choisies, le dveloppement de la mthode danalyse a ensuite


t effectu.
III. 2. Dveloppement de la mthode danalyse par CPL/SM

1. Optimisation des conditions de dtection par SM

Lors du dveloppement dune analyse par CPL/SM, les conditions de dtection par
SM sont optimiser avant les conditions chromatographiques. La premire rflexion
concerne le choix de la source dionisation utiliser. Au cours du chapitre 1, il a t mis en
vidence que la littrature scientifique reflte une utilisation plus rpandue de la source ESI
par rapport lAPCI. Par ailleurs, lexprience acquise au sein du LNE a montr quune
dtection par ESI est plus adapte la majorit des composs tudis que lAPCI. Le
chauffage du tube de nbulisation des hautes tempratures (350 550C) selon le dbit de
phase mobile utilis en APCI, ncessaire lionisation, rend difficile la dtection et la
quantification de certains pesticides thermolabiles. Ainsi, afin de saffranchir de cette
difficult supplmentaire et dans le but de dvelopper une mthode multirsidus, lESI a t
choisie et utilise au cours de cette tude.

1.1. Procdure de dtermination des ions prcurseurs et des ions de


fragmentation

La phase de dtermination des ions prcurseurs et des ions de fragmentation est


dterminante pour la suite des tudes car elle influe la fois sur la qualit de lanalyse
notamment en terme de sensibilit mais aussi sur la fiabilit des rsultats. Comme dj
voqu lors du chapitre 2, la dtermination des ions prcurseurs se fait par infusion directe des
composs via un pousse-seringue. La phase mobile utilise pour raliser cette tude doit se

- 139 -
Chapitre III

faire en utilisant des solvants proches de ceux susceptibles dtre utiliss lors de lanalyse
chromatographique. De plus, les pressions des diffrents gaz utiliss pour permettre
lionisation des molcules dpendent du dbit de la phase mobile. Dans un premier temps, les
essais ont donc t men avec la phase mobile qui a conduit une efficacit optimale lors du
dveloppement de la mthode danalyse de pesticides dans les eaux, savoir, une phase
mobile compose deau et dactonitrile acidifis 0,1% dacide formique. Les conditions
opratoires utilises sont donnes dans le tableau 3-2.

Tableau 3-2 : Conditions opratoires utilises lors de la dtermination des ions prcurseurs et des
ions de fragmentation (u.a. : unit arbitraire).

H2O et MeCN acidifis 0,1 % d'acide


Phase mobile
formique
Dbit de phase mobile 0,4 ml/min
Dbit du pousse seringue 5 l/min
Source d'ionisation ESI
Tension 4500 V
Gaz schant 50 u.a.
Gaz auxiliaire 20 u.a.
Temprature Capillaire 350C
Pression du gaz de
1,5 mTorr
collision

Lion prcurseur de chacune des molcules cibles a t dtermin dans les conditions
opratoires pr-cites lexception du gaz de collision maintenu zro. La source ESI a t
utilise la fois en mode dionisation positif (ion prcurseur sous forme proton [M+H+]) et
en mode ngatif (ion prcurseur sous forme dproton [M-H]-). Ces ions prcurseurs
parents sont alors slectionns par le premier quadriple Q1 avant dtre focaliss dans la
cellule de collision Q2 o ils subissent une fragmentation en ions fils analyss par le
troisime quadriple Q3. La fragmentation dans Q2 sobtient aprs collision de lion
prcurseur avec de largon ionis et sous leffet dun potentiel dionisation appel nergie
de collision . Cette nergie est spcifique chaque transition pre-fils et doit tre
dtermine pour chacun des ions de fragmentation dun pesticide donn. La slectivit de la
mthode est assure par le suivi des transitions ion prcurseur> ion de fragmentation.

Compte tenu du nombre de molcules slectionnes, un protocole de dtermination


des ions prcurseurs et des ions de fragmentation a t mis en place (figure 3-1).

- 140 -
Chapitre III

Full scan Full scan


Mode SM pour dtermination Mode SM pour dtermination
de lion parent (m/z) des ions fils (m/z)

SIM sur lion parent


pour optimiser :
la position de la sonde, Optimisation en mode
le spray voltage, SRM :
le sheath gaz, des nergies de collision,
le sweep gaz, des pression du gaz
lauxiliaire gaz, de collision.
la temprature du capillaire,
le tube lens,
la source CID.

Figure 3-1: Protocole doptimisation pour la dtermination de lion prcurseur et des ions de
fragmentation par SM.

Il est important de souligner que cette stratgie doptimisation est idale dans la
mesure o, avec lexprience, il devient vident que certains paramtres ne sont pas rgler
sur tous les composs lors du dveloppement dune mthode multirsidus. Les lments
concerns sont tous ceux qui ne peuvent pas tre modifis au cours dune acquisition et qui ne
sont donc pas spcifiques une molcule en particulier. Parmi ces paramtres peuvent tre
cits la position de la sonde, la valeur de la tension applique (spray voltage), les diffrentes
valeurs de gaz et la temprature du capillaire. En effet, ils dpendent tout particulirement de
la nature de la phase mobile et du dbit appliqu. Ainsi, lors de la mise au point dune
mthode danalyse multirsidus de pesticides, les valeurs attribues ces facteurs sont issues
de compromis, le but tant de dterminer les conditions optimales permettant de dtecter le
plus grand nombre de composs dintrt avec une sensibilit suffisante. En revanche,
dautres paramtres sont molcules-dpendants et ncessitent donc une optimisation
spcifique, lnergie de collision est lun dentre eux.

- 141 -
Chapitre III

1.2. Dtermination des transitions : ions prcurseurs > ions de


fragmentation

Compte tenu du nombre important de molcules (38 + 14 marques), cette tape


essentielle pour la suite de ltude a t particulirement longue et dlicate. Les ions
prcurseurs ainsi que les trois ions de fragmentation majoritaires ont donc t dtermins pour
tous les composs tudis.

Le mode dionisation utilis ainsi que la nature de lion prcurseur sont indiqus dans
le tableau 3-3. Les nergies de collision associes chacun des ions de fragmentations y sont
galement reportes. Lintensit des ions primaires est suprieure aux ions secondaires, elle
mme suprieure celle des ions tertiaires. Du fait de leur grande sensibilit, les ions
primaires seront utiliss comme ions de quantification et les ions secondaires comme ions de
confirmation. Ces ions ainsi que les ions tertiaires sont particulirement utiles lors de
lanalyse de matrices relles. En prsence dventuels interfrents, ils permettent de confirmer
la quantification.

Un texte normatif publi par lAFNOR portant sur la dtermination des rsidus de
pesticides par CPL/SM est paru en septembre 2007 soit trente-trois mois aprs le dbut des
travaux prsents ici [219]. Il donne la liste des paramtres de SM utiles pour le dosage par
CPL/SM de rsidus de pesticides. Ce document a permis de confirmer les diffrentes
transitions dtermines au cours de la thse par CPL/SM pour la plupart des composs
tudis. Cependant, lactochlore, lisoxaben et le mtolachlor ne sont pas cits dans ce
document. De plus, pour certains composs, lion prcurseur est diffrent. Cela a t observ
pour le bromoxynil o la norme prconise le suivi de lion 274 alors que lion cibl au cours
de notre tude est le 276. Cette diffrence denviron deux units est due lisotopie du brome.
De plus pour trois composs, le mode dionisation est invers : le florasulam, le fluroxypyr et
la msotrione. Par ailleurs, toutes les molcules marques ne sont pas mentionnes dans ce
document.

- 142 -
Chapitre III

Tableau 3-3 : Ions prcurseurs et nergies de collision (E coll) associes aux diffrents ions de fragmentation.

Ion Ion de fragmentation


Mode
Pesticide prcurseur primaire secondaire tertiaire
d'ionisation
(m/z) (m/z) E coll (V) (m/z) E coll (V) (m/z) E coll (V)
2,4 D - 218,9 [M-H]- 160,9 13 124,9 23 89,1 24
2,4 D 13C6 - 224,8 [M-H]- 166,9 19 131,0 28 95,0 40
+
Actochlore + 270,1 [M+H] 224,0 10 148,0 20 133,0 34
+
Actochlore D11 + 281,1 [M+H] 235,1 10 159,1 27 142,0 34
Aldicarbe + 212,9 [M+Na]+ 89,0 13 70,1 11 116,0 10
Aldicarbe D3 + 216,0 [M+Na]+ 89,0 16 116,0 12 70,1 16
+
Azoxystrobine + 404,1 [M+H] 372,0 16 329,0 28 344,0 26
-
Bentazone - 239,0 [M-H] 132,0 28 196,9 23 175,0 20
Bentazone D6 - 245,1 [M-H]- 132,0 29 181,1 21 198,0 23
Bromoxynil - 275,7 [M-H]- 80,9 25 78,9 25 167,0 34
+
Carbofuran + 222,0 [M+H] 149,0 10 163,1 19 77,0 51
+
Carbofuran D3 + 225,1 [M+H] 123,0 23 165,0 12 77,0 43
Carfentrazone thyle + 412,1 [M+H]+ 345,9 25 365,9 19 276,9 30
Chlorpyriphos + 350,0 [M+H]+ 197,9 21 96,8 35 106,9 58
+
Chlorpyriphos D10 + 360,0 [M+H] 198,9 18 98,9 30 295,8 21
+
Chlortoluron + 213,0 [M+H] 72,0 18 140,0 28 46,2 15
Chlortoluron D6 + 219,1 [M+H]+ 78,1 18 140,0 25 52,1 21
Cyproconazole + 292,1 [M+H]+ 124,9 33 89,0 55 70,0 15
+
Cyprodinil + 226,1 [M+H] 93,0 34 108,0 25 77,0 46

- 143 -
Chapitre III

Ion Ion de fragmentation


Mode
Pesticide prcurseur primaire secondaire tertiaire
d'ionisation
(m/z) (m/z) E coll (V) (m/z) E coll (V) (m/z) E coll (V)
Dichlorvos + 220,9 [M+H]+ 109,0 16 127,0 16 79,0 29
+
Dichlorvos D6 + 227,1 [M+H] 115,1 20 133,1 24 145,0 14
Diflufnicanil + 395,0 [M+H]+ 265,9 23 245,9 38 237,9 37
Dimthenamide + 276,0 [M+H]+ 244,0 15 168,0 23 111,0 34
+
Dimethoate + 230,0 [M+H] 124,9 24 170,9 18 79,0 34
+
Dimethoate D6 + 236,0 [M+H] 130,9 23 176,9 15 83,0 38
Fenpropidine + 274,2 [M+H]+ 147,0 30 117,0 53 132,0 39
Fipronil - 434,9 [M-H]- 329,9 16 249,9 35 182,9 47
-
Florasulam - 357,9 [M-H] 167,0 17 104,0 54 152,0 30
-
Fludioxonil - 247,0 [M-H] 180,0 30 126,0 35 169,0 31
Fluroxypyr - 252,9 [M-H]- 194,9 11 159,0 36 175,0 24
Flutriafol + 302,1 [M+H]+ 123,0 26 95,0 45 70,0 55
+
Hexaconazole + 314,0 [M+H] 158,9 32 124,9 40 70,0 37
+
Imazaquine + 312,1 [M+H] 199,0 29 180,9 43 267,1 24
Imidaclopride + 256,1 [M+H]+ 209,0 15 175,0 21 173,0 38
Imidaclopride D4 - 258,0 [M-H]- 155,0 18 86,0 28 46,1 18
-
Ioxynil - 369,7 [M-H] 126,8 43 214,8 36 242,8 24
+
Isoxaben + 333,1 [M+H] 165,0 22 150,0 36 106,9 56
Malathion + 331,0 [M+H]+ 98,9 18 127,0 13 124,9 33
Malathion D6 + 337,1 [M+H]+ 127,0 15 98,9 21 130,9 39

- 144 -
Chapitre III

Ion Ion de fragmentation


Mode
Pesticide prcurseur primaire secondaire tertiaire
d'ionisation
(m/z) (m/z) E coll (V) (m/z) E coll (V) (m/z) E coll (V)
Mcoprop - 213,0 [M-H]- 141,0 16 105,3 22 121,3 34
Mcoprop D3 - 216,0 [M-H]- 144,0 18 107,9 32 71,1 11
Mesotrione - 338,0 [M-H]- 291,0 15 212,0 30 249,0 31
+
Metolachlor + 284,1 [M+H] 252,1 18 176,1 27 134,0 33
+
Metolachlor D6 + 290,2 [M+H] 258,1 16 182,1 25 135,1 32
Mtosulam + 418,0 [M+H]+ 174,9 33 139,9 44 189,9 28
Prochloraze + 376,0 [M+H]+ 307,9 13 265,9 17 70,0 25
+
Pyrimiphos-mthyl + 306,1 [M+H] 164,0 23 108,0 34 67,0 45
+
Pyrimiphos-mthyl D6 + 312,2 [M+H] 164,1 24 108,0 32 67,0 42
Quinoxyfen + 308,0 [M+H]+ 196,9 35 161,9 46 271,9 27
Spiroxamine + 298,2 [M+H]+ 144,1 21 100,1 34 72,1 38
+
Triallate + 304,0 [M+H] 142,9 28 82,9 54 86,1 13
+
Tridemorphe + 298,3 [M+H] 130,0 25 98,0 30 57,1 22

- 145 -
Chapitre III

Lors du dveloppement dune mthode danalyse par CPL/SM, loptimisation de la


dtection par SM en tandem joue un rle essentiel mais ne suffit pas pour lobtention dune
sensibilit optimale pour tous les pesticides. Comme dj voqu, il existe des corrlations
entre les conditions danalyse chromatographique et les conditions dionisation (dbit des gaz
et de phase mobile). Il est donc galement indispensable doptimiser les conditions
chromatographiques afin de tendre vers une sensibilit optimale.

2. Optimisation des conditions analytiques par CPL/SM

Lutilisation de la spectromtrie de masse en tandem peut permettre de saffranchir


dune sparation totale de tous les composs analyss, la slectivit de la mthode tant
thoriquement assure par le suivi dune transition ion parent/ ions fils (de fragmentation) ,
spcifique chaque molcule. Malgr cette caractristique de lanalyse par CPL/SM, une
sparation chromatographique correcte en un temps raisonnable a tout de mme t
privilgie et donc recherche.

La phase mobile joue incontestablement un rle fondamental la fois au niveau de la


sparation mais galement sur la sensibilit de la dtection. Au-del des caractristiques de la
colonne (phase stationnaire, dimensions), les paramtres influents sont la fois la nature de la
phase mobile et le dbit utilis. Par ailleurs, comme dj mentionn dans le chapitre 1, un
modificateur est souvent ajout la phase mobile lors dune analyse par CPL/SM dans le but
la fois damliorer la sparation mais aussi et surtout daugmenter la sensibilit de la
dtection en assistant lionisation. Loptimisation des conditions analytiques de cette mthode
a donc principalement consist rechercher une sensibilit optimale.

Ainsi, dans un premier temps, ltude de linfluence de la nature de la phase mobile


travers le choix du solvant organique et de lacide utilis a t effectue. Une fois le solvant
organique et lacide choisis, linfluence de la proportion de ce dernier sur lintensit des
rponses observes pour les diffrents composs cibls a t value.

2.1. Conditions analytiques

Ltude de linfluence de la nature de la phase mobile a t ralise en appliquant les


conditions opratoires mentionnes dans le tableau 3-2 ( lexception du pousse seringue qui

- 146 -
Chapitre III

nest pas utilis) pour les paramtres fixes au niveau du spectromtre de masse. La colonne
analytique retenue est une Symmetry Shield RP18 (250*3 mm d.i.,5 m, Waters) qui permet
la mise en uvre de la chromatographie de partage polarit de phase inverse. Le volume
inject est fix 20 L. Les pesticides tudis ayant des proprits physico-chimiques
diffrentes, un gradient dlution a t mis en uvre afin dassurer au mieux la sparation des
composs et de faciliter llution des composs les plus retenus. Aprs optimisation, le
gradient qui a t retenu pour cette tude est dtaill dans le tableau 3-4.

Tableau 3-4 : Gradient dlution appliqu lors de lanalyse de pesticides par DI/CPL/SM
Colonne Symmetry Shield RP18 (250*3 mm d.i.,5 m, Waters), D = 0,3 mL/min.

H2O acidifie Solvant organique


Temps (min)
% acidifi %
0 80 20
10 50 50
15 50 50
30 20 80
35 20 80
36 10 90
45 10 90

Le dbit de phase mobile a t fix 0,3 mL/min. La mthode danalyse dure


quarante-cinq minutes et est suivie par une mise lquilibre de la colonne analytique dune
dure de quinze minutes. Celle-ci est ncessaire pour revenir aux conditions initiales
danalyse et indispensable une bonne reproductibilit des rsultats.

Toutefois, avant dtudier linfluence des conditions analytiques, il est apparu


judicieux de sassurer de la spcificit des transitions cibles. Dans cet objectif, les cinquante-
deux molcules ont t injectes individuellement 0,5 mg/L mais avec une mthode
multirsidus permettant le suivi de toutes les transitions (conditions tableaux 3-2, 3-3, 3-4).
Tous les chromatogrammes obtenus ont t exploits en recherchant lexistence dune
transition interfrente aux temps de rtention des composs dintrt. Par exemple, si un
compos A est lu un temps de rtention t1 lors du suivi des transitions de quantification et
de confirmation, il a t vrifi que les chromatogrammes des autres composs ne prsentent
pas un pic chromatographique au mme temps t1 lors du suivi des transitions de quantification
et de confirmation du compos A. Aucune interfrence chromatographique significative na
t mise en vidence.

- 147 -
Chapitre III

2.2. Influence de la nature de la phase mobile sur lintensit des


rponses

Linfluence de la nature de la phase mobile utilise a t tudie en exprimentant


diffrentes compositions. Ltude bibliographique a permis de slectionner le mthanol et
lactonitrile comme solvants organiques. Par ailleurs, deux acides, lacide formique (AF) et
lacide actique (AA) sont particulirement recommands. Ils peuvent effectivement
permettre un gain de 80 100% de la rponse observe une teneur de 0,1% par rapport
lutilisation de solvants purs [88]. Diffrentes combinaisons de phases mobiles ont donc t
testes :
mlange 1 : actonitrile (MeCN)/ H2O acidifis par AA, not MeCN/AA,
mlange 2 : MeCN/ H2O acidifis par AF, not MeCN/AF,
mlange 3 : mthanol (MeOH)/ H2O acidifis par AA, not MeOH/AA,
mlange 4 : MeOH/H2O acidifis par AF, not MeOH/AF.
Les diffrentes phases mobiles sont acidifies 0,1% quel que soit lacide utilis.

Ces diffrents tests ont t effectus avec maintien du profil du gradient dlution
(tableau 3-4), un dbit de phase mobile constant de 0,3 mL/min et dans les conditions de
dtection du tableau 3-2. Le suivi des ions de quantification (ions primaires) pour les
diffrents composs tudis a t effectu. Cette tude a t mene sur trente composs, les
huit composs restants ayant t ajouts aprs la prise de contact avec la DGCCRF, soit
postrieurement cette tude. Dans un souci de reprsentation graphique, les intensits des
aires ont t normalises pour chacun des composs tudis. Les rsultats obtenus,
correspondants au suivi des ions primaires, sont prsents sur la figure 3-2.

- 148 -
Aire normalise (%)

0
20
40
60
80
100
120

Bentazone

1
Dichlorvos

Malathion

Fipronil

Fludioxonil

2
Ioxynil
MeCN/AA

Triallate

2,4 D

Bromoxynil

3
Mcoprop

Msotrione

Carfentrazone thyle
MeCN/AF

Cyproconazole

Fenpropidine

4
Imidaclopride

- 149 -
Chapitre III

Spiroxamine

Tridmorphe

Cyprodinil
MeOH/AA

Diflufnicanil

Flutriafol

Hexaconazole

Imazaquin
(solution 0,2 mg/L (n=4), dtection MRM, ESI mode positif et ngatif)
5

Isoxaben

Mtolachlore
MeOH/AF

Mtosulam

Prochloraze
Figure 3-2 : Evolution de laire normalise des diffrents composs en fonction de la nature de la phase mobile

Quinoxyfne

Dimthenamide
6

Florasulam

Fluroxypyr
Chapitre III

Du fait de la diversit des molcules, il na pas t mis en vidence un comportement


similaire pour lensemble des composs. Afin de faciliter linterprtation des diffrents
rsultats obtenus, une classification des composs a t effectue.

Dans un premier temps, dans la zone 1 ont t consigns les composs dont les
comportements mettent en vidence une sensibilit plus leve lors de lutilisation du
mthanol en phase organique. Ainsi, pour la bentazone, le dichlorvos et le malathion,
lutilisation dactonitrile dfavorise lionisation et diminue donc la sensibilit de lanalyse
par CPL/SM. Le mthanol est favorable lionisation de quatre autres composs : le
florasulam, le triallate, le fipronil et le fludioxonil. Cependant leur comportement traduit
galement dautres tendances et seront donc traits par la suite. Une corrlation entre
linfluence de la phase mobile et lappartenance une famille chimique particulire a t
recherche, cependant, aucun lien na pu tre mis en vidence.

Les composs de la zone 2 sont caractriss par une influence plus prononce de la
nature de lacide que de celle du solvant organique. Ces composs ont un comportement qui
traduit une sensibilit particulire la nature de lacide. Lutilisation du mthanol ou de
lactonitrile induit les mmes intensits de signal ds lors quils sont acidifis par le mme
acide. Lionisation du fipronil, du fludioxonil et de lioxynil est favorise par la prsence
dacide actique quelle que soit la nature du solvant organique alors que lacide formique est
favorable lionisation du triallate. De nouveau, les composs sont reprsentatifs de familles
chimiques diffrentes et ont des proprits physico-chimiques varies.

La zone 3 quant elle rassemble des composs de comportement similaire, savoir,


une exaltation du signal ds lors que lactonitrile acidifi lacide actique est utilis en
phase mobile. Le 2,4 D, le bromoxynil, le mcoprop et la msotrione ont la diffrence des
composs prcdents des points communs, notamment au niveau de leurs proprits physico-
chimiques. Toutes ces molcules prsentent des proprits acides. Ils possdent tous les
quatre un pKa compris entre 2,8 et 3,9. Or, le pH de la phase mobile diffre selon sa
composition, par consquent, les molcules ayant un pKa proche du pH de la phase mobile
sont significativement affectes par la composition de celle-ci.

Au contraire des composs de la zone 1, ceux de la zone 4 conduisent un signal trs


faible en prsence de mthanol comme solvant organique. Les pics observs pour tous ces

- 150 -
Chapitre III

composs nont pas permis leur quantification en prsence de mthanol en phase mobile. En
revanche, une phase mobile compose deau et dactontrile acidifis est favorable leur
analyse par CPL/SM. Ainsi, le gain observ lors de lutilisation du mthanol pour les
composs de la zone 1 est plus faible que la perte de signal observ pour les composs de la
zone 4.

La zone 5 met en vidence au contraire de la zone 2, linfluence de la nature du


solvant organique. En effet, pour tous ces composs, quel que soit lacide utilis (acide
actique ou acide formique), les intensits des pics ne varient que trs peu ds lors que le
mme solvant organique est utilis. Les comportements observs mettent en avant une
sensibilit plus leve lors de lutilisation de lactonitrile et ce en particulier lorsque lacide
actique est employ ( sauf pour le cyprodinil).

Enfin, la zone 6 regroupe les composs qui sont peu affects par la nature de la phase
mobile. Lintensit du signal observ nest pas modifie de manire significative quelles que
soient les conditions utilises.

Ainsi, de manire gnrale, pour tous les composs fortement influencs par la nature
de la phase mobile, lactonitrile conduit une meilleure intensit de la rponse (aire), en
particulier lorsquil est acidifi avec de lacide actique. Un gain dun facteur allant de 2 11
est observ en comparaison lutilisation du mthanol acidifi lacide actique. Cette
tendance est vrifie galement avec lacide formique, pour lequel lactonitrile permet un
gain dun facteur 2 5 par rapport au mthanol. Ainsi, malgr le fait quil soit favorable
lanalyse de certains composs, le mthanol ne semble pas tre propice lanalyse
multirsidus des pesticides cibls.

Une corrlation entre les proprits physico-chimiques, la classe chimique des


pesticides et leur comportement en fonction de la nature de la phase mobile a t recherche,
toutefois, aucune relation particulire na pu tre mise en vidence.

Vu le nombre important de composs doser, un compromis a du tre effectu pour ce


paramtre, par consquent, la phase mobile retenue pour cette tude est compose deau et
dactonitrile acidifis 0,1% dacide actique. Leffet du pourcentage dacide actique sur
les aires des diffrents composs cibls a par la suite t tudi.

- 151 -
Chapitre III

2.3. Influence du pourcentage dacide actique en phase mobile sur


lintensit des rponses

Les rsultats prcdents ont clairement illustr le fait que la nature de la phase mobile
influe sur lintensit des rponses observes pour les diffrents composs. Par consquent, il
est raisonnable de penser que la quantit dagent acidifiant ajoute la phase mobile peut
galement avoir un effet non ngligeable sur les rponses. Lacide actique ayant t retenu,
linfluence de sa proportion en phase mobile sur lintensit de laire du pic a t tudie. Pour
cela, sept pourcentages diffrents allant de 0 0,1% ont t tests. Comme pour la nature de
la phase mobile, les intensits des aires ont t normalises pour chacun des composs
tudis. Les rsultats normaliss obtenus, correspondants au suivi des ions primaires, sont
illustrs par les figures 3-3 et 3-4.

- 152 -
Chapitre III

120 0% 0,0025 % 0,005 % 0,0075 % 0,01 % 0,05% 0,1 %

100
Aire normalise (%)

80

60

40

20

Imidaclopride
Imazaquine
Fludioxonil
Tridmorphe

Florasulam

Spiroxamine
Fipronil

Msotrione

Diflufnicanil
Ioxynil

2,4 D

Mcoprop
Dichlorvos
Carfentrazone thyle

Fluroxypyr
1 2
3 4

Figure 3-3 : Evolution de laire normalise des diffrents composs en fonction du pourcentage dacide actique ajout la phase mobile
(solution 0,125 mg/L (n=3), dtection MRM, ESI mode positif et ngatif).

- 153 -
Chapitre III

120 0% 0,0025 % 0,005 % 0,0075 % 0,01 % 0,05% 0,1 %

100
Aire normalise (%)

80

60

40

20

0
Dimthenamide

Mtosulam
Malathion
Fenpropidine

Mtolachlore
Triallate

Cyprodinil

Flutriafol

Hexaconazole

Prochloraze
Bentazone

Isoxaben
Cyproconazole

Quinoxyfne
5
6

Figure 3-4 : Evolution de laire normalise des diffrents composs en fonction du pourcentage dacide actique ajout la phase mobile (solution 0,125
mg/L (n=3), dtection MRM, ESI mode positif et ngatif).

- 154 -
Chapitre III

Une fois de plus, les comportements observs sont trs dpendants des composs. Les
composs ont t regroups en fonction du pourcentage qui mne une sensibilit maximale.
Afin de faciliter la reprsentation graphique, lordre croissant des pourcentages dacide
actique na pas t respect. Ainsi, la zone 1 correspond aux composs pour lesquels
lintensit maximale est obtenue avec un pourcentage de 0,1% dacide actique, seuls deux
composs sont concerns. La zone 2 comprend les composs pour lesquels un pourcentage de
0,05% est le plus favorable. Cette zone contient par exemple lioxynil qui est peu influenc
par le pourcentage dacide actique. Les composs de la zone 3 prsentent un maximum
dintensit (aire) 0,0025% dacide actique et sont caractriss par une exaltation du signal
ds lors quun minimum dacide (0,0025%) est ajout. Pour tous les composs de cette zone,
les pourcentages les plus levs savoir, 0,05% et 0,1% dfavorisent la dtection par
CPL/SM. Cette tendance est galement observe pour les composs de la zone 4. En
revanche, ces derniers ont une intensit maximale 0,01%. Par ailleurs, pour certains de ces
composs, une sensibilit leve est galement obtenue avec un pourcentage gal 0,005%.
Le triallate a un comportement particulier, il sagit du seul compos pour lequel labsence
totale dacide entrane un gain significatif en sensibilit. La majorit des composs se trouve
en zone 6 et sont caractriss par une intensit de laire maximale un pourcentage de
0,005% en acide actique.

Tout comme pour la nature de la phase mobile, aucune corrlation na pu tre mise en
vidence entre le comportement observ pour les composs et leur appartenance aux
diffrentes classes chimiques.

Deux types de comportements extrmes ont t observs, dune part certains composs
sont trs peu sensibles la modification de la nature de la phase mobile, comme la bentazone
(premier compos de la zone 6). Et dautre part, pour dautres, comme le fluroxypyr (second
compos de la zone 4), lajout dacide actique dans la phase mobile a une influence
significative sur laire du signal. Ces deux comportements sont illustrs en dtail sur la figure
3-5.

- 155 -
Chapitre III

120 Bentazone

Fluroxypyr
100
Aire normalise (%)

80

60

40

20

0
-0,01 0,01 0,03 0,05 0,07 0,09 0,11
Pourcentage d'acide actique

Figure 3-5 : Evolution de laire normalise de la bentazone (239>132) et du fluroxypyr (253>194) en


fonction du pourcentage dacide actique ajout la phase mobile (solution mulipesticides 0,125
mg/L, (n=3), mode MRM (ions primaires), ESI modes +/-).

Lintensit du signal observ pour la bentazone est trs peu modifie par le
pourcentage dacide (figure 3-5). La modification de la quantit dacide actique en phase
mobile entrane une variation moyenne infrieure 20%. Le comportement de ce type de
molcules montre que le phnomne dionisation est indpendant de la quantit dacide
actique ajout en phase mobile. Pour le fluroxypyr, en revanche, ds que de lacide actique
est ajout et ce jusqu 0,01%, une augmentation du signal est observe. La quantit dacide
actique ajoute peut entraner une variation de lintensit des aires de pics allant de 80 95%
du signal. Il est possible de penser que plus la concentration en acide augmente en phase
mobile plus lionisation des molcules est favorise et par consquent meilleure est la
sensibilit. Cependant, cette thorie est rfute par des composs comme le fluorxypyr, pour
lequel une exaltation quasiment linaire de lintensit de laire est observe de 0 0,01%. En
revanche, lorsque la quantit dacide actique continue daugmenter, une trs nette diminution
de lintensit du signal est observe et ce en particulier 0,05 et 0,1%.

Ainsi, de manire assez surprenante, la rponse optimale pour les composs est en
gnrale obtenue avec un pourcentage trs faible dacide actique (0,005% ou 0,01%).
Cependant, le pourcentage dacide actique permettant lobtention dune intensit optimale

- 156 -
Chapitre III

pour la majorit des composs est 0,005%. Cest cette valeur qui a donc t retenue pour la
suite de ltude.

3. Etude de linfluence du dbit de phase mobile

Si la sensibilit de la dtection par spectromtrie de masse dpend la fois de la nature


et de la composition de la phase mobile, lun des paramtres important est le dbit de phase
mobile appliqu en CPL et qui arrive la source dionisation. Or, celui-ci dpend des
caractristiques de la colonne. La colonne analytique initialement utilise est une colonne
Symmetry Shield RP18 (250*3 mm d.i., dp=5 m, Waters). Le diamtre interne de 3 mm
impose un dbit maximal utiliser de 0,5 mL/min pour viter des pertes de charge trop
leves. En CPL, il est admis quune diminution du diamtre de colonne doit thoriquement
induire un gain en sensibilit gal au rapport des diamtres internes des colonnes au carr. De
plus, la source ESI est reconnue comme tant trs sensible au dbit de phase mobile utilis.
En effet, la sortie de laiguille de la source ESI, les ions forms sont sous forme de
gouttelettes plus ou moins grosses, leur taille est proportionnelle au dbit de phase mobile.
Ainsi, plus le dbit est lev, plus les gouttelettes ont un diamtre important et plus la
dsolvatation est difficile. Lemploi de dbits plus faibles peut alors conduire un gain en
sensibilit importante. Lutilisation de colonne de plus faible diamtre permettrait
thoriquement un gain en sensibilit du fait quil est alors possible dappliquer des dbits plus
faibles qui amliorent ainsi la qualit du spray dans la source dionisation.

Il parat alors judicieux de tester une deuxime colonne de mme phase stationnaire
mais de diamtre plus petit (2,1 mm). Le dbit maximal pouvant tre appliqu sur cette
colonne est de lordre de 0,2 ml/min. Lutilisation de cette deuxime colonne doit permettre
datteindre un gain en sensibilit dun facteur de lordre de deux. Ainsi, une colonne de 15 cm
de long et de diamtre de particules de 3,5 m a t utilise.

Afin de procder une comparaison rigoureuse des deux colonnes utilises, lidal
serait de rechercher les conditions optimales dutilisation de chacune dentre elles et
notamment le dbit optimal. En chromatographie, la hauteur quivalente un plateau
thorique est proportionnelle la vitesse de la phase mobile. La reprsentation graphique
(courbe de Knox) permet de mettre en vidence l'existence d'un dbit optimal de phase mobile
pour lequel l'efficacit de la colonne est maximum. Il aurait fallu par ailleurs changer le

- 157 -
Chapitre III

volume inject sur ces deux colonnes. Toutefois, il convient de souligner que lobjectif de ce
travail na pas t la recherche des conditions optimales mais a pour but dvaluer
globalement le gain pour les composs tudis.

De plus, lors de cette tude, lun des facteurs limitant est le dbit minium pouvant tre
maintenu avec la pompe analytique utilise et qui est de 0,1 ml/min. Ltude a t mene en
appliquant un dbit de 0,3 ml/min sur la colonne de grand diamtre (250*3 mm d.i., dp=5 m,
Waters) et de 0,15 ml/min sur la colonne de plus faible diamtre (150*2,1 mm d.i., dp=3,5
m Waters). Cependant, avant de procder aux essais, il convient de rgler nouveau les
conditions opratoires de dtection par SM permettant une ionisation optimale lors de
lutilisation de la colonne de faible diamtre. En effet, le dbit tant plus faible, il convient
dajuster les pressions de gaz utilises mais aussi la position de la sonde dionisation. En effet,
plus le dbit est faible, plus la sonde doit tre approche de lentre du cne. Or, il faut
nanmoins prendre garde la formation ventuelle darcs lectriques du la haute tension
applique qui peut se produire si la sonde est trop prs de lentre de lanalyseur. Ces arcs
lectriques engendrent alors une instabilit du spray. Une solution 0,2 mg/L a t injecte
sur les deux colonnes et les essais ont t mens dans les conditions opratoires dfinies dans
le tableau 3-5.

Tableau 3-5 : Conditions opratoires utilises dans le cadre de la comparaison des intensits en
fonction du dbit appliqu.

Source d'ionisation ESI


Phase mobile H2O et MeCN acidifis 0,005 % d'acide actique
Symmetry Shield RP18 Symmetry Shield RP18
Colonne analytique (250*3mm d.i., dp=5 m (150*2,1mm d.i., dp=3,5 m
Waters) colonne A Waters) colonne B
Dbit de phase mobile 0,3 ml/min 0,15 ml/min
Volume inject 10 L 10 L
Position de la sonde ESI C B
Spray Voltage 4500 V 4000 V
Sheath gas 50 u.a. 35 u.a.
Auxiliary Gas 20 u.a. 2 u.a.
Temprature Capillaire 350 C 325 C
Pression du gaz de
1,5 mTorr
collision

- 158 -
Chapitre III

Pour tous les composs, les intensits des aires observes lors de lutilisation de la
colonne de faible diamtre sont suprieures celles obtenues avec celle de plus grand
diamtre. Lannexe 3-2 prsente les gains obtenus pour les diffrents pesticides tudis. Le
gain observ varie selon les composs dun facteur allant de 2,3 18,9. Ces rsultats
confirment le fait que le phnomne dionisation est compos-dpendant et ne peut tre prdit
lavance. Lexemple du fluroxypyr est illustr par la figure 3-6.

tr = 20,66 min tr = 22,35 min


A = 321 017 A = 85 387
H = 14 748 H = 4 116

RP-18, 150*2,1 mm d.i., dp=3,5 m RP-18, 250*3 mm d.i., dp=5 m

Figure 3-6 : Comparaison des pics chromatographiques obtenus pour le fluroxypyr lors de linjection
dune solution 0,2 mg/L, mode MRM, ion primaire 253>195, ESI, modes +/-
tr = temps de rtention, A : aire du signal, H = hauteur du signal.

Dans le cas du fluroxypyr (figure 3-6), un gain dun facteur 3,8 est observ aussi bien
sur laire des pics que sur leur hauteur, ce qui permet davoir un rapport signal sur bruit plus
grand et donc une sensibilit plus leve. Les essais effectus ont confirm le fait que
lutilisation dun dbit plus faible permet de gagner en sensibilit. Lionisation devient plus
facile, la colonne analytique de 2,1mm est donc retenue pour la suite des travaux.

- 159 -
Chapitre III

4. Analyse par CPL/SM dune solution multipesticides

Une solution multipesticides 0,2 mg/L en milieu hydro-organique a t injecte dans


le systme CPL/SM. Les conditions analytiques utilises sont indiques en annexe 3-3.

Les transitions de quantification (ions primaires) ont t acquises. Dans un souci de


clart et du fait que les pesticides ont le mme temps de rtention que leurs homologues
marqus, ces derniers nont pas t reprsents sur les figures suivantes. Les composs ont
t prsents selon leur mode dionisation, les pics associs aux diffrents pesticides sont
illustrs par les figures 3-7 et 3-8 en mode positif et sur la figure 3-9 en mode ngatif. Le
tridmorphe possde un pic qui se ddouble (figure 3-7), compte tenu de la nature de la phase
stationnaire utilise, aucune cause raisonnable na pu tre identifie comme tant lorigine
de ce ddoublement.

- 160 -
Chapitre III

Imidaclopride, tr = 8,88 min Carbofuran, tr = 19,40 min

Dimethoate, tr = 10,12 min Tridemorphe, tr=20,70 min

Fenpropidine, tr = 12,96 min Flutriafol, tr = 20,77 min

Spiroxamine, tr = 13,65 min Chlortoluron, tr 20,88 min

Aldicarbe, tr = 15,18 min Metosulam, tr = 21,53 min

Dichlorvos, tr = 17,66 min Cyproconazole, tr = 25,29 min

Dimethanamide, tr = 25,78 min


Imazaquin, tr = 19,10 min

Figure 3-7 : Chromatogrammes obtenus par CPL/SM, solution multipesticides 0,2 mg/L, mode MRM (ions primaires),
ESI positif et ngatif, conditions analytiques annexe 3-3.

- 161 -
Chapitre III

Azoxystrobine, Cyprodinil, tr = 31,78 min


tr = 27,35 min
Carfentrazone thyle,
Isoxaben, tr = 29,51 min tr = 32,67 min

Metolachlor, tr = 29,62 min Pirimiphos mthyl, tr = 36, 00 min

Hexaconazole, tr = 29,63 min Diflufnican, tr = 36,75 min

Quinoxyfne, tr = 38,11 min


Malathion, tr = 30,00 min
Chlorpyriphos, tr = 40,04 min
Actochlor, tr = 30,17 min

Triallate, tr = 40,90 min


Prochloraze, tr = 30,44 min

Figure 3-8 : Chromatogrammes obtenus par CPL/SM, solution multipesticides 0,2 mg/L, mode MRM (ions primaires),
ESI positif et ngatif, conditions analytiques annexe 3-3.

- 162 -
Chapitre III

Mesotrione, tr = 19,38 min Bentazone, tr = 25,76 min

Mecoprop, tr = 25,94 min


Fluroxypyr, tr = 20,31 min

Florasulam, tr = 20,37 min Fludioxonil, tr = 28,48 min

2,4 D, tr= 25,20 min Ioxynil, tr = 29,41 min

Bromoxynil, tr = 25,33 min Fipronil, tr = 33,75 min

Figure 3-9 : Chromatogrammes obtenus par CPL/SM, solution multipesticides 0,2 mg/L, mode MRM (ions primaires),
ESI positif et ngatif, conditions analytiques annexe 3-3.

- 163 -
Chapitre III

5. Influence de la composition de lchantillon inject


5.1. Etude qualitative et quantitative des pics

Au cours du dveloppement de la mthode danalyse multirsidus de pesticides par


CPL/SM, il est apparu clairement que la nature de la phase mobile peut avoir une influence
significative sur la rponse de certains composs. Cependant, quen est-il de la composition
de lchantillon inject ? En effet, il est de notorit en analyse chromatographique que la
composition de lchantillon inject a une influence sur lallure du pic chromatographique.
Celle-ci peut se traduire par une dformation du pic (asymtrie, trane,).

Linfluence de la nature du solvant de dilution de lchantillon inject sur lallure du


pic chromatographique (largeur, hauteur et aire) a t mene aprs dilution dune solution de
concentration donne (2 mg/L) dans diffrents mlanges hydro-organiques (eau-actonitrile).
Ainsi, des solutions de mme concentration (0,2 mg/L) contenant des proportions de phases
aqueuse et organique diffrentes ont t injectes. Les compositions des cinq solutions
tudies contiennent des pourcentages deau pure de 0 90% par rapport lactonitrile pur.

Suite diffrentes observations, cette tude a t uniquement mene sur deux couples
de composs : la bentazone et la bentazone D6 ; le mcoprop et le mcoprop D3 et sur un
compos nayant pas dhomologue marqu : limazaquin mais qui sionise la fois en mode
ngatif et positif. Le but tant de mettre en vidence une ventuelle diffrence du
comportement dune molcule selon le mode dionisation utilis. Les conditions opratoires
utilises sont celles indiques en annexe 3-3.

La figure 3-10 illustre lvolution de lallure du pic chromatographique de limazaquin


en fonction du pourcentage dactonitrile prsent dans lchantillon inject. Au niveau de la
forme des pics, dune part, il a t observ un lger largissement quand le pourcentage
dactonitrile augmente. Ce comportement semble normal du fait que lchantillon inject
devient de plus en plus apolaire par rapport aux conditions initiales de la phase mobile (80/20
H2O/MeCN acidifis 0,005% dacide actique). Dautre part, une variation de la hauteur des
pics et donc de lintensit des signaux a t mise en vidence.

- 164 -
Chapitre III

A = 119 956 731 90 % H2O


H= 11 637 109

A = 109 074 383


H= 9 631 927 80 % H2O

A = 118 228 852


H= 8 729 350 50 % H2O

A = 110 691 405


H= 7 183 427 25 % H2O

A = 52 553 083
H= 2 755 655 0 % H2O

Figure 3-10: Evolution de lallure du pic chromatographique de limazaquin (mode positif, ion
primaire) en fonction du pourcentage dactonitrile prsent dans la solution injecte (0,2 mg/L), mode
MRM, ESI, conditions en annexe 3-3, A : aire du signal, H : hauteur du signal.

Linfluence de la composition de lchantillon inject a t mise en vidence par


ltude plus prcise de lintensit des aires des pics chromatographiques obtenus aprs
injections rptes dans les mmes conditions des cinq solutions.

Exemples des couples : bentazone/bentazone D6 et mcoprop/mcoprop D3

Pour la bentazone et la bentazone D6, le suivi des trois transitions a t effectu. La


figure 3-11 prsente lvolution de laire du signal observ. Il a t mis en vidence dune part
la similitude des comportements des trois ions de fragmentation de la bentazone et de la
bentazone D6. Et dautre part, ces deux molcules ont le mme comportement et leur
ionisation nest que trs faiblement influence par la composition des solutions dans
lesquelles elles se trouvent. Les intensits de la bentazone et de la bentazone D6 ne varient en
effet que de 8,5 9%. Ltude des comportements du mcoprop et du mcoprop D3 a t
effectue uniquement sur les deux transitions (primaires et secondaires) (figure 3-11). Les
transitions correspondantes aux ions tertiaires ont une intensit trop faible la concentration
tudie.

- 165 -
Chapitre III

0% 25% 50% 80% 90%

100

80
Aire normalise (%)

60

40

20

Mecoprop D3

Mecoprop D3
Mecoprop

Mecoprop
Bentazone D6

Bentazone D6

Bentazone D6
Bentazone

Bentazone

Bentazone

213>141

213>105
239>132

239>197

239>175

216>144

216>108
245>132

245>181

245>198

Figure 3-11 : Evolution de laire normalise des pics de la bentazone et de la bentazone D6 en


fonction de la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3), mode MRM, ESI, conditions en
annexe 3-3.

Contrairement la bentazone et son homologue marqu, le mcoprop et le mcoprop


D3 sont fortement influencs par la nature de lchantillon inject et cette influence est
identique pour le mcoprop et le mcoprop D3. Les intensits de ces deux composs varient
de 36,5 39% selon le pourcentage deau prsent dans la solution injecte. Ds lors que la
proportion deau est de 25%, il est not une exaltation trs nette de lintensit de laire. Un
gain dun facteur trois sur la sensibilit est observ. En revanche de 25 80% deau dans
lchantillon, les variations des intensits des aires sont beaucoup moins prononces. Le
signal tend vers une stabilisation. Toutefois, une lgre augmentation de laire apparat 90%
deau.

- 166 -
Chapitre III

Exemple de limazaquin

Limazaquin est un compos qui sionise la fois en mode dionisation positif et


ngatif. La figure 3-12 illustre lvolution du signal observe pour ce compos en ionisation
ngative et positive.

0% 25% 50% 80% 90%

100
Aire normalise (%)

80

60

40

20

0
Imazaquin Imazaquin Imazaquin Imazaquin Imazaquin Imazaquin
312>267 312>199 312>181 310>266 310>223 310>222

ESI + ESI -

Figure 3-12 : Evolution de laire normalise des pics de limazaquin en fonction de la composition de
lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) mode MRM, ESI ngatif et positif, conditions en annexe 3-3.

Limazaquin est trs influenc par la nature de lchantillon inject. Nanmoins, ces
figures montrent que linfluence est quasiment identique quel que soit le mode dionisation
utilis pour ce compos. Un pourcentage de phase aqueuse de 25% entrane un gain dun
facteur deux de la rponse compare celle obtenue en labsence totale deau. Nanmoins,
comme le mcoprop et le mcoprop D3, pour des pourcentages deau compris entre 25 et
90%, la variation existe mais elle est beaucoup moins significative.

La diffrence de comportement des composs tudis souligne donc une fois de plus la
difficult de la mise au point et du dveloppement dune mthode multirsidus. Les
observations prcentes mettent en vidence un point qui premire vue aurait pu paratre

- 167 -
Chapitre III

dune importance secondaire. En effet, au vu de ces rsultats, il est clair que ltape de
prparation de lchantillon, la plus basique soit-elle, telle que la dilution doit tre strictement
contrle et ce dautant plus que les composs recherchs sont des teneurs trs faibles. En
effet, la variation des intensits des aires des pics peut entraner une valuation errone de la
teneur en pesticides dans un chantillon inconnu. Cependant, comment est-il possible de
saffranchir des variations des intensits daires observes ?

5.2. Intrt de la dilution isotopique

Au cours du dveloppement de cette mthode, la dilution isotopique a t mise en


oeuvre lorsque cela a t possible (disponibilit des molcules marques). La bentazone et le
mcoprop sont des composs qui possdent tous les deux un homologue marqu. Il est donc
intressant dtudier lvolution du rapport des intensits entre ces molcules et leurs
homologues marqus (figure 3-13).

Bentazone/Bentazone D6 ions primaires Bentazone/Bentazone D6 ions secondaires


Bentazone/Bentazone D6 ions tertiaires Mcoprop/Mcoprop D3 ions primaires
Mcoprop/Mcoprop D3 ions secondaires

1,4
Rapport des aires de pics

1,2

1,0

0,8

0,6

0,4

0,2

0,0
-5 15 35 55 75 95
Pourcentage d'H2O
Figure 3-13 : Evolution du rapport des aires de pics correspondants au suivi des transitions des ions
primaires, secondaires et tertiaires entre la bentazone et la bentazone D6, le mcoprop et le mcoprop
D3 en fonction de la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) ESI, mode MRM, conditions
en annexe 3-3.

- 168 -
Chapitre III

Les rapports des aires de pics ne varient que trs peu pour les deux couples,
bentazone/bentazone D6 et mcoprop/mcoprop D3. Cette figure met en vidence le
comportement trs intressant des rapports des aires de pics entre la molcule et son
homologue marqu. Les coefficients de variation des rapports en fonction du pourcentage
deau sont de lordre de 0,9% pour le couple bentazone/bentazone D6 et ce quelle que soit la
transition tudie.

Pour le couple mcoprop/mcoprop D3, la variation des rapports des aires de pics est
de lordre de 0,7% lors du suivi des ions primaires de quantification et de 5,8% avec les ions
secondaires de confirmation. Ces valeurs sont faibles compares aux variations sur les
intensits daires brutes qui peuvent atteindre une valeur de 40% (figure 3-12).

Quels que soient les ions suivis, les rapports des aires de pics ne varient que trs peu et
sont donc faiblement influencs par la composition de lchantillon inject. La prsence de la
molcule marque permet de saffranchir des variations de lintensit. Lun des intrts
majeurs de la dilution isotopique a t mis en vidence au cours de ltude de linfluence de la
composition de lchantillon inject sur les aires des pics chromatographiques. Mais quen
est-il si une autre molcule marque est utilise comme talon interne la place de
lhomologue marqu ?

La bentazone et le mcoprop et la bentazone sont deux composs qui sionisent tous


les deux en mode ngatif et qui ont des temps de rtention trs proches, respectivement de
25,8 et 25,9 minutes lors de lanalyse chromatographique dans les conditions analytiques
appliques. Il est donc raisonnable de penser que le mcoprop D3 peut tre utilis pour pallier
les variations dintensits daires de la bentazone en fonction de la composition de
lchantillon inject. Il en est de mme pour la bentazone D6 et le mcoprop. La figure 3-14
illustre les comportements obtenus lors de ltude du rapport des aires de pics entre la
bentazone et le mcoprop D3 et de celui entre le mcoprop et la bentazone D6.

- 169 -
Chapitre III

Rapport Aires Bentazone/Mcoprop D3, ions primaires


3,0
Rapport Aires Mcoprop/BentazoneD6, ions primaires
Rapport des intensits des aires de pics

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0
-5 10 25 40 55 70 85 100

Pourcentage d'H2O
Figure 3-14 : Evolution du rapport des aires de pics correspondants aux ions primaires en fonction de
la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) ESI, mode MRM, conditions en annexe 3-3.

Contrairement aux rsultats prcdents, les rapports ne sont pas stables. Il y a une trs
grande distinction entre les valeurs des rapports en labsence totale deau et ceux observs en
prsence deau. Ceci est du en particulier la diffrence de comportement entre les couples
bentazone/bentazone D6 et mcoprop/mcoprop D3. Lorsque toutes les valeurs sont prises en
compte, les coefficients de variation des rapports dintensits des aires du
mcoprop/bentazone D6 sont de 34,2% et ceux de la bentazone/mcoprop D3 de 61,9%. Les
intensits daires obtenues 0% sont celles qui induisent le maximum de variation. Ainsi, si
ces valeurs correspondantes sont limines, les coefficients de variation des rapports des aires
de pics du mcoprop/bentazone D6 sont alors de 3,6%. Lors de lutilisation du mcoprop D3,
ils taient de 0,7% mais de lordre de 40% lorsque les intensits daires brutes sont
considres. Pour le rapport entre la bentazone et le mcoprop D3, les coefficients de
variations sont de 4,9% contre 0,9% lors de lutilisation de la bentazone D6.

La bentazone et le mcoprop sionisent selon le mme mode dionisation et ont des


temps de rtention trs proches. Quen est-il lors de lutilisation dun talon interne ayant un
temps de rtention lgrement loign du compos dintrt doser ?

- 170 -
Chapitre III

Limazaquin a un temps de rtention de 19,1 minutes et sionise la fois en mode


positif et ngatif. La figure 3-15 reprsente lvolution des rapports des aires de pics
correspondants aux ions primaires entre limazaquin (mode positif et ngatif) et la bentazone
D6 ou le mcoprop D3.

3,0 Imazaquin (+)/Bentazone D6 Imazaquin (+)/Mcoprop D3


Imazaquin (-)/Bentazone D6 Imazaquin (-)/Mcoprop D3

2,5
Rapport des aires de pics

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0
-5 15 35 55 75 95

Pourcentage d'H2O

Figure 3-15 : Evolution du rapport des aires de pics correspondants aux ions primaires en fonction de
la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) ESI, mode MRM, conditions en annexe 3-3.

Cette figure met en vidence les variations observes en fonction de la composition de


lchantillon inject des rapports des aires entre limazaquin et la bentazone D6 et le
mcoprop D3. Il convient de rappeler dans un premier temps que les coefficients de variation
des aires brutes de limazaquin varient de 28 et 26,5% en mode positif et ngatif (figure 3-12).

En considrant lutilisation de la bentazone D6, les coefficients de variation obtenus


sur les rapports des aires de pics sont de lordre 28% quel que soit le mode dionisation
utilis. Aucune amlioration nest donc observe lors de lutilisation de la bentazone D6
comme talon interne lors de lanalyse de limazaquin. En ce qui concerne lutilisation du
mcoprop D3, les coefficients de variation obtenus sur les rapports des aires de pics sont de
lordre 17% quel que soit le mode dionisation utilis. Une lgre amlioration est observe
mais reste tout de mme insuffisante.

- 171 -
Chapitre III

Ainsi, il semble clair que pour saffranchir des variations des intensits le cas idal est
lutilisation dune molcule marque identique la molcule doser lorsque celle-ci est
disponible. Toutefois, si les conditions de composition de lchantillon sont dfinies, lusage
dun talon interne semble permettre de saffranchir des ventuelles variations. Ainsi, pour la
suite des tudes tous les chantillons sont prpars dans un milieu hydro-organique
(actonitrile/eau 50/50). Il existe en effet un palier au niveau des intensits ces proportions.

6. Limites de quantification et talonnage


6.1. Limites de quantification

Au cours du chapitre 2, les limites de dtection et de quantification de la mthode


danalyse des pesticides dans leau ont t dtermines selon diffrentes approches.
Cependant, lapproche empirique reste ncessaire tout comme la vrification exprimentale.
Ainsi, pour le dveloppement de la mthode danalyse par DI/CPL/SM, les limites de
quantification ont t estimes en calculant la concentration qui conduit lobtention dun
rapport signal/bruit de 10 partir dune solution de concentration gale 5 g/L sauf pour
laldicarbe, le chlorpyriphos, le dichlorvos et le triallate pour lesquels une solution dix fois
plus concentre a t utilise. Les valeurs obtenues pour les diffrents composs sont donnes
dans le tableau 3-6.

Nanmoins, ces valeurs ayant t obtenues partir de solutions talons, elles peuvent
tre sous-estimes. Ainsi, elles peuvent tre plus eleves ds lors que des matrices complexes
seront tudies, la prsence dinterfrents peut effectivement augmenter les valeurs de LQ.
De plus, lors dune analyse par CPL/SM, ltat gnral du systme analytique (propret du
systme, maintenance) influe fortement sur ses performances. En outre, la dtection par
spectromtrie de masse reste un systme analytique relativement instable au cours du temps
dont les performances doivent tre rgulirement vrifies.

- 172 -
Chapitre III

Tableau 3-6 : Limites de quantification obtenues pour les diffrents composs tudis par CPL/SM
S/N = 10 (S = Signal et N = Bruit de fond).

Composs LQ en g/L Composs LQ en g/L


2,4 D 0,420 Fludioxonil 0,090
Actochlore 1,700 Fluroxypyr 1,200
Aldicarbe 25,000 Flutriafol 2,500
Azoxystrobine 0,060 Hexaconazole 4,180
Bentazone 0,300 Imazaquine 0,400
Bromoxynil 1,500 Imidaclopride 3,700
Carbofuran 3,700 Ioxynil 0,700
Carfentrazone thyle 2,700 Isoxaben 0,200
Chlorpyriphos 20,000 Malathion 0,700
Chlortoluron 0,460 Mcoprop 1,200
Cyproconazole 1,860 Mesotrione 0,001
Cyprodinil 1,060 Metolachlor 0,100
Dichlorvos 48,000 Mtosulam 0,140
Diflufnicanil 1,900 Prochloraze 0,240
Dimthenamide 0,500 Pyrimiphos-mthyl 0,370
Dimethoate 0,670 Quinoxyfen 1,090
Fenpropidine 0,600 Spiroxamine 3,600
Fipronil 0,600 Triallate 34,100
Florasulam 0,020 Tridemorphe 2,200

6.2. Etalonnage et intrt de la dilution isotopique

Etalonnage

Afin dapprcier les performances de la mthode danalyse par CPL/SM, une gamme
dtalonnage a t effectue. Les sensibilits des composs tant diffrentes, la gamme de
concentrations varie selon les pesticides, de la limite de quantification 0,15 ou 0,225 mg/L.
Les molcules marques sont toutes une teneur de 50 g/L quel que soit le niveau de
concentration tudi. Les conditions analytiques appliques sont celles cites en annexe 3-3.

Les droites dtalonnage obtenues pour les trente-huit composs sont prsentes en
annexe 3-4. Les quations de chacune des droites et les coefficients de corrlation (r) sont
galement indiqus pour tous les composs. Toutes les concentrations ont t injectes 4 fois.

- 173 -
Chapitre III

Intrt de la dilution isotopique

Un des intrts de la dilution isotopique a t mis en vidence au cours dun des


talonnages effectus lors de la thse. Ltalonnage considr a alors t ralis avec des
niveaux de concentrations allant de 0,025 0,75 mg/L. Les molcules marques sont toutes
0,15 mg/L lors de cet talonnage.

Malathion

La figure 3-16 reprsente lvolution des aires de pics du malathion en fonction de la


concentration injecte.

1,8E+07
y = 2E+07x + 1E+06
1,6E+07
R2 = 0,9033
1,4E+07

1,2E+07
Aires de pics

1,0E+07

8,0E+06

6,0E+06

4,0E+06

2,0E+06

0,0E+00
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8
Concentration en mg/L

Figure 3-16 : Evolution des aires de pics du malathion en fonction de la concentration, mode MRM,
n=4, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

Visuellement, le modle est loin dtre linaire mme sans lutilisation de test
statistique. Le malathion possde une molcule marque sous la forme malathion D6
laquelle ont t substitus 6 atomes dhydrogne par 6 atomes de deutrium.

Lvolution des rapports des aires du malathion (A) par rapport au malathion D6 (A*)
en fonction du rapport de concentration (C/C*) a t trace (figure 3-17). La concentration du

- 174 -
Chapitre III

malathion D6 (C*) a quant elle t maintenue constante dans les diffrentes solutions 0,15
mg/L.

25

y = 3,9962x + 0,2395
R 2 = 0,9971
20
Rapport A/A*

15

10

0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*

Figure 3-17 : Evolution de la moyenne des rapports des aires de pics du malathion//malathion D6 en
fonction du rapport des concentrations, mode MRM, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75
mg/L, conditions annexe 3-3, A :Aire du pic du malathion, A* :Aire du pic du malathion D6,
C : concentration du malathion, C* : concentration du malathion D6.

Tout dabord, il convient de noter que ltude du rapport des aires permet une fois de
plus de compenser linstabilit des aires obtenus par SM. La molcule dintrt a donc subi
les mmes variations que sa molcule marque. Pourtant, le phnomne dionisation de ces
deux molcules nest pas le mme. Par exemple, lorsque le malathion et le malathion D6 sont
la mme teneur, le rapport de concentration est gal 1 alors que le rapport des aires est de
lordre de 4. Lionisation du malathion est quatre fois plus leve que celle du malathion D6
malgr leur similitude. Cependant, tant donn que cette diffrence dionisation est constante
quelle que soit la concentration, le modle dtalonnage prsente une allure linaire.
Lutilisation de la molcule marque a permis de saffranchir dventuels problmes de
dtection par spectromtrie de masse et en particulier des problmes dinstabilit du signal
frquemment observs lors de lutilisation dun tel dtecteur. Or comment choisir ltalon
interne lorsque la molcule ne possde pas dhomologue marqu ?

- 175 -
Chapitre III

Azoxystrobine

La figure 3-18 reprsente lvolution des aires de pics de lazoxystrobine en fonction


de la concentration injecte.

1,4E+09
y = 1E+09x + 1E+08
R2 = 0,9476
1,2E+09

1,0E+09
Aires de pics

8,0E+08

6,0E+08

4,0E+08

2,0E+08

0,0E+00
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8
concentration en mg/L

Figure 3-18 : Evolution des aires du pic de lazoxystrobine en fonction de la concentration, dtection
MRM, n=4, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

Lallure du signal est la mme que celle du malathion, le modle ne semble pas tre
linaire. Lazoxystrobine est un pesticide qui ne possde pas dhomologue marqu. Il parat
raisonnable de penser que le choix dun talon interne en analyse par CPL/SM dpend la
fois du temps de rtention mais aussi du mode dionisation. Ainsi, afin dtudier linfluence
de ces deux paramtres, les diffrentes molcules marques tudies au cours de la thse ont
t utilises comme talon interne lors de lanalyse de lazoxystrobine par CPL/SM (Tableau
3-7). Afin de compenser, linstabilit des signaux, lefficacit des diffrentes molcules
marques a t value et les diffrentes droites obtenues sont prsentes en annexe 3-5.

Lazoxystrobine est lu un temps de rtention de 27,3 minutes et sionise en mode


positif (figure 3-8). Dans un premier temps, lorsque le mode dionisation positif est considr,
la molcule la plus proche est le mtolachlor D6. Cest dailleurs avec lutilisation de cette
molcule que le coefficient de corrlation est le plus proche de 1. Toujours en mode

- 176 -
Chapitre III

dionisation positif, le compos qui a le temps de rtention le plus loign est le dimethoate
D6, dix-sept minutes sparent les deux composs (Tableau 3-7). Malgr cette diffrence, il ne
sagit pas du compos qui compense le moins bien les instabilits de la CPL/SM. Par ailleurs,
le dimethoate D6 est un meilleur talon interne que le malathion D6 (figure 3-19 et figure
A3-5-3 (Annexe 3-5)) qui a pourtant un temps de rtention plus proche de celui de
lazoxystrobine.

Tableau 3-7 : Mode dionisation, temps de rtention et coefficient de corrlation des composs utiliss
comme ventuels talon interne.

Mode Temps de Coefficient de


Composs
d'ionisation rtention (min) corrlation r
Dimethoate D6 positif 9,87 0,9919
Carbofuran D3 positif 19,34 0,9828
Chlortoluron D6 positif 20,69 0,9949
Mtolachlor D6 positif 29,38 0,9971
Malathion D6 positif 29,82 0,9731
Actochlor D11 positif 29,93 0,9867
Pirimiphos mthyl D6 positif 35,82 0,9951
2,4 D 13C6 ngatif 25,14 0,9967
Bentazone D6 ngatif 25,57 0,9970
Mcoprop D3 ngatif 25,81 0,9948

La reprsentation graphique des rapports des aires de lazoxystrobine et du malathion


D6 montre une nette amlioration du modle dtalonnage que celui observe pour
lazoxystrobine seule (figures 3-18 et 3-19). Contrairement son utilisation pour le malathion,
le malathion D6 ne parvient pas saffranchir totalement des problmes dinstabilits des
signaux de lazoxystrobine.

Ainsi, le temps de rtention ne semble pas tre un critre unique pour le choix de
ltalon interne. Il est raisonnable de penser que ltalon interne choisir doit sioniser dans le
mme mode que le compos dintrt. La bentazone D6, le mcoprop D3 et le 2,4 D13C6 sont
des pesticides marqus ayant un caractre acide qui sionisent en mode ngatif et dont
lefficacit en tant qutalon interne a t value. La reprsentation graphique des rapports
des intensits de lazoxystrobine et de ces trois molcules montre une nette amlioration de

- 177 -
Chapitre III

lallure des droites (annexe 3-5 : figures A3-5-6, A3-5-8 et A3-5-10). Lexemple de la
bentazone D6 est prsent sur la figure 3-20.

1800
y = 299,65x + 16,078
1600
R2 = 0,9731
1400
Rapport A/A*

1200

1000

800

600

400

200

0
0 1 2 3 4 5

Rapport C/C*

Figure 3-19 : Evolution des rapports des aires de pics de lazoxystrobine/malathion D6 en fonction du
rapport des concentrations, dtection MRM, n=4, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75
mg/L, conditions annexe 3-3.

45

y = 7,656x - 1,0289
40
R2 = 0,997
35
Rapport A/A*

30

25

20

15

10

0
0 1 2 3 4 5

Rapport C/C*

Figure 3-20 : Evolution des rapports des aires de pics de lazoxystrobine/bentazone D6 en fonction du
rapport des concentrations, dtection MRM, n=4, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75
mg/L, conditions annexe 3-3.

- 178 -
Chapitre III

Lutilisation de la bentazone D6 comme talon interne amliore de faon la plus


significative lallure de la droite dtalonnage. Ainsi, le mode dionisation nest pas un critre
de choix de ltalon interne et la difficult de son choix a t mise en vidence.

Comment explique-t-on que la bentazone D6 permet une plus grande amlioration du


modle dtalonnage que le malathion D6 ? Dautant plus que ces deux molcules ont toutes
les deux un temps de rtention proche de la molcule dintrt. Dautre part, leurs proprits
physico-chimiques sont diffrentes (annexe 3-1). Lazoxystrobine ne possde pas de
proprits acido-basiques tout comme le malathion alors que la bentazone est un acide de pKa
gal 3,28.

III. 3. Conclusions

Au cours de cette tude, limportance du choix de la nature de la phase mobile a t


mise en vidence. Il apparat clairement que la composition de celle-ci a une influence
significative sur les rponses des diffrents composs. Par ailleurs, les rsultats obtenus ont
montr linfluence de lagent acidifiant et ce mme des teneurs trs faibles. La diversit des
comportements observs souligne la difficult de la mise au point dune mthode danalyse
multirsidus par CPL/SM. Il apparat clairement que le dveloppement dune telle mthode
implique de nombreux compromis pour le choix des diffrents paramtres. Aussi, leffet de la
nature du solvant de dilution de lchantillon inject sur les intensits observes a montr
limportance de la matrise de la prparation dchantillon.

Dautre part, il a t choisi de montrer les rsultats dtalonnage obtenus une priode
o il existait des problmes dappareillage. Il semble possible de saffranchir de ces
problmes avec lutilisation de molcules marques, condition de vrifier au pralable que
la molcule marque et la molcule doser prsentent le mme comportement. Toutefois, la
stratgie finale de quantification na pu tre mise en place pour les composs nayant pas
danalogues marqus. Cependant, linjection dun chantillon sera toujours prcde ou suivie
de linjection dune solution talon.

- 179 -
Chapitre III

- 180 -
Chapitre IV

Chapitre IV : Pesticides dans les matrices cralires :


dveloppement de la mthode dextraction en solvant chaud
pressuris

Lanalyse par CPL/SM de rsidus de pesticides prsents dans les matrices cralires
ncessite la mise en uvre dune tape pralable de traitement de lchantillon incluant une
tape dextraction. La technique analytique retenue lors de cette tude est lextraction en
solvant chaud pressuris. Dans un premier temps, une prsentation du protocole analytique
global mis en place est effectue. Chaque tape du processus doit tre tudie et contrle
individuellement. Ainsi, linfluence de ltape dvaporation sur les composs cibls a t
tudie. La stabilit des composs dintrt au cours de lextraction en solvant chaud
pressuris a ensuite t value. La temprature est lun des paramtres majeurs lors de
lutilisation dune telle technique, son influence a donc t estime. Une fois les conditions
dextraction fixes, les essais ont t raliss sur une matrice relle : le bl. Toutefois, cette
matrice est complexe et a ncessit une tape supplmentaire de purification.

- 181 -
Chapitre IV

IV. 1 . Introduction

Le but de cette tude est de mettre au point une mthode danalyse multirsidus de
pesticides dans les matrices cralires. Nanmoins, la CPL/SM2 ne permet lanalyse que des
chantillons sous forme liquide, or les matrices cralires sont sous forme de matrice solide.
Cest pourquoi une tape de traitement de lchantillon et, en particulier, une tape
dextraction avant lanalyse proprement dite est ncessaire. La technique slectionne est
lextraction en solvant chaud pressuris note PLE (Pressurised Liquid Extraction). La
matrice cible au cours de ces travaux est le bl. Les diffrentes tapes du protocole
analytique sont illustres par la figure 4-1.

Extraction des pesticides en


solvant(s) chaud(s) pressuris(s)

Broyage,
tamisage
Bl

Concentration

Analyse des pesticides


par CPL/SM2 Purification

Figure 4-1 : Protocole analytique global.

Diffrentes tapes sont donc ncessaires avant la dtermination de la teneur en


pesticides dans les matrices cralires. Dans un premier temps, la matrice est broye dans le
but damliorer lefficacit de lextraction (diamtre des particules <1000 m). Lextraction

- 182 -
Chapitre IV

des pesticides est ensuite effectue par PLE. Comme dj voqu en partie bibliographique,
pendant le processus PLE, le solvant est soumis des tempratures leves et pressuris dans
la cellule afin dtre maintenu ltat liquide. La littrature a mis en vidence une faible
influence de la pression. Ainsi, avec le systme ASE 100 (Dionex) qui a t employ au cours
de ces travaux, la pression est fixe par dfaut 100 bars et ne peut tre modifie. Lannexe
4-1 prsente en dtail le systme utilis. En revanche, la temprature et la nature du solvant
sont deux paramtres qui influent fortement sur lefficacit de lextraction. Ltude de leur
influence et leur optimisation sont donc ncessaires.

Cependant, avant de procder ltape dextraction proprement dite des pesticides du


bl, des tudes prliminaires sont essentielles pour contrler les diffrentes tapes du
processus analytique global (figure 4-1). Il est important en premier lieu de sassurer que
ltape dvaporation qui permet de concentrer lextrait obtenu par PLE nentrane aucune
perte ou dgradation des composs dintrt. Il faut vrifier ensuite que les composs cibls
ne se dgradent pas au cours de ltape dextraction sous leffet combin des hautes
tempratures et des pressions mises en uvre. Cette tape est effectue sur une matrice inerte.
Une fois, que labsence de dgradation ou de perte des composs au cours du processus global
a t vrifie, ce dernier peut alors tre appliqu la matrice relle.

Lors du dveloppement de la mthode dextraction des pesticides dans le bl, la


quantification des pesticides a t effectue par ESI/CPL/SM. Le mode MRM par acquisition
des transitions de quantification (ions primaires) a t employ. Les conditions analytiques
utilises sont celles prcdemment optimises et sont indiques en annexe 3-3. Nanmoins,
avant analyse, lextrait de bl subit une tape de purification afin dliminer le maximum
dinterfrents qui peuvent rendre difficile la quantification des pesticides par CPL/SM. Une
tape de concentration par vaporation de lextrait est galement indispensable pour faciliter
la dtection des composs cibls par CPL/SM.

IV. 2. Contrle de ltape dvaporation


1. Principe et protocole dvaporation

Lextrait recueilli aprs ltape dextraction des matrices cralires peut atteindre un
volume de cinquante millilitres. Or, pour faciliter la quantification des pesticides cibls,
lextrait subit une tape dvaporation afin de les concentrer. Le contrle de cette tape est

- 183 -
Chapitre IV

primordial de faon sassurer que les pesticides ne sont pas dgrads pendant cette tape
denrichissement. Lvaporation de lextrait est ralise avec un vaporateur rotatif (figure 4-
2).

Rfrigrant
Ballon 1
contenant
Ballon 2 de lextrait
rcupration
des condensats

Pompe Bain
vide thermostat

Figure 4-2: Photo de lvaporateur rotatif.

Le ballon 1 contenant lextrait est plong dans un bain thermostat une temprature
dfinie. Ce ballon est inclin et anim dun mouvement de rotation dans le but daugmenter la
surface dvaporation du solvant. La pression lintrieur du dispositif est abaisse au moyen
dune pompe vide qui augmente la vitesse dvaporation. En effet, en travaillant pression
rduite la temprature dbullition est diminue. Les vapeurs du solvant se dirigent vers un
rfrigrant (ou condenseur) qui permet leur condensation ; les condensats sont alors rcuprs
dans le ballon 2.

Un volume de cinquante millilitres dactonitrile a t dop 10 g/L par une solution


multipesticides. Cette solution a ensuite t vapore une temprature de 50C. Le temps
ncessaire lvaporation de cinquante millilitres dactonitrile est alors denviron une
quinzaine de minutes. Cependant, du fait de la rapidit de lvaporation et dans le but de la
contrler au mieux, la solution nest vapore que partiellement lvaporateur rotatif et les
cinq derniers millilitres sont vapors sec sous flux dazote.

Lextrait sec doit ensuite tre repris avant analyse par CPL/SM. Or, au cours du
chapitre 3, linfluence de la composition de lchantillon inject sur lintensit des aires des
pics a t mise en vidence. La nature du solvant de lchantillon influe en effet sur les

- 184 -
Chapitre IV

rponses des diffrents pesticides. Ainsi, le choix des conditions de reprise de lextrait sec est
dune grande importance. Le solvant de reprise doit en effet, dune part, permettre une bonne
solubilisation de lextrait, et dautre part, tre compatible avec le systme danalyse. Ainsi, au
vu des rsultats prcdemment obtenus, lextrait est donc repris par 500 L dactonitrile puis
500 L dH2O pour constituer la solution injecter de concentration finale gale 0,5 mg/L.

2. Taux de rcupration aprs vaporation

La solution finale obtenue aprs vaporation et reprise est injecte dans le systme
danalyse par CPL/SM. Afin de procder la quantification, le chromatogramme obtenu est
compar celui dune solution de mme concentration (solution mre) nayant subit aucun
traitement. Cette dernire est une solution multipesticides une concentration de 0,5 mg/L en
milieu hydroorganique (H2O/ACN 50/50). Le taux de rcupration not TR en pourcentage est
dfinit par :
Aire du pic d ' un compos dans la solution finale
TR (%)= * 100.
Aire du pic d ' un compos dans la solution mre

Il est considr comme un indicateur de la conservation quantitative des composs.


Plus il est proche de 100%, moins il y a de perte de composs. En revanche, un taux de
rcupration plus faible reflte une dgradation ou une perte des composs lors de ltape
dvaporation. Les taux de rcupration obtenus pour les composs tudis sont prsents sur
les figures 4-3 et 4-4. Ces rsultats sont issus de six essais effectus au cours de six jours
diffrents, ceci afin dvaluer la reproductibilit de ltape dvaporation.

- 185 -
TR % TR %

0
20
40
60
80
100
120
140
0
20
40
60
80
100
120

Fipronil 2,4 D
Florasulam 2,4 D 13C6
Fludioxonil Actochlore
Fluroxypyr Actochlore D11
Flutriafol Aldicarbe
Hexaconazole Aldicarbe D3
Imazaquine Azoxystrobine
Imidaclopride Bentazone
Imidaclopride D4 Bentazone D6
Ioxynil Bromoxynil
Isoxaben Carbofuran
Malathion Carbofuran D3

- 186 -
Malathion D6 Carfentrazone-thyl
Chapitre IV

Mecoprop Chlorpyriphos
Mecoprop D3 Chlorpyriphos D10
Mesotrione Chlortoluron
Metolachlor Chlortoluron D6
Metolachlor D6 Cyproconazole
Metosulam Cyprodinil
Pirimiphos-mthyl Dichlorvos
Pirimiphos mthyl D6 Dichlorvos D6
CPL/ESI/SM, mode+/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.


Prochloraze Diflufenican
Quinoxyfne Dimethanamide
Spiroxamine Dimethoate
Triallate

ng/l obtenus aprs reprise de lextrait sec par 0,5 mL dactonitrile puis 0,5 mL deau (n=6)
Dimethoate D6
0,01 mg/L obtenus aprs reprise de lextrait sec par 500 L dactonitrile et 500 L deau (n=6),
Figure 4-3 : Taux de rcupration (TR) moyens aprs vaporation dune solution multipesticides

Tridemorphe Fenpropidine

Figure 4-4 : Taux de rcupration(TR) moyens aprs vaporation dune solution multipesticides 0,01
Chapitre IV

Ces rsultats mettent en vidence que le couple de composs : dichlorvos et dichlorvos


D6 est le plus influenc par ltape dvaporation. Ils prsentent en effet des taux moyens de
rcupration aprs vaporation de lordre de 50% et les rsultats sont trs disperss. Ils varient
effectivement de 20 82%. Ainsi, ils semblent que ces molcules sont volatiles ce qui est
confirm par la valeur de tension de vapeur leve du dichlorvos. De plus, ces composs
semblent tre sensibles notamment au dbit dazote appliqu pendant lvaporation sec
des cinq derniers millilitres. Malgr ces grandes dispersions et le fait que les valeurs puissent
tre faibles, il apparat que le dichlorvos et le dichlorvos D6 ont des comportements similaires.
Ainsi, lajout de dichlorvos D6 dans un chantillon inconnu devrait permettre de corriger les
pertes du dichlorvos.

Une attention particulire est porte sur les quatorze couples de pesticides/pesticides
marqus. Les valeurs moyennes des taux de rcupration aprs vaporation ne varient que de
1,5% entre les molcules et les homologues marqus. Cependant, les deux couples pour
lesquels les carts sont les plus importants sont : le chlorpyriphos et le chloryriphos D10 qui
ont un cart de 4,4% ainsi que limidaclopride et limidaclopride D4 qui ont un cart de 5,9%.
Pour ce dernier couple, la diffrence peut sexpliquer par la discordance du mode dionisation
de ces deux molcules. Limidaclopride sionise en mode positif alors que son homologue
marqu sionise en mode ngatif. En ce qui concerne le chlorpyriphos, il est raisonnable de
penser que la diffrence de comportement, mme si elle est faible, peut provenir du nombre
important de substitutions datomes dhydrogne par des atomes de deutrium. Toutefois,
cette hypothse est rfute par le couple actochlore/ actochlore D11 pour lequel la
diffrence des taux moyens de rcupration aprs vaporation est de 1,9%. Nanmoins, les
carts observs restent tout de mme relativement faibles. De faon gnrale, il existe une
bonne corrlation entre les valeurs observes pour les pesticides et leurs homologues
marqus au cours de ltape dvaporation.

Le taux moyen de rcupration aprs vaporation des cinquante deux composs est de
93,7% (CV = 10,4%, n=6), cette valeur est toute fait satisfaisante. Les essais ont en effet t
effectus sur diffrents jours et refltent donc la reproductibilit de ltape dvaporation. De
plus, si les valeurs les plus faibles du dichlorvos et du dichlorvs D6 sont cartes, le taux
moyen de rcupration est alors de 95,5% avec un coefficient de variation moyen de 4,1%
sur six rptitions.

- 187 -
Chapitre IV

Ainsi, ces rsultats montrent que les composs sont stables pendant le processus
dvaporation effectue lvaporateur rotatif 50C ainsi que sous flux dazote et que les
conditions de reprise de lextrait sec sont adaptes.

En consquence, les tapes dvaporation et de redissolution de lextrait sec ne


semblent pas induire des problmes de perte et/ou de dgradation des composs lexception
du dichlorvos. Nanmoins, pour ce dernier, une correction est possible avec lutilisation de
son homologue marqu.

IV. 3. Etude de la stabilit des composs cibls en PLE :


utilisation dune matrice inerte

La PLE est une technique qui combine des pressions et des tempratures leves.
Comme il nexiste pas de donnes sur la stabilit des composs soumis de hautes pressions
et hautes tempratures, il convient de vrifier que les composs cibls sont stables dans le
solvant chaud sous pression. Avant loptimisation de lextraction des pesticides sur des
matrices cralires, lapproche a consist utiliser une matrice inerte pour tudier la
stabilit des composs pendant ltape dextraction. Cette matrice doit tre dope par les
pesticides tudis et son utilisation a pour but, dune part, de minimiser la prsence
dinterfrents mais aussi les ventuelles interactions entre les composs et la matrice. Et
dautre part, la matrice inerte sera utilise terme pour complter le volume mort de la
cellule dextraction.

1. Conditions utilises en PLE

Les conditions utilises lors de ltude de la stabilit des composs lors de lextraction
sont indiques dans le tableau 4-1. Elles ont t dfinies partir des diffrentes donnes
existantes dans la littrature.

Afin de procder lextraction, un filtre en cellulose est dpos au fond de la cellule


dextraction en acier de 11 mL. Ce filtre est utilis pour viter le transfert des fines particules
pouvant provenir de la matrice inerte tudie vers le flacon de rcupration. La cellule est
ensuite remplie de moiti par la matrice. Elle est alors dope avec 1 mL dune solution mre

- 188 -
Chapitre IV

multipesticides 0,5 mg/L. Le remplissage complet de la cellule est ensuite effectu par ajout
de la matrice inerte.
Tableau 4-1 : Conditions appliques en PLE.

Prchauffage 0 min
Phase statique 5 min
Rinage 70 % volume de la cellule
Purge 150 sec
Cycles 3
Pression 100 bars
Temprature 100C
Actonitrile et/ou
Solvant
mthanol

Une fois lextraction termine, lextrait est rcupr et vapor selon le protocole
dfini prcdemment. Lextrait sec est ensuite repris par 1 mL dun mlange hydro-organique
pour reconstituer la solution finale. Une temprature fixe 100C a t choisie lors des
premiers essais. Toutefois, linfluence de ce paramtre sera tudie par la suite. La solution
finale a une concentration thorique quivalente celle de la solution mre soit 0,5 mg/L. Les
deux solutions sont analyses par CPL/SM2 et les taux de rcupration (TR) ont t valus en
comparant les aires de pics obtenues aprs les tapes dextraction, dvaporation et de
concentration avec celles de la solution initiale de mme concentration nayant subit aucun
traitement. Deux matrices ont t tudies, le sable de Fontainebleau et les billes de verre.

2. PLE de sable de Fontainebleau avec lactonitrile comme solvant


dextraction

Une premire matrice inerte a t teste dans les conditions pr-cites : le sable de
Fontainebleau (VWR Prolabo, France). Dans un premier temps, lactonitrile a t utilis
comme solvant dextraction. Etant donn que le dopage a t effectu juste avant lanalyse, la
nature du solvant ne doit avoir quune faible influence sur les taux de rcupration. En outre,
ce solvant permet une bonne solvatation des molcules cibles. Le volume dactonitrile de
lextrait est denviron 25 mL. Ces essais ont t raliss trois fois au cours dune mme
journe et trois jours diffrents afin de pouvoir apprcier la reproductibilit des rsultats.
Les figures 4-5 et 4-6 illustrent les rsultats obtenus avec le sable de fontainebleau. La
quantification a t effectue en exploitant les transitions correspondantes aux ions primaires.

- 189 -
TR % TR %

0
20
40
60
80
100
120

0
20
40
60
80
100
120
Fipronil 2,4 D

Florasulam 2,4 D 13C6


Fludioxonil Actochlore
Fluroxypyr Actochlore D11
Flutriafol Aldicarbe
Hexaconazole Aldicarbe D3
Imazaquine Azoxystrobine
Imidaclopride
Bentazone
Imidaclopride D4
Bentazone D6
Ioxynil
Bromoxynil
Isoxaben
Carbofuran
Malathion

- 190 -
Carbofuran D3
Malathion D6
Chapitre IV

Carfentrazone-thyl
Mecoprop
Chlorpyriphos
Mecoprop D3
Mesotrione Chlorpyriphos D10

Metolachlor Chlortoluron

dtection MRM, conditions en annexe 3-3.


dtection MRM, conditions en annexe 3-3.
Metolachlor D6 Chlortoluron D6

Metosulam Cyproconazole
Pirimiphos-mthyl Cyprodinil
Pirimiphos mthyl D6 Dichlorvos
Prochloraze Dichlorvos D6
Quinoxyfne Diflufenican
Spiroxamine Dimethanamide
Triallate Dimethoate

conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile, CPL/ESI/SM, mode +/-,
conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile, CPL/ESI/SM, mode +/-,

Figure 4-6: Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop (n=9),
Tridemorphe
Figure 4-5 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop (n=9),

Dimethoate D6
Fenpropidine
Chapitre IV

Les figures 4-5 et 4-6 mettent en vidence des faibles taux de rcupration pour
certains composs :
le 2,4 D, le 2,4D 13C6 (figure 4-5),
le dichlorvos et le dichlorvos D6 (figure 4-5)
le mcoprop, le mcoprop D3 (figure 4-6),
le fluroxypyr, limazaquine, la msotrione (figure 4-6).

Afin didentifier au mieux la cause des pertes observes, il convient de comparer ces
rsultats ceux prcdemment obtenus lors de ltude de linfluence de ltape dvaporation.
Le premier couple considrer est le dichlorvos/dichlorvos D6. Les faibles taux de
rcuprations observs sont trs proches des valeurs obtenues lors de ltude de linfluence de
ltape dvaporation. Ainsi, comme dj voqu auparavant, les faibles taux de rcupration
sont dus essentiellement aux pertes survenants au cours de ltape dvaporation cause de la
volatilit leve de ces molcules. Par ailleurs, les rsultats obtenus restent disperss. En
13
revanche, pour les autres composs (2,4 D, 2,4D C6, mcoprop, mcoprop D3, fluroxypyr,
imazaquine, msotrione) qui nont montr aucune dgradation ou perte au cours de ltape
dvaporation (figures 4-3 et 4-4), deux hypothses sont envisager. Il est raisonnable de
penser que les faibles rendements peuvent sexpliquer soit par une dgradation des composs
au cours de ltape dextraction, soit par lexistence dinteractions avec la matrice suppose
inerte. En outre, les composs concerns par les faibles taux de rcupration sont relativement
polaires et prsentent des proprits acides (Annexe 3-1).

De manire gnrale, des taux de rcupration quasiment identiques pour les


composs et leurs homologues marqus ont t obtenus. Ce qui laisse supposer une similitude
entre les comportements des molcules et des molcules marques. Toutefois, lorsque les taux
de rcupration sont observs plus en dtails, il savre que les diffrences entre les taux de
rcupration des molcules et de leurs homologues marqus sont comprises entre 0,3 et 5,9%.
Ainsi, lors de la mise en uvre de la dilution isotopique, le postulat selon lequel les molcules
et leurs homologues marqus ont le mme comportement du fait de leur analogie ne suffit pas.
Il est donc indispensable de vrifier la fois le comportement des molcules natives et celui
des molcules marques au cours du processus analytique global. Une diffrence de 6% en
terme de taux de rcupration observe sur des matrices pures peut induire effectivement une
erreur non ngligeable lors de lexpression du rsultat final. Cette erreur peut entraner une
incertitude supplmentaire sur lexpression du rsultat.

- 191 -
Chapitre IV

Enfin, le taux de rcupration moyen pour lensemble des composs est de 81% et le
coefficient de variation moyen est de 4% (n=9). Ces valeurs de dispersion restent
satisfaisantes du fait que les tudes ont t effectues des jours diffrents et que les tapes
mises en uvre avant lanalyse proprement dite par CPL/SM sont nombreuses. Malgr la
mise en vidence dune stabilit de la majorit des composs aux hautes pressions et
tempratures utilises, il est intressant de vrifier si les faibles taux de rcupration observs
pour certaines molcules sont dus une interaction des composs avec le sable ou une
dgradation de ceux-ci.

3. PLE de billes de verre

Des billes de verre supposes plus inertes que le sable de Fontainebleau ont t
utilises. Elles ont t testes dans les mmes conditions que ce sable avec lactonitrile
comme solvant dextraction, solvant pour lequel des interactions avaient t observes entre
certains composs et le sable. Les rsultats prsents sur les figures 4-7 et 4-8 ont t obtenus
lors de trois essais effectus au cours de trois jours diffrents.

100

80

60
TR %

40

20

0
Diflufenican
Chlorpyriphos D10
Actochlore

Bentazone

Chlortoluron
Chlortoluron D6

Dichlorvos D6

Dimethanamide
Actochlore D11
Aldicarbe

Chlorpyriphos

Dichlorvos
Bromoxynil

Cyprodinil
Carfentrazone-thyl
Carbofuran D3

Cyproconazole

Dimethoate
2,4 D 13C6

Bentazone D6

Fenpropidine
Aldicarbe D3
Azoxystrobine
2,4 D

Carbofuran

Dimethoate D6

Figure 4-7 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides des billes de verre dopes (n=3),
conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile, CPL/ESI/SM, mode +/-,
dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 192 -
Chapitre IV

100

80

60
TR %

40

20

0
Fluroxypyr
Fludioxonil

Ioxynil

Quinoxyfne
Isoxaben
Fipronil

Flutriafol

Malathion

Mecoprop

Metolachlor D6

Prochloraze

Triallate
Spiroxamine
Mecoprop D3
Hexaconazole
Imazaquine
Florasulam

Metolachlor

Tridemorphe
Malathion D6

Mesotrione
Imidaclopride D4
Imidaclopride

Metosulam

Pirimiphos mthyl D6
Pirimiphos-mthyl
Figure 4-8 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides des billes de verre dopes (n=3),
conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile, CPL/ESI/SM, mode +/-,
dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

Lorsque ces rsultats sont compars ceux prcdemment obtenus avec le sable de
Fontainebleau et avec comme solvant dextraction, lactonitrile (Figures 4-5 et 4-6), un
profil quasi-identique est observ. Malgr cela, lexistence dinteractions plus faibles avec les
billes de verre est mise en vidence. En effet, une amlioration des taux de rcupration est
observe pour les composs acides qui ntaient que trs faiblement extraits lors de
lutilisation du sable de Fontainebleau : le 2,4D et le 2,4 D 13C6 sont en effet extraits 20%
des billes de verre contre 1,5% auparavant avec le sable. Un gain denviron 35 % a galement
t observ pour le fluroxypyr, le mcoprop et le mcoprop D3. La msotrione est extraite
plus de 50% et limazaquin a environ 75%. Le rendement moyen de lextraction des
pesticides des billes de verre est de 85%. Les dispersions sont relativement faibles de lordre
de 4% pour des rsultats obtenus sur trois jours diffrents. En revanche, les taux de
rcupration du dichlorvos et du dichlorvos D6 sont trs satisfaisants de lordre de 83,5% ce
qui confirme aussi lexistence dinteractions entre le sable et le dichlorvos. En outre, ces
essais mettent en vidence une diminution de lefficacit de lextraction de limidaclopride
D4, phnomne qui nest pas observ pour limidaclopride qui est totalement extrait des billes
de verre. Cette tendance na pas t observe lors de lextraction lactonitrile pur des
pesticides du sable de Fontainebleau. La diffrence des taux moyens de rcupration obtenus

- 193 -
Chapitre IV

est de 23%. Par ailleurs, le couple de composs imidaclopride/imidaclorpide D4 est le seul


pour lequel les modes dionisation diffrent entre la molcule et son homologue marqu.
Cette diffrence de comportement lionisation peut traduire le fait que ces composs
possdent des proprits physico-chimiques diffrentes, do un comportement diffrent
lextraction.

Au vu de ces rsultats, les billes de verre semblent tre moins ractives vis vis des
pesticides que le sable de Fontainebleau et les faibles taux de rcupration observs semblent
tre dus principalement des interactions tablies entre le sable de Fontainebleau et certains
des composs tudis.

4. PLE de sable de Fontainebleau avec un mlange


actonitrile/mthanol comme solvant dextraction

Ainsi, afin de confirmer cette dernire hypothse (existence dinteractions), des


extractions ont t ralises avec un solvant plus polaire par mlange en proportions
quivalentes de mthanol et dactonitrile (figures 4-9 et 4-10). Les rsultats prsents ont t
obtenus sur quatre jours diffrents.

100

80

60
TR %

40

20

0
Dimethanamide

Dimethoate D6
Dimethoate
Chlortoluron D6
2,4 D 13C6

Fenpropidine
Chlorpyriphos D10

Cyprodinil
Chlortoluron
Bentazone D6
Bromoxynil

Dichlorvos D6
2,4 D

Carbofuran D3
Aldicarbe D3

Chlorpyriphos
Bentazone

Cyproconazole

Diflufenican
Actochlore D11

Dichlorvos
Carbofuran
Aldicarbe

Carfentrazone-thyl
Actochlore

Azoxystrobine

Figure 4-9 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop (n=4),
conditions dextraction en annexe 4-1, solvants dextraction = actonitrile/ mthanol (50/50, v/v),
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 194 -
Chapitre IV

100

80

60
TR %

40

20

0
Fluroxypyr

Ioxynil

Quinoxyfne
Mecoprop
Flutriafol

Malathion

Prochloraze
Mecoprop D3

Metolachlor
Hexaconazole

Triallate
Isoxaben

Metolachlor D6
Malathion D6
Fipronil

Mesotrione
Fludioxonil

Imazaquine

Metosulam

Spiroxamine

Tridemorphe
Florasulam

Imidaclopride
Imidaclopride D4

Pirimiphos mthyl D6
Pirimiphos-mthyl
Figure 4-10 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop (n=4),
conditions dextraction en annexe 4-1, solvants dextraction = actonitrile/ mthanol (50/50, v/v),
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

Lutilisation dun mlange actonitrile/mthanol comme solvant dextraction du sable


de Fontainebleau dop par les pesticides cibls entrane une augmentation des taux de
rcupration pour les composs faiblement extraits du sable de Fontainebleau par de
13
lactonitrile pur (le 2,4 D, le 2,4D C6 (figure 4-5), le fluroxypyr, limazaquine, le
mcoprop, le mcoprop D3 et la msotrione (figure 4-6)) except pour le dichlorvos et le
dichlorvos D6. Ces rsultats confirment labsence de dgradation mais au contraire lexistence
dinteractions entre ces composs et le sable de Fontainebleau.

Par ailleurs, ces essais dvoilent une diminution trs nette de lefficacit de
lextraction de limidaclopride. Ce phnomne est dautant plus prononc pour son
homologue marqu limidaclopride D4. La diffrence des rendements moyens entre
limidaclopride et limidaclopride D4 observs est de 46%. Comme voqu auparavant, ces
composs sont les seuls pour lesquels les modes dionisation diffrent entre la molcule et son
homologue marqu. Ainsi, une fois de plus, il est indispensable, lors du dveloppement dune
mthode danalyse, doptimiser les paramtres de dtection et dextraction la fois pour les
composs cibls mais aussi pour leurs homologues marqus.

- 195 -
Chapitre IV

Le rendement moyen pour lensemble des composs est de 84,5% et le coefficient de


variation moyen est de 3% (n=4). Toutefois, lorsque les rsultats du dichlorvos, du dichlorvos
D6, de limidaclopride et de limidaclopride D4 sont limins, le taux de rcupration moyen
atteint 89,5%.

Les composs sont donc stables dans ces solvants chauds une temprature de 100C
et pressuriss 100 bars. En revanche, le sable de fontainebleau nest pas une matrice si inerte
vis vis de tous les composs. Ainsi, compte tenu de la mise en vidence des interactions
entre le sable et les pesticides dintrt, les billes de verre seront donc utilises comme
matrice pour combler le volume mort de la cellule dextraction lors dapplications des
matrices relles. Nanmoins, tant donn que le dopage liquide du sable de Fontainebleau est
plus pratique que celui des billes de verre et compte tenu de lexistence dinteractions, ltude
de linfluence de la temprature en PLE sera mene sur le sable.

IV. 4. Influence de la temprature en PLE

Ltude bibliographique a mis en vidence que la temprature est lun des paramtres
influants lors dune extraction en solvant chaud pressuris. Les hautes tempratures diminuent
la viscosit du solvant liquide, augmentent la solubilit des composs dintrt et favorisent
leur diffusion la surface de lchantillon. Ces effets permettent une meilleure pntration du
solvant dans les particules de la matrice et donc une amlioration de lefficacit de
lextraction. Les interactions entre la matrice et les diffrents soluts sont plus facilement
rompues lorsque la temprature augmente. Malgr ces avantages, certains composs peuvent
se dgrader sous leffet de la temprature. Ainsi, compte tenu du nombre important de
molcules tudies, la difficult est de trouver un compromis entre la temprature pouvant
tre supporte par les pesticides et lefficacit de lextraction qui peut crotre avec la
temprature. Toutefois, il existe une valeur optimale, en effet, mme sil ny a pas de
dgradation des composs dintrt lorsque la temprature crot, il ny a aucun intrt fixer
une valeur trop leve qui augmente le risque de co-extraction dinterfrents et qui rend
lextrait plus difficile analyser.

Dans un premier temps, afin de saffranchir de la complexit de la matrice et des effets


dus cette dernire, des tests ont t effectus sur une matrice inerte. Les essais raliss
prcdemment lors de ltude de la stabilit des composs ont montr lexistence

- 196 -
Chapitre IV

dinteractions entre le sable de Fontainebleau et certains des composs tudis. Toutefois, ds


lors quun mlange actonitrile/mthanol est utilis comme solvant dextraction, les taux de
rcuprations sont satisfaisants (sauf pour limidaclopride, limidaclopride D4 et le dichlorvos,
le dichlorvos D6).

Ainsi, ltude de linfluence de la temprature a t effectue en utilisant le sable de


Fontainebleau dop par une solution multipesticides (1 mL 0,5 mg/L). Le solvant
dextraction retenu est donc le mlange actonitrile/mthanol (50/50,v/v) prcdemment
utilis (figures 4-9 et 4-10). Les conditions dextraction mises en uvre sont celles donnes
en annexe 4-1, hormis la temprature. Trois tempratures diffrentes ont t testes : 100, 120
et 150C pour vrifier la stabilit des composs chaud et sous pression. Les rsultats issus
dexprimentations effectues au cours de trois jours diffrents sont prsents sur les figures
4-11 4-13.

140
T=100 C
T=120 C
120 T=150 C

100
TR %

80

60

40

20

0
Azoxystrobine
2,4 D

Actochlore

Bentazone

Bromoxynil

Carfentrazone-thyl
Aldicarbe

Bentazone D6
2,4 D 13C6

Actochlore D11

Aldicarbe D3

Carbofuran

Carbofuran D3

Chlortoluron

Chlortoluron D6
Chlorpyriphos

Chlorpyriphos D10

Figure 4-11 : Influence de la temprature sur les taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du
sable de Fontainebleau (solvant : MeCN/MeOH (50/50), conditions en annexe 4-1, n=3,
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 197 -
Chapitre IV

140
T=100 C
T=120 C
120 T=150 C

100

80
TR %

60

40

20

Fluroxypyr

Flutriafol
Cyproconazole

Hexaconazole
Fipronil
Cyprodinil

Fludioxonil

Imazaquine
Dichlorvos

Dichlorvos D6

Diflufenican

Dimethoate

Dimethoate D6

Fenpropidine

Florasulam

Imidaclopride

Imidaclopride D4
Dimethanamide

Figure 4-12 : Influence de la temprature sur les taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du
sable de Fontainebleau (solvant : MeCN/MeOH (50/50), conditions en annexe 4-1, n=3,
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.
160
T=100 C
140 T=120 C
T=150 C
120

100

80
TR %

60

40

20

0
Ioxynil

Quinoxyfne
Mecoprop
Malathion

Mecoprop D3

Prochloraze
Metolachlor

Triallate
Isoxaben

Metolachlor D6
Malathion D6

Mesotrione

Metosulam

Spiroxamine

Tridemorphe
Pirimiphos mthyl D6

Pirimiphos-mthyl

Figure 4-13 : Influence de la temprature sur les taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du
sable de Fontainebleau (solvant : MeCN/MeOH (50/50), conditions en annexe 4-1, n=3,
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 198 -
Chapitre IV

La figure 4-11 met en vidence que laldicarbe et laldicarbe D3 ont des taux de
rcupration qui sont plus faibles 120 et 150C que ceux obtenus 100C. Ce
comportement peut tre expliqu par le fait quil sagit de molcules thermo-sensibles.
Toujours est-il que ces deux molcules ont des comportements identiques quelle que soit la
temprature tous comme les autres couples de composs (2,4D/2,4D13C6 ;
actochlore/actochlore D11 ; bentazone/bentazone D6 ; carbofuran/carbofuran D3 ;
chlortoluron/chlortoluron D6 ; chlorpyriphos/chlorpyriphos D10).

La figure 4-12 illustre les faibles taux de rcupration obtenus pour le dichlorvos et le
dichlorvos D6. Comme dj voqu prcdemment, ces composs sont volatils et donc
sensibles ltape dvaporation (figure 4-3). Par ailleurs, des interactions entre le sable de
Fontainebleau et ces composs ont t auparavant mises en vidence. En outre, pour
limidadopride et limidaclopride D4, une augmentation de la temprature entrane
paralllement un accroissement des taux de rcupration. En effet, 100C, il existe des
interactions entre limidaclopride, son homologue marqu et le sable de Fontainebleau. Or,
120 et 150C, ces composs sont extraits quantitativement du sable. Ce comportement
conforte la thorie selon laquelle laugmentation de la temprature permet de rompre plus
facilement les ventuelles interactions solut/matrice. Un comportement similaire a t obtenu
pour le tridmorphe (figure 4-13). En revanche, le triallate a un taux moyen de rcupration
de seulement 66% 150C. Tous les autres composs illustrs par la figure 4-13 ont des
rendements compris entre 80 et 100%. Cependant, 150C, lioxynil a un taux de
rcupration suprieur 100%, or un blanc de sable de Fontainebleau a t effectu et aucun
des composs ne sy est avr prsent.

Nanmoins, lorsque les rsultats sont tudis dans leur globalit, il ny a pas de
diffrence significative entre les taux moyens de rcupration pour lensemble des composs,
quelle que soit la temprature applique. Les rsultats obtenus donnent les valeurs de taux
moyens de rcupration suivants :
T = 100C, TRmoy = 86,1%, (CV = 2,7%, n=3),
T = 120C, TRmoy = 87,1%, (CV = 10,7%, n=3),
T = 150C, TRmoy = 85,9%, (CV = 5,4%, n=3).
Cette similitude des taux de rcupration observe sexplique par le fait que peu de composs
semblent tre thermodgradables. De plus, peu dinteractions solut/sable semblent se
produire hormis pour quelques exceptions.

- 199 -
Chapitre IV

Toutefois, de manire gnrale, une plus grande dispersion (CV) des rsultats est
observe 120C. Les valeurs sont toutes fait satisfaisantes compte tenu du nombre de
molcules analyses. Cependant, aucune cause de dispersion na pu tre raisonnablement
avance. Le choix dfinitif de la temprature devra tre effectu lors de ltude de matrices
relles, les crales car la temprature a un effet sur les interactions soluts/matrice. Par
ailleurs, il ne faut pas ngliger le risque de co-extraction lorsque la temprature augmente.

Ainsi, ces rsultats ont montr que les pesticides tudis sont stables quelle que soit la
temprature applique entre 100 et 150C except pour laldicarbe et son homologue marqu.

Les diffrents rsultats obtenus prcdemment au cours de ltape dvaporation, de


ltude de la stabilit des composs au cours dune PLE sur les matrices inertes et de
linfluence de la temprature ont t jugs encourageants et les travaux ont t poursuivis par
ltude de lextraction de pesticides de la matrice relle : le bl.

IV. 5. Application une matrice relle : le bl


1. Protocole dextraction du bl

Une prise dchantillon de deux grammes de bl broy (diamtres des particules


infrieurs 1000 m) est effectue. La plus petite cellule dextraction en acier disponible au
laboratoire de 11 mL a t utilise tant donn la faible quantit de prise dchantillon. Un
filtre en cellulose est dpos au fond de la cellule dextraction pour viter la migration des
faibles particules de bl vers lextrait. Environ un gramme dchantillon est dpos au fond de
la cellule. Le dopage du bl est alors effectu avec 1 mL dune solution mre multipesticides
0,5 mg/L. Le reste de lchantillon de bl (1 gramme) est alors ajout et un second filtre en
cellulose est mis en place dans la cellule. Ltude de la stabilit des composs au cours de la
PLE avec une matrice inerte ayant mis en vidence lexistence dinteractions plus faibles lors
de lutilisation des billes de verre que celle du sable de Fontainebleau, des billes de verre sont
alors introduites jusquau remplissage complet de la cellule pour combler le volume mort et
limiter le volume final de lextrait. Lextraction est ensuite ralise dans les conditions
donnes en annexe 4-1 avec lactonitrile comme solvant dextraction et 100C.

- 200 -
Chapitre IV

Les premires extractions effectues ont rvl la prsence de matires en suspension


et de graisses. Par ailleurs, aprs vaporation sec, des rsidus secs ont t mis en vidence.
Le bl constitue en effet une matrice relativement complexe dans laquelle les composs
dintrts sont en prsence de glucides, de protines, de lipides et de cellulose. Une tape de
purification avant lanalyse de lextrait par CPL/SM est donc apparue indispensable. Notre
choix sest port sur la mise en place dun protocole bas sur lutilisation dun support solide.

2. Principe de la filtration slective

Au cours du chapitre 1, le principe de la SPE a t prsent. Comme dj voqu, la


SPE est base sur la distribution des composs entre la phase liquide reprsentative de
lchantillon et la phase solide qui est un adsorbant. Elle sapparente un processus
chromatographique dans lequel ladsorbant joue le rle de phase stationnaire et lchantillon
percol constitue la phase mobile. En effet, si le solut prsente une forte affinit vis vis de
ladsorbant alors il y restera totalement fix au cours de la percolation de lchantillon. Cet
chantillon est limin et les composs dintrt sont ensuite lus par un solvant de forte
force luante. La procdure normale dextraction sur phase solide a t prsente au cours du
chapitre 1 (figure 1-21). Ainsi, lobjectif gnralement recherch lors de la mise en uvre de
la SPE est la rtention des composs cibls sur ladsorbant dans le but de les concentrer.

Toutefois, au cours de cette tude, la SPE a t utilise comme technique de filtration


slective, le but vis tant de minimiser la rtention des composs dintrt tout en favorisant
celle des corps gras. Une lution rapide des composs dintrt est alors recherche pendant
la percolation.

Un support Oasis HLB a t utilis au cours du chapitre 2 pour lextraction de


pesticides dans leau. Compte tenu, des proprits de cet adsorbant, il est raisonnable de
tester les performances de ce support polymrique pour la rtention de corps gras caractre
plus hydrophobe que les pesticides cibls. La filtration slective a donc t effectue sur une
cartouche de type Oasis HLB dont les caractristiques sont dcrites dans lannexe 2-1.

Cependant, avant de tester lefficacit de la cartouche Oasis HLB comme support de


filtration slective aprs extraction des pesticides du bl par PLE, des tudes prliminaires

- 201 -
Chapitre IV

sont ncessaires afin dvaluer les performances de cette cartouche. Il convient en effet de
mettre au point un protocole permettant de sassurer que les corps gras sont bien retenus par
ladsorbant et quau contraire les pesticides sont lus lors de la percolation de lchantillon.
Pour ce faire, il est apparu intressant de saffranchir dans un premier temps des fluctuations
des taux de rcupration lies ltape dextraction.

3. Evaluation de la filtration slective sur Oasis HLB


3.1. Protocole de filtration slective

Une extraction de bl vierge est effectue dans les conditions cites en annexe 4-1
avec lactonitrile comme solvant dextraction et une temprature de 100C. Lextrait est
ensuite vapor lvaporateur rotatif 50C jusquenviron 5 millilitres. Le dopage par une
solution multipesticides 0,5 mg/L seffectue alors juste avant la filtration slective sur
cartouche dans le but de saffranchir des ventuelles pertes dues lextraction et permettre
dvaluer le potentiel rtentif du support en prsence des composs interfrents.

Lextrait subit ensuite ltape de filtration slective selon le protocole mis en uvre et illustr
par la figure 4-14.

1/ Conditionnement : 2/ Percolation de 3/ Passages successifs de


3 mL M eCN lextra it da ns solvant organique :
lactontirile~5 mL 3 mL MeCN not Eluat E1
3 mL MeCN not Eluat E2
3 mL MeCN not Eluat E3

4/ Evaporation sec des luats

5/ Reprise des extraits secs

6/ Analyse par CPL/SM

Percolat

Figure 4-14 : Protocole de la filtration slective.

Ce protocole est compos dune premire tape de conditionnement de ladsorbant par


3 millilitres dactonitrile. Ltape de percolation de lextrait est ensuite effectue ici en
prsence du solvant dextraction (actonitrile) qui a un fort pouvoir luant face ladsorbant.

- 202 -
Chapitre IV

Les composs dintrt ne doivent pas tre retenus ou dans le cas chant faiblement retenus.
Le but est donc de fixer les corps gras et autres interfrents plus hydrophobes que les
composs dintrt sur la cartouche et de minimiser au maximum la rtention des pesticides
dintrt. Le percolat qui est alors rcupr doit ainsi contenir un maximum de composs.
Ensuite, afin de vrifier que les composs nont pas t retenus sur ladsorbant de la
cartouche, trois fractions de trois millilitres dactonitrile (E1, E2 et E3) sont percoles.
Compte tenu de la nature des solvants constituant lchantillon et les luats, il est raisonnable
de penser que la teneur en pesticides devrait dcrotre en fonction des passages sur la
cartouche. Lobjectif est que le percolat contienne le plus de pesticides et quau contraire
lluat E3 en contienne un minimum voire aucun.

Les diffrentes fractions (percolat, E1, E2 et E3) rcupres sont ensuite vapores
sec sous flux dazote, reprises par 500 L dactonitrile puis 500 L deau et analyses
individuellement par CPL/SM (conditions en annexe 3-3).

3.2. Performances de la filtration slective

Tout dabord, une trs nette diffrence de couleur est observe entre lchantillon
avant purification et aprs passage sur la cartouche. Lchantillon avant purification est de
couleur jaune alors quaprs passage sur cartouche il devient limpide tous comme le sont les
diffrents luats (E1, E2 et E3). Cette observation visuelle permet de penser que de nombreux
interfrents sont encore fixs sur le support aprs application de la procdure. Les taux de
rcupration correspondant chaque fraction sont prsents sur les figures 4-15 4-17.

- 203 -
Chapitre IV

100
Percolat Eluat E1
Eluat E2 Eluat E3

80
TR %

60

40

20

0
Azoxystrobine
2,4 D

Actochlore

Bentazone

Bromoxynil

Carfentrazone-thyl
Bentazone D6
2,4 D 13C6

Actochlore D11

Carbofuran

Carbofuran D3

Chlortoluron

Chlortoluron D6
Chlorpyriphos

Chlorpyriphos D10
Figure 4-15 : Taux moyens de rcupration(TR) des pesticides dans les diffrentes fractions obtenues
aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions
en annexe 3-3.
120
Percolat Eluat E1
Eluat E2 Eluat E3
100

80
TR %

60

40

20

0
Fluroxypyr

Flutriafol
Cyproconazole

Hexaconazole
Fipronil
Cyprodinil

Fludioxonil

Imazaquine
Dichlorvos

Dichlorvos D6

Diflufenican

Dimethoate

Dimethoate D6

Fenpropidine

Florasulam

Imidaclopride

Imidaclopride D4
Dimethanamide

Figure 4-16 : Taux moyens de rcupration (TR) des pesticides dans les diffrentes fractions obtenues
aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions
en annexe 3-3.

- 204 -
Chapitre IV

100
Percolat Eluat E1
Eluat E2 Eluat E3

80

60
TR %

40

20

Pirimiphos mthyl D6
Pirimiphos-mthyl
Malathion D6

Metolachlor D6

Metosulam
Malathion

Tridemorphe
Spiroxamine
Mecoprop D3

Triallate
Metolachlor
Mesotrione
Ioxynil

Mecoprop

Prochloraze
Isoxaben

Quinoxyfne
Figure 4-17 : Taux moyens de rcupration (TR) des pesticides dans les diffrentes fractions obtenues
aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions
en annexe 3-3.

Les figures 4-15 4-17 mettent principalement en vidence deux types de


comportements.

La majorit des composs ne sont que faiblement retenus par ladsorbant. Ils sont en
effet majoritairement prsents dans le percolat et quasiment totalement lus lors du passage
de la premire fraction dactonitrile (E1). Les couples actochlore/actochlore D11 ou
chlortoluron/chlortoluron D6 peuvent tre cits en exemple.

En revanche, les autres composs sont prsents dans lensemble des fractions et la
dernire fraction dactonitrile E3 est ncessaire leur rcupration. Le 2,4 D, le 2,4 D13C6, la
bentazone, la bentazone D6, le bromoxynil, le carbofuran, la carbofuran D3 (figure 4-15), le
fluroxypyr (figure 4-16), lioxynil, le mcoprop et le mcoprop D3 (figure 4-17) font partie de
ces composs. Tous ces pesticides, lexception du carbofuran, possdent des proprits
acides et ont des pKa compris entre 2,8 et 4,1.

- 205 -
Chapitre IV

De plus, les rsultats obtenus montrent une similitude des comportements des
molcules et de leurs homologues marqus. Le 2,4 D et le 2,4 D13C6 (figure 4-15) ont
exactement le mme profil et ce quelle que soit la fraction considre. Ce constat est valable
galement pour les autres couples de composs sauf pour le carbofuran et le carbofuran D3
pour lesquels une lgre diffrence est constate lors de lanalyse de lluat E3. La rptabilit
des essais raliss varie selon les composs et les coefficients de variation sont compris entre
0,4 et 9% sauf pour le dichlorvos et le dichlorvos D6. En effet, comme dj voqu
auparavant, ces composs sont volatils et sensibles ltape dvaporation. Ainsi, leurs taux
de rcupration varient en fonction des essais et leurs coefficients de variation peuvent
atteindre 30%. Toutefois, il convient dajouter que laldicarbe et laldicarbe D3 nont pas pu
tre quantifis au cours de cette tude pour des raisons de problmes analytiques.

Afin dapprcier les performances en terme de rcupration aprs passage dun extrait
de bl, le rendement total correspondant la somme des rendements obtenus dans le percolat
et dans les trois luats suivants est illustr par les figures 4-18 et 4-19.

140

120

100

80
TR %

60

40

20

0
Azoxystrobine
2,4 D

Actochlore

Bentazone

Bromoxynil

Carfentrazone-thyl
Bentazone D6

Cyproconazole
2,4 D 13C6

Actochlore D11

Cyprodinil
Carbofuran

Dichlorvos
Dichlorvos D6
Diflufenican
Carbofuran D3

Dimethoate
Chlortoluron

Dimethoate D6
Chlortoluron D6

Fenpropidine
Chlorpyriphos
Chlorpyriphos D10

Dimethanamide

Figure 4-18 : Taux moyens de rcupration (TR) correspondants aux quantits de pesticides retrouvs
dans lensemble des fractions aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3), CPL/ESI/SM, mode
+/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 206 -
Chapitre IV

140

120

100

80
TR %

60

40

20

Tridemorphe
Imidaclopride D4

Triallate
Imidaclopride
Imazaquine

Mecoprop D3

Quinoxyfne
Flutriafol

Mecoprop
Isoxaben
Fipronil

Malathion D6
Malathion

Metolachlor D6

Prochloraze
Hexaconazole

Mesotrione
Florasulam

Metolachlor

Spiroxamine
Fludioxonil

Ioxynil
Fluroxypyr

Metosulam
Pirimiphos-mthyl
Pirimiphos mthyl D6
Figure 4-19 : Taux moyens de rcupration (TR) correspondants aux quantits de pesticides retrouvs
dans lensemble des fractions aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3), CPL/ESI/SM, mode
+/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

Les rsultats prcdents sont comparer avec ceux obtenus lors de ltape
dvaporation. Lorsque la comparaison est effectue, il en ressort que se sont les composs
qui ont un log P elev qui posent problme. En effet, les taux moyens de rcupration obtenus
pour tous les composs sont suprieurs ou gaux 80%, lexception de cinq composs, pour
lesquels, les valeurs sont comprises entre 60 et 80%. Ces composs sont le chlorpyriphos, le
chlorpyriphos D10, le diflufnicanil (figure 4-18), le triallate et le tridmorphe (figure 4-19).
Or, ces pesticides ont des log P compris entre 4,2 et 4,9 et sont donc plutt apolaires. Deux
hypothses peuvent alors tre envisages : la premire prvoit une forte rtention des
composs sur la cartouche et la seconde suppose lexistence dinteractions entre les composs
cibls et la matrice lipidique, elle-mme encore sur la cartouche. Les rsultats dtaills
(figures 4-15, 4-16 et 4-17) montrent que les composs sont prsents dans le percolat et quen
revanche, ils ne le sont pas dans les autres fractions ( lexception du diflufnicanil, qui est
aussi faiblement lu lors du passage du premier luat (E1)). Ainsi, ces rsultats laissent
penser que les composs sont retenus partiellement par la matrice lipidique.

Une attention particulire est porte sur les comportements des pesticides et de leurs
homologues marqus. Il savre que les comportements diffrent dun couple lautre. Les

- 207 -
Chapitre IV

diffrences entre les taux moyens de rcupration entre les pesticides et les molcules
marques sont comprises entre 0,2 10,9%. Lcart le plus important tant observ pour le
couple imidaclopride/imidaclopride D4. Une diffrence importante de 7,5% est galement
constate pour le dichlorvos et le dichlorvos D6. Pour tous les autres couples, les diffrences
sont infrieures 5%. Le plus petit cart correspond au malathion et au malathion D6. Ces
rsultats mettent en vidence que chaque couple de composs est unique et leur
comportement est imprvisible. Il est donc ncessaire et indispensable dtudier les
comportements des molcules cibles et de celles marques.

Cependant, le rendement moyen a t valu 92,5%, ce qui est satisfaisant. Ainsi, au


vu de ces rsultats, ltape de purification mises en uvre a t juge toute fait satisfaisante
compte tenu du nombre important de composs analyss. Par ailleurs, ces rsultats prennent
en compte les diffrentes variations dues aux tapes dvaporation et de purification avant
lanalyse par CPL/SM. Malgr cela, il faut garder lesprit que le dopage a t effectu aprs
lextraction dun bl vierge, ces rsultats ne prennent donc pas en compte les ventuelles
pertes dues la PLE. Toutefois, le protocole propos a mis en vidence lefficacit de la
filtration slective. Les diffrents luats sont conservs et llution sera donc ralise avec 14
millitres dactonitrile (5 mL dchantillon et 3*3 mL dluats) dans le but de rcuprer un
maximum de composs dintrt.

4. Evaluation du protocole analytique global appliqu au bl

Lvaluation du protocole analytique global prsent en figure 4-1 a pu tre mene. Du


bl broy a t dop par 1 mL dune solution multipesticides 0,5 mg/L avant ltape
dextraction en solvant chaud pressuris. Les conditions dextraction utilises sont celles
donnes en annexe 4-1. Lactonitrile est utilis comme solvant dextraction. En outre dans le
but de sassurer que la matrice considre tait vierge de tous rsidus de pesticides, un bl non
dop a t trait selon le protocole global mis en place. Aprs analyse par CPL/SM, aucun
des pesticides cibls na t quantifi un seuil suprieur aux limites de quantification
dtermines prcdemment. Le sable utilis est donc exempt de tout pesticide dintrt.

Le niveau de dopage est de 0,5 mg/L avec une prise dessai de 2 g ce qui quivaut un
chantillon de bl contamin 0,25 mg/kg. Cette teneur est bien entendu largement au-dessus

- 208 -
Chapitre IV

des limites maximales de rsidus de pesticides autoriss dans le bl qui sont comprises entre
0,02 et 0,2 mg/kg selon les composs. Toutefois, cette valeur quelque peu leve a t choisie
volontairement afin de faciliter la quantification des composs dans le cas o lextraction ne
serait pas optimale.

Les figures 4-20 et 4-21 illustrent les rendements obtenus aprs toutes les tapes du
protocole analytique (figure 4-1) savoir : lextraction du bl dop par de lactonitrile
100C et 100 bars, lvaporation, la purification sur cartouche et enfin une vaporation sec.
140

105

70
TR %

35

Dimethanamide

Dimethoate D6
Dimethoate
Chlortoluron D6
2,4 D 13C6

Fenpropidine
Chlorpyriphos D10
Chlortoluron

Cyprodinil
Bentazone D6
Bromoxynil

Dichlorvos D6
2,4 D

Carbofuran D3
Aldicarbe D3

Chlorpyriphos
Bentazone

Cyproconazole

Diflufenican
Actochlore D11

Dichlorvos
Carbofuran
Aldicarbe

Carfentrazone-thyl
Actochlore

Azoxystrobine

Figure 4-20 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus aprs filtration slective de
lextrait de bl dop 0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en annexe 4-1),
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 209 -
Chapitre IV

140

105
TR %

70

35

Tridemorphe
Imidaclopride D4

Triallate
Imidaclopride
Imazaquine

Mecoprop D3

Quinoxyfne
Flutriafol

Mecoprop
Isoxaben
Fipronil

Malathion D6
Malathion

Metolachlor D6

Prochloraze
Mesotrione
Florasulam

Hexaconazole

Metolachlor

Spiroxamine
Fludioxonil

Ioxynil
Fluroxypyr

Metosulam

Pirimiphos-mthyl
Pirimiphos mthyl D6
Figure 4-21 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus aprs filtration slective de
lextrait de bl dop 0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en annexe 4-1),
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

Nanmoins, afin dapprcier lefficacit de ltape dextraction, les rsultats obtenus


lorsque lextrait de bl est dop juste avant la filtration slective ont t compars par
juxtaposition sur deux mme figures (4-22 et 4-23) de ceux obtenus lorsque le bl est dop
avant PLE.

- 210 -
Chapitre IV

sans PLE
120 avec PLE

100

80

60

40

20

Dimethanamide

Dimethoate D6
Dimethoate
Chlortoluron D6
2,4 D 13C6

Fenpropidine
Chlorpyriphos D10
Chlortoluron

Cyprodinil
Bentazone D6
Bromoxynil

Dichlorvos D6
2,4 D

Carbofuran D3
Aldicarbe D3

Chlorpyriphos
Bentazone

Cyproconazole

Diflufenican
Actochlore D11

Dichlorvos
Carbofuran
Aldicarbe

Carfentrazone-thyl
Actochlore

Azoxystrobine

Figure 4-22 : Comparaison des taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus lorsque
lextrait de bl est dop juste avant la filtration slective (sans PLE) et aprs PLE dun bl dop
0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en annexe 4-1), CPL/ESI/SM, mode +/-,
dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

sans PLE
120
avec PLE

100

80

60

40

20

0
Fluroxypyr

Ioxynil

Quinoxyfne
Mecoprop
Flutriafol

Malathion

Mecoprop D3

Prochloraze
Metolachlor
Hexaconazole

Triallate
Isoxaben

Metolachlor D6
Malathion D6
Fipronil

Mesotrione
Fludioxonil

Imazaquine

Metosulam

Spiroxamine

Tridemorphe
Florasulam

Imidaclopride
Imidaclopride D4

Pirimiphos mthyl D6
Pirimiphos-mthyl

Figure 4-23 : Comparaison des taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus lorsque
lextrait de bl est dop juste avant la filtration slective (sans PLE) et aprs PLE dun bl dop
0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en annexe 4-1), CPL/ESI/SM, mode +/-,
dtection MRM, conditions en annexe 3-3.

- 211 -
Chapitre IV

En plus, dtre compars aux rsultats obtenus lors de la filtration slective, il convient
de considrer galement les rsultats prcdemment observs lors de lextraction
lactonitrile de billes de verre dopes en pesticides.

Ces histogrammes mettent en vidence que pour certains composs et en particulier


douze dentre eux, les taux moyens de rcupration obtenus aprs PLE sont plus faibles de
plus de 15% par rapport ceux observs aprs filtration slective. Ces composs sont le
carbofuran, le chlortoluron, le cyprodinil, le florasulam, le fluroxypyr, limidaclopride,
limidaclopride D4, le malathion, la msotrione, le mtalochlor, le pirimiphos mthyl et le
quinoxyfne. Or, le fluroxypyr, limidaclopride D4 et la msotrione (figure 4-8) taient dj
peu extraits des billes de verre en prsence dactonitrile comme solvant dextraction. Ainsi,
les faibles taux observs ne sont pas dus une extraction insuffisante des composs du bl. En
revanche pour les huit autres, lefficacit de lextraction reste amliorer. Toutefois, lorsque
des points communs sont recherchs entre ces composs, il est constat quil nexiste pas de
relle tendance, ces composs sont la fois acides, neutres et polaires ou apolaires. Des
interactions dorigines diverses sont donc mises en jeu entre le bl et les pesticides dintrt.

Pour dautres composs au contraire les taux moyens de rcupration aprs PLE sont
suprieurs, cependant, lextraction dun bl vierge non dop permet daffirmer que lorsque les
taux moyens de rcupration sont suprieurs 100% cela nest pas d la prsence antrieure
au dopage de rsidus de pesticides dans le bl tudi.

Enfin, les figures prcdentes montrent que 40 composs dont 11 molcules marques
ont un taux moyen de rcupration suprieur 70%. En revanche, 12 composs dont 3
marqus ont un taux moyen de rcupration compris entre 45 et 70%. Les coefficients de
variations sont relativement faibles de 0,5 12% lexception du chlorpyriphos et du
chlorpyriphos D10.

Un intrt particulier a ensuite t port sur les rsultats obtenus pour les diffrents
couples de compos/compos marqu. Ainsi, il est paru intressant de regrouper les rsultats
illustrs par les figures 4-22 et 4-23 sous forme de tableau, la comparaison des taux moyens
de rcupration tant alors plus claire. Le tableau 4-2 prsente donc les diffrents taux
moyens de rcupration obtenus correspondants aux quantits de pesticides retrouvs dans
lensemble des fractions aprs filtration slective des extraits de bl dops aprs PLE et de

- 212 -
Chapitre IV

ceux obtenus aprs filtration slective des extraits de bl dops 0,25 mg/kg avant PLE. Les
carts types observs sont galement indiqus sur le tableau 4-2. Par ailleurs, une des faons
dinterprter lefficacit de la dilution isotopique est lexploitation des rapports entre le
pesticide et son homologue marqu. Dans le tableau 4-2 ont t nots les rapports entre les
taux de rcupration des pesticides et ceux des molcules marques. Les incertitudes sur ces
rapports sont galement indiques.

Tableau 4-2 : Comparaison des taux moyens de rcuprations (TR) correspondantsaux quantits de
pesticides retrouvs dans lensemble des fractions aprs filtration slective de lextrait de bl et de
ceux obtenus aprs filtration slective de lextrait de bl dop 0,25 mg/kg (M : molcule et M* :
molcule marque).

Sans l'tape PLE du bl Avec l'tape PLE du bl


Molcules TR % ET % (n=3) TRM/TRM* +/- u TR % ET % (n=3) TRM/TRM* +/- u
2,4 D 83,8 2,5 1,02 +/- 0,03 76,4 1,0 1,02 +/- 0,01
2,4 D 13C6 82,2 1,3 74,5 0,9
Actochlore 95,7 4,3 1,01 +/- 0,06 88,0 3,0 1,07 +/- 0,04
Actochlore D11 95,2 3,4 82,5 2,1
Aldicarbe - - 45,5 4,3 0,78 +/- 0,09
Aldicarbe D3 - - 58,0 11,1
Bentazone 100,2 7,6 0,96 +/- 0,07 109,1 2,2 0,98 +/- 0,03
Bentazone D6 104,9 1,6 111,9 1,4
Carbofuran 108,1 2,2 1,09 +/- 0,05 87,8 1,0 0,96 +/- 0,02
Carbofuran D3 98,7 4,5 91,3 1,4
Chlorpyriphos 62,6 2,9 0,93 +/- 0,04 73,3 32,6 1,16 +/- 0,61
Chlorpyriphos D10 67,0 2,9 63,2 41,8
Chlortoluron 103,7 7,3 1,03 +/- 0,08 86,5 0,6 0,93 +/- 0,03
Chlortoluron D6 100,2 1,3 93,0 2,8
Dichlorvos 82,7 13,9 0,92 +/- 0,29 123,6 2,4 1,21 +/- 0,14
Dichlorvos D6 90,2 28,2 102,2 11,7
Dimethoate 102,4 3,2 1,04 +/- 0,03 92,0 1,6 1,03 +/- 0,04
Dimethoate D6 98,8 0,9 89,0 3,0
Imidaclopride 93,2 3,7 1,13 +/- 0,10 72,7 2,2 1,33 +/- 0,04
Imidaclopride D4 82,4 7,7 54,7 1,9
Malathion 98,5 4,5 1,00 +/- 0,05 73,0 2,7 0,82 +/- 0,03
Malathion D6 98,7 2,8 89,0 2,0
Mecoprop 92,3 3,4 0,99 +/- 0,05 95,9 2,1 0,99 +/- 0,03
Mecoprop D3 93,2 3,2 97,0 1,4
Metolachlor 96,0 2,7 1,01 +/- 0,03 76,4 1,7 0,86 +/- 0,02
Metolachlor D6 95,5 0,8 89,2 2,1
Pirimiphos-mthyl 96,4 4,5 1,02 +/- 0,05 80,7 0,5 0,68 +/- 0,01
Pirimiphos mthyl D6 94,6 2,4 118,2 1,0

- 213 -
Chapitre IV

Lutilisation de la dilution isotopique repose sur le postulat selon lequel les


comportements des molcules et de leurs homologues marqus sont similaires. Ces deux
types de molcules ne diffrent en effet que par les quelques atomes qui ont t substitus.
Lutilisation de la dilution isotopique permet de doser un compos une concentration
inconnue dans un chantillon via lajout du mme compos marqu. Ainsi, les rapports entre
un pesticide et son homologue marqu (TRM/TRM*) une teneur donne devraient tre
constants quils soient prsents en solution ou quils aient subit diffrentes tapes de
traitement de lchantillon.

Ltude du tableau 4-2 permet de constater que seuls cinq couples de composs
prsentent des rapports qui ont des carts infrieurs ou gaux 6%. Ces cinq couples sont : le
2,4 D et le 2,4 D 13C6, l actochlore et lactochlore D11, la bentazone et la bentazone D6, le
dimethoate et le dimethoate D6, le mecoprop et le mecoprop D3. En revanche, pour tous les
autres couples, les rapports sont diffrents. Cette diffrence traduit des comportements
distincts des pesticides et de leurs homologues marqus pendant ltape dextraction en
solvant chaud pressuris. Les carts sont compris entre 10 et 33%. Les plus grandes
diffrences ont t observes pour les couples : imidaclopride/imidaclopride D4,
malathion/maltahion D6, mtolachlor/mtolachlor D6 et pirimiphos mthyl/pirimiphos mthyl
D6. En effet, malgr les incertitudes associes au rapport des taux de rcupration, aucune
zone de recouvrement na t mise en vidence pour ces composs entre les rapports
observs sans ltape PLE du bl et ceux observs avec ltape PLE du bl. Par ailleurs,
parmi les quatorze pesticides marqus utiliss au cours de cette tude, seul un compos est
13
marqu au C, le 2,4 D13C6. Or, il se trouve que ce compos et son homologue ont montr
des comportements similaires aussi bien sur des solutions talons que sur des matrices
relles. Ainsi, il est semble que le marquage au 13C soit plus favorable la mise en uvre de
la dilution isotopique que le marquage au deutrium. En effet, quelle est la raison pour
laquelle certains pesticides et leurs homologues marqus au deutrium ont le mme
comportement et dautres non ?

Malgr cela, ces rsultats ont t jugs satisfaisants compte tenu de la varit des
proprits physico-chimiques des pesticides tudis et de la complexit de la matrice.
Nanmoins, il faut garder lesprit que ces rsultats ont t obtenus aprs extraction dun bl
frachement dop. Ainsi, il y a de grande chance pour que les interactions ventuelles entre la

- 214 -
Chapitre IV

matrice et les composs cibls soient plus faibles lors dun dopage prcdent lanalyse que
celles vritablement existantes sur un bl rellement contamin par des rsidus de pesticides.

IV. 6. Conclusions

Une mthode dextraction de pesticides dans le bl associe une analyse par


CPL/SM a t dveloppe pour trente-huit pesticides reprsentatifs de vingt-six familles
chimiques et quatorze de leurs molcules marques.

Le protocole analytique global mis en uvre ncessite diffrentes tapes. Ces


dernires ont t tudies individuellement dans le but de mettre en vidence les ventuelles
pertes engendres au cours de chacune dentre elles. Ainsi, dans un premier temps, il a t
vrifi que les tapes dvaporation sec et de redissolution de lextrait sec nengendraient
pas de perte ou de dgradation des composs dintrt. Par la suite, la stabilit des pesticides
cibls au cours dune PLE mettant en uvre des pressions et tempratures leves a t
value. Il sest avr que la plupart des composs sont stables dans lactonitrile 100 bars
et des tempratures comprises entre 100 et 150C, lexception, de laldicarbe, de son
homologue marqu ainsi que du triallate.

Compte tenu des rsultats satisfaisants qui ont t obtenus, du bl a t extrait, or,
sagissant dune matrice complexe, une tape supplmentaire de purification a t juge
comme ncessaire et indispensable avant lanalyse par CPL/SM. Lextraction sur phase
solide a t retenue et une tape de filtration slective a t mise en uvre. Lefficacit de
ltape de filtration a t vrifie en saffranchissant des pertes ventuelles dues ltape
dextraction.

Le protocole global a alors t test sur le bl. Les taux de rcupration obtenus ont t
jugs satisfaisants compte tenu des diffrentes tapes subies par lchantillon avant son
analyse proprement dite. Par ailleurs, les carts types observs sur les rsultats obtenus des
jours diffrents sont relativement faibles. De plus, la purification mise en uvre travers une
filtration slective est simple et relativement rapide. Toutefois, compte tenu de la ncessit
des trois luats dactonitrile pour certains composs, il serait utile de tester un support moins
rtentif de type C18 qui permettrait llution plus rapide des composs concerns.

- 215 -
Chapitre IV

Par ailleurs, linfluence de la temprature sur lextraction du bl prsente galement un


intrt tre approfondie. Nanmoins, tous ces essais nont pas pu tre raliss la fin de la
thse du fait de nombreux problmes analytiques lis au spectromtre de masse (instabilit
des signaux, absence de linarit, perte de signal sur des temps trs courts).

De plus, afin dtudier les performances relles de lextraction, il serait trs intressant
dextraire un bl vieilli pour lequel les interactions dveloppes entre la matrice et les
composs se rapprocheront dune matrice rellement contamine par des rsidus de
pesticides. Par ailleurs, cette tape est ncessaire pour sassurer que les conditions
dextraction fixes (solvant, temprature) sont optimales.

En outre, afin de saffranchir des ventuelles interactions entre la matrice lipidique et


certains composs, il serait raisonnable de tester une PLE lactonitrile en prsence
dhydroxyde de potassium afin de procder une saponification. Des composs trs polaires
sont alors gnrs. La reprise de lextrait devrait se fait en solvant hydrophobe avant une
tape de purification sur silice dans le but dliminer les interfrents polaires. Or, un autre
problme survient alors : celui des pesticides polaires. Lapproche multirsidus soulve
diffrents problmes et de nombreux compromis sont effectuer dans le choix des conditions
du protocole analytique global.

- 216 -
Conclusion gnrale

Conclusion gnrale

Lutilisation de produits phytosanitaires, dans le but de protger les cultures de


diverses menaces pouvant altrer leur qualit nutritive mais aussi les rendements agricoles,
rend ncessaire la surveillance des teneurs en rsidus de pesticides dans les produits de
consommation. Ainsi, du fait des faibles teneurs de pesticides autorises par la
rglementation, des techniques analytiques permettant la dtermination et la quantification
des pesticides de trs faibles niveaux de concentration sont ncessaires.

Ce travail de thse avait pour objectif le dveloppement dune mthode danalyse


multirsidus de pesticides dans les matrices cralires par dilution isotopique associe la
chromatographie en phase liquide couple la spectromtrie de masse en tandem aprs une
tape dextraction.

Le but de la thse tait relativement ambitieux dans la mesure o il a fallu dans un


premier temps implanter la CPL/SM au sein du LNE et caractriser lappareil au niveau
mtrologique. Ainsi, la premire partie de la thse a t consacre au dveloppement dune
mthode danalyse par dilution isotopique associe la CPL/SM pour la dtermination de
pesticides dans les eaux. Une prcdente collaboration entre le LNE et lESPCI a grandement
facilit la matrise de ce type danalyse. Toutefois, le challenge rsidait dans la mise en
uvre de la dilution isotopique. Par ailleurs, cest au cours de cette tude que les diffrents
outils statistiques ncessaires la validation dune mthode danalyse ont t employs. Par
la suite, la mthode dveloppe a t mise lpreuve au cours dun essai inter-laboratoires.
Les rsultats obtenus ont t trs satisfaisants et les travaux de thse ont t poursuivis par le
dveloppement de la mthode danalyse de pesticides dans les matrices cralires.

Trente-huit composs de vingt-six familles chimiques diffrentes, susceptibles dtre


retrouvs sur les matrices cralires ont t slectionns. Par la suite, le dveloppement de la
mthode par CPL/SM a t ralis pour ces pesticides et quatorze molcules marques. Dans
un premier temps, les diffrents paramtres de dtection par SM ont t dtermins,
impliquant notamment lidentification des diffrentes transitions de quantification et de
confirmation. Une fois, les conditions de dtection mises en place, les conditions de
sparation ont t tudies. Contrairement dautres modes de dtection, le signal en
spectromtrie de masse est trs sensible la nature de la phase mobile. Ce fait est dautant

- 217 -
Conclusion gnrale

plus complexe, quau cours de cette tude, il est apparu clairement que lionisation est un
phnomne compos-dpendant et difficile voire impossible prvoir. Ainsi, au cours du
dveloppement dune mthode multirsidus de pesticides, la difficult crot avec le nombre
de composs cibls. Les conditions opratoires finales ont donc rsult de compromis dans le
but de permettre lanalyse dun grand nombre de composs avec le maximum de sensibilit.
Ds lors que les conditions analytiques ont t dtermines et optimises, les limites de
quantification ont t values. Dautre part, au cours de la thse, il est apparu nettement,
quen plus dtre trs sensible la nature de la phase mobile, la rponse du systme
analytique dpendait fortement de la composition de lchantillon inject.

Lextraction en solvant chaud pressuris a t choisie comme technique dextraction


pour cette tude. Le contrle des diffrentes tapes du protocole analytique global mis en
place a t effectu. En particulier, ltape dvaporation a t contrle et linfluence de la
temprature sur lextraction des composs de matrice inerte a t value. Les premiers essais
mens sur crales ont montr quune tape de purification de lextrait de bl tait ncessaire
avant lanalyse par CPL/SM afin de faciliter la quantification des composs cibls. Un
adsorbant de nature polymrique a alors t utilis pour la mise en uvre dune filtration
slective. Ainsi, les conditions analytiques dfinies ont permis dextraire un mlange de
trente-huit pesticides et de quatorze molcules marques du bl avec un rendement moyen
satisfaisant de lordre de 85 % (CV = 4% n=3).

Au vu de lensemble des rsultats obtenus au cours de la thse, il semble que le


principe de la dilution isotopique ne soit pas universel. Malgr la possibilit de saffranchir
dventuels problmes dappareillage grce lutilisation de molcule marque ds lors
quelle a le mme comportement que la molcule doser, les rsultats obtenus ont permis de
souligner les limites de cette mthode. En effet, il est apparu clairement que le phnomne
dionisation nest pas toujours le mme pour la molcule et son homologue marqu.
Lorsquune quantit identique de composs est injecte, le rapport des aires nest pas
toujours gal un. Les intensits des aires observes peuvent tre trs diffrentes pour une
mme quantit injecte laissant penser que lionisation des deux molcules ne se fait pas de
la mme manire. Cette diffrence de comportement a t galement mise en vidence lors
des essais dextraction sur matrice relle. Or, elle peut fortement biaiser le rsultat final ds
lors que lexploitation des rapports est utilise pour la quantification des composs. Il semble
donc que la substitution dun ou plusieurs atomes dhydrogne par un ou plusieurs atomes de

- 218 -
Conclusion gnrale

deutrium peut modifier le comportement de la molcule mre. Ceci navait pas t


jusqualors clairement mis en vidence. De plus, les molcules marques disponibles la
vente sont trs souvent marques au deutrium. Ainsi, parmi les quatorze pesticides marqus
utiliss au cours de la thse, un seul est marqu au 13C, le 2,4 D13C6. Or, ce compos et son
homologue, le 2,4 D, ont montr des comportements similaires au cours de la thse et ceci
galement lors de ltude de matrices relles. Ainsi, ces constatations laissent penser que
lutilisation de molcules marques au 13C est plus propice la mise en uvre de la dilution
isotopique que le marquage au deutrium.

Afin de complter ce travail de thse, il serait ncessaire de tester la mthode


dveloppe sur une matrice cralire vieillie. Ces essais permettront, de valider le protocole
analytique global, ou au contraire, de mettre en vidence la ncessit de poursuivre ltude
doptimisation avec notamment ltude de linfluence du solvant dextraction et
ventuellement de ltape de purification.

Seules ces conditions runies permettront au LNE datteindre lobjectif premier,


savoir, utiliser cette mthode lors du dveloppement dun matriau de rfrence (MR) pour
lanalyse de pesticides dans le bl. En outre, tant donn la large gamme de polarit couverte
par les pesticides cibls au cours de la thse, il est possible denvisager dinclure dautres
composs la liste du MR avec notamment certains mtabolites.

- 219 -
Conclusion gnrale

- 220 -
Annexes

Annexes

Annexe 2-1 : Extraction sur phase solide des pesticides dans leau

La cartouche Oasis HLB (Waters) qui compose le MRC qui a t dvelopp par le
LECA et le LNE est compose dun adsorbant constitu dun copolymre de divinylbenzne
fonctionnalis par des groupements de vinylpirolidone (Figure A1-1). Ses caractristiques
sont les suivantes :
surface spcifique : 810 m/g,
diamtre de particule : 30 - 60 m,
200 mg de phase,
20% de pyrrolidone.

Figure A1-1 : Adsorbant Oasis HLB.

Lefficacit de ce support pour lextraction de pesticides dans les eaux a t value


pour les dix molcules de la famille des triazines (atrazine, disopropylatrazine (DIA),
dthylatrazine (DEA), simazine, terbuthylazine, terbutryne) et des phnylures (isoproturon,
diuron, chlortoluron, linuron) [207, 208]. Le protocole mis au point et optimis pour une
efficacit optimale de lextraction est schmatis sur la figure A1-2.

- 221 -
Annexes

1- Conditionnement 2- Percolation 3- Lavage 4- lution


3 mL ACN chantillon 2mL H2O
6 mL dACN
3 mL MeOH (250mL) Schage (2min)
3 mL H2O Dbit 8-15 mL/min
5- vaporation du
solvant sous azote

6- Reprise de lextrait sec


dans 250 L

7- Injection de lextrait

Analyte

Contaminants

Figure A1-2 : Protocole dextraction des pesticides dune matrice aqueuse sur cartouche Oasis HLB.

Un volume de 250 ml deau est percol sur la cartouche Oasis HLB aprs un
conditionnement judicieusement choisi un dbit de lordre de 8 15 ml/min. Une tape de
lavage leau est ensuite effectue permettant llimination de certains interfrents. Llution
est effectue par un solvant de force luante suffisante pour dsorber les composs de la
cartouche, le solvant utilis est lactonitrile. Le percolat obtenu est ensuite vapor sec sous
flux dazote. Lextrait sec est repris par un volume de 250 l de solvant compatible avec la
phase mobile. Le facteur de pr-concentration appliqu ici est de 1000.

Les rsultats obtenus au LECA par CPL couple un dtecteur UV barrette de


diodes pour chacun des composs sont prsents sur la figure A1-3.

- 222 -
Annexes

Taux de rcupration %
100

80

60

40

20

0
DIA

Terbutryne
DEA

Atrazine
Simazine

Terbutylazine

Isoproturon

Diuron

Linuron
Chlortoluron
Figure A1-3 : Taux de rcupration obtenus sur un support OASIS HLB de pesticides dune eau ultra
pure dope 0,5 g/L (V= 250 ml) [220].

Les taux de rcupration sont compris entre 90 et 105%. Le rendement moyen est de
97,7%. Les coefficients de variation sont compris entre 0,3 et 7,4%. Le support Oasis HLB
est efficace pour lextraction des pesticides de la famille des triazines et des phnylures
cibls dans les eaux.

Compte tenu de ces rsultats, ce support a t retenu lors du dveloppement de la


mthode danalyse de pesticides dans les eaux par DI associe la CPL/SM. Cependant, une
modification a t effectue au niveau du volume de reprise pour abaisser le facteur
denrichissement et rendre la gamme de concentration dans lextrait compatible avec la
gamme dtalonnage. Le volume de reprise lors dune analyse par CPL/SM est donc de 1000
L au lieu de 250 L, le facteur de pr-concentration correspondant alors 250 au lieu de
1000 lors de lanalyse par CPL/UV ou SM.

- 223 -
Annexes

Annexe 2-2 : Mthode danalyse de pesticides par CPL/SM

Les conditions analytiques utilises lors de lanalyse de pesticides par CPL/SM sont
indiques dans le tableau A2-1. .
Tableau A2-1: Conditions opratoires.

Colonne analytique Symmetry Shield RP18 (250 mm, d.i. 3 mm, d.p. 5 m)
Phase mobile H2O et MeCN acidifis 0,1 % dacide formique
Dbit 0,4 ml/min
Volume inject 20 l
Source d'ionisation ESI mode positif

Un gradient est utilis pour permettre la sparation des composs (tableau A2-2).

Tableau A2-2 : Gradient appliqu A : Eau et B : Actonitrile,


A et B sont acidifis 0,1% d HCOOH.

Temps (min) %A %B
0 66 34
10 60 40
16 54 46
30 42 58

Les temps de rtention ainsi que les ions molculaires obtenus lors de lanalyse par CPL/SM
sont donns sur le tableau A2-3.

Tableau A2-3 : Temps de rtention et ion molculaire des composs cibls.

Temps de
Compos rtention en Ion molculaire
min
DIA 4,0 174,1
DEA 5,4 188,1
Simazine 10,4 202,1
Terbutryne 13,6 242,2
Chlortoluron 14,2 213,1
Isoproturon 15,3 207,2
Atrazine 15,7 216,2
Diuron 17,4 233,1
Terbuthylazine 23,7 230,1
Linuron 24,8 249,0

- 224 -
Annexes

La figure A2-1 illustre le chromatogramme obtenu en dtection en mode full scan lors de
linjection dun mlange des triazines et des phnylures.

1 3

6 7
2

4 5

8
10

Figure A2-1: Sparation dun mlange de triazines et de phnylures


Dtection en mode full scan, Composs : 1 : DIA, 2 : DEA, 3 : Simazine, 4 : Terbutryne,
5 : Chlortoluron, 6 : Isoproturon, 7 : Atrazine, 8 : Diuron, 9 : Terbuthylazine, 10 : Linuron.

Ltude des performances de la mthode a permis de dterminer les limites de dtection et de


quantification suivantes :

Tableau A2-4 : Limites de dtection (LD) et de quantification (LQ) obtenues


pour les composs cibls par CPL/SM.
Compos LD g/L LQ g/L
Atrazine 0,5 1,7
DIA 0,8 2,7
DEA 0,8 2,7
Simazine 0,5 1,7
Terbutryne 0,8 2,7
Terbutylazine 0,5 1,7
Chlortoluron 0,5 1,7
Diuron 1,6 5,3
Isoproturon 1,6 5,3
Linuron 0,8 2,7

- 225 -
Annexes

Annexe 2-3 : Mthode danalyse des pesticides par DI/CPL/SM

Les conditions opratoires utilises lors de lanalyse de pesticides par DI/CPL/SM


sont rsumes dans le tableau A3-1.

Tableau A3-1 : Conditions analytiques.


Symmetry Shield RP18 (250 mm, d.i. 3 mm, d.p. 5
Colonne analytique
m)
Phase mobile H2O et MeCN acidifis 0,1%
Dbit 0,4 ml/min
Volume inject 20 l
Source d'ionisation ESI
Spray Voltage 4500 V
Sheath gas 50 u.a.
Auxiliary Gas 20 u.a.
Temprature
350C
Capillaire
Pression du gaz de
1,5 mTorr
collision
Source CID -12 V

La phase mobile est compose dun solvant organique (MeCN acidifi 0,1 % dacide
formique = A) et dune phase aqueuse (H2O acidifi 0,1 % dacide formique). Un gradient
linaire dlution pour sparer les diffrents composs est utilis : t=0 minute, A = 50% puis
augmente en 12 minutes 90% et est maintenu jusqu t=13 minutes. Une tape de mise
lquilibre de 15 minutes est ensuite effectue.

- 226 -
Annexes

Annexe 2-4 : Adquation du modle dtalonnage

Cette annexe prsente les quations permettant de dfinir les paramtres statistiques
utiliss lors de ltude de ladquation du modle dtalonnage du type y = b1x+b0.

la moyenne :

lcart type pour le rapport dintensits observes :


les valeurs de la pente b1 et de lordonne lorigine b0 sont calcules selon les
formules suivantes :

b1 =
(x x )(y y )
i i i i b0 = y i b1 xi
(x x )
2
i i

les rponses modlises y i sont calculs selon la formule :

les rsidus de non-linarit : . Il sagit pour chacun des niveaux de lcart


entre la moyenne des aires mesures exprimentalement et laire obtenue avec le
modle.

les rsidus de rptabilit : . Il sagit de lcart entre laire mesure


exprimentalement et la moyenne des aires un niveau de concentration donne.
la Somme des carrs des carts (SCE) renvoie la somme des carres des carts
entre les points de donnes et leur moyenne chantillonne. Par exemple, pour la
colonne du rapport des intensits observes :

- 227 -
Annexes

Annexe 2-5 : Analyse de la variance

Cette annexe prsente le dtail des calculs ncessaires lanalyse de la variance.


Soient p le nombre de niveaux et n le nombre de rptitions par niveaux.
Degr de libert : DDL

9 DDL expliqus = DDL modle 1 (DDLmodle = 2 dans le cas dun modle linaire et
DDL modle = 3 dans le cas dun modle quadratique)

9 DDL non linarit = p 2

9 DDL rsiduels = np p

9 DDL totaux = np 1.

Carr moyen :
SCE
Le carr moyen est calcul selon la formule : Carr moyen =
DDL

Par exemple, pour les rsidus expliqus :

Les valeurs de Fobs correspondantes sont calcules comme suit :

et

Les valeurs de la loi normale avec deux risques 5 et 1%.


F (95%) : Valeur de la loi normale un niveau de confiance de 95% pour les degrs de
libert correspondant.
F (95%) Expliqus : valeur de la loi normale pour des degrs de libert de DDL expliqus et
DDL rsiduels.
F (95%) non-linarit : valeur de la loi normale pour un degr de libert de DDL non linarit et
DDL rsiduels.

- 228 -
Annexes

Annexe 2-6 : Etude de ladquation du modle dtalonnage

Actochlore

Le tableau A6-1 prsente lexploitation des donnes obtenues pour les neufs niveaux
de la gamme dtalonnage de lactochlore.

Tableau A6-1: Exploitation de la gamme dtalonnage pour lactochlore et lactochlore D11.

Le test de Cochran permettant de vrifier lhomognit des variances a t effectu, les


variances sont gales. Lanalyse de la variance a t faite (Tableau 2-7).

somme
Source de degr de carr
des carrs Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
des carts
Expliqus
41,903 1 4,19E+01 229355 4,11 7,40
(rgression)
Non Linarit 6,38E-03 7 9,12E-04 4,99 2,28 3,18
Rsiduels 6,6E-03 36 1,83E-04
Totaux 41,916 44

Tableau 2-7 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage pour lactochlore et


lactochlore D11
Le modle explique les donnes mais la linarit nest pas vrifie. Il convient alors comme
pour latrazine et latrazine D5 dtudier de manire plus dtaille le comportement des
rsidus (Figure 2-17).
Figure 2-16 : Exploitation de la gamme dtalonnage pour lactochlore et lactochlore D11

- 229 -
Annexes

Lhomognit des variances ayant t vrifie par le test de Cochran, lanalyse de la


variance a t faite (tableau A6-2).

Tableau A6-2 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage pour lactochlore et


lactochlore D11.

Somme
Source de Degr de Carr
des carrs Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
des carts
Expliqus
41,903 1 4,19E+01 229355 4,11 7,40
(rgression)
Non Linarit 6,38E-03 7 9,12E-04 4,99 2,28 3,18
Rsiduels 6,6E-03 36 1,83E-04
Totaux 41,916 44

Le modle explique les donnes mais la linarit nest pas vrifie. Il convient alors,
comme pour latrazine et latrazine D5, dtudier le comportement des rsidus (figure A6-1).

0,06

0,04
Somme des rsidus

0,02

0,00
0 0,5 1 1,5 2 2,5
-0,02

-0,04

-0,06
Rapport Q/Q*

Figure A6-1 : Reprsentation graphique de la somme des rsidus en fonction du rapport des
concentrations entre lactochlore et lactochlore D11, Q varie de 1 et 125 g/L et Q* 50 g/L.

Les rsidus prsentent une dispersion alatoire, cependant le tableau A6-1 met en
vidence que lcart de linarit du niveau 75 pg/l est plus important que les autres niveaux
de la gamme. Son limination peut alors tre envisage. Ltude de ladquation du modle
dtalonnage va tre effectue sur la gamme dtalonnage sans ce point. Il apparat nanmoins
que le point 100 pg/l prsente galement des rsidus de non linarit importants.
Cependant, un seul point est liminer la fois.

- 230 -
Annexes

Tableau A6-3 : Exploitation de la gamme dtalonnage pour lactochlore et lactochlore D11 sans le
point 75 pg/l.

- 231 -
Annexes

Lanalyse de la variance a t ensuite effectue aprs vrification de lhomognit des


variances (Tableau A6-4).

Tableau A6-4 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage pour lactochlore et


lactochlore D11 sans le point 75 pg/l.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
41,102 1 4,11E+01 231443 4,15 7,50
(rgression)
Non Linarit 3,48E-03 6 5,80E-04 3,26 2,40 3,43
Rsiduels 5,7E-03 32 1,78E-04
Totaux 41,112 39

Aprs limination de la concentration 75 pg/l, le modle linaire explique les donnes.


Cependant, la linarit est vrifie 1 % mais pas 5%.

DEA

Le tableau A6-5 prsente lexploitation des donnes obtenues pour les neufs niveaux
de la gamme dtalonnage de la DEA et la DEA D6.

- 232 -
Annexes

Tableau A6-5: Etude de ladquation un modle dtalonnage linaire pour la DEA et la DEA D6.

Le test de Cochran effectu a mis en vidence une ingalit de variances. Lcart type
du niveau le plus concentr est plus lev que les autres, cependant, le test de Grubbs effectu
pour la concentration 125 pg/l a montr quaucune des valeurs de ce niveau ne pouvaient

- 233 -
Annexes

tre considre comme aberrante. Lanalyse de la variance a donc pu tre effectue (Tableau
A6-6).
Tableau A6-6 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage pour la DEA et la DEA D6.

Somme
Source de Degr de Carr
des carrs Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
des carts
Expliqus
29,882 1 2,99E+01 522012 4,11 7,40
(rgression)
Non Linarit 2,55E-03 7 3,64E-04 6,36 2,28 3,18
Rsiduels 2,1E-03 36 5,72E-05
Totaux 29,886 44

Le modle explique les donnes mais la linarit nest pas vrifie, les rsidus sont tudis.

0,06

0,04
Somme des rsidus

0,02

0,00
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0
-0,02

-0,04

-0,06
Rapport Q/Q*

Figure A6-2: Reprsentation graphique de la somme des rsidus en fonction du rapport des
concentrations pour la DEA et la DEA D6, Q varie de 1 et 125 g/L et Q* 50 g/L.

La reprsentation graphique de la somme des rsidus met en vidence une allure


parabolique. Une telle allure est caractristique dune fonction quadratique. Il convient alors
deffectuer ltude de ladquation un modle de degr 2. Le tableau A6-7 prsente
lexploitation des donnes obtenues pour ltude de ladquation un modle dtalonnage de
degr 2 pour les neufs niveaux de la gamme dtalonnage de la DEA et la DEA D6.

- 234 -
Annexes

Tableau A6-7 : Etude de ladquation un modle dtalonnage de degr 2


pour la DEA et la DEA D6.

Lanalyse de la variance a t effectue aprs vrification de lhomognit des variances


(tableau A6-8).

- 235 -
Annexes

Tableau A6-8 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de degr 2 pour la DEA et la
DEA D6.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
29,883 2 1,49E+01 261019 3,26 5,25
(rgression)
Non Linarit 1,09E-03 6 1,82E-04 3,18 2,36 3,35
Rsiduels 2,1E-03 36 5,72E-05
Totaux 29,886 44

Le modle de degr 2 explique les donnes et il existe une adquation entre le modle
de degr 2 et la courbe dtalonnage observe. Nanmoins, au cours de notre tude, cest le
modle linaire qui est recherch. Une saturation du signal peut tre suspecte et le niveau de
concentration le plus haut de la gamme peut tre limin. Une tude de ladquation un
modle linaire de la gamme dtalonnage sans la concentration 125 pg/l est de nouveau
effectue.

- 236 -
Annexes

Tableau A6-9 : Etude de ladquation un modle dtalonnage linaire pour la DEA et la DEA D6
(sans le point 125 pg/l).

Les variances sont ingales, lcart type de la concentration 75 pg/l est plus
important que les autres. Nanmoins, le test de Grubbs effectu pour ce niveau permet
daffirmer quaucune des valeurs nest aberrante. Lanalyse de la variance a ensuite t
effectue (tableau A6-10).

- 237 -
Annexes

Tableau A6-10: Analyse de la variance pour le modle dtalonnage linaire pour la DEA et la DEA
D6 sans le point n9.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
16,213 1 1,62E+01 554347 4,15 7 ,50
(rgression)
Non Linarit 5,49E-04 6 9,15E-05 3,13 2,40 3,43
Rsiduels 9,4E-04 32 2,92E-05
Totaux 16,214 39

Le modle explique les donnes.


DIA

Le tableau A6-11 prsente lexploitation des donnes obtenues pour les neufs niveaux
de la gamme dtalonnage de la DIA et la DIA D5.

- 238 -
Annexes

Tableau A6-11 : Etude de ladquation un modle dtalonnage linaire pour la DIA et la DIA D5.

Les variances peuvent tre considres comme gales. Lanalyse de la variance a t mene,
le tableau A6-12 prsente les rsultats obtenus.

- 239 -
Annexes

Tableau A6-12: Analyse de la variance pour le modle dtalonnage linaire


pour la DIA et la DIA D5.
Somme
Source de Degr de Carr
des carrs Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
des carts
Expliqus
48,684 1 4,87E+01 282800 4,11 7,40
(rgression)
Non Linarit 1,07E-02 7 1,53E-03 8,90 2,28 3,18
Rsiduels 6,2E-03 36 1,72E-04
Totaux 48,701 44

Le modle explique les donnes mais la linarit nest pas vrifie. Les rsidus sont
alors tudis (Figure A6-3).

0,06

0,04
Somme des rsidus

0,02

0,00
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0
-0,02

-0,04

-0,06
Rapport Q/Q*

Figure A6-3 : Reprsentation graphique de la somme des rsidus en fonction du rapport des
concentrations pour la DIA et la DIA D5, Q varie de 1 et 125 g/L et Q* 50 g/L.

La reprsentation graphique de la somme des rsidus met en vidence une allure


parabolique, caractristique dune fonction quadratique. Il convient alors deffectuer ltude
de ladquation un modle de degr 2.

- 240 -
Annexes

Tableau A6-13 : Etude de ladquation un modle dtalonnage de degr 2


pour la DIA et la DIA D5.

Lanalyse de la variance a t effectue aprs vrification de lhomognit des variances, le


tableau A6-14 prsente les rsultats obtenus.

- 241 -
Annexes

Tableau A6-14: Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de degr 2


pour la DIA et la DIA D5.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
48,690 2 2,43E+01 141418 3,26 5,25
(rgression)
Non Linarit 4,34E-03 6 7,23E-04 4,20 2,36 3,35
Rsiduels 6,2E-03 36 1,72E-04
Totaux 48,701 44

Le modle de degr 2 explique les donnes mais ne suffit pas pallier la non
linarit. Il convient de vrifier de nouveau les rsidus lors de lapplication du modle
linaire. Le tableau A6-13 met en vidence que lcart de non linarit du point 125 pg/l
est plus important que les autres niveaux de la gamme. Ce point peut tre considr comme
suspect. Ltude de ladquation un modle dtalonnage linaire la gamme sans le point
le plus concentr a t effectue (Tableau A6-15).

- 242 -
Annexes

Tableau A6-15: Etude de ladquation un modle dtalonnage linaire pour la DIA et la DIA D5
sans le point 125 pg/l.

Lanalyse de la variance a t effectue aprs vrification de lhomognit des


variances, le tableau A6-16 prsente les rsultats obtenus.

- 243 -
Annexes

Tableau A6-16 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage linaire pour la DIA et la DIA
D5 sans le point 125 pg/l.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
26,723 1 2,67E+01 173231 4,15 7,50
(rgression)
Non Linarit 5,15E-04 6 8,58E-05 0,56 2,40 3,43
Rsiduels 4,9E-03 32 1,54E-04
Totaux 26,729 39

Le modle explique les donnes et la linarit est vrifie, le doute concernant le point
le plus concentr est bien confirm.

Isoproturon

Le tableau A6-17 prsente lexploitation des donnes obtenues pour les neufs niveaux
de la gamme dtalonnage de lIPU et lIPU D6.

- 244 -
Annexes

Tableau A6-17 : Etude de ladquation un modle dtalonnage linaire pour lIPU et lIPUD6.

Les variances peuvent tre considres comme gales, lanalyse de la variance a alors t
effectue (Tableau A6-18).

- 245 -
Annexes

Tableau A6-18 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage linaire pour lIPU et
lIPU D6.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
23,085 1 2,31E+01 952956 4,11 7,40
(rgression)
Non Linarit 1,56E-02 7 2,22E-03 91,79 2,28 3,18
Rsiduels 8,7E-04 36 2,42E-05
Totaux 23,102 44

Le modle explique les donnes mais la linarit nest pas vrifie, les rsidus sont
alors tudis.

0,06

0,04
Somme des rsidus

0,02

0,00
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5
-0,02

-0,04

-0,06
Rapport Q/Q*

Figure A6-4 : Reprsentation graphique de la somme des rsidus en fonction du rapport des
concentration entre lIPU et lIPU D6, Q varie de 1 et 125 g/L et Q* 50 g/L.

Les rsidus ne sont pas disperss de manire alatoire, ils prsentent une allure
parabolique. Ltude de ladquation un modle dtalonnage de degr 2 a alors t
effectue (Tableau A6-19).

- 246 -
Annexes

Tableau A6-19 : Etude de ladquation un modle dtalonnage de degr 2 pour lIPU et lIPU D6.

Aprs vrification de lhomognit des variances, les rsultats correspondants


lANOVA sont indiqus dans le Tableau A6-20.

- 247 -
Annexes

Tableau A6-20 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de degr 2 pour lIPU et
lIPU D6.

Somme des
Source de Degr de Carr
carrs des Fobs F(5%) F(1%)
variation libert moyen
carts
Expliqus
23,100 2 1,15E+01 476772 3,26 5,25
(rgression)
Non Linarit 1,32E-03 6 2,20E-04 9,08 2,36 3,35
Rsiduels 8,7E-04 36 2,42E-05
Totaux 23,102 44

Le modle explique les donnes mais la linarit nest pas vrifie. Une amlioration
est observe avec le modle de degr 2 mais nest pas suffisante. Une tude dadquation un
modle linaire aprs limination du point le plus haut de la gamme a t effectue. Le
modle explique alors les donnes mais la linarit nest toujours pas vrifie. Par ailleurs,
lallure parabolique des rsidus est conserve. Pour lisoproturon, toute la gamme est
conserve et une incertitude lie au modle dadquation prendra en compte le dfaut de
linarit.

- 248 -
Annexes

Annexe 2-7 : Essai inter-laboratoires AquaTerra

Objectifs du projet AquaTerra

L'objectif global du projet AquaTerra est le dveloppement d'une approche de


modlisation intgre pour les systmes rivires - sols - eaux souterraines et sdiments,
applique la gestion des bassins hydrographiques en Europe. Il vise fournir une base
scientifique pour une amlioration de la gestion des bassins. Ceci exige une meilleure
comprhension du systme fleuves - sdiments - sols - eaux souterraines diffrentes chelles
temporelles et spatiales. Il concerne principalement les impacts sur la qualit et la quantit
deau dus au changement climatique et la pollution [221].

Echantillons fournis

Les essais raliss lors de la campagne inter-laboratoires AquaTerra ont port sur
lanalyse de diffrentes types deaux :
trois eaux souterraines :
9 une eau souterraine non dope,
9 une eau souterraine dope un niveau de concentration faible (de lordre
de 0,01 g/L) note level 1 ,
9 une eau souterraine dope un niveau de concentration moyen (de lordre
de 0,1 g/l) note level 2 ,
deux eaux distilles :
9 une eau distille non dope qui sert de rfrence,
9 une eau distille dope un niveau de concentration moyen (de lordre de
0,1 g/l) note level 3 .

Les diffrents laboratoires participants sont indiqus sur le tableau A7-1.

- 249 -
Annexes

Laboratoires participants

Tableau A7-1 : Liste des laboratoires participants.

Laboratoires participants
AGBAR (Barcelone, Espagne)
BRGM (Orlans, France)
CEMAGREF (Lyon, France)
Centre d'Analyses et de Recherches (Illkrich, France)
CSIC (Barcelone, Espagne)
Universit europenne de Sciences Appliques (Idstein, Germany)
Institut Fresenius (Taunusstein, Germany)
Institut Pasteur (Lille, France)
Laboratoire Dpartemental d'Analyses de la Drme (Valence, France)
Laboratoire National de Mtrologie et d'Essais (Paris, France)

Rsultats de lessai inter-laboratoires

Les rsultats de lessai inter-laboratoires concernant lanalyse des trois chantillons deaux de
concentrations et de natures diffrentes sont prsents sur les figures A7-1 A7-3. Le LNE
correspond au laboratoire 10. Le code de couleurs utilises sur les figures est indiqu sur le
tableau A7-2.

Tableau A7-2: Code de couleurs associes aux diffrents laboratoires.

Concentration de rfrnce
Laboratoire 01 Laboratoire 06
Laboratoire 02 Laboratoire 07
Laboratoire 03 Laboratoire 08
Laboratoire 04 Laboratoire 09
Laboratoire 05 Laboratoire 10

- 250 -
Annexes

Figure A7-1 : Moyennes et cart types des rsultats danalyse de latrazine, de la DEA, de la DIA, de
lIPU et de lactochlore obtenus par les dix laboratoires participants (chantillon deau souterraine
level 1 ).

Figure A7-2 : Moyennes et cart types des rsultats danalyse de latrazine, de la DEA, de la DIA, de
lIPU et de lactochlore obtenus par les dix laboratoires participants (chantillon deau souterraine
level 2 ).

- 251 -
Annexes

Figure A7-3 : Moyennes et cart types des rsultats danalyse de latrazine, de la DEA, de la DIA, de
lIPU et de lactochlore obtenus par les dix laboratoires participants (chantillon deau distille
level 3 ).

- 252 -
Annexes

Annexe 3-1 : Informations concernant les pesticides tudis


Tableau A3-1-1 : Activit, famille, formule chimique et caractristiques physico-chimiques des composs tudis
(Seau : solubilit dans leau et pKa : dissociation dan leau).

Po ids
Subs tanc e ac tiv e A c tiv it Famille c himique Fo rmule c himique lo g P Se au pK a
mo l c ulaire

pH 1 2,7 311 mg/l


pH 5 0,18 pH 1
2,4 D H e rbic ide A ryloxya c ide 221,04 pH 7 -0,83 2,03 g/l 2,8
pH 9 -1,01 pH 5
25C 25C

233 mg/l
A c toc hlore H e rbic ide C hloroa c ta mide 269,8 4,14 -
25C

Inse ctic ide ,


A ldica rbe C a rba ma te 190,27 1,15 6000 mg/l -
N ma tic ide

Strobilurine , 2,5 6 mg/l


A zoxystrobine Fongic ide 403,4 -
mthoxya c ryla te 20C 20 C

pH 5 0,77
490 mg/l
pH 7 -0,46 3,28
B e nta zone H e rbic ide Thia diazinone 240,3 20C
pH 9 -0,55 24C
pH 3
22C

- 253 -
Annexes

Poids
Subs tance active Activit Famille chimique Formule chimique log P Se au pKa
mol culaire

539 mg/l
pH 2 1,31 pH5
Bromoxynil Herbicide Benzonitrile 276,9 pH 7 1,04 90 mg/l pH7 3,86
25C >3100 mg/l
pH9 25C

Insecticide, 1,52
Carbofuran Carbamate 221,25 700mg/l -
Nmaticide 20 C
25C

3,36 22 mg/l
Carfentrazone thyle Herbicide Triazolinone 412,19 -
20C 25C

4,7 1,4 mg/l


Chlorpyriphos Insecticide Organophosphor 350,6 -
20C et pH7 25C

74 mg/l
Chlortoluron Herbicide Phnylure 212,7 2,5 -
25C

- 254 -
Annexes

Poids
Subs tance active Activit Famille chimique Formule chimique log P Se au pK a
mol culaire

pas de pts
140 mg/l acido-
2,91
Cyproconazole Fongicide Triazole 291,8 22 C basiques
pH 7
pH 6,7 entre
3,5<pH<10

3,9 (pH5), 20 g/l (pH5),


Cyprodinil Fongicide Anilinopyrimidine 225,3 4 (pH7-9) 13 (pH7), 15 4,44
25C (pH9) 25C

Dichlorvos Insecticide Organophosphor 220,98 1,9 _ _

<0.05 mg/l
Diflufnicanil Herbicide P henoxynicotinanilide 394,3 4,9 -
25 C

1389 mg/l
Dimthenamide Herbicide Chloroacetamide 275,8 1,89 -
22 C

- 255 -
Annexes

Poids
Subs tance active Activit Famille chimique Formule chimique log P Se au pK a
mol culaire

Insecticide, 25 g/l
Dimethoate Organophosphor 229,28 0,704 2 (20C)
acaricide 21 C

2,58 21,5C
Fenpropidine Fongicide P ipridine 273,46 <1 g/l 10,5
pH 7

4 1,9 mg/l
Fipronil Insecticide P yrazole 437,2 -
20C 20C

1 pH4;
-1,22 pH7; - 6.36 g/l 4,54
Florasulam Herbicide Sulfonamide 359,3
2,06 pH10 20 C pH7 22 C
20 C

4,12 1,8 mg/l


Fludioxonil Fongicide P hnylpyrrole 248,2 -
25 C 25 C

- 256 -
Annexes

Poids Dis s . ds
Substance active Activit Famille chimique Formule chimique log P Se au
mol culaire e au

5,7 g/l pH5


2,94
Fluroxypyr herbicide Acide picolinique 255 2 7,3 g/l pH9
25C
20C

2,3 104 mg/l 2,3


Flutriafol Fongicide Triazole 301,3
20 C 20 C 25 C

18 mg/l
3,9 2,3
Hexaconazole Fongicide Triazole 314,2 20 C
20 C 25 C
pH 6,5

Herbicide
0,34 60 mg/l
Imazaquine Substance de Imidazolinone 311,3 3,8
22C 25 C
croissance

0,57 0,58 g/l


Imidaclopride Insecticide Nitromethylene 255,66 -
22 C 20 C

- 257 -
Annexes

Poids
Substance active Activit Famille chimique Formule chimique log P Se au pKa
mol culaire

539 mg/l
2,2 pH 5, pH 5,
Ioxynil Herbicide Benzonitrile 370,92 4,1
0,23 pH8,7 5,53 g/l pH9,
20 C

0,8 mg/l
Isoxaben Herbicide Amide 332,39 2,64 -
25 C

Acaricide 145 mg/l


Malathion Organophosphor 330,36 2,89 -
insecticide 25C

734 mg/l
Mcoprop Herbicide Aryloxyacide 214,6 -0,19 pH7 25 C 3,11
pH de 7

2,2 g/l
0,9 (pH 5), -
(pH4,8), 15
Mesotrione Herbicide Trictone 339,3 1 pH (7-9) 3,12
(pH6,9), 22
20 C
(pH9) 25C

- 258 -
Annexes

Poids
Subs tance active Activit Famille chimique Fo rmule chimique lo g P Se au pK a
mo l culaire

488 mg/l
Metolachlor Herbicide Chloroactanilide 283,8 2,9 -
25C

2,12 pH5,
200 mg/l
2,46 pH7,
Mtosulam H erbicide Triazolopyrimidine 418,26 20 C eau 4,8
3,08 pH9
distille
20C

Insecticide, 11 mg/l
P arathion thyl Organophosphor 291,3 3,83 -
acaricide 20C

Acaricide 4,2 5 mg/l


P yrimiphos-mthyl Organophosphor 305,3 _
insecticide 20C 30C

34 mg/l
P rochloraze Fongicide Imidazole 376,7 4,12 3,83
25C

- 259 -
Annexes

Poids
Subs tance active Activit Famille chimique Formule chimique log P Se au pK a
mo l culaire

116g/l
Quinoxyfne Fongicide Quinoline 308,1 4,66 pH 6,45 3,56
20C

340 mg/l
2,79 pH7
Spiroxamine Fongicide Spiractalamine 297,5 20 C 6,9
20C
pH 7

3 mg/l
Triallate Herbicide Carbamate 304,66 4,66 -
24C

4,2
1,1 mg/l pH7
Tridemorphe Fongicide Morpholine 297,5 pH7 6,5
20C
22C

- 260 -
Annexes

Annexe 3-2 : Influence du dbit de phase mobile en analyse par


CPL/SM

Cette annexe prsente les rsultats obtenus pour tous les composs lors de ltude de
linfluence du dbit de phase mobile sur lintensit des aires observes. Les rsultats sont
exprims en rapport des aires observes entre la colonne B (Symmetry Shield RP 18, 150*2,1
mm d.i., dp=3,5 m, Waters) et la colonne A (Symmetry Shield RP 18, 250*3 mm d.i., dp=5
m, Waters).

Intensit aire colonne B


Rapport =
Intensit aire colonne A

Tableau A3-2-1 : Gains observs sur les aires obtenues par CPL/SM, mode MRM, ions primaires, ESI
mode positif et ngatif.

Substance active Rapport Substance active Rapport


2,4 D 7,8 Fludioxonil 7,2
2,4 D 13C6 8,0 Fluroxypyr 3,8
Aldicarbe 5,1 Flutriafol 5,5
Aldicarbe 5,3 Hexaconazole 7,9
Azoxystrobine 14 Imazaquine 4,4
Bentazone 6,6 Imidaclopride 4,0
Bentazone D6 6,9 Imidaclopride D4 3,0
Bromoxynil 7,0 Ioxynil 6,7
Carbofuran 7,0 Isoxaben 8,9
Carbofuran D3 7,0 Malathion 18,9
Carfentrazone thyle 8,7 Malathion D6 18,5
Cyproconazole 5,8 Mcoprop 8,3
Dichlorvos 2,3 Mcoprop D3 8,6
Dichlorvos D6 3,3 Mtosulam 5,1
Diflufnicanil 10,9 Prochloraze 18,0
Dimthenamide 10,9 Pyrimiphos-mthyl 8,9
Fenpropidine 3,7 Pyrimiphos-mthyl D6 8,0
Fipronil 13,3 Spiroxamine 3,5
Florasulam 3,5 Triallate 13,4

- 261 -
Annexes

Annexe 3-3 : Conditions analytiques CPL/SM

Cette annexe rsume les diffrentes conditions analytiques fixes partir des
diffrentes tudes menes dans le cadre de la thse.

Tableau A3-3-1 : Conditions analytiques de dtection par SM.

Source d'ionisation ESI


H2O et MeCN acidifis 0,005%
Phase mobile
d'acide actique
Symmetry Shield RP18 (150*2,1mm
Colonne analytique
d.i., dp=3,5 m Waters)
Dbit de phase mobile 0,15 ml/min
Volume inject 10 L
Position de la sonde ESI B
Spray Voltage 4000 V
Sheath gas 35 u.a.
Auxiliary Gas 2 u.a.
Temprature Capillaire 325 C
Pression du gaz de
1,5 mTorr
collision

Le gradient appliqu est prsent ci-dessous.

Tableau A3-3-2 : Gradient dlution appliqu lors de lanalyse de pesticides


par DI/CPL/SM.

H2O acidifie Actonitrile acidifi


Temps (min)
% %
0 80 20
10 50 50
15 50 50
30 20 80
35 20 80
36 10 90
45 10 90

- 262 -
Annexes

Annexe 3-4 : Etalonnage

Cette annexe prsente les diffrentes droites dtalonnages obtenues pour les diffrents
composs par CPL/SM.

Bromoxynil Fludioxonil Aldicarbe Ioxynil

1,2E+07
y = 7E+07x - 200994
R 2 = 0,9662

1,0E+07

8,0E+06
y = 5E+07x - 99304
Aires de pics

R2 = 0,9805
6,0E+06

4,0E+06 y = 2E+07x + 53081


R 2 = 0,9691

y = 2E+07x - 41455
2,0E+06
R2 = 0,9773

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-1 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3 , bromoxynil : 0,002 0,15 mg/L, fludioxnil : 0,0005 0,15 mg/L, aldicarbe :
0,025 0,15 mg/L et ioxynil : 0,001 0,15 mg/L.

- 263 -
Annexes

Chlorpyriphos Dichlorvos Triallate


1,8E+06

1,6E+06 y = 7E+06x - 73604


R2 = 0,9389
1,4E+06
Aires de pics

1,2E+06

1,0E+06

8,0E+05
y = 2E+06x - 25358
6,0E+05 R2 = 0,8139
y = 3E+06x - 31317
4,0E+05
R2 = 0,8852
2,0E+05

0,0E+00
0,00 0,05 0,10 0,15 0,20
concentrations mg/L

Figure A3-4-2 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, gamme de concentrations allant de 0,05 mg/L 0,225 mg/L.

Mtolachlor Pirimiphos mthyl Azoxystrobine


4,5E+08

4,0E+08 y = 2E+09x - 853063


R2 = 0,9777
3,5E+08
y = 2E+09x - 4E+06
Aires de pics

3,0E+08 R2 = 0,9829

2,5E+08 y = 2E+09x - 1E+06


R 2 = 0,9867
2,0E+08

1,5E+08

1,0E+08

5,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-3 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, mtolachlor et azoxystrobine : 0,0005 mg/L 0,15 mg/L et pirimiphos mthyl :
0,001 0,15 mg/L.

- 264 -
Annexes

Isoxaben Spiroxamine
4,5E+08
y = 3E+09x - 2E+06
4,0E+08 R 2 = 0,984

3,5E+08 y = 2E+09x - 2E+06


R2 = 0,9855
Aires de pics

3,0E+08

2,5E+08

2,0E+08

1,5E+08

1,0E+08

5,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-4 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, isoxaben : 0,0005 0,15 mg/L et spiroxamine : 0,005 0,15 mg/L.

1,8E+08 Cyprodinil Imazaquin Prochloraze


y = 1E+09x - 980330
1,6E+08 R2 = 0,9826

1,4E+08

1,2E+08
y = 6E+08x - 71258
Aires de pics

R2 = 0,984
1,0E+08
y = 6E+08x - 913021
8,0E+07 R2 = 0,9828

6,0E+07

4,0E+07

2,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-5 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, cyprodinil : 0,001 0,15 mg/L, imazaquin et prochloraze : 0,0005 0,15 mg/L.

- 265 -
Annexes

Dimethanamide Fenpropidin Quinoxyfne Mtosulam


2,0E+08 y = 1E+09x - 2E+06
R2 = 0,9859

1,5E+08 y = 1E+09x - 754298


R2 = 0,9873
Aires de pics

y = 8E+08x - 1E+06
1,0E+08 R2 = 0,9857
y = 6E+08x - 728839
R2 = 0,9863

5,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-6 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, dimethanamide, fenpropidin et quinoxyfne : 0,001 0,15 mg/L et mtosulam :
0,0005 0,15 mg/L.

2,4 D Msotrione Fipronil Dimethoate


6,0E+07

y = 3E+08x - 426031
5,0E+07 R2 = 0,9849

y = 3E+08x - 592310
4,0E+07 R2 = 0,9724
Aires de pics

y = 2E+08x - 389152
R2 = 0,9835
3,0E+07 y = 2E+08x - 349086
R2 = 0,9879

2,0E+07

1,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-7 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, 2,4D et msotrione : 0,0005 0,15 mg/L ; fipronil et dimethoate : 0,001 0,15
mg/L.

- 266 -
Annexes

5,0E+07 Bentazone Mcoprop Tridemorphe y = 3E+08x - 872915


R2 = 0,9787

4,0E+07 y = 3E+08x - 549651


R2 = 0,9831
Aires de pics

y = 2E+08x - 291234
3,0E+07
R2 = 0,9852

2,0E+07

1,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-8 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, bentazone et mcoprop : 0,001 0,15 mg/L ; tridmorphe : 0,005 0,15 mg/L.

6,0E+07 Chlortoluron Flutriafol Cyproconazole


y = 3E+08x - 300779
R2 = 0,9863
5,0E+07

y = 3E+08x - 321808
R2 = 0,9804
Aires de pics

4,0E+07

y = 2E+08x - 180167
3,0E+07 R2 = 0,9844

2,0E+07

1,0E+07

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-9 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, chlortoluron : 0,0005 0,15 mg/L, flutriafol : 0,002 0,15 mg/L et
cyproconazole : 0,001 0,15 mg/L.

- 267 -
Annexes

2,5E+07 Fluroxypyr Imidaclopride Carfentrazone thyle y = 2E+08x + 43605


R2 = 0,9861
y = 1E+08x - 470728
2,0E+07 R2 = 0,979
y = 1E+08x - 389113
R2 = 0,9842
Aires de pics

1,5E+07

1,0E+07

5,0E+06

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-10 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, fluroxypyr : 0,002 0,15 mg/L ; imidaclopride et carfentrazone thyle : 0,005
0,15 mg/L.

2,5E+07 Carbofuran Actochlore Diflufnican


y = 1E+08x - 293828
R2 = 0,9833

2,0E+07 y = 1E+08x - 160825


R2 = 0,9908
Aires de pics

1,5E+07
y = 8E+07x + 3901,4
R2 = 0,9833
1,0E+07

5,0E+06

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16
concentrations mg/L

Figure A3-4-11 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, carbofuran : 0,005 0,15 mg/L ; actochlore et diflufnican : 0,002 0,15
mg/L.

- 268 -
Annexes

3,0E+07 Florasulam Malathion Hexaconazole

y = 2E+08x - 165342
2,5E+07
R2 = 0,9898
y = 1E+08x - 91397
2,0E+07 R2 = 0,9832
Aires de pics

y = 1E+08x - 131040
1,5E+07 R2 = 0,9864

1,0E+07

5,0E+06

0,0E+00
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16

concentrations m g/L

Figure A3-4-12 : Evolution des aires de pics en fonction de la concentration, dtection MRM, n=4,
conditions annexe 3-3, florasulam : 0,0005 0,15 mg/L, malathion : 0,002 0,15 mg/L et
hexaconazole : 0,005 0,15 mg/L.

- 269 -
Annexes

Annexe 3-5 : Intrt des diffrentes molcules marques comme talon


interne pour lanalyse de lazoxystrobine

Pirimiphos mthyl D6

7
y = 1,0908x + 0,0791
6
R2 = 0,9951
5
Rapport A/A*

0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*

Figure A3-5-1 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le pirimiphos
mthyl D6 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations
allant de 0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

Malathion D6
1800

y = 299,65x + 16,078
1600
R2 = 0,9731
1400
Rapport A/A*

1200

1000

800

600

400

200

0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*

Figure A3-5-2 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le malathion
D6 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

- 270 -
Annexes

Dimethoate D6
80
y = 14,116x + 0,9943
70
R2 = 0,9919
60
Rapport A/A*

50

40

30

20

10

0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*

Figure A3-5-3 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le dimethoate
D6 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

Chlortoluron D6

45
y = 7,7822x + 0,8792
40 2
R = 0,9949
35
Rapport A/A*

30
25
20
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*
Figure A3-5-4 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le
chlortoluron D6 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations
allant de 0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

- 271 -
Annexes

Carbofuran D3

45
y = 7,613x + 0,8647
40 2
R = 0,9828
35

30
Rapport A/A*

25
20
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*
Figure A3-5-5 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le carbofuran
D3 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

Bentazone D6

45
y = 7,656x - 1,0289
40
R2 = 0,997
35
Rapport A/A*

30

25
20

15

10

0
0 1 2 3 4 5

Rapport C/C*

Figure A3-5-6 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le bentazone
D6 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

- 272 -
Annexes

Actochlore D11

450
y = 81,126x - 2,0063
400
R2 = 0,9867
350
Rapport A/A*

300

250

200

150
100

50

0
0 1 2 3 4 5 6
Rapport C/C*

Figure A3-5-7 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et lactochlore
D11 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

Mecoprop D3

70
y = 12,967x + 0,9157
R2 = 0,9948
60

50
Rapport A/A*

40

30

20

10

0
0 1 2 3 4 5 6

Rapport C/C*

Figure A3-5-8 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le mecoprop
D3 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

- 273 -
Annexes

Mtolachlor D6

14

12 y = 2,4652x + 0,1512
R2 = 0,9971
Rapport A/A*

10

0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*

Figure A3-5-9 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le mtalachlor
D6 en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

2,4 D13C6
140
y = 22,576x + 0,3819

120
R2 = 0,9967

100
RapportA/A*

80

60

40

20

0
0 1 2 3 4 5
Rapport C/C*

Figure A3-5-10 : Evolution de la moyenne des rapports des aires entre lazoxystrobine et le 2,4 D13C6
en fonction du rapport des concentrations, ESI, mode MRM, gamme de concentrations allant de 0,025
mg/L 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3.

- 274 -
Annexes

Annexe 4-1 : Extraction PLE

Cette annexe dcrit le matriel PLE utilis.

Flacon contenant le
solvant choisi pour
Cellule extraire les composs
dextraction (pesticides) de la
en acier matrice

Four

Flacon de
poubelle Extrait de la solution

Figure A4-1-1 : Appareil ASE 100 Dionex.

La matrice est introduite dans une cellule dextraction en acier (Figure A4-1-2).

Figure A4-1-2 : Cellule dextraction en acier.

Les conditions PLE utilises sont celles indiques dans le tableau A4-1-1.

Tableau A4-1-1 : Conditions PLE.

Prchauffage 0 min
Phase statique 5 min
Rinage 70 % volume de la cellule
Purge 150 sec
Cycles 3
Pression 100 bars
Temprature 100 C

- 275 -
Annexes

- 276 -
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Lsite des figures et tableaux

Liste des figures et tableaux

Liste des figures :


Chapitre I :

Figure 1-1 : Structures chimiques des principales familles de pesticides. 19


Figure 1-2: Principales tapes dune procdure analytique utilise pour la dtermination de
pesticides dans des chantillons alimentaires adapt de [27] . 23
Figure 1-3 : Photo de la source dionisation ESI, adapte de [83] . 32
Figure 1-4 : Processus dionisation par ESI, daprs [84] . 32
Figure 1-5 : Photo de la source dionisation APCI, adapte de [83]. 33
Figure 1-6 : Reprsentation schmatique du processus dionisation par APCI en mode positif
[89]. 34
Figure 1-7 : reprsentation dune trappe ionique et de son mode de fonctionnement [94]. 38
Figure 1-8 : reprsentation dun analyseur de type quadriple [95]. 39
Figure 1-9 : Schma du couplage de la chromatographie en phase liquide la spectromtrie de
masse en tandem. 42
Figure 1-10 : Reprsentation schmatique du mode full scan . 43
Figure 1-11 : Reprsentation schmatique du mode SIM . 43
Figure 1-12 : Reprsentation schmatique du mode Product Ion Scan . 44
Figure 1-13 :Reprsentation schmatique du mode MRM. 44
Figure 1-14 : Reprsentation schmatique du mode Neutral loss . 45
Figure 1-15 : Reprsentation schmatique du mode Precursor Ion Scan. 45
Figure 1-16 : Principe de la spectromtrie de masse en tandem pour une trappe ionique, adapt
de [94] . 46
Figure 1-17 : Comparaison de la sensibilit de la CPG-SM par rapport la CPL-SM pour
diffrentes familles de pesticides [74] . 49
Figure 1-18 : Exemple de suppression dions de certains pesticides dans un extrait de fraises
0,05 mg/kg (0,125 g/mL) (bleu volontairement dcal de 0,3 min sur le graphe) par
superposition dune injection dune solution talon la mme teneur (rouge) et dune injection
dun extrait vierge de fraises (vert) (CPL/ESI(+)SM), (1 : thiofencarb-sulphoxide, 2 :
carbendazime, 3 : thiabendazole, 4 : propoxur, 5 : carbaryl) [93] . 58
Figure 1-19 : Reprsentation schmatique des tapes dextraction [129]. 60
Figure 1-20 : Schma dun systme dextraction en solvant chaud pressuris (Dionex). 70
Figure 1-21 : Principe de lextraction sur phase solide. 82
- 285 -
Lsite des figures et tableaux

Figure 1-22 : Reprsentation schmatique du principe de dilution isotopique. 91


Figure 1-23 : Intrt de la dilution isotopique mis en vidence lors dune campagne dinter-
comparaison [204]. 92

Chapitre II :

Figure 2-1 : Evolution du signal de latrazine, latrazine D5, de lIPU et lIPU D6 en fonction
de la nature de la phase mobile lors de linjection dune solution 0,1 mg/L (n=3) (mode
MRM, ESI +), les conditions opratoires dtailles sont dcrites en annexe 2-3. 106
Figure 2-2 : Evolution du signal de la DIA, la DIA D5, la DEA et la DEA D6 en fonction de la
nature de la phase mobile lors de linjection dune solution 0,1 mg/L (n=3) (mode MRM,
ESI +), les conditions opratoires dtailles sont dcrites en annexe 2-3. 106
Figure 2-3 : Sparation des composs une teneur de 0,05 mg/L, dtection MRM (mode
positif), 1/ DIA et DIA D5 tr = 3,5 min 2/ DEA et DEA D6 tr = 4,2 min 3/ IPU et IPU D6 tr =
7,2 min, 4/ Atrazine et Atrazine D5 tr = 7,9 min 5/ Actochlore et Actochlore D11 tr = 11,5
min, les conditions analytiques dtailles sont celles prsentes en annexe 2-3. 107
Figure 2-4 : Evolution du rapport des intensits entre la molcule (I) et la molcule marque
(I*) en fonction du rapport des concentrations de la molcule (Q) et la molcule marque (Q*)
pour latrazine, la DIA, la DEA, lactochlore et lIPU, dtection MRM, mode positif n=1
Q : gamme de concentrations allant de 1 125 g/L et Q* = 50 g/L. 110
Figure 2-5 : Logigramme de dcision concernant ladquation du modle dtalonnage 112
Figure 2-6 : Reprsentation graphique de la somme des rsidus en fonction du rapport des
concentrations (Q/Q*) entre latrazine et latrazine D5. 115
Figure 2-7 : Reprsentation schmatique des limites de dtection et de quantification. 118
Figure 2-8 : Rendements moyens dextraction des pesticides dune eau dope 0,05 g/L
(n=3), V = 250 ml sur cartouche Oasis HLB (Annexe 2-1) et analyse par CPL/SM. 123
Figure 2-9 : Rsultats exprims sous forme de z-scores pour lanalyse des pesticides dans
lchantillon deau souterraine (level 1). 127
Figure 2-10 : Rsultats exprims sous forme de z-scores pour lanalyse des pesticides dans
lchantillon deau souterraine (level 2). 128
Figure 2-11 : Rsultats exprims sous forme de z-scores pour lanalyse des pesticides dans
lchantillon deau distille (level 3). 129

Chapitre III :

Figure 3-1: Protocole doptimisation pour la dtermination de lion prcurseur et des ions de
fragmentation par SM. 141
- 286 -
Lsite des figures et tableaux

Figure 3-2 : Evolution de laire normalise des diffrents composs en fonction de la nature de
la phase mobile (solution 0,2 mg/L (n=4), dtection MRM, ESI mode positif et ngatif). 149
Figure 3-3 : Evolution de laire normalise des diffrents composs en fonction du
pourcentage dacide actique ajout la phase mobile, (solution 0,125 mg/L (n=3), dtection
MRM, ESI mode positif et ngatif). 153
Figure 3-4 : Evolution de laire normalise des diffrents composs en fonction du
pourcentage dacide actique ajout la phase mobile (solution 0,125 mg/L (n=3), dtection
MRM, ESI mode positif et ngatif). 154
Figure 3-5 : Evolution de laire normalise de la bentazone (239>132) et du fluroxypyr
(253>194) en fonction du pourcentage dacide actique ajout la phase mobile (solution
mulipesticides 0,125 mg/L, (n=3), mode MRM (ions primaires), ESI mode +/-. 156
Figure 3-6 : Comparaison des pics chromatographiques obtenus pour le fluroxypyr lors de
linjection dune solution 0,2 mg/L, mode MRM, ion primaire 253>195, ESI, modes +/-, tr =
temps de rtention, A : aire du signal, H = hauteur du signal. 159
Figure 3-7 : Chromatogrammes obtenus par CPL/SM, solution multipesticides 0,2 mg/L,
mode MRM (ions primaires), ESI positif et ngatif, conditions analytiques annexe 3-3. 161
Figure 3-8 : Chromatogrammes obtenus par CPL/SM, solution multipesticides 0,2 mg/L,
mode MRM (ions primaires), ESI positif et ngatif, conditions analytiques annexe 3-3. 162
Figure 3-9 : Chromatogrammes obtenus par CPL/SM, solution multipesticides 0,2 mg/L,
mode MRM (ions primaires), ESI positif et ngatif, conditions analytiques annexe 3-3. 163
Figure 3-10: Evolution de lallure du pic chromatographique de limazaquin (mode positif, ion
primaire) en fonction du pourcentage dactonitrile prsent dans la solution injecte (0,2
mg/L), mode MRM, ESI, conditions en annexe 3-3, A : aire du signal, H : hauteur du signal.
165
Figure 3-11 : Evolution de laire normalise des pics de la bentazone et de la bentazone D6 en
fonction de la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3), mode MRM, ESI,
conditions en annexe 3-3. 166
Figure 3-12 : Evolution de laire normalise des pics de limazaquin en fonction de la
composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) mode MRM, ESI ngatif et positif,
conditions en annexe 3-3. 167
Figure 3-13 : Evolution du rapport des aires de pics correspondants au suivi des transitions des
ions primaires, secondaires et tertiaires entre la bentazone et la bentazone D6, le mcoprop et
le mcoprop D3 en fonction de la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) ESI,
mode MRM, conditions en annexe 3-3. 168

- 287 -
Lsite des figures et tableaux

Figure 3-14 : Evolution du rapport des aires de pics correspondants aux ions primaires en
fonction de la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) ESI, mode MRM,
conditions en annexe 3-3. 170
Figure 3-15 : Evolution du rapport des aires de pics correspondants aux ions primaires en
fonction de la composition de lchantillon inject (0,2 mg/L n=3) ESI, mode MRM,
conditions en annexe 3-3. 171
Figure 3-16 : Evolution des aires de pics du malathion en fonction de la concentration, mode
MRM, n=4, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3. 174
Figure 3-17 : Evolution de la moyenne des rapports des aires de pics du malathion//malathion
D6 en fonction du rapport des concentrations, mode MRM, gamme de concentrations allant de
0,025 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3, A :Aire du pic du malathion, A* :Aire du pic du
malathion D6, C : concentration du malathion, C* : concentration du malathion D6. 175
Figure 3-18 : Evolution des aires du pic de lazoxystrobine en fonction de la concentration,
dtection MRM, n=4, gamme de concentrations allant de 0,025 0,75 mg/L, conditions
annexe 3-3. 176
Figure 3-19 : Evolution des rapports des aires de pics de lazoxystrobine/malathion D6 en
fonction du rapport des concentrations, dtection MRM, n=4, gamme de concentrations allant
de 0,025 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3. 178
Figure 3-20 : Evolution des rapports des aires de pics de lazoxystrobine/bentazone D6 en
fonction du rapport des concentrations, dtection MRM, n=4, gamme de concentrations allant
de 0,025 0,75 mg/L, conditions annexe 3-3. 178

Chapitre IV :

Figure 4-1 : Protocole analytique global. 182


Figure 4-2: Photo de lvaporateur rotatif. 184
Figure 4-3 : Taux de rcupration (TR) moyens aprs vaporation dune solution
multipesticides 0,01 mg/L obtenus aprs reprise de lextrait sec par 500 L dactonitrile et
500 L deau (n=6), CPL/ESI/SM, mode+/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 186
Figure 4-4 : Taux de rcupration(TR) moyens aprs vaporation dune solution
multipesticides 0,01 ng/l obtenus aprs reprise de lextrait sec par 0,5 mL dactonitrile
puis 0,5 mL deau (n=6) CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.
186
Figure 4-5 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop
(n=9), conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile,
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 190
- 288 -
Lsite des figures et tableaux

Figure 4-6: Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop
(n=9), conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile,
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 190
Figure 4-7 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides des billes de verre dopes
(n=3), conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile,
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 192
Figure 4-8 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides des billes de verre dopes (n=3),
conditions dextraction en annexe 4-1, solvant dextraction = actonitrile, CPL/ESI/SM, mode
+/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 193
Figure 4-9 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau dop
(n=4), conditions dextraction en annexe 4-1, solvants dextraction = actonitrile/ mthanol
(50/50, v/v), CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 194
Figure 4-10 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides du sable de Fontainebleau
dop (n=4), conditions dextraction en annexe 4-1, solvants dextraction = actonitrile/
mthanol (50/50, v/v), CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3.
195
Figure 4-11 : Influence de la temprature sur les taux de rcupration (TR) moyens des
pesticides du sable de Fontainebleau (solvant : MeCN/MeOH (50/50), conditions en annexe 4-
1, n=3, CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 197
Figure 4-12 : Influence de la temprature sur les taux de rcupration (TR) moyens des
pesticides du sable de Fontainebleau (solvant : MeCN/MeOH (50/50), conditions en annexe 4-
1, n=3, CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 198
Figure 4-13 : Influence de la temprature sur les taux de rcupration (TR) moyens des
pesticides du sable de Fontainebleau (solvant : MeCN/MeOH (50/50), conditions en annexe 4-
1, n=3, CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 198
Figure 4-14 : Protocole de la filtration selective. 202
Figure 4-15 : Taux moyens de rcupration(TR) des pesticides dans les diffrentes fractions
obtenues aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection
MRM, conditions en annexe 3-3. 204
Figure 4-16 : Taux moyens de rcupration (TR) des pesticides dans les diffrentes fractions
obtenues aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection
MRM, conditions en annexe 3-3. 204
Figure 4-17 : Taux moyens de rcupration (TR) des pesticides dans les diffrentes fractions
obtenues aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection
MRM, conditions en annexe 3-3. 205
- 289 -
Lsite des figures et tableaux

Figure 4-18 : Taux moyens de rcupration (TR) correspondants aux quantits de pesticides
retrouvs dans lensemble des fractions aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 206
Figure 4-19 : Taux moyens de rcupration (TR) correspondants aux quantits de pesticides
retrouvs dans lensemble des fractions aprs filtration slective de lextrait de bl (n=3),
CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 207
Figure 4-20 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus aprs filtration
slective de lextrait de bl dop 0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en
annexe 4-1), CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 209
Figure 4-21 : Taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus aprs filtration
slective de lextrait de bl dop 0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en
annexe 4-1), CPL/ESI/SM, mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 210
Figure 4-22 : Comparaison des taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus
lorsque lextrait de bl est dop juste avant la filtration slective (sans PLE) et aprs PLE dun
bl dop 0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en annexe 4-1), CPL/ESI/SM,
mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 211
Figure 4-23 : Comparaison des taux de rcupration (TR) moyens des pesticides obtenus
lorsque lextrait de bl est dop juste avant la filtration slective (sans PLE) et aprs PLE dun
bl dop 0,25 mg/kg (n=3), (solvant : actonitrile, conditions en annexe 4-1), CPL/ESI/SM,
mode +/-, dtection MRM, conditions en annexe 3-3. 211

Liste des tableaux :

Chapitre I :

Tableau 1-1 : Historique de lvolution des trois plus grandes classes de pesticides des annes
1900 nos jours [1]. 16
Tableau 1-2 : Exemples dapplications danalyse de pesticides dans les matrices alimentaires
par CPG-SM ou SM. 26
Tableau 1-3 : Comparaison de la source ESI lAPCI [90]. 35
Tableau 1-4 : Exemples dapplications de la CPL-SM lanalyse de pesticides. 52
Tableau 1-5 : Exemples dapplications dextraction de diffrentes matrices par SFE. 65
Tableau 1-6 : Exemples dapplications dextraction de diffrentes matrices par MAE. 68
Tableau 1-7 : Comparaison des diffrentes techniques dextraction de matrices solides [165-
167]. 72

- 290 -
Lsite des figures et tableaux

Tableau 1-8 : Exemples dapplications dextraction de diffrentes matrices par PLE. 77


Tableau 1-9 : Applications de la SPE la purification dans le domaine alimentaire, (ACE :
actone, DCM : dichloromthane, HEX : hexane, MeCN : actonitrile, MeOH : mthanol, TOL : tolune, PSA : primary

secondary amine). 85
Tableau 1-10 : Exemples dapplication de la SPE dans des matrices aqueuses pour lextraction
de pesticides, Oasis HLB (Hydrophilic Lipophilic Balance) : N-vinylpyrrolidane divinylbenzene, SBD : styrne

divinylbenzne, PS-DVB : polystyrene-divinylbenzene. 88

Chapitre II :

Tableau 2-1 : Modes daction, classes chimiques, structures et proprits physico-chimiques


des molcules tudies. 100
Tableau 2-2 : Composs tudis avec les ions parents correspondants ainsi que les ions de
fragmentations et les nergies de collision (Ecoll) associes. 104
Tableau 2-3 : Exploitation de la gamme dtalonnage pour latrazine et latrazine D5. 113
Tableau 2-4 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de latrazine/atrazine D5.
114
Tableau 2-5 : Exploitation de la gamme dtalonnage pour latrazine et latrazine D5 sans le
point 100 pg/l. 116
Tableau 2-6 : Analyse de la variance pour le modle dtalonnage de latrazine/atrazine D5
sans le point 100 pg/l. 117
Tableau 2-7 : Comportements des molcules lors de ltude de ladquation du modle
dtalonnage. 117
Tableau 2-8 : Valeurs de limites de dtection obtenues par les diffrentes approches, * Valeur
non calcule car lordonne lorigine b0 est significativement diffrent de 0. 120
Tableau 2-9 : Valeurs de LQ estimes partir des LD (LQ = 10 LD/3). 121
Tableau 2-10 : Rsultats obtenus par le LNE pour les diffrents chantillons deaux. 124
Tableau 2-11 : Valeurs des carts normaliss pour les trois chantillons deaux de nature et
concentration diffrentes. 130
Tableau 2-12 : Incertitudes des rsultats de mesures associes chacune des molcules pour
deux niveaux de concentration diffrents. 132

Chapitre III :

Tableau 3-1 : Modes daction, classes chimiques et proprits physico-chimiques associs aux
38 pesticides cibls (A : acaricide, F : fongicide, H : herbicide, I : insecticide, N : nmaticide,
SC : substance de croissance) [217-218]. 138
- 291 -
Lsite des figures et tableaux

Tableau 3-2 : Conditions opratoires utilises lors de la dtermination des ions prcurseurs et
des ions de fragmentation (u.a. : unit arbitraire). 140
Tableau 3-3 : Ions prcurseurs et nergies de collision (E coll) associes aux diffrents ions de
fragmentation. 143
Tableau 3-4 : Gradient dlution appliqu lors de lanalyse de pesticides par DI/CPL/SM
Colonne Symmetry Shield RP18 (250*3 mm d.i.,5 m, Waters), D = 0,3 mL/min. 147
Tableau 3-5 : Conditions opratoires utilises dans le cadre de la comparaison des intensits en
fonction du dbit appliqu. 158
Tableau 3-6 : Limites de quantification obtenues pour les diffrents composs tudis par
CPL/SM, S/N = 10 (S = Signal et N = Bruit de fond). 173
Tableau 3-7 : Mode dionisation, temps de rtention et coefficient de corrlation des composs
utiliss comme ventuels talon interne. 177

Chapitre IV :

Tableau 4-1 : Conditions appliques en PLE. 189


Tableau 4-2 : Comparaison des taux moyens de rcuprations (TR) correspondantsaux
quantits de pesticides retrouvs dans lensemble des fractions aprs filtration slective de
lextrait de bl et de ceux obtenus aprs filtration slective de lextrait de bl dop 0,25
mg/kg (M : molcule et M* : molcule marque). 213

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