Universidad Central de Venezuela

Facultad de Medicina
Escuela Luis Razetti
Ctedra de Bioqumica

TEMA 4
ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS

Noviembre, 2012
 Objetivos generales del Tema 2
Describir la estructura de las protenas
Explicar con ejemplos la relacin que existe entre la estructura de las protenas y
la funcin biolgica que desempean.
Explicar las propiedades cido-base de las protenas.
Describir algunos mtodos de separacin de protenas.

Objetivos
Estructura y Funcin de las Protenas
Mencionar algunas funciones de las
protenas.
Representar un enlace peptdico.
Describir las caractersticas del enlace
peptdico.
Describir los niveles de organizacin
estructural de las protenas.
Definir conformacin nativa y dominio
funcional.
Explique el efecto del pH sobre la
estructura de las protenas.
Explicar en qu consiste la
desnaturalizacin de las protenas.
La Hemoglobina y la mioglobina como ejemplos de protenas globulares
Contenidos
Transporte, defensa, catlisis, estructura y
receptores.
Participacin de grupos alfa-amino y alfa-
carboxilo.
Carcter parcial de doble enlace.
Enlaces que estabilizan las estructuras
primaria, secundaria, terciaria y
cuaternaria.
Conformacin nativa y dominio funcional.
Ionizacin de las cadenas laterales de los
aminocidos que forman la protena y de
los grupos terminales.
Efectos de la temperatura y el pH sobre la
estructura de las protenas.

Grupo hemo, subunidades proteicas,

Comparar la estructura general de la
puentes salinos, bolsillo del hemo,
mioglobina y de la hemoglobina.
histidinas proximal y distal.
Describir las curva de saturacin de la
hemoglobina y la mioglobina por el Curvas sigmoidea e hiperblica. P50.
oxgeno.
Efecto alostrico del oxgeno sobre las
subunidades de la hemoglobina.
Explicar las caractersticas de la unin del
Cooperatividad. Formacin y rotura de
oxgeno a la hemoglobina.
puentes salinos. Formas desoxi y oxi de la
hemoglobina.

2
 Unin del CO2 a algunos grupos amino.
Explicar el papel de la hemoglobina en el Formacin y rotura de puentes salinos.
transporte de CO2, indicando la Reaccin catalizada por la anhidrasa
participacin de la anhidrasa carbnica. carbnica, formacin de bicarbonato,
liberacin de protones.
Explicar a nivel molecular el efecto que
tienen los cambios de pH y de presin de Unin de CO2 y H+ a algunos grupos de la
CO2 sobre el aporte de oxgeno a los Hemoglobina. Formacin y rotura de
tejidos por parte de la hemoglobina puentes salinos.
(Efecto Bohr).
Predecir el efecto que tienen los cambios
Desplazamiento de las curva a la izquierda
de pH y de presin de CO2 sobre la curva
y a la derecha a distintos pH y presiones
de saturacin de la Hemoglobina por
de CO2.
oxgeno.
Mencionar el origen del 2,3
Precursor glicoltico.
bisfosfoglicerato en el eritrocito.
Sitio de unin del 2,3 bisfosfoglicerato,
Explicar el efecto de 2,3 bisfosfoglicerato estabilizacin de forma desoxigenada
en la afinidad de la hemoglobina por el O2. (tensa) de la Hemoglobina. Formacin y
rotura de puentes salinos.
Predecir el efecto que tienen los cambios
Desplazamiento de las curva a la izquierda
de concentracin de 2,3 bisfosfoglicerato
y a la derecha a distintas concentraciones
sobre la curva de saturacin de la
de 2,3 bisfosfoglicerato.
Hemoglobina por el oxgeno.
Estructura, localizacin, funcin y curva de
Comparar la hemoglobina y la mioglobina.
saturacin con el oxgeno.
Protenas fibrosas
Describir la estructura general de las
queratina (alfa queratina) y colgeno.
protenas fibrosas.
Comparar la composicin de las protenas Contenido relativo de prolina,
fibrosas con las protenas globulares. hidroxiprolina, glicina y cistena. Puentes
disulfuro.
Relacionar la estructura y la localizacin
Tejido conectivo, formacin de fibras,
de la queratina y del colgeno con su
faneras.
funcin.
Mtodos de separacin de protenas

Explicar el fundamento de los mtodos de Separacin de acuerdo a cargas

separacin de las protenas. elctricas: electroforesis y cromatografa
de intercambio inico. Separacin de

3
 acuerdo al peso molecular: centrifugacin,
cromatografa de exclusin molecular.
Explicar cmo la electroforesis y la Separacin de aminocidos y pptidos a
cromatografa de intercambio inico se diferentes pH.
pueden utilizar para separar aminocidos
y protenas.

Implicaciones mdicas

Afinidad de la Hemoglobina por el

Comparar la Hemoglobina normal del
oxgeno, unin el 2,3 bisfosfoglicerato,
adulto y la Hemoglobina fetal.
curva de oxigenacin.
Afinidad de la Hemoglobina por el
Comparar la Hemoglobina normal del
oxgeno, estructura primaria,
adulto y la Hemoglobina S.
polimerizacin molecular.
Predecir el efecto del pH estomacal sobre Ionizacin de grupos disociables,
las protenas de la dieta desnaturalizacin.
Explicar el fundamento del efecto de las
sustancias usadas para realizar desrizado y Formacin y/o rotura de enlaces disulfuro.
permanente del cabello.

Bibliografa

Champe, P., Harvey, R. y Ferrier, D. (2005) Bioqumica. 3ra ed. Mxico:

Editorial Mc Graw Hill.

Devlin, Thomas. (2004). Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas.

4ta ed. Editorial Revert S.A.

Mathews-Van Holde-Ahern. (2003). Bioqumica. 3ra ed. Editorial Addison

Wesley.

McKee, T. y McKee, J.R (2009) Bioqumica. 4ta ed. Madrid: Editorial Mc Graw
Hill.

Murray, R.; Bender, D.; Botham, K.; Kennelly, P. Rodwell, V. y Weil, P. (2010)
HARPER, Bioqumica ilustrada. 28o ed. Mxico: McGraw Hill.Nelson, D. y Cox, M.
(2005). Lehninger. Principios de Bioqumica. 4ta ed. Editorial Omega.

4
 Smith, C; Marks, A. y Lieberman, M. (2006). Bioqumica bsica de Marks. Un
enfoque clnico. 2da ed. McGraw Hill-Interamericana.

Voet, D.; Voet, J. y Pratt, C. (2007). Fundamentos de Bioqumica. La vida a

nivel molecular. 2da ed. Editorial Mdica Panamericana.

Actividad de Prctica

1) Enmarca en la siguiente figura los grupos qumicos que forman los enlaces
peptdicos:

2) Dibuja un enlace de hidrgeno correspondiente a la estructura secundaria de

las protenas, sealando los grupos qumicos que intervienen en la formacin de
dicho enlace.

3) Identifica lo sealado en la siguiente figura. Contiene esta protena un grupo

prosttico?

5
I

4) Explica el concepto de dominio y de conformacin en las protenas

5) Compara (establece semejanzas y diferencias) la estructura de la

Inmunoglobulina G y el colgeno. Identifica si son globulares o fibrosas.

6) Explica el efecto de la temperatura y el pH sobre la estructura de las protenas.

Cundo se dice que una protena se ha desnaturalizado?

7) Se realiz una electroforesis de protenas plasmticas en acetato de celulosa a

pH 8,6 y se obtuvo el siguiente resultado

- Cul es el fundamento de la electroforesis?

- Cmo se relaciona el valor del PI de una protena con su migracin en un
campo elctrico?

6
 - Revisa estos enlaces: http://www.farestaie.com.ar/te/bc/326.htm
http://www.med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/pdf/proteinas.pdf y
discute - - Cul es su utilidad en el diagnstico clnico?

8) Se tiene una mezcla de tres protenas (X, Y, Z) cuyos puntos isoelctricos (PI),
son los siguientes: X= 5,5; Y= 9,0 y Z= 7,1. Explique cmo podra obtener cada
una de ellas en forma pura utilizando una cromatografa de intercambio inico.

9) Describa como podra separar la hemoglobina A (HbA) y de la hemoglobina

glicosilada (HbA1c) mediante una cromatografa de intercambio aninico,
conociendo que los puntos isoelctricos (pI) de la HbA y de la HbA1c son 6,9 y 6,3
respectivamente.

Caso Clnico

A Rodrigo, un joven de 11 aos de edad, proveniente de Curiepe, Estado Miranda,

se le diagnostic en su pueblo anemia y lo envan a Caracas para estudiar cul es
la causa de la misma. Interrogando a la madre se supo que en la infancia present
en 2 oportunidades dolor y edema (hinchazn) en manos y pies y necesit
hospitalizacin por una neumona. Durante la evaluacin se aprecia dficit de
peso, palidez en piel y mucosas y cicatrices de lceras en los tobillos.

En los exmenes de laboratorio se muestran unos valores de hemoglobina: 7 g

(VN: 12 16 g) y hematocrito: 25% (VN: 35 45%). Se realiz un frotis de sangre
perifrica y se observaron glbulos rojos en forma de hoz, lo cual hizo sospechar
la presencia de anemia de clulas falciformes.

7
Se examinaron las propiedades fisicoqumicas de la hemoglobina normal y de la
hemoglobina del paciente y se realizaron pruebas electroforticas, encontrndose
un punto isoelctrico de la hemoglobina falciforme oxigenada de 7,09, ligeramente
superior al de la hemoglobina normal que es de 6,87. Esto indic que exista una
variacin del nmero o clase de grupos ionizables entre las dos hemoglobinas.

Responde las siguientes preguntas:

- Compara la estructura general de la mioglobina con la de la hemoglobina.

- Dibuja y compara las curvas de oxigenacin de la mioglobina y la hemoglobina.
Por qu al hablar de la concentracin de O2 nos referimos a presin parcial?
- Explica los cambios en la estructura cuaternaria de la hemoglobina al unir
oxgeno que explican el efecto cooperativo observado en la curva de
oxigenacin.
- Cmo est el pH en los tejidos hipxicos y cmo influye este pH sobre la
estructura de la hemoglobina y el transporte de oxgeno
- Existe algn mecanismo mediante el cual se modifique la afinidad de la
hemoglobina por el oxgeno? Qu pasa con los niveles de 2,3-
bisfosfoglicerato?
- Compara la estructura y la afinidad por el oxgeno de la Hemoglobinas A, F y S.
- Cmo se modifica la estructura de la Hb S? Cules niveles de organizacin
estructural se ven afectados?

- Por qu se deforman los glbulos rojos? Cules son las consecuencias de

esta deformacin?
- Explique por qu el PI de la Hb S est aumentado con respecto a la HbA
- Cmo haras para separar ambas protenas en una electroforesis?

Investiga en lnea

Es muy importante que revises los videos, ejercicios y animaciones que estn en
el Campus Virtual de la asignatura dentro del tema 4

Realiza la siguiente lectura:

Los glbulos rojos son clulas que carecen de ncleo y de mitocondrias, cuya
funcin es el transporte de oxgeno a los tejidos. Estn constituidos por grandes
proporciones de hemoglobina, una protena conjugada que contiene una porcin
proteica, las globinas y una porcin no proteica, la ferroprotoporfirina o grupo
hemo.

8
La hemoglobina tienen un peso molecular aproximado de 65.000 kDa, es un
tetrmero, que consta de 4 cadenas polipeptdicas, cada una de las cuales est
unida a un grupo hemo. Cada grupo hemo cuenta con un tomo de hierro, que fija
una molcula de oxgeno y la transporta desde los pulmones hasta los tejidos. Las
molculas de hemoglobina se forman por combinacin de cadenas peptdicas que
pueden ser de globina , , y . Las molculas de hemoglobina se forman por la
combinacin de dos cadenas con dos o . La Hemoglobina de una persona
adulta normal se designa por hemoglobina A1= 22 y de igual forma, la
hemoglobina fetal se designa como hemoglobina F= 22

Estructura Primaria

Se refiere a la secuencia de aminocidos, es decir, la combinacin lineal de los

mismos mediante un enlace covalente tipo amida, el enlace peptdico. Las
cadenas de globina estn constituidas por residuos de aminocidos; la cadena
globina contiene 141 residuos y 146 la cadena de globina . Existen otros dos
tipos de cadenas de globina, y que contienen 146 residuos de aminocidos,
que se asemejan mucho a la estructura primaria de la globina, presentando solo
39 residuos de aminocidos diferentes con la globina y solo 10 con la cadena .

Estructura Secundaria

Es la disposicin espacial local del esqueleto proteico, gracias a la formacin

de puentes de hidrgeno. La orientacin ms frecuente de las cadenas
polipeptdicas puede ser alfahlice, hoja plegada y al azar.

El porcentaje de contenido de alfahlice en las protenas globulares es bastante

variable, en el caso de la hemoglobina su contenido alfahlices es de un 75%.
Existen principalmente dos factores que pueden interrumpir la orientacin
helicoidal: la presencian de la prolina que provoca una torsin de la cadena y las
fuerzas electrostticas localizadas de repulsin debido a un conjunto de grupos -R
cargados positivamente (lisina y arginina), o negativamente (cidos glutmico y
asprtico). Del aminocido 43 al 52, se forma una estructura de hoja plegada, la
cual se identifica por no formar una hlice sino una cadena en forma de zigzag.

Estructura Terciaria

Es el modo en el que la cadena polipeptdica se pliega en el espacio. Es la

disposicin de los dominios proteicos en el espacio. Los grupos hemo de la
hemoglobina, estn localizados en orificios hidrofbicos y estn anclados a la
cadena polipeptdica mediante un enlace coordinado del in hierro con la histidina
(His), mientras el otro enlace de coordinacin del in est disponible para el
transporte del oxgeno. Como en todas las protenas existe una naturaleza
anfiptica, la cual hace que se puedan identificar diferentes regiones que
presenten mayor o menor polaridad, esto depende de los tipos de residuos que

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compongan la regin. Tambin existen fuerzas Vander Walls, interacciones
electrostticas o puentes salinos, que le confieren estabilidad a la estructura de la
hemoglobina.

Estructura Cuaternaria

Deriva de la conjuncin de varias cadenas peptdicas asociadas, conformando

un multmero, que posee propiedades distintas a la de sus
monmeros componentes. Dichas subunidades se asocian entre s mediante
interacciones no covalentes, como pueden ser puentes de hidrgeno,
interacciones hidrofbicas o puentes salinos.

La hemoglobina es una protena globular, en la que las cuatro cadenas estn

empaquetadas conjuntamente en disposicin tetradrica. La unidad funcional de la
hemoglobina es un tetrmero que consta de dos clases de cadenas polipeptdicas.

Cuando se produce la oxigenacin de la hemoglobina, los dmeros 11 y 22

rotan aproximadamente 15 grados el uno respecto al otro. La estructura de la
hemoglobina completamente oxigenada es conocida como el estado R (Relajado),
ya que las interacciones entre sus subunidades se encuentran debilitadas (o
relajadas). La estructura cuaternaria observada en el estado desoxigenado de la
hemoglobina se conoce como el estado T (Tenso), ya que las interacciones entre
sus subunidades son fuertes.

Al desencadenar el paso del estado T al estado R, el enlace de un oxgeno

aumenta la afinidad de otros sitios de enlace. El in ferroso arrastra a la histidina
proximal cuando se introduce en el plano de la porfirina. Este movimiento de la
histidina F8 provoca una alteracin de la estructura hlice F y en los acodamientos
EF y FG. Estos cambios conformacionales se transmiten a las interfaces de las
subunidades ocasionando la ruptura de los enlaces salinos intercatenarios lo que
provoca que la protena cambie a la forma R.

Cmo se determin la diferencia entre la hemoglobina normal y la

falciforme?
Para estudiar la hemoglobina y determinar su estructura fue necesario utilizar
tcnicas bioqumicas convencionales, tales como la electroforesis sobre acetato
de celulosa a pH alcalino y sobre citrato agar a pH cido, cromatografa de
intercambio inico y mtodos de desnaturalizacin por lcalis.
La electroforesis, permiti determinar el punto isoelctrico de la hemoglobina
normal oxigenada (pI=6,87), ya que a ese pH la carga neta de la protena es cero
y no existe movilidad cuando se somete a un campo elctrico. Cuando se estudi
la hemoglobina falciforme oxigenada se determin que su pI=7,09. Esta diferencia
sugiri que exista una variacin del nmero o clase de grupos ionizables entre las
dos hemoglobinas. En una disolucin de hemoglobina el cambio de una unidad de

10
pH se asocia con el cambio de alrededor de 13 cargas de la protena. La
diferencia entre los pI de ambas protenas es de 0,23 y corresponde
aproximadamente a unas tres cargas por molcula de hemoglobina.

La etapa siguiente del estudio consisti en fragmentar las protenas por hidrlisis
con proteasas (enzimas capaces de romper enlaces peptdicos). Despus, se
separaron estos fragmentos por electroforesis, pero exista mucho solapamiento
(se superponan las bandas), por lo que se utiliz otro mtodo de separacin:
cromatografa de intercambio inico. Se vio que la diferencia entre las dos
hemoglobinas se encontraba en un fragmento peptdico de 8 aminocidos. Se
secuenci el pptido y se determin que la diferencia entre la hemoglobina S y A
se deba al cambio de un aminocido en la posicin 6, encontrndose que la
hemoglobina S contena valina en lugar de glutamato.

La cadena lateral de la valina es apolar, por lo que aparece un parche hidrfobo

en la superficie de la molcula, mientras que el glutamato es polar. Esta alteracin
reduce marcadamente la solubilidad de la hemoglobina S desoxigenada, pero
tiene poco efecto sobre la solubilidad de la Hb S oxigenada.

Como resultado de estos estudios se determin que los pacientes con anemia
falciforme tienen hemoglobina S pero no hemoglobina A, mientras que los
pacientes con rasgos falciformes (portadores de un solo alelo), tienen ambas
clases de hemoglobina en cantidades aproximadamente iguales.

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 Fig. Determinacin de las variantes de la hemoglobina por cromatografa.

Anemia Drepanoctica

La anemia de clulas falciformes, drepanocitosis o anemia drepanoctica, es una

enfermedad que afecta la hemoglobina, una protena que forma parte de los
glbulos rojos y se encarga del transporte de oxgeno. En esta enfermedad ocurre
una sustitucin de un aminocido, cido glutmico por valina en la sexta posicin
de la cadena beta globina 1 de la hemoglobina. El cido glutmico tiene carga
negativa (aminocido polar con carga) y la valina es hidrfoba, entonces al ocurrir
la sustitucin se forman nuevos contactos entre la valina y otros aminocidos
hidrfobos de la hemoglobina, lo que promueve la formacin de polmeros
cruzados que deforman el glbulo rojo, esto provoca que a menor presin de
oxgeno, el eritrocito se deforme y adquiera apariencia de una hoz. La nueva
forma provoca dificultad para la circulacin de los glbulos rojos, por ello se
obstruyen los vasos sanguneos y desencadenan sntomas como dolor en las
extremidades, ya que los glbulos rojos no pueden pasar a travs de los capilares
y las vnulas y causan obstrucciones en los vasos, lo que producir esos
episodios peridicos de dolor.

Los glbulos rojos normales son bicncavos y duran unos 120 das en la corriente
sangunea, mientras que los hemates falciformes tienen una vida media ms
corta, duran slo unos 10 a 20 das y tienen forma de hoz. Este acortamiento de la
vida media de los glbulos rojos anormales explica la anemia que se produce en
estos pacientes ya que las clulas sanguneas no pueden reponerse en tan corto
tiempo.

La transformacin del eritrocito se produce cuando no transporta oxgeno, pues

con oxihemoglobina, el glbulo rojo tiene la forma clsica bicncava. Despus de
que estas molculas de hemoglobina entregan su oxgeno, algunas de ellas se

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agregan formando fibras polimricas, que deforman el hemate, de modo que
pierde elasticidad y toma una forma alargada y encorvada (falciforme, en forma
de hoz).

Durante mucho tiempo se ha reconocido que los niveles elevados de hemoglobina

fetal (Hemoglobina F) pueden mejorar los efectos clnicos de la anemia de clulas
falciformes. Esto es porque la hemoglobina fetal dificulta la formacin de polmeros
de la hemoglobina falciforme dentro del eritrocito. Cuanto mayor sea la cantidad
de hemoglobina fetal, mayor ser la inhibicin.

Algunas personas tienen ms Hemoglobina F que otras. Las personas que

padecen de la enfermedad de clulas falciformes y poseen niveles ms altos de
Hemoglobina F generalmente sufren menos complicaciones de la enfermedad.
El tratamiento con hidroxiurea eleva los niveles de hemoglobina fetal en la anemia
falciforme, lo que ayuda a que los glbulos rojos permanezcan redondos y
flexibles. Su uso parece conseguir varios efectos entre los que se encuentran:

Aumento de la Hemoglobina F: es beneficioso por disminucin compensatoria

de los otros tipos de Hemoglobina y porque los tetrmeros de Hemoglobina F
se pueden disociar a dmeros y formar hbridos con los dmeros de
Hemoglobina S, los cuales no tienden a polimerizarse.

La hidroxiurea se descompone parcialmente en xido ntrico, un potente

vasodilatador.

Disminuye la adhesividad de los hemates.

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